Screen-printed biosensors using different alcohol oxidases

10
Screen-printed biosensors using different alcohol oxidases N.G. Patel a,* , S. Meier b , K. Cammann a,b , G.-C. Chemnitius a,1 a Institut fu Èr Chemo und Biosensorik ICB), Mendelstrasse 7, D-48149 Mu Ènster, Germany b Lehrstuhl fu Èr Analytische Chemie, Westfa Èlische Wilhelms-Universita Èt, Wilhelm-Klemm-Strasse 8, D-48149 Mu Ènster, Germany Received 20 August 2000; received in revised form 26 December 2000; accepted 28 December 2000 Abstract Low-cost screen-printed sensors consisting of a platinum working electrode, a carbon counter electrode, and an Ag/AgCl pseudo- reference electrode were fabricated for the development of alcohol oxidase biosensors. The sensors were fabricated as amperometric transducers for the detection of alcohols in batch systems. A mixture of alcohol oxidase AOD) with polycarbamoyl)sulfonate PCS) hydrogel was used for enzyme immobilization onto the platinum electrodes. Alcohol oxidases from different sources such as from Hansenula sp., from Candida boidinii and from Pichia pastoris were used for immobilization. The performances of the resulting different sensors has been compared and characterized with respect to enzyme load, pH and temperature dependence, response time, recovery time, linear range and sensitivity. The relative response of sensors for different alcohols was measured to evaluate the selectivity of the sensors. The effect of ascorbic acid and sodium sul®te as electrochemical interferents on the sensor's performance was investigated. The continuous operation and storage stability of the sensors were also evaluated. Most of the characterization parameters were found to be superior for sensors with immobilized AOD from Hansenula sp. The sensors were also tested with wine samples. The results obtained by the newly developed biosensors were compared to results obtained by pycnometry, the well-established reference method as well as gas chromatograph method. # 2001 Elsevier Science B.V. All rights reserved. Keywords: Ethanol; Enzyme sensor; Alcohol oxidase; Screen-printing; Wine analysis 1. Introduction The accurate measurement of ethanol is very important for clinical and forensic laboratories to analyze human breath and blood. Moreover, the pulp, food and beverages industry is very much interested in fast analytical methods to control fermentation processes and product quality. For gaseous samples several methods are employed, e.g. gas chromatography, IR spectrometry, and detection meth- ods that are based on the fact that ethanol may easily be oxidized chemically or electrochemically [1]. Methods that use the latter, relatively non-speci®c property comprise of chemical sensors and chemical methods related to the reduction of colored indicating substances. These two approaches are already used for fast on-site detection of drunken vehicle drivers. For liquid samples ethanol detection is more complicated because a greater number of interfering substances could be present. Therefore, the analysis of liquid samples may be accomplished by using the above mentioned methods directly or, indirectly, combining them with headspace techniques [1]. Furthermore, HPLC and refractometry may be used [1]. For the determination of ethanol in alco- holic beverages the distillation method is the benchmark for all other procedures. It is of®cially approved by the Eur- opean Community, for example wine analysis [2]. For that purpose the speci®c density of the distillate is measured using a pycnometer after conventional distillation. For the analysis of ethanol in complex samples the application of enzymes allow to considerably enhance spe- ci®city and thus, decrease the expenditure for sample pre- treatment. The enzymes used for ethanol detection are alcohol dehydrogenase ADH) and alcohol oxidase AOD). The following overview of enzymatic state of the art ethanol determination is focused on electrochemical biosensors with immobilized enzymes. ADH has the advantage to be more stable and more speci®c for ethanol but also the disadvantage to be depen- dent on the dissolved coenzyme NAD which has to be Sensors and Actuators B 75 2001) 101±110 * Corresponding author. Permanent address: Department of Electronics, Sophisticated Instrumentation Centre for Applied Research & Testing SICART), Sardar Patel University, Charutar Vidya Mandal, Vallabh Vidyanagar 388120, Gujarat, India. E-mail address: [email protected] G.-C. Chemnitius). 1 Present address: EKF-diagnostic GmbH, Ebendorfer Chaussee 3, D-39179 Barleben/Magdeburg, Germany. 0925-4005/01/$ ± see front matter # 2001 Elsevier Science B.V. All rights reserved. PII:S0925-400501)00545-7

Transcript of Screen-printed biosensors using different alcohol oxidases

������������ ��� �� �� � ��� ������� ������� ���� �

���� �������� �� ������� �� ����������� ����� �������� ���

��������� ��� �� � ��� ���������� ����� ������������ �� ������� �������� �� �� �!������� ��� "��� ���#�� �� ��� $���������#�� $����� ��%��&�������� $����� �'�� �(����� �� ������� �������� �� ��

����!� "# $��� "###% �����!� �� ��!� � ���� "& '������� "###% ������ "( '������� "###

��������

)�*��� ����������� �� �� ��� � ��� �� � ������� *��+��� �������� � ������ ������ �������� �� �� $�,$��� � ����

��������� ������� *��� �������� ��� �� �!������� �� ������� ���� � ��� �� �� � -�� �� �� *��� �������� � �����������

��� ���� ��� �� ������ �� ������� �� ���� . �� � $ ������ �� ������� ���� � /$0'1 *�� ���./�������.�1 ������� /���1

�.����� *� � � ��� ��2.�� ��������2���� ��� �� ������� ������� � $������ ���� � ���� ������� ����� ��� � ����

)�������� ��� ���� ������ *������� �� ���� +�#��� ,������ *��� � � ��� ��������2����� -�� ����������� �� �� �� ����� �������

�� �� �� ���� ������� �� ���������2� *�� �� ��� � ��2.�� ���� �3 �� ��������� ��������� �� ��� � ���� ����!��. ����

������ ����� �� �� ��!�.� -�� �����!� �� ��� � �� �� �� ��� ������� ������� *� ��� ��� � �!����� �� �����!�. �� �� �� �� �

-�� ����� �� � ������ ��� �� ���� ��4� � �������������� ��������� �� �� �� ��5 ����������� *� ��!� ����� -�� ��������

�������� �� ����� �����. �� �� �� �� *��� �� � �!������ �� �� �� ���������2���� �������� *��� ���� � �� ������� ���

�� �� *�� ��������2� $0' ���� )�������� �� -�� �� �� *��� �� � � � *�� *��� ����� � -�� �� �� ������ �. �� ��*�.

�!����� ��� �� �� *��� ������� � �� �� ������ �. �.������.� �� *����� ���� �� ��������� ���� � *��� � ��

������������ ����� � "##� 6� �!��� ������� 7�8� $�� ���� �� ��!��

'� -���. 6�����% 6�2.�� �� ��% $������ ���� �% ��������������% 9��� ����. �

� ���� ������

-�� ������� ��� ������ �� ������ � !��. �������

��� �������� �� ����� �� ���������� � ����.2� �����

����� �� ����� �����!��� �� ����� ��� �� ��!�����

��� �. � !��. ���� ����� � �� �� ����.���� ���� �

������ ���������� ����� � �� ����� :����.�

;�� �� ��� ����� �!���� ���� ��� �����.�� ����

�� ������������.� < ��������.� �� ������ ����

� �� ��� �� � �� �� ��� �� ������ ��. �� ��. ��

����2� ���������. �� ���������������. =�>� ���� ��

� � �� ����� �����!��. ���� ����4� ������. ������ � ��

�������� �� �� �� �������� ���� ����� � ��

������� �� ������ �������� �� ���� � -�� � *�

��������� ��� �����. � � ��� �� ��� �� ������ ��

���+�� !������ ��!�� �

;�� ��:�� ����� ������ ������ � ���� ���������

����� � � ������ ������ �� ���������� �� ���� ���� ��

��� ��� -��������� �� ����. � �� ��:�� ����� ��. ��

�������� �� �. � ��� �� ���!� ������� ����

�����. ��� �������.� ��������� ��� *�� ��� ����

�����:�� =�>� ;���������� 3�)� �� ����������.

��. �� � � =�>� ;�� �� ���������� �� ������ �� �����

����� ��!����� �� � ������� ���� � �� ��������+ ���

��� ���� �������� � < � ��4�����. �����!� �. �� 6���

����� �������.� ��� ������� *��� ����. � =">� ;�� ��

����� � �� ����4� �� �. �� �� � ����� � ��� ���

� ��� � �.������� ���� ���!������� � ��������

;�� �� ����. � �� ������ �� ������� ����� ��

���������� �� ��2.�� ����* � ��� ������. ������� ���

��4��. �� �� � ����� � �� ��������� ��� ����� ����

������� -�� ��2.�� � � ��� ������ ������ ���

������� ��.������ � /$'31 �� ������� ���� �

/$0'1� -�� �����*��� �!��!��* �� ��2.���� �� �� ��

�� ������ ���������� � ���� � �� ��������������

��� �� �� *�� ��������2� ��2.�� �

$'3 �� �� �!����� � �� ���� ���� �� ����

����4� ��� ������ �� �� � �� � �!����� � �� �����

�� �� �� � ��!� ����2.�� �$'� *���� �� � ��

��� �� �� $����� 7 ?@ /"##�1 �#�A��#

� ����� ������ ������ �������� ��� B '������� �� 6�������� �

����� ���� <� ��������� ����� ��� $����� � ����� C -� ���

/�<�$ -1� ����� ���� D��!�� �.� ������� 8�.� ������ 8������

8�.������ E((�"#� ��F���� <����

/� ��� ������B ��������G�������� H���������� /����� �������� 1�� ��� �� ��� B 6�;������ �� ���3� 6�������� ���� �� E�

'�EI�?I 7�������,��������� ������.�

#I"@�J##@,#�,K A �� ���� ���� � "##� 6� �!��� ������� 7�8� $�� ���� �� ��!��

�<<B � # I " @ � J # # @ / # � 1 # # @ J @ � ?

�� � �� � �.� $�������.� �������������� ������

�� �� ����� ���� �$'3 � � ����� *�� ���� �!���

������� �� �������. ������ ������� � �� *��+���

������� � ����. ������ � ��. ����������. �����!� ���� �

-�� � �!����� ��. �� �!������ �. ������������ �

������ � *��+ � ��*�� ������� ������� �� ������

�!��. ��������� �$'�� $��������.� ���4� $'3 ����

��� �� � ������� *�� �������������� ������� ��

�$'3 *��� �!����� �. ��� �� '��� �� � �� ��

� ���� ������ ���.���� ����� =E>� �. -������� � ���

�� � �� �� ������ = �/���������1/�01E��> ��

=;�/���������1E>/�;&1" =J> �� �. ������ � ��� �� � ��

�� ������ ������ ���� =@>� -������� � ��� �� � ��!� ��

��� ������ ��� ����� �� ���4� �. �� ������ E�J�

��.���.���2����.� � ������� ������� =&>� 7� ��

���4� ������ �� � =?>� 9��� � ��� � � �������������

������ ��+ =(> *�� � ��� � �������� � ������� ����

���� �� �� � ����� � �� �!��������� ��� $'3 ������

�� �� �

;�� �� �� ����������� �� ���� �!����� �� ������

����� �� �� � �� ��� �� ����� � ����� ������

�� �� �� ��� ����������. �� �������� �. ���� ���� ��

��� ������� � ;�� ������ � ��� �� +�� �� �� ��

�� ���� �!����� ��!��� �. � �� ��� ���� �� ����

�.�� ����4� ��2.�� ��.�� ���� � � �� ���� ��� �� �

�� ���������� ����!��. �� �� *��+��� ������� � ���� �

��. ��.���� ���� ��������� �� �����!� ��2.�� ���������

���+ � ��� �!����� ����������� ������ �� �� �.

������������ � ������ �� $'3� �$'� �� �.���.��.��������� � �� ������ ��*�� =IA��>� $��� ����.����� ��.

������ �� � ������� � �� �� ��� ���������� ��

������� �� �� �� ��� �� -��. ����� ������ �� �����

�������� ������ � ��� ��� ��� ������ �� ��� � ���

������ ���� ���4� ������� � ����������� ��� �� ��

=�">� 0����.������2��������4� ����������� �� ��

������ ��� ������� ��� ������ *��� ������� �.

�L�� � ��� =�E>� -��. � � �� ��* ������ �� ��� ������

��� �� ���������� $'3 �� ���� ��������� *����

�$'�A���.��.�����.����;�� �� �� �� � �� $0' �� ���� ��� �� ��� ��� 0" �

����� 3�*�!��� $0' � �� � ���� � $'3� ���F� ��

�������� *��� �� 4� *�� ��������2� $0' ��� ������

��� ������ �� �I?@ =�J>� 9�� � ������� *��+��� �����

��� ��. *��� ���� � ��� ���� ������ � �� ��2.����

����. ����� �.����� ������� �� ����� � ��

��2.�������. ��� ��� ��.���� ��� �� � ��� �����2�

$0' �� � �� �� �. �� ����� �� ������ �� � �� ��

�!��. ������ ����� ���!��!� =�@>� �� )�� �� 9���

��������2� $0' *���� �.�������� ���� ��� ������

=�&>� $����� �������� � *��+ *�� �� ��!� ��2.�� ��+�

$0' � � � � � ���� ����� �� ��2.�� � ����� �� ��2.��

�� ��!��� � �� ���� ��� ������ ��2.�� �������� �� �� �

�� ��� �� �� �������� ��� �����!��� -�� ��� ��

�������� �� �. � ��� ��2.�� ������ *�� ���� ��2.��

��� � -�� � ������ ��!� ���� ������� *�� ����������

����� ��� ���� �� M�* . �� =�?��(>� -� ������ �

����4��. �!�� ����� ���������� �� ;<$ *�� $0'

������ �� �������������� �������� ������ ��!� ����

� � � ������ ���������� ����� � =�I�"#> �� �

������� ������� �� ��� �� �� ����� ="�>� ;��*���F�����

. �� *�� $0' ������ ��!� �� � ����4� ���� �� �

���� ��� ��� =""�"E>� 7�� �� �� �������� ����� ��

$0' �. ���� �� � �� ���������� �������� *���

� ����� �. �� ���.� �� � ��� ="J> �� )������ � ���

="@>� �����!��� $0' �� ���� ��������2� �. ���.���

�������� �� ��� . ������ ������� ="&> �� ��� �����

��� ="?>� $������ ��� �� �� *��� �������� �� � ��

������ ����� �� ��������� $0' ��� � ��� �

������� � . �� � ���� 8�F�.�+���� � ��� ="(>� $0' ����

!����� ����� � !�2� ���� �� ������ � 1 *�������� +1

,������� )�������� �� �� )�������� ,�� �,��� �� ����

�!��.� �� +����,��� 2�2����� �� ���� � � � ���

������ �� � ������� �� �� ����� . �� �������� �.

7������ � ��� =�?> �� )��N� � ��� ="�>�

0� �� *�. � �� �� . � ����� ��� �� ��� ������

. �� ������ � ��� ="I> ������ � ���� ����� ���������

�� ������� ������� ������ ��� ������� ��*��� ����.

�� �� �� $0' ���� 1 *�������� �L��� �� ���*��+��

=E#�E�> � ����� ���+ 4�� �� �� *�� $0' ���� +1

,������ ��� ����+� *�� ��!��� ���� ������� �� ����

������.�� 7��F�� � ��� =E"> �!����� � �� ���� �����

��� �� �� �� � �� ����� �������.����� ���4� ������

����� ������ ������� �� ������ ��� ��� ����. �

�� ����� D� � ��* ������ �� �� � ���� ������� ��

!����� ���� ��������� ��!����� � ��� ��� �� �� �� M�*

����. � . �� =""�"E> �� �� ���� ����. � . ��

=@��"��(�E#�EE>�

'����� �� �� ����� ��F�� ������ �� ���� ��*� �

�� �� ����� �� �� ���������� �� ��� �� �� � ��� ������

������� ��������. ��� �� �������� =EJ>� �����.� ���

����� ������� ��2.�� �� �� ������ ��� � ���.� ��

�� ���� � *��+��� ������� ��� �� � ���+ 4�� ���.���

�� � ��������� �������� � ������ ������ �� �� $�,$���

� ������������� ������� =E@�E&>� 3���� *� ����� �� ��

���������� �� ���������2���� �� �� .�� �� ������

����� ��� �� �� � ��� $0' ���� ������� ����� ��

���� ���������� � �� ���������� �� ������ �� *���

����� �

� ������������

31�1 4��2����

$�� ������ *��� ������� *�� ����.���� ������ ����

�������� � $�� ������ *��� ������� � ��� ���������2�

#�" �� 4���� *���� ������ �� ����A7�������

/������.1� $������ ���� � /$0'� 6� ����E��E1 ���� ���

����� ����� *��� � �� $0' ���� ����� *�������

/#�@J D,�� ���1� $0' ���� +1 ,������ /� D,�� ��2.�� ������1 �� $0' ���� )�������� �� /�� D,�� ���1

� *��� � ���.��.�������� /�6<1� ��� ��� ��������

�#" 01�1 +���� �� ��1 5 (����� ��� "#������ � �6 �377�� �7�8��7

������� ��� ��� ����� � ������ ��� �� ���� ��4�

*��� ������ � ���� ������ '�� ������� /������.1�

������� � /�0'� 6� �������?1 �� "�"���2������/E���.�����2���2������&� �������1 ��������� �� /$7-�1 *���

������ ���� ���� '����� �� � �������� /������.1�

���./�������.�1 ������� /���1 �.����� *� � �� �����

����� �� ��� ���� )���2�� /������.1� 6������ �������

�� ���� ��� ��� ���� *��� ������ � ���� ����+�

'��� � /������.1� �� ���������� �� �������� ����

;��+�� 7��� /�*�2�����1� ����� ������ �� �� ���

����� ������� *��� ��� � J��� '���. � �������� /�J +'�1 *��� ������� ���� ���������� /D�$1�

3131 9�*�#����� �� ������#��

6��� �� �� ������ � �� � " �� ������ *��+���

������� �� "��� J �� ������ �� ��������� �����

���� �� ����!��.� -�� ��.�� �� �� ��� ���� �� ����

� ����� �� �*���� =E@>� -�� ���������� �� �� �� �� *�

�������� �� �� ���� ������������� �� B /�1 ������� ��

�� ������ �������� �� �� ���+ ������ *�� �� ������

������� � ��� ���4� ��������� ���.��� �� � ����

���� ��+% /��1 ������� �� �� $�,$��� ��������� �������

� ��� ���.� �� �� � $�,$��� ��+% /���1 ������� �� ��

������� *��+��� ������� � ��� ���.� �� �� � �������

��+% /�!1 ������� �� �� �� ������ ��.�� � ��� ���4�

������!� ������ ��+� ���� ���� *��� � ����� �������

�. ��� ����� =E@>� -�� 4�� *� ���� � (#�� ��� ����

�# ��� � �. ��� �� ���� ��!�� �� ���� �� ������

�� � ���� �!��. �� �� �������������� $�� ��� ����

*��� ������ ������� ��� @ � � �E#�� ��� ������� ���������� �� �� ������� ���

31:1 /�; � ���� ���

<� ���� � ����!� ���!� ��� � �� �� ���� ����

�� � ��!� $0' ���� +1 ,������ � ���. � �� �� ����

�������� -�� *� ��� ����� � �� ���!� ���� ��!�

�� ��M����� �� �� �����. �� �� ��������2���� ������

����������. �� �� ���.����2���� �� �� ���.������� ����

���.���� -�� ��2.�� ������ *� ���.2� ����� #�#� �

��� ��� ��� ���� ������ �3 ?�@ � J�� ��� �# � � ��� ��������� *�� � ������ �� �J +'��

31�1 /�; � �#��&�� ����

����� � �� ��������2���� �������� �� ���!�. �� ��

$0' ���� ������� ����� �� ���� ������� � ����*

�� ��� ���������� �� ��2.�� ��� �� ����������� �� ��

�� ����!� �� �� � $0' ���!�. �� ���� :����4� � ���

������� � �� ��� �. �� ����������� � �. �������� �

�� �����������5 �� ������ =E?>� 7���M.� �� ��2.����

����. ����� 3"0" *� +��������. ������� �. � ���

�� �0' ����.2� ������� �� $7-� � J#@ �� *��

� )����" D8A8<� �������������� ���+���6�����

'�L ����� /������.1�

3161 � �*���;����� �� ��; ��

;�� ��������2���� ������ �� $0' ���� 1 *������� ��

)�������� ��� �� ����!��.� *��� ������� �� #�#� � ��� �

��� ��� ���� ������ �3 ?�@� 6�2.�� ���. �� �� $0'

���� +1 ,������ *� � � ����. ���� ���. � �� ���!�.

� � ��� ������ *� � � � ����� �� ������� ��2.��

�� �� *��+��� ������� �� �� ����������� ���� �����

��� �� �� � ����� ���!�� ��� ������.��� /�@# ��1

*� � ��!� �� J## �� *���� �6< /"�@O �� �:���� ����

���1 *� �� � �� ����� ��� ������ ���� �� �3 !����

������ @�J� -���� �:��� !����� �� $0' �� ��� ������

*��� *��� ����� $ !����� �� " �� �� �� ������ *� ������ ��� �� � *��+��� ������� � -�� �� �� *���

+�� � J�� �� ���� ��� ����� �!������ �� *��� ���.��� � � ����*�� �

31<1 ",,����� ��� � ,�� ���# ����� ����

-�� ���� . �� ������ � �� � �������. � ����

�� �� ����� *���� ��� ��������� ���� �� �� �����

����� �.� �� �������. ������ � ���� �!����� �����

/����+� 7������ ������.1� -�� ����������. ������� ����

�� �� *��� ���� �� �## �� ������ ������ �� � ���+���

;�� ������ ����������� �� �� ������� �����������

$�,$��� � ������������� ������� �� #�� � ��� ���

��� ���� ��� ����� ������ ������ �� ���� ���������

*�� � ��� �� ����������� �� #�� � �������� -*�

������ *��������� ������ � /�6' E#� 7�������

��L������ ������.1 *��� � � ��� ����������� ��� ����

��� � � ������� �� �&## �8 !�� � �� $�,$���

��������� �������� ��� ������ *��� ������ �� � ����

��������� /""��1�7����� ����� �� 4� ��� ������ �� � !����� �� �� �

������������� �� *� ������ �� �. ����.��� � �������

�� ���" 8 � �� *��+��� ������� !�� � $�,$��� ���

J ���� 9��� �� ���+����� ������ �� �����2� /� ����.

���� ���� �" ���1 �� ��� ������ *��� ��� �. ��

��*� � ����� �� ���� ������ �� ������ -�� ��

��:�� ���� ���� �� ���� �� �� *� �������� �� �����

����� �. � ��� ������ � �!����� ;������ ��*��� / �

;�����L���� <�7� ��L� ��� ������.1�

31�1 4��� �� ,���

��!���� ����� �� *��� �� �� *��� *��� +���.

������ �. �� ��4���� ��� � ��� ��������. �� ��L� ��

/����� ��� )��� � �� �������� 8������L����� ��

����� �� ��L� ��1� ;�� ��� ������ �� ������ �� *���

����� � ��� ����������� �� �� � ��� ����+ �� �� *��

��� ���.��� �� *���� ��2.�� �� ���� ��2.�� �� ��

*�� ��������2� $0' *��� � � ��������� �.� -��

��� ������ *��� �������� � ��� �� ������� ����

���� �. ���� � 4� "# �� �� @ � ������ ����

������ � �## �� �� �� ������ ������� �����*� �. "# ���� �� ����� �� "# �� �� @ � ������ ���� �������

01�1 +���� �� ��1 5 (����� ��� "#������ � �6 �377�� �7�8��7 �#E

-�� ����� �� �� �� �� *���� ��2.�� *� !��. ���� ��

*� ������ ���� �� ����� �� �� �� �� ��!��� $0'

��2.�� �� ���� � ������ �� ��� �� �� �� �� ��� �

�� ���. ������� �. ���������������. ���!� �������

�� �� *��� ����� �

�������� ��� ������ �� �� ��������� ����� �.

!����� *��� �������� �������� � �� �.��������

����� -�� ������ ����� �� �� *��� ����� *��� �� �

������� *�� �� ������������. /���+���6����� $�� . �

�� P)� D�$1 � ��� ��������. ������ �� ;< ����� =E(>�

� ������� �� ���������

:1�1 ���� ������� �� ��; � �#��&��

<� ���� � !����. �� ����� ���!�. �� �� �������

���� � ����� � � ��� ��������2����� �� ���!�. *�

������� �. �� � ����� ��������� ���!�. � �����

� ���� ��������2���� �������� � �� ���� � ��������

��2.�� �� �� ����������.�

;�� �� ��������� $0' ������ *�� ���!��� ��

@@A?@ D,�� ��!� ���� � �� -�� $0' ���!�. ������ �

���� ������� �� ���� 4�� �. �F� ��� �� !����� �� ��

��������2���� ������ !��.��� ���� ��@ � "�@ �� �� �.������ �� ��2.�� �������

:131 ,) ��,�����#� �� ��� ����� ��2����

-�� �� ��� � �� �� �� �� *�� ��������2� �������

���� � ���� ������� ����� �� ���� ��!� ���� �

������� �3 !���� �� �� ��� ����� ������� -�� �� ��� � �

�� ����� �� ��? �� ������ �� ��? �� ������� ��

���� �������� $ ������ �� �� ��� � �� �� �� �� �

������ *� ���� � �� ������� � �3 ?�@ /;��� �1� -��

�� ��� � �� �� �� �� � ������ *� :��� ������ �� �� � ��

�� �� *�� $0' ���� )�������� �� ��� �� �� �� ��

*�� $0' ���� +1 ,������ �� 1 *�������� <� �������� ��

�� ��� � �� ��� �� �� � ������� *� ������ ��� �

������� $����� �� �� �� *�� ��������2� $0' ����

)�������� �� ��*� ������ �� ��� � � ������� � �3 ?�@

��� �� �� �� *�� $0' ���� +1 ,������ �� 1 *�������

/�� �� ��*�1� )��� *� .�� ��*� � ���� �3

������� �� �� ����� �� �3 ?�#A?�@� 9�� ����� �

�� � �� ��!���� � ��� ������ ��� ������ *��� ������

�� �� #�� � ��� ���� ������ �3 ?�@ ��������� *��

#�� � ����

:1:1 /���#� �� ��; � ������2 �� ��� ����� �������&��

-�� ��2.�� ���!�. � � � �������� �� �� �� �� ����

!���� �. ������ �� ��2.�� ������ ��� �� ��������2��

��� ������� ;��� " ��* �� ��M����� �� �� ��2.��

���!�. ������ � �� �� �� �� �� �� ��!�. �� �� ��

������� *�� $0' ���� �� ���� ������� ������ � � -��

�� ��� � �� �� �� �� � ��? �� ������ �� ���� ����

����� $���� � *� �� ��!� �� �� �� ��� � �� ��

�� �� *�� $0' ���� )�������� �� *� ������ ���

�� �� ��� � �� �� �� �� *�� $0' ���� �� ���� *�

����� � ;�� ��� �� �� �� �� ��� � �� � ��� ������. *��

������ ��� ����� �� ��2.�� ��������2� ��� �� �� �� �

7. ������ ��� �� ��2.�� ��� ��� ������� �. � ����� ��

�# �� �� �� �� ��� � ������ � �� ���� �. �. ����� �� (�

J�@ �� ? ��� $0' ���� )�������� ��� +1 ,������ ��

1 *�������� �� ����!��.� 9�� �� ���� �!������� ��2.��

���������� �� ����4����. ������ ��2.�� ��� ���� ��

������ � �� *��+��� ������� � -�� � ��*�!�� �� �� ��

��� �� *��+��� �� �� ���� ��� ������� ���� � ��.

���� �������. � ��� ����.� ������� �� �� ��������

*��� ������ ���������2�� 9� ��!� � ���� �� ��� ��

���+��� � �� +�� �� +��������. �������� �� �� �� ��� �

��������� �� � �� ��!�. �� �����!�. ��. ��� ����

���. ���� �� �� ��� �� �� �� �� � 0��� ����������

*��+��� �� �� �� . �� *�� ��������2� $0' ����

������� ����� � �� ������� ���������� �� ��

���!��� �� � ��!� $0' ����� � ��������2���� ��

;��� �� 6���� �� �3 �� ������ �� �� ��� � �� �� �� � ��? �� ������ ���

$0' ���� 1 *������� /�1% $0' ���� +1 ,������ /�1% $0' ����

)�������� �� /�1 /#�#?@ D,�������� � � E �� �� � ���� �� �1�

;��� "� <�������� �� ��2.�� ��� �� �� �� ��� � �� �� �� *�� $0'

���� 1 *������� /����+1� *�� $0' ���� +1 ,������ /��� ������1 ��

*�� $0' ���� )�������� �� /���.1 � ��? �� ������ /� � E �� �� �

���� �� �1�

�#J 01�1 +���� �� ��1 5 (����� ��� "#������ � �6 �377�� �7�8��7

�� � � �� . ��������. !��. ��2.�� ��� �� �� �� ��

�� ������ � )������ � ��� � � ������� ����� �� $0'

��������2� �. ��� ����+��� ������ *�� ���������.�

�� ��!��� ���� ������� �� ���.�������� ��������

�������� ="@>� -��. ���� �� ���� ��� �������� ����

���� *��� ������ *�� �# D $0' ���� +1 ,������ ���

�������� D���������. ��. � �� � ����� �� � � �

��� $0' ���!�. ���������� �� � � � �� �� ���� �

�����. ������� ���� �� �� � �� � ��� ��� ����� �L���

� ��� ��������2� ����� #��J D $0' ���� +1 ,������ ���

������� �������� � �� ������ ���!�. �� �� �� ��2.��

����������� =E�>� 8�N��� � $�N�.� � � �� ���� ���

#�##( D $0' ���� 1 *������� �� +�#�� ,������ ��� �����

����2���� �� � ��� ��.�� ��2.�� ������ =�(>� <� ���

��������. *� �������. � � ��2.�� ��� ���� #�J �

@ D ��� ������� ��� �!���� ���� ���� � =E@�E&>�

)��+��� ��� �� � 4���� � �� ����� �� ���� ��2.��

���!�. �� #�#?@ ��� *� � � ��� �� ��������2���� ���

���� *��+��� ������� �� �� ����������� ���� �������

�� �� �

:1�1 ���*����� �� ��� ������

;��� E ���� ���������� ��� ��� ������ ������ �.

���� ������. ����� �� �� ���� �� ��� ���� *��

$0' ���� ���� �� �� ���� ������� ����� �

��� �� *�� $0' ���� )�������� �� ��*� �� �����

� �� ��!�. ��� ������ �� E#�@ �$,��� #�&�� �����*��. �� �� *�� $0' ���� +1 ,������ *�� � �� ��!�. ��

�#�& �$,��� #�#(� �� �� �� *�� $0' ���� 1 *���

����� *�� �� ��*� �� ��!�. �� &�" �$,��� ��&�� <����� � �!����� �� ������������. �� �� �� �� ��������

���� �� �� *��� ��� *���� ���� ������� ����� � -��

�� ��!��� �� �� ���������� ���!� *��� �����������

*���� �� ����� �� �"�@O ��� ��� ������ �� �� 4�

�. ���� ����������� ;�� ��� ������ *���� �� ������

����� �� �� �� �� � ��������� �� �� �� �������� ���

������� �� -���� �� -�� �� ��� � ��� *� ��� ��� �

�� ������ �� ��� ��:���� � ����� I#O �� �� �������

������� *���� �� ����!��. ��� *� ��� ��� � �� ����

��� �� ��� ��:���� � ����� �� ����� ������ �*� �

�#O� -�� �� �� *�� $0' ���� )�������� �� ��*� �

��*�� ������ ����� �� ������ �� ��!�.� ��*�� ������

���� �� �� �� �� ��� � ��� ��� �� � *�� $0' ���� ��

���� *� ����� � 3����� ����������� �� ������ �� �

J# �� ���� �� ��� ��� ����.��� ���������� 4��� � ��

���������� ���!� � �L��� ������ �� ���+ 4�� �� �� *��

� ������ ����� ���� #�#E ��A#�( �� ������ �� � �� ��

�!�. �� (## �$,�� =E#>� *����� ������ � ��� � �����

������� ����� �� ������� *�� � ������ ����� �� ?A

J�# �� �� � �� ��!�. �� �### �$,�� ="I>� ��� ��

������ � �� � *���� �� �� ������������ ��� � �����

��� ������ ��!� ���� �!����� ��� �� ���������� ��

���� ��� =E@> �� )��. ��� =E&> �� ��� ��������.� -��

���!��� �� �� � *� ���� � *��� �� � ������� �� �

�� ����������� ��� ������ �� ����� � �.����� �������

�����. ����� � ��������2����� 6�2.�� ��� � � ��� ���

��������2���� �� �� � �� �� *��� #�" D ���� ��� ����

� � �� #�@? D )��. ����/�1����� � ��� *��+��� ��������-�� � �� ��!��� �� "�E �$,�� ���� ��� �� ��? �$,��)�

�. ��� ��!� ���� ������� �������� �� ������ ��2.��

��� ��� ������� ���� �� �� �� ������ �� �� �� ��!�

��� � $� �� �� � 4���� ���� �� �� �� �� ��!�. ��

��*�. �!����� ���� � �� �� ����� �� ������ �����

� ��������� �� � ����4����. ���� �� �� ��������

�� �� ��������2�� ���!���� ��2.�� �� �� �� ���� ���

�� ����.� �� ����� �� �� ��2.�� ���������

:161 4�����&� ��,���� �� ��� ������

-�� �� ����� �� ;��� J ��* �� �����!� �� ��� � �� ��

�� �� � ���� ������� ��� ��� *�� ��������� � ������

�� ��� � /�##O1� $�� ��� ������ *��� ������ �� � �

����������� �� @ �� �� �� �� ����!� �������� < *�

;��� E� ���������� �� ��� �� �� *�� ������ ��� $0' ���� 1 *�������

/�� � #�III?1% $0' ���� +1 ,������ /�� � #�IIII1% $0' ����

)�������� �� /�� � #�III(1 /#�#?@ D,�������� � � E �� �� � ����

�� �1�

-���� �

��������� �� �������� �� ��� �� �� *�� $0' ���� ������� ������ � �

������ ��

$0'

)����� �����

/��1

)����� ����������

����������

��� ��!�.

/�$,��1

� ��� �

���� �I# / 1

���!��.

��� / 1

)�������� �� #�#�AE�# #�III( E#�" � #��? �" � #�? "# � �

+1 ,������ #�#"AE�?@ #�IIII �#�& � #�#I �I � #�& E# � �

1 *������� #�#JAE�?@ #�III? &�" � #��# "& � � E& � �

� -���� �� �� *�� $0' ���� ���� ����� ��� �� ��� ���� *��� � � ��� ���� �� ��� � � ������ � ���� �� ��

01�1 +���� �� ��1 5 (����� ��� "#������ � �6 �377�� �7�8��7 �#@

�� ��!� �� �� �� ��� � � ���������� �� �������� *�

��* /Q@O1 *�� ��������� � ������ ��� ��� ���� �������

.�� �� �� �� � ��������.� �� �� ��!�. ����� � *��

������ ��� ����� ����� �� �� �������� �������� -�� ����

�� ��� � � ������� ��. �� �� � �� ��� �� ��������

�.�� �� ����� �� �� ���!�� ��� �� ������� �. $0'�

�� � ��!� � � �� ��� ��� $0' ="(>� -�� �� ��� � �

������� *� ������ ��� � ������ �� �� � �� �� �� *��

$0' ���� +1 ,������ /�&#O1 ������� � �� �� *��

$0' ���� 1 *������� /�"#O1 �� )�������� �� /��EO1�

-�� ��� ��� �� ���� ������ �. )��N� � ��� ="�>� -����

��� ���. ����� � �� ����� ���������� ������ *����

�� ��� ���� �� ������� � �� ������� -�� � �� �� ��

��� �� � � ��� ������ ���������� �� �� � �� � � �����

�!��� � ���� �� �� ���� � � ��������2.�� ������� ��

���������� ���� � ���� ���������� �� �� ���������

��� �� ���!���� �������� �� ����.� ������ =EIAJ�>�

:1<1 �������#� �� ���������� �� ��� ����� ��,����

-�� ��M����� �� �� ���� �������������� ��������� ��

�� �� ��� � �� �� ������� �� �� �� ���� � �� <� ��

��� ���� �� �:������� ������ �� ������� � ������ ����

�� ��4� �� �� �� ����� *��� ����� � �� � ������

�� � �� �� ������� �� �� ��2.�������. ����� �.���

��� �������� �� ������� ������ �� � �� �� ����

������� �� � ������ ��� �� � ������ �� � �� �� ����

������� �� ��4� � �� ������� �� �� ������� ��

��4� �. ����� �.����� ������� �� � ������ ���� -��

��M����� �� � ������ ��� �� ��4� *� ���� � �� �����

��� �� �� *�� $0' ���� 1 *������� �� ��*� ���

�� �� *�� $0' ���� )�������� �� ������� � ��

������ ����� � !�2� ��( �� �(O �� �#�& �� �EO��� ����!��. /�� �� ��*�1� -�� ���������� �� ����

��� ��� �� �� ���� ����� �� � ���� ��*�� �����������

��� ������� ;���������� � ���� �� �� ���� � ������.

�������� �� ��M����� �� �� � *� �� ���� �. ���

��������2���� �� � ������ ��� ���� � �� ��4� ���� ��

:1�1 /���#� �� �� ,����� �� ��� ����� ��2����

-�� ����� �� ��������� �� �� �� �� �� ��� � �

������� ��� �� �������� � ������ �� �� �� �������

*�� � ��� ����� ���� ����������.� �� �� ������ �������

�� ������� ������� � -�� ��������� �� �� ��� ����� ����

*� ������ � �. � ������������������ *��� ����������

���� -�� �� ��� � �� �� ������� �� �� � � �� ������

� ������� �����2� ��������� � ��*� �� ;��� @� ;�� ���

���� +�� �� �� �� � �� ������ �� ��� � *� �� ���

������� ������ �� �� ��������� ����� ���� �@ � "@����� ��� ������ ��������� � ;��� "@ � J#�� �� �� ��� ������� � *�� ���������� �� � �� �� ��2.�� �������

�� ����.� ���� ��� �� ��� ��� � ����� � �� �

����!���� �� �� $0'�

:1�1 ��������� ����� ���� ��� ����2� ���*���� �� ���

������

;�� � ����� �� �" �� �" �� �:��� ��� ������ ��

@ �� ������ *��� ������ �� �. �� �� �� *�� $0'

���� �� ���� ������� ����� � $��� ���� ��� ������ ��

������ ������ *� ������� �. #�� � ��� ���� �������

D��� �� ��� ��� ������ �� �� �� *��� +�� �� ��

��� � ������ ��� �� ������ ��� ������ '�������� ��

�� �� ����� �� ��� � ��*� �� ;��� &� ;�� �� 4� ����

��� ������ *���� �� 4� ( � �� �����!� ����� � ��IO

��� �� �� *�� $0' ���� )�������� ��� "�?O ��� �� ��

*�� $0' ���� +1 ,������� �� @O ��� �� �� *�� $0'

���� 1 *�������� '����� �� �� J � �� �� ��������� ��

����� �� �� �� �� *�� $0' ���� )��������

�� ����� � � I@O �� � ������ !���� �� �� ����� ��

�� �� �� *�� $0' ���� +1 ,������ �� 1 *�������

����� �*� � &( �� @IO �� ���� ������ !���� �

-�� ����� �����. �� ��. .�� �� �� �� � �� �������

����� ��� ���+� !������. ���� �� !��*� ��� �� ��������

�� ����� �� �!���� ����� �. ������������� ��������.

��!� � �� ��� ��!� ��� �!���� *��+ ���� ��. ��� � � ���

;��� J� ����!� �� ��� � �� �� �� *�� $0' ���� �� ���� �������

����� � @ �� ������� �������� ����������� �� ��������� �� ����

�!��. /#�#?@ D,�������� � � E �� �� � ���� �� �1�

;��� @� 6���� �� ��������� �� �� ��� � �� �� �� *�� $0' ���� 1

*������� /�1% $0' ���� +1 ,������ /�1% $0' ���� )�������� �� /�1 �

� �� ������ /#�#?@ D,�������� � � E �� �� � ���� �� �1�

�#& 01�1 +���� �� ��1 5 (����� ��� "#������ � �6 �377�� �7�8��7

���� ���������� � 3����� *� � � �� ��M����� �� �����

����� �� ����� ������� �� �� ����� �� �� �� ��

*�� �� ������� $0' �

$��� �� ��������2���� �� �� ��2.�� � ��� �� �� *���

�!�� ��� ���� ����� �� *���� ���� ����� *� ���

���� ������� ����� ������� !�2� /�1 ����� �� ����

��� ����� � J��� /��1 *� ����� �� ��� ���� ������ �3?�@ � J��� /���1 ����� � ���� ��������� /"E��1 *���� ������ �����. �F� ���� -�� ��� ������ *��� ����

��� �� �!��. �. � �� ��� ��� *�� �� ������ ����

�������� �� @ �� ���� ������� ������ ������� �

$��� ��� ������ �� �� �� *��� ����� ���+ �� ����

�� ����!� ����� ������� �� � ��� �.5 ��� �������

-�� ��� ��������� � �� ����� �����. �� �� �� ��

*�� ��������2� $0' ���� )�������� �� � ��*� ��

;��� ?� '�� �� �� �� �� ���� +1 ,������ �� 1 *�������

��� �� ��*�� ;�� ���� ����� ������� �� ����� �� ��

�� �� *�� $0' ���� �� ���� ������� ����� ��*�

�� ��� ��� � ����� ������ � ��� ���� �� �� � �� ����

����� �� �� �� *�� $0' ���� )�������� �� *���

����� � '����� ����� �� ������ � J�� �� ����� �� ���

�� �� �� �� � �� � �#&A��JO �� �� ������ �����

����� � �� �� *������ �� �� �.������ *�� �*� � ����

@@O �� �� ������ ����� �� �. R( �� �� ���������� ��

��� ��*�. ������ ����� � � E#AE@O ����� �� ��� �#

�. � '����� �� ����� �� ���� ��� ����� � J�� ��

���� ������ ������� � ���� ��������� �� �� ��

����� ���� �������� �.� D� � ����� �. RJ �� ����� ��

��� �� � �( �� �� ����� � � ���� @@A&@O �� �� ������

����� � $���*�� � ���� ����� �. R@ ��*�� � ��

�� �� ��� �� *� ����� ������� ������� 0� �� ���

��� �� ����� �� �� �� �� ��� � ���� ���������

����� � ������ �*� � "JO �� �� ������ ����� �� ��

�� �� *�� $0' ���� )�������� �1 �� ����� �. R��

�� � �JO �� "(O �� �� ������ ����� �� �� �� �� *��

$0' ���� +1 ,������ �� 1 *������� �� ����� �. R�(�

�� ����!��.� 0� �� ���� ��� �� ����� ������ �� ��

�� �� ��� ���� ���� ������� � J�� ��*� �*� � �� ���� �( �. �� ����� ��. ������ ����� �� J#A

@#O �� �� ������ !���� � -�� �� ��!���� *� � �������.

�!��� ��� �� �� �� *�� $0' ����)�������� �� *�� �

����� ������� ���� ��� �� ���� ����� �. R? �

����� �. R�(� 9� ���� � � � �� �� *�� $0' ����

)�������� �� ���� �� ������ ����� ����� �� � *��+� -��

� �� ��������� *�� )��N� � ��� *�� ���� � � �����

������ �� � �� �� *�� $0' ���� +1 ,������ �������

��2� *�� ���������.� �� �6< �� � M�* . �� " �.

����� � � � � �� �� �� �� ��� ����*� � �����2� ��

��2.�� �������� *���� *��� �� ���� ����. ��. ��

*� �� �*�. ="�>� ������� � ��� �� �� ��. �� �

������ � ���� ����4��� ����� � �� I# �� @#O �� ��

�� ��� � �� �� �� *�� $0' ���� )��������

�� ��������2� �� ������ �� � ���� � ����� ����� ��

J �. *�� �. ����� ������� �� �� ������� �� ����!��.�

��� �� � ��� �� �� �� ������ � �� �� ���� ���� �� ��

�� �� ��. �� ������ �. ������ ��� �� ����� ��

��2.�� ��� �� �� �� ������ �� �� ������� =�@>� 7.

������������ �� ���� �� ��2.�� �� �� ������� ������

�� �� ������������ ��� �� ���!�. �� ��� �����

�������� ����� ��. �� �!����

-��������� ������ ����� ���� �� �����+�� � �����.

�� ��������� �� $0' ���� �� ������� ����� ����� �

��������2���� �� � 4� �� �� ������ �����2���

���!� �

:1�1 ",,��#������ �� ��� ������ �� ����� ���� �� ���

�� ,���

)��+��� ��� �� ���� ����������� �� �� �� *��

��������2� $0' ���� )�������� �� ��� �� �� � *��

��������2� $0' ���� +1 ,������ �� 1 *�������� �� ��

*�� $0' ���� )�������� �� *��� ��� �� ��� ��� ����

;��� ?� ������ �����. �� �� �� *�� $0' ���� )�������� �� �� � ��

�� �� �� ��� � � @ �� ������ �� �� �� ��� /�1 ���� ����

������� � J�� /�1% /��1 �� #�� � ��� ���� ������ �3 ?�@ � J�� /�1%

/���1 ����� �� ������ ��� ����� � ���� ��������� /�����������.

"E��1 /�1 /#�#?@ D,�������� � � E �� �� � ���� �� �1�

;��� &� 0��������� �����. �� �� �� *�� $0' ���� 1 *������� /�1%

$0' ���� +1 ,������ /�1% $0' ���� )�������� �� /�1� 6��� �� ����

����� �� � ��* ��� ������ �� @ �� ������� $��� ���� ��� ������

������ *� ������ �� ������� *��� +�� �� #�� � ��� ���� ������ ���

�� ������ ��� ����� /#�#?@ D,�������� � � E �� �� � ���� �� �1�

01�1 +���� �� ��1 5 (����� ��� "#������ � �6 �377�� �7�8��7 �#?

��� �� ������ �� *��� ����� � $ ��� �� �# *���

����� � !�2� *� ����� �� *��� *��� �� ���� �����

�� �� *��� *��� ��!� ����� -�� �� �� ��� ��*� ��

;��� (� -�� �� �� �� ��� �� �� ��� ������ *��� �!���

��� �!�� ���� ��� ������ � ���� ��������� ��������

��� ������ ������ �. ���� �� �� �������� *����

��� ����� � �� �� ��������� �.�������� ������ ����

������� ����� �� ���� �� ��*�. �!����� ������

����� ��� �� �� *�� ��������2� $0' ����� *����

�#O ����� ����!��� 8���� ������ �. �� �� �����

*�� �� !���� ������ �. �� ��������� ���� ��

��� ��.� $�� ����� *� !���� ������ �. �� *��� #�JA

J�@O ������ ��� �� ����� ������ !���� �� �� ���������

����� -�� � *� !���� *��� ������� � �� &O /��

*���1 �� &�JO /*��� *���1 �� ��* �. ��� -�� ������

����������� ������� �. ��� �� �� �!��� � � ������

���� ���� �� !���� ������� �. �� ��������� �����

6����� ����� �� �� *�*��� *��� *� ������� � ��

E�?A@�(O� �� ���� ������� � �� �.�������� ����

�� �� ������ ����� �� �� ���� �� *��� *� ����

���� ��(A�"�&O� �� ��* �������� �� ��������� �����

< ���� �� �� ��� �� ��. ����2���� �� ���� ���

��� �� �� �� *��� *��� ����� �� ����� �� �� ����

�� �� ����� �� �� �� ��. �������� �� ���� ��+�

��4�� *���� � ��� �� �� �� *��� �� ������ ���������

��� � �� ��� �� ������ ������ �� ��*�

<� �� ����� ������� �������� � ������������ ��

����+ ������� *���� ��2.�� ="I>� �� ������� �����

����2���� �� � ������ ��� ���� � �� ��4� ���� � � *���

� ������� � ��� ��� �� �� ��������2���� ������

���� �� ��!� ���� � ������ �����!� �� �� ������ �

� �����������

������������ ���� ������� �� �� ��!� ���� ����.

���� ������ ��� �� ���������� �� ��*��� � M������ ��

� �� ���� ��� �� �� ��� �� ������ �� ������� $�� ������

�� ��� �� ���������� �� �� ��� ���� ��� �����������.

�!������� *�� ��� �� ������� ��������� �� � < *� ����

�� �� ���!�. �� �� $0' � � ��� ��������2���� �� � ��

� �� �������� ��������.� -�� �� �� *�� ��������2�

$0' ���� )�������� �� ��*� ������� ���������2����

�������� �� ��*� ��M����� ���� �������������� �����

������� ������� � �� �� *�� $0' ���� +1 ,������ ��

1 *�������� ��������.� �� �� ��!��� �� �� �!�����

�� �� *��� ��* �� � �� ��* ��2.�� ��� *���� ����

�� ��������2� ��� ���� ������� �� � ��*� ��!������ �

�� �� �� ��*� ��� ������������. *�� ����

�!����� �� �� ��� EO �� ����� �����. �� � E

*��+ � J��� '� ��� ��M����� �� ����� ����� �� *��� ����� ������ ����� ���� �� ������� *���� �#O

����� ������� � �� ��4���� � ������� �.��������

����� ��!���� *�. � ������ �����!� ����. � �� ��

��!� ���� ����� ��� )��+��� ��� �� � �����������

�� �� ���� ����������� ���� ������� �� �� � ��� ��

�� ��� �� *��� �� � ��!� ���� ��������� ������

�� ������� ����.� � ��� �������. � ���� �����������

�����*��+��� ������� �� �� �

�������� �������

9� ��� ���+��� � �� '������� �� ������� C -����

�����. /'�-1� ��!������ �� <���� ��* '���� �� ��

'�� ��� S����� ��L� )��� �� ������� /') 1 � ��

<���������� 7����� �� �� 7�7; /7��� ���� ����� ��L�

7����� �� ;�� �����1� 7���� ������.� ��� �*����� ��

<��������� F��� �� ����� ���F�� ��� <�<�#E@�II� �� �

������� ����� � ������� � �� '�� ��� 7��� �����

D�*�� /'7D1 ��� �������� �� ���F�� ��� �E#"(,�E� 9�

���+ '�� �� �+� ���� ����� ��� )��� � �� ��������

8������L����� ������ �� ��L� �� ��� ����.��� � *��

�� *��� ����� �� �� ��������� �� �� ������ ����

���������

����������

=�> 9�T� ������ ��B $� -�*� ��� /6�1� 6����� �� 6��.������� ��

$���.���� �������� 8��� "� $������ ��� � )����� �II@�

="> 66�� ����� ��� �������� ��� "&?&,I# �� �? �������� �II#

��������� �������. ���� ��� �� ����. � �� *��� � 0��� T�

6��� ������� ) "?" /EE1 /�II#1 E@AE(�

=E> U�T� ���� ��T� '���� 6���������.�� ������� �� ����� ��������

��� ����2.�� � ���.���������������� ������� �� ��������

��� �� ����������� ������� ��� �� �� � $���� ����� $�� "(@

/�IIJ1 �"@A�EE�

=J> ;� -�������� ;� �������� )� 3������2� 3�'� $������ 6� )����2��

<������ ������ ��� �� �� �� � �� ������ �� � �������

������ *�� = �/���������1/�01E��> �� =;�/��������

��1E>/�;&1"� $���� ����� $�� EI@ /�III1 �?A"&�

=@> ���� ������� �� ������2����2��� $�T��� 0����� � 7�)� ��2�

$������ ��� �� �� �� � �� ������� ��.������ � �� ������

���� ��������2� ��� � ������ �� � �������� -����� JE /�II&1

??IA?(J�

;��� (� ��� ������ �� ������ ����� �� ������� *��� ����� �.

��� �� �� *�� $0' ���� )�������� �� /���� ���.� ����� ��*�� 1�

�� ������������. /��+ ���.� ����� �*�*�� 1 �� �.��������

��������� ���� /����+1 /� � I ��� ��� �� �� � � � J ��� ��1�

�#( 01�1 +���� �� ��1 5 (����� ��� "#������ � �6 �377�� �7�8��7

=&> ;� -�������� ;� �������� )� 3������2� 3�'� $������ 6� )����2��

������ ��� ����� �� ������� �� ���� � � �� ���������������.

�� ���B � ��� �� �� �� � �� �������� $���� ����� $�� E@( /�II(1

�@A"@�

=?> T� 9���� 6��� ������ $�T� �!��F�� <����!� ������� ��� �� ��

�� � �� ���������� ���� ������ �� � ��2.�� ������� � T�

6���������� ����� E@E /�IIE1 ��EA�"#�

=(> T� 9���� U� ����� �� ������� T��� ���������� ������������

����������� ��� �� �� ��� ����� � �� ������� �� � ��

���������� ��� � ������ ��+ � $���� ����� $�� E## /�II@1

���A��&�

=I> T��� ���+� 3�T� V��� ��-� ���� $���������� ��� �� �� ���

���������� �� ������ !����� 7�� �� � 7���������� �# /�II@1

@(?A@IJ�

=�#> 3�T� V��� T��� ���+� ��-� ���� '� �� ���� ���+����� �����������

��� �� �� *�� ������� *��+��� ������� �������� �� �� �����

�� ���� ��� � $����� 7 EJ /�II&1 JI#AJI"�

=��> T�T� ���+� 3�T� V��� ���� )��� 9�V� )��� ���� ����� -�3� ���� �� �

���� '���������� �� ����� ������� � ��� � �����������.��

����������� ��� �� �� �� � �� ������� ��.������ �� $����

����� $�� EI# /�III1 (EAI��

=�"> ��'� ������ � <��� 3����.� � 9���� T��� 3��� � �� ��� $

� �� ���� �������� ����������� ����������� ��� �� �� ��� ��

��� ������ �� ������� �� ��!����� � $���� ����� $�� E"I /�II&1

"�@A""��

=�E> D� �L��� ����� �������� � �� �������� �����2�� � 7�� �� ����

��� 7� � �$'������L������ '��.������ ��� ��������� �� ������������ �� �� �@� '������ $����� ������ �� 7���������

��� � JA& ����� �II?� ��L� ��� �� E�#�

=�J> �� ���F�� ���� ��������� $���������� ���������� �� ������� �

����.� �� ������.��� ��� *�� �� ��������2� ������� ���� �

��2.�� �������� $���� ����� $�� ?@ /�I?@1 �&IA�(#�

=�@> -�'� ��� ��� T��� 3������ ���� ���+��� T� � 9��*��� <�T� 3����� �

6���� ��������� �� ��2.����� � ��� �� �� � ��� � ��!��

�����2���� . ��� 7�� �� � 7���������� ? /�II"1 ?#�A?#(�

=�&> T� )��� T� 9���� ����+���� ����� �����. �� ���������� �� �

�� ��2.�� ��������2� *���� �.�������� ���� ��� ������ �

7��������� $���� 7������� E# /�III1 �??A�(E�

=�?> T� 7������� 7� 9������ �� ���2���� �� ����L����� $� 3�*��� ;�

��������� '���������� �� �� ����������� �� ������ ������� *��

��2.�� ������ ���*���F����� ����. � �� ���� . �� � $����

����� $�� E"" /�II&1 �E�A�EI�

=�(> �� 8�N���� �� $�N�.�� $��������� �� ��� �� �� *�� �����������

������ ��� ��������� ������� $���. ��I /�IIJ1 �(JEA�(J?�

=�I> -� 7����� )� ������ 3� T�� +��� �� ���+�!����� 7� 3�����������

�� ��������� )� 0� ��� ��������� �� ������ ����� ����������

�� � ������������ � �.���. �� �. ������ ��������. � ��������

������ ��:�� ������������. �� �� ������� ��� �� ��� 7���������

7������ JJ /��IJ1 E""AE"(�

="#> 3� )��N�� -� 7����� 3� T��� ��� �� ���+��8����� T� 8���� )�

������ 0������ ��������� �� ���� �������� �� ������ �����

� ���������� �. ��������. � �������� ��:�� ������������.

�� *� ����������� ��� �� �� � �������������� J? /�II(1

@#�A@#(�

="�> 3� )��N�� $� � 8�F�.�+����� )� ������ �� ���+��8����� ���

������� ���������� �� ��� �� �� ����� �. ������ ��:��

������������. *�� ��� �� �� ������� T� ������ 7����� $����

�? /�II(1 ����A��"(�

=""> 9� ��L����+�� � ������ �� ����� ��� ������ ���*���F�����

���� ��� �� ���������� �� ������ �� ��!����� *���� �����

���������� $���� ����� $�� "EJ /�II#1 "�EA""#�

="E> T� ���� � 9� ��L����+�� 7� ������ �� 6�����+��2������� ��

7��� �� 9��� ���� ;�������� ��� �$���. � �� ���+�������

� ���� '��+���� '�� ��� )���� ����� �� ���� I" /�II&1 �AJ�

="J> �� �� ���.� ��� �� V�+�.���� -� -�+������ <� ������� �� ���� �

��� �� �� ��� ������� $���� ����� && /�IIJ1 E"I?AEE#"�

="@> ��T� )������� ��3� ;������� �� ����� ���� �� ��������� $������

����� ������� ������� *�� ����� �������. �� �����

����������� � $���� 7������� �I( /�II�1 I?A�#E�

="&> ;� ��2����� �� P���+�� V� ���� V� 3����� $���������� ��� �� ��

� ��� �� ��2.������������ ���.��� �������� ���.�� ��� � &I#

/�II(1 J&A@&�

="?> $� ���!�N��2� �� ���N��2� <��� ���� ��� <� ���+� � 6� '��WN����2�

������� ��� �� �� �� � �� ������� �� ���� ���.�������

�.����������� � ���������� � 7�� �� � 7���������� �@ /"###1

JEA@"�

="(> $� � 8�F�.�+����� 6� � �L����� $� 3������ )� ������ $������

��� �� �� �� � �� ������ ���� �A������� . �� � $���� �����

$�� E"? /�II&1 ""EA"EJ�

="I> $� ������ � ;� �� ��� � 6� ������2�;������ � �� $������ 6�����

����������� ��� �� �� �� � �� �� ������� ���� �A��������

���.��� �������� ��� 6��������� JE /�II(1 E@?@AE@?I�

=E#> �� �L���� $��������� ��� 6�2.� �� ���� ��� �� 7� � ��

'��+ ���������������� ���'� -�� � � -�������� D��!�� �. ��

7���� ��*���� ������.� �II"�

=E�> �� �L���� D� 7����* +�� �'� ������ ����� � �� ������

��� �� �� �� � �� ���+����� ��������.� ��� � $����� 7 J

/�II�1 "&?A"?��

=E"> �� 7��F��� T��� 3��� � �� ��� '�!������� �� � � �� ����

������ ��� �� �� �� � �� � ���������. ������ �����������

������� ���� *�� ������� ���� � ��� �� ����. � �� �����

7�� �� � 7���������� �@ /"###1 "@?A"&E�

=EE> ���9� )��� ��3�;� ����� T�S� )�� $������ �� ��� �������� �� �

�� ��������2� ��������/<<1 ������� �� ������.��� �8� ��

������ ��!�����. ���� ������� ���� �� -����� J( /�III1 E"�A

EE��

=EJ> �� $�!���2�<��2�� D� 7����* +�� �� �������� �� ��� �� �� �

$���� ����� &@ /�IIE1 @"@$A@EE$�

=E@> $� 6����+�L��� �� ���� � ����� �������� � ;������� �����������

��� ���� ��� ��� �� �� �� � �� � ����������� ���� �������

. ��� T� 6���������� ����� J(� /"###1 ("AIJ�

=E&> 3� 0� ���* +�� $� 6����+�L��� �� S����� ��� ����� �������� �

������������ ��2.�� �� �� ��� )��. ��� ����������� 6�2.��

���������� -������� "& /"###1 @E?A@JE�

=E?> 6�2.���� � �. �� ������� ���� � /6� ����E��E1 ����� ���� ���

$�#JE( �� $�"J#J� -�������� ���!���� ������ '�� ��������

������.�

=E(> ���+�� 6����� $���.���� <� ����� � $������ 6 ������ ���� 9���

������ � $��������� ����

=EI> �� 7������ T� ������� 3� <�������� �� �� ����� �� �������

���������� ��2.���� �������������� ���������� �� ����

��� �� ������� �. � � �� ��������� ������ ��*��+ ��� �����������

$���� ����� $�� EI( /�III1 (EAI"�

=J#> 8� ������� �� ������ 7� �� �����+� '� 9���+�� ;� ������� �� ������

�� S����� ��� $���. � �� �����. ������ *�� � ����� .�����

��������� �� �� �� ���������� � ��� � ���������� �����!�����

����������� $���� ����� ?" /"###1 "IE?A"IJ"�

=J�> 3� ;������ $��������� ��� 6�2.� �� ���� �� ���������� X

���� 9��� �� �� 7�� �� ���+ X 7� ������ �������� $���� ��L�

�� ;� ����� ���� ���'� -�� � � D��!�� �. �� ��L� ��� ������.�

�III�

������� ���

0� ���� � �1 +���� �����!� �� ��� ����� �� ��. �� *�� ���� ���

6�������� � � �������2���� ���� ����� ���� D��!�� �.� 8������

8�.������� ��F���� <��� �� �I?(� 3� ������� �� ��' *��+ ��

��� �� ������� ���������� ��� ���� �� �I(J� 3� F���� ��

�� ������� '������� �� ��. �� � � �����. ������ ���I?I�

'����� �I(&A�I(? �� *��+� � � '$$' �����* � �� 0�����������

����� �� �� D��!�� �. �� '������ ������.� �� ���*� �� <<A8<

������� ���������� ��� ���� �. ��� ���� � � �0�8' ����

01�1 +���� �� ��1 5 (����� ��� "#������ � �6 �377�� �7�8��7 �#I

�� ������������ ��� � ���. ����� � 3� � *��+��� � � ����� �� ��

6�������� �� 3�� �� �� �� ������� '������� �� 6�������� �

����� ���� D��!�� �. ���� �II� �� �� � � �� 3������. ���������

�� ����� ���� <� ��������� ����� ��� $����� � ����� C

-� ��� /�<�$ -1� $ � '$$' �����* �� �!����� ��2.�� �� �� �

<� �� ��L� ������ �� 7�� �� ���+� ��8� /<�71� ��L� ��� ������.

�� �II&� ����� �III �� *� ���� �. �� ��L� ��� �� � *��+��� ��

�� �!������� �� ��� �� �� ��� ��� ����. � �� ��������

����� �. ���� �� '�-�') ��� ��� <��������� F��� �� �����

���F�� *��+� 3� � �� � ��!��!� �� �� ����� *��+ �� ����������

��� ���� �!��� � ������������ ��� � ���. � �� �� �� ��

�� ����������

(������� ���� *� ���� �� �I?J� ��� �����!� ��� ������ ����� ��

����� �. ���� �� D��!�� �. �� ��L� �� /������.1 �� ;������. �III�

����� ��� �� � � ��' ��� � �� D��!�� �. �� ��L� ��� 3�� *��+

������ �� �!������� �� �� �� ��� �� ����������� ��2.��

�� �� ��� *��� ����. � �

'�� � ��� *� ���� �� '�L ������ ������. �� �IEI� 3� �����!� ��

'�����<��� �� ��������� ����������� ���� �� ����� <�������� ����� ��L�

�� ������*� �� �� 6 �� �� �I&E� 3� �����!� �� ������ �� ����� �.

� �� -����� ��� D��!�� ��L �� ��L����� �� �I?# �� �� '�� ���� ��� �

�� )�*��������������D��!�� ��L �� ��L����� �� �I?@� $��� �� �

������ �� ���� *�� ��$� �����2 /��� D��!�� �. �� ��* V��+ �

7������1 �� �� ��2�� /D��!�� �. �� �������1� �� ������ �� � � ��

����� �� ��� ��� ����.���� ����� �. � �� D��!�� ��L �� D��� <� �I(& ��

������ � ����� ����� �� �� ����.���� ����� �. � �� -����� ���

D��!�� ��L �� ��L����� �� �� �I(? ���� ����� �� �� ����.���� ����� �.

� �� 9� ��L�� ��� 9������ �D��!�� ��L �� ��L� ��� ����� �II� �� ��

��������. ���� �� <�7� �� *���� � ��� �� ?# ����� *��+ �����.

�� �� ���� �� �������� �� ����������� �� �� �

��*������������ �� ������ �����!� ��� ������ �� ����� �. �� '��

���� ��� ����� ���� �� -�������� D��!�� �. �� 7���� ��*��� �� �I(I

�� �IIJ� �� ����!��.� ;��� �I(( � �II" �� �� ���� *��+��� �� ���*�

��F����� ����. � . �� �� �������2.�� �� �� � �� ��� �� �� �����

�� �� �7;� 7���� ��*���� <� �IIE �� F���� �� C' '�������

������� ���� �� ;�� ���� $�� 7� 3������� *���� �� *� ��������

*�� �� �!������� �� �������� �� ����������� �� �� . �� ��� ��

!��� ����� �� � ;��� �II@ � �III �� �� ���� ������ �� ��2.��

�� �� ����� �� �� <�7� ��L� ��� ��* �� � *��+��� �� �� �!�������

�� �������������� �� ������ �� ��������� ��� *���� ���� ����� ��

� 6�;������ �� ���3� 7�������,���������

��# 01�1 +���� �� ��1 5 (����� ��� "#������ � �6 �377�� �7�8��7