TUGAS BAKTERIOLOGI

Oleh :Tamya Dhita Habiba R.A(P27834113006)

D4 Analis KesehatanPOLTEKKES KEMENKES SURABAYA2014-2015

Macam-macam pewarnaan bakteriI. Pewarnaan sederhana Tujuan : untuk melihat morfologi bakteri secara umum.Berbagai macam tipe morfologi bakteri (kokus, basil, spirilum, dan sebagainya) dapat dibedakan dengan menggunakan pewarna sederhana, yaitu dengan mewarnai sel-sel bakteri. Menggunakan satu macam zat warna, misalnya :Methylene blue, crystal violet, atau carbol fuchsin. Komposisi pewarnaMethylen blue : Methylene blue5gramAlkohol 96%95mLCrystal violet : Crystal violet5gramAlkohol 96%95mLCarbol fuchsin : Carbol fuchsin5gramAlkohol 96%95mL Pembacaan hasil Prosedur

II. Pewarnaan gram Tujuan : membedakan bakteri gram positif dan bakteri gram negatif Menggunakan lebih dari satu zat warna, yaitu :Zat pewarna kristal violet / carbol gentian violet: pewarna primerLarutan iodin / lugol : penguatAlkohol 95% / etanol: pelunturSafranin / air fuchsin : pewarna pembanding Komposisi pewarnaCrystal violet : Crystal violet 2gram Alkohol 95%20mL Aquadest 80mL Amonium oksalat0,8gramLugol : Iodium1gram KI2gram Aquadest300mLAir fuchsin : Cat induk Fuchsin 10mL Aquadest90mL Pembacaan hasilBakteri yang terwarnai dengan pewarnaan ini dibagi menjadi dua kelompok, yaitu bakteri Gram Positif dan bakteri Gram Negatif. Bakteri Gram positif akan mempertahankan zat pewarna kristal violet dan karenanya akan tampak berwarna ungu tua di bawah mikroskop. Adapun bakteri gram negatif akan kehilangan zat pewarna kristal violet setelah dicuci dengan alkohol, dan sewaktu diberi zat pewarna pembandingnya yaitu dengan zat pewarna air fuchsin atau safranin akan tampak berwarna merah. Perbedaan warna ini disebabkan oleh perbedaan dalam struktur kimiawi dinding selnya. Dinding sel bakteri gram positif tebal sedangkan dinding sel bakteri gram negatif tipis. Prosedur

III. Pewarnaan bakteri tahan asam Tujuan : membedakan bakteri tahan asam dan bakteri tidak tahan asam Terdapat dua cara perwarnaan, yaitu :1. Pewarnaan Ziehl-Nelsen(pewarnaan panas)Prinsip : Dinding bakteri yang tahan asam mempunyai lapisan lilin dan lemak yang sukar ditembus cat. Oleh karena pengaruh fenol dan pemanasan maka lapisan lilin dan lemak itu dapat ditembus cat basic fuchsin. Pada waktu pencucian lapisan lilin dan lemak yang terbuka akan merapat kembali. Pada pencucian dengan asam alkohol warna fuchsin tidak dilepas. Sedangkan pada bakteri tidak tahan asam akan luntur dan mengambil warna biru dari methylen blue.Pewarna yang digunakan :Carbol fuchsin : pewarna primerHCl alkohol: pelunturLoeffler methylene blue: pewarna pembandingKomposisi pewarna :Carbol fuchsin : Basic fuchsin1gram Alkohol 96%10mL Carbolic acid kristal5gram Aquadest100mLHCl alkohol: HCl pekat5mL Alkohol 96%100mLLoeffler methylene blue : Cat induk methylene blue30mL 10% NaOH/KOH0,1mL Aquadest100mLPembacaan hasil :Bakteri tahan asam berwarna merah sedangkan bakteri tidak tahan asam berwarna biru.2. Pewarnaan Kenyoun Gabbet(pewarnaan dingin)Prinsip : Dinding bakteri yang tahan asam mempunyai lapisan lilin dan lemak yang sukar ditembus cat. Oleh karena pengaruh fenol dan kadar cat yang tinggi maka lapisan lilin dan lemak itu dapat ditembus cat basic fuchsin. Pada waktu pencucian lapisan lilin dan lemak yang terbuka akan merapat kembali. Pada pencucian dengan asam alkohol warna fuchsin tidak dilepas. Sedangkan pada bakteri tidak tahan asam akan luntur dan mengambil warna biru dari methylen blue.Pewarna yang digunakan :Carbol fuchsin: pewarna primerH2SO4: pelunturMethylene blue: pewarna pembandingKomposisi pewarna :Cat kenyoun: Basic fuchsin4gram Phenol pekat8mL Alkohol 96%20mL Aquadest 100mLCat gabbet: Methylene blue1gram H2SO4 pekat20mL Alkohol 96%30mL Aquadest50mLPembacaan hasil : Bakteri tahan asam berwarna merah sedangkan bakteri tidak tahan asam berwarna biru. Prosedur

IV. Pewarnaan spora Tujuan : untuk melihat bagian spora kuman Terdapat dua cara pewarnaan, yaitu :1. Pewarnaan KleinPrinsip : badan kuman mengikat pewarna methylene blue berwarna biru dan spora mengikat carbol fuchsin berwarna merah.Pewarna yang digunakan :Methylene blueCarbol fuchsinH2SO4Komposisi pewarna :Methylene blue : Cat induk methylene blue30mL 10% NaOH/KOH0,1mL Aquadest100mLCarbol fuchsin : Basic fuchsin1gram Alkohol 96%10mL Carbolic acid kristal5gramPembacaan hasil : pada pewarnaan metode ini akan tampak badan bakteri berwarna biru dan spora berwarna merah.2. Pewarnaan Schaeffer fultonPrinsip : badan kuman mengikat pewarna safranin atau air fuchsin berwarna merah dan spora mengikat malachit green berwarna hijau.Pewarna yang digunakan :Malachit green: pewarna primerAir fuchsin atau safranin: pewarna pembandingKomposisi pewarna :Malachit green : Malachit green oxalat 5gram Aquadest100mLAir fuchsin : Cat induk Fuchsin 10mL Aquadest90mL Pembacaan hasil : pada pewarnaan metode ini akan tampak badan bakteri berwarna merah dan spora berwarna hijau Prosedur

V. Pewarnaan kapsul Pewarnaan menggunakan metode Burry Gins Tujuan : untuk melihat kapsul pada bakteri Prinsip : Kapsul pada kuman tidak dapat mengikat zat warna, sehingga pada pemberian cat tinta cina dan calbol fuchsin terlihat bulatan terang atau transparan dengan latar belakang gelap dan badan kuman berwarna merah dari fuchsin. Pewarna yang digunakan :Crystal violet: pewarna primerCuSO4 : membilas Komposisi pewarnaCrystal violet : Crystal violet 2gram Alkohol 95%20mL Aquadest 80mLAmonium oksalat0,8gram

Pembacaan hasil : Pada pewarnaan ini akan tampak badan bakteri berwarna ungu dan kapsul berwarna biru.

Prosedur

VI. Pewarnaan flagel Tujuan : melihat flagel pada bakteri Prinsip : membuat organel tersebut dapat dilihat dengan cara melapisinya dengan mordant dalam jumlah yang cukup. Pewarna yang digunakan :Crystal violet : pewarna primerAsam tanat dan aluminium kalium sulfat : penguat Komposisi pewarnaCrystal violet : Crystal violet 2gram Alkohol 95%20mL Aquadest 80mLAmonium oksalat0,8gram Pembacaan hasil : flagel berwarna ungu Prosedur

Referensi

e-book Benson's Microb App Lab exercisesBuku laporan praktikum Bakteriologihttp://rikedianhusada.blogspot.com/p/cara-pewarnaan-bakteri.htmlhttp://id.wikipedia.org/wiki/Pewarnaan_Gramhttp://labmikrobiologi.blogspot.com/2012/02/pewarnaan-gram.html