Post on 19-Jul-2015
5/17/2018 Mikrobiota Fekal - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikrobiota-fekal 1/17
PENGARUH PADA MIKROBIOTA PROBIOTIK FESES DAN KEGIATAN
GENOTOKSIK AIR DI FESES PASIEN DENGAN DERMATITIS ATOPIK:
A, TERKONTROL PLACEBO STUDI
S M U M A R Y
Latar Belakang: mikrobiota kolon terlibat dalam penyebab kanker usus
besar menurut beberapa laporan. Studi juga menunjukkan bahwa mikrobiota yang
berbeda antara pasien atopik dan subyek sehat. Tujuan: Untuk mengevaluasi apakah
campuran probiotik yang mengandung Lactobacillus paracasei LPC-37,
Lactobacillus acidophilus 74-2, dan Bifidobacterium animalis subsp. lactis DGCC
420 dapat mempengaruhi mikrobiota dan aktivitas genotoksik pada subyek sehat
dan pasien dengan dermatitis atopik (AD). Metode: terkontrol plasebo cross-over
studi dilakukan. Lima belas orang dewasa yang sehat dan pasien dewasa 15 AD
dikonsumsi 2_ 100 ml / d baik probiotik atau minuman plasebo selama 8 minggu
yang diikuti oleh sapuan keluar jangka waktu 2 minggu sebelum menyeberang
intervensi. Air feses diisolasi dari sampel tinja dikumpulkan pada akhir setiap
periode. HT29c19a sel diinkubasi dengan air feses diukur untuk kerusakan DNA
menggunakan satu sel elektroforesis gel ("komet assay"). Spesies bakteri ditentukan
oleh qPCR dan konsentrasi rantai pendek asam lemak diukur dengan menggunakan
kromatografi gas. Hasil: suplementasi probiotik menghasilkan peningkatan
signifikan dalam laktobasilus, sedangkan jumlah Bifidobacteria dan Bacteroidetes
tetap tidak berubah. Clostridium perfringens klaster IeII menurun secara bermakna
pada subyek sehat. Potensi genotoksik (dinyatakan sebagai intensitas ekor) air
feses, tidak terpengaruh. Namun, intensitas ekor menurun secara signifikan pada
periode probiotik dibandingkan dengan plasebo (23,5 vs 16,7%) pada pasien AD.
Meskipun konsentrasi fekal dari rantai pendek asam lemak tidak terpengaruh, pH
feses berkurang secara signifikan (7,0 vs 6,6) pada pasien AD setelah probiotik.
Kesimpulan: Hasil penelitian menunjukkan bahwa probiotik menurunkan potensi
genotoksik air feses pada pasien AD. C. perfringens feses klaster IeII tingkat tetap
tidak terpengaruh menunjukkan baik perubahan dalam aktivitas mereka, atau fakta
5/17/2018 Mikrobiota Fekal - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikrobiota-fekal 2/17
bahwa spesies bakteri lainnya bertanggung jawab untuk kegiatan genotoksik
berkurangnya air tinja.
PENDAHULUAN
Bukti kuat yang menghubungkan perbedaan dalam komposisi mikrobiota
usus pada subyek alergi dan non-alergi telah reported.1 Hasil dari studi, khususnya,
pada bayi dengan dermatitis atopik atau alergi menunjukkan kolonisasi usus kurang
dengan kedua Lactobacillus dan Bifidobacterium dan tingkat yang lebih tinggi dari
Clostridium, serta peningkatan frekuensi untuk Staphylococcus terjadinya daripada
di non-alergi children.2e4 Sebuah hubungan langsung antara kolonisasi dengan
Clostridium difficile pada bulan-bulan pertama kehidupan dan peningkatan risiko
semua hasil atopik pada anak usia ini menunjukkan untuk pertama waktu dengan
Penders dkk. di 2007,5 Dalam dekade terakhir, banyak peneliti telah menunjukkan
bahwa mikrobiota usus memegang peranan penting dalam timbulnya atopik
diseases.3e6
Mikrobiota usus adalah sumber yang paling penting untuk stimulasi sistem
kekebalan tubuh. Menginduksi pematangan sistem kekebalan tubuh dan
mempertahankan fungsi penghalang yang mencegah invasi patogen. Metabolit
bakteri usus, seperti rantai pendek asam lemak (SCFAs) yang terlibat dalam
pertumbuhan sel epitel dan differentiation.7 Selain itu, aktivitas metabolik enzim
bakteri mempengaruhi beban dari lumen usus yang berkaitan dengan potensi
produk metabolik tidak beracun atau beracun . Khususnya, aktivitas enzim ini
berbeda antara spesies bakteri. Bakteri yang berasal dari spesies Lactobacillus dan
Bifidobacterium yang ditandai dengan kegiatan yang lebih rendah dari kanker
mempromosikan enzim dibandingkan dengan bakteri lain dari mikrobiota seperti
Clostridium dan Bacteroides.8 Komposisi mikrobiota seperti yang diamati pada
penyakit atopik mengarah ke saran bahwa pasien ini memiliki lebih genotoksik
lingkungan dalam lumen usus mereka daripada orang sehat. Hal ini dapat, pada
gilirannya, menimbulkan risiko lebih tinggi terkena kanker usus besar pada
penyakit atopik. Secara umum, bagaimanapun, studi epidemiologi menunjukkan
hasil yang bertentangan untuk hubungan antara penyakit atopik dan kanker. Ini
5/17/2018 Mikrobiota Fekal - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikrobiota-fekal 3/17
adalah hipotesis bahwa (i) stimulasi antigenik memprediksi hubungan positif antara
kanker dan alergi (yaitu, penderita alergi memiliki risiko kanker lebih tinggi),
sedangkan, (ii) imunosurveilans dan profilaksis memprediksi asosiasi terbalik
(yaitu, penderita alergi memiliki risiko kanker lebih rendah) .9 Singkatnya, data
epidemiologi terakhir menunjukkan hubungan yang kompleks antara alergi, atopi
dan kanker yang tergantung pada kondisi atopik spesifik dan organ tertentu sites.10
Modulasi dari mikrobiota usus oleh bakteri probiotik yang dipilih
memberikan kesempatan untuk mengurangi risiko kanker usus besar. Probiotik
berasal terutama dari spesies Lactobacillus dan Bifidobacterium telah terbukti
mengurangi metabolit tertentu dan enzim konon terlibat dalam sintesis atau aktivasi
carcinogens.11 Selanjutnya, studi intervensi manusia dengan probiotik yang dipilih
mengungkapkan penurunan aktivitas enzim fekal yang menghasilkan karsinogen
bersama-sama dengan penurunan potensi genotoksik dari feses water.1, 12e14
Hipotesis bahwa modulasi dari komunitas mikroba usus dapat mencegah atau
bahkan mengobati penyakit atopik didukung oleh beberapa studi klinis yang
menentukan efek positif dari intervensi dengan bakteri probiotik pada tingkat dan
keparahan dari atopik disease.15, 16
Studi saat ini pada pasien dengan AD dan subyek sehat berfokus pada efek
dari suplemen probiotik yang mengandung Lactobacillus paracasei LPC-37,
Lactobacillus acidophilus 74-2, dan Bifidobacterium animalis subsp. lactis DGCC
420 pada bakteri selektif dari mikrobiota feses yang diduga terlibat dalam
perkembangan penyakit. Selain itu, penelitian ini bertujuan untuk: (1) mengevaluasi
apakah pasien AD memiliki lingkungan luminal lebih beracun dari orang sehat, (2)
membuktikan jika probiotik dapat mempengaruhi lingkungan kolon, yaitu potensi
genotoksik air feses, dan (3) menentukan aktivitas metabolisme mikrobiota tinja.
5/17/2018 Mikrobiota Fekal - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikrobiota-fekal 4/17
METODE
Studi desain dan peserta
Penelitian ini adalah double blind randomized, placebo-controlled, cross-
over uji yang dirancang untuk menyelidiki efek dari campuran probiotik pada feses
dan aktivitas mikrobiota genotoksik. Sidang ini dilakukan di Departemen Fisiologi
Gizi dan Klinik untuk Allergology Dermatologi dan dermatologis di Universitas
Friedrich Schiller Jena. Peserta direkrut antara November 2004 dan Februari 2005.
Subyek sehat direkrut melalui plakat yang ditampilkan pada papan pengumuman di
universitas dan melalui iklan di koran lokal. Pasien direkrut di Klinik untuk
Allergology Dermatologi dan dermatologis. Penelitian dilakukan antara bulan
Januari dan Juli 2005 (subjek pertama dalam subjek untuk keluar terakhir).
Sebanyak 19 pasien dengan dermatitis atopik ringan atau sedang dan 15 subyek
sehat yang terdaftar. Tiga pasien dengan AD mundur sebelum mulai sidang dan satu
pasien dengan AD putus karena penyakit ini mengharuskan pengobatan dengan
kortikosteroid, kriteria eksklusi penelitian. Karakteristik subjek dari semua relawan
yang menyelesaikan studi disajikan pada Tabel 1. Kriteria inklusi untuk subyek
yang sehat merupakan diagnosis negatif: asma alergi, rhinoconjunctivitis alergi,
alergi makanan, dan mengesampingkan diatesis atopik (kurang dari 7 poin sesuai
dengan atopyscore dari Diepgen17). Layak pasien puas semua berikut
kriteria: berusia antara 18 dan 40 tahun, diagnosis yang jelas dermatitis atopik
(lebih dari 10 poin sesuai dengan skor atopi-of Diepgen17), atau eksim lentur atau
pruritus paling sedikit 12 bulan (residivis atau permanen), skor SCORAD dari 5 -30
(AD kecil atau sedang), 18 kesediaan untuk secara eksklusif menggunakan untuk
masa penelitian produk kosmetik tertentu yang direkomendasikan oleh dokter studi
5/17/2018 Mikrobiota Fekal - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikrobiota-fekal 5/17
dan menggunakan kelas II direkomendasikan kortikosteroid (Advantan) sebagai
terapi lebih lanjut untuk AD (misalnya selama episode). Pengecualian kriteria untuk
semua peserta termasuk: wanita hamil atau menyusui, terapi supresif atau sitostatik
imun atau terapi steroid dan fototerapi atau sistemik sistemik AD dalam 4 minggu
terakhir sebelum studi dimulai, infeksi aktif dari kulit, asma penyakit yang relevan
yang harus diobati dengan corticoids, asupan antihistamin, pengobatan antibiotik,
subjek dengan indigestibility atau alergi terhadap komponen intoleransi susu atau
laktosa (tes tusuk kulit dilakukan untuk mengesampingkan tipe 1 sensitivitas
terhadap susu sapi), pengobatan jangka panjang dengan sistemik steroid, steroid
depo, long-acting antihistamin, obat penenang dan psychopharmaceuticals, asupan
antihistamin, psychopharmaceuticals dengan efek antihistamin dan penerapan krim
yang mengandung steroid untuk lengan bawah dalam 7 hari terakhir sebelum
pengujian tusukan dan / atau pengobatan pasien dengan Astemizol ( Hismanal)
dalam waktu 4 minggu sebelum penyakit jantung tes, akut atau kronis gejala atau
penyakit internistic parah, penyakit autoimun, defisiensi imun (termasuk perawatan
penekan kekebalan tubuh), kekebalan-kompleks yang disebabkan immunopathies
atau tumor ganas, penyalahgunaan alkohol, narkoba atau obat sebagai serta
konsumsi secara teratur probiotik. Studi ini disetujui oleh Komite Etika Fakultas
Kedokteran Universitas Friedrich Schiller Jena (admin. jumlah 1452-11/04) dan
terdaftar dalam database Clinical Trials (ident. NCT00550472).
Pendaftaran dan tugas untuk intervensi dilakukan oleh dokter percobaan dan
AR. Semua orang yang terlibat (percobaan dokter, staf ilmiah) dan peserta studi
buta. Selain itu, produk penelitian telah menjadi buta dan diberi label dengan kode
numerik oleh susu produksi. Pada minggu 3-pra-periode dan sepanjang durasi studi
20-minggu, semua sukarelawan harus menghilangkan produk pro-dan prebiotik lain
selain minuman yoghurt intervensi dari diet mereka. Pada awal penelitian, semua
mata pelajaran secara acak ditugaskan untuk kelompok perlakuan 2 (1:1) sesuai
dengan daftar pengacakan yang dihasilkan komputer (pengacakan diblokir). Satu
kelompok menerima 2 _100 mL / d minuman probiotik dan yang lainnya menerima
2 _100 mL / d minum plasebo selama 8 minggu. Setelah mencuci 2-minggu keluar
periode, intervensi yang disalib antara kelompok dan produk masing dikonsumsi
5/17/2018 Mikrobiota Fekal - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikrobiota-fekal 6/17
selama 8 minggu. Sampel tinja dikumpulkan pada akhir setiap periode (probiotik,
plasebo, cuci bersih). Setelah melewati bangku, sampel diangkut langsung ke
lembaga dan dipersiapkan untuk analisa lebih lanjut (Gambar 1).
Studi produk
Minuman probiotik yang terdapat Streptococcus thermophilus dan
diperkaya dengan budaya probiotik L. paracasei LPC-37 (3.9_108 CFU / g), L.
acidophilus 74-2 (2.9_104 CFU / g) dan B. animalis subsp. lactis DGCC 420 (B.
lactis 420, 5,9 _104 CFU / g) (Danisco Deutschland GmbH, Niebüll, Jerman).
Asupan harian dari probiotik untuk L. paracasei LPC-37, L. acidophilus 74-2 dan B.
lactis 420 rata-rata 7,8 _1010 CFU / d, 5.8_ 106 CFU / d, dan 1.2_107 CFU / hari,
masing-masing. Strain ini dipilih karena kemampuan mereka untuk bertahan hidup
perjalanan pencernaan dan untuk mematuhi cells.19 usus manusia Pada tanggal
kedaluwarsa, setiap batch dari persiapan uji dikendalikan untuk kelangsungan hidup
ketegangan dengan menghitung piring. L. acidophilus dan L. 74-2 paracasei LPC-
37 ditanam pada Agar Lactobacillus Difco_ MRS (Difco Laboratories GmbH,
Augsburg, Jerman) untuk 3 hari atau 37 _C dan B. lactis 420 di RCM 5,9 Agar
(Merck KGaA, Darmstadt, Jerman) selama 5 d pada 37 _C. Minuman plasebo
adalah identik dengan minuman probiotik dalam hal penampilan, rasa, dan bau, tapi
tidak mengandung kultur probiotik. Isi karbohidrat, lemak dan protein dibandingkan
dalam semua batch minuman yogurt.
5/17/2018 Mikrobiota Fekal - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikrobiota-fekal 7/17
Persiapan sample
Pemisahan air feses ini dilakukan dengan sentrifugasi. Kotoran
dihomogenisasi segar ditimbang ke dalam Ultra-Clear tabung centrifuge (Beckman
Instruments GmbH, Munich, Jerman) dan disentrifugasi selama 240 menit pada
60.000 _g pada 4 _C. Fraksi supernatan (air feses) telah aliquoted dan disimpan
pada _80 _C sampai penentuan genotoxicity (ukuran hasil primer). Untuk
menentukan rantai pendek asam lemak (hasil sekunder), masing-masing sampel
tinja segar seberat 1 gram ditempatkan dalam 2 mL air suling dan disimpan pada
5/17/2018 Mikrobiota Fekal - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikrobiota-fekal 8/17
_20 _C sampai analisis. DNA bakteri dari sampel feses diekstraksi dan dimurnikan
menggunakan kit DNA komersial untuk sampel tinja (Invitek, Berlin, Jerman)
seperti yang dijelaskan previously.20 Kuantitas DNA ditentukan melalui suatu ND-
1000 NanoDrop penuh spektrum UV / Vis Spectrophotometer ( Wilmington, DE,
USA). DNA bakteri disimpan pada _20 _C sampai analisis qPCR (hasil sekunder
mengukur).
Kuantitatif real-time PCR
Reaksi PCR dilakukan pada total volume 25 ml. Kondisi untuk reaksi
termasuk primer, suhu annealing yang tepat, dan MgCl2 konsentrasi ditunjukkan
pada Tabel 2. Lactobacillus spp ini. PCR assay yang terkandung 1_ SYBR
Inti penyangga reagen Hijau (Applied Biosystems, Bridgewater, NJ, USA) dan 200
nM setiap primer sementara 300 nM primer masing-masing digunakan untuk Bacteroides dan Clostridium perfringens klaster PCR. Untuk uji Staphylococcus
aureus PCR, 25 ml campuran reaksi PCR terdiri dari 1_ hijau CEPAT SYBR Guru
Mix (Terapan Biosystems) dan 300 nM primer masing-masing. The 25 ml
campuran reaksi PCR untuk Bifidobacterium spp. termasuk 1_ TaqMan CEPAT
Universal Master Mix, Tidak UNG AmpErase (Terapan Biosystems), 300 nM
primer forward dan reverse serta 200 nM dari probe MGB (Dengan pemadam BHQ
non-fluorescent). Semua reaksi PCR mengandung 1 ng DNA template. Amplifikasi
5/17/2018 Mikrobiota Fekal - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikrobiota-fekal 9/17
dan deteksi DNA dilakukan dengan sistem ABI PRISM-deteksi sekuensing 7000
(Terapan Biosystems). Untuk pengujian masing-masing, spesies berikut digunakan
sebagai strain standar: Bacteroides fragilis ATCC 25285, Bifidobacterium DSM
20083 adolescentis, L. acidophilus NCFM dan S. aureus ATCC 29213. Sepuluh
kali lipat pengenceran seri (10 pg dan 1 ng) DNA dari strain standar digunakan
untuk kurva standar. Untuk penentuan DNA, sampel rangkap tiga yang digunakan
dan jumlah rata-rata per berat basah g feses dihitung.
Rantai pendek asam lemak
Untuk analisis rantai pendek asam lemak, sampel tinja yang dicairkan,
dicampur dan disentrifugasi pada 6000_g selama 15 menit. Selanjutnya, 500 mL
supernatan ditambahkan 50 mL standar internal (i-caproic asam), divortex dan
disentrifugasi lagi. Sampel 1 ml disuntikkan untuk gas kromatografi-pengukuran
(pada Shimadzu GC Model 17A, Shimadzu, Kyoto, Jepang). Kondisi operasi
berikut digunakan untuk pemisahan dan pendeteksian rantai pendek asam lemak:
detektor ionisasi nyala-, 15 m FFAP-kolom (15 m_0.25 mm_ 0,25 mm), hidrogen
sebagai gas pembawa dan program suhu dengan temperatur awal dari 105 _C,
meningkat 35 _C / menit, dan suhu akhir 170 _C.
Penentuan cyto-dan genotoxicity
Cyto-dan genotoxicity air feses sebagai hasil utama diuji dalam
HT29clone19A menurut Oberreuther-Moschner et al.14 Singkatnya, HT29 sel
dipanen dan disesuaikan dengan konsentrasi 2 _106 sel per ml dan diinkubasi
dengan 10% feses air selama 30 menit pada 37 _C. Viabilitas sel ditentukan
sebelum dan setelah diinkubasi feses melalui tripan biru exclusion.21 aktivitas
genotoksik air feses dianalisis dengan satu sel elektroforesis microgel (komet
assay). Setiap sampel feses dianalisis dalam tiga ulangan. Sebagai kontrol negatif,
0,9% NaCl isotonik dan sebagai kontrol positif 75 mM H2O2 dilibatkan untuk
masing-masing berjalan. Setelah sentrifugasi sel diinkubasi pelet sel yang tersisa
resuspended dalam 40 ml dalam 0,7% lowmelting-titik agarosa dan tertanam ke
slide pra berlapis (0,5% normal-lebur-titik agarosa). Sel ini kemudian ditutupi
5/17/2018 Mikrobiota Fekal - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikrobiota-fekal 10/17
dengan 80 ml 0,7% rendah lebur-titik agarosa. Setelah itu, slide ditempatkan ke
dalam larutan lisis (100 mM Na2EDTA, 1% Triton X-100, 2,5 M NaCl, 1% N-
lauroyl-sarcosin garam natrium, DMSO 10%, 10 mM Tris, pH 10) selama 60 menit
pada 4 _C dan diproses lebih lanjut ke dalam ruang elektroforesis microgel
mengandung larutan alkali (1 mM Na2EDTA, 300 mM NaOH, pH 13) selama 20
menit. Selanjutnya, elektroforesis dilakukan pada 25, 300 mM V selama 20 menit.
Selanjutnya, slide dibilas tiga kali dengan buffer netralisasi (0,4 M Tris, pH 7,5)
dan diwarnai dengan SYBR Hijau I (Sigma Deisenhofen, Jerman). Evaluasi
mikroskopis dilakukan dengan menggunakan sistem analisis citra Instrumen
tanggap (Haverhill, Suffolk, Inggris). Tingkat migrasi DNA ditentukan untuk 50
spot per slide. Intensitas ekor (TI), sebagai penanda untuk evaluasi, didefinisikan
sebagai proporsi intensitas fluoresensi ekor komet intensitas fluoresensi total.
Semua langkah-langkah kerja yang dilakukan di bawah lampu merah untuk
menghindari kerusakan DNA.
Analisis statistic
Untuk mengevaluasi ukuran sampel, analisis dilakukan dengan
menggunakan daya 6,0 PASS (NCSS statistik Software, Kaysville, UT, USA)
berdasarkan data dari literatur dan kelompok studi kami.
Perhitungan statistik dilakukan dengan SPSS versi 17.0 (SPSS Inc, Chicago,
USA). Sebagai persyaratan untuk analisis varians, semua data diuji homogenitas
varians dan untuk distribusi normal dengan uji Levene dan uji
KolmogoroveSmirnov, masing-masing. Untuk mengevaluasi data dalam hal
signifikansi statistik, diulang-langkah analisis varians (ANOVA) dengan Model
Linear Umum (GLM) diaplikasikan untuk mengidentifikasi perubahan parameter
dari waktu ke waktu, kecuali jika dinyatakan lain. Model ini menganggap kedua
perubahan individu dan antar-individu dari waktu ke waktu. Perbedaan antara
sukarelawan sehat dan pasien dengan AD dianalisis dengan menyisipkan kelompok
studi (sehat vs pasien) sebagai intersubyek. Selanjutnya, urutan intervensi sebagai
konsekuensi dari cross-over designwas dipertimbangkan dengan menyisipkan
5/17/2018 Mikrobiota Fekal - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikrobiota-fekal 11/17
urutan sebagai kovariat. Tidak ada pengaruh urutan ditentukan untuk setiap
parameter dianalisis.
Data yang tidak terdistribusi normal dianalisis dengan menggunakan
Wilcoxon signed-rank test untuk mengevaluasi perubahan dari waktu ke waktu dan
ManneWhitney U test untuk perbedaan antara kelompok (pasien sehat vs M),
masing-masing. Untuk setiap perbandingan, nilai P <0,05 dianggap signifikan.
HASIL
Feses mikrobiota pengukuran
Hasil analisis mikrobiota feses ditunjukkan pada Tabel 3. Suplementasi
dengan campuran probiotik yang mengandung strain laktobasilus dua dan satu
strain Bifidobacterium mengakibatkan tingkat yang lebih tinggi signifikan dari
genus Lactobacillus pada kedua kelompok subjek. Nomor Lactobacillus menurun
setelah mencuci 2-minggu keluar periode (P ¼ 0,015) dan tetap konstan pada
tingkat bahkan pada periode plasebo (P ¼ 0,001). Ada kecenderungan peningkatan
jumlah rata-rata bifido sebagai akibat dari suplementasi probiotik pada pasien AD
(P ¼ 0,088), sedangkan tingkat pada sukarelawan sehat tidak terpengaruh.
Selanjutnya, konsumsi campuran probiotik menyebabkan penurunan yang
signifikan dari C. perfringens klaster IeII pada subyek sehat, tapi tidak pada pasien
dengan AD. Anggota dari kelompok ini hadir dalam 93% dari pasien AD, tapi
hanya dalam 64% dari subyek sehat. Selain itu, tingkat yang lebih tinggi dari C.
perfringens klaster IeII terdeteksi pada pasien AD dibandingkan dengan subyek
sehat di semua periode studi. Tidak ada perbedaan yang diamati untuk
Lactobacillus spp, Bifidobacterium spp.. dan Bacteroidese Prevotellae
Porphyromonas kelompok antara subyek sehat dan pasien AD. Selain itu, tingkat
feses dari kelompok BacteroidesePrevotellaePorphyromonas tetap tidak
terpengaruh oleh suplementasi probiotik. S. aureus terdeteksi pada hanya satu
pasien AD setelah mencuci keluar periode (8_ 104 bakteri / g).
Rantai pendek asam lemak (tinja kimia)
5/17/2018 Mikrobiota Fekal - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikrobiota-fekal 12/17
Konsentrasi feses dari total rantai pendek asam lemak serta tingkat asetat,
propionat, butirat, dan valerat caproate tidak dipengaruhi oleh suplementasi
probiotik di kedua subyek sehat dan pasien AD (Tabel 4). Namun, pada pasien AD,
pH feses segar ditemukan menurun secara signifikan pada periode probiotik
dibandingkan dengan plasebo (6,6 _ 0,5 vs 0,4 7.0_, P ¼ 0,037). Dua minggu
setelah cuci bersih, sedikit menurun, tetapi tidak signifikan diamati (6.9_ 0,4, P ¼
0,139). Pada orang dewasa sehat, tidak ada perbedaan signifikan terlihat antara
periode studi (6,7 _0.5 (probiotik) vs 6,8 _0.5 (cuci bersih) vs 6,8 _ 0,4 (plasebo)).
Sitotoksisitas dan genotoxicity air feses
Inkubasi sel HT29clone19A dengan air feses tidak menunjukkan efek yang
signifikan terhadap viabilitas sel. Sebelum memulai percobaan, viabilitas sel rata-
rata adalah 99,3 _0.2%, sedangkan setelah 30 menit inkubasi dengan air feses,
kelangsungan hidup berkisar antara 97,6% dan 98,8% pada periode studi yang
berbeda. Setelah inkubasi dengan larutan garam isotonik (0,9%) sebagai kontrol
negatif, viabilitas sel menyumbang 97.0_1.4%. Oleh karena itu, air feses tidak
sitotoksik terhadap sel HT29.
Air tinja dari orang dewasa yang sehat tidak menginduksi istirahat untai
DNA yang lebih signifikan dalam HT29 sel dibandingkan dengan kontrol salin
isotonik. Selanjutnya, suplementasi dengan campuran probiotik tidak berpengaruh
pada aktivitas genotoksik sampel air feses pada kelompok penelitian (Gambar 2).
Sebaliknya, pada pasien dengan AD, suplementasi dengan kombinasi L. paracasei
LPC-37, L. acidophilus 74-2 dan B. animalis subsp. lactis DGCC 420 menghasilkan
penurunan yang signifikan dari genotoxicity air feses di HT29 sel dari 23,5 _9.2%
pada periode plasebo menjadi 16,7% setelah _7.6 probiotik. Tingkat ini sebanding
dengan tingkat plasebo subyek sehat dengan 14,6 _ 6,8%. Selain itu, nilai intensitas
membandingkan ekor periode plasebo mengungkapkan secara signifikan lebih
tinggi genotoksik potensi sampel air dari feses pasien AD daripada dari subyek
sehat (Gbr. 2).
5/17/2018 Mikrobiota Fekal - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikrobiota-fekal 13/17
Diskusi
Saldo dalam komposisi mikroba usus adalah penting dalam hal risiko
kanker kolorektal. Pada pasien AD, komposisi mikroba dari mikrobiota usus
cenderung ketidakseimbangan menuju manfaat bagi bakteri berbahaya. Bukti ada
bahwa bakteri probiotik menengahi efek menguntungkan dengan memodifikasi
mikrobiota usus dan aktivitas metabolik. Hal ini sebelumnya telah menunjukkan
bahwa campuran probiotik dilengkapi terpengaruh parameter kekebalan tubuh
perifer dan cenderung menghilangkan gejala kulit di AD patients.20
Dalam penelitian ini, suplementasi dengan minuman probiotik meningkat
secara signifikan laktobasilus feses total dalam kedua kelompok studi. Tingkat
berkorelasi cukup dengan konsentrasi L. paracasei (P ¼ 0,005, n = 90) dalam mata
pelajaran dilengkapi dengan dosis tertinggi dalam campuran probiotik (publikasi
200.820). Jumlah total Bifi-dobacterium tidak diubah secara signifikan oleh
intervensi probiotik, meskipun peningkatan dari spesies B. dikonsumsi lactis
diamati (diterbitkan 200.820). Ini mungkin indikasi pergeseran dalam genus
Bifidobacterium lactis terhadap B. menggarisbawahi in vitro terdeteksi adhesi
efektif strain ini untuk lendir usus manusia (terisolasi dari orang dewasa)dibandingkan dengan jenis lainnya Bifidobacteria. 19 Di sisi lain, tingkat B. lactis
agak rendah dibandingkan dengan konsentrasi seluruh bifido dan, dengan demikian,
mungkin tidak mempengaruhi jumlah total. Feses Bifidobacterium tingkat pada
sukarelawan muda relatif rendah dibandingkan dengan penelitian sebelumnya di
usia-cocok mata pelajaran, tetapi juga dibandingkan dengan peserta lanjut usia.
22e26 ini bertentangan dengan pendapat umum bahwa Bifidobacterium tingkat
lebih tinggi pada orang dewasa muda dibandingkan orang tua. 27e29 Namun,
5/17/2018 Mikrobiota Fekal - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikrobiota-fekal 14/17
konsentrasi Lactobacillus ditentukan oleh qPCR sesuai dengan data.25 diterbitkan
sebelumnya, 30 tingkat feses dari kelompok Bacteroidese Prevotellae
Porphyromonas tetap tidak terpengaruh oleh suplemen dan sesuai dengan hasil yang
diperoleh dalam studies.22 lain, 30 Tidak ada variasi yang diamati antara sehat
subyek dan pasien untuk kelompok bakteri. Sebaliknya, tingkat feses dari C.
perfringens klaster IeII berbeda secara signifikan antara pasien AD dan orang
dewasa yang sehat (Tabel 3). Lebih sampel tinja positif (14 dari 15) dan tingkat
yang lebih tinggi dari kilau C. perfringens IeII ditemukan pada pasien AD.
Clostridia secara luas knownto terlibat dalam pembentukan senyawa beracun dan
genotoksik karena tingginya aktivitas mereka b-lucuronidase dan, dengan demikian,
mungkin memodulasi risiko cancer.31 Menariknya, pada pasien atopik, aktivitas
genotoksik air feses meningkat pada semua mempelajari periodscompared untuk
healthycontrols. Pengamatan dan perbedaan yang sangat signifikan dalam periode
plasebo (P ¼ 0,006, Gambar. 2) menunjukkan bahwa potensi genotoksik air feses
umumnya mungkin meningkat pada pasien AD. Untuk yang terbaik dari
pengetahuan kami, ini adalah studi pertama menyelidiki potensi genotoksik air feses
pada pasien dermatitis atopik. Suatu kegiatan genotoksik tinggi faecalwater secara
langsung berhubungan dengan tumor meningkat incidence.32 Hal ini menimbulkan
pertanyaan apakah risiko kanker usus besar umumnya meningkat pada pasien
atopik. Sebuah meta-analisis dari Sherman et al.9 dievaluasi hubungan antara alergi,
sebagai bagian dari penyakit atopik, dan kanker. Analisis lebih dari 500 penelitian
antara tahun 1955 dan 2006 mengungkapkan bahwa lebih dari dua kali lebih banyak
studi melaporkan hubungan terbalik allergyecancer dari asosiasi positif dilaporkan.
Nilai dari asosiasi bervariasi antara kanker sistem organ yang berbeda. Khusus
untuk kanker usus besar dan dubur, hubungan terbalik diamati pada subyek alergi.
Sebuah penelitian di Jerman caseecontrol yang meneliti hubungan atopi dan risiko
kanker kolorektal tidak menunjukkan hubungan statistik yang signifikan dari kanker
kolorektal dan diseases.10 atopi atau atopi terkait Observasi ini bertentangan
dengan anggapan kita. Namun, kedua studi difokuskan terutama pada jalur
imunologi melalui sistem IgE dan fungsi pelindung dan tidak secara khusus pada
kondisi lingkungan yang sangat mempengaruhi usus besar karsinogenesis.
5/17/2018 Mikrobiota Fekal - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikrobiota-fekal 15/17
Umumnya, kekebalan penjelasan untuk hubungan dipostulasikan antara atopi dan
risiko kanker masih sangat spekulatif. Mungkin, respon kekebalan sehingga
imunosurveilans meningkat melebihi efek metabolik berbahaya dimediasi oleh
bakteri usus spesifik seperti Clostridia dan Bacteroides yang meningkat di AD.
Kemajuan dalam pemahaman pathwaysmay kanker andimmunological menawarkan
petunjuk lebih lanjut pada peran gangguan atopik dan risiko berbagai jenis kanker.
Kondisi di usus besar dan, dengan demikian, potensi genotoksik
dipengaruhi oleh beberapa parameter, sebagaimana telah ditunjukkan. Data
eksperimen dari beberapa penelitian telah menunjukkan bahwa asupan oral
probiotik dan prebiotik menghasilkan pengurangan risiko tumor dengan
mengurangi paparan genotoxins di gut.32e34 Secara khusus L. acidophilus 145
dalam kombinasi dengan longum B. 913 dan B. animalis dilengkapi subsp. lactis
DGCC 420 mengurangi potensi genotoksik air feses in vivo dan sesuai di vitro.14,
35 Pool-Zobel et al.36 dan Rowland et al.37 melaporkan fungsi pelindung dari
lactobacilli yang berbeda dan spesies bifido pada kerusakan DNA yang diinduksi
karsinogen dalam sel usus besar dari tikus dan penurunan b-glukuronidase aktivitas
di isi sekum. Informasi ini sejalan dengan penelitian lain yang mendokumentasikan
lactobacilli dan bifidobacteria menghasilkan tingkat rendah dari b-glukuronidase,
tetapi juga azoreductase dan nitroreductase, sedangkan anaerob yang ketat
(Bacteroides sp, Clostridium sp.). Menghasilkan tingkat tinggi enzim beracun 8,38,
39. Reguler asupan berbeda strain probiotik Lactobacillus mengungkapkan
penurunan konsentrasi feses dan kegiatan ini kanker mempromosikan enzim dalam
humans.12, 40,41 Dalam penelitian ini, suplementasi dengan L. paracasei LPC-37,
L. acidophilus 74-2, dan B. lactis DGCC 420 tidak mempengaruhi genotoxicity air
feses pada subyek sehat. Sebaliknya, air feses pasien atopik memiliki potensi
genotoksik jelas berkurang setelah konsumsi 8-minggu dari minuman probiotik.
Efek yang berbeda dari probiotik dalam kelompok mata pelajaran menunjukkan
bahwa interaksi bakteri probiotik dengan mikrobiota tersebut mungkin dipengaruhi
oleh kondisi khusus yang tergantung pada status kesehatan dari tuan rumah. Guerin-
Danan et al.41 ditentukan enzim tertinggi aktivitas penurun efek probiotik pada
subyek dengan tingkat awal tinggi aktivitas enzim, konsekuensi logis dari
5/17/2018 Mikrobiota Fekal - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikrobiota-fekal 16/17
genotoxicity air umumnya tinggi feses pada pasien AD. Di sisi lain, pH feses adalah
signifikan secara signifikan adalah dikurangi pada pasien pada periode probiotik
yang mungkin telah mengakibatkan penghambatan pertumbuhan dan aktivitas
potensial karsinogen bakteri pembentuk. Sejak feses C. perfringens klaster IeII
tingkat tetap tidak terpengaruh, kelompok lainnya Clostridia atau spesies bakteri
yang mungkin bertanggung jawab atas aktivitas genotoksik berkurangnya air tinja.
Saran ini didukung oleh genotoxicity tidak berubah pada subyek sehat dan secara
signifikan mengurangi tingkat C. perfringens klaster IeII pada periode probiotik.
Rantai pendek asam lemak adalah produk fermentasi yang paling penting
bakteri di usus besar. Sebagian besar (sampai 95%) dari ALRP dan produk lainnya
yang dibentuk oleh bakteri usus diserap dari usus atau lebih metabolized.42 Oleh
karena itu, perubahan kecil dalam ekskresi fekal menunjukkan perbedaan besar
dalam produksi ALRP atau penyerapan di usus. Dalam studi ini, tidak ada variasi
yang signifikan dalam konsentrasi feses dari asetat ALRP utama, propionat dan
butirat n-akibat konsumsi probiotik ditentukan dibandingkan dengan plasebo.
Dengan demikian, produk metabolik lainnya dari ALRP tampaknya bertanggung
jawab atas pH feses secara signifikan berkurang pada pasien pada periode probiotik.
Secara umum, efek dari probiotik pada konsentrasi ALRP feses pada manusia
bervariasi tergantung pada strain probiotik dan bakteri diberikan count.43e46
Konsentrasi dan rasio molar asetat, propionat dan butirat dalam penelitian ini tidak
berbeda antara subyek sehat dan pasien AD dan sebanding dengan tingkat diperoleh
dari dalam studies.47 lain, 48 Kesimpulannya, air feses pasien lebih genotoksik
dibandingkan dengan subyek sehat yang menunjukkan risiko yang lebih tinggi
kemungkinan untuk kanker usus besar pada pasien AD. Kombinasi probiotik yang
mengandung L. paracasei LPC-37, L. acidophilus 74-2, dan B. lactis DGCC 420
mampu secara signifikan mengurangi potensi genotoksik air feses pada pasien AD
dan dengan demikian, dapat berkontribusi pada lingkungan yang kurang
karsinogenik. Namun, feses terdeteksi C. perfringens klaster IeII tampaknya tidak
bertanggung jawab atas aktivitas genotoksik berkurang.