Structural Abnormalities of the AChR Caused by Mutations Underlying Congenital Myasthenic Syndromes

11
++

Transcript of Structural Abnormalities of the AChR Caused by Mutations Underlying Congenital Myasthenic Syndromes

���

��������������� ������������������������������������������������� ��� �

�� ��������!"��# ���$�����

�%�&%&�#��'����# % � ����%(���)(*�)& ���

'��+&%% �� �,����#� �-�)��-�� %#�

+� %(�� ���������

��������������� ������������������������������ �� ������

�������������������������������������������

��������������� ������������ ��������������������� ��������

����������� ���

������������ �����������������������������������������������������������������

�������������������� �!"#��$�����%����&

�"�����&�����������������'��$�(���'������)���������)�������$�����%����&

�"�����&�������*���&������'��$�(���'�+�������,�������,�������$�����%����&

�.�/*�)/��/(���'0�% 1��� �%����� ���%(����#�&#����(� � �&����#� �-

��-�� %#��� %(�� � ������� ��)+���'�� %&�� �-��&%% �� �� %( ��-��� ���� �-�%(���%�#(�# ������2%�����)(*�������#%���2��%� � �%�%(����&��3

�& &#��0&�% ����4%�� ���&���%(%��&%% �� �� %( ���& #���)(* ����%(�

�� %� ������& �����)+���/(���0�� %����� #�%���� %( �� %(���3 &'&� %-��������� &#%� ���)(*���� ����

56�78*9�����-�� %#��� %(�� � ������� ��)+��:��%�#(�# ������2%��

��)(*�:��&%% �� :��)(*���� ���:�-������#&��� ��%�2��%� �:�� %�(���#: #���(���#:���������(�'� � ;% ��

4�/*89,)/48�

���� ��� ��!"#$� %&#'"���!�� '&�()�%�'� * ��+� #)�� #� ��"�)� ����,'� )�,-� �.

!���)!"�(� (!'�)(�)'� �.� ��,)�%,'�,$#)� ")#�'%!''!��/� ���&� '�#)�� "��� ��#)#�"�)!'"!�

�$!�!�#$�.�#",)���.�.#"! #0$��%,'�$��1�#2��''/��!..�)��"!#$�(!# ��'!'�%#&�0��!%-�)"#�"

'!����(!..�)��"�'&�()�%�'�)�3,!)��(!..�)��"�")�#"%��"�'")#"� !�'/���1�4�)���5��-"�!�

'-��!#$!'"����"�)'��#�(�.!�!"!4��(!# ��'!'�0#'�(�����$!�!�#$��5#%!�#"!���%#&�-)�4�

(!..!�,$"/�4�)�"���$#'"�"1��(��#(�'��(�.��"'�!��-�'"'&�#-"!���'&�#-"!���#�(�-)�'&�#-"!�

-)�"�!�'��#4��0����(�.!��(�#�(�"���,�(�)$&!� � ���"!��0#'!'�(�"�)%!��(/6��,"#"!��'

!�� "���%,'�$��#��"&$���$!��� )���-"�)� *� ��+�,�(�)$!��� ���(�.!�!���&�7869�'$�1

��#���$��#�(�.#'"���#���$�'&�()�%�':66879�%,"#"!��'�!��)#-'&���#��#$'���#,'��� ��

(�.!�!���&� '&�()�%�:76� %,"#"!��'� !�� �$�� �#,'�� ��(-$#"�� #��"&$���$!��'"�)#'�

(�.!�!���&:77�7;� #�(�%,"#"!��'� !�� ���$!��� #��"&$")#�'.�)#'�� * ���+�,�(�)$!�� ��

�(()�''� .�)� ��))�'-��(����<� �#4!(� ���'���� �,)�'�!����'� �)�,-�� ��#"��)#$$� ��'"!","�� �.��$��,$#)� ��(!�!���� ���� ����� �#(�$!..��� ��#(!� "���� 5.�)(� �;� =���� ��!"�(� �!� (�%/��!��<�+>>�*9+6?@A�777;66:�.#5<�+>>�*9+6?@A�777>97/�

(0��'��B�#%%�)/!%%/�5/#�/,2

��$.66�8����������/*,)/,*�<��.�8*+�<4/46�

1!"�� �-!'�(!�� #-��#/7>� �$"��, �� !"� !'� $!2�$&� "�#"� %,"#"!��'� 1!$$� 0�� !(��"!.!�(� !�

#((!"!��#$��#�(!(#"��-)�"�!�'�$��#"�(�#"� "�����,)�%,'�,$#)�C,��"!���7A�7@�!"� !'���1

-�''!0$�� "�� ,'�� ���"!�� '�)���!� � ��%0!��(� 1!"�� .,��"!��#$� '",(!�'� "�� -)�4!(�

(�.!�!"!4��(!# ��'!'�.�)�"���%#C�)!"&��.�#..��"�(�.#%!$!�'/

��)���1���! �$! �"�"���)�',$"'��.�"��� ���"!��'�)����"�#"�1���#4��-�).�)%�(���

','-��"�(� �#'�'� �.� ��� #�(� (!'�,''� '�%�� �.� �,)� '",(!�'� �.� "��� %�$��,$#)

%���#�!'%'�"�#"�,�(�)$!��"��'��(!'�)(�)'/

�)*66�4�=�>8*�+,/�/48���4���,�?6)/69�)��6��8>�)+�

�5��'�1!"�!��"��� ���'�����(!� �"����,%#��� ���α��β��δ��#�(�ε�',0,�!"'�� �$�� �����#�(�)#-'&��1�)��'�)����(�,'!� �'!� $��'")#�(����.�)%#"!���-�$&%�)-�!'%

#�#$&'!'�*�� D+/��%-$!���'�!��1�!���#0��)%#$����.�)%�)'�1�)��(�"��"�(�1�)��',0�

C��"�(�"��(!)��"����'�3,���!� /���'")!�"!�����(��,�$�#'��(! �'"!��'�1�)��,'�(�"�

���.!)%����'�3,�������#� �'�#�(�"��")#�2�"���'� )� #"!����.�%,"#�"�#$$�$�'�1!"�!�

-�(! )��'/�����#'�'�1��)�����#0��)%#$����.�)%�)'�1�)��(�"��"�(��0,"�"����$!�!�#$

/�.<6 ��� )+�� � � ( 2 � �(���� %(�� 2� � � � -�� � ��� %(�� �������� ( � '���

��� ���������� �����'����#�&#��-���% � %&� �

�&�()�%� �!�'�!-'

�$�1���#���$ 6>

E#'"���#���$ @

� ���(�.!�!���& @9

� ���(�.!�!���&�*)#-'&�+ =

���"&$���$!��'"�)#'��(�.!�!���&� @

���1!"���-!'�(!��#-��#� A

699

��E,��"!��#$�'",(!�'��#4����"�0����-�).�)%�(�.�)�"��������#� �'�!��"��'��(!'�)(�)'/

/�.<6 �.� <�% ��� ��� %(�� )+�� �&%% �� � �� 9��� �2#� � �#�;��� %� %(�

7�%(��##�4� % %&%�����+�#�&#��+�� ��

D)�"�!� �,0,�!" �,"#"!��' �!�'�!-'

� �� α @ ?

β 7 7

δ > >

ε ;? @@

�#-'&� A =

�$� F @

��� @ A

��"#$ @? 699

��! ����<���67��8*5��)�96+��8>��)46�)6�

(!# ��'!'� '")�� $&� !%-$!�#"�(� ���� -#)"!�,$#)� ����� #$$� "��� �5��'�1!"�!�� "�#"� ���

1�)�� ',0C��"� "�� (!)��"� ��� '�3,���!� /� E,��"!��#$� �..��"'� �.� %,"#"!��'� 1�)�

!�4�'"! #"�(� 0&� 0!����%!�#$� �)� �$��")�-�&'!�$� !�#$� #�#$&'!'� �.�%,"#�"�� ��� �)

� ��G)#-'&���5-)�''�(�!������7=;���$$'/

������6��'��1'� "���',0(!4!'!����.�(!# ��'�(�'&�()�%�'�0#'�(�,-����$!�!�#$

.�#",)�'�#�(�%,"#"!��#$�#�#$&'!'/�������6��'��1'�"���-)�"�!�'G� ���',0,�!"'�!�

1�!���"���%,"#"!��'�#)�� $��#"�(/�,)�'�)���!� ��#'� "��(�(�"��.��,'����"���� ��

',0,�!"� ���':�"�,'��"���-)�-�)"!����.�-#"!��"'�1!"�� �$��#�(� ����%,"#"!��'�%#&

0�� ,�(�))�-)�'��"�(/� �4�)"��$�''�� !"� !'� �$�#)� "�#"� � ��� (�.!�!���&� !'� "��� %�'"

��%%��� ���#�(�"�#"��!��"���%#C�)!"&��.��#'�'��!"�!'�(,��"��%,"#"!��'�!��"���� ��

ε�',0,�!"� ���/� ����%,"#"!��'� "�#"� 1�� �#4�� !(��"!.!�(� !�� "��� ε�',0,�!"� ���� #)�'��1��!��E������6/�ε�F?D�#�(�ε�776E�,�(�)$!��'$�1���#���$�'&�()�%�'�7A�ε�676D,�(�)$!�'�#�.#'"���#���$�'&�()�%��6A�#�(�"���)�%#!�!� �;>�#)���!"��)�$�1��5-)�''!��

�)��,$$�#$$�$�'�"�#"�,�(�)$!��� ���(�.!�!���&�'&�()�%�'��)�,�%#'2�"���-����"&-���.

.#'"� ��#���$� '&�()�%�'/� ���� %#C�)!"&� #)�� H-)!4#"�I�� #�(� ε67@F(�$��� 1�!��� !'��%%���!��"�����%#�&��&-'&�-�-,$#"!����.���,"��#'"��,)�-��@�!'�"�����$&��$�#)�

�,"��5#%-$���.�#� .�,�(�)��..��"/�ε6;@=(�$���ε�;66���#�(�εAA;(�$F�#)�� "���%�'"

��%%���%,"#"!��'� !(��"!.!�(� !�� #,�#'!#�'� .)�%� ��)"��)�� �,)�-�� �)� "�����!"�(

�!� (�%/����#((!"!����1��#�(��"��)'��#4��(�"��"�(�%,"#"!��'�!��"����0�5��#���"'�

0!�(!� ��$�%��"�!��"���ε�',0,�!"�-)�%�"�)�)� !��/7F87=���� ����#'�'�1��)��ε�',0,�!"

>4=,*6 �� ����%#"!�� )�-)�'��"#"!��� �.� "��� � ��� ε�',0,�!"� '��1!� � "��� (!..�)��"%,"#"!��'�!(��"!.!�(�#"�"�����#"��)#$$���'"!","���.���$��,$#)���(!�!��/

��@.66�8����������/*,)/,*�<��.�8*+�<4/46�

�,$$�%,"#"!��'�#)��-)�'��"����0�"��#$$�$�'��!"�!'�"��, �"�"�#"�%#!�"��#�����.�$�1�$�4�$

�5-)�''!����.�"���γ�',0,�!"���#0$�'�.�"#$�� ���"��-#)"!#$$&���%-��'#"��.�)�$�''��.

#(,$"�� ��/7

����#4��0����,�#0$��"��(�"��"�%,"#"!��'�1!"�!��"��� ���'�����(!� �"���� ���!�

#)�,�(�7AJ��.�� ���(�.!�!���&��#'�'�(�.!��(�0&�"���#�#$&'!'��.�%,'�$��0!�-'!�'/

�����"$&��!"��#'�0����(�%��'")#"�(�"�#"�%,"#"!��'�!��)#-'&���1�!���-$#&'�#���''��"!#$

)�$��!���$,'"�)!� ��.�"���� ������"���-�'"'&�#-"!��%�%0)#����,�(�)$!��'�%���.�"��'�

�#'�'/76���,'�.#)��1���#4��!(��"!.!�(�)#-'&��%,"#"!��'�!���!���,�)�$#"�(�2!�'�!-'/

�#����#)0�)'�"���%!''��'��%,"#"!����??�/����"�)���2!�'�!-'��??��!'�-)�'��"���

0�"��#$$�$�'�#�(��!��"���)�%#!�!� �'!5�2!�'�!-'��"���%,"#"!��'�#)����"�)�#$$�$!�/���,'�

0&����")#'"�1!"��"���%#�&�-)!4#"��%,"#"!��'�!(��"!.!�(�!���"��)� ����-)�$!%!�#)&

)�',$"'�', �'"�"�#"�??��1!$$�0��!(��"!.!�(�!��"���%#C�)!"&��.�� ���(�.!�!���!�'�(,�

"��)#-'&��%,"#"!��'/

)+��74/A�,�,�,�<�?�//6*���8>�4�A6*4/��)6

����%�(���.�!���)!"#����1!"�!��#�-�(! )���%#&��."��� !4���$,�'�.�)�(!# ��'!'/�E�)

%,"#"!��'� �.� "��� � ���� "��� '$�1� ��#���$� '&�()�%�� ,',#$$&� '��1'� (�%!�#�"

!���)!"#�����1��)�#'�� ���(�.!�!���&�#�(�.#'"���#���$�'&�()�%�'�'��1�)���''!4�

!���)!"#���/������"$&��)���''!4��!���)!"#����#�(�4#)!#0$��-���")#�����.�'$�1���#���$

>4=,*6 �� �!# )#%��.�"���β�'���"'�.)�%�"���ε�',0,�!"��$��#"�(�#0�4��"���-,"#"!4��� ��0!�(!� � '!"��� '��1!� � "��� -�''!0$�� (!'),-"!4�� %�$��,$#)� �..��"� �.� "��� ε�F?D� #%!��� #�!(',0'"!","!��/

��� ����<���67��8*5��)�96+��8>��)46�)6�

'&�()�%�� %,"#"!��'� �#4�� 0���� )�-�)"�(/;9� ���� !�(�5� �#'�� -)�'��"�(� .�$$�1!�

(!..!�,$"&�)���4�)!� �.)�%�#��'"��'!#�#�(�!'�#�%�%0�)��.�#����'#� ,!���,'�-�(! )��

"�#"� �#)0�)'� "��� '$�1� ��#���$� %,"#"!��� ε�F?D/� �$"��, �� #$$� .#%!$&� %�%0�)'

#�#$&K�(� �#)0�)�(� "��� ε�F?D�%,"#"!���� 1�#2��''� 1#'� ��$&� #--#)��"� ��� �$!�!�#$

�5#%!�#"!��� !�� �#'�'� 1��)�� "��� %,"#"!��� !'� -)�'��"� ��� 0�"�� #$$�$�'/� ���� �)&'"#$

'"),�",)���.�"���'�#!$�*,'&����+�� ��0!�(!� �-)�"�!��-$#��'�ε�F?�#"�"���α�ε !�"�)�.#��/;6����"���'�#!$�-)�"�!���"�!'�-�'!"!���!'����,-!�(�0&�4#$!����#�(�"���0#�20����#"

"�!'�-�'!"!��� !'� �&()� ���0��(�(� "�� #�β�'")#�(� "�#"� $!��'� "���� ��0!�(!� � )� !��*E��/� 7+/� �,0'"!","!��� �.� #� -)�$!��� .�)� $�,�!��� #"� "�!'� -�'!"!��� 1!$$� (!'),-"� "��

�&()� ���0��(�.�)%#"!���#"�"�!'�-�'!"!���#�(�"�,'�#..��"�� ��0!�(!� /

����#4��#$'����"�(����'!(�)#0$��4#)!#"!����.�(!'�#'��'�4�)!"&�1!"�!���"��)�'$�1

��#���$�'&�()�%��-�(! )��'/�ε�776E��#'�0����!(��"!.!�(� !�� "1��2!�'�!-'/��������"��)��!'���)%#$�(�%!�#�"�!���)!"#����"�)�, ��"�)��� ���)#"!��':�!��"���'����(�2!��

'�!-��"��)��!'�4#)!#0$��!���)!"#�����.�"���-����"&-���1!"��"���%#$�'�*!��"�)��� ���)#�

"!��'+�&�"� "��-)�'��"�1!"��'&%-"�%'/�E#�"�)'��"��)� "�#�� "���� ���%,"#"!���%,'"

!�.$,����� -����"&-��� #�(� #�� ,�(�)'"#�(!� � �.� "���%���#�!'%'� "�#"� ,�(�)$!�� "�!'

-����"&-!��4#)!#0!$!"&�%#&���$-�!��!�4�'"! #"!��'��.��"��)��5�!"�"�5!��(!'�)(�)'�#�(

!��(�4!'!� ���1�")�#"%��"'/

�!�����#���� ���-��"#%�)����"#!�'�"1��α�',0,�!"'��"�����"���)�"!�#$$&��%,"#�

"!��'��.�"���α�',0,�!"�"�#"��#,'��#�$�''��.�.,��"!�����,$(��#4��#�(�%!�#�"��� #"!4�

�..��"/� ��� '",(!�(� #� .#%!$&�� (�'�)!0�(� -)�4!�,'$&�;7�;;� !�� 1�!��� 1�� 0�$!�4�� "�!'

���,)'/���%,'�$��0!�-'&�.)�%�"���!�(�5�-#"!��"�'��1�(�4�)&�'%#$$�%!�!#",)����(�

-$#"��-�"��"!#$'�*��DD'+��0,"��"��)1!'����)%#$�� �����"��"�#�(�)���-"�)��,%0�)'/

��0!�-'&�.)�%�"���-#"!��"L'�.#"��)�(�%��'")#"�(�'!%!$#)�'%#$$���DD'��#$"��, ����

(!(���"�-)�'��"�1!"���$!�!�#$�'&%-"�%'/

�,"#"!��#$� #�#$&'!'��.����.)�%� .#%!$&�%�%0�)'�(�"��"�(�#� '!� $��%!''��'�

%,"#"!����αE7A@���1�!���1#'�-)�'��"�!��.#"��)�#�(�'���*E���/�;��#�(�;�+/��!)��"

'�3,���!� ��.� "���α�',0,�!"� ������(!� �#�(�-)�%�"�)� )� !��'� *#�(�'�)���!� ��.

�"��)�',0,�!"� ���'+�.)�%�"���-#"!��"�.#!$�(�"��(�"��"�#��#((!"!��#$�%,"#"!��/��!� $�

��#���$�)���)(!� '�'��1�� ��'����"#!�!� �αE7A@��1!"��.#'"���#���$���#)#�"�)!'"!�'*E��/�; ��������7+/�����-���&$#$#�!���#"�-�'!"!���7A@�%#-'�"��"����7�)� !��/���"�)�

�'"!� $&��#'�'��1��!��E������;���'�4�)#$�'$�1���#���$�2!��"!��%,"#"!��'��#4��0���

>4=,*6 ��� ���'�3,�����#�#$&'!'�'��1'�#���"�� �")#�'!"!���!���5���F��%,"#"!� �#-���&$#$#�!���"��#�$�,�!��/

���.66�8����������/*,)/,*�<��.�8*+�<4/46�

>4=,*6 �)� �!� $����#���$�#�"!4!"&�)���)(�(�#"�$�1�� ��������")#"!���*699���+��.1!$(�"&-��#�(�αE7A@��� ���")#�'.��"�(�����7=;���$$'<���#���$��-��!� '�#)��(�1�1#)((�.$��"!��'/��,)'"�#�"!4!"&�1#'�.!""�(�"��"���',%��.�"�)����5-����"!#$'�*�������������+:�"��(,)#"!����.� "���$�� �'"�-�-,$#"!����.�0,)'"�#�"!4!"&�1#'�'! �!.!�#�"$&�)�(,��(�!��αE7A@��� ��/�����-)�-�)"!����.�0,)'"'�!��"���$�� �'"�-�-,$#"!���1#'�#$'��'! �!.!�#�"$&�)�(,��(/

>4=,*6 �.� �! �'"!����.�D ��#%-$!���'�1!"��)�'")!�"!�����K&%��-�����'��1�("���-)�'������.�"���%,"#"!���!��"���!�(�5�-#"!��"�*↓+�#�(��!'�.#"��)��0,"���"�!���!'�%�"��)��)'!'"�)/

��� ����<���67��8*5��)�96+��8>��)46�)6�

)�-�)"�(�!��"�!'�)� !���!��1�!���)�'!(,�'��#4��0����%,"#"�(�"��#�-���&$#$#�!��/��"�!'

"�%-"!� �"��'-��,$#"��"�#"�0,$2&�-���&$#$#�!���)�'!(,�'�!��"�!'�)� !���%! �"��#4��#

'"�)!�� !�.$,����� ��� ��#���$� #"!� �� $�#(!� � "�� '"#0!$!K#"!��� �.� "��� �-��� '"#"�� #�(

!4!� �"�����#)#�"�)!'"!�'��.�#�'$�1���#���$:����4�)'�$&��$�''��.�"�!'�)�'!(,��1�,$(

(�'"#0!$!K��"����-���'"#"���$�#(!� �"��#�.#'"���#���$�2!��"!��-)�.!$�/

��!'�'",(&�!%-$!�'�"�#"�"��)��#)����)%#$��,%0�)'��.�� ��'����"���-�'"'&�#-"!�

%�%0)#����0,"�#�(�%!�#�"��� #"!4���..��"��.�"���α�',0,�!"�%,"#"!���)�',$"'�!����$&

7AJ��.� "���� ��'�� "��'��%#(��,-��.� ��)%#$�α�',0,�!"'�� 0�!� � .,$$&� .,��"!��#$/��1�4�)��#�(�%!�#�"�!���)!"#����-#""�)���#'���"�0����)�-�)"�(�.�)��"��)�α�',0,�!".#'"���#���$�'&�()�%��%,"#"!��'/;>

/�.<6 �� �)(*�'&� %��&�% ��

��<�� ���0,)'"�(,)#"!��'�1�)��.!""�(�"��"���',%��.�"�)����5-����"!#$�.,��"!��'/�����"!%����'"#�"� *τ�+� #�(� .)#�"!��#$� -)�-�)"!��� *α�+� 1�)�� ��%-#)�(� 0&� �",(��"L'� �� "�'"/� M��(!�#"�'� #'! �!.!�#�"�(!..�)����:���!�(!�#"�'�"����,%0�)��.�-#"���'�'",(!�(/

τ6�*%'+ α6�*5G6+ τ7 α7 τ; α; �

�!$(�"&-�

*���+

9/9F

*9/96+

9/>9

*9/96+

6/7A

*9/7A+

9/;6

*9/9;+

;/@7

*9/@6+

9/7?

*9/9>+

;

αE7A@�*���+

9/9@

*9/96+

9/>>

*9/9;+

9/;9M

*9/96+

9/A>M

*9/9;+

6/?FM

*9/>=+

9/97M

*9/96+

A

>4=,*6 �9� �!# )#%%#"!��)�-)�'��"#"!����.�"���$��#"!����.�-,0$!'��(�'$�1���#���$-���&#$#�!���%!''��'��%,"#"!��'�#�(�"���αE7A@��.#'"���#���$�%,"#"!���!��"����6��7�-�)�)� !����.�� ��/��$�1���#���$����4�)'!��'�"��-���&$#$#�!���#)���! �$! �"�(��#'�1�$$�#'�"��.#'"���#���$�αE7A@�����4�)'!���.)�%�-���&$#$#�!���"��$�,�!��/

���.66�8����������/*,)/,*�<��.�8*+�<4/46�

������'#� ,!���,'�2!�'�!-'��)�!����%%,�!"!�'�1��)��#�.�,�(�)��..��"�!'��4!(��"�

)���''!4�� (!'�)(�)'� '�%�"!%�'� ���,)� !�� %�)�� "�#�� ���� ���)#"!��/� ��� )����"$&

#�#$&K�(�#�.#%!$&�!��1�!���"���!�(�5��#'���#(�(!..!�,$"&�!��.��(!� �.)�%�0!)"���-"�'!'�

#�(�(�$#&�(�%�"�)�%!$�'"���'/��&#'"���!#�1#'�(!# ��'�(�#"�"���# ���.�;����"���0#'!'

�.�#� '&'"�%!�����'"! %!��� !�C��"!��/����5#%!�#"!���#"�7=�&�#)'��.�# ��� �5"�)�#$

�-�"�#$%�-$� !#��0!$#"�)#$�-"�'!'��.#�!#$�1�#2��''��#�(�'�%��-)�5!%#$�,--�)�$!%0

1�#2��''�1�)��#--#)��"/��$��")�%&� )#-�&�'��1�(�!��)�#'�(�(��)�%��"�#�(�C!""�)/

��"!0�(!�'�# #!�'"�"���� ���1�)��#0'��"��#�(��!'����(!"!����#'�)�%#!��(�'"#0$����

#�"!���$!��'"�)#'��%�(!�#"!��/�����'����.�"���!�(�5��#'��-)�'��"�(�#"�66�1��2'��.

# ��1!"��.#!$,)��"��"�)!4��#�(�(&'-�# !#/�����#(�#�-�'!"!4��)�'-��'��"��#�"��'!$���"�'"�

#�(�#� ����"��, �"�"��0��(�%!�#�"$&�!���)!"�(��1#'�(!# ��'�(/��,"#"!��#$�#�#$&'!'

�.����'#%-$�'�.)�%�.#%!$&�%�%0�)'�*E��/�>+�)�4�#$�(�"�#"�"���.#%!$&��#)0�)'�"1�

%,"#"!��'� !�� "���� ���ε�',0,�!"� ���/��$"��, ��"��)��1#'�������'#� ,!�!"&�� "��!�(�5��#'��!'���%�K& �,'�.�)�#�'�4����,�$��"!(��(�$�"!���!���5���F��εAA;(�$F/

��!'�%,"#"!����#'�0����)�-�)"�(�-)�4!�,'$&�;�#�(�1���#4��!(��"!.!�(�!"�!��.!4���"��)

2!�'�!-'<�!��"�)����"���!�(�5��#'��!'���%�K& �,'�.�)�εAA;(�$F:�!��"1���"���!�(�5��#'�!'���"�)�#$$�$!�/��'��5-��"�(��"���-#"!��"L'�'����#)0�)'�"���εAA;(�$F�%,"#"!����0,"

'")!2!� $&� ��� #$'�� �#)0�)'� #�� ε�',0,�!"� ���� '-$!��� '!"�� %,"#"!���� ���?�6�→��

1�!���1#'�!���)!"�(�.)�%��!'�%�"��)/���"��%,"#"!��'�#)��-)�(!�"�(�"���#,'��"),��#�

"!����.�"���ε�',0,�!"�-�$&-�-"!(��-)!�)�"��"����;�")#�'%�%0)#���(�%#!��#�(�"�,'

1!$$�0���,$$�#$$�$�'/����0�"��.#"��)�#�(�'����"���)�'!(,#$��5-)�''!����.�"���γ�',0,�!"�!'$!2�$&�"��)�'�,��"���-����"&-�/

>4=,*6 �� ��'")!�"!���(! �'"'��.�D ��#%-$!���'�.)�%�.#%!$&�%�%0�)'����.!)%!� �"��-)�'����� �.� #$$�$�'� �#)0�)!� � εAA;(�$F� *�5��� A+� #�(� ε���?�6�→�� *�5��� =+/� ��#(�('&%0�$'�!�(!�#"��#..��"�(�!�(!4!(,#$':��#$.�'�#(�(�'&%0�$'�!�(!�#"������%,"#�"�#$$�$�/

��� ����<���67��8*5��)�96+��8>��)46�)6�

�/,946��8>�/A6�+8<6),<�*�+6)A��4�+��,�96*<�4�=�)A*�96>4)46�)�����9*8+6

��!$��'�%��%,"#"!��'�!��"���ε�',0,�!"� ���� !4��)!'��"��$�1��5-)�''!� �#$$�$�'�"��� %#C�)!"&� #)�� �,$$� %,"#"!��'/� D)�%#",)�� ���'��'�� %,"#"!��'� 1!"�!�� #�� ��

")#�'�)!-"�%#&�0�� )��� �!K�(�0&����',)4�!$$#���� '&'"�%'�#�(� $�#(� "�� "��� )#-!(

(� )#(#"!����.� ")#�'�)!-"/� ���(�����&0)!(!K#"!���1!"�� ;A��$#0�$�(�#�"!'��'�����

1#'�,'�(�"��'",(&�"���'"�#(&�'"#"��$�4�$'��.�%���!��',0'&�#-"!��)� !��'��.�%,'�$�

0!�-'!�'�.)�%�� ���(�.!�!���&�-#"!��"'�1!"��(�.!��(�ε�',0,�!"�%,"#"!��'/��!�-'!�'

.)�%�-#"!��"'�1!"��%,"#"!��'�$��#"�(�0�"1����"���ε�',0,�!"��;�#�(��>�")#�'%�%�

0)#��� (�%#!�'� '��1�(� )�0,'"� '! �#$� .�)� ε %��� ")#�'�)!-"'�� ��%-#)#0$�� "�� "��

'! �#$�.)�%����")�$�'#%-$�'/���,'��"���%,"#"!��'�1��!(��"!.!�(�#�(�'",(!�(�!��"���ε�',0,�!"���(!� �)� !���(!(���"��#4��#�'�4�)���..��"����ε�',0,�!"�%���$�4�$'/��"�!'

$!2�$&�"�#"�"���� ���(�.!�!���&�!��"��'��-#"!��"'�!'��#,'�(�0&�)�"��"!����.�%!'.�$(�(

%,"#�"�ε�',0,�!"'�1!"�!��"�����(�-$#'%!��)�"!�,$,%�*��+�#�(�"���.#!$,)���.�%,"#�"

-��"#%�)'�"��!�'�)"�!�"��"���',).#���%�%0)#��/

�1���.�"���%,"#"!��'�!��"���ε�',0,�!"� �����ε�>A?��#�(�ε6;@=(�$���#)��$��#"�(!��"���'��)"��5")#��$$,$#)�"#!$� �"�)%!�#$�"��"����>�")#�'%�%0)#���(�%#!�/����1�)�

!�"�)�'"�(�!��!�4�'"! #"!� �"���%�$��,$#)�%���#�!'%�,�(�)$&!� �� ���(�.!�!���&�!�

"��'�� �#'�'� '!���� ε�',0,�!"'� �5-)�''�(� .)�%� "��'�� %,"#�"� #$$�$�'� ���"#!�� #$$� "��

(�%#!�'�"��, �"�"��0���''��"!#$�.�)�� ���.,��"!��/�����)(�)�"��4!',#$!K��1!$(�"&-�

#�(�%,"#�"�',0,�!"'��1���)�#"�(�#��������'"),�"�"�#"�!�"� )#"�'�#� )����.$,�)�'���"

*�ED+� "# � 0�"1���� �;� #�(� �>/� �!����%!�#$� #�(� �$��")�-�&'!�$� !�#$� #�#$&'�'

'��1�"��� .,��"!��#$�-)�-�)"!�'��.�� ���ED�#�(�1!$(�"&-��� ���"��0��#$%�'"

!�(!'"!� ,!'�#0$�/�� ���ED�1#'��5-)�''�(�!������7=;���$$'��)�!��"������%,'�$�

��$$�$!���#�(�4!�1�(�,'!� ����.��#$�%!�)�'��-&/�� ��ε��ED���,$(�0��4!',#$!K�(�!�"���-$#'%#�%�%0)#����1��)�#'�� ��ε6;@=(�$���ED�1#'�)�'")!�"�(�"��!�"�)��$$,$#)��%-#)"%��"'/� ��5-)�''!��� �.� � ��ε6;@=(�$���ED� 1!"�� #� 0$,�� .$,�)�'���"%#)2�)�.�)�"������'��1'�-)��!'����$��#$!K#"!����.�"���0$,��#�(� )����.$,�)�'�����

"�� !4��#�H�&#��I�'"#!�!� ��.�"�����/��!%!$#)�)�',$"'�1�)���0"#!��(�1!"��"���ε>A?�%,"#"!����!�(!�#"!� �"�#"�"��'��%,"#�"�',0,�!"'�#)��0�!� �)�"#!��(�1!"�!��"�����/

���!�4�'"! #"��.,)"��)��(�$�"!���%,"#"!��'�1�)�����'"),�"�(�'-#��!� �"���6?�#%!���

#�!(� �"�)%!�#$��5")#��$$,$#)�"#!$��#�(�',).#����5-)�''!����.�� ���1#'�#�#$&K�(�0&

!%%,��-)��!-!"#"!���1!"��ε�',0,�!"�'-��!.!��#�"!'�)#/���0,'"�',).#����5-)�''!����.#(,$"�� ���1#'�'������$&�1����"���ε�',0,�!"����"#!��(� >F9��1�!���!'����'�)4�(0�"1����%#%%#$!#��'-��!�'�#�(�!'�$��#"�(�C,'"�>�#%!���#�!('�.)�%�"��� �"�)%!�,'/

��!'� ',).#��� #(,$"� � ��� �5-)�''!��� 1#'� $�'"� !.� >F9� 1#'� %,"#"�(� "�� '�)!���

!�(!�#"!� �"�#"�!"�!'�$!2�$&�"��.�)%�#�(!',$.!(��0��(/�����)�',$"'�', �'"�"�#"�#�-)�4!�

�,'$&�,�!(��"!.!�(�(!',$.!(��0��(�(��&'"!���-$#&'�#��),�!#$�)�$��!��"���#''�%0$&��.

#(,$"�� ���#�(�', �'"�#�%���#�!'%�0&�1�!���.)#%�'�!."��)����'��'��%,"#"!��'�!�

"���ε�',0,�!"� �"�)%!�#$�)� !����#,'��� ���(�.!�!���&/

?6*�?6)/4B6�

�!��!(��"�1!"��!��)�#'�(�2��1$�( ��#0�,"�"��'��(!'�)(�)'��!"��#'�0���%��#--#)��"

"�#"�"��&�#)��%�)����%%���"�#��-)�4!�,'$&��'"!%#"�(/�����#4#!$#0!$!"&��.� ���"!�

'�)���'�.�)�%,"#"!��'�,�(�)$&!� � ���'��,$(�#$$�1�#�(�.!�!"!4��(!# ��'!'�!��%#�&

���.66�8����������/*,)/,*�<��.�8*+�<4/46�

%�)���#'�'/�E)�%�"���(#"#��0"#!��(�"�,'�.#)��!"�!'��$�#)�"�#"�!�(!4!(,#$'�'�#)!� �"���'#%�

%,"#"!��'�%#&�'��1�#�1!(��4#)!#"!���!��(!'�#'��'�4�)!"&/���(�)'"#�(!� �"���.#�"�)'

,�(�)$&!� �"�!'�-����"&-!��4#)!#"!���%#&�-)�4!(��-�"��"!#$�"#) �"'�.�)���1�"��)#-!�'/

�'� )�-�)"�(� .�)� %�,'�� � ���;A� !�'�)"!��� �.� "��� �ED� "# � !�� "��� �&"�-$#'%!�

(�%#!��0�"1�����;�#�(��>�*#4�!(!� �"���#%-�!-#"�!��)� !������+��#�� ���)#"�

"# �(��,%#��� ���"�#"�!'��5-)�''�(����"�����$$�',).#���1!"��.,��"!��#$�-)�-�)"!�'

#$%�'"�!�(!'"!� ,!'�#0$��.)�%�1!$(�"&-�/���!"!#$�'",(!�'�!�(!�#"��"�#"�"���-)�'������.

"����ED�"# �(��'���"�!�"�).�)��1!"��)#-'&��!�(,��(��$,'"�)!� ��.�"���� ��/����'�

�ED�"# �(�� ��'�'��,$(�-)�4!(��#�-�1�).,$�"��$�.�)�"���'",(&��.�(!'�)(�)'��.�"��

$��#$!K#"!����#''�%0$&��#�(�")#..!�2!� ��.�"���� ��/

�)5�87<69=+6�/�

��!'�1�)2�1#'�',--�)"�(�0&� "����� �� "�����$$��%���),'"��#�(� "����,'�,$#)

�&'")�-�&� #%-#! �G�&#'"���!#��)#4!'��''��!#"!��/

*6>6*6�)6�

6/ ����/�N��/�/�����/�7997/� �� ��!"#$�%&#'"���!��'&�()�%�'<� ���"!��(�.��"'��."�����,)�%,'�,$#)�C,��"!��/� ,))/��,)�$/��,)�'�!/���-/����F?8??/

7/ �������/�/������.�6==@/���(�-$#"��#��"&$���$!���)���-"�)�(�.!�!���&�(,��"�����'��'�%,"#"!��'�!��"����-'!$���',0,�!"/����/��,)�$/�����?698?6F/

;/ ����/������.�6==F/� �� ��!"#$�%&#'"���!��'&�()�%�'�(,��"����"�)�#$$�$!�����'��'�G%!''��'��%,"#"!��'�!��"���#��"&$���$!���)���-"�)��-'!$���',0,�!"� ���<�!(��"!.!�#"!��#�(�.,��"!��#$���#)#�"�)!K#"!����.�'!5���1�%,"#"!��'/��,%/���$/�����"/�!��FA;8F@@/

>/ ����������/������.�6===/� �)�%�'�%��6F-8$!�2�(�%&#'"���!#'�'"�%�.)�%�(�.��"'�!�"���#��"&$���$!���)���-"�)��-'!$���',0,�!"� ���/��,)�$� &�$���69F@869?7/

A/ ����/������.�6==?/��&#'"���!��'&�()�%�'�!���,)2!'��2!�'�!-'�(,��"��%,"#"!��'�!�"���#��"&$���$!���)���-"�)/����/��,)�$/�����7;>87>6/

@/ ��� ���� �/� ��� ��.� 6===/� �� ��%%��� %,"#"!��� *�-'!$��67@F(�$�+� !�� ��� ��!"#$%&#'"���!��-#"!��"'��.��&-'&��"��!���)! !�/��,)�$� &�$���6A@>86A@=/

F/ �������� D/�/� ��� ��.� 6===/� �,"#"!��� �#,'!� � ��� ��!"#$� %&#'"���!#� )�4�#$'� #��"&$����$!���)���-"�)�0�"#G(�$"#�',0,�!"�!�"�)#�"!����''��"!#$�.�)�#''�%0$&/��/� $!�/���4�'"/�����6>9;86>69/

?/ ������/������.�6===/��4�$�.,��"!��#$��-'!$���',0,�!"�-�$&-�-"!(�� ���)#"�(�0&�#'!� $���,�$��"!(��(�$�"!���!��#��"&$���$!���)���-"�)�(�.!�!���&���� ��!"#$�%&#'"���!�'&�()�%�/����/��,)�$/��!��@;=8@>F/

=/ ������ �/D/� ��� ��.� 7999/� �%%#",)�� ��(�-$#"�'� #�(� ,")�-�!�� (�.!�!���&� !�� ��� ��!"#$%&#'"���!��'&�()�%���#,'�(�0&��-'!$���� ���',0,�!"� "),��#"!� �%,"#"!��'/��,%/����"/���@��6@986@>/

69/ ������/������.�7996/���(�-$#"�� #%%#��#�(��-'!$���',0,�!"�%���$�4�$'�!��� ��(�.!�!���&�'&�()�%��(,��"���-'!$���',0,�!"��,$$�%,"#"!��'/��)#!�������6;@786;F7/

66/ ����/������.� 6==A/� �� ��!"#$�%&#'"���!�� '&�()�%���#,'�(�0&�-)�$�� �(�#��"&$����$!���)���-"�)���#���$��-��!� '�(,��"��#�%,"#"!���!��"����7�(�%#!���.�"����-'!$��',0,�!"/�D)��/�#"$/���#(/���!/���������FA?8F@7/

67/ ������/�/������.�6==A/��,"#"!����.�"���#��"&$���$!���)���-"�)�#$-�#�',0,�!"��#,'�'�#'$�1���#���$�%&#'"���!�� '&�()�%�� 0&� ���#��!� � # ��!'"� 0!�(!� � #..!�!"&/��,)���$��77=87;=/

6;/ �������/�/������.�6==@/��1�%,"#"!��'�!��#��"&$���$!���)���-"�)�',0,�!"� ���'�)�4�#$��"�)� ���!"&� !�� "��� '$�1���#���$� ��� ��!"#$� %&#'"���!�� '&�()�%�/� �,%/� ��$/����"/�$��676F8677F/

6>/ ���O�� /�/� ��� ��.� 6==@/� �� 0�"#�',0,�!"� %,"#"!��� !�� "��� #��"&$���$!��� )���-"�)��#���$� #"���#,'�'�'�4�)��'$�1���#���$�'&�()�%�/����/��,)�$/�����F678F7;/

��� ����<���67��8*5��)�96+��8>��)46�)6�

6A/ ����/������.�6==@/� �� ��!"#$�%&#'"���!��'&�()�%���#,'�(�0&�(��)�#'�(�# ��!'"0!�(!� � #..!�!"&� (,�� "�� #� %,"#"!��� !�� "��� #��"&$���$!��� )���-"�)� �-'!$��� ',0,�!"/�,)����@��6AF86F9/

6@/ ����� �/� ��� ��.� 6==F/� �,"#"!��'� !�� (!..�)��"� .,��"!��#$� (�%#!�'� �.� "��� �,%#�%,'�$�� #��"&$���$!��� )���-"�)� #$-�#� ',0,�!"� !�� -#"!��"'� 1!"�� "��� '$�1���#���$��� ��!"#$�%&#'"���!��'&�()�%�/��,%/���$/�����"/�!��F@F8FF>/

6F/ ���O�� /�/� ��� ��.� 6==F/� �$�1���#���$� ")#�' ��!�� %!��<� #� %�(�$� �.� -�'"'&�#-"!��) #��$$#)�(� ���)#"!���#"�"�����,)�%,'�,$#)�C,��"!��/��/��,)�'�!/��@��>6F98>6F=/

6?/ ������ �/� ��� ��.� 6==F/� �$�1���#���$� %&#'"���!�� '&�()�%�� �#,'�(� 0&� ���#���(#�"!4#"!����(�'��'!"!K#"!����#�(�# ��!'"�0!�(!� �#..!�!"&�#"")!0,"#0$��"��%,"#"!���!��"���7�(�%#!���.�"���#��"&$���$!���)���-"�)�#$-�#�',0,�!"/��/��,)�'�!/��@��A@A68A@@A/

6=/ ���O�� /�/� ��� ��.� 7997/� �4�$� (�$"#� ',0,�!"� %,"#"!��� !�� '$�1���#���$� '&�()�%��#,'�'�'�4�)��1�#2��''�0&���4�$�%���#�!'%'/����/��,)�$/�$���6978667/

79/ ��������/������.�7996/����"&$���$!���)���-"�)�(�$"#�',0,�!"�%,"#"!��'�,�(�)$!��#.#'"���#���$�%&#'"���!�� '&�()�%��#�(�#)"�)� )&-�'!'�%,$"!-$�5���� ��!"#/� �/� $!�/��4�'"/������67A86;9/

76/ ��� �/� ��� ��.� 7997/� �#-'&�� %,"#"!��'� !�� �,%#�'� �#,'�� ��(-$#"�� #��"&$���$!���)���-"�)�(�.!�!���&�#�(�%&#'"���!��'&�()�%�/��%/��/��,%/�����"/�@���?FA8??A/

77/ ��� �/� ��� ��.� 6==?/� �,%#�� ��(-$#"�� #��"&$���$!��'"�)#'�� (�.!�!���&� �#,'�(� 0&%,"#"!��'�!��"�����$$# ���$!2��"#!$�',0,�!"�* �$�+��.� "���#'&%%�")!����K&%�/�D)��/#"$/���#(/���!/������$��=@A>8=@A=/

7;/ ������ /� ��� ��.� 6==?/� �,"#"!��� !�� "��� �,%#�� #��"&$���$!��'"�)#'��#''��!#"�(��$$# ��� ����� ����!'�)�'-��'!0$��.�)���� ��!"#$�%&#'"���!��'&�()�%��1!"����(�-$#"��#��"&$���$!��'"�)#'��(�.!�!���&�*"&-����+/��%/��/��,%/�����"/�!���=@F8=FA/

7>/ ����/������.�7996/� ��$!���#��"&$")#�'.�)#'��%,"#"!��'��#,'��%&#'"���!��'&�()�%�#''��!#"�(�1!"���-!'�(!��#-��#�!���,%#�'/�D)��/�#"$/���#(/���!/���������796F87977/

7A/ �� ���� �/�� �/� ����� N� �/� ���/� 7999/� ��$��,$#)� "#) �"'� .�)� #,"�!%%,��� #�( ���"!��(!'�)(�)'��.���,)�%,'�,$#)�")#�'%!''!��/��,)/��/��!����%/��!@��@F6F8@F7?/

7@/ ����������/������.�7997/�����# )!�G%,'�$��'-��!.!��2!�#'��-#"�1#&<���1�"#) �"'� .�)#,"�!%%,���#�(� ���"!��(!'�)(�)'�#"�"�����,)�%,'�,$#)�C,��"!��/��,'�$���)4���$�>86@/

7F/ � ����� D/� ��� ��.� 6===/� �,"#"!��� �.� "��� #��"&$���$!��� )���-"�)� �-'!$���',0,�!"-)�%�"�)�!����� ��!"#$�%&#'"���!��'&�()�%�/����/��,)�$/��$��>;=8>>;/

7?/ ����/���/������N��/�/�����/�6===/� �� ��!"#$�%&#'"���!��'&�()�%���#,'�(�0&#� %,"#"!��� !�� "��� �"'�0!�(!� � '!"�� �.� "��� -)�%�"�)� )� !��� �.� "��� #��"&$���$!��)���-"�)��-'!$���',0,�!"� ���/��,)�%,'�,$/��!'�)(/����6;686;A/

7=/ ��� �����/������.�7997/�����1$&�!(��"!.!�(���)�%�'�%#$�%!�)�(�$�"!���#�(�#���0�5%,"#"!����.� "���� ���-'!$��� �����#,'��#���� ��!"#$�%&#'"���!��'&�()�%�/��)#!���$��699A8696;/

;9/ ����� �/� ��� ��.� ����''!4�� !���)!"#���� #�(� 4#)!#0$�� -���")#���� !�� '$�1� ��#���$��� ��!"#$�%&#'"���!��'&�()�%�/��,)�$� &/����-)�''/

;6/ ���� ���/������.�7996/� )&'"#$�'"),�",)���.�#��� ��0!�(!� �-)�"�!��)�4�#$'�"���$! #�(�0!�(!� �(�%#!���.��!��"!�!��)���-"�)'/�#",)�������7@=87F@/

;7/ �� �����/������.�6=?6/� �� ��!"#$�%&#'"���!#<���(�-$#"��#��"&$���$!���)���-"�)'�#�(�$��")�-�&'!�$� &�!��.!4���#'�'/��,'�$���)4�����;9@8;6?/

;;/ �� ���� �/� ��� ��.� 6==;/� $!�!�#$� #�(� �5-�)!%��"#$� �0'�)4#"!��'� !�� -#"!��"'� 1!"���� ��!"#$�%&#'"���!��'&�()�%�'/����/�/�/���#(/���!/�!����>A68>@9/

;>/ ����� �/�/� ��� ��.� 6===/� ���"&$���$!��� )���-"�)� �;� (�%#!�<� '"�)�����%!�#$� #�(4�$,%�����")!0,"!��'�"����#���$� #"!� /�#"/��,)�'�!/����77@87;;/

;A/ ���������/������.�7996/��''�%0$&�#�(��$,'"�)!� ��.�#��"&$���$!���)���-"�)'����"#!�!� �ED�"# �(� �-'!$��� �)� #%%#� ',0,�!"'<� '�$��"!4�� "#) �"!� � "�� "��� ��,)�%,'�,$#)C,��"!�����((�/��,)/��/��!����%/��!���779=8776F/