PCRPolymerase Chain Reaction

PCR : teknik untuk mendapatkan sejumlah kopi DNA dari segmen DNA tertentu.Komponen yg diperlukan :1. DNA Primer2. Nukleotida : dATP, dCTP, dGTP, dTTP3. Enzim polimerase DNA (tag polymerase)4. Sampel DNA

DNA primer berhibridisasi (anneal) dg tepi dari gen yg diperbanyak, dan merupakan tempat awal bekerjanya enzim polimerase DNA

ProsesDenaturasi : DNA didenaturasi dg pemanasan sehingga mjd single strand, suhu 94-96Annealing : Suhu diturunkan agar primer dapat berikatan dg segmen DNA yg akan digandakan, suhu 50-65Sintesis/Ekstensi :Tag polymerase akan mensintesis DNA baru, suhu 72

Siklus pemanasan dan pendinginan diulang-ulang sampai mendapatkan sejumlah kopi DNA yg cukup

Penggunaan :1. identifikasi mikroba spesifik2. identifikasi orang yg terlibat dalam tindak kejahatan hanya dengan sampel sehelai folikel rambut3. deteksi penyakit

Contoh aplikasi pd deteksi virus HIVPerlu primer spesifik DNA HIV, artinya primer hanya bisa berhibridisasi dengan DNA HIV, tdk dg yg lain.

Proses : 1. Dilakukan isolasi DNA dari darah pasien2. Dilakukan PCR dg primer spesifik DNA HIV. 3. Dilakukan elektroforesis gel agaros untuk deteksi ada tidaknya penggandaan DNA selama proses PCR.Bila hasil elektroforesis menunjukkan adanya pita DNA, maka berarti pasien terinfeksi HIV dan sebaliknya