Searching for new-type antifungal drugs (An outline for possible new strategies

11
6($5&+,1*)251(:7<3($17,)81*$/'58*6 $1287/,1()253266,%/(1(:675$7(*,(6 , 3 / 6 e / / 0 % 6 7 ( 7 3 ,QWURGXFWLRQ 7KH LQFLGHQFH RI LQYDVLYH IXQJDO LQIHFWLRQV ULVHV VWHDGLO\ LQ KXPDQV VWDUWLQJ IURP WKH V >@ 3DWLHQWV UHFHLYLQJ LPPXQRVXSSUHVVLYH WKHUDSLHV XVLQJ EURDG

Transcript of Searching for new-type antifungal drugs (An outline for possible new strategies

$FWD�0LFURELRORJLFD�HW�,PPXQRORJLFD�+XQJDULFD�������±����SS�����±�����������

�7KLV�SDSHU�ZDV�ZULWWHQ�WR�FRPPHPRUDWH�WR�WKH�ILIWLHWK�DQQLYHUVDU\�RI� WKH�IRXQGDWLRQ�RI�WKH�+XQJDULDQ�

6RFLHW\�IRU�0LFURELRORJ\��

�����������������������������$NDGpPLDL�.LDGy��%XGDSHVW�

������������� ����������������������������������������� �����������

�679È1��Ï&6,���È6=/Ï��È0,���9$��(,7(5���È6=/Ï��$-2526

���e/$��=$%Ï���$0È6��05,

��$1'��h1'(��86=7$+(/<,��

��'HSDUWPHQW�RI�0LFURELRORJ\�DQG�%LRWHFKQRORJ\��)DFXOW\�RI�6FLHQFHV��8QLYHUVLW\�RI�'HEUHFHQ��

3�2��%R[�����+������'HEUHFHQ��+XQJDU\���'HSDUWPHQW�RI�0LFURELRORJ\��)DFXOW\�RI�0HGLFLQH��0HGLFDO�DQG�+HDOWK�&HQWHU��8QLYHUVLW\�RI�

'HEUHFHQ��3�2��%R[�����+������'HEUHFHQ��+XQJDU\�

�5HFHLYHG��0DUFK�����������DFFHSWHG��$SULO����������

1HZ� DSSURDFKHV� IRU� WUHDWPHQW� RI� LQYDVLYH� IXQJDO� LQIHFWLRQV� DUH� QHFHVVDU\� WR� FRSH�

ZLWK�HPHUJLQJ�UHVLVWDQW�IXQJDO�SDWKRJHQV�RI�KXPDQV��,Q�WKLV�SDSHU��WKUHH�GLIIHUHQW�VWUDWHJLHV�

DUH� SUHVHQWHG� DQG� HYDOXDWHG� WR� ILQG� QHZ�W\SH� DQWLIXQJDO� GUXJV� DQG� WKHLU� WDUJHWV�� :KLOH�

H[SHULPHQWDO�GDWD�REWDLQHG�ZLWK�SRWHQW�FKLWLQDVH�LQKLELWRUV��H�J��DOORVDPLGLQ��DQG�VPDOO�VL]H�

DQWLIXQJDO�SURWHLQV�RI� IXQJDO�RULJLQ�DUH�HQFRXUDJLQJ�PRUH� HIIRUWV�DUH�QHHGHG� WR�YHULI\�DQG�

H[SORLW�WKH�SRVVLEOH�LQYROYHPHQW�RI�LQWUDFHOOXODU�WKLROV��H�J��JOXWDWKLRQH��DQG�WKHLU�PHWDEROLF�

HQ]\PHV� LQ� WKH� SDWKRJHQHVLV� RI� P\FRVHV� FDXVHG� E\� GLPRUSKLF� IXQJL�� &KLWLQDVH� LQKLELWRUV�

VHHP� WR� KLQGHU� WKH� FHOO� VHSDUDWLRQ� RI� \HDVWV� DQG� WKH� IUDJPHQWDWLRQ� RI� ILODPHQWRXV� IXQJL�

TXLWH� HIIHFWLYHO\� DQG�� KHQFH�� WKH\� PD\� EH� LPSOLFDWHG� LQ� IXWXUH� WKHUDSLHV� RI� V\VWHPLF�

P\FRVHV�� ,Q�DGGLWLRQ��VPDOO�VL]H�DQWLIXQJDO�SURWHLQV�SRVVHVVLQJ�D�EURDG�LQKLELWLRQ�VSHFWUXP�

PD\�DOVR�SURYLGH�XV�ZLWK�SURPLVLQJ�QHZ�DJHQWV�IRU�WKH�WUHDWPHQW�RI�GLIIHUHQW�NLQGV�RI��H�J��

FXWDQHRXV��IXQJDO�LQIHFWLRQV��

.H\ZRUG��DQWLIXQJDO�FKHPRWKHUDS\�

�����������

��� �� �!�� � "# ��$%&�$� #'�(%) ��#� *�"�& +�&�& &*�%!�), �� �'-%�& &*%+*��(#+"- *�� ./& 0123 �%*���*& +� ��$��( �--'�"&'44+�&&�$� *��+%4��&� '&��( 5+"%!�

678 3Ï&6,�HW�DO�

$FWD�0LFURELRORJLFD�HW�,PPXQRORJLFD�+XQJDULFD����������

&4� *+'- %�*�5% *�+�%) -�!� ���& #"+ 4+")"�(�! 4�+�"!& "# *�-� "+ &'##�+��( "#�--'�"&'44+�&&�$� $�+%) ��#� *�"�& &' � %& ���� %+� �&4� �%)), 4+�!�&4"&�! *"!�##�+��* 9��!& "# -, "&�&3 ��� �'-5�+ "# �"&" "-�%) ��#� *�"�& �& %)&" �� +�%&��(&�%+4), !'� *"� #"+ �:%-4)�� *�� "--"� '&� "# ��!;�))��( ��*+%$��"'& !�$� �& 0123�� ��*), '&�! %�*�#'�(%) %(��*& �� )'!� �+("&*�+") 5�"&,�*��&�& ����5�*"+&� 4"),���&%�!6�#)'"+" ,*"&��� 01�<25'*��; *%+(�*&%�!!+'(!�)�$�+, &,&*�-&%+� "�&�!�+�!#"+%�*�#'�(%)*��+%4,0723���!�$�)"4-��*"#��;�&%#�+%�!-"+��##� *�$�%�*�#'�(%)!+'(& �&&*�-')%*�!5,*��'�!�&�+%5)�&�!���##� *&"# '++��*),%$%�)%5)�-�!� ���&%&;�)) %& *�� �-�+(�� � "# ��; 4%*�"(��� &4� ��& 4"&&�&&��( ��*+��&� 4+�-%+,+�&�&*%� � %�! "--"� 4%*�"(��& +%4�!), !�$�)"4��( &� "�!%+, +�&�&*%� � *" *��&�%(��*&0<�823�*�&;"+*��"*��(*��*�+�%*����(�-�+(�� �"#�%*'+%)),+�&�&*%�*"+�$��4"),+�&�&*%�*�"��%)5� %�&�������&4� ��&��3(3��������������� %� �+4%*���*&082%�!!'+��(%�*�#'�(%)*��+%4,0623��*��&4%4�+�;�"'*)���*���##"+*&;�-%!���*��)%&* "'4)�"# ,�%+& *" #��!�"$�)%�*�#'�(%)%(��*&%�!!�#�����; *%+(�*& #"+ #'*'+�%�*�#'�(%)!+'(+�&�%+ �3

����� ����������

�"-4"'�!& % *�$� %(%��&* #'�(%) �)) ;%)) 5�"&,�*��*� ��=,-�& �� )'!��( ��*�� &,�*��*%&�& %�! ()' %� &,�*��*%&�& %+� +�(%+!�! %& 4"*��*�%) %�! 4+"-�&��(*%+(�*& #"+ %�*�#'�(%) %(��*& �� )'!��( ��99"-, ��& %�! � ���" %�!��& 0123�'+4+�&��(),�*����!"(��"'& �));%))!�(+%!��(��=,-�&"#*��&�"+(%��&-&�*";�� �$�+&%*�)� %�! �-4"+*%�* �'*+�*�"�%)� -"+4�")"(� %) %�! 4�,&�")"(� %) #'� *�"�& %+�%**+�5'*�! 0>� .2� %**+% *�! -' � )�&& %**��*�"� '�*�) �";3 �"+ �:%-4)�� %)) ��*��� "�*%����(#'�(�&*'!��!*�'&#%+�%$�5���&�";�*"4+"!' � ��*��%&�&*�%**%9�4%+*�� &;�))��( %�! (�+-��%*�"� "# &4"+�&� 5+%� ���( %�! %4� %) �:*��&�"� "# (+";��(�,4�%��*%�)"+��( ��*��-� +"#�5+�)&��+�(�!�#,��(;%))� �))&�4%+%*�"�"#,�%&*&%&;�))%& %(��+�)%*�! #+%(-��*%*�"� %�! %'*"),&�& "# �,4�%� 0>?1/23 �5$�"'&),� *��&��-4"+*%�* ��*��"),*� ��=,-�& "')!5�&'�*%5)�*%+(�*&#"+%�*�#'�(%)!+'(!�&�(���%!!�*�"�*" �));%))5�"&,�*��*� ��=,-�&3

��%$�%)+�%!,�%! &"-��� "'+%(��( ������ ���=,-� ����5�*�"�!%*% ��"'+�%�!& "� �+���( #'�(%) ��*��%&�&3 �"+ �:%-4)�� *�� 4&�'!"*+�&% �%+�!� ��*��%&�����5�*"+ %))"&%-�!�� ���(3 1� ���!�+�! �##� *�$�), *�� �)) &�4%+%*�"� "# *�� ,�%&*&������� ��������������� 011�1<2%�!���������������� 0>2� %�! *��(�+-��%*�"�"#&"-�#'�(%)&4"+�&;%&%)&"#"'�!*"5�%))"&%-�!���&��&�*�$�0>�.�1723

1(:�7<3(�$17,)81*$/�'58*6� 676�

$FWD�0LFURELRORJLFD�HW�,PPXQRORJLFD�+XQJDULFD����������

)LJ�����3VHXGRWULVDFFKDULGH�VWUXFWXUH�RI�DOORVDPLGLQ��RQH�RI�WKH�PRVW�SRWHQW�NQRZQ�LQKLELWRUV�RI�FKLWLQDVHV�

�� *�� "*��+ �%�!� %))"&%-�!�� !�! �"* ��#)'�� � *�� (+";*� %�! %�*�5�"*� 4+"!' *�"�"#*����)% *%-4+"!' �+#�)%-��*"'&#'�(������ �������� �����0182%�! ����������� ���� ����� 0162 ��%5)� ��3 �-4"+*%�*),� *��& 4&�'!"*+�&% �%+�!����!�+�!&�(��#� %�*),*���!�"4�%&� 5+�%9%(�"#������� ������,4�%�0182%&;�))%& *�� #+%(-��*%*�"� %�! %'*"),&�& "5&�+$%5)� �� %+5"��!�4)�*�! ��� ���� ����� ')*'+�&01623�))"&%-�!��%)&"����5�*�!*��"'*(+";*�"#&'+$�$��(�,4�%)#+%(-��*&�� %'*"),&��(��� ���� ����� ')*'+�& ;��� %+5"� &*%+$%*�"� ;%& %5")�&��! 5, *��%!!�*�"�"#%��:*+%!"&�"#()' "&����(&<%�!7�01623�"*��5�&*"#"'+9�";)�!(��*��& ;%& *�� #�+&* 4+�&��*%*�"� "# % 4"&&�5)� %�*�#'�(%) �##� * "# %))"&%-�!�� "� %#�)%-��*"'&(+";*�#"+-3

�"&*+� ��*�:4�+�-��*%)!%*%&'--%+�=�!���%5)�� )�%+),��!� %*�!*�%**��%�*�#'�(%)�##� *"#%))"&%-�!��"�%'*"),&��(������� �����-, �)�%;%&#'�(�&*%*� +%*��+*�%�#'�(� �!%)01>23�"&'-�*'4�%))"&%-�!��%�!�*&&�-�&,�*��*� !�+�$%*�$�&01/�1.2-�(�*5��##� *�$�%(%��&*#�)%-��*"'&4)%�*���&� *"+�$���'-%�4%*�"(��� #'�(� ;��� �))& 4"&&�&&��( ,�%&* "+ ,�%&*�)�9� -"+4�")"(, %+� *�"'(�* *" 4)%, %��-4"+*%�*+")���*����$%&�"�"#�"&**�&&'�&01@23

����� �� �������������������� � ������ ���������� ����������������� �����������

�� !�-"+4�� #'�(� �� )'!��( 4)%�*� ��&� * %�! �'-%� 4%*�"(��� &4� ��&�-"+4�")"(� %) *+%�&�*�"�& %� 5� 4+"$"9�! 5, % )%+(� "�&*�))%*�"� "# ��$�+"�-��*%)4%+%-�*�+&01@�1A23�&'%)),� *��4%*�"(��� �*,"#*��&�-� +"�"+(%��&-&�& )�-�*�!*""�), "�� "# *�� -"+4�")"(� %) #"+-&� %�! ,�%&*�-, �)�'--"+4�")"(� %) &;�* ��&

� ���

��

��

��

��

������

����

��

������

67> 3Ï&6,�HW�DO�

$FWD�0LFURELRORJLFD�HW�,PPXQRORJLFD�+XQJDULFD����������

%+�)�9�),*"4)%,% +' �%)),�-4"+*%�*+")���*��4%*�"(���&�&"##'�(%)��#� *�"�&01@�1A23

7DEOH�,�

0RUSKRORJLFDO�DQG�SK\VLRORJLFDO�HIIHFWV�RI�DOORVDPLGLQ�RQ�DXWRO\VLQJ�3HQLFLOOLXP�FKU\VRJHQXP�FXOWXUHV�

>������@�

&KDUDFWHULVWLF� � � � � � � � � � � � � (IIHFW�RI�DOORVDPLGLQ��

$XWRO\WLF�ORVV�RI�ELRPDVV� � � � � � � � � � � � � � � � � � GHFUHDVHV�

1XPEHU�RI�K\SKDO�HOHPHQWV� � � � � � � � � � � � � � � � � LQFUHDVHV�

&KLWLQ�FRQWHQW�RI�WKH�ZDOOV�� � � � � � � � � � � � � � � � � LQFUHDVHV�

5HOHDVH�RI�FKLWLQRO\WLF�HQ]\PHV� � � � � � � � � � � � � � � GRHV�QRW�LQIOXHQFH�

9LWDOLW\�HVWLPDWHG�E\�YLDEOH�FHOO�FRXQWV�� � � � � � � � � � � � GRHV�QRW�LQIOXHQFH�

9LWDOLW\�WHVWHG�E\�WUDQVIHUULQJ�DOORVDPLGLQ�� � � � � � � � � � � GRHV�QRW�LQIOXHQFH�

WUHDWHG�P\FHOLD�LQWR�DOORVDPLGLQ�IUHH�

FXOWXUH�PHGLD��JDLQV�LQ�FHOO�GU\�ZHLJKWV��

DQG�RXWJURZWK�IUHTXHQFLHV��

,QWUDFHOOXODU�JOXWDWKLRQH��JOXWDWKLRQH�� � � �� � � � � � � � � � GRHV�QRW�LQIOXHQFH�

GLVXOSKLGH�OHYHOV�DQG�JOXWDWKLRQH��

JOXWDWKLRQH�GLVXOSKLGH�UHGR[�EDODQFHV�

2XWJURZWK�DIWHU�JOXFRVH�VXSSOHPHQWDWLRQ� � � � � � � � � � � � LQKLELWV�

*OXFRVH�XWLOLVDWLRQ�UDWHV�LQ�DOORVDPLGLQ�� � � � � � � � � � � � UHGXFHV�

WUHDWHG�FXOWXUHV�DIWHU�JOXFRVH�UH�DGGLWLRQ�

$FLGLILFDWLRQ�UDWHV�LQ�DOORVDPLGLQ�WUHDWHG� � � � � � � � � � � � UHGXFHV�

FXOWXUHV�DIWHU�JOXFRVH�UH�DGGLWLRQ�

8WLOLVDWLRQ�RI�LQWUDFHOOXODU�JOXWDWKLRQH� � � � � � � � � � � � � UHGXFHV�

UHVHUYHV�DIWHU�FDUERQ�VXSSOHPHQWDWLRQ�

��&KDQJHV�ZHUH�UHFRUGHG�LQ�WKH�SUHVHQFH�RI�����m0�DOORVDPLGLQ�EHWZHHQ�����DQG�����K�LQFXEDWLRQ�WLPHV�

�DXWRO\WLF�DQG�FU\SWLF�JURZWK�SKDVHV���$OORVDPLGLQ�ZDV�DGGHG�DW����K�LQ�WKH�GHFHOHUDWLRQ�SKDVH�RI�JURZWK��$Q�

H[WUD����P0�JOXFRVH�ZDV�DGGHG�WR�VHOHFWHG�FXOWXUHV�DW�����K�RI�LQFXEDWLRQ��

��-%+9%5),� �%�(�& �� *�� ��*+% �))')%+ ()'*%*��"�� "� ��*+%*�"�& %�!()'*%*��"��B()'*%*��"�� !�&')4��!� +�!": 5%)%� �& %+� %)&" 4+"$"9�! 5, $�+&%*�)���$�+"�-��*%)#% *"+&0</?<<23�*�&+�%&"�%5)�*�%**��% *'%)+�!":&*%*�"#*�� �))')%+*��")�!�&')4��!�5'##�+&,&*�-&;�))-"!')%*�*����*+% �))')%+4+"*���*��"))�$�)&%�!���� �� *�� 5�")"(� %) % *�$�*, "# &4� �#� 4+"*���& ��$")$�! �� *�� +�(')%*�"� "#!�-"+4�� &;�* ��&0<7?<623

1(:�7<3(�$17,)81*$/�'58*6� 67.�

$FWD�0LFURELRORJLFD�HW�,PPXQRORJLFD�+XQJDULFD����������

)LJ�����2XWJURZLQJ�K\SKDH�LQ�3��FKU\VRJHQXP�FXOWXUHV������K��VXSSOLHG�ZLWK����P0�H[WUD�JOXFRVH�DW�����K�

IHUPHQWDWLRQ�WLPH��%DU� ����mP��5HSURGXFHG�ZLWK�SHUPLVVLRQ�IURP�>��@��·�8QLYHUVLW\�RI�3RWVGDP�

)LJ�����$�3��FKU\VRJHQXP�FXOWXUH������K��VXSSOHPHQWHG�ZLWK�����m0�DOORVDPLGLQ�����K�IHUPHQWDWLRQ�WLPH��

DQG����P0�JOXFRVH������K�IHUPHQWDWLRQ�WLPH���%DU� ����mP��5HSURGXFHG�ZLWK�SHUPLVVLRQ�IURP�>��@��

·�8QLYHUVLW\�RI�3RWVGDP��

67@ 3Ï&6,�HW�DO�

$FWD�0LFURELRORJLFD�HW�,PPXQRORJLFD�+XQJDULFD����������

�"+� +� ��*),� !�%-�!�� % ;�!�), '&�! ��-� %) *" !�&*'+5 *��()'*%*��"��B()'*%*��"��!�&')4��!�+�!":&*%*'&"#*�� �))&5,":�!�=��(()'*%*��"��*"()'*%*��"�� !�&')4��!� ��&*%�*%��"'&), %�! &*"� ��"-�*+� %)), 0<>� <.2�;%& &�";� *"�%$�4)��"*+"4� �##� *&"�*��(����:4+�&&�"�4+"#�)�"#������������0<@23��%!!�*�"�*"4+"*���'�#")!��(%�!*��(���+%*�"�"#":�!%*�$�&*+�&&�!�%-�!�;%&)�9�),*"%##� *!�&%!$%�*%(�"'&),*��&� +�*�"�%�!%&&�-5)�"# �));%)) "�&*�*'��*&!'�*"�-4+"4�+!�&')4��!� 5"�! #"+-%*�"� �� *�� ��!"4)%&-� +�*� ')'- 0<@23 ��%�(�& �� *�� *��")+�!":&*%*'&"# *�� �))&-%, *��+�#"+��%$�%!�+� *�##� *"� *�� �));%)) &*+' *'+��;�� � &�"')!� "# "'+&�� +�&')* �� �%�(�& �� *�� "5&�+$�! �)) -"+4�")"(, %& ;�))3�5$�"'&),� %�, &' �&&#') %**�-4* *" ��#)'�� � "+ !�&*'+5 !�-"+4�� *+%�&�*�"�& ����%##� *��(*��()'*%*��"��-�*%5")�&-"##'�(�;"')!%**+% *%(+�%*!�%)"#��*�+�&*#+"-4�"4)���$")$�!��*��!�$�)"4-��*"#��;%�*�#'�(%)!+'(&3

���()'*%*��"��-�*%5")�&-&"#��� �������������� �))&4"&&�&&��(��*��+,�%&*"+-, �)�%)-"+4�")"(,�%&5���&*'!��!%�! "-4%+�!5,'&0<A23���&-� +"�"+(%��&-�&%;�%94)%�*4%*�"(��� #'�('&�"+-%)),���%5�*��(*��&'+#% �"#)�$��("+&���& ��()�%$�&�:4)"�*��(*��-"+�+�%!�),'*�)�&%5)��'*+���*&01@�7/23�-4"+*%�*),�*�� �))-"+4�")"(,"5&�+$�! ������������ ')*'+�& %�5� ��#)'�� �!5, �%�(��(&")�),*����" ')'-&�=�071�7<2�;�� �-%9�&*��&-� +"�"+(%��&-%��!�%)-"!�)#"+*����$�&*�(%*�"�"#*��4�,&�")"(� %)5% 9(+"'�!"#!�-"+4�� *+%�&�*�"�&3

�� % "+!%� � ;�*� 4+�$�"'& �:4�+�-��*%) !%*% "5*%���! �� �������� �������� ')*'+�&0<7?<62�&�(��#� %�*),��(��+&4� �#� ()'*%*��"�� "� ��*+%*�"�&;�+�#"'�!������������,�%&* �))& *�%� ��-, �)�%C61?66--") �9(4+"*��������7>?81--")�9( 4+"*������D 0<A23 �'+4+�&��(),� *��+� ;%& �" &�(��#� %�* !�##�+�� � 5�*;��� *��()'*%*��"��B()'*%*��"��!�&')4��!�+�!":&*%*'&"#*�� �))&;�*���*��+,�%&*"+-, �)�%)-"+4�")"(,3

���&� �:4�+�-��*%) !%*% �%))��(� *�� �,4"*��&�& *�%* �%�(�& �� �))')%+()'*%*��"��B()'*%*��"��!�&')4��!�+�!":5%)%� �&;"')!5���$")$�!��*�����*�%*�"�"#!�-"+4�� -"+4�")"(� %) *+%�&�*�"�&3 �)*�"'(� &"-� -"+4�")"(,�!�4��!��*!�##�+�� �& ;�+� +� "+!�! �� *�� &4� �#� % *�$�*��& "# &"-� ()'*%*��"�� -�*%5")� ��=,-�& ��3(3 ()'*%*��"�� +�!' *%&�� ��()'*%-,)*+%�&4�4*�!%&�� *��, ;�+� �"*&%*�&#% *"+, *" �:4)%�� *�� "5&�+$�! %)*�+%*�"�& �� *�� ��*+% �))')%+ ()'*%*��"�� )�$�)&3�"+�"$�+� �� &"-� %&�& *�� &4� �#� % *�$�*��& !�##�+�! -"+� &�(��#� %�*), �� �))&&�%+��( *��&%-�-"+4�")"(,5'* &�4%+%*�!#+"-4'+�"+-�:�!-"+4�")"(, ')*'+�&*�%�*�"&�#"'�!��,�%&* �))&%�!�,4�%�"#%-�:�!-"+4�")"(, ')*'+�0<A23

� "+!��( *" *��&� !%*%� *�� �,4"*��&�=�! �##� * "# ��*+% �))')%+ ()'*%*��"��)�$�)& %�! ()'*%*��"�� -�*%5")� ��=,-�& "� *�� "5&�+$�! �)) -"+4�")"(, ���!&#'+*��+$�+�#� %*�"�3�%9��(��*" "�&�!�+%*�"�"#"*��+ "-4"���*&"#*����*+% �))')%+*��")4"") �� )'!��( ,&*����B ,&*���077�782;"')!(�$�'&%-"+�+�)�%5)�"$�+$��;

1(:�7<3(�$17,)81*$/�'58*6� 67A�

$FWD�0LFURELRORJLFD�HW�,PPXQRORJLFD�+XQJDULFD����������

"�*��+")�*�%*+�!' �!*��")&%�!*��")5'##�+&,&*�-&-%,4)%,��*�����*�%*�"�%�!&�(�%)*+%�&!' *�"��$��*&"#!�-"+4�� *+%�&�*�"�&3

��� ������������ ���������������������

�-%))-")� ')%+-%&& �%5"'*�UE>///� ,&*�����+� � %�*�#'�(%) 4�4*�!�& �%$�5��� &�";� *" 5� &� +�*�! 5, ��������� �������� 076?7@2� ��� ���� ����� 07A2���������� ������ 08/2 %�!����������� ����� ����� 08123 �* �& +�-%+9%5)� *�%* *���������� %�*�#'�(%) 4+"*��� &�%+�& &"-� "--"� &�F'��*�%) %�! &*+' *'+%) -"*�#& ;�*�%�*�#'�(%) 4+"*���& "# 4)%�* "+�(�� 08/2� �� )'!��( ������ ��� ��������� 08<2 %�!������������08723�)*�"'(�*��-� �%��&-"#% *�"�"# #'�(%)4+"*���&�%&+�-%���!*"5��)' �!%*�!*��4�+-�%5�)�&%*�"�"##'�(%) �))-�-5+%��&5,*��%�%)"("'&4)%�*4+"*���&� !�#��&��& %�! *��"���& %+� ;�))� �%+% *�+�=�! 088� 8623 ��� ,*"*":� �*, "##'�(%)4+"*���&-%,%)&"��$")$���*�+% *�"�;�*�*��4�"&4�")�4�! "-4"���*&"#*�� �))-�-5+%��&07@�8123

�& #%+ %& *�� ����5�*�"� &4� *+'- �& "� �+��!� *�� %�*�#'�(%) 4+"*��� "# ������������ ����5�*�! *�� (+";*� "# ����� ������ � ������� ����E> ���� ������ ��� ��� ����E.?<6 ���� ����������� ���� ���� ����E1/ ��� %�!����� ������ �������� ����E1<. ��� 07@23 ���& 4+"*��� !�! �"* ��#)'�� � *��(+";*� "# ,�%&*& �� )'!��( ��� �������� ��� ���������� ������� ����� ������� � � ������������ � %�!���������������� ����� %�!;%& ���##� *�$� %(%��&*��� ��������� ���� �����%�!��� �������� �3�3� *�� 4+"!' ��(-� +"�"+(%��&- �*&�)#3���� %�*�#'�(%) 4+"*���"#��� ���� ����;%& �##� *�$� %(%��&*��������� 07A2 %�!�������� �����:��5�*�!%�*%("��&*� % *�$�*,%(%��&*%+%�(�"##�)%-��*"'&#'�(�08/23�*�&;"+*��"*��( *�%* *��%�*�#'�(%)4+"*���"#��������� ���(38�;%&% *�$�%(%��&* *��,�%&*& ��� ���������� ����E@ ��� %�! ��� �������� ����E@?16 ��� �� %!!�*�"� *"�'-�+"'& #�)%-��*"'& &4� ��& �� )'!��( ��������� ���� ��� ������ ��� ��� ��������� ����%�!����� � � ���������������E8?16���3��*�+�&*��(),��" )�*�+%*'+� !%*% "� *�� 4"&&�5)� ,*"*":� �##� *& "# *��&� %�*�#'�(%) 4+"*���& "��'-%�"+%��-%) �)))���&%�!-"!�)"+(%��&-&�%$�5���4'5)�&��!*�'&#%+5'**��%44)� %*�"� "# *�� ��� ����� ����� 4+"*��� #"+ 5�"4+�&�+$%*�"� 4'+4"&�& �& 5���( "�&�!�+�!08123

68/ 3Ï&6,�HW�DO�

$FWD�0LFURELRORJLFD�HW�,PPXQRORJLFD�+XQJDULFD����������

)LJ�����&KHPLFDO�VWUXFWXUH�RI�WKH�VPDOO�VL]H�DQWLIXQJDO�SURWHLQ�RI�$VSHUJLOOXV�JLJDQWHXV�>��@��6ROLG�OLQHV�LQGLFDWH�WKH�SRVLWLRQV�RI�GLVXOSKLGH�EULGJHV�

��(%+!��( *�%* *�� ����5�*"+, % *�$�*, %�! &4� *+'- "# %�*�#'�(%) 4+"*���& %+�$�+&%*�)��$���� %&�"# )"&�),+�)%*�!&4� ��&�*&��-&*"5�!�#���*�),;"+*��&")%*��(%�! *�&*��( *�� %�*�#'�(%) % *�$�*, "# #'+*��+ &-%))�&�=� 4+"*���& "# *��& 9��!3� G"��*& +�����(4+"(+%-�&�";��4+"(+�&&��"'+)%5"+%*"+��&3

�$FNQRZOHGJHPHQWV��2QH� RI� XV� �7�3��� UHFHLYHG� DQ�27.$�SRVWGRFWRUDO� IHOORZVKLS� �JUDQW� UHIHUHQFH�

QXPEHU�'�������DQG�WKH�+XQJDULDQ�0LQLVWU\�RI�(GXFDWLRQ�JUDQWHG�D�6]pFKHQ\L�6FKRODUVKLS�IRU�3URIHVVRUV�WR�

,�3���ZKLFK�DUH�JUHDWO\�DFNQRZOHGJHG��7KHVH�SURMHFWV�DUH�VXSSRUWHG�ILQDQFLDOO\�E\�WKH�27.$��JUDQW�UHIHUHQFH�

QXPEHUV�7��������7�������DQG�7���������

����������

���*KDQQRXP�� 0�$��� 5LFH�� /�%��� $QWLIXQJDO� DJHQWV�� PRGH� RI� DFWLRQ�� PHFKDQLVPV� RI� UHVLVWDQFH�� DQG�

FRUUHODWLRQ�RI�WKHVH�PHFKDQLVPV�ZLWK�EDFWHULDO�UHVLVWDQFH��&OLQ�0LFURELRO�5HY�����������������

���:KLWH�� 7�&��� 0DUU�� .�$��� %RZGHQ�� 5�$��� &OLQLFDO�� FHOOXODU�� DQG� PROHFXODU� IDFWRUV� WKDW� FRQWULEXWH� WR�

DQWLIXQJDO�GUXJ�UHVLVWDQFH��&OLQ�0LFURELRO�5HY�����������������

���:DOVK�� 7�-��� 9LYLDQL��0�$��� $UDWKRRQ�� (��� &KLRX�� &��� *KDQQRXP��0��� *UROO�� $�+��� 2GGV�� )�&��� 1HZ�

WDUJHWV�DQG�GHOLYHU\�V\VWHPV�IRU�DQWLIXQJDO�WKHUDS\��0HG��0\FRO������������������

���0DMRURV��/���.DUGRV��*���3yFVL��,���6]DEy��%���'LVWULEXWLRQ�DQG�VXVFHSWLELOLW\�RI�&DQGLGD�VSHFLHV�LVRODWHG�

LQ�WKH�0HGLFDO�8QLYHUVLW\�RI�'HEUHFHQ��$FWD�0LFURELRO��,PPXQRO��+XQJ���VXEPLWWHG�IRU�SXEOLFDWLRQ�

1(:�7<3(�$17,)81*$/�'58*6� 681�

$FWD�0LFURELRORJLFD�HW�,PPXQRORJLFD�+XQJDULFD����������

���1JX\HQ�� 0�+��� 3HDFRFN�� -�(��� 0RUULV�� $�-��� 7DQQHU�� '�&��� 1JX\HQ��0�/��� 6Q\GPDQ�� '�5��� :DJHQHU��

0�0���5LQDOGL��0�*���<X��9�/���7KH�FKDQJLQJ�IDFH�RI�FDQGLGHPLD��HPHUJHQFH�RI�QRQ�&DQGLGD�DOELFDQV�

VSHFLHV�DQG�DQWLIXQJDO�UHVLVWDQFH��$P�-�0HG������������������

���*RRGD\��*�:���=KX��:��<���2C'RQQHOO��5�:���:KDW�DUH�WKH�UROHV�RI�FKLWLQDVHV�LQ�WKH�JURZLQJ�IXQJXV"�

)(06�0LFURELRO�/HWW������������������

���*RRGD\��*�:���7KH�PDQ\�XVHV�RI�FKLWLQDVHV�LQ�QDWXUH��&KLWLQ�&KLWRVDQ�5HV����������������

���'LFNLQVRQ��.���.HHU��9���+LWFKFRFN��&�$���$GDPV��'�-���&KLWLQDVH�DFWLYLW\�IURP�&DQGLGD�DOELFDQV�DQG�LWV�

LQKLELWLRQ�E\�DOORVDPLGLQ��-�*HQ�0LFURELRO�������������������

���+RUVFK��0���0D\HU��&���6HQQKDXVHU��8���5DVW�'�0���b�1�$FHW\OKH[RVDPLQLGDVH��$�WDUJHW�IRU�WKH�GHVLJQ�

RI�DQWLIXQJDO�DJHQWV��3KDUPDFRO�7KHU�����������������

����5DVW��'�0���0HU]��5�$���-HDQJXHQDW��$���0|VLQJHU��(���(Q]\PHV�RI�FKLWLQ�PHWDEROLVP�IRU�WKH�GHVLJQ�RI�

DQWLIXQJDOV��,Q�3HWHU��0�*���'RPDUG��$���0X]]DUHOOL��5�$�$���HGV���$GYDQFHV�LQ�&KLWLQ�6FLHQFH��9RO�����

8QLYHUVLW\�RI�3RWVGDP��3RWVGDP��������SS�������

����&DELE��(���6LOYHUPDQ��6�-���6KDZ��-�$���&KLWLQDVH�DQG�FKLWLQ�V\QWKDVH����FRXQWHUEDODQFLQJ�DFWLYLWLHV�LQ�FHOO�

VHSDUDWLRQ�RI�6DFFKDURP\FHV�FHUHYLVLDH��-�*HQ�0LFURELRO�����������������

���� ,]XPLGD��+���1LVKLMLPD��0���7DNDGHUD��7���1RPRWR��$�0���6DQR��+���7KH� HIIHFW�RI�FKLWLQDVH� LQKLELWRUV��

F\FOR�$UJ�3UR�� DJDLQVW� FHOO� VHSDUDWLRQ� RI� 6DFFKDURP\FHV� FHUHYLVLDH� DQG� WKH�PRUSKRORJLFDO� FKDQJH� RI�

&DQGLGD�DOELFDQV��-�$QWLELRW�����������������

����7DND\D�� 1��� <DPD]DNL�� '��� +RULXFKL�� +��� 2KWD�� $��� 7DNDJL�� 0��� &ORQLQJ� DQG� FKDUDFWHUL]DWLRQ� RI� D�

FKLWLQDVH�HQFRGLQJ� JHQH� �FKL$�� IURP�$VSHUJLOOXV� QLGXODQV�� GLVUXSWLRQ� RI�ZKLFK�GHFUHDVHV� JHUPLQDWLRQ�

IUHTXHQF\�DQG�K\SKDO�JURZWK��%LRVFL�%LRWHFKQRO�%LRFKHP����������������

����6iQGRU�� (��� 3XV]WDKHO\L�� 7��� .DUDIID�� /��� .DUiQ\L�� =��� 3yFVL�� ,��� %LUy�� 6��� 6]HQWLUPDL�� $��� 3yFVL�� ,���

$OORVDPLGLQ� LQKLELWV� WKH� IUDJPHQWDWLRQ� RI� $FUHPRQLXP� FKU\VRJHQXP� EXW� GRHV� QRW� LQIOXHQFH� WKH�

FHSKDORVSRULQ�&�SURGXFWLRQ�RI�WKH�IXQJXV��)(06�0LFURELRO�/HWW������������������

����3yFVL�� ,���(PUL��7���9DUHF]D��=���6iPL��/���3XV]WDKHO\L�� 7���$OORVDPLGLQ� LQKLELWV� WKH� IUDJPHQWDWLRQ�DQG�

DXWRO\VLV�RI�3HQLFLOOLXP�FKU\VRJHQXP��,Q�3HWHU��0�*���'RPDUG��$���0X]]DUHOOL��5�$�$���HGV���$GYDQFHV�

LQ�&KLWLQ�6FLHQFH��9RO�����8QLYHUVLW\�RI�3RWVGDP��3RWVGDP��������SS�������

����6iPL��/���3XV]WDKHO\L��7���(PUL��7���9DUHF]D��=���)HNHWH��$���*UDOOHUW�����.DUiQ\L��=V���.LVV��/���3yFVL��,���

$XWRO\VLV�DQG�DJLQJ�RI�3HQLFLOOLXP�FKU\VRJHQXP�FXOWXUHV�XQGHU�FDUERQ�VWDUYDWLRQ��FKLWLQDVH�SURGXFWLRQ�

DQG�DQWLIXQJDO�HIIHFW�RI�DOORVDPLGLQ���-�*HQ�$SSO�0LFURELRO��LQ�SUHVV��

����6DNXGD�� 6��� 6DNXUDGD�� 0��� 3UHSDUDWLRQ� RI� ELRWLQ\ODWHG� DOORVDPLGLQV� ZLWK� VWURQJ� FKLWLQDVH� LQKLELWRU\�

DFWLYLWLHV��%LRRUJ�0HG�&KHP�/HWW�����������������

����'HDFRQ��-�:���,Q�0RGHUQ�0\FRORJ\��%ODFNZHOO�6FLHQFH��2[IRUG��������

����2UORZVNL�� 0��� <HDVW�P\FHOLXP� GLPRUSKLVP�� ,Q� :HVVHOV�� -�*�+��� 0HLQKDUGW�� )�� �HGV��� 7KH�0\FRWD� ,��

*URZWK��'LIIHUHQWLDWLRQ�DQG�6H[XDOLW\��6SULQJHU�9HUODJ��%HUOLQ��������SS�������

����3HQQLQFN[�� 0�-��� (OVNHQV�� 0�7��� 0HWDEROLVP� DQG� IXQFWLRQV� RI� JOXWDWKLRQH� LQ� PLFUR�RUJDQLVPV�� $GY�

0LFURELDO�3K\VLRO�����������������

����(PUL�� 7��� 3yFVL�� ,��� 6]HQWLUPDL�� $��� &KDQJHV� LQ� WKH� JOXWDWKLRQH� �*6+�� PHWDEROLVP� RI� 3HQLFLOOLXP�

FKU\VRJHQXP�JURZQ�RQ�GLIIHUHQW�QLWURJHQ��VXOSKXU�DQG�FDUERQ�VRXUFHV��-�%DVLF�0LFURELRO���������������

����3HQQLQFN[��0�-��� $� VKRUW� UHYLHZ� RQ� WKH� UROH� RI� JOXWDWKLRQH� LQ� WKH� UHVSRQVH� RI� \HDVWV� WR� QXWULWLRQDO��

HQYLURQPHQWDO��DQG�R[LGDWLYH�VWUHVVHV��(Q]\PH�0LFURE�7HFKQRO�����������������

����7KRPDV��'���.OHLQ��.���0DQDYDWKX��(���'LPPRFN�� -�5���0XWXV��%���*OXWDWKLRQH� OHYHOV� GXULQJ� WKHUPDO�

LQGXFWLRQ�RI�WKH�\HDVW�WR�P\FHOLDO�WUDQVLWLRQ�LQ�&DQGLGD�DOELFDQV��)(06�0LFURELRO�/HWW�����������������

68< 3Ï&6,�HW�DO�

$FWD�0LFURELRORJLFD�HW�,PPXQRORJLFD�+XQJDULFD����������

����0DQDYDWKX��(���'XQFDQ��&���3RUWH��4���*XQDVHNDUDQ��0���,QKLELWLRQ�RI�\HDVW�WR�P\FHOLXP�FRQYHUVLRQ�RI�

&DQGLGD�DOELFDQV�E\�FRQMXJDWHG�VW\U\O�NHWRQHV��0\FRSDWKRORJLD��������±�����������

����0DQDYDWKX��0���*XQDVHNDUDQ��6���3RUWH��4���0DQDYDWKX��(���*XQDVHNDUDQ��0���&KDQJHV� LQ�JOXWDWKLRQH�

PHWDEROLF�HQ]\PHV�GXULQJ�\HDVW�WR�P\FHOLXP�FRQYHUVLRQ�RI�&DQGLGD�DOELFDQV��&DQ�-�0LFURELRO��������

��������

����(PUL��7���3yFVL�� ,���6]HQWLUPDL��$���*OXWDWKLRQH�PHWDEROLVP�DQG� WKH�SURWHFWLRQ�DJDLQVW� R[LGDWLYH� VWUHVV�

FDXVHG�E\�SHUR[LGHV�LQ�3HQLFLOOLXP�FKU\VRJHQXP��)UHH�5DG�%LRO�0HG�����������������

����(PUL��7���3yFVL��,���6]HQWLUPDL��$���$QDO\VLV�RI�WKH�R[LGDWLYH�VWUHVV�UHVSRQVH�RI�3HQLFLOOLXP�FKU\VRJHQXP�

WR�PHQDGLRQH��)UHH�5DG�5HV�����������������

����*DVFK��$�3���6SHOOPDQ��3�7���.DR��&�0���&DUPHO�+DUHO��2���(LVHQ��0�%���6WRU]��*���%RWVWHLQ��'���%URZQ��

3�2���*HQRPLF�H[SUHVVLRQ�SURJUDPV�LQ�WKH�UHVSRQVH�RI�\HDVW�FHOOV�WR�HQYLURQPHQWDO�FKDQJHV��0RO��%LRO��

&HOO������������������

���� -�UJHQVHQ�� &�:��� -DFREVHQ�� 1�5��� (PUL�� 7��� (ULNVHQ�� 6�+��� 3yFVL�� ,��� *OXWDWKLRQH� PHWDEROLVP� DQG�

GLPRUSKLVP�LQ�$XUHREDVLGLXP�SXOOXODQV��-�%DVLF�0LFURELRO��LQ�SUHVV���������

����6FKHQD��/��� ,SSROLWR��$���=DKDYL��7���&RKHQ��/���1LJUR��)���'URE\��6���*HQHWLF�GLYHUVLW\�DQG�ELRFRQWURO�

DFWLYLW\�RI�$XUHREDVLGLXP�SXOOXODQV�LVRODWHV�DJDLQVW�SRVWKDUYHVW�URWV��3RVWKDUYHVW�%LRO�7HFKQRO���������

��������

����&RRSHU�� /�$��� *DGG��*�0��� 7KH� LQGXFWLRQ� RI�P\FHOLDO� GHYHORSPHQW� LQ�$XUHREDVLGLXP�SXOOXODQV� �,0,�

�������E\�\HDVW�H[WUDFW��$QWRQLH�YDQ�/HHXZHQKRHN�����������������

����5HHVOHY��0���1LHOVHQ��-�&���2OVHQ��-���-HQVHQ��%���-DFREVHQ��7���(IIHFW�RI�S+�DQG�WKH�LQLWLDO�FRQFHQWUDWLRQ�

RI� \HDVW� H[WUDFW� RQ� UHJXODWLRQ� RI� GLPRUSKLVP� DQG� H[RSRO\VDFFKDULGH� IRUPDWLRQ� RI� $XUHREDVLGLXP�

SXOOXODQV�LQ�EDWFK�FXOWXUH��0\FRO�5HV�����������������

����/HLWK�� .�0��� +D]HQ�� .�&��� 3DUDTXDW� LQGXFHG� WKLRO� PRGXODWLRQ� RI� +LVWRSODVPD� FDSVXODWXP�

PRUSKRJHQHVLV��0\FRSDWKRORJLD�����������������

����0DUHVFD��%���.RED\DVKL��*�6���'LPRUSKLVP� LQ�+LVWRSODVPD�FDSVXODWXP�� D�PRGHO� IRU� WKH� VWXG\�RI� FHOO�

GLIIHUHQWLDWLRQ�LQ�SDWKRJHQLF�IXQJL��0LFURELRO�5HY�����������������

����1DND\D��.���2PDWD��.���2NDKDVKL��,���1DNDPXUD��<���.RONHQEURFN��+���8OEULFK��1���$PLQR�DFLG�VHTXHQFH�

DQG�GLVXOILGH�EULGJHV�RI�DQ�DQWLIXQJDO�SURWHLQ�LVRODWHG�IURP�$VSHUJLOOXV�JLJDQWHXV��(XU�-�%LRFKHP������

�����������

����:QHQGW�� 6��� 8OEULFK��1��� 6WDKO��8���0ROHFXODU� FORQLQJ�� VHTXHQFH� DQDO\VLV� DQG� H[SUHVVLRQ� RI� WKH� JHQH�

HQFRGLQJ�DQ�DQWLIXQJDO�SURWHLQ�IURP�$VSHUJLOOXV�JLJDQWHXV��&XUU�*HQHW�����������������

����&DPSRV�2OLYDV��5���%UXL[��0���6DQWRUR��-���/DFDGHQD��-���0DUWLQH]�GHO�3R]R��$���*DYLODQHV��-�*���5LFR��

0���105�VROXWLRQ�VWUXFWXUH�RI�WKH�DQWLIXQJDO�SURWHLQ�IURP�$VSHUJLOOXV�JLJDQWHXV��HYLGHQFH�IRU�F\VWHLQH�

SDLULQJ�LVRPHULVP��%LRFKHPLVWU\������������������

����/DFDGHQD��-���0DUWtQH]�GHO�3R]R��$���*DVVHW��0���3DWLxR��%���&DPSRV�2OLYDV��5���9i]TXH]��&���0DUWtQH]�

5XL]�� $��� 0DQFKHxR�� -�0��� 2xDGHUUD�� 0��� *DYLODQHV�� -�*��� &KDUDFWHUL]DWLRQ� RI� WKH� DQWLIXQJDO� SURWHLQ�

VHFUHWHG�E\�WKH�PRXOG�$VSHUJLOOXV�JLJDQWHXV��$UFK�%LRFKHP�%LRSK\V������������������

����0DU[��)���+DDV��+���5HLQGO��0���6W|IIOHU��*���/RWWVSHLFK��)���5HGO��%���&ORQLQJ��VWUXFWXUDO�RUJDQL]DWLRQ�DQG�

UHJXODWLRQ� RI� H[SUHVVLRQ� RI� WKH� 3HQLFLOOLXP� FKU\VRJHQXP� SDI� JHQH� HQFRGLQJ� DQ� DEXQGDQWO\� VHFUHWHG�

SURWHLQ�ZLWK�DQWLIXQJDO�DFWLYLW\��*HQH������������������

����/HH��'�*���6KLQ��6�<���0DHQJ��&��<���-LQ��=�=���.LP��.�/���+DKP��.��6���,VRODWLRQ�DQG�FKDUDFWHULVDWLRQ�RI�

D�QRYHO�DQWLIXQJDO�SHSWLGH�IURP�$VSHUJLOOXV�QLJHU��%LRFKHP�%LRSK\V�5HV�&RPPXQ������������������

1(:�7<3(�$17,)81*$/�'58*6� 687�

$FWD�0LFURELRORJLFD�HW�,PPXQRORJLFD�+XQJDULFD����������

����*HLVHQ��5���3��QDOJLRYHQVH�FDUULHV�D�JHQH�ZKLFK�LV�KRPRORJRXV�WR�WKH�SDI�JHQH�RI�3��FKU\VRJHQXP�ZKLFK�

FRGHV�IRU�DQ�DQWLIXQJDO�SHSWLGH��,QW�-�)RRG�0LFURELRO����������������

����+X�� ;��� 5HGG\�� $�6��� &ORQLQJ� DQG� H[SUHVVLRQ� RI� D� 35��OLNH� SURWHLQ� IURP� $UDELGRSVLV�� LQKLELWLRQ� RI�

IXQJDO�JURZWK�E\�EDFWHULDOO\�H[SUHVVHG�SURWHLQ��3ODQW�0RO�%LRO�����������������

����1HXPDQQ��*�0���&RQGURQ�� 5��� 3RO\D��*�0��� 3XULILFDWLRQ� DQG�PDVV� VSHFWURPHWU\�EDVHG� VHTXHQFLQJ� RI�

\HOORZ�PXVWDUG��6LQDSLV�DOED�/�����N'D�SURWHLQV��,GHQWLILFDWLRQ�DV�DQWLIXQJDO�SURWHLQV��,QW�-�3HSW�3URWHLQ�

5HV�����������������

����7KHYLVVHQ��.���*KD]L��$���'H�6DPEODQ[��*�:���%URZQOHH��&���2VERUQ��5�:���%URHNDHUW��:�)��� )XQJDO�

PHPEUDQH�UHVSRQVHV�LQGXFHG�E\�SODQW�GHIHQVLQV�DQG�WKLRQLQV��-�%LRO�&KHP��������������������

����7KHYLVVHQ��.���7HUUDV��)�5���%URHNDHUW��:�)���3HUPHDELOL]DWLRQ�RI�IXQJDO�PHPEUDQHV�E\�SODQW�GHIHQVLQV�

LQKLELWV�IXQJDO�JURZWK��$SSO�(QYLURQ�0LFURELRO������������������