Uji Kuantitatif

8/12/2019 Uji Kuantitatif

1/34

PERHITUNGAN MIKROORGANISME

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Mikroorganisme tumbuh dan berkembang pada berbagai

lingkungan. Banyaknya mikroorganisme dalam suatu habitat biasa kita

katakan sebagai populasi mikroba sedangkan jika populasi ini bertambah

maka dikatakan terjadi pertumbuhan.

Pengukuran secara langsung atau tidak langsung banyak

dilakukan untuk mengukur pertumbuhan selama proses fermentasi. Dalam

perhitungan mikroorganisme secara langsung, jumlah sel mikroorganisme

dapat dihitung jika medium pertumbuhannya tidak mengganggu

pengukuran. Sebagai contoh adalah dalam volumentrik dan gravimetrik,

pengukuran volume dan berat sel. Oleh karena jika substrat tempat

tumbuh banyak mengandung padatan misalnya bahan pangan, maka sel

sel mikroorganisme tidak dapat diukur dengan menggunakan metode

volumentrik dan gravimetrik. Pertumbuhan massa sel secara tidak

langsung sering digunakan dalam mengamati pertumbuhan sel selama

proses fermentasi, dimana komposisi substratnya atau bahan yang

difermentasi dapat diamati dan diukur dengan teliti.

!umlah mikroorganisme yang ada didalam suatu bahan sangat

bervariasi, tergantung dari jenis bahan itu sendiri dan kondisi

lingkungannya, dimana jumlah dari mikroorganisme yang terdapat dalam

suatu senya"a dapat diidentifikasi dan diketahui juimlahnya.

JUMIATI SUKRIANI KURSIA, S.Farm!" #!" "$%


2/34


#ji kuantitatif mikroba ini merupakan salah satu uji mikrobiologis

yang sangat penting untuk menentukan tingkat pencemaran

mikroorganisme. Mengingat arti penting dari uji kuantitatif mikroba ini,

maka sangat penting di dalam praktikum mikrobiologi ini juga diadakan uji

kuantitatif.

Oleh karena itu diperlukan suatu teknik tertentu untuk mengetahui

adanya mikroba dalam suatu bahan makanan dan minuman antara lain

dengan metode MP$, SP%.

B. R&m&'an Ma'ala(

&. Bagaimana cara menentukan jumlah '() *'ngka (empeng )otal+ dari

bakteri dari sampel )imtan, %oca %ola, -reen Sands, dan Biskuat.

. Bagaimana cara menentukan jumlah '() *'ngka (empeng )otal+ dari

kapang dari sampel )imtan, %oca %ola, )ogo, dan Biskuat.

/. Bagaimana menetukan nilai Most Probable $umber *MP$+ dari

sampel )imtan, %oca %ola, )ogo, dan Biskuat.

). Mak'&*

Maksud dari praktikum yaitu untuk mengetahui dan memahami

perhitungan kuantitas mikroorganisme

D. T&+&an

&. #ntuk menentukan '() *angka (empeng )otal+ dari kapang dengan

sampel )imtan, %oca %ola, )ogo, dan Biskuat.



3/34


4/34


BAB II

KAJIAN PUSTAKA

A. Ter0 Um&m

3dentifikasi mikroba adalah salah satu tugas yang la4im dilakukan

pada laboratorium mikrobiologi. Di laboratorium diagnostic penyakit,

isolasi dan pencirian mikroba yang berasal dari penderita penyakit harus

dilaksanakan dengan cepat dan tepat sehingga pengobatan dapat

diberikan sedini mungkin. Pencirian mikroorganisme yang diisolasi dari

makanan dan minuman yang terlibat dalam pencemaran makanan harus

dilakukan secepat mungkin agar "abah keracunan akibat makanan dan

minuman yang tercemar dapat dihentikan *D10*+'e2&tr, 334+.

!umlah mikroorganisme yang ada di dalam suatu bahan sangat

bervariasi, tergantung dari jenis bahan itu sendiri dan kondisi

lingkungannya. !umlah mikroorganisme dapar dihitung dengan beberapa

cara yaitu *D+0*e, #""%+ 5

a. Secara langsung

Pada cara ini dihitung jumlah bakteri dalam satuan isi yang sangat

kecil. #ntuk ini digunakan kaca obyek khusus yang bergaris

*petroff6auser+ berbentuk bujur sangkar. !umlah cairan yang

terdapat antara kaca obyek dan kaca penutup mempunyai volume

tertentu, sehingga satuan ini yang terdapat dalam satu bujur

sangkar juga tertentu.



5/34


#ji mikrobiologis, pendugaan hasil panen sel dalam kaldu, biakan,

atau suspensi berair disebut sebagai perhitungan kekeruhan. 'da pula

perhitungan bakteri dalam susu, air, makanan. )anah, biakan dan

sebagainya.

7umankuman tidak dapat dihitung secara tepat dengan

pemeriksaan mikroskopik kecuali sekurangkurangnya ada &88 juta *&89+

sel untuk tiap &88 ml. karena itu, metode yang digunakan sejumlah

tertentu air, diencerkan terlebih dahulu secara berturutturut. 7emudian

tiap& ml dari tiap larutan tersebut ditanam pada lempeng agar nutrien dan

kolonikoloni yang tumbuh kemudian dihitung.

Pengukuran kuantitatif populasi mikroba sering kali amat

diperlukan di dalam berbagai macam penelaahan mikrobiologis. Pada

hakikatnya terdapat macam pengukuran dasar, yaitu penentuan jumlah

adap.

&. )otal counter, yaitu perhitungan terhadap jumlah dari mikroba baik

bakteri, jamur maupun kelompok lain tanpa harus menentukan

jenisnya.

. Deteksi, yaitu penentuan kehadiran suatu kelompok atau jenis tanpa

harus memperhitungkan jumlah per m( atau gram bahan.

/. :numerase, yaitu menghitung jumlah jenis atau kelompok mikroba per

gram atau per m(.

2. 3dentifikasi, yaitu penentuan kelompok atau jenis mikroba yang berada

dalam bahan, baik secara lengkap atau tidak.



6/34


'nalisis pertumbuhan bakteri dapat dilakukan dengan beberapa

cara yaitu penentuan jumlah sel dari kandungan protein , nitrogen atau

kekeruhan.

&. Penentuan jumlah sel hidup.

Pada metode ini perhitungan sel hidup dilakukan dengan cara

plating atau teknik atau dengan filter membrane. !umlah koloni yang

timbul sebaiknya berkisar antara /8 ; /88 yang dapat diambil untuk

data perhitungan. Satuan yang dipakai untuk perhitungan bakteri hidup

adalah %P# *%oloni


7/34


=. 7ekeruhan.

Dapat diukur diantaranya dengan menggunakan kalorimetri dan

spektrofotometer. Pada alat ini jumlah cahaya yang melalui sampel

dapat diukur. Perbandingan kekuatan cahaya yang dilakukan dari

media biakan tanpa bakteri disebut optical density. 6itungan ca"an

penerapannya yaitu perhitungan bakteri dalam susu dan air, makanan,

tanah biakan dan lainlain.

#ntuk menentukan jumlah bakteri dapat digunakan beberapa cara 5

&. !umlah bakteri secara keseluruhan *)otal cell

count+

Pada cara ini dihitung semua bakteri baik yang hidup maupun

yang mati.

. !umlah bakteri yang hidup *>iable count+

Pada cara ini hanya menggambarkan jumlah sel yang hidup,

sehingga lebih tepat bila dibandingkan teknik pada cara 3.

#ntuk membuat kurva pertumbuhan, sebelumnya diperlukan

perhitungan. %ara perhitungan yang paling umum adalah dengan 5

&. Pengenceran

. Penggunaan ruang hitung

/. Metode turbidometri?nefelometer.

Dengan pengenceran, disiapkan beberapa buah tabung yang berisi

a@uadest steril sebanyak A m(. 7epada masingmasing tabung kemudian

ditambahkan & m( sampel yang mau diperiksa secara bertahap, yaitu 5



8/34


a. & m( sampel ke dalam tabung pertama, hingga konsentrasi larutan di

dalam tabung pertama menjadi &8&.

b. & m( dari tabung pertama ke tabung kedua, hingga konsentrasi larutan

di dalam tabung kedua menjadi &8.

Dan seterusnya sampai mencapai larutan dengan konsentrasi

terendah.

Perhitungan massa sel secara langsung atau tidak langsung,

banyak dilakukan untuk mengukur pertumbuhan selama proses

fermentasi. Dalam perhitungan massa sel secara langsung, jumlah sel

mikroorganisme dapat dihitung jika medium pertumbuhannya tidak

mengganggu pengukuran. Oleh karena jika substrat tempat tumbuh

banyak mengandung padatan, maka selsel mikroorganisme tidak dapat

diukur dengan metode volumetrik, gravimetrik maupun turbidimetrik.

Perhitungan massa sel secara tidak langsung sering digunakan dalam

mengamati pertumbuhan sel selama proses fermentasi, dimana komposisi

substratnya atau bahan yang difermentasi dapat diamati dan diukur

dengan teliti.

Prinsip metode hitungan ca"an adalah sebagai berikut 5 !ika sel

mikroba yang masih hidup ditumbuhkan pada medium agar, maka sel

mikroba tersebut akan berkembang biak dan membentuk koloni yang

dapat dilihat langsung dengan mata tanpa menggunakan mikroskop.

Metode hitungan ca"an merupakan cara yang paling efektif untuk

menghitung jumlah mikroba karena alasanalasan sebagai berikut 5



9/34


&. 6anya sel yang masih hidup yang dihitung.

. Beberapa jenis mikroba dapat dihitung sekaligus.

/. Dapat digunakan untuk isolasi dan identifikasi mikroba karena koloni

yang terbentuk mungkin berasal dari satu sel mikroba dengan

penampakan pertumbuhan spesifik.

Bila kita harus memeriksa konsentrasi sel sejumlah besar biakan,

maka metode hitungan ca"an bukanlah pilihan yang baik karena tidak

hanya memakan "aktu tetapi juga memerlukan media dan pecah belah

dalam jumlah besar. #ntuk kasus demikian tersedia metode yang lebih

cepat dan praktis, yaitu pengukuran kekeruhan biakan dengan

fotokolorimetri. $amun agar data yang diperoleh dari pengukuran ini dapat

dinyatakan sebagai konsentrasi organisme, diperlukan suatu kurva

standar yang menyatakan korelasi antara kekeruhan biakan dengan

jumlah organisme per m( biakan. 7urva semacam ini dapat diperoleh

dengan cara menggunakan metode hitungan ca"an utnuk menentukan

hitungan organisme di dalam biakan yang kekeruhannya diketahui. Sekali

kurva ini diperoleh, maka sejumlah besar biakan organisme sejenis dapat

dengan cepat diukur kekeruahnnya dan konsentrasinya segera diketahui

dengan cara membaca kurva tersebut.

B. Ura0an Sam2el

&. )imtam

$etto 5 288 gram



10/34


7omposisi 5 Susu sapi, susu skim bubuk, lemak susu &/,

kalsium 08, protein &/, karbohidrat /, >itamin '

8, >itamin D/ =8, vitamin : 2, vitamin 7& C,

vitamin % 8, vitamin B& 8, >itamin B &=,

vitamin BC 2, vitamin B& 8, niasin , biotin

/8, asam pantotenat &=, kolin C mg, inosol 9

mg, natrium 2, kalium &8, kalium &8, kalsium

08, fosfor /8, magnesium &8, besi , 4ink

9, mangan = mcg, klorida &8 mg, 3odium C ,

selenium 9.

Penyimpanan 5 Simpan di tempat sejuk yangn tertutup rapat.

Perhatian 5 )idak cocok untuk bayi

Produksi 5 P).


11/34


7egunaan 5 Sebagai pengencer.

. 'lkohol 08 *2+

$ama resmi 5 'ethanolum

Sinonim 5 'lkohol

Pemerian 5 %airan tak ber"arna, jernih, mudah menguap dan

mudah bergerakG bau khas rasa panas. Mudah

terbakar dengan memberikan nyala biru yang tidak

berasap.

7elarutan 5 Sangat mudah larut dalam air, kloroform P dan

dalam eter P.

Penyimpanan 5 Dalam "adah tertutup rapat, terlindung dari cahayaG

di tempat sejuk, jauh dari nyala api.

7egunaan 5 Sebagai antiseptik

/. Pepton *=50&+

Pemerian 5 SerbukG kuning kemerahan sampai coklatG bau khas

tidak busuk.

7elarutan 5 (arut dalam airG memberikan larutan ber"arna coklat

kekuningan yang bereaksi agak asamG praktis tidak

larut dalam etanol *A=+ P dan dalam eter P.

7egunaan 5 Sebagai komposisi medium.

2. Dekstrosa *C5/88+

$ama resmi 5 De1trosum

$ama lain 5 Dekstrosa, -lukosa



12/34


FM?BM 5 %C6&OC? &98,&C

FB 5 %6O6

O6

Pemerian 5 6ablur tidak ber"arna, serbuk hablur atau serbuk

granul putihG tidak berbauG rasa manis.

7elarutan 5 Mudah larut dalam airG sangat mudah larut dalam air

mendidihG larut dalam etanol mendidihG sukar larut

dalam etanol.

Penyimpanan 5 Dalam "adah tertutup baik.


=. 'gar *=502+

$ama resmi 5 'gar

$ama lain 5 'garagar

Pemerian 5 Berkas potongan memanjang, tipis seperti selaput

dan berlekatan, atau berbentuk keeping, serpih atau

butiranG jingga lemah kekuningan, abuabu

kekuningan sampai kuning pucat atau tidak

ber"arnaG tidak berbau atau berbau lemahG rasa

berlendirG jika lembab liatG jika kering rapuh.

7elarutan 5 Praktis tidak larut dalam airG larut dalam air mendidih.


O

OH

OH

OH


13/34




C. :kstrak daging sapi *C5&&=+

7aldu daging sapi konsentrat diperoleh dengan mengekstraksi

daging sapi segar tanpa lemak, dengan cara merebus dalam air dan

menguapkan kaldu pada suhu rendah dalam hampa udara sampai

terbentuk residu kental berbentuk pasta.

Pemerian 5 Massa berbentuk pasta, ber"arna coklat kekuningan

sampai coklat tua, bau an rasa seperti daging, sedikit

asam.

Penyimpanan 5 Hadah tidak tembus cahaya, tertutup rapat.

0. (aktosa *=5//9+

$ama resmi 5 (actosum

$ama lain 5 (aktosa, Saccharum (actis

FM?BM 5 %&6O&&? /C,/8

FB 5 %6O6 %6O6

6O

O6 O6

Pemerian 5 6ablur tidak ber"arna, serbuk hablur atau serbuk

granul putihG tidak berbauG rasa manis.


O

O

H

O

H


14/34


7elarutan 5 Mudah larut dalam airG sangat mudah larut dalam air

mendidihG larut dalam etanol mendidihG sukar larut

dalam etanol.


7egunaan 5 Sebagaia komposisi medium.

9. Sukrosa *C50C+

$ama resmi 5 Sucrosum

$ama lain 5 Sakarosa

FM?BM 5 %&6O&&? /2,/8

FB5 %6O6

6O O %6O6

O6

Pemerian 5 6ablur putih atau tidak ber"arnaG massa hablur

atau berbentuk kubus, atau serbuk hablur

putihG tidak berbau, rasa manis, stabil di udara.

(arutannya netral terhadap lakmus.

7elarutan 5 Sangat mudah larut dalam airG lebih mudah

larut dalam air mendidihG sukar larut dalam

etanolG tidak larut dalam kloroform dan dalam

eter.




O

OH

OH

HOCH2O

HO


15/34


BAB III

KAJIAN PRAKTIKUM

A. Alat 5ang D0g&nakan

&. 'utoklaf

. Botol steril

/. %a"an petri steril

2. 6and spray



16/34


=. 3nkubator

C. Oven

0. Fak tabung

9. spoit

A. )abung durham

&8.)abung reaksi

B. Ba(an 5ang D0g&nakan

&. 'ir steril

. 'lkohol 08

/. Biskuat

2. %oca cola

=. 7apas penutup

C. 7ertas label

0. Medium $' *$utrien 'gar+

9. Medium PD' *Potato De1trose 'gar+

A. Medium (B *(aktosa Broth+

&8.)imtan

&&.)ogo

). )ara Ker+a

&. Pengenceran Sampel

a. Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan.



17/34


b. Ditimbang & gram )imtan kemudian dimasukkan ke dalam botol

pengencer yang berisi air steril A ml dan dihomogenkan

*pengenceran &8&+.

c. Dipipet & ml dari larutan di atas *pengenceran &8&+ kemudian

dimasukkan dalam botol pengencer yang berisi A ml air steril

*pengenceran &8+.

d. Pada pengenceran &8dipipet & ml lalu dimasukkan dalam botol

pengencer yang berisi A ml air steril *pengenceran &8/

+.

e. Pada pengenceran &8/dipipet & ml lalu dimasukkan dalam botol

pengencer yang berisi A ml air steril *pengenceran &82+.

f. Dari ketiga pengenceran *&8, &8/, &82+ akan diberi perlakuan

untuk metode '() Bakteri, '() 7apang, sedangkan

pengenceran &8& untuk metode #ji MP$.

. Pengujian '() Bakteri

a. Disiapkan alat dan bahan.

b. Disiapkan / ca"an petri yang steril dan diberi etiket masing

masing label &8, &8/, dan &82.

c. Masingmasing ca"an petri diisi & ml sampel berdasarkan

pengencerannya dengan menggunakan spoit dan dimasukkan ke

dalam ca"an petri secara aseptis .

d. Dituang medium $' pada masingmasing ca"an petri secara

aseptis dan kemudian dihomogenkan. Dibiarkan memadat.

e. Diinkubasi di inkubator selama & 1 2 jam pada suhu /0o %.

f. Diamati dan dihitung serta dilaporkan nilai SP% nya.

/. Pengujian '() 7apang

a. Disiapkan alat dan bahan.



18/34


b. Disiapkan / ca"an petri yang steril dan diberi etiket masing

masing label &8

, &8/

, dan &82

.

c. Masingmasing ca"an petri diisi & ml sampel berdasarkan

pengencerannya dengan menggunakan spoit dan dimasukkan ke

dalam ca"an petri secara aseptis .

d. Dituang medium PD' pada masingmasing ca"an petri secara

aseptis dan kemudian dihomogenkan. Dibiarkan memadat.

e. Diinkubasi di inkubator selama / 1 2 jam.

f. Diamati dan dihitung serta dilaporkan nilai SP% nya.

2. #ji MP$

a. Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan.

b. Diambil & ml dari masingmasing pengenceran &8, &8/, &82dan

dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi medium (B dan

tabung Durham.

c. Dilakukan masingmasing / tabung reaksi untuk pengenceran

yang sama.

d. Diinkubasi dalam inkubator & 1 2 jam pada suhu /0o%.

e. Diamati perubahan "arna dari "arna biru menjadi kuning dan

terbentuknya gas pada tabung Durham serta dihitung nilai MP$

nya.



19/34


BAB I6

HASIL PENGAMATAN

A. Gam/ar Pengamatan

&. Metode '() Bakteri


('BOF')OF3#M M37FOB3O(O-3


20/34


. Metode '() 7apang

/. Metode MP$ %oliform


7eterangan 5

0. Pengenceran &8

9. Pengenceran &8/

A. Pengenceran &82

&8.%a"an petri

&&.Pertumbuhan koloni

&.Medium PD'

('BOF')OF3#M M37FOB3O(O-3


21/34


B. Data 2engamatan

&. Metode '() 7apang

$O. S'MP:(Pengenceran

$ilai SP%&8& &8 &8/ &82

&. )imtan /= C &= I /,=1&8klo?g



22/34


. %oca cola 92 &&C &=C I 9,21&8klo?g

/. Biskuat 8= &&0 C0 I &,&01&82klo?g

2. )ogo && / / I &,&1&8klo?g

. Metode '() Bakteri


$ilai SP%&8& &8 &8/ &82

&. )imtan I 0 8 8 01&8klo?g

. %oca cola I &0 &C8 90 &,C1&8=klo?g

/. Biskuat I &/ &98 9 ,&/1&82klo?g

2. )ogo I &&0 / =9 /,1&82klo?g

/. Metode MP$ coliform


$ilai tabel&8& &8 &8/ &82

&. )imtan I 8 8 8 8,8/

. %oca cola I 8 8 8,8A&

/. Biskuat I 8 8 8,8A&

2. )ogo I 8 8 8 8,8/

). Per(0t&ngan



23/34


&. '() Bakteri

!umlah koloni bakteri /8 /88

Fumus perhitungan '() bakteri

SP% J > 1 jumlah koloni 1 &?*Pengencerannya+

a. )imtam

&8 &8/ &82

0 8 8

7arena ada dua data yang memenuhi syarat, maka dilaporkan

SP% tertinggi tertinggi?SP% terendah

SP% tertinggi$P J

SP% terendah

$P J & 1 0 1 &?&8

J 01&8kol?g

karena hasil yang diperoleh hanya pada pengenceran &8, maka

dilaporkan yaitu 01&8kol?g.

b. %oca cola

&8 &8/ &82

7arena ada dua data yang memenuhi syarat, maka

dilaporkan SP% tertinggi tertinggi?SP% terendah

SP% tertinggi$P J

SP% terendah



24/34


&8A 1 &82$P J

/& 1 &8/

J /=,&C K

karena hasil yang diperoleh lebih dari M7, maka

dilaporkan pengenceran terendah

&SP% J /& 1

&8/

J /,& 1 &82 koloni?mlc. Susu bubuk

&8 &8/ &82

&= &/ &8

7arena jumlah koloni kurang dari /8, maka dilaporkan

pengenceran terendah

&SP% J &= 1

&8

J &,= 1 &8/koloni?ml

&J * /8 1 +

&8

J * /8 1 &8/+



25/34


D. Pem/a(a'an

Mikroorganisme adalah makhluk hidup yang terbagi / yaitu yang

bersifat eukariotik, prokariotik dan virus. Baik ketiga jenis mikroorganisme

ini, dalam kehidupannya memerlukan makanan untuk pertumbuhannya.

Dalam percobaan mikrobiologi, tidak dapat diamati suatu mikroorganisme

yang diinginkan jika tidak ada medium, yang mana merupakan tempat

tumbuh mikroorganisme tersebut. Dalam medium harus terpenuhi segala

kebutuhan mikroorganisme untuk melangsungkan kehidupannya, seperti

senya"asenya"a organic *protein, karbohidrat, lemak, mineral dan

vitamin+

Mikroorganisme tumbuh dan berkembang pada berbagai

lingkungan. Banyaknya mikroorganisme dalam suatu habitat biasa kita

katakan sebagai populasi mikroba sedangkan jika populasi ini bertambah

maka dikatakan terjadi pertumbuhan.

'gar semua mikroorganisme dapat tumbuh baik dalam suatu

media, maka medium pertumbuhan memenuhi syaratsyarat antara lain 5

&. Mengandung semua 4at4at makanan yang mudah digunakan oleh

mikroorganisme.



26/34


. Mempunyai tekanan osmosa, tegangan permukaan reaksi *p6+ yang

sesuai.

/. )idak mengandung 4at4at penghambat *inhibitor+.

2. 6arus steril dan mencegah adanya kontaminasi.

Dunia mikroorganisme terdiri dari lima kelompok organisme 5

bakteri, protozoa, virus, serta algae dan cendawan mikroskopis. Dalam

bidang mikrobiologi kita mempelajari banyak segi mengenai jasadjasad

renik ini *juga dinamakan mikrobe atau protista+G dimana ciricirinya,

kekerabatan antara sesamanya seperti juga dengan kelompok organisme

lainnya, pengendaliannya, dan peranannya dalam kesehatan serta

kesejahteraan kita

Mikroorganisme terbagi atas kelompok yaitu mikroorganisme

patogen dan nonpatogen. Mikroorganisme ini hidup hampir diseluruh

tempat baik itu pada tempat panas atau dingin, dalam ruangan, terutama

pada permukaan tubuh manusia. #ntuk itulah dibutuhkan antimikroba

untuk membunuh mikroorganisme tersebut terutama mikroorganisme

yang patogen.

#ji mikrobiologis adalah salah satu pengujian yang menggunakan

perubahan sifat mikroba terhadap lingkungan sebagai tolak ukurnya.

Pengujian ini dilakukan karena produk umumnya obatobatan dibuat oleh

industri secara besarbesaran. Sediaan ini memakan "aktu yang cukup

lama baik dalam penyimpanan maupun dalam peredarannya. Sehingga



27/34


dengan demikian akan dapat memberikan timbulnya beberapa mikroba

tertentu di dalamnya.

#ji mikrobiologis terbagi menjadi , yaitu uji kualitatif dan uji

kuantitatif. #ji kualitatif dimaksudkan untuk mengetahui jenis

mikroorganisme yang ada dalam sediaan tersebut. Sedangkan uji

kuantitatif dilakukan untuk mengetahui berapa jumlah mikroorganisme

yang terdapat dalam sediaan tersebut.

Pada penyiapan sampel dilakukan pengenceran, dengan maksud

untuk menginaktifkan penga"et yang ada di dalam sediaan tersebut,

karena dikha"atirkan akan mempengaruhi pengujian, sehingga data yang

didapat tidak akurat.

Pada percobaan uji '() bakteri dan kapang, digunakan metode

tuang dengan menggunakan medium PD' dan $'. Digunakan metode ini

karena sampel yang digunakan merupakan sampel cair *larutan+.

Pemilihan medium PD' dan $' karena dalam sampel belum diketahui

apakah mengandung bakteri atau kapang dimana PD' sangat cocok

untuk pertumbuhan kapang karena mengandung karbohidrat yang baik

untuk pertumbuhannya sedangkan $' mengandung banyak protein yang

dibutuhkan untuk pertumbuhan bakteri.

Pada percobaan ini sampel mulamula diencerkan sebanyak / kali,

pengenceran ini dilakukan agar nantinya setelah diinkubasi jumlah koloni

yang terbentuk dapat dihitung. Setelah diencerkan sampel dimasukkan ke

dalam ca"an petri lalu kemudian medium. Pekerjaan ini sedapat mungkin



28/34


dilakukan secara aseptis untuk menghindari kontaminasi dengan udara

luar. Setelah itu ca"an petri dibungkus kertas dan kemudian

diinkubasikan. #ntuk ca"an petri yang menggunakan medium $'

diinkubasikan pada incubator aerob dengan suhu /0L% selama & 1 2 jam

sedangkan untuk ca"an petri yang menggunakan medium PD' diletakkan

pada suhu kamar selama / 1 2 jam.

Metode ini digunakan untuk menghitung jumlah koloni bakteri dan

kapang pada ca"an secara langsung tanpa alat pembesar. Prinsip

metode hitungan ca"an adalah jika sel mikroba yang masih hidup

ditumbuhkan pada medium agar, maka sel mikroba tersebut akan

berkembang biak dan membentuk koloni yang dapat dilihat langsung

dengan mata tanpa menggunakan mikroskop. Metode hitungan ca"an

merupakan cara yang paling efektif untuk menghitung jumlah mikroba

karena alasanalasan sebagai berikut 5

&. 6anya sel yang masih hidup yang dihitung.

. Beberapa jenis mikroba dapat dihitung sekaligus.

/. Dapat digunakan untuk isolasi dan identifikasi mikroba karena koloni

yang terbentuk mungkin berasal dari satu sel mikroba dengan

penampakan pertumbuhan spesifik.

Di samping itu juga terdapat kelemahankelemahan antara lain 5

&. 6asil perhitungan tidak menunjukkan jumlah sel mikroba yang

sebenarnya karena beberapa sel yang berdekatan mungkin

membentuk satu koloni.



29/34


. Medium dan kondisi yang berbeda mungkin menghasilkan nilai yang

berbeda.

/. Mikroba yang ditumbuhkan harus dapat tumbuh pada medium padat

dan membentuk koloni yang kompak dan jelas, tidak menyebar.

2. Memerlukan persiapan dan "aktu inkubasi beberapa hari sehingga

pertumbuhan koloni dapat dihitung.

Pada metode ini, terlebih dahulu sampel diencerkan pada

konsentrasi yaitu &8&; &82. Pengenceran dilakukan dengan melarutkan

sampel yang telah digerus ke dalam A m( air suling, lalu dari tabung itu

diambil & m( kemudian dimasukkan ke dalam tabung lain yang berisi A m(

air suling. Perlakuan ini dilakukan sampai memperoleh konsentrasi &8 2.

#ntuk '() kapang digunakan konsentrasi &8 &, &8, dan &8/, sedangkan

untuk bakteri &8, &8/, dan &82. Bakteri digunakan konsentrasi mulai &8

sebab pada konsentrasi &8& konsentrasinya terlalu pekat sehingga

nantinya sulit untuk diamati. Setelah itu, & m( larutan sampel pada tiap

tiap konsentrasi yang digunakan dimasukkan ke dalam ca"an Petri, lalu

ke dalam ca"an dimasukkan medium PD' untuk kapang dan medium $'

untuk bakteri. Setelah itu kapang diinkubasikan pada suhu kamar selama

/12 jam dan bakteri diinkubasikan pada incubator selama &12 jam.

Pada saat diinkubasi ca"an Petri dibalik agar uap air yang terbentuk

selama proses inkubasi tidak merusak medium, sehingga secara tidak

langsung akan menggangu atau menghambat pertumbuhan bakteri.



30/34


Setelah ca"an petri diinkubasikan, kemudian dihitung jumlah koloni

yang terbentuk. %ara menghitung koloni adalah sebagai berikut 5

&. ca"an yang dipilih atau dihitung adalah yang mengandung jumlah

koloni antata /8 ; /88.

. Beberapa koloni yang bergabung menjadi satu merupakan suatu

kumpulan koloni yang besar dimana jumlah koloninya diragukan, dapat

dihitung sebagai satu koloni.

/. Suatu deretan *rantai+ koloni yang terlihat sebagai suatu garis tebal

dihtung sebagai satu koloni.

Setelah melakukan perhitungan diketahui bah"a jumlah koloni pada

uji SP%?'() tidak ada yang masuk range. !umlah koloni bakteri yaitu /8

/88 koloni bakteri maka diambil pada konsentrasi tertinggi?pengenceran

terendah..

Metode MP$ dapat digunakan untuk menghitung jumlah

mikroorganisme tertentu yang terdapat di antara campuran

mikroorganisme lainnya. Pada metode ini digunakan medium yang

berbentuk cair, dalam hal ini medium yang digunakan yaitu (B *(aktosa

Broth+, yang diisi dengan tabung durham. 'danya bakteri yang dapat

memfermentasi laktosa ditunjukkan dengan terbentuknya gas di dalam

tabung durham. Pada percobaan ini digunakan / seri tabung. %ara ini

digunakan untuk menentukan MP$ coliform terhadap air atau minuman,

karena bakteri coliform termasuk bakteri yang dapat memfermentasi

laktosa. Pada metode ini juga dilakukan pengenceran dimana setiap



31/34


pengenceran digunakan / tabung reaksi. Setelah sampel dimasukkan

dalam tabung reaksi yang telah berisi medium (B, tabung reaksi

kemudian dibungkus kertas dan diinkubasikan dalam incubator aerob

dengan suhu /0L% selama & 1 2 jam. Setelah diinkubasikan jumlah koloni

dihitung dengan berdasarkan atas banyaknya tabung yang positif yaitu

yang ditumbuhi oleh mikroorganisme *keru+ atau terjadi perubahan "arna

dari medium dan terbentuk gas.

%ara perhitungannya didasarkan pada terjadinya perubahan "arna

larutan dari hijau menjadi kuning dan terbentuknya gas. !ika pada tabung

menghasilkan perubahan tersebut maka tabung itu memberikan nilai

positif. 'danya perubahan "arna disebabkan karena adanya proses

fermentasi dari laktosa oleh bakteri sedangkan terbentuknya gelembung

gas akibat dari hasil fermentasi yang terbentuk. -elembung gas terlihat di

dalam tabung durham. )abung durham yang terdapat di dalam tabung

reaksi diletakkan terbalik, dengan maksud agar bila terbentuk gelembung

gas maka gelembung itu dapat terlihat karena gelembung itu terkumpul di

dalam tabung yang terbalik. !ika tabungnya tidak terbalik maka gas tidak

dapat terlihat sebab gas itu akan terlepas ke larutan.

Dari hasil pengamatan diperoleh jumlah koloni bakteri pada sampel

)imtan yaitu 01&8 kol?gr , %oca %ola yaitu &,C1&8= kol?ml, -reen

Sandyaitu ,&/=1&82kol?ml, dan Biskuat yaitu /,1&82kol?gr.



32/34


Sedangkan pada '() kapang diperoleh jumlah koloni kapang

pada sampel )imtan yaitu /,=1&8kol?gr , %oca %ola yaitu 9,21&8

kol?ml, )ogoyaitu &,&01&82kol?gr, dan Biskuat yaitu &,&1&8kol?gr.

Pada percobaan uji MP$ diperoleh jumlah koloni pada sampel

)imtan yaitu /8 kol?gr , %oca %ola yaitu A& kol?ml, )ogoyaitu A&

kol?gr, dan Biskuat yaitu /8 kol?gr.

BAB 6

PENUTUP

A. KESIMPULAN

&. !umlah koloni bakteri pada uji '() bakteri pada sampel

)imtan yaitu 01&8kol?gr , %oca %ola yaitu &,C1&8=kol?ml, -reen

Sandyaitu ,&/=1&82kol?ml, dan Biskuat yaitu /,1&82kol?gr.

. Pada '() kapang diperoleh jumlah koloni kapang

pada sampel )imtan yaitu /,=1&8kol?gr, %oca %ola yaitu 9,21&8

kol?ml, )ogo yaitu &,&01&82 kol?gr, dan Biskuat yaitu &,&1&8

kol?gr.

/. Pada percobaan uji MP$ diperoleh jumlah koloni

pada sampel )imtan yaitu /8kol?gr , %oca %ola yaitu A&kol?ml,

)ogoyaitu A& kol?gr, dan Biskuat yaitu /8 kol?gr.

B. SARAN



33/34


DAFTAR PUSTAKA

Dirjen POM, &A0A,Farmakope Indonesia, :disi 333, Depkes F35 !akarta

Dirjen POM, &AA=,Farmakope Indonesia, :disi 3>, Depkes F35 !akarta

Djide, $atsir, 88=, Mikrobiologi Farmasi Dasar, !urusan


34/34


Pelc4ar, M.!., %han, :.%.S., *&A99+, DasarDasar Mikrobiologi N, #3

Press, !akarta, 90/

Suria"iria, #nus, &A9C, Pengantar Mikrobiologi Umum, 'ngkasa5

Bandung,A&

Uji Kuantitatif

Documents

Transcript of Uji Kuantitatif