UJI EFEK PENGHAMBATAN ENZIM XANTIN OKSIDASE …repository.usd.ac.id/30221/2/148114131_full.pdf ·...

UJI EFEK PENGHAMBATAN ENZIM XANTIN OKSIDASE

KOMBINASI INFUSA DAUN SALAM (Eugenia polyantha Wight) DAN

SARANG SEMUT (Myrmecodia tuberosa (non Jack) BI.)

SKRIPSI

Diajukan Untuk Memenuhi Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm)

Program Studi Farmasi

Oleh :

Martin Vincentsius

NIM : 148114131

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2018

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

ii

UJI EFEK PENGHAMBATAN ENZIM XANTIN OKSIDASE

KOMBINASI INFUSA DAUN SALAM (Eugenia polyantha Wight) DAN

SARANG SEMUT (Myrmecodia tuberosa (non Jack) BI.)

HALAMAN SAMPUL

SKRIPSI

Diajukan Untuk Memenuhi Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm)

Program Studi Farmasi

Oleh :

Martin Vincentsius

NIM : 148114131

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2018


iii


iv


v

HALAMAN PESEMBAHAN

“If you do not overcome your

tendency to give up easily, your

life leads to nothing.”

— Mas Oyama

Skripsi ini aku persembahkan untuk ….

Tuhan Yesus Kristus yang selalu membimbing dan memberi kesehatan serta

kekuatan untuk mengerjakan skripsi ini..

Keluargaku tersayang..

Kedua orang tuaku tercinta yang selalu mendukung dan memberi semangat serta

doa yang terbaik untuk aku,

Semua usaha yang telah kalian berikan tidak akan pernah aku lupakan..

Kakak adik yang selalu membantu dan menemani disaat jenuh..

Terima kasih untuk sahabat dan teman-teman yang telah memberikan dukungan

untuk penyusunan skripsi ini…

Almamaterku tercinta Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.


vi


vii


viii

PRAKATA

Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa, karena atas

berkat dan cinta anugerah-Nya, penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul

“Uji Efek Penghambatan Enzim Xantin Oksidase Kombinasi Infusa Daun

Salam (Eugenia polyantha Wight) dan Sarang Semut (Myrmecodia tuberosa

(non Jack) BI.)” sebagai syarat untuk memperoleh gelar sarjana Farmasi

(S.Farm) di Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Penelitian ini merupakan

bagian dari penelitian Dr. Erna Tri Wulandari, M.Si., Apt. dengan nomor SK

025/LPPM/USD/IV/2017 dengan judul proposal “Efek Penghambatan Enzim

Xantin Oksidase Ekstrak Daun Sidaguri (Sida rhombifolia L) dan Daun

Salam (Eugenia polyantha Wight)”

Penulis menyadari bahwa keberhasilan dalam penyusunan skrispi ini tidak

lepas dari dukungan dan bantuan berbagai pihak, baik langsung ataupun tidak

langsung. Oleh karena itu, penulis ingin menyampaikan ungkapan terimakasih

kepada:

1. Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

2. Ketua Program Studi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.

3. Ibu Dr. Erna Tri Wulandari, M.Si., Apt. selaku dosen pembimbing skripsi

yang selalu membimbing dengan sabar dan sudah meluangkan waktu serta

tenaga dalam pelaksanaan penelitian dan penyusunan skripsi ini.

4. Ibu Dr. Christine Patramurti, M.Si., Apt. dan Ibu Dr. Yustina Sri Hartini,

M.Si., Apt. selaku dosen penguji yang telah memberikan masukan dan

saran yang sangat membangun dalam penulisan skripsi ini.

5. Bapak Maywan Hariono, Ph.D., Apt. selaku dosen yang telah meluangkan

waktu untuk memberikan penjelasan dari pertanyaan yang muncul di benak

dan kesulitan yang dihadapi saat penelitian dan penyusunan skripsi ini dari

awal hingga akhir.

6. Ibu Dr. Sri Hartati Yuliani, Apt. selaku Dosen Pembimbing Akademik

yang telah memberikan bimbingan dari awal proses perkuliahan hingga

akhir.


ix

7. Ibu Dr. Dewi Setyaningsih, M.Sc., Apt. selaku Kepala Penanggung Jawab

Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah memberikan ijin dalam

penggunaan fasilitas laboratorium untuk kepentingan penelitian skripsi.

8. Bapak Wagiran selaku bapak laboran yang senantiasa sabar dan baik dalam

membantu berjalannya penelitian ini sehingga berjalan dengan baik dari

awal hingga akhir.

9. Keluargaku, Papa, Mama, Kakak dan Adik yang selalu memberikan

semangat, dukungan dan kasih sayang selama penyusunan skripsi ini.

10. Teman-teman Kelas FSM C 2014 dan Angkatan 2014 Farmasi.

11. Kelompok penelitian payung ―Talum Grup‖ yang beranggotakan Chris,

Dany, Wisnu, Kevin, Sheela, Agnes dan Lala yang menjadi kawan tempur

skripsi bersama.

12. ―The Three Muscleteen‖ yang beranggotakan Theory, Caum, Hehoooh

yang selalu memberi semangat, teman bermain dan jalan-jalan disaat jenuh

skripsi.

13. “The Ethercoustic Group” yang beranggotakan Lintang, Venty, Chris,

Garry yang selalu memberi semangat dan dukungan disaat jenuh skripsi

dan juga sebagai teman buat main musik bareng.

14. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu yang telah

mendukung dalam penyelesaian penyusunan naskah ini.

Penulis menyadari bahwa naskah penelitan ini masih jauh dalam

kesempurnaan dan masih memiliki banyak kekurangan. Penulis sangat

mengharapkan kritik dan saran yang dapat membangun naskah penelitian agar

dapat bermanfaat dalam pengembangan ilmu pengetahuan.

Yogyakarta, 26 Februari 2018

Penulis


x

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL .............................................................................................. ii

HALAMAN SAMPUL……………………………………………………………ii

PERSETUJUAN PEMBIMBING...…………………………………………...…iii

PENGESAHAN ......................................................................................................iv

HALAMAN PESEMBAHAN ................................................................................iv

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .................................................................vi

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI ............................... vii

PRAKATA........................................................................................................... viii

DAFTAR ISI...........................................................................................................vi

DAFTAR TABEL................................................................................................. xii

DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... xiii

DAFTAR LAMPIRAN.........................................................................................xiv

ABSTRAK .............................................................................................................xv

ABSTRACT ............................................................................................................xvi

PENDAHULUAN ...................................................................................................1

METODE PENELITIAN.........................................................................................2

Alat dan Bahan .............................................................................................2

Determinasi Tanaman ..................................................................................3

Pengumpulan Bahan.....................................................................................3

Pembuatan Infusa .........................................................................................3

Pembuatan Kombinasi Infusa.......................................................................3

Uji Efek Penghambatan Enzim Xantin Oksidase.........................................4

Pembuatan Dapar Fosfat pH 7,5 0,05 M ......................................................4

Pembuatan Larutan Enzim Xantin Oksidase................................................4

Pembuatan Larutan Substrat Xantin.............................................................4

Pembuatan Larutan Standar Allopurinol......................................................4

Penentuan Panjang Gelombang Maksimum ................................................5

Pengujian Sampel dan Allopurinol ..............................................................5


xi

Pengujian Kontrol Sampel dan Kontrol Allopurinol....................................5

Pengujian Blanko .........................................................................................6

Pengujian Kontrol Blanko ............................................................................6

Perhitungan Penghambatan Enzim Xantin Oksidase (IC50).........................6

Uji Kandungan Flavonoid dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ..........7

Analisis Statistik...........................................................................................7

HASIL DAN PEMBAHASAN................................................................................8

Penyiapan Bahan ..........................................................................................8

Uji Efek Penghambatan Enzim Xantin Oksidase.........................................9

Uji Kandungan Flavonoid Dengan Kromatografi Lapis Tipis ...................11

KESIMPULAN ......................................................................................................13

SARAN ..................................................................................................................13

UCAPAN TERIMAKASIH...................................................................................13

DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................14

LAMPIRAN...........................................................................................................16

BIOGRAFI PENULIS ...........................................................................................37


xii

DAFTAR TABEL

Tabel I. Hasil uji KLT flavonoid .....................................................................12

Tabel II. Data infusa tunggal sarang semut .......................................................22

Tabel III. Data infusa tunggal daun salam..........................................................23

Tabel IV. Data kombinasi infusa daun salam dan sarang semut ........................24

Tabel V. Data allopurinol ..................................................................................25


xiii

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Reaksi enzimatis xantin oksidase .......................................................9

Gambar 2. Nilai IC50 infusa dan standar allupirnol ............................................11

Gambar 3. Tanaman salam (A), tumbuhan sarang semut (B), simplisia daun

salam (C), dan simplisia sarang semut (D) ....................................... 17


xiv

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Data Penimbangan ...........................................................................18

Lampiran 2. Data Perhitungan Pembuatan Larutan Seri Konsentrasi..................19

Lampiran 3. Perhitungan Xantin Oksidase 0,1 unit/mL ......................................20

Lampiran 4. Perhitungan Xantin ..........................................................................21

Lampiran 5. Dat Perhitungan Nilai Rf .................................................................21

Lampiran 6. Data Uji Efek Penghambatan Enzim Xantin Oksidase ...................22

Lampiran 7. Surat Keterangan CV. Merapi Farma Herbal ..................................26

Lampiran 8. Hasil Determinasi Tanaman ............................................................27

Lampiran 9. Sertifikat Analisis Xantin Oksidase.................................................29

Lampiran 10. Sertifikat Analisis Xantin ..............................................................29

Lampiran 11. Sertifikat Analisis Statistika ..........................................................32

Lampiran 12. Uji Statistik ....................................................................................33


xv

ABSTRAK

Hiperurisemia merupakan suatu kondisi yang ditandai dengan peningkatan

kadar asam urat dalam darah dan dapat menyebabkan kerusakan sendi, nyeri, dan

peradangan. Salah satu obat yang digunakan untuk mengatasi hiperurisemia

adalah allopurinol dengan mekanisme menghambat aktivitas xantin oksidase.

Tanaman salam dan tumbuhan sarang semut diketahui mengandung flavonoid dan

terbukti secara empiris untuk mengobati keluhan asam urat. Dengan efek terapi

farmakologi yang sama yaitu sebagai anti asam urat, memiliki kesamaan efek dan

kandungan yang digunakan secara bersama dapat menghasilkan efek yang lebih

baik. Oleh karena itu, perlu dilakukan penelitian untuk menguji kombinasi infusa

daun salam dan sarang semut mampu menghambat aktivitas enzim xantin

oksidase lebih baik dibandingkan infusa tunggalnya dengan adanya efek sinergik.

Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan efek penghambatan enzim xantin

oksidase kombinasi infusa daun salam dan sarang semut dibandingkan dengan

infusa tunggalnya. Penelitian ini bersifat eksperimental. Tahapan penelitian ini

meliputi preparasi sampel, determinasi tanaman, proses ektraksi dengan metode

infundasi, uji efek penghambatan enzim xantin oksidase dengan menentukan nilai

IC50. Sebagai pembanding digunakan allopurinol. Uji kuantitatif flavonoid dengan

KLT dilakukan untuk membuktikan bahwa di tanaman salam dan tumbuhan

sarang semut mengandung flavonoid. Hasil penelitian menunjukkan bahwa infusa

kombinasi daun salam dan sarang semut dengan tunggalnya mampu menghambat

aktivitas enzim xantin oksidase dengan IC50 kombinasi infusa daun salam dan

sarang semut sebesar 5,009 ± 0,064%, infusa daun salam sebesar 6,167 ± 0,020%,

infusa sarang semut sebesar 6,771 ± 0,046%, lebih lemah dibandingkan dengan

allopurinol sebesar 0,170 ± 0,036 µg/mL. Nilai IC50 dari sampel dan pembanding

dianalisis dengan uji Shapiro-Wilk dilanjutkan uji One Way Anova dan post-hoc

Scheffe. Dari uji One Way Anova didapatkan hasil bahwa terdapat perbedaan nilai

IC50 antara sampel dan pembanding yang signifikan [F(3,8)=13785,143; p=0,000]

(p<0,05).

Kata Kunci: asam urat, sarang semut, daun salam, IC50


xvi

ABSTRACT

Hyperuricemia is a condition characterized by elevated uric acid levels in the blood and can cause joint, pain, and inflammation. One of the drugs used to

treat hyperuricemia is allopurinol with a mechanism inhibiting the activity of xanthine oxidase. Bay leaf and ant nest plants are known to contain flavonoids

and are proven empirically to treat gout complaints. With the same pharmacological therapeutic effect as anti uric acid, having the same effects and the content used together can produce a better effect. Therefore, it is necessary to

do research to test the combination of bay leaf infusa and ant nest is able to inhibit xanthine oxidase enzyme activity better than single infusa with the effect of

synergic. This study aims to prove the inhibitory effect of xanthine oxidase enzyme combination of bay leaf and ant nest compared with its sole infusa. This research is experimental. The stages of this study include sample preparation, plant

determination, extraction process with infundation method, test of inhibitory effect of xanthine oxidase enzyme by determining IC50 value. For comparative use

allopurinol. Quantitative test of flavonoids with TLC was done to prove that in the bay leaf plant and ant nest plants contain flavonoids. The result of this research showed that the combination of bay leaf and ant nest with its sole is able to inhibit

xantin oxidase enzyme activity with IC50 combination of bay leaf and ant nest infusa by 5,009 ± 0,064%, bay leaf infusa 6,167 ± 0,020%, ant nest infestation

6,771 ± 0,046%, weaker than allopurinol of 0,170 ± 0,036 µg/mL. IC50 values from samples and comparators were analyzed by Shapiro-Wilk test followed by One Way Anova and post-hoc Scheffe tests. From One Way Anova test, it was

found that there was difference of IC50 value between sample and significant comparator [F(3,8) = 13785,143;p= 0,000] (p <0.05).

Keywords: gout, ant nest, bay leaf, IC50


1

PENDAHULUAN

Hiperurisemia adalah suatu kondisi yang ditandai dengan meningkatnya

kadar asam urat dalam darah. Hiperurisemia yang lama dapat menyebabkan

kerusakan sendi, jaringan lunak dan ginjal. Hiperurisemia disebabkan oleh dua

faktor utama yaitu meningkatnya produksi asam urat dalam tubuh dan

pengeluaran asam urat melalui ginjal kurang (Ningtiyas, 2016).

Cara untuk mengatasi penyakit hiperurisemia adalah dengan menurunkan

produksi asam urat atau meningkatkan ekskresinya melalui urin. Sampai saat ini,

allopurinol adalah satu-satunya obat yang digunakan untuk menurunkan produksi

asam urat dengan mekanisme kerja menginhibisi enzim xantin oksidase, yaitu

enzim yang berperan dalam metabolisme purin menjadi asam urat (Murray et al,

2003). Meskipun penggunaan allopurinol berkhasiat dan efektif, allopurinol dapat

menimbulkan reaksi alergi ringan hingga berat, gangguan saluran cerna serta

bersifat toksik bagi hati dan ginjal (Dipiro et al, 2008). Oleh karena efek samping

yang dimiliki allopurinol, masyarakat mulai menggunakan obat herbal untuk

mengatasi keluhan asam urat. Tumbuhan yang sering digunakan adalah Sarang

semut dan salam yang secara empiris dapat menyembuhkan penyakit asam urat.

Tumbuhan sarang semut merupakan tumbuhan epifit yang menggantung

atau menempel pada tumbuhan lain yang lebih besar, batangnya menggelembung

dan di dalamnya banyak terdapat ruang atau rongga kecil yang dihuni semut

(Mardany et al, 2016). Tumbuhan sarang semut mengandung senyawa-senyawa

kimia dari golongan flavonoid dan tanin yang diketahui mampu menyembuhkan

radang dan nyeri, pegal linu, melancarkan peredaran darah, reumatik,

meningkatkan sistem imun (Ernawati dan Susanti, 2014).

Tanaman salam mudah hidup di wilayah iklim tropis dan subtropis.

Menurut penelitian yang sudah ada, senyawa kimia yang terkandung dalam daun

salam antara lain minyak atsiri, tanin, dan flavonoid yang banyak terdapat dalam

daunnya (Studiawan dan Santosa, 2005). Kandungan dalam daun salam dapat

menurunkan kadar asam urat dengan mekanisme kerjanya yaitu menghambat

kerja enzim xantin oksidase sehingga dapat menghambat pembentukkan asam urat

(Muhtadi et al, 2012).


2

Masyarakat yang mulai menggunakan obat herbal sebagai alternatif untuk

mengatasi keluhan penyakit terutama asam urat, bentuk sediaan infusa merupakan

sediaan yang paling mudah dan sederhana untuk dibuat oleh masyarakat. Dari hal

tersebut, peneliti ingin melakukan penelitian ini karena ingin mengetahui apakah

infusa daun salam dan infusa sarang semut jika dikombinasikan akan memberikan

efek yang lebih baik dikarenakan adanya efek sinergik dibandingkan tunggalnya

untuk menurunkan kadar asam urat.

Penggunaan kombinasi dapat memberikan efek sinergik, antagonis, aditif.

Sinergik dalam hal ini adalah hasil dari kombinasi 2 atau lebih komponen untuk

menghasilkan efek yang lebih besar dibandingkan dengan tunggalnya. Kombinasi

dapat menguntungkan dalam sistem biologi seperti kombinasi terapi. Sedangkan

antagonis adalah hasil dari kombinasi 2 atau lebih yang memperlihatkan efek

lebih kecil dibandingkan dengan tunggalnya (Bulusu et al, 2016).

Dengan efek terapi farmakologi yang sama yaitu sebagai anti asam urat,

sesuai dengan literatur yang menyatakan bahwa situasi dimana tanaman memiliki

kesamaan efek dan kandungan yang digunakan secara bersama untuk

menghasilkan efek yang lebih baik dengan beberapa mekanisme yang mungkin

terjadi yaitu, pertama efek sinergik multi-target pada enzim, substrat, metabolit,

reseptor, dan lain- lain. Kedua, efek farmakokinetik atau fisiokimia. Ketiga,

interaksi antagonis dengan mekanisme resistensi mikroorganisme patogen.

Keempat, eliminasi atau neutralisasi efek samping yang disebabkan oleh salah

satu senyawa dalam campuran (Chun-Tao Che et al, 2013).

METODE PENELITIAN

Alat dan Bahan

Bahan-bahan yang digunakan adalah daun salam dari CV Merapi Farma

dengan spesifikasi daun segar, berwarna hijau, dan tidak berlobang. Tumbuhan

sarang semut yang didapat dari kota Fakfak, Papua Barat, tepatnya di Desa

Mabunibuni pada tanggal 26 Mei 2017 pada pukul 19:00 WIB, aquades bebas

CO2, aquades, K2HPO4 1 M, HCl 1N, NaOH 0,2 N, NaOH 1 N, allopurinol,

substrat xantin (Sigma Aldrich), enzim xantin oksidase (Sigma Aldrich),

sitroborat, quarsetin, asam asetat, n-butanol, HCl pekat, dan pH meter. Alat-alat


3

yang digunakan adalah spektrofotometer UV-Vis merek Shimadzu, timbangan

analitik, panci infus, oven, ayakan nomor mesh 40, seperangkat kromatografi lapis

tipis (KLT), pipet mikro (Effendorf), tabung reaksi (Pyrex), rak tabung reaksi,

pipa kapiler, corong pisah, alat-alat gelas.

Determinasi Tanaman

Determinasi tanaman salam dan tumbuhan sarang semut dilakukan oleh

Laboratorium Sistematika Tumbuhan Fakultas Biologi Universitas Gadjah Mada.

Bahan yang digunakan untuk determinasi adalah tanaman salam dan umbi sarang

semut.

Pengumpulan Bahan

Bahan yang digunakan adalah daun salam yang diambil dari CV Merapi

Farma. Sarang semut dengan spesifikasi umbi masih utuh dan berukuran 40x50

cm. kemudian dilakukan sortasi basah, pencucian dengan air mengalir,

pengeringan, sortasi kering, lalu dibuat serbuk simplisia dan diayak dengan

ayakan nomor mesh 40.

Pembuatan Infusa

Infusa dibuat dengan cara simplisia daun salam atau sarang semut yang

sudah diayak dan ditimbang sebanyak 10 gram dicampur dalam panci dengan

aquades 100 mL. panaskan di atas tangas air selama 15 menit terhitung mulai

suhu mencapai 90o sambil sekali-kali diaduk. Serkai selagi panas melalui kain

flanel, tambahkan air panas secukupnya melalui ampas hingga diperoleh volume

infus yang dikehendaki (FI, 1995). larutan seri infusa dibuat dengan

mengencerkan larutan induk hingga diperoleh larutan infusa dengan konsentras 1;

2,5; 5; 7,5; dan 10%.

Pembuatan Kombinasi Infusa

Kombinasi infusa dibuat dengan cara mencampurkan hasil pembuatan

infusa tunggal daun salam dan sarang semut dengan rasio perbandingan 1:1

(Saputra, 2012).


4

Uji Efek Penghambatan Enzim Xantin Oksidase

Pengujian efek penghambatan enzim xantin oksidase dilakukan pada

infusa sarang semut dan daun salam. Prosedur penelitian merujuk pada Owen et al

dan Umamaheswari et al.

Pembuatan Dapar Fosfat 0,05 M pH 7,5

Kalium dihidrogen phosfat (KH2PO4) sebanyak 6,805 g dilarutkan dalam

600 mL aquades bebas CO2 kemudian ditambahkan dengan larutan NaOH 2 N

sebanyak 18 mL kemudian diencerkan hingga 1000 mL dengan aquades bebas

CO2.

Pembuatan Larutan Enzim Xantin Oksidase

Perhitungan yang diperoleh dari keterangan pada label kemasan xantin

oksidase diperoleh : 0,8 unit/mg protein. Konsentrasi larutan enzim yang dibuat

adalah 0,1 unit/mL. Total mg protein adalah 5,126 unit/6,408 mg protein.

Ditimbang 9,0875 mg enzim xantin oksidase, kemudian dilarutkan dengan dapar

fosfat dan dimasukkan ke dalam labu ukur 10 mL hingga batas tanda.

Pembuatan Larutan Substrat Xantin

Substrat xantin ditimbang 15,21 mg dan ditambahkan dengan beberapa

tetes NaOH 0,2 N hingga larut, setelah itu diencerkan dengan aquades bebas CO2

sampai dengan 100 mL (konsentrasi 1 mM). Larutan substrat xantin dibuat

dengan mengencerkan larutan induk sampai diperoleh larutan substrat xantin

dengan konsentrasi 0,15 mM.

Pembuatan Larutan Standar Allopurinol

Standar Allopurinol ditimbang 10 mg dan ditambahkan NaOH 1 N

beberapa tetes hingga larut lalu diencerkan dengan aquades bebas CO2 di dalam

labu ukur 10 mL hingga batas tanda (konsentrasi 1000 µg/mL). larutan seri

standar Allopurinol dibuat dengan mengencerkan larutan induk hingga diperoleh

larutan standar Allopurinol dengan konsentrasi 0,5; 1; 2,5; 5; dan 10 µg/mL.


5

Penentuan Panjang Gelombang Maksimum

Larutan dapat fosfat 0,05 M pH 7,5 sebanyak 2,9 mL dimasukkan ke

dalam tabung reaksi, lalu ditambahkan 2 mL larutan substrat xantin 0,15 mM.

Kemudian dilakukan prainkubasi pada suhu 25oC selama 15 menit. Setelah selesai

prainkubasi, ditambahkan dengan 0,1 mL larutan enzim xantin oksidase dan

dihomogenkan. Kemudian diinkubasi pada suhu 25oC selama 30 menit. Reaksi

dihentikan dengan penambahan 1 mL HCl 1 N, kemudian diukur serapannya

menggunakan spektrofotometer uv-vis.

Pengujian Sampel dan Allopurinol

Pengujian dilakukan dengan menggunakan spektrofotometer uv-vis di

bawah kondisi aerob. Larutan infusa tunggal, infusa kombinasi, atau Allopurinol

sebanyak 1 mL ditambahkan 2,9 mL larutan dapar fosfat 0,05 M pH 7,5 dan 2 mL

larutan substrat xantin 0,15 mM di tabung reaksi kemudian dilakukan prainkubasi

pada suhu 25oC selama 15 menit. Setelah selesai prainkubasi, ditambahkan

dengan 0,1 mL larutan enzim xantin oksidase dan dihomogenkan. Kemudian

diinkubasi pada suhu 25oC selama 30 menit. Reaksi dihentikan dengan

penambahan 1 mL HCl 1 N, kemudian diukur serapannya pada panjang

gelombang maksimum menggunakan spektrofotometer uv-vis. Pengujian

dilakukan sebanyak 3 kali.

Pengujian Kontrol Sampel dan Kontrol Allopurinol

Larutan infusa tunggal, infusa kombinasi, atau Allopurinol sebanyak 1 mL

ditambahkan 3 mL larutan dapar fosfat 0,05 M pH 7,5 dan 2 mL larutan substrat

xantin 0,15 mM di tabung reaksi kemudian dilakukan prainkubasi pada suhu 25oC

selama 15 menit. Kemudian diinkubasi pada suhu 25oC selama 30 menit. Setelah

selesai inkubasi, ditambahkan dengan 1 mL HCl 1 N ke dalam tabung reaksi

tersebut dan dihomogenkan. Setelah selesai, larutan diukur serapannya pada

panjang gelombang maksimum menggunakan spektrofotometer uv-vis. Pengujian



6

Pengujian Blanko

Larutan dapar fosfat 0,05 M pH 7,5 sebanyak 3,9 mL dan 2 mL larutan

substrat xantin 0,15 mM dimasukkan ke dalam tabung reaksi kemudian dilakukan

prainkubasi pada suhu 25oC selama 15 menit. Setelah prainkubasi, ditambahkan

dengan 0,1 mL larutan enzim xantin oksidase dan dihomogenkan. Kemudian

diinkubasi pada suhu 25oC selama 30 menit. Reaksi dihentikan dengan

penambahan 1 mL HCl 1 N, kemudian diukur serapannya pada panjang

gelombang maksimum menggunakan spektrofotometer uv-vis. Pengujian


Pengujian Kontrol Blanko

Larutan dapat fosfat 0,05 M pH 7,5 sebanyak 4 mL dan 2 mL larutan

substrat xantin 0,15 mM di tabung reaksi kemudian dilakukan prainkubasi pada

suhu 25oC selama 15 menit. Kemudian diinkubasi pada suhu 25oC selama 30

menit. Setelah selesai inkubasi, ditambahkan dengan 1 mL HCl 1 N ke dalam

tabung reaksi tersebut dan dihomogenkan. Setelah selesai, larutan diukur

serapannya pada panjang gelombang maksimum menggunakan spektrofotometer

uv-vis. Pengujian dilakukan sebanyak 3 kali.

Perhitungan Penghambatan Enzim Xantin Oksidase (IC50)

Data absorbansi dari hasil pembacaan pada spektrofotometer dengan

panjang gelombang 291,5 nm dihitung % inihibisi dengan :

Rumus % inhibisi = (1 - 𝐵

𝐴) x 100%

Keterangan:

A : perubahan absorbansi larutan uji (sampel – kontrol sampel)

B : perubahan absorbansi blanko (blanko – kontrol blanko)

Nilai IC50 dihitung dengan rumus persamaan regresi : y = bx + a. Didapat

dari linearitas antara konsentrasi dengan % inhibisi. Aktivitas penghambatan

enzim xantin oksidase dinyatakan dengan Inhibition Concentration 50% yaitu


7

konsentrasi sampel yang dapat menghambat aktivitas enzim xantin oksidase

sebanyak 50%. Nilai IC50 didapatkan dari nilai x setelah mengganti nilai y = 50.

Uji Kandungan Flavonoid dengan Kromatografi Lapis Tipis

Uji kandungan kimia secara KLT merujuk pada Suplemen III Farmakope

Herbal Indonesia. Fase diam yang digunakan adalah lempeng silika gel 60 F254

dan fase gerak yang digunakan adalah n-butanol-asam asetat-air (5 : 1 : 5). Infusa

dipekatkan terlebih dahulu di atas water bath dan standar quarsetin yang sudah

dibuat ditotolkan ke fase diam dengan menggunakan pipa kapiler 1 tetes. Setelah

proses eluasi selesai, diamati bercak di spektrofotometer UV dengan sinar 254 nm

dan 365 nm. Untuk mempertegas hasil digunakan reagen semprot sitroborat.

Analisis Statistika

Data yang diperoleh dari uji kandungan flavonoid dengan kromatografi

lapis tipis dibuat dalam bentuk tabel kemudian dideskripsikan hasilnya.

Sedangkan data yang diperoleh dari uji efek penghambatan enzim xantin oksidase

dilakukan analisis Shapiro-Wilk untuk melihat normalitas distribusi data. Jika data

yang didapat terdistribusi normal maka dapat dilakukan uji One Way Anova

dengan taraf kepercayaan 95% untuk mengetahui apakah ada perbedaan antara

kelompok. Jika data yang didapat tidak terdistribusi normal maka dilakukan uji

Kruskal-Wallis. Pada uji One Way Anova atau Kruskal-Wallis jika didapatkan

nilai P < 0,05, maka dilanjutkan dengan analisis Post-Hoc untuk mengetahui

kelompok yang berbeda bermakna. Uji Post-Hoc dilakukan dengan menggunakan

uji Scheffe apabila data terdistribusi normal sedangkan apabila data tidak

terdistribusi normal, maka digunakan uji Mann-Whitney. Didapat nilai P < 0,05

menunjukkan terdapat perbedaan rerata yang bermakna antara dua kelompok data

dan jika nilai P > 0,05 menunjukkan perbedaan rerata yang tidak bermakna antara

dua kelompok (Dahlan, 2016).


8

HASIL DAN PEMBAHASAN

Penyiapan Bahan

Pada penelitian ini, simplisia yang digunakan adalah bagian daun dari

tanaman salam yang diperoleh dari CV Merapi Farma (lampiran 7.) dan bagian

umbi dari tumbuhan sarang semut yang diperoleh dari kota Fakfak dan telah

dideterminasi oleh Laboratorium Sistematika Tumbuhan Fakultas Biologi

Universitas Gadjah Mada (lampiran 8.). Hasil determinasi menunjukkan bahwa

tanaman yang diambil benar merupakan tanaman Salam (Eugenia polyantha

Wight) dan tumbuhan sarang semut (Myrmecodia tuberosa (non Jack) BI.).

Determinasi perlu dilakukan untuk menunjukkan kebenaran jenis tanaman yang

akan digunakan pada saat penelitian.

Daun salam dan sarang semut (gambar 4.) yang diperoleh dilakukan

sortasi basah terlebih dahulu untuk memisahkan dari pengotornya. Kemudian

dicuci untuk memisahkan dari kotorannya yang masih menempel. Setelah itu

Sarang semut ditiris tipis kemudian dilakukan pengeringan hingga diperoleh

simplisia kering. Setelah pengeringan, dilakukan sortasi kering untuk dipilih

simplisia yang sesuai kriteria yang baik yaitu mudah dipatahkan, tidak berjamur,

kering. Kemudian simplisia dijadikan serbuk agar luas permukaan bertambah

sehingga mudah diperoleh kandungan kimia saat dilakukan ekstraksi.

Ekstraksi serbuk simplisia dilakukan dengan cara panas, yaitu dengan cara

Infundasi. Tujuan penelitian ini menggunakan metode infundasi adalah untuk

melihat efek dari sediaan infusa yang paling mudah dan sederhana dilakukan oleh

masyarakat dalam penggunaan tanaman herbal sebagai alternatif untuk mengatasi

penyakit. Pelarut yang digunakan adalah aquades yang bersifat polar sehingga

mudah untuk menarik senyawa dalam simplisia yang digunakan terutama

flavonoid yang bersifat polar.


9

Uji Efek Penghambatan Enzim Xantin Oksidase

Pengujian efek penghambatan enzim xantin oksidase dilakukan secara in

vitro dengan reaksi enzimatis dan pengukuran secara spektrofotometri pada

panjang gelombang optimum. Prinsipnya adalah dengan mengukur jumlah asam

urat yang terbentuk dari reaksi yang dikatalis oleh enzim xantin oksidase.

Enzim xantin oksidase bekerja dengan

cara mengkatalis oksidasi dari xantin menjadi

asam urat dengan mekanisme seperti pada

gambar disamping (gambar 1.). Perubahan

struktur yang terjadi dari xantin ke asam urat

menyebabkan panjang gelombang lebih besar

karena ada perpanjangan gugus kromofor

sehingga dalam penentuan panjang gelombang

maksimum yang terbaca adalah struktur dari

asam urat.

Uji penghambatan enzim xantin oksidase terdiri dari uji pendahuluan,

pengujian sampel, blanko dan pembanding. Uji pendahuluan yang terdiri dari

optimasi suhu inkubasi, optimasi pH larutan, dan optimasi konsentrasi substrat

xantin yang merujuk pada Umamaheswari et al. suhu prainkubasi 15 menit dan

inkubasi 30 menit, pH larutan 7,5, dan konsentrasi substrat xantin 0,15 mM. Uji

pendahuluan penghambatan enzim xantin oksidase bertujuan untuk menentukan

kondisi optimum aktivitas enzim sehingga dapat berlangsung optimal.

Penentuan panjang gelombang maksimum dilakukan untuk menentukan

panjang gelombang dimana produk asam urat terbanyak dihasilkan yang

menandakan besarnya aktivitas enzim xantin oksidase. optimasi konsentrasi

substrat xantin dilakukan untuk menentukan konsentrasi dimana aktivitas enzim

telah mencapai puncaknya Optimasi suhu dan pH optimum dilakukan untuk

menentukan kondisi suhu dan pH dimana serapan dan aktivitas yang dihasilkan

paling besar. Di akhir percobaan uji efek penghambatan enzim xantin oksidase,

Gambar 1. Reaksi enzimatis xantin

oksidase (Murray et al, 2003)


10

reaksi dihentikan dengan penambahan HCl 1 N dengan mekanisme mengubah

suasana menjadi asam. Dalam suasana asam, enzim akan mengalami denaturasi

yaitu perubahan struktur protein dari yang kompleks menjadi lebih sederhana

sehingga bagian sisi aktif enzim akan mengalami perubahan dan mengakibatkan

substrat dengan antagonisnya tidak dapat berikatan agar dalam pengukuran

dengan spektrofotometri tidak terjadi perubahan-perubahan absorbansi yang

diakibatkan reaksi yang tidak dihentikan.

Standar yang digunakan pada uji penghambatan enzim xantin oksidase

adalah allopurinol. Konsentrasi allopurinol yang digunakan adalah 0,5; 1; 2,5; 5;

dan 10 µg/mL yang diencerkan dari larutan induk 1000 µg/mL. diperoleh hasil

IC50 sebesar 0,170 ± 0,036 µg/mL.

Pengujian larutan infusa tunggal dan infusa kombinasi terhadap

penghambatan enzim xantin oksidase dilakukan dengan mengukur sampel,

kontrol sampel, blanko, dan kontrol blanko secara spektrofotometri. Pengukuran

kontrol sampel dilakukan sebagai faktor koreksi bila pada sampel yang diuji

menghasilkan serapan pada panjang gelombang optimum pengukuran. Pengujian

pada sampel dilakukan dalam beragam konsentrasi yang bertujuan untuk melihat

pengaruh penambahan konsentrasi pada peningkatan daya inhibisi. Konsentrasi

yang digunakan adalah 1; 2,5; 5; 7,5; dan 10%.

Pada pengukuran penghambatan enzim xantin oksidase, diperoleh nilai

IC50 infusa daun salam sebesar 6,167 ± 0,020%, infusa sarang semut sebesar

6,771 ± 0,046%, dan infusa kombinasi daun salam dan sarang semut sebesar

5,009 ± 0,064%. Diperoleh hasil bahwa masing-masing mempunyai kekuatan

menghambat enzim xantin oksidase. Nilai IC50 secara berurutan dari yang paling

mendekati allopurinol adalah infusa kombinasi daun salam dan sarang semut

dengan nilai IC50 5,009%, infusa daun salam dengan nilai IC50 6,167%, dan infusa

sarang semut dengan nilai IC50 6,771%.


11

Gambar 2. Nilai IC50 infusa dan standar allopurinol

Kandungan flavonoid yang ada pada daun salam dan sarang semut dapat

menghambat enzim xantin oksidase. Struktur planar dan flavonol dengan 7-OH

grup mempunyai efek penghambatan yang cukup tinggi pada enzim xantin

oksidase (Nagao, 1999). Adanya kombinasi menggunakan dua tanaman juga

membuat daya penghambatan terhadap enzim xantin oksidase lebih baik

dibandingkan tunggalnya. Adanya peningkatan persen daya penghambatan pada

kombinasi tersebut dikarenakan adanya efek sinergis antara daun salam dan

sarang semut. Berdasarkan hasil uji One Way Anova, terdapat perbedaan nilai IC50

antara sampel dan allopurinol yang signifikan [F(3,8)=13785,143; p=0,000]

(p<0,05).

Uji kandungan Flavonoid Dengan Kromatografi Lapis Tipis

Tujuan dari uji ini adalah untuk membuktikan adanya senyawa flavonoid

pada infusa tunggal dan kombinasi dikarenakan memiliki efek penghambatan

enzim xantin oksidase. Pengujian dilakukan pada infusa daun salam, infusa sarang

semut, dan infusa kombinasi daun salam dan sarang semut yang telah dikentalkan

di atas water bath yang akan ditotolkan pada lempeng KLT. Fase gerak yang

digunakan adalah larutan n-butanol : asam asetat : air (5 : 1 : 5). Hasil elusi

kemudian disemprot dengan pereaksi semprot yang spesifik untuk flavonoid, yaitu

sitroborat. Sitroborat akan bereaksi dengan gugus orto-dihidroksi pada struktur

flavonoid dan akan memberikan warna kuning terang (Santosa, 2015).

Infusa Tunggal Daun Salam

Infusa Tunggal Sarang Semut

Kombinasi Infusa Daun salam Dan

Sarang SemutAllopurinol

6,167 6,771 5,009 0,17

012345678

IC50


12

Terbentuknya warna kuning ini dikarenakan adanya gugus kromofor dan

auksokrom dan bentuknya yang rigid dan planar sehingga senyawa dapat

berfluorosensi di bawah sinar uv. Hasil positif adanya flavonoid pada hasil elusi

ditunjukkan dengan adanya bercak berwarna kuning terang pada panjang

gelombang 365 nm dan 254 nm di bawah sinar tampak.

Tabel I. Hasil uji KLT flavonoid

No. Deteksi 254 nm setelah

reagen semprot Deteksi 365 nm setelah

reagen semprot

Rf Warna Rf Warna

1. Infusa sarang semut 0,74 kuning 0,24 Hijau biru

0,36 Kuning hijau

0,93 Kuning hijau

1 merah

2. Infusa daun salam 0,77 Kuning 0,24 Hijau biru

0,90 Kuning coklat

1 Merah

3. Kombinasi infusa

daun salam dan sarang semut

0,76 Kuning 0,24 Hijau biru

0,37 Kuning hijau

0,93 Kuning hijau

1 Merah

4. Quarsetin 0,70 Kuning 0,70 kuning

Berdasarkan hasil KLT tersebut, dapat diketahui bahwa tanaman salam

dan tumbuhan sarang semut mengandung flavonoid jenis quarsetin dan senyawa

lain. Terdapat literatur yang menyebutkan bahwa flavonoid yang memiliki

penghambatan terhadap xantin oksidase adalah flavonoid golongan flavon, seperti

apigenin, luteolin dan golongan flavonol seperti kaempferol, quarcetin, dan

myricetin (van Hoorn et al, 2002).


13

KESIMPULAN

Bedasarkan penelitian yang telah dilakukan, menunjukkan bahwa efek

penghambatan enzim xantin oksidase dari infusa kombinasi sarang semut dan

daun salam (5,009 ± 0,064%) lebih baik dibandingkan dengan infusa tunggal

sarang semut (6,771 ± 0,046%) dan infusa tunggal daun salam (6,167 ± 0,020%)

untuk menurunkan kadar asam urat dan berbeda secara signifikan (p=0,000).

Infusa kombinasi dan tunggal mengandung senyawa flavonoid yang dapat

menghambat enzim xantin oksidase.

SARAN

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut terkait isolasi dan karakterisasi

senyawa yang terdapat pada infusa daun salam dan infusa sarang semut untuk

mengetahui jenis senyawa yang dapat menghambat enzim xantin oksidase.

Pengujian toksisitas juga perlu dilakukan untuk mengetahui keamanan dari

sediaan kombinasi infusa daun salam dan sarang semut yang dibuat.

UCAPAN TERIMAKASIH

Penelitian ini dilaksanakan dengan pembiayaan dari Lembaga Penelitian

dan Pengabdian kepada Masyarakat Universitas Sanata Dharma dengan nomor

kontrak 070/Penel/LPPM-USD/IV/2017.


14

DAFTAR PUSTAKA

Anonim. 1995. Farmakope Indonesia, Edisi IV, Departemen Kesehatan Republik

Indonesia, Jakarta. 9.

Bulusu, K.C., Guha, R., Mason, D.J., Lewis, R.P. I., Muratov, E., Kalantar

Motamedi, Y., ... Bender, A. (2016). Modelling of compound combination

effects and applications to efficacy and toxicity: State-of-the-art,

challenges and perspectives. Drug Discovery Today, 21(2), 225-238.

Che, Chun-Tao., Wang, Z.J., Chow, M.S.S., Lam, C.W.K. 2013. Herb-Herb

Combination for Therapeutic Enhancement and Advancement: Theory,

Practice and Future Perspectives. Molecules, 18: 5125-5141.

Dahlan, M.S., 2016. Statistika Untuk kedokteran dan Kesehatan. Epidemiologi

Indonesia. Jakarta, hal 7,235.

Dipiro, J., Talbert, L., Yee, C., Matzke, R., Wells, G., & Posey, L. 2008.

Pharmacotherapy, seventh edition. New York: Mc-Graw-Hill

Companies,Inc.

Ernawati dan Susanti, H. 2014. Penghambatan Aktivitas Xanthine Oxidase Oleh

Ekstrak Etanol Sarang Semut (Myrmecodia tuberosa (non Jack) BI.)

Secara In Vitro. Pharmaciana, 4(1): 15-22.

KeMenKes RI. 2013. Suplemen III Farmakope Herbal Indonesia, Edisi 1.

Jakarta:Direktorat Jenderal Bina Kefarmasian dan Alat Kesehatan.

Mardany, M.P., Chrystomo, L.Y., Karim, A.K. 2016. Skrining Fitokimia dan Uji

Aktivitas Sitotoksik dari Tanaman Sarang Semut (Myrmecodia beccarii

Hook.f.) Asal Kabupaten Merauke. J. Biol. Papua. 8(1): 13-22.

Muhtadi, Retnani, I., Wahyuningtyas, N. 2012. Penghambatan Ksantin Oksidase

Oleh Kombinasi Ekstrak Tempuyung (Sonchus arvensis) dan Salam

(Syzygium polyanthum) Pada Mencit Hiperurisemia. Biomedika, 4(1):

17-23.

Murray, K.R., Granner, K.D., Mayes, A.P., & Rodwell, W.V. 2003. Biokimia

Harper Edisi 27. Terjemahan dari Harper Biochemistry oleh Andy

Hartono. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. 303-309.


15

Nagao, A., Seki, M., Kobayashi, H. 1999. Inhibition of Xanthine Oxidase by

Flavonoids. Biosci.biotecnol.biochem 63(10): 1787-1790.

Ningtiyas, I.F. dan Ramadhian, M. Ricky. 2016. Efektivitas Ekstrak Daun Salam

untuk Menurunkan Kadar Asam Urat pada Penderita Artritis Gout.

J. Maj.5(3): 105-110.

Owen, P.L., and John, T. 1999. Xanthine Oksidase Inhibitory Activity of

Northeastern North America Plant Remedies Used For Gout. Journal of

Ethnopharmacology, 64 : 149-160.

Santosa, D dan Haresmita, P.P. 2015. Penentuan Aktivitas Antioksidan Gargina

dulcis (Roxb.) Kurz, Blumeamollis (D.Don)Merr., Siegesbeckia

orientalis L., dan Salvia riparia H.B.K yang Dikoleksi Dari Taman

Nasional Gunung Merapi Dengan Metode DPPH (2,2-difenil-1-pikril-

hidrazil) Serta Profil Kromatografi Lapis Tipis. Traditional Medicine

Journal, 20(1): 28-36.

Saputra, K.A. 2012. Uji Penghambatan Aktivitas Xantin Oksidase Secara In Vitro

Pada The Celup Kombinasi Daun Gandarusa (Justicia gendarusa Burm.)

dan Kaliks Rosela (Hibiscus sabdariffa Linn.). Depok: Fakultas

Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam.

Studiawan, H dan Santosa, M.H. 2005. Uji Aktivitas Penurunan Kadar Glukosa

Darah Ektrak Daun Eugenia polyantha pada Mencit yang Diinduksi

Aloksan. Media Kedokteran Hewan, 21(2): 62-65.

Umamaheswari, M., Asokkumar, K., Sivashammugam, A.T., Kemyaraju, A.

2009. In Vitro Xanthine Oksidase Inhibitory Activity of The Fractions of

Erythrina scricta Roxb. Journal of Ethnopharmacology, 124 : 646- 648.

Van Hoorn, D.E.C., Nijveldt, T.J., van Leeuwen, P.A.M., Hofman, Z., M’Rabet.,

De Bont, D.B.A., and van Norren K. 2002. Accurate Prediction of

Xanthine Oxidase Inhibition Based on the Structure of Flavonoids, Eur.

J. Pharmacol., 451:111-118.


16

LAMPIRAN


17

A B

C D

Gambar 3. Tanaman salam (A), tumbuhan sarang semut (B), simplisia daun

salam (C) dan simplisia sarang semut (D)


18

Lampiran 1. Data Penimbangan

Daun Salam

Gelas beaker = 62,5860 g

Gelas beaker + simplisia = 72,6046 g

Gelas beaker + sisa = 62,5936 g

Simplisia = 10,0110 g

Sarang Semut

Gelas beaker = 61,7634 g

Gelas beaker + simplisia = 71,8043 g

Gelas beaker + sisa = 61,7683 g

Simplisia = 10,0360 g

Quarsetin

Kertas perkamen = 0,1729 g

Kertas + quarsetin = 0,1982 g

Qarsetin = 0,0250 g

Enzim Xantin Oksidase

Cawan Porselen = 25,7311 g

Cawan Porselen + Enzim = 25,7402 g

Enzim = 0,0091 g

Substrat Xantin Oksidase

Cawan Porselen = 43,5547 g

Cawan Porselen + Substrat = 43,5700 g

Substrat = 0,0153 g

Allopurinol

Kertas Perkamen = 0,4245 mg

Kertas Perkamen + Allopurinol= 10,4296 mg

Allopurinol = 10,0051 mg


19

Lampiran 2. Data Perhitungan Pembuatan Larutan Seri Konsentrasi Infusa

Tunggal Sarang Semut, Infusa Tunggal Daun Salam, Infusa

Kombinasi Daun Salam dan Sarang Semut, dan Larutan

Standar Allopurinol

1. Larutan seri konsentrasi infusa tunggal sarang semut dan tunggal daun salam

Larutan induk 10 gram / 100 mL = 100% infusa

Larutan seri dibuat 5 konsentrasi dengan perhitungan:

a. 100% x 100 µL = C x 10 mL ; C = 1%

b. 100% x 250 µL = C x 10 mL ; C = 2,5%

c. 100% x 500 µL = C x 10 mL ; C = 5%

d. 100% x 750 µL = C x 10 mL ; C = 7,5%

e. 100% x 1000 µL = C x 10 mL ; C = 10%

2. Larutan seri konsentrasi infusa kombinasi sarang semut dan daun salam (1:1)

Larutan induk = 100% infusa (1:1)


a. 100% x 100 µL = C x 10 mL ; C = 1%

b. 100% x 250 µL = C x 10 mL ; C = 2,5%

c. 100% x 500 µL = C x 10 mL ; C = 5%

d. 100% x 750 µL = C x 10 mL ; C = 7,5%

e. 100% x 1000 µL = C x 10 mL ; C = 10%

3. Larutan seri konsentrasi standar allopurinol

Larutan induk 10 gram / 10 mL = 1 gram/mL = 1000 ppm


a. 1000 ppm x 5 µL = C x 10 mL ; C = 0,5 ppm

b. 1000 ppm x 10 µL = C x 10 mL ; C = 1 ppm

c. 1000 ppm x 25 µL = C x 10 mL ; C = 2,5 ppm

d. 1000 ppm x 50 µL = C x 10 mL ; C = 5 ppm

e. 1000 ppm x 100 µL = C x 10 mL ; C = 10 ppm


20

Lampiran 3. Perhitungan Larutan Xantin Oksidase 0,1 unit/mL

1. Satu kemasan enzim mengandung 44,2 mg solid:

a. 0,7 unit/mg protein

b. 0,11 unit/mg solid

2. Jumlah total unit enzim:

0,11 unit/mg solid x 44,2 mg solid = 4,862 unit

4,862 𝑢𝑛𝑖𝑡

0,7𝑢𝑛𝑖𝑡

𝑚𝑔𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛

= 6,95 mg protein

44,2 𝑚𝑔 𝑠𝑜𝑙𝑖𝑑

6,95 𝑚𝑔 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛 =

6,36 𝑚𝑔 𝑠𝑜𝑙𝑖𝑑

1 𝑚𝑔 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛 = 6,36 mg solid/ 1 mg protein

Perhitungan yang diperoleh dari keterangan pada label kemasan xantin

oksidase diperoleh : 1 mg protein – 6,36 mg solid – 0,7 unit. Konsentrasi larutan

enzim yang dibuat adalah 0,1 unit/mL.

3. Pembuatan larutan xantin oksidase 0,1 unit/mL:

0,1 𝑢𝑛𝑖𝑡

0,7 𝑢𝑛𝑖𝑡 x 6,36 mg solid = 0,908571 mg

Jika dibuat dalam 10 mL, maka jumlah enzim yang harus ditimbang sebanyak:

0,908571 mg/mL x 10 mL = 9,08571 mg

Cara pembuatan, ditimbang 9,08571 mg xantin oksidase, kemudian

dimasukkan ke dalam labu ukur dan dilarutkan dengan dapar fosfat sampai

dengan 10,0 mL.

Pada label kemasan dituliskan :

44,2 mg solid 0,11 unit/mg solid

Xantin oksidase 0,7 unit/ mg protein


21

Lampiran 4. Perhitungan Larutan Xantin

Perhitungan larutan substrat xantin

Xantin, BM = 152,1 (Sigma Aldrich)

Substrat xantin yang ditimbang = 15,21 mg

mmol xantin = 15,21 𝑚𝑔

152 ,1 = 0,1 mmol

dilarutkan ke dalam 100 mL aquades bebas CO2

mM larutan substrat xantin = 0,1 𝑚𝑚𝑜𝑙

0,1 𝑙𝑖𝑡𝑒𝑟 = 1 mM

Lampiran 5. Data Perhitungan Nilai Rf

Hasil uji KLT flavonoid (254nm)

- Standar quarsetin = 5,25/7,5 cm = 0,70

- Infusa daun salam = 5,8/7,5 cm = 0,77

- Infusa sarang semut = 5,6/7,5 cm = 0,74

- Infusa kombinasi = 5,7/7,5 cm = 0,76

Hasil uji KLT flavonoid (366 nm)

- Standar quarsetin = 5,25/7,5 = 0,70

- Infusa daun salam = 1,8/7,5 = 0,24; 6,8/7,5 = 0,90; 7,5/7,5 = 1

- Infusa sarang semut = 1,8/7,5 = 0,24; 2,7/7,5 = 0,36; 7/7,5 = 0,93; 7,5/7,5 = 1

- Infusa kombinasi = 1,8/7,5 = 0,24; 2,8/7,5 = 0,37; 7/7,5 = 0,93; 7,5/7,5 = 1


22

Lampiran 6. Data Uji Efek Penghambatan Enzim Xantin Oksidase

Tabel II. Data infusa tunggal sarang semut

Pengulan

gan

Konsentrasi

(%)

Absorbansi Inhibisi

(%)

IC50

(%) Regresi Linear

Sampel (S)

Kontrol Sampel (KS)

S - KS

1

1 0,509 0,159 0,350 27,984

6,807

y = 3,843x +

23,84 R² = 0,987

r = 0,989

2,5 0,490 0,173 0,317 34,774

5 0,477 0,187 0,290 40,329

7,5 0,463 0,235 0,228 53,086

10 0,442 0,262 0,180 62,963

2

1 0,509 0,157 0,352 27,572

6,786

y = 3,843x +

23,92

R² = 0,990

r = 0,994

2,5 0,489 0,174 0,315 35,185

5 0,478 0,192 0,286 41,152

7,5 0,459 0,228 0,231 52,469

10 0,442 0,263 0,179 63,169

3

1 0,509 0,155 0,354 27,160

6,719

y = 3,880x +

23,93

R² = 0,993 r = 0,996

2,5 0,488 0,174 0,314 35,391

5 0,477 0,195 0,282 41,975

7,5 0,459 0,230 0,229 52,881

10 0,443 0,264 0,179 63,169

Kontrol blanko 0,152 Blanko 0,638 Rata-rata IC50 6,771

Nilai IC50 (% ) Rata-Rata Nilai IC50

(% ) SD CV

6,807

6,771 0,046 0,68% 6,786

6,719


23

Tabel III. Data infusa tunggal daun salam

Pnegulan

gan

Konsentrasi

(%)

Absorbansi Inhibisi

(%)

IC50

(%) Regresi Linear

Sampel

(S)

Kontrol

Sampel (KS) S - KS

1

1 0,478 0,137 0,341 29,835

6,154

y = 3,801x +

26,61

R² = 0,999

r = 0,999

2,5 0,489 0,181 0,308 36,626

5 0,470 0,207 0,263 45,885

7,5 0,440 0,222 0,218 55,144

10 0,419 0,246 0,173 64,403

2

1 0,480 0,139 0,341 29,835

6,190

y = 3,793x +

26,52

R² = 0,998 r = 0,998

2,5 0,488 0,180 0,308 36,626

5 0,470 0,206 0,264 45,679

7,5 0,440 0,219 0,221 54,527

10 0,418 0,246 0,172 64,609

3

1 0,480 0,138 0,342 29,630

6,157

y = 3,836x + 26,38

R² = 0,998

r = 0,998

2,5 0,489 0,181 0,308 36,626

5 0,469 0,206 0,263 45,885

7,5 0,440 0,220 0,220 54,733

10 0,418 0,247 0,171 64,815



(% ) SD CV

6,154

6,167 0,020 0,32% 6,190

6,157


24

Tabel IV. Data infusa kombinasi daun salam dan sarang semut

Pengulan

gan

Konsentrasi

(%)

Absorbansi Inhibisi

(%)

IC50

(%) Regresi Linear

Sampel

(S)

Kontrol

Sampel (KS) S - KS

1

1 0,487 0,150 0,337 30,658

4,953

y = 4,480x +

27,81

R² = 0,993

r = 0,996

2,5 0,450 0,160 0,290 40,329

5 0,418 0,178 0,240 50,617

7,5 0,410 0,228 0,182 62,551

10 0,383 0,244 0,139 71,399

2

1 0,488 0,147 0,341 29,835

4,995

y = 4,593x +

27,06

R² = 0,992 r = 0,995

2,5 0,447 0,157 0,290 40,329

5 0,415 0,173 0,242 50,206

7,5 0,409 0,226 0,183 62,346

10 0,382 0,246 0,136 72,016

3

1 0,484 0,146 0,338 30,453

5,078

y = 4,679x + 26,24

R² = 0,996

r = 0,997

2,5 0,459 0,156 0,303 37,654

5 0,415 0,173 0,242 50,206

7,5 0,409 0,228 0,181 62,757

10 0,382 0,245 0,137 71,811



(% ) SD CV

4,953

5,009 0,064 1,27% 4,995

5,078


25

Tabel V. Data allopurinol

Pnegulan

gan

Konsentrasi

(ppm)

Absorbansi Inhibisi

(%)

IC50

(ppm) Regresi Linear

Sampel

(S)

Kontrol

Sampel (KS) S - KS

1

0,5 0,306 0,060 0,246 49,383

0,202

y = 2,081x +

49,58

R² = 0,985

r = 0,992

1 0,289 0,054 0,235 51,646

2,5 0,274 0,059 0,215 55,761

5 0,259 0,069 0,190 60,905

10 0,243 0,096 0,147 69,753

2

0,5 0,305 0,061 0,244 49,794

0,132

y = 2,048x +

49,73

R² = 0,991 r = 0,995

1 0,289 0,055 0,234 51,852

2,5 0,275 0,059 0,216 55,555

5 0,259 0,068 0,191 60,670

10 0,243 0,096 0,147 69,753

3

0,5 0,305 0,059 0,246 49,383

0,177

y = 2,087x + 49,63

R² = 0,987

r = 0,993

1 0,289 0,056 0,233 52,058

2,5 0,274 0,058 0,216 55,555

5 0,259 0,069 0,190 60,905

10 0,243 0,097 0,146 69,959


Nilai IC50 (ppm) Rata-Rata Nilai IC50

(ppm) SD CV

0,202

0,170 0,036 20,88% 0,132

0,177


26

Lampiran 7. Surat Keterangan Pengambilan Daun Salam dari CV. Merapi

Farma Herbal


27

Lampiran 8. Determinasi Tanaman Salam dan Tumbuhan Sarang Semut

oleh Kepala Laboratorium Sistematika Tumbuhan Fakultas

Biologi Universitas Gadjah Mada


28


29

Lampiran 9. Sertifikat Analisis Xantin Oksidase


30

Lampiran 10. Sertifikat Analisis Xantin


31


32

Lampiran 11. Sertifikat Analisis Statistika


33

Lampiran 12. Uji Statistik

Case Processing Summary

Kelompok

Cases

Valid Missing Total

N Percent N Percent N Percent

IC50 Infusa Sarang Semut 3 100,0% 0 0,0% 3 100,0%

Infusa Daun Salam 3 100,0% 0 0,0% 3 100,0%

Infusa Kombinasi Daun Salam dan Sarang Semut

3 100,0% 0 0,0% 3 100,0%

Allopurinol 3 100,0% 0 0,0% 3 100,0%

Descriptives

Kelompok Statistic

Std.

Error

IC50 Infusa

Sarang

Semut

Mean 6,77067 ,26535

95% Confidence

Interval for Mean

Lower Bound 6,65650

Upper Bound 6,88484

5% Trimmed Mean .

Median 6,78600

Variance ,002

Std. Deviation ,045960

Minimum 6,719

Maximum 6,807

Range ,088

Interquartile Range .

Skewness -1,334 1,225

Kurtosis . .


34

Infusa Daun

Salam

Mean 6,16700 ,11533

95% Confidence

Interval for Mean

Lower Bound 6,11738

Upper Bound 6,21662

5% Trimmed Mean .

Median 6,15700

Variance ,000


Minimum 6,154

Maximum 6,190

Range ,036


Skewness 1,688 1,225

Kurtosis . .

Infusa

Kombinasi

Daun Salam

dan Sarang

Semut

Mean 5,00867 ,36726

95% Confidence

Interval for Mean

Lower Bound 4,85065

Upper Bound 5,16668

5% Trimmed Mean .

Median 4,99500

Variance ,004


Minimum 4,953

Maximum 5,078

Range ,125


Skewness ,922 1,225

Kurtosis . .


35

Allopurinol Mean ,17033 ,020480

95% Confidence

Interval for Mean

Lower Bound ,08221

Upper Bound ,25845

5% Trimmed Mean .

Median ,17700

Variance ,001


Minimum ,132

Maximum ,202

Range ,070


Skewness -,816 1,225

Kurtosis . .

Tests of Normality

Kelompok

Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk

Statistic df Sig. Statistic df Sig.

IC50 Infusa Sarang Semut ,297 3 . ,917 3 ,440

Infusa Daun Salam ,358 3 . ,812 3 ,144

Infusa Kombinasi Daun

Salam dan Sarang

Semut

,252 3 . ,965 3 ,643

Allopurinol ,241 3 . ,974 3 ,688

a. Lilliefors Significance Correction


36

Oneway

Descriptives

IC50

N Mean

Std.

Deviation Std. Error

95% Confidence

Interval for Mean

Minimum Maximum

Low er

Bound

Upper

Bound

Infusa Sarang

Semut

3 6,77067 ,045960 ,026535 6,65650 6,88484 6,719 6,807

Infusa Daun Salam 3 6,16700 ,019975 ,011533 6,11738 6,21662 6,154 6,190

Infusa Kombinasi

Daun Salam dan

Sarang Semut

3 5,00867 ,063611 ,036726 4,85065 5,16668 4,953 5,078

Allopurinol 3 ,17033 ,035473 ,020480 ,08221 ,25845 ,132 ,202

Total 12 4,52917 2,710655 ,782499 2,80690 6,25143 ,132 6,807

Test of Homogeneity of Variances

IC50

Levene Statistic df1 df2 Sig.

1,380 3 8 ,317

ANOVA

IC50

Sum of

Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 80,809 3 26,936 13785,143 ,000

Within Groups ,016 8 ,002

Total 80,824 11


37

Post Hoc Tests

Multiple Comparisons

Dependent Variable: IC50

Scheffe

(I) Kelompok (J) Kelompok

Mean

Difference (I-J) Std. Error Sig.

95% Confidence Interval

Low er Bound

Upper

Bound

Infusa Sarang

Semut

Infusa Daun Salam ,603667* ,036092 ,000 ,47761 ,72972


Salam dan Sarang Semut

1,762000* ,036092 ,000 1,63594 1,88806

Allopurinol 6,600333* ,036092 ,000 6,47428 6,72639

Infusa Daun

Salam

Infusa Sarang Semut -,603667* ,036092 ,000 -,72972 -,47761



1,158333* ,036092 ,000 1,03228 1,28439

Allopurinol 5,996667* ,036092 ,000 5,87061 6,12272

Infusa

Kombinasi

Daun Salam

dan Sarang

Semut

Infusa Sarang Semut -1,762000* ,036092 ,000 -1,88806 -1,63594

Infusa Daun Salam -1,158333* ,036092 ,000 -1,28439 -1,03228

Allopurinol 4,838333* ,036092 ,000 4,71228 4,96439

Allopurinol Infusa Sarang Semut -6,600333* ,036092 ,000 -6,72639 -6,47428

Infusa Daun Salam -5,996667* ,036092 ,000 -6,12272 -5,87061



-4,838333* ,036092 ,000 -4,96439 -4,71228

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.


38

BIOGRAFI PENULIS

Penulis skripsi dengan judul ―Uji Efek Penghambatan

Enzim Xantin Oksidase Kombinasi Infusa Daun Salam

(Eugenia polyantha Wight) dan Sarang Semut

(Myrmecodia tuberosa (non Jack) BI.)‖ bernama Martin

Vincentsius. Penulis merupakan anak kedua dari

pasangan Lim Bun Sin dan Lisa. Penulis lahir di

Tangerang, 23 April 1996. Pendidikan formal penulis

diawali di TK Tarsisius Vireta (2001-2002), melanjutkan

pendidikan ke SD Kanisius Kalasan (2002-2008), kemudian menengah pertama di

SMP N 1 Kalasan (2008-2011) dan pendidikan menengah atas di SMA Kolese De

Britto Yogyakarta (2011-2014). Pendidikan dilanjutkan hingga perguruan tinggi

di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.


UJI EFEK PENGHAMBATAN ENZIM XANTIN OKSIDASE …repository.usd.ac.id/30221/2/148114131_full.pdf ·...

Documents

Transcript of UJI EFEK PENGHAMBATAN ENZIM XANTIN OKSIDASE …repository.usd.ac.id/30221/2/148114131_full.pdf ·...