Isolasi Inhibitor Angiotensin 1-Converting Enzim (ACE) dari hidrolisat jeroan

bandeng

Chanos chanos Forsk.

USULAN PENELITIAN S1

Oleh: MASTORI

04/PN/177615/09995PEMBIMBING : 1. Dr. Ir. Ustadi, M.Sc.

2. Dr. Ir. Iwan Yusuf B.L. ,M.sc.

LETAR BELAKANGHIPERTENSI PENYAKIT ENDEMIK• 15-29% PENDUDUK DUNIA

MENDERITA• MENYERANG TARGET ORGAN UTAMA

PENGOBATAN • EFEK SAMPING• 1-2 BULAN

JEROAN BANDENG• LIMBAH BERPOTENSI SEBAGAI

HIDROLISAT• MENINGKATKAN NILAI TAMBAH

HIDROLISAT

TUJUAN

MENGETAHUI KEKUATAN INHIBITOR

• HIIDOLISIS PAPAIN• HIDROLISIS TRIPSIN

MENGISOLASI

• INHIBITOR ACE

METODOLOGIBAHAN Jeroan ikan

bandeng( Chanos chanos Forsk.)

ACE ( Angiotensin Converting Enzyme)

Substrat ACE (hippuryl-histidyl-leucine)

Buffer Sodium Borat, NaCl 0,5 M, HCl 1 M,

Etil Asetat Aquades, SP-Sephadex C25 (35x350

mm), SP-Spadedex G-25 (2,5 x

150 cm) enzim papain dan tripsin,

ALAT Tabung dan gelas

inkubasi, mikro pipet tabung reaksi, sentifuse, freez dray UV-Spectrofotometer, Inkubator kromatografi, Electroforesis SDS-PAGE, alat uji protein,

CARA KERJA

Jeroan bandeng dibersihkan dan direbus

Dihomogenkan diatur : HCl 1 /NaOH 1 N ( papain pH5,5 & tripsin pH8,5)

Tambahkan enzim ( papain & tripsin secara terpisah) 5% b/b protein

inkubasi 50 0

C 2jam papain& 35 0

C 2jam & diinaktivasi pada suhu didih air 10 menit

Dipisahkan & disaring , disentrifus 10 menit 110.000 rpm ( hidrolisat)

Preparasi hidrolisat

Pengujian inhitor ACEPencampuran dan inkubasi• 50 µ l sampel • 50 µ l larut ACE

( 25 munit/ml)• pre-inkubasi; 37

oC, 10 menit • 150 µ l substrat

( 8,3 mM HHl) Diinkubasi ;37 oC, 30’

ekstraksi• 250 µ l 1 M HCl • ekstrasi 0,5 ml

etil asetat• sentrifus ( 800

gravitasi, 15’• 0,2 ml supernatan

ke tabung ujiPengukuan absorbansi• Dievaporasi suhu

ruang 2 jam ( didalam vakum)

• Dilarutkan 1 ml aquades

• Diukur 228 UV-spectrophotometer

KONSENTRASI PENGHAMBATAN IC 50

Presentase penghambatan (%) = ([Ec – Es]/[Ec – Eb]) x 100

Es = absorbansi larutan test Ec = absorbansi larutan control Eb = absorbansi larutan blank IC50 diperoleh jika larutan test

menghambat 50% aktivitas ACE

Isolasi inhibitor ACE menggunakan kromatografi

berlapis Ion Exchange : Fasa tetap: SP-Sephadex

C25Fasa bergerak: buffer sodium borat 20 mM ( pH 4)Linier gradient NaCl (0-2 M)

Gel-filtration : fasa tetap: SP Sephadex G 25 fasa bergerak: aquades kecepatan aliran rata-rata 30 ml/ jam, setiap fraksi dalm tabung 5 ml.

Pengujianyangdilakukan dari fraksi yang

diperoleh Uji aktifitas inhibitor ACE Uji kadar protein Uji kemurnian protein

dengan elektroporesis ( SDS-PAGE )

Gambaran UMUM yang akan dilakukan

Jeroan Bandeng

hidrolisat

SP Sephadex C25

Fraksi-fraksi

SP Sephadex G25

Fraksi-fraksi

Uji Kemurnian Isolat

Uji inhibitor ACE (220nm)

Uji protein (280nm)

Uji Inhibitor ACE (220)

Uji protein (280nm)

Uji Inhibitor ACE (220)

Papain Tripsin

TERIMAKASIH