Pengaruh berbagai konsentrasi A-438.079 pada histologis ginjalcedera dan fungsi ginjalTikus tunduk pengobatan cisplatin dikembangkan ginjal beratcedera tubular dan disfungsi dibandingkan dengan tikus kontrol normalpada hari 3. Namun, pretreatmentwith A-438079 signifikan dikurangicedera tubulus ginjal dan disfungsi ginjal di cisplatin-diinduksinefrotoksisitas. Skor cedera Tubular dan tingkat serum kreatininkeduanya secara dramatis menurun A-438079 pretreatment dalamdosis cara yang tergantung di kisaran dosis 100-300 umol / kg,Namun tidak ada perbedaan yang signifikan dalam skor cedera tubulardan tingkat kreatinin serum antara 300 umol / kg dan 400 umol / kgA-438079 kelompok pretreatment (Gambar. 1A dan B).Pengaruh berbagai konsentrasi A-438.079 pada tingkat proinflamasisitokin dalam jaringan ginjalKadar IL-1β, dan IL-18 dalam jaringan ginjal secara bermaknameningkat pada kelompok cisplatin-disuntikkan dibandingkan dengan kontrol normalKelompok pada hari 3. Setelah berbagai konsentrasi pretreatmentwith dari A-438.079 pretreatment, kadar IL-1β, dan IL-18 dalam jaringan ginjalkeduanya nyata menurun secara dosis-tergantung didosis berkisar 100 hingga 300 umol / kg. Namun tidak ada yang signifikanperbedaan dalam tingkat yang pro-inflamasi sitokin antara300 umol / kg dan 400 umol / kg A-438079 kelompok pretreatment pada hari 3(Gambar. 2A dan B). Sementara itu tingkat penghambatan 300 umol / kg A-438.079 pada peningkatan sitokin pro-inflamasi yang dekat dengan50-60% untuk tingkat IL-1β dan IL-18 dalam jaringan ginjal. Berdasarkan merekadata, kita bekerja dosis 300 umol / kg di A-438079 pretreatmentsebagai dosis blokade dalam percobaan berikut.

Imunofluoresensi untuk P2X7R di cisplatin-diinduksi nefrotoksisitasUntuk memahami peran P2X7R di cisplatin diinduksi-nefrotoksisitas,kami menguji ekspresi P2X7R di jaringan ginjal dari kontrol normaldan cisplatin diperlakukan kelompok. Imunofluoresensi pewarnaan menunjukkanyang therewas ada ekspresi P2X7R pada jaringan ginjal dari kontrol normaltikus, tapi ekspresi P2X7R adalah nyata diregulasi di ginjalSel-sel epitel tubular dari tikus cisplatin-diperlakukan (Gambar. 3A dan B).A-438079 ameliorates ginjal kerusakan jaringan: nekrosis, infiltrasi neutrofil,dan apoptosis pada cisplatin diinduksi-nefrotoksisitasPemeriksaan histokimia menunjukkan morfologi normal di normalkontrol dan kelompok kontrol A-438079 (Gambar. 4A dan B). Namun,tikus tunduk pengobatan cisplatin dikembangkan cedera ginjal berat,termasuk nekrosis tubular, akumulasi bahan PAS-positiflumen tubular (pembentukan cor), hilangnya membran brush border,dilatasi tubular dan terkenal infiltrasi sel inflamasi dalamginjal interstisial tubular pada hari 3 (Gambar. 4C). Pretreatment dengan A-438.079 dramatis meringankan kerusakan histologis dalam cisplatin diinduksi nephrotoxicitywithmild pembengkakan sel-sel epitel tubulardan beberapa formasi pemain (Gambar. 4D). Skor cedera tubular yangsecara signifikan berkurang setelah A-438079 pretreatment dibandingkan denganbahwa kelompok cisplatin-dirawat di 72 h (Gambar. 4E). Sementara A-438.079 pretreatment nyata menurun jumlah neutrofilper bidang berdaya tinggi (neutrofil / HPF) dibandingkan denganKelompok cisplatin-diperlakukan (Gambar. 4F).Apoptosis pada sel-sel epitel tubulus ginjal pada hari 3 dikonfirmasidan diukur dengan TUNEL assay. Hampir tidak ada sel apoptosis yang

diamati dalam jaringan ginjal dari kedua kelompok kontrol pada hari 3. Jumlahsel positif TUNEL / HPF telah meningkat secara signifikan dalamKelompok cisplatin diobati dibandingkan dengan kontrol yang normalkelompok (Gambar. 5A, B, dan C). A-438079 pretreatment secara signifikanberkurang jumlah sel positif TUNEL dalam jaringan ginjal dibandingkandengan kelompok cisplatin-diperlakukan (Gambar. 5D dan E).A-438079 disfungsi ginjal ditingkatkan disebabkan oleh cisplatinTidak ada perbedaan yang signifikan dalam fungsi ginjal antarakelompok kontrol A-438079 dan kelompok kontrol normal. Setelah cisplatinadministrasi tingkat BUN dan kreatinin serum yangbaik secara signifikan meningkat dibandingkan dengan kontrol yang normalkelompok. Pretreatment dengan A-438079 signifikan mengurangi tingkatBUN dan kreatinin serum dan ditingkatkan fungsi ginjal dibandingkandengan kelompok cisplatin-disuntikkan (Gambar. 6A dan B).Kadar MDA, CAT, SOD dan GSH dalam jaringan ginjalStres oksidatif yang dihitung melalui kegiatan enzim mengukurMDA, CAT, SOD dan GSH dalam homogenat jaringan ginjal.Kegiatan MDA meningkat secara signifikan, sedangkan kegiatanCAT, SOD dan GSH yang nyata menurun pada jaringan ginjal daritikus cisplatin diobati dibandingkan dengan orang-orang dari kontrol normalkelompok. Setelah A-438079 pretreatment, aktivitas MDA di jaringan ginjalitu nyata mengurangi (Gambar. 7A), sedangkan kegiatan CAT, SOD, danGSH secara signifikan meningkat dibandingkan dengan orang-orang dari cisplatin yangkelompok perlakuan (Gambar. 7B, C dan D). Tidak ada perbedaan penting dalamtingkat mereka penanda stres oksidatif antara A-438079kontrol dan kelompok kontrol normal.Ekspresi NLRP3 / ASC / Caspase-1, p53 dan protein caspase-3Efek dari A-438.079 pada ekspresi NLRP3 / ASC / caspase-1inflammasomecomponents di micewere cisplatin-diperlakukan diuji olehblotting barat. Tingkat protein NLRP3, ASC dan-caspase 1 dijaringan ginjal tikus cisplatin-disuntikkan semua signifikanmeningkat dibandingkan dengan orang-orang dari kelompok kontrol normal. Setelah-438.079 pretreatment tingkat protein dari NLRP3 / ASC / caspase-1komponen inflammasome dalam jaringan ginjal semua nyata berkurang(Gambar. 8A, B, C dan D).Gen Proapoptosis juga diuji oleh blotting barat. Ituekspresi p53 dan caspase-3 yang ditemukan nyata meningkatpada tikus cisplatin diobati dibandingkan dengan kelompok kontrol normal. Tingkat protein p53 dan caspase-3 berdua signifikanmenurun setelah A-438079 pretreatment di cisplatin-diinduksi nefrotoksisitas(Gambar. 9A, B, dan C).

ELISAKadar IL - 1β , IL - 18 , andMCP - 1 di jaringan ginjal secara bermaknameningkat pada kelompok cisplatin diobati dibandingkan denganbahwa dari kelompok kontrol normal. Setelah A- 438079 pretreatmenttingkat peradangan factorswere ini terkait secara signifikan menurundibandingkan dengan tikus cisplatin - diperlakukan ( Gambar . 10A ,B , dan C ) .

Ara. 6. Efek A- 438.079 pada fungsi ginjal di cisplatin - diinduksi nefrotoksisitas pada hari 3. Tikus diobati dengan garam ( Con ) , A - 438079 ( A - 438079 ) , cisplatin ( Cis ) , atau cisplatin denganpretreatment A - 438079 ( Cis + A - 438079 ) . Kadar BUN ( A ) dan kreatinin ( B ) keduanya meningkat secara signifikan pada tikus cisplatin - diperlakukan ( Cis ) pada hari 3 dibandingkan denganbahwa dari kelompok kontrol normal. Pra - pengobatan dengan A - 438079 signifikan mengurangi kadar BUN serum dan kreatinin dibandingkan dengan kelompok cisplatin - diperlakukan( ** P b 0,01 vs con ; ## P b 0,01 dibandingkan cisplatin , n = 12 ) .

Ara. 5. Pengaruh A- 438.079 di apoptosis sel epitel tubular dari dalam cisplatin - diinduksi nefrotoksisitas pada hari 3. Tikus diobati dengan garam ( Con ) , A - 438079 ( A - 438079 ) , cisplatin ( Cis ) , ataucisplatin ditambah pretreatment A - 438079 ( Cis + A - 438079 ) . Apoptosis dinilai dengan terminal deoxynucleotidyl transferase ( TdT ) -dimediasi nick akhir pelabelan ( TUNEL ) . Wakilgambar ginjal TUNEL assay ditunjukkan dari setiap kelompok ( A - D ) . Panah menunjukkan sel positif TUNEL ( pembesaran , × 400 ) . TUNEL pewarnaan ; pembesaran asli , × 400 . Jumlahapoptosis cellswas meningkat secara signifikan pada jaringan ginjal dari cisplatin - treatedmice , sementara pretreatmentwith A - 438079 signifikan menurunkan jumlah sel TUNEL - positif / HPFdibandingkan dengan kelompok cisplatin diobati pada hari 3 ( E ) ( ** P b 0,01 vs con ; ## P b 0,01 vs Cis , n = 12 ) .