7/23/2019 Tes Tes Biokimia
1/23
Tes tes biokimia
7/23/2019 Tes Tes Biokimia
2/23
Kegunaan tes tes biokimia
1. u/ melihat met bakteri thp KH & zat lain yg
berhub.
2. Met bakteri thp protein & as amino
3. Met lemak oleh bakteri
4. Enzim-enzim yg dihasilkan oleh bakteri
7/23/2019 Tes Tes Biokimia
3/23
Tes oksido-fermentasi
Tujuan: lihat pemecahan KH dlm keadaanaerobik/oksidatif a/ anaerobik/fermentatif
Cara:
1. Bakteri ditanam pd 2 medium semisolidmedium OF. Berisi glukosa & bromotymol
blue dgn indikator pH jadi kuning bila pH
asam2. Bgn atas 1 medium ditutup parafin cair( u/
anaerob) lainnya biar terbuka (aerob)
3. Diinkubasi semalam 35oC
7/23/2019 Tes Tes Biokimia
4/23
Hasil : positif bila jadi kuning ada pemecahan glukosa, bl neg.lanjutkan sp 4 hr baru bilang neg.
Oksidatif tabung terbuka jadi kuning, yg tertutup tak berubah
Fermentatif; kedua tabung jadi kuning
Non-oksidatif: kedua tabung tak berubah selama 4 hr.
Contoh: P aeruginosa: oksidatif u/ glukosa, non-fermentatif u/maltosa; Alkaligenes faecalis, non-oksidatif u/ glukosa &maltosa
Note: Tes OF hanya u/ basil yg tak meragikan gula-gula sbgpengganti tex peragian gula-gula dgn medium TSI
7/23/2019 Tes Tes Biokimia
5/23
Tes peragian gula-gula
Tujuan: melihat kemampuan bakteri meragikan gula-gula t3 dgn hasilkan asam & gas a/ asam saja.
Cara01
Bakteri ditanam dlm medium cair ada pepton dr salahsatu gula: glukosa, laktosa, sukrosa, maltosamannitol.
Indikator pH phenol red jadi kuning bl asam
Tabung durham u/ tanda ada gas.Hasil: pos; ada peragian KH warna jadi kuning
Neg. tak ada peragian KH, warna tetap merah.
7/23/2019 Tes Tes Biokimia
6/23
Tes peragian gula-gula02
Cara02
Bakteri ditanam TSI medium dgn tusuk ke butt & olespd slant, ada 3 KH: glukosa, laktosa, sukrosa, FeCL,As amino dgn gugus sulfur.
Indikator pH phenol red jadi kuning bl asamPecah dan terangkat agar u/ tanda ada gas.
Hasil: Alkali/asam; ada peragian KH scr fermentasi;butt kuning (asam) slant merah (alkali)
Asam/asam; ada peragian KH scr aerobik/anaerobikslant & butt kuning (asam/asam)
Alkali/alkali; tak ada perubahan tetap merah (alkali)
7/23/2019 Tes Tes Biokimia
7/23
Tes methyl red
Tujuan: melihat dihasilkan asam stabil pd pemecahan
glukosa
Cara:
Tanam bakteri pd medium MR-VP yg ada pepton &glukosa. Inkubasi 1-2 hr 35oC kmd tetesi Methyl red.
Hasil: pos; dihasilkan asam stabil (merah)E coli
Neg.; tak dihasilkan asam stabil (kuning)enterobactercloacae
7/23/2019 Tes Tes Biokimia
8/23
Tes Voges-Proskauer
Tujuan: melihat dihasilkan asam tidak stabil dr pecahanglukosa, shg mudah terurai jadi alkohol kmd jadiacetyl methyl carbinol a/ 2,3 butylene glycol
Cara: bakteri ditanam dlm medium MR-VP inkubasi 1-2hr kmd tambah alfa naftol 5% kmd beberapa saat dgnpotasium hidroksida (KOH) 40%
Hasil: pos; cincin merah diantara lap. Alfa naftol dan
KOH artinya ada acetyl methyl carbinol krn terbtkasam tak stabil dr peragian glukosaenterobactercloacae
Neg. tak ada cincin merah---E coli
7/23/2019 Tes Tes Biokimia
9/23
Tes Hidrogen-Sulfida (H2S)
Tujuan: melihat dihasilkan a/ tidak H2S dr pemecahan
asam amino oleh bakteri
Cara: bakteri ditanam pd medium TSI a/ SIM yg ada
asam amino dgn gugus sulfur, ferro chlorida laluinkubasi semalam
Hasil: pos; ada H2S dgn terbtk FeS (hitam) hasil ikatan
antara H2S dan FeCl2Proteus vulgaris
Neg.; tak ada perub (tak ada hitam)shigella sonnei
7/23/2019 Tes Tes Biokimia
10/23
Tes Indol
Tujuan: melihat kemampuan bakteri hasilkan indol hslpecahan tryptofan (asam amino lain) yg ada dlmpepton
Cara:bakteri ditanam medium TSI a/ SIM yg adatryptofan & FeCl2. tes ini u/ pembentukan H2S danmotility bakteri. Inkubasi semalam & tetesi lar.Kovac pd permukaan medium.
Hasil: pos; reagensia jadi merah--- E coliNeg. Reagensia tetap coklat muda--- enterobacter
cloacae
7/23/2019 Tes Tes Biokimia
11/23
7/23/2019 Tes Tes Biokimia
12/23
Tes Dekarboksilase
Tujuan: melihat bakteri bisa membentuk amin dr
asam amino dgn rx dekarboksilase.
Cara: bakteri ditanam dlm butt & slant medium
yg ada asam amino: lysine, arginine a/
ornithine. Inkubasi semalam periksa sp 4 hr.
Mis. Tanam pd Lysin Iron Agar (LIA) ada
pepton, ekstrak yeast, lysine, glukose iron
citrate, bromcresol purple indokator agar.
7/23/2019 Tes Tes Biokimia
13/23
Hasil: pos; jadi ungu, krn dekarboksilase hanya
pd pH asam, jg dipakai u/ melihat bakteri bisa
meragikan glukosa
Neg. tetap kuning, tapi bl inkubasi lama terj
alkalisasi shg indikator jadi ungu.
LIA bisa melihat H2S juga ada warna hitam pd
agar (FeS2)
7/23/2019 Tes Tes Biokimia
14/23
Tes urease
Tujuan: melihat bakteri bisa hasilkan urease a/ tidak
Cara: bakteri ditanam pd medium urease yg ada urea
dgn neutral red sbg indikator pH inkubasi & baca
hasilnyaHasil: pos; warna jadi merah krn pH jadi alkalis akibat
tbtk ammonia dr urea dgn bantuan enzim urease.
proteus vulgaris
Neg. warna pH indikator tak berubah jadi merah---E
coli
7/23/2019 Tes Tes Biokimia
15/23
Tes phenilalanine diaminase
Tujuan: menunjukkan terjadinya diaminase dr phenilalanine shg dihasilkanphenylpiruvic acid.
Prinsip tes: alfa keto acid berx dgn ferri chlorida btk warna hijau(phenylpiruvic acid)
Cara:
1. Siapkan reagen ferri chlorida2. Tanam bakteri pd agar miring yg ada kandungan phenylalanine lalu
inkubasi
3. Tetesi 5 tetes reagen dlm biakan bakteri pd agar
4. Goyangkan shg rx lebih intensif
5. Bila ada warna hijau berarti ada phenylpyruvic acid yg akan hilang dlm
10 mntKontrol pos P vulgaris
Neg. E coli
7/23/2019 Tes Tes Biokimia
16/23
Tes Oksidase
Tujuan: melihat bakteri yg dites hasilkanoksidase atau tidak
Cara01: ambil sdkt koloni gosokkan pd kertas
saring yg sebelumnya dibasahi dgn lartetramethyl p diamine dihydrochloride
Pos; warna reagen jadi ungu tua dlm 5 mnt
Neg. ; tak berubah warna reagen
7/23/2019 Tes Tes Biokimia
17/23
Tes Oksidase02
Cara02: tetesi koloni yg dicurigai dgn lar
tetramethyl p diamine dyhydrochloride
Pos; koloni berubah warna mula-mula merah
muda pelan-pelan jadi ungu tua
Neg. ; koloni tak berubah
Note: segera buat pd saat koloni merah muda(bakteri masih hidup) ungu tua (sudah mati)
Kontrol pos; P aeruginosa Neg. E coli
7/23/2019 Tes Tes Biokimia
18/23
Tes katalase
Tujuan: melihat apakah bakteri yg dites hasilkan
enzim katalase a/ tidak
Cara: biakkan bakteri pd medium cairan a/ pd
agar miring kmd tetesi H2O2 5%
Hasil; pos; ada terbtk gel udaraS aureus
H2O2--- H2O + CO2Neg. tak ada gel udara--- St. faecalis
7/23/2019 Tes Tes Biokimia
19/23
Tes Koagulase
Tujuan: melihat bakteri yg dites hasilkan
koagulase a/ tidak
Cara 01
Masukkan dlm 1 tab rx steril 1 ml biakan bakteri
yg akan dites & tambahkan 1 ml plasma steril
inkubasi 4 jam 36oC kmd lihat hasilnya.
7/23/2019 Tes Tes Biokimia
20/23
Cara 02: buat suspensi tebal bakteri yg akan dites
dlm lar grm fisiologis steril, kmd tambah 1 ml
plasma steril inkubasi 4 jam & baca hasilnya
Cara 03: buat suspensi di atas kaca benda &
tetesi dgn plasma goyang pelan dan perhatikan
hasilnya
7/23/2019 Tes Tes Biokimia
21/23
Hasil tes:
Positif: terjadi koagulase--- S aureus
Negatif: tak terjadi koagulase---S epidermidis
7/23/2019 Tes Tes Biokimia
22/23
Tes kepekaan antibiotik
Guna:
1. Pedoman dlm memilih AB tepat u/ terapi
2. Pola kepekaan bakteri t3 thp AB
Rutin mnt Kirby and Bauer (tes difusi) gunakan
disc (cakram) dgn konsentrasi sesuai standarNCCLS USA
7/23/2019 Tes Tes Biokimia
23/23
Tes kepekaan antibiotik
Cara:
Suspensi bakteri steril nacl 0.9% sesuai McFarland 0.5; diambil dgn kapas lidi steril ,
dioles merata pd medium u/ tes kepekaan,cakram AB diletakkan mendatar, inkubasisemalam 35oC, diukur zona hambatan dgnkaliper u/ masing AB & sesuaikan dgnstandar dr NCCLS apakah resisten atausensitif.