UJI EFEK KOMBINASI ANTIBIOTIK AMOKSISILIN DENGAN … · Pseudomonas aeruginosa adalah 5 yang...

i

UJI EFEK KOMBINASI ANTIBIOTIK AMOKSISILIN DENGAN EKSTRAK

METANOL DAUN SIRIH (Piper betle L.) TERHADAP PERTUMBUHAN

Pseudomonas aeruginosa

SKRIPSI

Diajukan Untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh:

Valentina Natalia Dwi Kurniawati

NIM : 148114074

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2017

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

-t

PembimbingUtama.t(Dr. Yustina Sri Hartini, M.Si., Apt.)

Persetuj uan Pembi mbin g

UJI EFEK KOMBINASI ANTIBIOTIK AMOKSISILIN DENGAN EKSTRAK

METANOL DAUN SIRI H (Piper berle L.) TERI {ADAP PERTUMBUHAN

Pseudomonas aeruginov

Skripsi yang diajukan oleh:

Valentina Natalia Dwi Kumiawati

NIM: 148114074

Telah disetujui oleh:

l'anggal 23 November 2017


iv

HALAMAN PERSEMBAHAN

Kupersembahkan karya ini untuk:

Tuhan Yesus Kristus, sumber kehidupan, kasih, penyelamat dan pengharapan

Papa, Mama, Mbak Sisca dan seluruh keluarga besarku

Sahabat-sahabatku yang selalu mendukung dan membantuku

Serta Almameterku Universitas Sanata Dharma

I Can Do All Things Through Christ

Which Strengtheneth Me.

Philippians 4 : 13


-

PERNYATAAN KEASLIITAN KARYA

Saya menyatakan dengan sesungguhnya bahwa skripsi yang saya tulis ini

tidak memuat karya atau bagian karya orang lain, kecuali yang telah disebutkan

dalam kutipan dan daftar pustaka, dengan mengikuti ketentuan sebagaimana layaknya

karya ilmiah.

Apabila di kemudian hari ditemukan indikasi plagiarisme dalam naskah ini.

maka saya bersedia menanggung segala sanksi sesuai peratiran perundang-undangan

yang berlaku.

Yogyakarta, 27 November 2017

Penulis

\Q, I

\ htil.V1

(Valentina Natalia Dwi Kurniawati)


LEMBAR PERYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH

UNTUK KL,PENTINGAN AKADEMIS

Yang berlanda tangan dibarvah ini, saya mahasiswa universitas Sanata Dharma:

Nama : Valentina Natalia Dwi Kurniar,vati

NIM : 148114074

Demi perkembangan ilmu pengetahuan, saya rnemberikan kepada Perpustakaan

Universitas Sanata Dharma karya ilmiah saya yang berjudul :

UJI EFEK KOMBINASI ANTIBIOTIK AMOKSISILIN DENGAN

EKSTRAK METANOL DAUN SIRIH tPiper betle L.) TERHADAP

PERTUMBUHAN Pseuclomonas aeruginoso.

Besefia perangkat yang diperlukan (bila ada). Dengan demikian saya memberikan

kepada Perpustakaan Universitas Sanata Dharma hak untuk menyimpan. mengalihkan

dalam bentuk lain, mengolah dalam bentuk pangkalan data. mendistribusikan secara

terbatas, dan meinpublikasikan di internet atau media lain untuk kepentingan

akademis tanpa perlu meminta izin dari saya ataupun memberi royalti kepada saya

selama mencantumkan nama saya sebagai penulis

Demikian pernyataan ini saya buat dengan sebenarnya

Dibuat di Yogyakarta

Pada tanggal 27 November 2017

Yang menyatakan

(Valentina Natalia Dwi Kurniawati)

VI

I

I

I

I


vii

PRAKATA

Puji dan syukur kepada Tuhan yang Maha Esa atas segala penyertaan, kasih,

karunia dan berkat-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul

“UJI EFEK KOMBINASI ANTIBIOTIK AMOKSISILIN DENGAN EKSTRAK

METANOL DAUN SIRIH (Piper betle L.) TERHADAP PERTUMBUHAN

Pseudomonas aeruginosa” dengan baik. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu

syarat mendapat gelar Sarjana Farmasi program studi Farmasi Universitas Sanata

Dharma.

Penulis menyadari bahwa dalam, pembuatan skripsi ini tidak terlepas dari

bantuan, doa dan dukungan dar berbagai pihak. Penulis mengucapkan terimakasih

kepada :

1. Ibu Aris Widayati, M.Si., Ph.D., Apt selaku Dekan Fakultas Farmasi

Universitas Sanata Dharma.

2. Ibu Yustina Sri Hartini, M.Si., Apt selaku dosen pembimbing skripsi atas

perhatian, kesabaran, bimbingan, masukkan dan motivasi kepada penulis

dari proses penyusunan proposal sampai penyusunan skripsi selesai.

3. Ibu Damiana Sapta Candrasari, S.Si., M.Sc selaku dosen penguji

4. Ibu Dr. Erna Tri Wulandari, Apt selaku dosen penguji.

5. Ibu Dr. Dewi Setyaningsih, Apt selaku Kepala Penanggung jawab

Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah memberikan izin dalam

penggunaan semua faselitas laboratorium untuk penelitian skripsi penulis.

6. Bapak Wagiran, Ibu Novelia, Bapak Mukminin serta seluruh laboran yang

telah membantu selama penelitian sampai skripsi diselesaikan.

7. Keluarga tercinta, Papa Florensius Roseno, Mama Yulia Sumarni, Kakak

Fransisca Ratih Setiani yang selalu memberikan doa, perhatian, pengertian

dan semangat kepada penulis.


viii

8. Teman-teman seperjuangan satu kelompok skripsi Angelica Rivera

Santoso, Lintang Sari Hermandana, Gusti Ayu Vivin Fitriani, Livia

Setiastuti Hadiwinoto atas kerjasamanya, bantuan, hiburan serta semangat

yang diberikan selama penyususnan skripsi dari awal hingga akhir.

9. Teman-teman Ni Komang Ayu Terra, Gita Yanti, Natalia Devita

Simorangkir, Elisabeth Gio, Sastira Putri, serta teman-teman “sanata kost”

atas kebersamaan, keceriaan dan semangat yang diberikan kepada penulis.

10. Teman-teman FSM B 2014 dan seluruh angkatan 2014 atas dukungannya.

11. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu sehingga

penulis dapat menyelesaikan skripsi ini dengan baik.

Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan, oleh

karena itu, penulis sangat terbuka dengan segala kritik dan saran yang

membangun dari semua pihak. Akhir kata, semoga skripsi ini bermanfaat

bagi perkembangan ilmu pengetahuaan terutama dalam bidang farmasi

serta untuk semua pihak yang membutuhkan.

Yogyakarta

Penulis


ix

ABSTRAK

Latar belakang : Kasus resistensi antibiotik amoksisilin terhadap Pseudomonas

aeruginosa semakin meningkat maka, diperlukan cara untuk mengatasi. Salah satu cara

untuk mengatasi dengan pemanfaatan bahan alam atau melakukan kombinasi senyawa

antimikroba. Kombinasi dapat dilakukan antara antibiotik dengan bahan alam yang

memiliki aktivitas sebagai antimikroba dan ekstrak metanol daun sirih mampu

memberikan aktivitas sebagai antimikroba yang lebih baik dibandingkan dengan

ekstrak daun sirih menggunakan pelarut lain. Kombinasi antibiotik amoksisilin (AMX)

dengan ekstrak metanol daun sirih (EMDS) akan diuji untuk mengetahui efek yang

dihasilkan dari kombinasi.

Metode : Rancangan pengukuran kombinasi menggunakan metode Checkerboard .

Nilai kadar hambat minimum digunakan untuk menghitung interaksi dalam kombinasi

yang digambarkan dalam Fractional Inhibition Concentration Index (FICI) yang

diimplementasikan sinergis FICI ≤ 0,5, Indifferent FICI 0,5 – ≤4, dan Antagonis FICI

> 4. Data hasil uji antibakteri dianalisis statistik dengan One Way Anova dan diketahui

perbedaannya dengan post hoc Turkey-HSD.

Hasil : Kadar hambat minimum AMX yang dipilih 200 µg/ml sedangkan AMX

kombinasi 800 µg/ml. Kadar hambat minimum EMDS 200 mg/mg , EMDS kombinasi

200 mg/ml.

Kesimpulan : Nilai FIC kombinasi AMX dan EMDS dalam menghambat

Pseudomonas aeruginosa adalah 5 yang menunjukan efek antagonis.

Kata kunci : Amoksisilin, Pseudomonas aerugiosa, Kombinasi, Daun sirih, Kadar

hambat minimum,Fractional inhibition concentration, Antagonis


x

ABSTRACT

Background : The development of antibiotic amoxicillin resistance by Pseudomonas

aeruginosa more increasing then we need a way to get over. One way to get over from

that case is with the utilization of natural materials or doing a combination of

antimicrobial compounds. The combination can be done between the antibiotic with

natural materials which have antimicrobial activity as methanol and extract the betel

leaf is able to provide the anti-microbial activity as better compared to other solvent

uses extracts. Combination antibiotic amoxicillin (AMX) with methanol extract of

betel leaf (EMDS) will be tested to find out the effects resulting from the combination.

Method : The measurement method is a Checkerboard method. The value of the levels

of minimum inhibition is used to calculate the interactions in combination described in

Fractional Inhibition Concentration Index (FICI) that implemented synergistically FICI

≤ 0.5, 0.5 – FICI Indifferent ≤ 4, and Antagonis > 4 FICI. Research of anti bacterial

test analyzed statistics "by One Way Anova and the differences in each group were

calculated with post-hoc TukeyHSD.

Results : MIC AMX alone was 200 µg/ml while AMX in combination 800 µg/ml. MIC

EMDS alone was 200 mg/ml, EMDS in combination 200 mg/ml.

Conclusion: The FIC of combination amoxicillin and EMDS in inhibiting

Pseudomonas aeruginosa was 5 which showed antagonistic effect.

Key words : Amoxicillin, Pseudomonas aerugiosa, Combinations, Piper betle leaf,

Minimum inhibition concentration, Fractional inhibition concentration, Antagonism


xi

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ............................................................................................... i

PERSETUJUAN PEMBIMBING .......................................................................... ii

HALAMAN PENGESAHAN ................................................................................ iii

HALAMAN PERSEMBAHAN ............................................................................ iv

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ................................................................. v

HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI ......................................................... vi

PRAKATA ............................................................................................................ vii

ABSTRAK ............................................................................................................ ix

ABSTRACT .............................................................................................................. x

DAFTAR ISI .......................................................................................................... xi

DAFTAR TABEL ................................................................................................. xii

DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... xiii

DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ xiv

PENDAHULUAN ................................................................................................. 1

METODE PENELITIAN ....................................................................................... 3

HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................................. 10

KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................................. 18

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 19

LAMPIRAN .......................................................................................................... 22

BIOGRAFI PENULIS .......................................................................................... 29


xii

DAFTAR TABEL

Tabel 1. Hasil pengukuran diameter zona hambat ......................................... 15

Tabel 2. Hasil Metode Checkboard................................................................ 16


xiii

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Cara Pengukuran Zona Hambat ......................................................... 6

Gambar 2. Rancangan pengukuran dengan metode checkerboard ...................... 7

Gambar 3. Kontrol Pertumbuhan dan Kontrol Media ....................................... 12

Gambar 4. Hasil Zona Hambat Antibiotik, Ekstrak Metanol Daun Sirih .......... 13


xiv

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Surat determinasi tanaman (daun sirih hijau) ......................... 22

Lampiran 2. Surat identifikasi bakteri Pseudomonas aeruginosa .................. 23

Lampiran 3. Bukti pengukuran dengan Microplate reader ...................... 24

Lampiran 4. Hasil pengukuran dengan Microplate reader ...................... 25

Lampiran 5. Sertifikat pengujian statistik dengan SPSS ........................ 26

Lampiran 6. Hasil perhitungan statistik ........................ 27


1

PENDAHULUAN

Intensitas penggunaan antibiotik yang relatif tinggi menimbulkan ancaman

luas bagi kesehatan terutama terjadinya resistensi bakteri terhadap antibiotik.

Berbagai studi menemukan bahwa sekitar 40-62% antibiotik digunakan secara tidak

tepat untuk penyakit-penyakit yang sebenarnya tidak memerlukan antibiotik

(Departemen Kesehatan RI 2009). Beberapa kuman resisten antibiotik sudah banyak

ditemukan di seluruh dunia, yaitu sebagai contoh Pseudomonas aeruginosa resitensi

terhadap beberapa antibiotik, salah satunya amoksisilin. Pseudomonas aeruginosa

merupakan bakteri aerob Gram negatif, salah satu penyebab terjadinya infeksi

nosokomial. Angka kejadian infeksi nosokomial di dunia sekitar 10-15% (Rustini et

al. 2016).

Amoksisilin merupakan antibiotik golongan penisilin yang efektif untuk

mengatasi infeksi yang disebabkan oleh bakteri Gram positif dan Gram negatif.

Mekanisme aksi amoksisilin yaitu menghambat sintesis dinding sel bakteri dengan

mengikat satu atau lebih pada ikatan penisilin-protein (PBPs – Protein binding

penisilin’s), sehingga menyebabkan penghambatan pada tahapan akhir transpeptidase

sintesis peptidoglikan dalam dinding sel bakteri, akibatnya biosintesis dinding sel

terhambat, dan sel bakteri menjadi pecah (Kaur et al. 2011). Kasus resistensi

Pseudomonas aeruginosa terhadap antibiotik amoksisilin dari September 2013

sampai Januari 2014 sekitar 95% (Ullah et al. 2016). Salah satu cara mengatasi kasus

resistensi dapat menggunakan tanaman obat sebagai alternatif antibiotik. Tanaman

obat sudah banyak digunakan sejak dahulu oleh masyarakat Indonesia. Pemanfaatan

tanaman obat sebagai alternatif pengobatan melahirkan teknik-teknik baru. Salah

satunya dengan melakukan kombinasi antimikroba. Kombinasi antimikroba memiliki

keuntungan yaitu : menekan dan mengendalikan resistensi; serta memberikan efek

sinergis (Yuan et al. 2010). Kombinasi Cefepime dengan amikasin memberikan efek

antibakteri yang sinergis pada Acinetobacter baumannii dan Pseudomonas

aeruginosa (Yuan et al. 2010). Kombinasi dilakukan tidak hanya antar antibiotik,


2

tetapi banyak penelitian melakukan kombinasi antara antibiotik dengan senyawa aktif

yang berasal dari tanaman. Sebagai contoh, kombinasi antara antibiotik amoksisilin

dengan ekstrak metanol daun serai memberikan efek yang sinergis pada

Pseudomonas aeruginosa dengan nilai Fractional Inhibitory Concentration Index

(FICI) 0,46 (Noor 2016). Nilai FICI ≤ 0.5 menunjukan efek sinergis; FICI 0.5 – 4

indifferent, dan FICI > 4 menunjukkan efek antagonis (Blesson et al. 2015). Dari

pernyataan tersebut, peneliti memutuskan untuk melakukan kombinasi antara

tanaman obat dan antibiotik yang telah beredar di masyarakat untuk melihat adanya

efek sinergis. Tanaman sirih khususnya pada bagian daun dikombinasikan dengan

antibiotik amoksisilin untuk melihat apakah kombinasi tersebut mampu memberikan

efek sinergis yang akan meningkatkan efek antibakteri dari amoksisilin sebagai

antibiotik dalam menghambat Pseudomonas aeruginosa.

Daun sirih memiliki kandungan kimia alkaloid, tannin, karbohidrat, asam

amino, steroid, minyak atsiri : eugenol, chavibetol, Hydroxychavicol (HC) (Dwivedi

and Tripathi 2014). Daun sirih di ekstraksi menggunakan pelarut metanol, karena

pelarut metanol mampu menarik senyawa- senyawa lebih banyak dibandingkan

pelarut lain (Tiwari et al. 2011). Menurut Khan dan Kumar (2011), ekstrak metanol

menunjukkan aktivitas antimikroba yang lebih baik dalam menghambat pertumbuhan

Pseudomonas aeruginosa. Penelitian terkait kombinasi antara ekstrak daun sirih

dengan antibiotik serupa penelitian (Taukoorah et al. 2016), ekstrak daun sirih etil

asetat, aqueous, dichloromethane serta ekstrak etanol daun sirih dikombinasi dengan

streptomisin dan kloramfenikol menunjukan efek sinergi. Oleh karena itu, peneliti

tertarik untuk melakukan kombinasi antara antibiotik amoksisilin dengan ekstrak

metanol daun sirih, untuk mengukur apakah kombinasi ini memiliki efek yang

sinergis untuk mengatasi kasus resistensi Pseudomonas aeruginosa terhadap

amoksisilin.


3

METODE PENELITIAN

Alat dan Bahan

Alat yang digunakan untuk penelitian antara lain: Alat-alat gelas (tabung reaksi,

erlenmeyer, labu takar, labu alas bulat 500 ml, gelas beker , cawan petri, batang

pengaduk (Iwaki Pyrex)), blender, oven (Memmert), autoclave (ALP), shaker

(Optimal), rotary evaporator (Buchi), pengayak, mikropipet, yellow tip steril, jarum

ose, pelubang sumuran, IWAKI microplate 96-well, micro plate reader, incubator

(Hemmert), Biological Safety Cabinet class II type A2 (ESCO), alat destilasi

(pendingin air balik, alat penampung, dan tabung penerima), hot plate, corong

Buchner, timbangan analitik (OHAUS), Bunsen, nephelometer (PhoenixSpec).

Bahan yang digunakan antara lain: bakteri uji Pseudomonas aeruginosa didapat

dari Laboratorium Kesehatan Yogyakarta , daun sirih yang diperoleh dari daerah

Sleman, Daerah Istimiwa Yogyakarta, amoksisilin tablet 500 mg, Media Nutrient

Agar (Oxoid), Nutrient Broth (Oxoid), larutan standar McFarland 0.5, toluene P,

Dimetilsulfoksida 1% (Merck), aquadest, Buffered Pepton Water (Oxoid) yang

diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi Universitas Sanata Dharma. Pelarut

ekstrak daun sirih yang digunakan adalah metanol teknis, antibiotik amoksisilin.

Penyiapan bahan uji dan determinasi tanaman sirih

Daun sirih diperoleh dari daerah Sleman, Yogyakarta. Daun sirih yang dipilih

adalah daun sirih tidak berlubang, dan berwarna hijau muda. Determinasi tanaman

dilakukan di Fakultas Farmasi bidang Biologi Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.

Pembuatan simplisia

Daun sirih diambil yang masih segar berwarna hijau muda, tidak berlubang

dan dipisahkan dari bahan pengotor yang menempel pada daun sirih. Kemudian

dicuci sampai bersih menggunakan air mengalir. Daun sirih dipotong-potong kecil,

dioven pada suhu 40⁰C, lalu dibuat serbuk dengan menggunakan blender.


4

Penetapan kadar air pada simplisia kering daun sirih

Tujuan penetapan kadar air dari simplisia memberikan batasan minimal atau

rentang tentang besarnya kandungan air yang diperbolehkan yaitu kurang dari 10%.

Penetapan kadar air dilakukan dengan menimbang 10 g simplisia kering daun sirih

dan dimasukkan ke dalam alat destilasi toluene. Kemudian dimasukkan 200 ml

toluene jenuh air kedalam labu dan pasang rangkaian alat. Kemudian labu dipanaskan

dengan hati-hati selama 15 menit. Setelah toluen mulai mendidih, penyulingan diatur

dengan kecepatan 2 tetes tiap detik, hingga sebagian air tersuling, kemudian naikkan

kecepatan penyulingan hingga 4 tetes tiap detik. Penyulingan dilanjutkan selama 5

menit, tabung penerima didinginkan hingga suhu ruang. Kemudian volume air dibaca

setelah air dan toluene memisah sempurna. Kadar air dihitung dalam % v/b

(Direktorat Jenderal Bina Kefarmasian Kefarmasian dan Alat Kesehatan RI. 2011).

%Kadar air =volume air (ml)

berat simplisia yang ditimbang (g) × 100%

Pembuatan ekstrak metanol daun sirih

Pembuatan ekstrak metanol daun sirih dilakukan dengan metode maserasi

menurut Badan Pengawas Obat dan Makanan RI (2010) jumlah serbuk yang

dimaserasi berjumlah 10 gram dan pelarut metanol sebanyak 75 ml. Tahapan

maserasi dilakukan dengan merendam 10 gram serbuk daun sirih, dimasukan ke

dalam erlenmeyer, kemudian dilarutkan dengan pelarut metanol hingga terendam

semua. Maserasi dilakukan selama 3 kali dengan bantuan shaker. Hasil maserat yang

diperoleh disaring dengan corong Buchner yang dilapisi kertas saring dengan bantuan

pompa vakum. Hasil kemudian diuapkan dengan rotary evaporator pada suhu 70°C

untuk menguapkan pelarut pada ekstrak. Ekstrak diletakan pada cawan petri dan

diuapkan kembali pada waterbath pada suhu 50-60°C untuk menghilangkan pelarut

yang mungkin masih ada dalam ekstrak. Kemudian dihitung persen rendemen setelah

didapat ekstrak kental. % RendemenBobot ekstrak

Bobot simplisia yang dihitung × 100%


5

Pembuatan larutan stok dan variasi konsentrasi amoksisilin (AMX)

Tablet amoksisilin 500 mg digerus dan dilarutkan dalam 5 ml aquadest steril

sehingga didapat konsentrasi 100 mg/ml. Konsentrasi 100 mg/ml diambil 1 ml

kemudian ditambahkan aquadest steril hingga 10 ml sehingga didapat konsentrasi

larutan 10 mg/ml. Pada konsentrasi larutan 10 mg/ml diambil 1 ml ditambahkan

aquadest steril hingga 10 ml sehingga didapat larutan stok 1 mg/ml.

Konsentrasi amoksisilin yang dibuat adalah 200, 400, 800 μg/ml. Cara:

larutan stok 1 mg/ml diambil 8 ml dan ditambahkan aquadest steril hingga 10 ml

hingga didapat konsentrasi 800 μg/ml. Konsentrasi larutan 800 μg/ml, diambil 5 ml

dan ditambahkan aquadest steril hingga 10 ml sehingga didapatkan konsentrasi

amoksisilin 400 μg/ml. Pengenceran dilakukan dengan cara yang sama hingga

didapat konsentrasi 200 μg/ml.

Pembuatan larutan stok dan variasi konsentrasi ekstrak metanol daun sirih

(EMDS)

Ekstrak kental metanol ditimbang 4 gram dilarutkan ke dalam 10 ml DMSO

1% steril hingga diperoleh konsentrasi larutan stok 400 mg/ml. Konsentrasi ekstrak

metanol daun sirih yang dibuat adalah 50, 100, 200, 400 mg/ml. Cara: larutan stok

400 mg/ml diambil 5 ml dan ditambahkan DMSO 1% steril hingga 10 ml sehingga

konsentrasi 200 mg/ml. Pengenceran dilakukan dengan cara yang sama hingga

didapat konsentrasi 50 mg/ml.

Penyiapan bakteri uji dan suspensi bakteri

Kultur bakteri Pseudomonas aeruginosa diambil 1-2 ose ke Nutrient Broth

(NB) Agar steril diinkubasi pada suhu 37°C selama 16-24 jam untuk mendapatkan

stok bakteri. Suspensi bakteri diambil secukupnya diencerkan dengan Buffered

Pepton Water (BPW kemudian disetarakan kekeruhannya dengan larutan standar

McFarland 0.5 dengan bantuan nephelometer.


6

Uji aktivitas antimikroba amoksisilin (AMX), ekstrak metanol daun sirih

(EMDS) dengan metode difusi sumuran

Suspensi bakteri yang telah disetarakan dengan Mc Farland 0.5 diambil 1 ml

kemudian ditambahkan pada media NA steril, divortex , dipindahkan ke cawan petri.

Setelah media memadat, dibuat sumuran. Berikut yang diujikan dengan metode difusi

sumuran: Kontrol negatif (DMSO 1%, aquadest, dan BPW); Konsentrasi EMDS

tunggal 50, 100, 200, 400 mg/ml; Konsentrasi Amoksisilin tunggal 200, 400, 800

μg/ml. Pengukuran dilakukan 24 jam setelah perlakuan dan diukur dalam satuan mm.

Pengukuran zona hambat dilakukan dengan rumus: ((𝑥−𝑑)+(𝑦−𝑑))

2 (Sendy dkk., 2014).

Gambar 1. Cara Pengukuran Zona Hambat


7

Penentuan kadar hambat minimum (KHM) dengan metode checkboard

Pengukuran dilakukan dengan microplate reader di Laboratorium

Parasitologi, Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta (Lampiran

3)

Gambar 2. Rancangan Pengukuran dengan metode Checkboard (Hijau muda: variasi

konsentrasi ekstrak metanol daun sirih tunggal; Pink: variasi konsentrasi amoksisilin

tunggal (kontrol positif); Kuning: kombinasi ekstrak metanol daun sirih dan

amoksisilin (1:1); Biru (B1): blank media dan pelarut; Hijau tua B2: blank ekstrak

metanol daun sirih 50 mg/ml; Hijau tua B3: blank ekstrak metanol daun sirih 100

mg/ml; Hijau tua B4: blank ekstrak metanol daun sirih 200 mg/ml; Hijau tua B5:

blank ekstrak metanol daun sirih 50 mg/ml, kombinasi; Hijau tua B6: blank ekstrak

metanol daun sirih 100 mg/ml, kombinasi; Hijau tua B7: blank ekstrak metanol daun

sirih 200 mg/ml, kombinasi).

Berikut penjelasan perlakuan:

a. Blank media dan pelarut (B1) berisi 50 μl NB dan pelarut aquadest, DMSO 1%, dan

BPW dengan perbandingan 1:1.


8

b. Blank ekstrak metanol daun sirih tunggal hanya berisikan variasi konsentrasi ekstrak

metanol daun sirih sebanyak 50 μl dibagi menjadi 3 yaitu: blank ekstrak metanol

daun sirih konsentrasi 50 mg/ml (B2), konsentrasi 100 mg/ml (B3), konsentrasi 200

mg/ml (B4).

c. Blank ekstrak metanol daun sirih kombinasi hanya berisikan variasi konsentrasi

ekstrak metanol daun sirih sebanyak 25 μl dibagi menjadi 3 yaitu: blank ekstrak

kombinasi konsentrasi 50 mg/ml (B5), konsentrasi 100 mg/ml (B6), dan konsentrasi

200 mg/ml (B7).

d. Konsentrasi amoksisilin yang diujikan adalah 200, 400, 800 μg/ml. Well B1-D1, F1-

H1, F2-H2 merupakan variasi konsentrasi amoksisilin tunggal. Cara: well diisi NB

sebanyak 50 μl, 50 μl variasi konsentrasi amoksisilin, dan 50 μl suspensi bakteri.

e. Konsentrasi ekstrak metanol daun sirih yang diujikan adalah 50, 100, 200 mg/ml.

Well A2-A10 merupakan variasi konsentrasi ekstrak metanol daun sirih tunggal.

Cara: well diisi NB sebanyak 50 μl, 50 μl variasi konsentrasi ekstrak metanol daun

sirih , dan 50 μl suspensi bakteri.

f. Well berwarna kuning adalah kombinasi ekstrak metanol daun sirih dan amoksisilin

dengan berbagai variasi konsentrasi. Cara: well diisi NB sebanyak 50 μl, 25 μl variasi

konsentrasi ekstrak metanol daun sirih, 25 μl variasi konsentrasi amoksisilin, dan 50

μl suspensi bakteri.

g. Kontrol pertumbuhan bakteri (well bewarna coklat): 50 μl NB dan 50 μl suspensi

bakteri. Kontrol negatif (well bewarna orange): 50 μl NB dan pelarut aquadest,

DMSO 1%, dan BPW, 50 μl suspensi bakteri.


9

Pengukuran nilai Fractional Inhibitory Concentration Index (FICI)

Penentuan nilai kadar hambat minimum (KHM) ini akan digunakan untuk

menentukan Fractional Inhibitory Concentration Index (FICI). Fractional Inhibitory

Concentration Index (FICI) dapat dihitung dengan rumus :

FICI =KHM ekstrak kombinasi

KHM ekstrak tunggal+

KHM obat kombinasi

KHM obat tunggal

Nilai FICI ≤ 0.5 menunjukan efek sinergis; FICI 0.5 – 4 indifferent, dan FICI > 4

menunjukan efek antagonis (Blesson et al. 2015).

Teknik Analisis Data Penelitian

Analisis data pengukuran efek dalam kombinasi diukur secara statistik yang diawali

dengan menguji distribusi normalitas dengan uji Shapiro-Wilk. Uji homogenitas

dilakukan dengan uji Levene. Apabila didapati data terdistribusi normal dan variansi

data homogen, maka dilanjutkan dengan uji One Way ANOVA. Jika ditemukan

perbedaan, maka dilanjutkan Post-Hoc Tukey HSD pada taraf kepercayaan 95%.


10

HASIL DAN PEMBAHASAN

Determinasi tanaman dilakukan untuk memastikan bahwa tanaman yang

digunakan adalah benar tanaman yang dimaksud untuk digunakan dalam penelitian.

Ciri tanaman yang digunakan sama dengan hasil determinasi yang dilakukan di

Laboratorium Biologi Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada,

Yogyakarta, yang disertai dengan surat keterangan keaslihan tanaman (Lampiran 1)

yang digunakan sebagai bukti bahwa tanaman yang digunakan dalam penelitian

merupakan tanaman sirih (Piper betle L.).

Daun sirih yang di dapat dilakukan sortasi basah secara manual untuk

memisahkan pengotor yang menempel pada daun sirih sehingga mendapatkan daun

sirih yang berkualitas. Setelah proses sortasi basah, dilakukan penimbangan daun

sirih. Hasil penimbangan daun sirih yang diperoleh penimbangan awal 3500 gram

dan penimbangan setelah kering 584.63 gram. Proses pengeringan bertujuan untuk

mempermudah dalam penyerbukan dan mengurangi kadar air dalam simplisia

sehingga tidak mudah ditumbuhi oleh kapang dan bakteri (Manoi, 2015).

Pengeringan dilakukan hingga daun sirih berubah warna dan mudah dihancurkan

sehingga akan mudah untuk dibuat serbuk.

Simplisia kering daun sirih dilakukan penetapan kadar air. Penetapan kadar air

menggunakan metode destilasi toluene karena terdapat kandungan simplisia yang

bersifat termolabil terhadap panas (Ioannou et al. 2012). Tujuan dari penetapan kadar

air untuk memberikan batasan minimal atau rentang tentang besarnya kandungan air

yang diperbolehkan pada simplisia (Zainab et al. 2016). Menurut Direktorat Jenderal

Bina Kefarmasian Kefarmasian dan Alat Kesehatan RI. 2011, kadar air yang

diperbolehkan kurang dari 10% hal ini bertujuan untuk menghindari cepatnya

pertumbuhan jamur dalam ekstrak. Volume air yang didapat 0,2 ml, berat simplisia

9,9811 gram. Kadar air dihitung dengan menggunakan rumus :

% 𝐾𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑎𝑖𝑟 =𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑎𝑖𝑟 (𝑚𝐿)

𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑡𝑖𝑚𝑏𝑎𝑛𝑔 (𝑔) × 100


11

Maka dari hasil menunjukkan bahwa kadar air pada simplisia masih masuk dalam

rentang batas yang diperbolehkan yaitu 2,0037%.

Pembuatan ekstrak metanol daun sirih dilakukan dengan metode maserasi.

Metode maserasi dipilih karena tidak membutuhkan pemanasan sehingga tidak

merusak senyawa-senyawa yang terdapat di dalam ekstrak yang memiliki fungsi

sebagi antibakteri yang bersifat termolabil seperti flavonoid (Ioannou et al. 2012).

Prinsip dari metode maserasi yaitu keseimbangan konsentrasi komponen aktif di

dalam sel simplisia dan di dalam pelarut sama. Hasil maserasi yang didapat disaring

dengan corong bucher yang dilapisi oleh kertas saring agar partikel-partikel kecil dari

serbuk tidak ikut tersaring. Hasil filtrat kemudian di uapkan dengan menggunakan

rotary evaporator pada suhu 70 ⁰C. Prinsip dari rotary evaporator yaitu intrumen

yang menggunakan prinsip destilasi (pemisahan). Memisahkan suatu larutan dari

pelarutnya sehingga dihasilkan ekstrak dengan kandungan kimia tertentu sesuai yang

diinginkan.

Setelah proses penguapan selesai dan telah mendapat ekstrak kental maka

dilakukan bobot tetap. Bobot tetap dilakukan untuk memastikan bahwa pelarut yang

digunakan sudah tidak ada di dalam ekstrak. Ekstrak dikatakan sudah memenuhi

bobot tetap saat penimbangan berturut-turuk ekstrak yang dikeringkan setiap 1 jam

tidak melebihi 0,5 mg (Peraturan Menteri Kesehatan. 2009). Hasil bobot tetap yang

didapat sebesar 11,3313 gram sehingga % rendemen yang didapat yaitu :

% 𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 =𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘

𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖ℎ𝑖𝑡𝑢𝑛𝑔 × 100%

=11,3313 gram

59,9357 gram × 100%

= 18, 9057%


12

Selanjutnya dilakukan persiapan untuk melakukan uji kombinasi antibiotik

amoksisilin dengan ekstrak metanol daun sirih. Tahap pertama yang dilakukan yaitu

melakukan sterilisasi alat dan bahan. Setelah selesai melakukan sterilisasi dilakukan

pembuatan pelarut ekstrak. Pelarut yang digunakan untuk melarutkan ekstrak yaitu

DMSO 1%. Pemilihan DMSO 1% karena tidak memberikan aktivitas antibakteri. Hal

ini didukung dengan penelitian Sangkanu et al. 2017, yang menyatakan bahwa

DMSO 1% tidak memberikan zona hambat disekitar sumuran. Setelah dilakukan

pembuatan pelarut ekstrak dilanjutkan dengan pembuatan stok dan suspensi bakteri.

Bakteri uji yang digunakan diidentifikasi (Lampiran 2) terlebih dahulu untuk

memastikan kultur bakteri yang digunakan benar kultur bakteri Pseudomonas

aeruginosa. Sebelum digunakan, stok bakteri diambil secukupnya dan diencerkan

dengan Buffered Pepton Water (BPW) kemudian disetarakan kekeruhannya dengan

larutan standar Mc Farland 0.5 agar jumlah bakteri yang digunakan untuk perlakuan

tetap sama. Dibuat penanaman bakteri pada media Nutrient Agar padat secara poor

plate untuk memastikan bahwa bakteri yang digunakan dapat bertumbuh baik pada

media Nutrient Agar.

(a) (b)

Gambar 3. Kontrol Pertumbuhan Kontrol Media

Hasil pengamatan menunjukkan bahwa bakteri Pseudomonas aeruginosa

dapat bertumbuh baik pada media Nutrient Agar dengan ditandai media menjadi


13

tampak keruh seluruhnya (Gambar a). Sedangkan pada (Gambar b) merupakan

kontrol media yang tampak bening, sehingga menunjukkan bahwa teknik aseptis

yang dilakukan sudah tepat dan tidak ada kontaminasi.

Selanjutnya dilakukan pembuatan variasi konsentrasi antibiotik amoksisilin

dan variasi ekstrak metanol daun sirih. Permbuatan konsentrasi antibiotik berdasarkan

kadar hambat minimum yang dihasilkan untuk menghambat bakteri Pseudomonas

aeruginosa. Menurut Clinical and Laboratory Standards Institute (2016), kadar

hambat minimum antibiotik amoksisilin yaitu 32 µg/ml. Kemudian antibiotik

amoksisilin 32 µg/ml dilakukan uji difusi sumuran untuk melihat apakah benar pada

konsentrasi tersebut mampu menghambat pertumbuhan bakteri uji. Hasil yang di

dapat pada konsentrasi 32 µg/ml antibiotik amoksisilin tidak menunjukkan adanya

penghambatan terhadap Pseudomonas aeruginosa maka untuk menentukan kadar

hambatan, konsentrasi dinaikkan menjadi 64 µg/ml dan 128 µg/ml. Pada hasil

pengamatan amoksisilin konsentrasi 64 µg/ml dan 128 µg/ml belum mampu memberi

penghambatan terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa. Kemudian dilakukan

peningkatan konsentrasi antibiotik kembali menjadi 200 µg/ml ; 400 µg/ml dan 800

µg/ml. Pada konsentrasi 400 µg/ml dan 800 µg/ml menunjukkan adanya zona

hambat, sedangkan pada konsentrasi 200 µg/ml zona hambat hanya sedikit/kecil.

(a) (b)

Gambar 4. Konsentrasi AMX dan EMDS

Keterangan gambar a dan b : 1. Pelarut ; 2a. AMX 400 µg/ml ; 2b. AMX 800 µg/ml; 3. EMDS 50

mg/ml ; 4. EMDS 100 mg/mg ; 5. EMDS 200 mg/ml ; 6. EMDS 400 mg/ml


14

Adanya perbedaan konsentrasi hambat antibiotik amoksisilin dengan acuan

bisa saja disebabkan karena bakteri Pseudomonas aeruginosa yang digunakan sudah

tahan atau kebal terhadap antibiotik amoksisilin. Hasil dapat diketahui konsentrasi

penghambatan antibiotik amoksisilin untuk Pseudomonas aeruginosa dimulai dari

konsentrasi 200 µg/ml, 400 µg/ml, 800 µg/ml kemudian dilakukan pengukuran

diameter zona hambat dengan mengukur diameter X dan Y dalam satuan millimeter,

masing-masing dikurangi lubang sumuran . Hasil kemudian dijumlah dan dibagi dua.

Rumus diameter zona hambat (𝑋−𝑑)+(𝑌−𝑑)

2 (Sendy et al. 2014). Didapat zona hambat

konsentrasi 200 µg/ml yaitu 2,5 mm, konsentrasi 400 µg/ml : 5 mm dan 800 µg/ml

sebesar 6,5 mm. Berdasarkan hasil zona hambat pada antibiotik amoksisilin

konsentrasi 200 µg/ml memiliki daya hambat lemah sedangkan konsentrasi 400

µg/ml ; 800 µg/ml memiliki daya hambat sedang terhadap Pseudomonas aeruginosa

dimana hasil diameter zona hambat berada pada rentang 5-10 mm. Selanjutnya

dilakukan pembuatan variasi konsentrasi ekstrak metanol daun sirih. Menurut

penelitian Bhardwaj dan Tiwari (2017) kadar hambat minimum ekstrak metanol daun

sirih sebesar 40 mg/ml dapat menghambat bakteri Pseudomonas aeruginosa.

Dilakukan pengecekan untuk konsentrasi 40 mg/ml apakah dapat memberikan

penghambatan untuk bakteri uji. Pada konsentrasi 40 mg/ml ekstrak metanol daun

sirih dilakukan uji difusi sumuran dan belum menunjukan adanya penghambatan. Hal

ini dapat dipengaruhi oleh bakteri Pseudomonas aeruginosa yang sudah terlalu kuat

atau resistensi sehingga ekstrak sirih pada konsentrasi tersebut tidak dapat

menghambat pertumbuhan bakteri. Untuk mengetahui konsentrasi hambat maka

dilakukan peningkatan konsentrasi yaitu 50 mg/ml, 100 mg/ml dan 200 mg/ml.

Hasil yang didapat menunjukkan bahwa pada konsentrasi 50 ; 100 ; 200

mg/ml memberikan penghambatan. Pada konsentrasi 50 mg/ml zona hambat yang

dihasilkan lebih besar dibandingkan dengan 100 mg/ml, begitu juga dengan 100

mg/ml zona hambat yang dihasilkan lebih besar dibandingkan 200 mg/ml. hasil zona

hambat ekstrak metanol daun sirih sebagai berikut :


15

Table I. Hasil Diameter Zona Hambat Ekstrak metanol Daun Sirih (EMDS)

Konsentrasi Mean ± SD

EMDS 50 mg/ml 10,667 mm ± 0,2887

EMDS 100 mg/ml 8,833 mm ± 0,764

EMDS 200 mg/ml 6,333 mm ± 2,020

Negatif 0 ± 0

N = 3

Pada ekstrak metanol daun sirih konsentrasi 50 mg/ml memiliki daya hambat

kuat terhadap Pseudomonas aeruginosa sedangkan, konsentrasi 100 mg/ml ; 200

mg/ml memiliki daya hambat sedang terhadap Pseudomonas aeruginosa. Menurut

Bian et al. 2015 dikatakan sangat kuat jika diameter zona hambat ≥20 mm, kuat

apabila 10-20 mm, sedang jika zona hambat 5-10 mm dan lemah apabila <5 mm.

Setelah ditentukan konsentrasi antibiotik dan ekstrak metanol maka dilakukan

uji kombinasi. Menurut Blesson et al. 2016 saat suatu agen antimikroba di kombinasi

maka akan menghasilkan efek yang berbeda-beda. Efek yang dihasilkan antara lain

sinergis, indifferent dan antagonis. Uji kombinasi ini menggunakan metode

checkboard dengan menggunakan 96well yang diukur dengan microplate reader yang

memiliki prinsip fotometrik. Setiap well berisi 150 µl yang terdiri 50 µl media

Nutriet Broth Agar, 50 µl suspensi bakteri Pseudomonas aeruginosa, 50 µl antibiotik

amoksisilin tunggal/ ekstrak metanol daun sirih tunggal atau kombinasi amoksisilin

dan ekstrak metanol daun sirih masing-masing 25 µl.


16

Tabel II. Hasil Metode Checkboard

EMDS

50 mg/ml

EMDS

100 mg/ml

EMDS 200

mg/ml

0,111

0,183

0,328

Amoksisilin 200 µg/ml

0,412 0,115 0,121 0,218

Amoksisilin 400 µg/ml 0,375 0,091 0,113 0,206

Amoksisilin 800 µg/ml 0,255 0,122 0,145 0,256

Keterangan :

*Hasil absorbansi metode checkboar setelah dikurangi blank.

** Kontrol Pertumbuhan sebagai pembanding = 0,632.

Kadar hambat minimum (KHM) merupakan konsentrasi dimana suatu agen

antibakteri yang digunakan menghambat penuh pertumbuhan mikroorganisme (Vipra

et al. 2013). KHM ditentukan berdasarkan optical density atau absorbansi yang

diukur dengan mikroplate reader. Kekeruhan menjadi indikator dalam menentukan

konsentrasi bakteri. Semakin keruh kultur bakteri maka absorbansi yang dihasilkan

semakin besar. Hasil absorbansi dibandingkan dengan kontrol pertumbuhan dan

dilihat absorbansi yang paling mendekati kontrol pertumbuhan. Hasil tabel

menjelaskan kadar hambat minimum yang dihasilkan jika dibandingkan dengan

kontrol pertumbuhan mengalami penurunan. KHM amoksisilin tunggal yaitu

konsentrasi 200 µg/ml sedangkan KHM amoksisilin kombinasi pada konsentrasi 800

µg/ml. Pada ekstrak tunggal KHM yaitu 200 mg/ml sedangkan untuk KHM

kombinasi ekstrak metanol daun sirih yaitu konsentrasi 200 mg/ml. Setelah

mengetahui nilai kadar hambat minimum dilakukan perhitungan dengan rumus FICI

yaitu 𝐾𝐻𝑀 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝐾𝑜𝑚𝑏𝑖𝑛𝑎𝑠𝑖

𝐾𝐻𝑀 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑡𝑢𝑛𝑔𝑔𝑎𝑙+

𝐾𝐻𝑀 𝑂𝑏𝑎𝑡 𝐾𝑜𝑚𝑏𝑖𝑛𝑎𝑠𝑖

𝐾𝐻𝑀 𝑂𝑏𝑎𝑡 𝑇𝑢𝑛𝑔𝑔𝑎𝑙 maka diperoleh nilai FICI sebesar 5

yang artinya bersifat antagonis.

Analisis statistik untuk mengetahui kebermaknaan perbedaan antara kelompok

pertumbuhan bakteri, kontrol negatif, kombinasi dengan masing-masing tunggalnya.


17

Uji Shapiro-Wilk menunjukkan data terdistribusi normal. Uji variansi levene

mendapati data memiliki variansi homogen. Syarat pengujian ANOVA terpenuhi

sehingga dilakukan uji perbandingan lebih dari dua kelompok dengan ANOVA-One

Way. Hasil uji ANOVA menunjukan adanya perbedaan signifikan pada data dengan

nilai p dibawah 0,05 sehingga dilanjutkan uji Post-Hoc Tukey (Lampiran 6) .

Pada efek antagonis menyebabkan aktivitas antibakteri mengalami penurunan.

Efek antagonis merupakan efek agen kombinasi lebih rendah atau lemah

dibandingkan dengan efek agen tunggalnya (Jain et al. 2011). Efek antagonis bisa

disebabkan karena efek dari kedua bahan yang digunakan memiliki tempat

pengikatan yang sama dari target aksi yang sama. Dalam penelitian ini, peneliti

menduga adanya senyawa dari tanaman yang memiliki mekanisme aksi yang sama

seperti amoksisilin sehingga efek yang dihasilkan bersifat antagonis. Amoksisilin

memiliki mekanisme aksi dengan menghambat sintesis dinding sel bakteri dengan

mengikat satu atau lebih pada ikatan penisilin-protein (PBPs – Protein binding

penisilin’s), sehingga menyebabkan penghambatan pada tahapan akhir transpeptidase

sintesis peptidoglikan dalam dinding sel bakteri, akibatnya biosintesis dinding sel

terhambat, dan sel bakteri menjadi pecah (Kaur et al. 2011). Pada tanaman daun sirih

terdapat kandungan eugenol, Hydroxychavicol (HC). Eugenol memiliki mekanisme

yang menyebabkan kerusakan pada dinding sel (menginduksi lisisnya sel) dan

menyebabkan kebocoran protein (Oyedemi et al. 2009). Hydroxychavicol (HC)

menyebabkan gangguan permeabilitas membran mikroba karena memiliki

mekanisme dengan mengubah struktur membrane (Oyedemi et al. 2009). Adanya

kesamaan mekanisme aksi dapat menyebabkan suatu kombinasi tidak menghasilkan

efek sinergis tetapi efek yang dihasilkan dapat bersifat indifferent dan antagonis.


18

KESIMPULAN dan SARAN

Hasil yang didapat menunjukkan terdapat perbedaan bermakna. Kombinasi

antibiotik amoksisilin dengan ekstrak metanol daun sirih terhadap Pseudomonas

aeruginosa menghasilkan efek bersifat antagonis dimana nilai FICI adalah 5.

Saran, dapat dilakukan penambahan seri konsentrasi antibiotik amoksisilin

dan ekstrak metanol daun sirih dalam metode checkboard agar lebih jelas dalam

menentukan nilai kadar hambat minimum.


19

DAFTAR PUSTAKA

Badan Pengawas Obat dan Makanan RI, 2010. Acuan Sediaan Herbal. Volume 5,

Edisi 1, Jakarta : Badan Pengawas Obat dan Makanan, 6-8.

Bian, F., Febby, E.F.K., Marhaenus, J. R., 2015. Daya Hambat Ekstrak Etanol

Schismatoglottis Sp. Terhadap Bakteri Staphylococcus Aureus Dan Escherichia

Coli. Jurnal Ilmiah Sains, 15(2), 149-153.

Blesson, J., Saji, C. V, Nivya, R.M., and Kumar, R., 2015. Synergistic Antibacterial

Activity of Natural Plant Extracts and Antibiotics Against Methicillin Resistant

Staphylococcus Aureus ( Mrsa ), 4 (3), 741–763.

Clinical and Laboratory Standards Intitute., 2016. Performance Standards for

Antimicrobial Susceptibility Testing. 26 th edition, 62.

Departemen Kesehatan RI, 2009. Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonsesia

Nomor 2046/MENKE/PER/XII/201. Pedoman Umum Penggunaan Antibiotik, 1.

Direktorat Jenderal Bina Kefarmasian Kefarmasian dan Alat Kesehatan RI, 2011.

Farmakope Herbal. Suplemen II. Edisi 1, Jakarta : Kementerian Kesehatan RI,

110-111.

Dwivedi, V. and Tripathi, S., 2014. Review study on potential activity of Piper betle.

Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry JPP, 93 (34), 9398.

Ioannou, I., Ines, H., Salem, H., Celine, C., Mohamed, G., 2012. Review of the

effects of food processing and formulation on flavonol and anthocyanin

behaviour. Journal of Food Engineering, 111, 208-217.

Jain, S.N., Vishwanatha, T., Reena, V., Divyashree, B.C., Sampath, A.,

Siddhalingeshwara, K.G., Venugopal, N., and Ramesh, I., 2011. Antibiotic

Synergy Test: Checkerboard Method on Multidrug Resistant Pseudomonas

aeruginosa. International Research Journal of Pharmacy, 2 (12), 196–198.

Khan, N. and Kumar, J., 2011. Evaluation of Antibacterial Properties of Extracts of

Piper betel Leaf. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Sciences, 11 (11),

1–3.

Kaur, S.P., Rekha, R., Sanju, N., 2011. Amoxicillin : A Broad Spectrum Antibiotic.


20

International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 3 (3), 30-37.

Manoi, F., 2015. Pengaruh Kehalusan Bahan Dan Lama Ekstraksi Terhadap

Mutu Ekstrak Tempuyung (Sonchus Arvensis L.). Jurnal Penelitian Pertanian

Terapan, 15(2),156-161.

Noor, S., 2016. Synergistic Effect of the Methanolic Extract of Lemongrass and

Some Antibiotics to Treat Urinary Tract Bacteria. Journal of Biosciences and

Medicines, 48–58.

Oyedemi, S.S., Okoh, A.I., Mabinya, L.V., Pirochenva, G., Afolayan, A.J., 2009. The

proposed mechanism of bactericidal action eugenol, α-terpineol, γ-terpinene

against Listeria monocytogenes, Streptococcus pyogenes, Proteus vulgaris, and

Escherichia coli. African Journal of Technology, 8(7), 1280-1286.

Rustini., Silvya, I., Fithriani, A., 2016. Penentuan MultI Drug Resisten Pseudomonas

aeruginosa (MDRPA) Yang Berasal Dari Sampel Klinis Pasien RSUP DR. M.

DJAMIL Padang. Prosiding Rakernas dan Pertemuan Ilmiah Tahunan Ikatan

Apoteker Indonesia, 87-91.

Sendy, V.A.A., Pujiastuti, P., Ernawati, T., 2014. Daya Antibakteri Ekstrak Daun

Sirih Merah Terhadap Pophyromonas gingivalis. Artikel Ilmiah Hasil Penelitian

Mahasiswa Universitas Jember, 1-5.

Taukoorah, U., Lall, N., Mahomoodaly, A., 2016. Piper betle L. (betle quid) shows

bacteriostatic, additive, and synergistic antimicrobial action when combined

with conventional antibiotics. South African Journal of Botany, Vol. 105, 133-

140

Tiwari, P., Kumar, B., Kaur, M., Kaur, G., and Kaur, H., 2011. Phytochemical

screening and Extraction: A Review. International Pharmaceutical Sciencia, 1

(1), 98–106.

Tripathi, I.P., 2010. Chemistry, Biochemistry, and Ayuverda of Indian Medicinal

Plants. International E-Publication, 50-60.

Ullah, W., Qasim, M., Rahman, H., Bari, F., Khan, S., Rehman, Z.U., Khan, Z.,


21

Dworeck, T., and Muhammad, N., 2016. Multi drug resistant Pseudomonas

aeruginosa: Pathogen burden and associated antibiogram in a tertiary care

hospital of Pakistan. Microbial Pathogenesis, 97, 209–212.

Vipra, A., Desai, S.N., Junjappa, R.P., Roy, P., Poonacha, N., Ravinder, P., Sriram,

B., Padmanabhan, S., 2013. Determining the Minimum Inhibitory Concentration

of Bacteriophage : Potential Advantages. Scientific Research, 3, 181-190.

Yuan, Z., Ledesma, K.R., Singh, R., Hou, J., Prince, R.A., and Tam, V.H., 2010.

Quantitative Assessment of Combination Antimicrobial Therapy against

Multidrug-Resistant Bacteria in a Murine Pneumonia Model. JID, 889–897.

Zainab., Faril, G., Hardi, A.W., Citra, A.E., Mustafa., Mimiek, M., 2016. Penetapan

Parameter Standarisasi Non SpesifikEkstrak Etanol Daun Belimbing Wuluh

(Averrhoa Bilimbi L.). Prosiding Rakernas dan Pertemuan Ilmiah Tahunan

Ikatan Apoteker Indonesia, 210-214.


22

Lampiran 1. Surat determinasi tanaman (daun sirih)


23

Lampiran 2. Surat identifikasi bakteri Pseudomonas aeruginosa


24

Lampiran 3. Bukti pengukuran dengan Microplate reader


25

Lampiran 4. Hasil pengukuran dengan Microplate reader


26

Lampiran 5. Sertifikat pengujian statistik dengan SPSS


27

Lampiran 6. Hasil perhitungan statistik

Test of Homogeneity of Variances

MIC

Levene Statistic df1 df2 Sig.

1.672 4 10 .232

Tests of Normality

Kelompok

Shapiro-Wilk

Statistic df Sig.

MIC Kontrol Pertumbuhan Bakteri .976

3 .702

Kontrol Negatif .873 3 .304

MIC Ekstrak Metanol Daun Sirih .900 3 387

MIC Antibiotik Amoksisilin .939 3 .522

MIC Kombinasi EMDS dan Amoksisilin .814 3 .149

a. Lilliefors Significance Correction

Descriptives

MIC

N Mean

Std.

Deviation Std. Error

95% Confidence Interval for

Mean

Lower Bound Upper Bound

K

PERTUMBUHAN 3 .58000 .044542 .025716 .46935 .69065

K NEGATIF 3 .67800 .063151 .036460 .52113 .83487

MIC KOMBINASI 3 .31500 .032140 .018556 .23516 .39484

MIC ANTIBIOTIK 3 .41867 .040772 .023540 .31738 .51995

MIC EKSTRAK 3 .37967 .017388 .010039 .33647 .42286

Total 15 .47427 .143482 .037047 .39481 .55372


28

ANOVA

Daun sirih

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups .270 4 .068

37.

666 .000

Within Groups .018 10 .002

Total .288 14

Multiple Comparisons

Dependent Variable: MIC

Turkey HSD


29

BIOGRAFI PENULIS

Penulis skripsi bernama Valentina Natalia Dwi Kurniawati,

lahir di Menggala pada tanggal 28 Desember 1995. Penulis

yang akrab dipanggil Valen merupakan anak kedua dari

dua bersaudara dari pasangan Florensius Roseno dan Yulia

Sumarni. Penulis menempuh pendidikannya di TK Dharma

wanita Bumi Dipasena (2001 – 2002), SD Negeri 1 Bumi

Dipasena (2002 – 2008), SMP Xaverius Pringsewu (2008 –

2011), SMA Negeri 1 Pagar Dewa (2011 – 2014), dan pada tahun 2014 melanjutkan

pendidikan di Program Studi Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

Selama perkuliahan, penulis aktif dalam mengikuti kegiatan seminar, kepanitiaan dan

organisasi seperti Cara Belajar Insan Aktif (2014), Desa Mitra 2 dan 3 (2015), Donor

Darah (2016).


UJI EFEK KOMBINASI ANTIBIOTIK AMOKSISILIN DENGAN … · Pseudomonas aeruginosa adalah 5 yang...

Documents

Transcript of UJI EFEK KOMBINASI ANTIBIOTIK AMOKSISILIN DENGAN … · Pseudomonas aeruginosa adalah 5 yang...