1

PERCOBAAN X

KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS

I. Tujuan Percobaan

Adapun tujuan yang ingin dicapai praktikan setelah percobaan ini adalah

- Mengetahui dan memahami cara-cara pemisahan dan identifikasi suatu zat

dengan menggunakan kromatografi lapis tipis.

II. Landasan Teori

Kromatografi adalah suatu metode pemisahan fisik, dimana komponen

yang dipisahkan terdistribusi dalam 2 fase. Salah satu fase tersebut adalah suatu

lapisan stasioner dengan permukaan yang luas yang lainnya seperti fluida yang

mengalir lembut disepanjang landasan stasioner. Ketika pita tersebut melewati

kolom, pelebaran disebabkan oleh rancangan kolom dan kondisi pengerjaan dan

dapat diterangkan secara kuantitatif dengan pengertian jarak dengan teori kolom

adalah jantung kromatografi, pemisahan sesungguhnya komponen dicapai dalam

kolom. Kromatografi lapis tipis atau TLC(Thin layer chromatography) seperti

halnya kromatografi kertas, murah dan mudah dilakukan. Kromatografi ini

mempunyai satu keunggulan dari segi kecepatan dan kromatografi kertas.

Kromatografi lapis tipis membutuhkan hanya setengah jam saja, sedangkan

pemisahan yang umum pada kertas membutuhkan waktu beberapa jam. TLC

sangat terkenal dan rutin digunakan di berbagai laboratorium. Media

pemisahannya adalah lapisan dengan ketebalan sekitar 0,1-0,3 mm zat padat

adsorben pada lempeng kaca, plastic dan aluminium. Lempeng yang paling umum

digunakan yang berukuran 8x2 inchi. Dan zat padat yang digunakan adalah

alumina, TLC kadang-kadang disebut dengan kromatografi planar. Tidak ada cara

yang mudah dalam mengelusi komponen sampel dari lempengan (kertas) untuk

melintasi sebuah detektor tetapi telah dikembangkan peralatan untuk mengamati

lempengan dengan sifat-sifat sampel seperti itu adsorpsi sinar UV dan

pengedaran.

2

( Underwood.2006 : 487 )

KLT merupakan contoh dari kromatografi adsorpsi. Fase diam berupa

padatan dan fase geraknya dapat berupa cairan dan gas. Zat terlarut yang

diadsorpsi oleh permukaan partikel padat. Kromatografi adsorpsi memiliki

beberapa kekurangan, yaitu : a. pemilihan fase diam(adsorben), b. koefisien

distribusi untuk seringkali tergantung pada kadar total, sehingga pemisahannya

kurang sempurna.

( Soebagio,dkk. 2002 : 58-88)

Kromatografi lapis tipis (KLT) dikembangkan oleh Izmailoff dan

Schraiber pada tahun 1938. KLT merupakan bentuk kromatografi planar, selain

kromatografi kertas dan elektroforesis. Berbeda debgan kromatografi kolom yang

mana fase diamnya diisikan atau dikemas di dalamnya, pada kromatografi lapis

tipis, fase diamnya berupa lapisan yang seragam (uniform) pada permukaan

bidang datar yang didukung oleh lempeng kaca, pelat aluminium atau pelat

plastik. Meskipun demikian, kromatografi planar ini dapat dikatakan sebagai

bentuk terbuka dari kromatografi kolom.

Kromatografi lapis tipis menggunakan plat tipis yang dilapisi dengan

adsorben seperti silika gel, aluminium oksida (alumina) maupun selulosa.

Adsorben tersebut berperan sebagai fasa diam. Fasa gerak yang digunakan dalam

KLT sering disebut dengan eluen. Pemilihan eluen didasarkan pada polaritas

senyawa dan biasanya merupakan campuran beberapa cairan yang berbeda

polaritas, sehingga didapatkan perbandingan tertentu. Eluen KLT dipilih dengan

cara trial and error

.Kepolaran eluen sangat berpengaruh terhadap Rf (faktor retensi) yang

diperoleh. Faktor retensi (Rf) adalah jarak yang ditempuh oleh komponen dibagi

dengan jarak yang ditempuh oleh eluen. Rumus faktor retensi adalah: Nilai Rf

sangat karakterisitik untuk senyawa tertentu pada eluen tertentu. Hal tersebut

dapat digunakan untuk mengidentifikasi adanya perbedaan senyawa dalam

sampel. Senyawa yang mempunyai Rf lebih besar berarti mempunyai kepolaran

yang rendah, begitu juga sebaliknya. Hal tersebut dikarenakan fasa diam bersifat

3

polar. Senyawa yang lebih polar akan tertahan kuat pada fasa diam, sehingga

menghasilkan nilai Rf yang rendah. Rf KLT yang bagus berkisar antara 0,2 - 0,8.

Jika Rf terlalu tinggi, yang harus dilakukan adalah mengurangi kepolaran eluen,

dan sebaliknya.

(Ewing Galen Wood, 1985)

Kromatografi lapis tipis dalam pelaksanaannya lebih mudah dan lebih

murah dibandingkan dengan kromatografi kolom. Demikian juga peralatan yang

digunakan. Dalam kromatografi lapis tipis, peralatan yang digunakan lebih

sederhana dan dapat dikatakan hampir semua laboratorium dapat melaksanakan

setiap saat secara cepat.

Beberapa keuntungan dari kromatografi planar ini

1. Kromatografi lapis tipis banyak digunakan untuk tujuan analisis.

1. Identifikasi pemisahan komponen dapat dilakukan dengan perekasi warna,

fluorinsasi atau dengan radiasi menggunakan sinar ultraviolet. T

2. Dapat dilakukan elusi secara menaik, atau dengan cara elusi 2 dimensi.

merupakan bercak yang tidak bergerak.

3. Ketepatan penentuan kadar akan lebih baik karena komponen yang akan

ditentukan merupakan bercak yang tidak bergerak.

Penggunaan umum KLT adalah untuk menentukan banyaknya komponen

dalam campuran, identifikasi senyawa, memantau berjalannya suatu reaksi,

menentukan efektivitas pemurnian, menentukan kondisi yang sesuai untuk

kromatografi kolom, serta memantau kromatografi kolom, melakukan screening

sampel untuk obat. Analisa kualitatif dengan KLT dapat dilakukan untuk uji

identifikasi senyawa baku. Parameter pada KLT yang digunakan untuk

identifikasi adalah nilai Rf. Analisis kuantitatif dilakukan dengan 2 cara, yaitu

mengukur bercak langsung pada lengpeng dengan menggunakan ukuran luas atau

dengan teknik densitometry dan cara berikutnya dalaha dengan mengerok bercak

lalu menetapkan kadar senyawa yang terdapat dalam bercak dengan metode

analisis yang lain, misalnya dengan metode spektrofotometri. Dan untuk analisis

preparatif, sampel yang ditotolkan dalam lempeng dengan lapisan yang besar lalu

4

dikembangkan dan dideteksi dengan cara yang non- dekstruktif. Bercak yang

mengandung analit yang dituju selanjutnya dikerok dan dilakukan analisis

lanjutan

(Gholib Gandjar, 2007)

III. Prosedur Kerja

3.1 Alat dan Bahan

3.1.1 Alat

- Oven

- Kertas saring

- Kaca besar

- Pita selotip

- Gelas piala

- Batang pengaduk

- TLC

- Tabung reaksi

- Pipa gelas kapiler

- Bejana

- Gelas piala

- Rotarvan

- Pipet tetes

- Lempeng

3.1.2 Bahan

- Benzena

- Akuades

- Metanol

- Etanol

- Tablet kafelin

- Zat cateknik

- PE

- CaCO4

- Sukrosa

5

- Larutan pengembang komposisi metanol

3.2 Skema Kerja

3.2.1 Reparasi Plat

Diaduk dengan mortis

Dilapiskan diatas plat

Dikeringkan pada oven dalam suhu 120

selama satu jam

3.2.2 Penyiapan Pengembang Kromatografi

Dimasukkan ke dalam chember, digoyang,

dihomogenkan, dan dijenuhkan selama 5 10

menit

Dicampurkan dalam gelas kimia

Ditutup dengan cawan sampai jenuh

Diamati pola senyawa

3 gram silika + 6 mL air

HASIL

1 mL metanol

Asam asetat, eter,

benzen

HASIL

6

3.2.3 Penotolan Sampel

Ditotolkan pada ujung plat menggunakan pipet

halus

Didiamkan sampai kering

Dimasukkan dalam chember, didiamkan, dan

dilihat hasilnya

Sampel

Hasil

7

IV. Hasil dan Pembahasan

4.1 Hasil

NO Perlakuan Hasil

1 Silika Gel pada eluen Heksana :

Benzena

Terbentuk warna :

- Cokelat, jarak dari pangkal 0,6

cm

Rf =

= 0,15

- Kuning, jarak dari pangkal 0,48

cm

Rf =

= 0,12

- Hijau, jarak dari pangkal 0,3 cm

Rf =

= 0,075

2 Silika Gel pada eluen CH3COOH :

Benzena : Heksana

Terbentuk warna :

- Hijau, jarak 1,6 cm

Rf =

= 0,4 cm

3 Silika gel pada eluen CH3COOH :

Benzena

Terbentuk warna

Hijau, jarak 3,8 cm

Rf =

= 0,95

4 Silika Gel pada eluen CH3COOH :

Heksana : Bnezena

Terbentuk warna

- Hijau, jarak 3,6 cm

Rf =

= 0,9

- Merah, jarak 2,3 cm

Rf =

= 0,575

- Cokelat, jarak 2,3 cm

Rf =

= 0,575

8

4.2 Pembahasan

Pada percobaan ini praktikan melakukan identifikasi senyawa yang

terkandung dalam sirih merah menggunakan prinsip kromatografi lapis tipis

(KLT), sirih merah sendiri mengandung senyawa metabolit sekunder seperti

flavonoid, alkaloid, saponin, dan tanin.

Kromatografi lapis tipis merupakan salah satu analisis kualitatif dari suatu

sampel yang ingin dideteksi dengan memisahkan komponen-

komponen sampel berdasarkan perbedaan kepolaran.

Prinsip kerjanya

memisahkan sampel berdasarkan perbedaan kepolaran antara sampel

dengan pelarut yang digunakan. Teknik ini biasanya menggunakan fase diam dari

bentuk plat silika dan fase geraknya disesuaikan dengan jenis sampel yang ingin

dipisahkan. Larutan atau campuran larutan yang digunakan

dinamakan eluen. Semakin dekat kepolaran antara sampel dengan eluen maka

sampel akan semakin terbawa oleh fase gerak tersebut.

Fase gerak pada KLT dapat dipilih dari pustaka, tetapi lebih sering dengan

mencoba-coba karena waktu yang diperlukan hanya sebentar. Sistem yang paling

sederhana ialah campuran 2 pelarut organik karena daya elusi campuran kedua

pelarut ini dapat mudah diatur sedemikian rupa sehingga pemisahan dapat terjadi

secara optimal. Berikut adalah beberapa petunjuk dalam memilih dan

mengoptimasi fase gerak :

1. Fase gerak harus mempunyai kemurnian yang sangat tinggi karena KLT

merupakan teknik yang sensitif.

2. Daya elusi fase gerak harus diatur sedemikian rupa sehingga harga Rf terletak

antara 0,2-0,8 untuk memaksimalkan pemisahan.

3. Untuk pemisahan dengan menggunakan fase diam polar seperti silika gel,

polaritas fase gerak akan menentukan kecepatan migrasi solut yang berarti

juga menentukan nilai Rf. Penambahan pelarut yang bersifat sedikit polar

seperti dietil eter ke dalam pelarut non polar seperti metil benzene akan

meningkatkan harga Rf secara signifikan

Dalam kromatografi, eluent adalah fase gerak yang berperan penting pada

proses elusi bagi larutan umpan (feed) untuk melewati fase diam (adsorbent).

Interaksi antara adsorbent dengan eluent sangat menentukan terjadinya pemisahan

9

komponen. Eluent dapat digolongkan menurut ukuran kekuatan teradsorpsinya

pelarut atau campuran pelarut tersebut pada adsorben dan dalam hal ini yang

banyak digunakan adalah jenis adsorben alumina atau sebuah lapis tipis silika.

Penggolongan ini dikenal sebagai deret eluotropik pelarut. Suatu pelarut yang

bersifat larutan relatif polar, dapat mengusir pelarut yang relatif tak polar dari

ikatannya dengan alumina (gel silika).

Eluen eluen yang dipergunakan pada percobaan ini memiliki nilai

perbandingan yang telah ditentukan. Eluen yang dipergunakan antara lain

Heksana : Benzena (1:1), CH3COOH : Benzena : Heksana (1:1:1), CH3COOH :

Benzena (2:1), dan CH3COOH : Heksana : Benzena (1:1:1). Ketiga jenis pelarut

tersebut memiliki kepolaran berbeda beda, dimana CH3COOH bersifat polar,

benzena bersifat non polar, sedangkan heksana bersifat sangat non polar.

Seperti yang yang telah diketahui bahwa daun sirih merah mengandung

senyawa flavonoid, alkaloid, saponin, dan tanin. Flavonoid merupakan senyawa

polifenol sehingga bersifat kimia senyawa fenol yaitu agak asam dan dapat larut

dalam basa, dan karena merupakan senyawa polihidroksi (gugus hidroksil) maka

juga bersifat polar sehingga dapat larut dalan pelarut polar seperti metanol, etanol,

aseton, air, butanol, dimetil sulfoksida, dimetil formamida, dan asam asetat.

Disamping itu dengan adanya gugus glikosida yang terikat pada gugus flavonoid

sehingga cenderung menyebabkan flavonoid mudah larut dalam air. Berikut

struktur flavonoid

Alkaloid merupakan senyawa yang bersifat basa yang mengandung satu

atau lebih atom nitrogen dan biasanya berupa sistem siklis. Alkaloid mengandung

atom karbon, hidrogen, nitrogen dan pada umumnya mengandung oksigen.

Senyawa alkaloid banyak terkandung dalam akar, biji, kayu maupun daun dari

tumbuhan dan juga dari hewan. Senyawa alkaloid merupakan hasil metabolisme

10

dari tumbuhtumbuhan dan digunakan sebagai cadangan bagi sintesis protein.

Kegunaan alkaloid bagi tumbuhan adalah sebagai pelindung dari serangan hama,

penguat tumbuhan dan pengatur kerja hormon. Alkaloid mempunyai efek

fisiologis. Alkaloid bebas biasanya tidak larut dalam air (beberapa dari golongan

pseudo dan protoalkaloid larut), tetapi mudah larut dalam pelarut organik agak

polar (seperti benzena, eter, kloroform). Dalam bentuk garamnya, alkaloid mudah

larut dalam pelarut organik polar. Berikut struktur alkaloid

Saponin adalah suatu glikosida alamiah yang terikat dengan steroid atau

triterpena. Saponin mempunyai aktifitas farmakologi yang cukup luas diantaranya

meliputi: immunomodulator, anti tumor, anti inflamasi, antivirus, anti jamur,

dapat membunuh kerang-kerangan, hipoglikemik, dan efek hypokholesterol.

Saponin juga mempunyai sifat bermacam-macam, misalnya: terasa manis, ada

yang pahit, dapat berbentuk buih, dapat menstabilkan emulsi, dapat menyebabkan

hemolisis, dan bersifat polar sehingga dapat larut dalam pelarut yang bersifat

polar seperti seperti metanol, etanol, aseton, air, butanol, dimetil sulfoksida,

dimetil formamida, dan asam asetat

Tanin merupakan suatu senyawa golongan yang terbesar dari senyawa

kompleks yang tersebar luas pada dunia tumbuhan. Tanin dianggap senyawa

11

kompleks yang dibentuk dari campuran polifenol yang sangat sukar dipisahkan

karena tidak dapat dikristalkan. Tanin umumnya terdapat dalam organ daun, buah,

kulit batang, dan kayu. Tanin bersifat polar sehingga dapat larut dalam senyawa

polar.

Sebelum melakukan identifikasi dengan KLT, terlebih dahulu sampel

daun sirih merah di maserasi untuk memeperoleh ekstrak daun sirih merah.

Maserasi adalah salah satu jenis metoda ekstraksi dengan sistem tanpa pemanasan

atau dikenal dengan istilah ekstraksi dingin, jadi pada metoda ini pelarut dan

sampel tidak mengalami pemanasan sama sekali. Sehingga maserasi merupakan

teknik ekstraksi yang dapat digunakan untuk senyawa yang tidak tahan panas

ataupun tahan panas.

Namun biasanya maserasi digunakan untuk mengekstrak senyawa yang

tidak tahan panas (termolabil) atau senyawa yang belum diketahui sifatnya.

Karena metoda ini membutuhkan pelarut yang banyak dan waktu yang lama.

Secara sederhana, maserasi dapat kita sebut metoda perendaman karena

memang proses ekstraksi dilakukan dengan hanya merendam sample tanpa

mengalami proses lain kecuali pengocokan (bila diperlukan). Prinsip penarikan

(ekstraksi) senyawa dari sample adalah dengan adanya gerak kinetik dari pelarut,

dimana pelarut akan selalu bergerak pada suhu kamar walaupun tanpa

pengocokan. Namun untuk mempercepat proses biasanya dilakukan pengocokan

secara berkala.

Setelah diperoleh ekstrak dari sirih merah, dilanjutkan dengan

penotolan sampel. Dimana pada percobaan ini digunakan fase diam berupa silika

12

gel atau alumina yang seragam pada sebuah lempeng gelas atau logam atau plastik

yang keras. Fase diam untuk kromatografi lapis tipis seringkali juga mengandung

substansi yang mana dapat berpendar flour dalam sinar ultra violet. Fase diam

lainnya yang biasa digunakan adalah alumina-aluminium oksida. Atom

aluminium pada permukaan juga memiliki gugus -OH. Digunakan silica gel

karena mengandung bahan tambahan kalsium sulfat untuk mempertinggi daya

lekat.

Pelat KLT yang digunaka berukuran 5 cm 1 cm, kemudian dibuat batas

bawah dan atasnya agar mudah untuk menghitung Rfnya. Batas bawah yang

dibuat adalah cm dan batas atas adalah cm. Batas bawah dan batas atas ini

dibuat dengan menggunakan pensil. Sebuah garis menggunakan pensil digambar

dekat bagian bawah lempengan dan setetes pelarut dari campuran pewarna

ditempatkan pada garis itu. Diberikan penandaan pada garis di lempengan untuk

menunjukkan posisi awal dari tetesan. Sebagai penanda batas atas dan batas

bawah fase diam (yang akan dilalui eluen) digunakan pensil, karena pensil

mengandung senyawa karbon yang tidak larut dalam eluen. Jika ini dilakukan

menggunakan tinta, pewarna dari tinta akan bergerak selayaknya kromatogram

dibentuk, oleh karena itu digunakan pensil sebagai penandanya. Penotolan

biasanya dilakukan menggunakan pipa kapiler kaca tetapi dapat pula dilakukan

penyemprotan atau alat otomatis. Lalu pelarut dibiarkan menguap atau

dihilangkan dengan bantuan aliran udara kering. Selanjutnya lapisan dimasukkan

ke bejana pengembang sesuai dengan fraksi dan perbandingan masing-masing.

Ketika bercak dari campuran itu mengering, lempengan ditempatkan

dalam sebuah gelas kimia bertutup berisi pelarut dalam jumlah yang tidak terlalu

banyak. Perlu diperhatikan bahwa batas pelarut berada di bawah garis dimana

posisi bercak berada. Alasan untuk menutup gelas kimia adalah untuk meyakinkan

bawah kondisi dalam gelas kimia terjenuhkan oleh uap dari pelarut. Untuk

mendapatkan kondisi ini, dalam gelas kimia biasanya ditempatkan beberapa kertas

saring yang terbasahi oleh pelarut. Kondisi jenuh dalam gelas kimia dengan uap

mencegah penguapan pelarut.

Karena pelarut bergerak lambat pada lempengan, komponen-komponen

yang berbeda dari campuran pewarna akan bergerak pada kecepatan yang berbeda

13

dan akan tampak sebagai perbedaan bercak warna. Pelarut dapat mencapai sampai

pada bagian atas dari lempengan. Ini akan memberikan pemisahan maksimal dari

komponen-komponen yang berwarna untuk kombinasi tertentu dari pelarut dan

fase diam.

Ketika pelarut mulai membasahi lempengan, pelarut pertama akan

melarutkan senyawa-senyawa dalam bercak yang telah ditempatkan pada garis

dasar. Senyawa-senyawa akan cenderung bergerak pada lempengan kromatografi

sebagaimana halnya pergerakan pelarut. Bagaimana cepatnya senyawa-senyawa

dibawa bergerak ke atas pada lempengan, tergantung pada:

1. Kelarutan senyawa dalam pelarut. Tergantung pada besar atraksi antara

molekul-molekul senyawa dengan pelarut.

2. Senyawa melekat pada fase diam, misalnya jel silika. Tergantung pada

bagaimana besar atraksi antara senyawa dengan jel silika.

Senyawa yang dapat membentuk ikatan hidrogen akan melekat pada jel

silika lebih kuat dibanding senyawa lainnya hanya dapat mengambil bagian

interaksi van der Waals yang lemah. Kita mengatakan bahwa senyawa ini terjerap

lebih kuat dari senyawa yang lainnya. Penjerapan merupakan pembentukan suatu

ikatan dari satu substansi pada permukaan.

Terdapat perbedaan bahwa ikatan hidrogen pada tingkatan yang sama

dan dapat larut dalam pelarut pada tingkatan yang sama pula. Ini tidak hanya

merupakan atraksi antara senyawa dengan jel silika. Atraksi antara senyawa dan

pelarut juga merupakan hal yang penting-hal ini akan mempengaruhi bagaimana

mudahnya senyawa ditarik pada larutan keluar dari permukaan silika.

Penyerapan pada kromatografi lapis tipisbersifat tidak permanen, terdapat

pergerakan yang tetap dari molekul antara yang terjerap pada permukaan jel silika

dan yang kembali pada larutan dalam pelarut. Dengan jelas senyawa hanya dapat

bergerak ke atas pada lempengan selama waktu terlarut dalam pelarut. Ketika

senyawa dijerap pada jel silika-untuk sementara waktu proses penjerapan

berhenti-dimana pelarut bergerak tanpa senyawa. Itu berarti bahwa semakin kuat

senyawa dijerap, semakin kurang jarak yang ditempuh ke atas lempengan.

Setelah pencelupan, pada silika gel akan terbentuk noda noda yang

memilki warna berbeda beda. Setiap noda yang terbentuk pada silika gel diukur

14

jaraknya dari batas yang telah dibuat agar dapat dilakukan perhitungan nilai Rf.

Jarak antara jalannya pelarut bersifat relatif. Oleh karena itu, diperlukan suatu

perhitungan tertentu untuk memastikan spot yang terbentuk memiliki jarak yang

sama walaupun ukuran jarak plat nya berbeda. Nilai perhitungan tersebut adalah

nilai Rf, nilai ini digunakan sebagai nilai perbandingan relatif antar sampel. Nilai

Rf juga menyatakan derajat retensi suatu komponen dalam fase diam sehingga

nilai Rf sering juga disebut faktor retensi. Nilai Rf dapat dihitung dengan rumus

berikut :

Semakin besar nilai Rf dari sampel maka semakin besar pula jarak

bergeraknya senyawa tersebut pada plat kromatografi lapis tipis. Saat

membandingkan dua sampel yang berbeda di bawah kondisi kromatografi yang

sama, nilai Rf akan besar bila senyawa tersebut kurang polar dan berinteraksi

dengan adsorbent polar dari plat kromatografi lapis tipis.

Nilai Rf dapat dijadikan bukti dalam mengidentifikasikan senyawa. Bila

identifikasi nilai Rf memiliki nilai yang sama maka senyawa tersebut dapat

dikatakan memiliki karakteristik yang sama atau mirip. Sedangkan, bila nilai

Rfnya berbeda, senyawa tersebut dapat dikatakan merupakan senyawa yang

berbeda. Oleh karena itu bilangan Rf selalu lebih kecil dari 1,0

Untuk pelat yang dicelupkan pada eluen Heksana : Benzena (1:1)

terbentuk tiga warna yang berbeda, yaitu warna cokelat berjarak 0,6 cm, warna

kuning berjarak 0,48 cm, dan hijau 0,3 cm. nilai Rf yang diperoleh dari ketiga

warna tersebut adalah 0,15, 0,12, dan 0,075. Pada pelat ini noda yang terbentuk

bergerak lurus dari warna pertama hingga warna ketiga. Ini menunjukan noda

yang terbentuk tidak berekor dan senyawa - senyawa yang terlarut oleh pelarutnya

terpisah dengan baik dan membentuk noda yang berada di tengah, dari hasil ini

dapat di;ihat bahwa eluen Heksana : Benzena merupakan eluen yang baik pada

percobaan KLT ini. Berbeda dengan pelat yang direndam dengan eluen lain yang

membentuk noda yang berekor, ini menunjukan senyawa yang tidak terpisah.

Pada eluen CH3COOH : Heksana : Heksana(1:1:1) hanya terbentuk noda

15

berwarna hijau, dengan jarak tempuh 1,6 cm dan nilai Rf yang diperoleh 0,4. Pada

eluen CH3COOH : Benzena (2:1) terbentuk noda berwarna hijau dengan jarak

tempuh 3,8 cm dan Rf 0,95, dan pada eluen CH3COOH : Heksana : Benzena

(1:1:1) terbentuk tiga warna yaitu hijau, merah, dan cokelat, dengan jarak tempuh

masing masing 3,6 cm, 2.3 cm, dan 2,3 cm dan Rf yang diperoleh 0,9, 0,575,

dan 0,575.

Noda-noda yang diperoleh biasanya berekor disebabkan karena :

1. Penotolan yang berulang-ulang dan letaknya tidak tepat

2. Kandungan senyawa yang terlalu asam atau basa

3. Lempeng yang tidak rata

Dari nilai Rf yang diperoleh dibawah 1, dapat diketahui bahwa senyawa

senyawa yang serkandung dalam sirih merah sebagian besar bersifat polar. Warna

wana yang terbentuk itu merupakan hasil pengamatan berdasarkan penglihatan

mata, seharusnya digunakan sinar UV untuk dapat melihat noda noda yang

benar benar terbentuk pada pelat KLT dan pengukuran jarak jarak noda lebih

akurat.

Menurut beberapa jurnal penelitian senyawa metabolit sekunder, dengan

eluen yang berbeda diperoleh :

1. Ekstrak metanol daun sirih merah ditotolkan pada fase diam lempeng KLT

silica gel, dengan fase gerak etilasetat:metanol:air (9:2:2). Penampak noda

yang digunakan pereaksi Dragendorf. Jika timbul warna jingga menunjukkan

adanya senyawa alkaloid di dalam ekstrak daun sirih merah.

2. Dengan menggunkan eluen n-heksana : etil asetat (20:80) dan diamati

dibawah sinar UV , = 365 nm setelah diberi penampak noda asam sitroborat

menghasilkan noda orange yang menunjukan adanya senyawa flavonoid.

16

V. Kesimpulan dan Saran

1. Kromatografi lapis tipis merupakan salah satu analisis kualitatif dari suatu

sampel yang ingin dideteksi dengan memisahkan komponen-

komponen sampel berdasarkan perbedaan kepolaran.

Prinsip kerjanya

memisahkan sampel berdasarkan perbedaan kepolaran antara sampel

dengan pelarut yang digunakan.

2. Eluen yang dipergunakan antara lain Heksana : Benzena (1:1), CH3COOH :

Benzena : Heksana (1:1:1), CH3COOH : Benzena (2:1), dan CH3COOH :

Heksana : Benzena (1:1:1).

3. Pelat yang dicelupkan pada eluen Heksana : Benzena (1:1) terbentuk tiga

warna yang berbeda, yaitu warna cokelat berjarak 0,6 cm, warna kuning

berjarak 0,48 cm, dan hijau 0,3 cm. Nilai Rf yang diperoleh dari ketiga

warna tersebut adalah 0,15, 0,12, dan 0,075.

4. Pada eluen CH3COOH : Heksana : Heksana(1:1:1) hanya terbentuk noda

berwarna hijau, dengan jarak tempuh 1,6 cm dan nilai Rf yang diperoleh

0,4.

5. Pada eluen CH3COOH : Benzena (2:1) terbentuk noda berwarna hijau

dengan jarak tempuh 3,8 cm dan Rf 0,95.

6. Pada eluen CH3COOH : Heksana : Benzena (1:1:1) terbentuk tiga warna

yaitu hijau, merah, dan cokelat, dengan jarak tempuh masing masing 3,6

cm, 2.3 cm, dan 2,3 cm dan Rf yang diperoleh 0,9, 0,575, dan 0,575.

7. Noda yang baik adalah noda yang tidak berekor yang menunjukkan senyawa

- senyawa yang terlarut oleh pelarutnya terpisah dengan baik dan

membentuk noda yang berada di tengah.

5.2 Saran

Disarankan untuk percobaan KLT ini disediakan pembanding dari

percobaan lain sehingga dapat dengan mudah mengidentifikasi kandungan yang

ada dalam suatu sampel dan untuk memperoleh pengamatan bercak yang

terbentuk ada baiknya diamati dengan menggunakan sinar UV, sehingga warna

warna yang sebenarnya terbentuk dapat terdeteksi dan pengukuran jaraknya juga

lebih akura.

17

VI. Daftar Pustaka

Day, R.A dan Underwood, A.L.2001. Analisis Kimia Kuantitatif. Jakarta :

Erlangga.

Ewing, Galen Wood. 1985. Instrumental of Chemical Analysis

Fifth edition. McGraw-Hill. Singapore.

Gholib, Ibnu.2007. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta : Pustaka Pelajar

Soebagio,dkk.2003. Kimia Analitik II. Malang : Jurusan Kimia FMIPA

Universitas Negeri Malang.