i

EFEKTIVITAS KOMBINASI

ISOLAT ANDROGRAFOLID DARI Andrographis

paniculata (Burm.f.) Nees DAN VITAMIN E DALAM

UPAYA PENCEGAHAN

KEJADIAN ATEROSKLEROSIS PADA

TIKUS PUTIH JANTAN GALUR WISTAR

SKRIPSI

I MADE SANJAYA SAPANCA

1208505071

JURUSAN FARMASI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS UDAYANA

2016

ii

Lembar Pengesahan

EFEKTIVITAS KOMBINASI

ISOLAT ANDROGRAFOLID DARI Andrographis

paniculata (Burm.f.) Nees DAN VITAMIN E DALAM

UPAYA PENCEGAHAN

KEJADIAN ATEROSKLEROSIS PADA

TIKUS PUTIH JANTAN GALUR WISTAR

SKRIPSI

Skripsi ini diajukan sebagai syarat untuk memperoleh gelar sarjana farmasi (S.Farm.) di

Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Universitas Udayana

OLEH

I MADE SANJAYA SAPANCA

NIM. 1208505071

Menyetujui:

Pembimbing I Pembimbing II

Ni Kadek Warditiani, S.Farm., M.Sc., Apt Luh Putu Febryana Larasanty, S.Farm, M.Sc., Apt.

NIP. 198310302008122001 NIP. 198402222008012008

Mengesahkan:

Ketua Jurusan Farmasi

Fakultas Matematika dan Ilmu pengetahuan Alam

Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt

NIP. 196804201994021001

iii

KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa, karena atas

berkat rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul

“Efektivitas Kombinasi Isolat Andrografolid dari Andrographis paniculata

(Burm.f.) Nees dan Vitamin E dalam Upaya Pencegahan Kejadian

Aterosklerosis pada Tikus Putih Jantan Galur Wistar” tepat pada waktunya.

Penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari dukungan, saran, dan bimbingan

dari berbagai pihak. Maka dari itu, pada kesempatan ini penulis ingin

mengucapkan terima kasih kepada:

1. Ni Kadek Warditiani, S.Farm., M.Sc., Apt., selaku dosen pembimbing I

yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, dukungan,

semangat, bimbingan, dan saran dengan sabar selama penulis mengikuti

pendidikan di Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu

Pengetahuan Alam Universitas Udayana, khususnya dalam penyusunan

skripsi ini.

2. Luh Putu Febryana Larasanty, S.Farm., M.Sc., Apt., selaku dosen

pembimbing II yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi,

semangat, bimbingan dan saran dalam penyusunan skripsi ini.

3. Bapak Drs. Ida Bagus Made Suaskara, M. Si., selaku Dekan Fakultas

Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.

4. Bapak Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt., selaku

Ketua Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Universitas Udayana.

iv

5. Seluruh dosen dan staf pegawai di Jurusan Farmasi Fakultas MIPA

Universitas Udayana yang telah memberikan bantuan kepada penulis

selama penyusunan skripsi ini.

6. Orang tua yang sangat saya cintai dan hormati, I Wayan Darmika Sapanca,

S.Pd. dan Ni Putu Widyiasih yang telah mengasuh dan membesarkan

penulis, membimbing dan memberi motivasi dengan penuh kasih sayang

dalam penyusunan skripsi ini.

7. Saudara saya yang tercinta Putu Agus Kurniawan Sapanca, serta keluarga

besar di Rumah Tabanan yang selalu memberi motivasi dan dukungan.

8. Seluruh rekan mahasiswa Jurusan Farmasi angkatan 2012 (Dioscury

Hygeia), khususnya Tim seperjuangan penulis: Widi, Rika, Dipa, Putri

Nejor, dan Kak Feb, serta para laboran Kak Anggi, Kak Pasek, Kak Nova

dan Mbok Dwi yang banyak membantu dan memberikan semangat dalam

penyusunan skripsi ini.

9. Teman seperjuangan pada saat praktikum yaitu, Milka, Yudi, Ayu

Suryani, Kak Tata, Agas, Ulan, dan Inggrid.

10. Teman seperjuangan yang selalu menemani saya saat suka dan duka di

Pondok Pekak Ole: Dipa, Krisnawan, Dewa, Lanang, Widiangga, Made,

dan Pasek.

11. Seluruh mahasiswa Jurusan Farmasi angkatan 2011, khususnya Kak Gung

Ta, Kak Adit, Kak Putri Paramitha dan Kak Jeffry yang memberikan

semangat dan dukungan dalam pembuatan skripsi ini.

v

12. Semua pihak yang terlibat dan telah membantu penulis dalam penyusunan

skripsi ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu.

Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih belum sempurna.

Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang bersifat

membangun sehingga di masa yang akan datang dapat menjadi lebih baik. Penulis

berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang

memerlukan.

Bukit Jimbaran, Juni 2016

Penulis

vi

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL ........................................................................................ i

LEMBAR PENGESAHAN ............................................................................. ii

KATA PENGANTAR ..................................................................................... iii

DAFTAR ISI .................................................................................................... vi

DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH ....................................................... viii

DAFTAR TABEL ............................................................................................ xi

DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... xii

DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... xiii

ABSTRAK ....................................................................................................... xiv

ABSTRACT ..................................................................................................... xv

BAB I PENDAHULUAN ................................................................................ 1

1.1. Latar Belakang ................................................................................. 1

1.2. Rumusan Masalah ............................................................................ 4

1.3. Tujuan Penelitian ............................................................................. 4

1.4. Manfaat Penelitian ........................................................................... 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ...................................................................... 5

2.1. Tanaman Sambiloto (Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees) ... 5

2.1.1. Klasifikasi Tanaman .............................................................. 5

2.1.2. Morfologi Tanaman ............................................................... 6

2.1.3. Kandungan Kimia .................................................................. 6

2.1.4. Kegunaan dan Bioaktivitas .................................................... 6

2.2. Andrografolid .................................................................................. 7

2.3. Aktivitas Farmakologi Andrografolid ............................................. 9

2.4. Ekstraksi dan Isolasi Metabolit Sekunder dari Bahan Alam ........... 10

2.5. Vitamin E ......................................................................................... 11

2.6. Antioksidan ...................................................................................... 12

2.7. Kolesterol ......................................................................................... 13

BAB III METODE ........................................................................................... 14

vii

3.1. Rancangan Penelitian....................................................................... 14

3.2. Lokasi dan Waktu Penelitian ........................................................... 15

3.3. Subjek Penelitian ............................................................................. 15

3.4. Bahan Penelitian .............................................................................. 16

3.5. Alat Penelitian ................................................................................. 16

3.6. Prosedur Penelitian .......................................................................... 16

3.6.1. Determinasi Tanaman ............................................................ 16

3.6.2. Pembuatan Ekstrak Sambiloto dan Isolasi Andrografolid ..... 17

3.6.3. Uji Kemurnian Isolat Andrografolid. .................................... 17

3.6.4. Pengukuran Kadar Andrografolid dalam Isolat ..................... 18

3.6.5. Penyiapan dan Aklimatisasi Hewan Uji ................................ 18

3.6.6. Perlakuan Terhadap Hewan Uji ............................................. 18

3.6.7. Pengukuran Kadar Kolesterol Total ...................................... 20

3.7. Analisis Data .................................................................................... 20

3.8. Skema Rancangan Penelitian ........................................................... 21

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ......................................................... 22

4.1. Determinasi Tanaman ...................................................................... 22

4.2. Ekstraksi .......................................................................................... 22

4.3. Isolasi Andrografolid ....................................................................... 24

4.4. Kemurnian Isolat Andrografolid...................................................... 25

4.5. Kadar Andrografolid dalam Isolat ................................................... 25

4.6. Induksi Hiperkolesterol pada Hewan Uji ........................................ 29

4.7. Efektivitas Kombinasi Isolat Andrografolid dari Andrographis

paniculata (Burm. f.) Nees dan Vitamin E dalam Perubahan

Kadar Kolesterol Total .................................................................... 30

BAB V PENUTUP ........................................................................................... 35

5.1. Kesimpulan ...................................................................................... 35

5.2. Saran ................................................................................................ 35

DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................... 36

LAMPIRAN ..................................................................................................... 42

viii

DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH

Arteri koroner : Pembuluh pemasok darah beroksigen ke jantung

Arteri serebral : Pembuluh pemasok darah beroksigen ke otak

BB : Berat Badan

CMC Na : Carboxy Methyl Cellulose Natrium

Diet aterogenik : Makanan yang menginduksi aterosklerosis berupa lemak

babi : kuning telur bebek : pakan standar (15:5:80) setiap

hari dengan penambahan kalsium 0,1% setiap hari dan

Vitamin D3 20000 IU seminggu sekali

Ekstrak terpurifikasi : Ekstrak yang sudah mengalami proses purifikasi untuk

menghilangkan komponen yang dianggap sebagai

pengganggu seperti lemak, klorofil dan lain-lain sehingga

didapatkan komponen bahan alam yang lebih murni dan

bebas dari komponen kimia lain yang tidak dibutuhkan

Fatty Streak : Garis lemak yang merupakan lesi awal dari Aterosklerosis

Fibrosis : Pembentukan struktur seperti skar yang halus yang

menyebabkan jaringan mengeras dan mengurangi aliran

cairan melalui jaringan-jaringan

GPx : Glutathione Peroxidase

HDL : High Density Lipoprotein, yaitu lipoprotein yang

mengandung kolesterol sekitar 20-30%

HMG-CoA reductase : Hydroxymethylglutaryl-CoenzymeA reductase

ix

IDL : Intermediate Density Lipoprotein

In vitro : Percobaan dalam biakan dengan medium buatan, tidak

dalam sel atau jaringan hidup

In vivo : Eksperimen di dalam tubuh organisme

Isolat : Hasil dari proses isolasi

IU : International Unit, yaitu satuan khusus untuk vitamin

LCAT : Lecithin Cholesterol Acyltransferase

LDL : Low Density Lipoprotein, yaitu lipoprotein yang

mengandung kolesterol paling banyak yaitu 60-70% dan

10% trigliserida

MDA : Malondialdehid, produk akhir dari peroksidasi lipid yang

bersifat radikal dan juga merusak makromolekul lain

disekitarnya

p.o : Per oral, yaitu diberikan secara oral

Proliferasi : Pertumbuhan pesat menghasilkan jaringan baru

PUFAs : Polyunsaturated Faty Acid’s

RSD : Standar Deviasi Relatif

Sel busa : Bentukan makrofag berisi LDL yang teroksidasi

SOD : Superoksida Dismutase

Stroke : Penyakit yang terjadi akibat penyumbatan pada pembuluh

darah otak atau pecahnya pembuluh darah di otak

Ulserasi : Plak lemak yang mengandung kapur

UV : Ultra Violet

x

VCAM-1 : Vascular Cell Adhesion Molecules-1

VLDL : Very Low Density Lipoprotein

WHO : World Health Organization

xi

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 4.1. Hasil maserasi serbuk kering herba sambiloto ................................... 23

Tabel 4.2. Hasil pengamatan KLT-Spektrodensitometri seri standar ................. 27

Tabel 4.3. Hasil Perhitungan Kadar Andrografolid dalam Isolat ....................... 28

xii

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 2.1. Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees ................................. 5

Gambar 2.2. Struktur Kimia Andrografolid .................................................... 8

Gambar 2.3. Spektrum KLT-Spektrofotodensitometri dari kristal

andrografolid pada panjang gelombang 235 ............................... 9

Gambar 3.1. Persamaan untuk penetapan kadar kolesterol total ..................... 20

Gambar 3.2. Skema Rancangan Penelitian ...................................................... 21

Gambar 4.1. Spektrum standar andrografolid dan isolat pada panjang gelombang

200 nm sampai 400 nm ............................................................... 26

Gambar 4.2. Kurva kalibrasi seri standar andrografolid .................................. 27

xiii

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1. Hasil Evaluasi Kelayakan Etik Hewan Uji ..................................... 43

Lampiran 2. Hasil Determinasi Tanaman Sambiloto (Andrographis paniculata

(Burm. f.) Nees) ............................................................................. 44

Lampiran 3. Data Hasil Pembuatan Ekstrak Terpurifikasi Herba Sambiloto ..... 45

Lampiran 4. Perhitungan Rendemen Ekstrak dan Isolat ..................................... 46

Lampiran 5. Hasil Perhitungan Kadar Andrografolid dalam Isolat .................... 48

Lampiran 6. Output Kadar Kolesterol Total untuk Uji Shapiro-Wilk dan Uji

Levene untuk Uji Distribusi Normal dan Homogenitas ................. 51

xiv

ABSTRAK

Andrografolid merupakan komponen bioaktif utama tanaman sambiloto

(Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees) dan mampu mencegah aterosklerosis

melalui mekanismenya menghambat terbentuknya LDL teroksidasi. Vitamin E

merupakan antioksidan yang mencegah aterosklerosis dengan menghambat

oksidasi LDL pada lesi aterosklerosis. Dengan mempertimbangkan aktivitas yang

saling mendukung dari andrografolid dan vitamin E, maka kemungkinan

pemberian terapi kombinasi semakin baik apabila kedua senyawa bekerja secara

sinergis. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui efektivitas kombinasi isolat

andrografolid dan vitamin E dalam penurunan kadar kolesterol total pada tikus

putih (Rattus norvegicus, L.) jantan galur wistar yang diinduksi diet aterogenik.

Penelitian ini meliputi beberapa tahapan yaitu: ekstraksi, isolasi

andrografolid, uji kemurnian dan penetapan kadar andrografolid, serta pengujian

efektivitas kombinasi isolat andrografolid dan vitamin E dengan melihat kadar

kolesterol dalam darah tikus. Pengujian dilakukan dengan mengelompokan hewan

uji menjadi 5 kelompok perlakuan antara lain: kontrol normal, kontrol negatif

(CMC Na 0,1%), perlakuan 1 (Vitamin E 10 IU/kg BB), perlakuan 2

(Andrografolid 18 mg/kg BB) dan perlakuan 3 (Kombinasi Andrografolid 9

mg/kg BB dan Vitamin E 5 IU/kg BB). Semua kelompok hewan uji kecuali

kontrol normal diberi perlakuan dan diet aterogenik selama 60 hari. Data yang

diperoleh dianalisis dengan statistik metode ANOVA satu arah dengan taraf

kepercayaan 95%.

Pemberian tunggal isolat andrografolid, vitamin E dan kombinasi isolat

andrografolid 9 mg/kg BB dan vitamin E 5 IU/kg BB sama efektif dalam

menurunkan kadar koleseterol total pada tikus yang diinduksi diet aterogenik.

Kata kunci : andrografolid, vitamin E, kadar kolesterol total

xv

ABSTRACT

Andrographolide is a main bioactive component of bitter plant

(Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees) and capable to prevent atherosclerosis

by inhibiting the formation of oxidized LDL. Vitamin E is an antioxidant to

prevent atherosclerosis by inhibiting oxidation of LDL in atherosclerotic lesions.

Taking into account the mutual activity of andrographolide and vitamin E, then

the possibility of combination therapy is getting better if the two compounds work

synergistically. The purpose of this study to determine the effectiveness of the

combination of andrographolide isolates and vitamin E in reducing total

cholesterol in the male rat (Rattus norvegicus, L.) wistar strain induced

atherogenic diet.

This study includes several stages: extraction, isolation andrographolide,

purity test and assay andrographolide, as well as testing the effectiveness of the

combination of andrographolide isolates and vitamin E to prevent atherosclerosis.

Testing is done by grouping the animals into 5 groups : normal control, negative

control (CMC Na 0,1%), treatment 1 (Vitamin E 10 IU/kg), treatment 2

(andrographolide 18 mg/kg) and treatment 3 (combination of andrographolide 9

mg/kg and Vitamin E 5 IU/kg). All groups except normal control was treated by

atherogenic diet for 60 days. The data were analyzed with statistical methods one-

way ANOVA with 95% confidence level.

The results showed isolates andrographolide, vitamin E and combination

of both equal potention in lowering total cholesterol in rats induced atherogenic

diet.

Keywords : andrographolide, vitamin E, levels of total cholesterol