output (2)

PENGARUH TERAPI EKSTRAK ETANOL DAUN KENIKIR (Cosmos

caudatus) DAN ROSUVASTATIN TERHADAP PENINGKATAN KADAR

HDL SERUM TIKUS DISLIPIDEMIA

SKRIPSI

Oleh

Vony Safitri Yusmarina

NIM 112010101039

FAKULTAS KEDOKTERAN

UNIVERSITAS JEMBER

2014

ii




SKRIPSI

diajukan guna melengkapi tugas akhir dan memenuhi salah satu syarat untuk

menyelesaikan pendidikan di Fakultas Kedokteran (S1) dan mencapai gelar Sarjana

Kedokteran

Oleh


NIM 112010101039

FAKULTAS KEDOKTERAN

UNIVERSITAS JEMBER

2014

iii

PERSEMBAHAN

Alhamdulillah, segala puji bagi Allah SWT, Maha Suci Allah dengan segala

limpahan rahmat dan pertolongan-Nya, penulis dapat menyelesaikan skripsi yang

berjudul Pengaruh Terapi Ekstrak Etanol Daun Kenikir (Cosmos caudatus) dan

Rosuvastatin Terhadap Peningkatan Kadar HDL Serum Tikus Dislipidemia.

Dengan segala ketulusan dan kerendahan hati, skripsi ini saya persembahkan untuk :

1. Ayahanda Drs. H. Marsudi dan Ibunda Hj. Yusti Ariani, S.H tercinta, yang

senantiasa memberikan doa, dukungan, bimbingan, nasihat, dan kasih sayang

tiada henti serta telah mendidik dan menjadikanku manusia yang lebih baik.

Senyum dan kebahagiaan mereka adalah harapan terbesarku;

2. Guru-guruku tercinta, yang telah memberikan ilmu dan mendidikku dengan

penuh kesabaran sejak taman kanak-kanak hingga perguruan tinggi;

3. Almamater Fakultas Kedokteran Universitas Jember.

iv

MOTO

Allah akan mengangkat (derajat) orang-orang yang beriman di antaramu dan orang-

orang yang diberi ilmu beberapa derajat. Dan Allah Maha Teliti apa yang kamu

kerjakan. (terjemahan Surat Al-Mujadalah ayat 11)1.

Dan carilah pada apa yang dianugrahkan Allah kepadamu (kebahagiaan) negeri

Akhirat. Dan janganlah kamu melupakan bahagiamu dari (kenikmatan) duniawi dan

berbuatlah baik kepadamu, dan janganlah kamu berbuat kerusakan. (terjemahan Surat

Al-Qashash ayat 77)2.

Sebaik-baik manusia adalah yang paling bermanfaat bagi manusia lain (HR Ahmad,

Thabrani, Daruqutni)3.

1,2

Kementerian Agama Republik Indonesia. Al-Quran Tajwid dan Terjemahnya. Bandung: PT Sygma

Examedia Arkanleema

3 Disahihkan Al Albani dalam As-Silsilah As-Shahihah

v

PERNYATAAN

Saya yang bertanda tangan di bawah ini:

Nama : Vony Safitri Yusmarina

NIM : 112010101039

menyatakan dengan sesungguhnya bahwa skripsi yang berjudul Pengaruh Terapi

Ekstrak Etanol Daun Kenikir (Cosmos caudatus) dan Rosuvastatin Terhadap

Peningkatan Kadar HDL Serum Tikus Dislipidemia adalah benar-benar hasil karya

sendiri, kecuali kutipan yang sudah saya sebutkan sumbernya, belum pernah diajukan

pada institusi mana pun, dan bukan karya jiplakan. Saya bertanggung jawab atas

keabsahan dan kebenaran isinya sesuai dengan sikap ilmiah yang harus dijunjung

tinggi.

Demikian pernyataan ini saya buat dengan sebenarnya, tanpa ada tekanan dan

paksaan dari pihak mana pun serta bersedia mendapat sanksi akademik jika ternyata

di kemudian hari pernyataan ini tidak benar.

Jember, 9 Desember 2014

Yang menyatakan,

(Vony Safitri Yusmarina)

112010101039

vi

SKRIPSI




Oleh


NIM 112010101039

Pembimbing

Dosen Pembimbing Utama : dr. Sugiyanta, M.Ked

Dosen Pembimbing Anggota : dr. Wiwien Sugih Utami, M.Sc

vii

PENGESAHAN

Skripsi berjudul Pengaruh Terapi Ekstrak Etanol Daun Kenikir (Cosmos caudatus)

dan Rosuvastatin Terhadap Peningkatan Kadar HDL Serum Tikus Dislipidemia

telah diuji dan disahkan oleh Fakultas Kedokteran Universitas Jember pada:

hari, tanggal : Selasa, 9 Desember 2014

tempat : Fakultas Kedokteran Universitas Jember.

Tim Penguji:

Penguji I,

dr. Hairrudin, M.Kes

NIP. 19751011 200312 1 008

Penguji II,

Dr. dr. Aris Prasetyo, M.Kes

NIP. 19690203 199903 1 001

Penguji III,

dr. Sugiyanta, M.Ked

NIP. 19790207 200501 1 001

Penguji IV,

dr. Wiwien Sugih Utami, M.Sc

NIP. 19760922 200501 2 001

Mengesahkan,

Dekan Fakultas Kedokteran Universitas Jember

dr. Enny Suswati, M.Kes

NIP 19700214 199903 2 001

viii

RINGKASAN

Pengaruh Terapi Ekstrak Etanol Daun Kenikir (Cosmos caudatus) dan

Rosuvastatin Terhadap Peningkatan Kadar HDL Serum Tikus Dislipidemia;

Vony Safitri Yusmarina, 112010101039; 2014: 73 halaman; Jurusan Pendidikan

Dokter Fakultas Kedokteran Universitas Jember.

Dislipidemia adalah kelainan metabolisme lipid yang ditandai dengan

meningkatnya salah satu atau lebih kolesetrol total, LDL, trigliserida, dan atau

penurunan HDL. Dislipidemia merupakan salah satu faktor risiko terjadinya penyakit

aterosklerosis. Peningkatan HDL dapat mencegah terjadinya proses aterosklerosis

sedangkan peningkatan LDL merupakan faktor risiko proses tersebut. Berdasarkan

penelitian WHO diperoleh data bahwa 20% kasus kematian di seluruh dunia

diakibatkan penyakit yang didasari oleh aterosklerosis seperti stroke, infark miokard

dan penyakit jantung koroner. Di Indonesia prevalensi aterosklerosis cukup tinggi,

sekitar 500.000 kejadian baru dan 125.000 meninggal tiap tahun karena manifestasi

stroke.

Terapi primer kondisi dislipidemia adalah dengan menggunkaan obat golongan

statin yang bekerja sebagai penghambat enzim HMG-CoA reduktase yaitu suatu

enzim di hati yang berperan pada sintesis kolesterol. Diantara golongan statin, obat

yang memiliki profil keamanan dan toleransi yang baik adalah rosuvastatin.

Rosuvastatin dapat meningkatkan kadar HDL dan menurunkan kolesterol LDL lebih

baik dari golongan statin lainnya, namun obat golongan statin memiliki efek samping

menyebabkan gangguan pada hati apabila dikonsumsi dalam dosis tinggi.

Untuk mengurangi efek samping yang dihasilkan dari pemberian obat statin,

terapi dapat digabungkan dengan bahan alam yang dapat mendukung kerja statin

dalam meningkatkan kadar HDL. Daun kenikir memiliki bahan-bahan yang dapat

mendukung kerja obat statin yaitu antioksidan flavonoid yang dapat menghambat

kerja enzim HMG-CoA reduktase dan meningkatkan jumlah HDL. Antioksidan yang

dimiliki daun kenikir sangat besar yaitu 52,18mg flavonoid, 152,01mg polifenol per

gram sampel segar. Daun kenikir juga dapat berfungsi sebagai hepatoprotekror.

Dalam penelitian ini, jenis penelitian yang dilakukan adalah true experimental

laboratories yang dilaksanakan di laboratorium Biomedik Fakultas Kedokteran Gigi

Universitas Jember secara in vivo. Penelitian ini dibagi menjadi kelompok studi dan

kelompok kontrol yang pengambilan sampelnya dilakukan secara randomisasi.

Sampel penelitian adalah hewan coba tikus strain wistar jantan usia dua sampai tiga

bulan dengan berat badan 100-250 gram. Jumlah perlakuan pada penelitian ini adalah

4 perlakuan sehingga tikus wistar jantan dibagi menjadi 4 kelompok yaitu kelompok

kontrol negatif dan kelompok kontrol positif yang diberikan rosuvastatin dosis

0,0009mg/gramBB, kelompok perlakuan pertama dengan dosis 0,4mg/gBB ekstrak

etanol daun kenikir, kelompok perlakuan kedua dengan dosis 0,2 mg/gBB ekstrak

ix

etanol daun kenikir dan 0,00045mg/gBB rosuvastatin. Variabel bebas dalam

penelitian ini adalah dosis ekstrak etanol daun kenikir dan dosis kombinasi ekstrak

etanol daun kenikir dan rosuvastatin. Variabel terikat dalam penelitian ini adalah

kadar HDL serum setelah terapi. Analisis data yang digunakan adalah uji One Way

Anova.

Data yang diperoleh berupa kadar HDL pre test dan post test HDL serum tikus

wistar yang disajikan dalam delta rata-rata kadar HDL. Pada analisis data, data yang

diolah adalah delta kadar HDL serum tikus pre test dan post test yang dianalisis

statistika dengan uji One Way ANOVA. Hasil pengamatan menunjukkan bahwa

kelompok dengan pemberian ekstrak etanol daun kenikir dan rosuvastatin

menunjukkan peningkatan kadar HDL serum. Hasil uji statistik dengan uji One Way

ANOVA, data memiliki perbedaan yang signifikan (p0,005) dengan

kelompok kontrol positif. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa pemberian terapi

ekstrak etanol daun kenikir dan rosuvastatin memiliki pengaruh dalam meningkatkan

kadar HDL serum tikus wistar yang diberi diet dislipidemia.

x

PRAKATA

Puji syukur ke hadirat Allah Maha Suci Allah SWT atas segala rahmat dan

karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul Pengaruh

Terapi Kombinasi Ekstrak Etanol Daun Kenikir (Cosmos caudatus) dengan

Rosuvastatin Terhadap Kadar HDL Serum Tikus yang Diinduksi Dislipidemia.

Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat menyelesaikan pendidikan

strata satu (S1) Fakultas Kedokteran Universitas Jember.

Dalam penyusunan skripsi ini penulis banyak menemui kendala dan

hambatan, namun berkat bimbingan, arahan, dan bantuan dari berbagai pihak penulis

mampu menyelesaikannya, oleh karena itu dengan setulus hati penulis

menyampaikan terima kasih kepada:

1. dr. Enny Suswati, M.Kes selaku Dekan Fakultas Kedokteran Universitas Jember

atas segala fasilitas dan kesempatan yang diberikan selama menempuh

pendidikan kedokteran di Universitas Jember serta selaku Dosen Pembimbing

Akademik yang telah membimbing penulis selama menjadi mahasiswa;

2. dr. Sugiyanta, M.Ked selaku Dosen Pembimbing Utama dan dr. Wiwien Sugih

Utami, M.Sc selaku Dosen Pembimbing Anggota yang telah meluangkan waktu,

pikiran, tenaga, dan perhatiannya dalam penulisan tugas akhir ini;

3. dr. Hairrudin, M.Kes sebagai Dosen Penguji I dan Dr. dr. Aris Prasetyo, M.Kes

sebagai Dosen Penguji II yang telah banyak memberikan kritik, saran, dan

masukan yang membangun dalam penulisan skripsi ini;

4. Ayahanda Drs. H. Marsudi dan Ibunda Hj. Yusti Ariani, S.H tercinta yang

senantiasa memberikan doa, dukungan, motivasi baik material dan spiritual, serta

semua curahan kasih sayang yang tak akan pernah putus;

5. Adikku tersayang Henny Rismawatie Yusmarina dan Indri L. Rahmawati

Yusmarina yang senantiasa memberikan doa, dukungan, dorongan semangat,

kasih sayang dan perhatian tiada henti kepadaku;

xi

6. Rekan kerjaku Hanifa Rosyida Risqi Cahyani dan Muhammad Firdaus yang telah

membantu dan selalu memberikan dorongan dan semangat;

7. Analis Laboratorium Biokimia Fakultas Kedokteran Universitas Jember, Mbak

Nuris, analis Laboratorium Biomol Fakultas Kedokteran Gigi Universitas

Jember, Mas Agus, dan analis Laboratorium Biologi Fakultas Farmasi

Universitas Jember, Ibu Widi, terima kasih atas bantuan , kerja sama, dan

masukan yang diberikan selama penelitian skripsi ini;

8. Sahabatku tercinta Tamzila Akbar Nila Sandhi, Ratih Puspita Wulandari, dan

Mbak Meilisa Fani, terimakasih atas doa, dorongan semangat, bantuan, dan

perhatian yang selalu diberikan;

9. Teman-teman angkatan 2011 Cardio tercinta yang telah berjuang bersama-sama

demi meraih gelar Sarjana Kedokteran, terimakasih atas persaudaraan, bantuan

dan semangat yang selalu diberikan;

10. Guru di TK Al- Akbar, SDN Ardimulyo II, SMPN 1 Singosari, SMAN 1

Lawang, dan dosen-dosen Fakultas Kedokteran Universitas Jember, yang telah

memberikan ilmu dan membuat penulis mencintai ilmu pengetahuan;

11. Semua pihak yang telah membantu dalam penyusunan skripsi ini yang tidak

dapat disebutkan satu persatu.

Penulis juga menerima segala kritik dan saran yang membangun dari semua

pihak demi kesempurnaan skripsi ini. Akhirnya penulis berharap, semoga skripsi ini

dapat bermanfaat.

Jember, 9 Desember 2014

Penulis

xii

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL ................................................................................. ii

HALAMAN PERSEMBAHAN ............................................................... iii

HALAMAN MOTTO ............................................................................... iv

HALAMAN PERNYATAAN ................................................................... v

HALAMAN PEMBIMBINGAN .............................................................. vi

HALAMAN PENGESAHAN ................................................................... vii

RINGKASAN ............................................................................................ viii

PRAKATA ................................................................................................. x

DAFTAR ISI .............................................................................................. xii

DAFTAR TABEL ..................................................................................... xv

DAFTAR GAMBAR ................................................................................. xvi

DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................. xvii

BAB 1. PENDAHULUAN ........................................................................ 1

1.1 Latar Belakang ..................................................................... 1

1.2 Rumusan Masalah ............................................................... 3

1.3 Tujuan Penelitian ................................................................. 3

1.4 Manfaat Penelitian ............................................................... 4

BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA ............................................................... 5

2.1 Lipid Plasma ......................................................................... 5

2.1.1 Kolesterol ...................................................................... 5

2.1.2 Lipopoprotein ................................................................ 10

2.1.3 Apopoprotein ................................................................ 12

2.2 Lipoprotein Densitas Tinggi (HDL) ................................... 13

2.2.1 Pengertian HDL ............................................................ 13

2.2.2 Metabolisme HDL ....................................................... 13

2.3 Dislipidemia ........................................................................... 16

xiii

2.3.1 Klasifikasi Kadar Lipid ................................................ 16

2.3.2 Hiperlipidemia dan Aterosklerosis .............................. 17

2.4 Statin ...................................................................................... 17

2.4.1 Pembagian Obat Golongan Statin ................................ 17

2.5 Kenikir .................................................................................. 21

2.5.1 Taksonomi ................................................................... 22

2.5.2 Morfologi ..................................................................... 22

2.5.3 Manfaat ........................................................................ 23

2.6 Diet Tinggi Lemak .............................................................. 25

2.7 Kerangka Teori .................................................................... 26

2.8 Kerangka Konsep.................................................................. 27

2.9 Hipotesis Penelitian ............................................................... 29

BAB 3. METODE PENELITIAN ............................................................ 30

3.1 Jenis Penelitian ..................................................................... 30

3.2 Tempat dan Waktu Penelitian ............................................ 30

3.3 Populasi dan Sampel Penelitian.......................................... 30

3.3.1 Populasi ......................................................................... 30

3.3.2 Sampel .......................................................................... 31

3.3.3 Jumlah Sampel ............................................................. 31

3.4 Rancangan Penelitian .......................................................... 32

3.5 Variabel Penelitian .............................................................. 33

3.5.1 Variabel Bebas .............................................................. 33

3.5.2 Variabel Terikat ............................................................ 33

3.5.3 Variabel Terkendali ...................................................... 33

3.6 Definisi Operasional ............................................................ 33

3.7 Alat dan Bahan Penelitian .................................................. 34

3.7.1 Alat ................................................................................ 34

3.7.2 Bahan ........................................................................... 34

3.8 Prosedur Penelitian .............................................................. 35

xiv

3.8.1 Perlakuan Hewan Uji ................................................... 35

3.8.2 Pemberian Diet Dislipidemia ........................................ 35

3.8.3 Pembuatan Ekstrak Daun Kenikir ................................. 36

3.8.4 Pembuatan Larutan Na CMC 1% ................................. 37

3.8.5 Penetapan Dosis Ekstrak Daun Kenikir ........................ 37

3.8.6 Penetapan Dosis Pemberian Rosuvastatin .................... 37

3.8.7 Pengambilan Sampel Darah .......................................... 38

3.8.8 Pemeriksaan Kadar HDL Serum ................................... 38

3.9 Analisis Data ......................................................................... 39

3.10 Alur Penelitian ..................................................................... 40

3.11 Ethical Clearance ................................................................. 41

BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................... 42

4.1 Hasil Penelitian .................................................................... 42

4.1.1 Hasil Ekstraksi Daun Kenikir (Cosmos caudatus) ...... 42

4.1.2 Hasil Pengukuran Kadar HDL Serum Tikus ............... 42

4.1.3 Analisis Data ................................................................ 45

4.2 Pembahasan .......................................................................... 46

BAB 5. PENUTUP .................................................................................... 50

5.1 Kesimpulan ........................................................................... 50

5.2 Saran ..................................................................................... 50

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 51

LAMPIRAN ............................................................................................... 57

xv

DAFTAR TABEL

Halaman

2.1 Klasifikasi lipoprotein.............................................. ............................. 11

2.2 Komposisi HDL dalam plasma manusia.............................................. . 13

2.3 Klasifikasi kolesterol Total, trigliserida, HDL, dan LDL pada manusia 17

2.4 Kisaran kolesterol normal danhiperkolesterol pada tikus ..................... 17

4.1 Rata-rata kadar HDL serum sebelum dan sesudah pemberian diet

dislipidemia .......................................................................................... 42

4.2 Rata-rata kadar HDL serum ................................................................. 43

4.3 Hasil uji post hoc dengan tes LSD delta kadar HDL pre test dan post test 45

xvi

DAFTAR GAMBAR

Halaman

2.1 Biosintesis kolesterol ............................................................................ 6

2.2 Jalur metabolisme kolesterol ................................................................. 8

2.3 Transpor kolesterol................................................................................ 9

2.4 Jalur yang terlibat dalam pembuatan dan perubahan HDL ................... 15

2.5 Kenikir .................................................................................................. 22

2.6 Kerangka teori ....................................................................................... 26

2.7 Kerangka konsep ................................................................................... 27

3.1 Rancangan penelitian ............................................................................ 32

3.2 Alur penelitian ....................................................................................... 40

4.1 Diagram batang rata-rata kadar HDL serum...................................... 43

xvii

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

A. Ethical clearance.................................................................................... 57

B. Penghitungan dosis pemberian terapi ..................................................... 59

C. Hasil pengukuran kadar HDL serum ...................................................... 61

D. Uji normalitas dengan Saphiro Wilk test ................................................ 62

E. Dokumentasi penelitian .......................................................................... 68

1

BAB 1. PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Dislipidemia merupakan suatu kondisi yang ditandai dengan peningkatan

jumlah kolesterol dalam darah melebihi ambang normal terutama kadar Low Density

Lipoprotein (LDL) yang diikuti dengan penurunan kadar High Density Lipoprotein

(HDL) darah. Penurunan kadar HDL pada dislipidemia merupakan salah satu faktor

risiko terjadinya penyakit kardiovaskuler. Dislipidemia berhubungan dengan

beberapa faktor salah satunya adalah diet tinggi lemak jenuh (Bhatnagar et al., 2008).

Diet tinggi kolesterol merupakan salah satu faktor lingkungan yang penting dalam

mempengaruhi perkembangan penyakit kardiovaskuler (Mayes, 2009). Asam lemak

jenuh di dalam pakan hiperkolesterol menyebabkan penurunan kadar HDL dengan

cara menekan sintesis HDL melalui penurunan kadar apo A-1 yang merupakan

prekursor untuk pembentukan HDL (Voet, 1995).

Dislipidemia dapat menyebabkan penyakit kardiovaskuler karena telah terbukti

memiliki peranan dalam mengganggu dan mengubah struktur pembuluh darah

sehingga dapat mengganggu fungsi endotel dan menyebabkan lesi, plak, oklusi, dan

emboli (Stapleton et al., 2010). Banyak penelitian membuktikan bahwa kadar

kolesterol total, lipoprotein, LDL, dan VLDL yang tinggi di dalam darah akan

meningkatkan proses aterosklerosis (Makmun et al., 2003). Tingginya kadar LDL

merupakan faktor risiko terjadinya aterosklerosis dan HDL dapat mencegah

terjadinya proses tersebut (Tomkin dan Owens, 2012).

Berdasarkan penelitian WHO diperoleh data bahwa 20% kasus kematian di

seluruh dunia diakibatkan penyakit yang didasari oleh aterosklerosis seperti stroke,

infark miokard dan penyakit jantung koroner. Di Indonesia prevalensi aterosklerosis

cukup tinggi, sekitar 500.000 kejadian baru dan 125.000 meninggal tiap tahun karena

2

manifestasi stroke (Wijaya, 2011). Berdasarkan hasil Survey Kesehatan Rumah

Tangga (SKRT) menyatakan prevalensi penyakit kardiovaskuler di Indonesia dari

tahun ke tahun terus meningkat. Pada tahun 1972 penyakit kardiovaskuler menempati

urutan ke-11 dengan persentase 5,9% kemudian meningkat menjadi urutan ke-3

sebesar 9,1% pada tahun 1986 dan menjadi penyebab kematian pertama pada tahun

2005. Sampai pada tahun 2007 penyakit jantung koroner di Indonesia sebesar 22.454

kasus (Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Departemen Kesehatan RI,

2008). Menurut WHO (2011) diperkirakan pada tahun 2030 angka kematian akibat

penyakit kardiovaskuler mencapai sekitar 23,6 juta orang. Beberapa penelitian

menunjukkan bahwa hal terpenting untuk mengurangi penyakit kardiovaskuler adalah

dengan mengurangi prevalensi dislipidemia (Bhatnagar et al., 2008).

Salah satu pengelolaan kondisi dislipidemia adalah terapi dengan menggunakan

obat golongan statin (HMG-CoA redukstase inhibitor), cara kerjanya dengan

menghambat secara kompetitif enzim 3-hydroxy-3methylglutaryl oenzyme A

reductase (HMG-CoA reduktase) yaitu suatu enzim di hati yang berperan pada

sintesis kolesterol. Diantara golongan statin, obat yang memiliki profil keamanan dan

tingkat toleransi yang baik adalah rosuvastatin. Rosuvastatin dapat meningkatkan

kadar HDL dan menurunkan kadar LDL lebih signifikan dari jenis obat statin yang

lain serta memiliki interaksi minimal dengan obat lain (Sargowo, 2005).

Untuk mengurangi efek samping yang dihasilkan oleh obat statin, terapi dapat

digabungkan dengan bahan alam yang dapat mendukung kerja obat statin dalam

menurunkan kadar LDL dan meningkatkan kadar HDL. Berdasarkan penelitian, daun

kenikir mengandung bahan-bahan yang dapat mendukug kerja obat statin, diantanya

adalah bahan antioksidan golongan flavonoid yang dapat menghambat kerja enzim

HMG-CoA reduktase dan meningkatkan kadar HDL (Fajrin, 2010 dan Jansen, 1997).

Identifikasi kandungan flavonoid daun kenikir menunjukkan bahwa daun tanaman

kenikir mengandung senyawa polifenol dan flavonoid berturut-turut sebanyak 152,01

mg dan 52,18 mg per 100 g sampel segar (Rahman, 2012).

3

Pemberian terapi gabungan atau kombinasi dinilai efektif apabila kedua bahan

obat bekerja secara sinergis (Jonosewojo, 2005). Dalam hal ini rosuvastatin dapat

menghambat kerja enzim HMG-CoA reduktase, meningkatkan reseptor LDL dan

menurunkan sintesis kolesterol di hati, sedangkan zat yang terdapat pada daun kenikir

seperti antioksidan flavonoid juga dapat menghambat kerja enzim HMG-CoA

reduktase dan meningkatkan jumlah reseptor LDL di hati (Fajrin, 2010 dan Sukma,

2011). Waktu paruh rosuvastatin adalah 20 jam (Sargowo, 2005) sehingga

memungkinkan bahan obat pada daun kenikir dan rosuvastatin dapat bekerja

bersama-sama. Hal tersebut menjadi dasar peneliti untuk menggunakan rosuvastatin

dan ekstrak daun kenikir sebagai terapi dislipidemia. Terapi diberikan secara peroral

dengan memberikan gabungan setengah dosis terapi tunggal pada masing-masing

obat dan pemberian obat kimia dan herbal diberi jeda waktu 2 jam (Jonosewojo,

2012).

1.2 Rumusan Masalah

Apakah pemberian terapi ekstrak etanol daun kenikir (Cosmos caudatus) dan

rosuvastatin dapat meningkatkan kadar HDL serum tikus dislipidemia ?

1.3 Tujuan Penelitian

Tujuan pada penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh terapi ekstrak

etanol daun kenikir (Cosmos caudatus) dan rosuvastatin terhadap peningkatan kadar

HDL serum tikus dislipidemia.

4

1.4 Manfaat Penelitian

Penelitian ini diharapkan dapat memberikan manfaat praktis kepada berbagai

pihak antara lain:

a. Sebagai data acuan untuk penelitian lebih lanjut mengenai pengaruh terapi ekstrak

daun kenikir dan rosuvastatin sebagai terapi dislipidemia.

b. Sebagai informasi bagi masyarakat mengenai manfaat kenikir.

5

BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Lipid Plasma

Lipid plasma terdiri dari triasilgliserol (16%), fosfolipid (30%), kolesterol

(14%), dan ester kolesteril (36%), serta sedikit asam lemak rantai panjang tak

teresterifikasi (asam lemak bebas, FFA) (4%) yang merupakan lemak plasma paling

aktif secara metabolik (Botham dan Mayes, 2009:225).

Susunan lipid plasma perlu dimodifikasi dalam bentuk lipoprotein yang larut

dalam air supaya dapat diangkut dalam sirkulasi. Struktur lipoprotein terdiri dari ester

kolesterol dan trigliserida pada yang terletak pada inti lipoprotein dan dikelilingi oleh

fosfolipid, kolesterol non ester, dan apo. Zat-zat tersebut beredar dalam darah sebagai

lipoprotein larut plasma. Lipoprotein ini bertugas mengangkut lipid dari tempat

sintesisnya menuju tempat penggunaannya (Suyatna, 2007:374).

2.1.1 Kolesterol

Kolesterol bersifat lipid amfipatik dan merupakan komponen struktural esensial

pada membran dan lapisan luar lipoprotein plasma. Kolesterol sebagai produk

metabolisme hewan, terdapat di dalam makanan yang berasal dari hewan, misalnya

kuning telur, daging, hati, dan otak. Kolesterol yang ada di dalam tubuh berasal dari

makanan (eksogen) dan sintesis (endogen) (Botham dan Mayes, 2009:239). Kadar

kolesterol plasma menurun oleh hormon tiroid dan esterogen, kedua hormon ini dapat

meningkatkan jumlah reseptor LDL di hati. Esterogen juga dapat meningkatkan kadar

HDL plasma (Ganong, 2005).

a. Biosintesis kolesterol

Kolesterol endogen disintesis dari asetil-CoA, yang merupakan sumber semua

atom karbon dalam kolesterol. Biosintesis kolesterol dapat dibagi menjadi lima tahap,

6

yaitu: (1) Sintesis mevalonat dari asetil-CoA. (2) Pembentukan unit isoprenoid dari

mevalonat melalui pengeluaran . (3) Kondensasi enam unit isoprenoid untuk

membentuk squalen. (4) Pembentukan lanosterol (steroid induk) melalui siklisasi

squalen. (5) Pembentukan kolesterol dari lanosterol yang berlangsung di membran

retikulum endoplasma dan melibatkan pertukaran-pertukaran di inti steroid dan rantai

samping. Sintesis kolesterol ini dikontrol oleh HMG-CoA reduktase melalui inhibisi

kompetitif (Botham dan Mayes, 2009:239).

Gambar 2.1 Biosintesis kolesterol

b. Metabolisme kolesterol

Metabolisme kolesterol mengikuti beberapa jalur dari metabolisme

lipoprotein. Secara garis besar terdapat tiga jalur metabolisme lipoprotein yang terjadi

dalam tubuh, yaitu :

1) Jalur Metabolisme Eksogen

Trigliserida dan kolesterol yang berasal dari makanan dalam usus dikemas

sebagai kilomikron. Kilomikron ini akan diangkut menuju saluran limfe lalu ke dalam

7

darah melalui duktus torasikus. Di dalam jaringan lemak trigliserida dalam

kilomikron mengalami hidrolisis oleh lipoprotein lipase yang terdapat pada

permukaan sel endotel. Akibat hidrolisis ini maka akan terbentuk asam lemak dan

kilomikron remnan. Asam lemak bebas akan menembus endotel dan masuk ke

jaringan lemak atau sel otot untuk diubah menjadi trigliserida kembali (cadangan)

atau dioksidasi (energi).

Kilomikron remnan adalah kilomikron yang telah dihilangkan sebagian besar

trigliseridanya sehingga ukurannya mengecil sedangkan jumlah ester kolesterol tetap.

Kilomikron remnan ini akan dibersihkan oleh hati dari sirkulasi dengan melakukan

endositosis oleh lisosom. Hasil metabolisme ini berupa kolesterol bebas yang akan

digunakan untuk sintesis berbagai struktur (membran plasma, mielin, hormon steroid,

dan sebagainya), disimpan dalam hati sebagai kolesterol ester kembali atau

diekskresikan menjadi empedu (sebagai kolesterol atau asam empedu) atau diubah

sebagai lipoprotein endogen yang dikeluarkan ke dalam plasma. Kolesterol juga dapat

disintesis dari asetat di bawah pengaruh enzim HMG-CoA reduktase yang menjadi

aktif jika terdapat kekurangan kolesterol endogen. Asupan kolesterol dari darah juga

diatur oleh jumlah reseptor LDL yang terdapat pada permukaan sel hati (Suyatna,

2007).

2) Jalur Metabolisme Endogen

Trigliserida dan kolesterol yang disintesis oleh hati diangkut secara endogen

dalam bentuk VLDL kaya trigliserida dan mengalami hidrolisis dalam sirkulasi oleh

lipoprotein lipase yang juga menghidrolisis kilomikron menjadi partikel lipoprotein

yang lebih kecil yaitu IDL dan LDL. Low Denity Lipoprotein (LDL) merupakan

lipoprotein yang mengandung kolesterol paling banyak dan mengalami katabolisme

melalui reseptor dan jalur non reseptor. Jalur katabolisme reseptor dapat ditekan oleh

produksi kolesterol endogen. Peningkatan kadar kolesterol sebagian disalurkan ke

dalam makrofag yang akan membentuk sel busa (foam cells) yang berperan dalam

terjadinya aterosklerosis prematur (Suyatna, 2007).

8

3) Jalur Reverse Cholesterol Transport

Jalur ini berkaitan dengan metabolisme kolesterol HDL. High Density

Lipoprotein (HDL) dilepas sebagai partikel kecil yang miskin kolesterol dan

mengandung apo A, C, dan E (HDL nescent) yang berasal dari usus halus dan hati.

High Density Lipoprotein nescent akan mendekati makrofag untuk mengambil

kolesterol yang tersimpan di makrofag dan berubah menjadi HDL dewasa. Kolesterol

yang telah diambil HDL akan diesterifikasi oleh enzim Lecithin Cholesterol

Acyltransferase (LCAT) menjadi kolesteril ester yang akan ditranspor dalam dua

jalur yaitu jalur hati yang akan ditangkap oleh reseptor kolesterol HDL dan kolesteril

ester dalam HDL akan dipertukarkan dengan trigliserida dari VLDL dan IDL yang

akan kembali ke hati dengan bantuan Cholesterol Ester Transfer Protein (CETP)

(Suyatna, 2007).

Gambar 2.2 Jalur metabolisme kolesterol (Suyatna, 2007)

9

c. Transpor Kolesterol

Lipid diangkut di dalam plasma sebagai lipoprotein. Empat kelompok

utama lipoprotein penting yaitu : kilomikron, VLDL, LDL, dan HDL.

Kilomikron mengangkut triasilgliserol hati, LDL menyalurkan kolesterol ke

jaringan, dan HDL membawa kolesterol dari jaringan dan mengembalikannya

ke hati untuk diekskresikan dalam proses yang dikenal sebagai transpor

kolesterol terbalik (reserve cholesterol transport) (Botham dan Mayes,

2009:243).

Gambar 2.3 Transpor kolesterol

Kolesterol dari makanan mencapai keseimbangan dengan kolesterol plasma

dalam beberapa hari dan dengan kolesterol jaringan dalam beberapa minggu. Ester

kolesteril dalam makanan dihidrolisis menjadi kolesterol yang kemudian diserap oleh

usus bersama dengan kolesterol tak teresterifikasi dan lipid lain dalam makanan.

Bersama dengan kolesterol yang disintesis di usus, kolesterol ini kemudian

dimasukkan ke dalam kilomikron. Kolesterol yang diserap oleh usus, sebanyak 80-

10

90% akan mengalami esterifikasi dengan asam lemak rantai panjang di mukosa usus.

Sebanyak 95% kolesterol kilomikron disalurkan ke hati dalam bentuk kilomikron

remnan dan sebagian besar kilomikron yang disekresi oleh hati dalam bentuk VLDL

dipertahankan selama pembentukan IDL dan akhirnya LDL yang diserap oleh

reseptor LDL di hati dan jaringan ekstrahepatik (Botham dan Mayes, 2009:243).

d. Pembuangan kolesterol

Satu-satunya organ yang dapat membuang kolesterol secara aktif adalah hati

yang mengekskresikannya ke dalam saluran empedu untuk dikeluarkan dari tubuh

bersama tinja. Pada metabolisme kolesterol, hati mempunyai peran yang sangat

penting yaitu sebagai tempat sintesis, mengonversi menjadi asam empedu, serta

mengekskresikan kolesterol dan asam empedu bersama dengan empedu. Kolesterol

empedu berasal dari: (1) sintesis kolesterol endogen oleh hepatosit; (2) usus, dibawa

oleh kilomikron remnan; (3) jaringan perifer, dibawa oleh HDL (Hairrudin, 2008).

2.1.2 Lipoprotein

a. Definisi Lipoprotein

Lipoprotein merupakan suatu ikatan biokimia yang terdiri dari lipid dan protein.

Lipid utama di dalam lipoprotein adalah kolesterol, triasilgliserol, dan fosfolipid.

Untuk dapat diangkut dalam sirkulasi darah maka lipid yang bersifat tidak larut air

akan berikatan dengan protein khusus yaitu apoprotein, sehingga membentuk ikatan

yang disebut lipoprotein (Adam, 2006). Lipoprotein memiliki struktur misel, dengan

lipid nonpolar (trigliserida dan kolesterol ester) terkandung dalam pusat hidrofobik

yang dikelilingi oleh lipid amfipatik (kolesterol bebas dan fosfolipid) dan protein.

Protein hidrofilik dan komponen lipid bertugas mengangkut lipid nonpolar

(Montgomery, 1993).

b. Fungsi lipoprotein

Hampir semua lipoprotein dibentuk di dalam hati, yang merupakan tempat

sebagian besar kolesterol plasma, fosfolipid, dan trigliserida (kecuali trigliserida yang

11

diabsorbsi dari usus dalam bentuk kilomikron) disintesis. Sejumlah kecil lipoprotein

densitas tinggi juga disintesis di dalam epitel usus selama absorpsi asam lemak dari

usus. Fungsi utama lipoprotein adalah untuk mengangkut komponen-komponen lipid

di dalam darah. Lipoprotein densitas sangat rendah mengangkut trigliserida yang

disintesis di dalam hati terutama ke jaringan adiposa, sedangkan lipoprotein yang lain

berperan penting dalam tahap-tahap transpor fosfolipid dan kolesterol yang berbeda

dari hati menuju jaringan perifer atau dari jaringan perifer kembali ke hati (Guyton.

2008).

c. Jenis-Jenis Lipoprotein

Lipoprotein dibedakan berdasarkan rasio antara lipid dan protein sehingga

menghasilkan berat jenis yang berbeda-beda yang terdiri atas beberapa fraksi yaitu

kilomikron, very low density lipoprotein (VLDL), intermediate density lipoprotein

(IDL), low density lipoprotein (LDL), dan high density lipoprotein (HDL) dengan

ciri-ciri yang disajikan pada Tabel 2.l (Assmann et al., 2004).

Tabel 2.1 Klasifikasi lipoprotein

Ultracentrifuge Kilomikron VLDL LDL HDL

1) Densitas hidrasi

(g/ml )

400 20-400 0-20 -

3) Elektroforesis Tidak bergerak Pre-beta Beta Alfa

4) Diameter (A) 800-5000 300-800 180-280 50-120

5) Susunan :

% trigliserida

% kolesterol ester

% kolesterol

% phospholipid

% protein

85

4

2

7

1-2

52

17

7

15

9

10

37

8

23

22

4

18

2

25

51

6) Apoprotein utama A,B,C B,C,E B A,E

7) Asal Usus Usus, hati Hasil akhir

metabolisme

VLDL

Usus, hati

8) Fungsi Transport

trigliserida

eksogen

Transport

trigliserida

endogen

Transport

kolesterol dan

phospholipid ke

sel perifer

Transport

kolesterol dari

sel perfer ke hati

12

2.1.3 Apoprotein

Apoprotein atau apo merupakan unsur pokok protein pada lipoprotein dan

mempunyai struktur dan fungsi yang penting. Apoprotein mempunyai bagian yang

polar dan non polar. Bagian polar terletak mengarah ke medium aqueous dan bagian

non polar terikat dan mengelilingi trigliserida dan kolesteril ester. Fungsi apoprotein

sebagai sel ligan yang dapat berikatan dengan sel permukaan spesifik reseptor

lipoprotein, abnormalitas pada ikatan tersebut dapat menyebabkan dislipidemia.

Apoprotein juga berfungsi mengaktifkan dan menghambat enzim, misalnya

lipoprotein lipase diaktifkan oleh apo C-II dan dihambat oleh apo C-III. Defisiensi

apo C-II menyebabkan kerusakan dalam aktivasi lipoprotein lipase dan menyebabkan

hidrolisis kilomikron dan VLDL menjadi tidak sempurna. Apoprotein A-I merupakan

kofaktor untuk mengaktivasi LCAT yang harus diaktifkan sebelum esterifikasi

kolesterol terjadi (Forster, 1998).

Beberapa apoprotein bersifat menyatu (integral) dan tidak bisa dilepaskan,

sementara sebagian lagi dapat berpindah dengan bebas ke lipoprotein lainnya. Satu

atau lebih apoprotein ditemukan pada setiap lipoprotein. Menurut penataan ABC,

apoprotein utama HDL (-lipoprotein) diberi simbol A. Apoprotein utama LDL (-

lipoprotein) adalah apo B, yang juga ditemukan pada VLDL dan kilomikron.

Apoprotein B pada kilomikron (B-48) lebih kecil daripada apo B-100 di hati.

Apoprotein C-I, C-II, dan C-III merupakan polipeptida berukuran lebih kecil yang

dipindahkan secara bebas di antara beberapa lipoprotein yang berlainan. Beberapa

apoprotein lainnya telah ditemukan pula pada lipoprotein plasma. Salah satunya

adalah apo E yang kaya arginin dan diisolasi dari VLDL serta HDL (Mayes, 2001).

13

2.2 Lipoprotein Densitas Tinggi (HDL)

2.2.1 Pengertian HDL

High Density Lipoprotein (HDL) disebut juga -lipoprotein adalah partikel

yang padat, memiliki ukuran yang kecil, dan mengandung protein paling tinggi

diantara lipoprotein lain. HDL disintesis dalam hati dan usus kemudian

ditransportasikan ke dalam aliran darah. Fungsi HDL adalah membawa kolesterol

dalam membran ke sel hati untuk didegradasi kembali dan digunakan untuk sintesis

asam empedu. HDL disebut juga kolesterol baik karena mempunyai efek

antiaterogenik yaitu mengangkut kolesterol bebas dari pembuluh darah dan jaringan

lain menuju hati selanjutnya mengeluarkannya lewat empedu (Assmann et al., 2004).

Tabel 2.2 Komposisi HDL dalam plasma manusia

Lipoprotein Sumber Diameter

(nm)

Densitas

(g/ml)

Komposisi Komponen

lipid

utama

Apoprotein Protein

(%)

Lipid

(%)

HDL1

Hati, usus,

VLDL,

kilomikron

20-25 1,019-

1,063 32 68

Fosfolipid,

kolesterol

A-I, A-II,

A-IV, C-I,

C-II, C-III,

D2, E

HDL2 10-20 1,063-

1,125 33 67

HDL3 5-10 1,125-

1,210 57 43

PraHDL3 1,210 A-I

Sumber: Mayes, 2009: 226

2.2.2 Metabolisme HDL

High Density Lipoprotein (HDL) mengambil bagian di dalam metabolisme

triasilgliserol maupun kolesterol. High Density Lipoprotein disekresi di hati dan

intestinum. High Density Lipoprotein nascent (HDL yang baru disekresikan) dari

intestinum tidak mengandung apo C dan E, tetapi hanya mengandung apo A.

Apoprotein C dan E disintesis di hati dan dipindahkan dari HDL hati ke HDL usus

ketika HDL usus memasuki plasma. Fungsi HDL adalah sebagai tempat

14

penyimpanan apo C dan E yang dibutuhkan dalam metabolisme kilomikron dan

VLDL (Botham dan Mayes, 2009: 229).

High Density Lipoprotein nascent terdiri dari lapis ganda fosfolipid diskoid

yang mengandung apo A dan kolesterol bebas. Lipoprotein ini serupa dengan partikel

yang ditemukan di dalam plasma pasien dengan defisiensi enzim plasma LCAT dan

di dalam pasien ikterus obstruktif. Lecithin Cholesterol Acyltransferase (LCAT) dan

aktivator LCAT apo A-I berikatan dengan diskoid dan fosfolipid permukaan. Proses

katalis oleh LCAT mengonversi fosfolipid permukaan dan kolesterol bebas menjadi

ester kolesteril dan lisolesitin. Ester kolesteril nonpolar bergerak menuju bagian

interior lapisan ganda yang bersifat hidrofobik, sedangkan lisolesitin dipindahkan ke

albumin plasma. Reaksi tersebut meghasilkan bagian inti yang nonpolar dan

terbentuk HDL pseudomisel sferis yang dibungkus oleh lapisan permukaan lipid polar

dan apo, hal ini akan mempermudah pengeluaran kolesterol yang tidak teresterifikai

dari lipoprotein dan jaringan (Botham dan Mayes, 2009: 230).

Siklus HDL yang dikemukakan untuk menjelaskan pengangkutan balik

kolesterol dari jaringan ke hati dikenal sebagai proses transpor kolesterol terbalik

(reverse cholesterol transport). Siklus tersebut melibatkan ambilan dan esterifikasi

kolesterol oleh HDL3 yang menjadi lebih besar dan kurang rapat dengan membentuk

HDL2.. Class B Scavenger Receptor B1 (SR-B1) yang diidentifikasi sebagai reseptor

HDL dengan peranan ganda dalam metabolisme HDL. Di hati dan jaringan

steroidogenik, reseptor ini mengikat HDL melalui apo A-I, dan ester kolesteril secara

selektif disalurkan ke sel meskipun partikelnya sendiri, termasuk apo A-I, tidak

diserap. Di jaringan, SR-B1 memerantarai penerimaan kolesterol dari sel oleh HDL

yang kemudian mengangkutnya ke hati untuk diekskresikan melalui empedu. HDL3

yang dihasilkan dari HDL diskoid melalui kerja LCAT, menerima kolesterol dari

jaringan melalui SR-B1 dan kolesterol kemudian diesterifikasi oleh LCAT, yang

memperbesar ukuran partikel untuk membentuk HDL2 yang kurang padat. High

Density Lipoprotein3 kemudian terbentuk kembali, baik setelah penyaluran selektif

15

ester kolesteril ke hati melalui SR-B1 atau melalui hidrolisis triasilgliserol dan

fosfolipid HDL2 oleh enzim lipase hati (Botham dan Mayes, 2009: 230).

Pertukaran antara HDL2 dan HDL3 disebut sebagai siklus HDL. Apoprotein A-I

bebas dihasilkan oleh proses ini dan membentuk pra-HDL setelah berikatan dengan

sejumlah kecil fosfolipid dan kolesterol, sedangkan kelebihan apo A-I diekskresi di

ginjal. Mekanisme penting kedua untuk transpor berlawanan kolesterol melibatkan

ATP-binding cassette transporter A1 (ABCA-1). ATP-binding cassette transporter

A1 (ABCA-1) cenderung untuk memindahkan kolesterol dari sel ke partikel yang

kurang memiliki lipid, seperti pra-HDL atau apo-A1 yang kemudian diubah menjadi

HDL3 melalui HDL diskoid (Botham dan Mayes, 2009: 230).

Gambar 2.4 Jalur yang terlibat dalam pembuatan dan perubahan HDL (Sumber: Assmann

et al., 2004).

16

Kadar HDL bervariasi secara timbal balik dengan kadar trigliserida plasma dan

secara langsung dengan aktivitas lipoprotein lipase. Kadar HDL2 berbanding terbalik

dengan insidensi aterosklerosis koroner diduga karena HDL mencerminkan efisiensi

kolesterol terbalik. High Density Lipoprotein1 ditemukan di dalam darah hewan yang

hiperkolesterolemia akibat makanan, HDL ini kaya akan kolesterol dan hanya

memiliki apo E (Botham dan Mayes, 2009: 230-231).

2.3 Dislipidemia

Dislipidemia adalah peningkatan satu atau lebih dari komponen lemak yang

terdiri dari kolesterol, fosfolipid, atau trigliserida (Priyanto, 2009 dan Katzung,

2006). Berdasarkan penyebabnya dislipidemia dibagi menjadi 2, yaitu dislipidemia

primer dan dislipidemia sekunder. Dislipidemia primer terutama disebabkan oleh

kelainan genetik yang biasanya diketahui pada saat pemeriksaan laboratorium karena

tidak menimbulkan keluhan. Sementara dislipidemia sekunder adalah peningkatan

kadar lipid dalam darah yang disebabkan oleh suatu penyakit tertentu, obat-obatan

atau penyebab lain selain faktor genetik (Hairrudin, 2008).

2.3.1 Klasifikasi kadar lipid

Klasifikasi kadar lipid yang ada dalam plasma dapat dilihat pada Tabel 2.3.

Kisaran kolesterol normal dan hiperkolesterol pada tikus dapat dilihat pada Tabel 2.4.

17

Tabel 2.3 Klasifikasi kolesterol total, trigliserida, HDL, dan LDL pada manusia

Lipid plasma Kadar (mg/dl) Kriteria

Kolesterol total < 200 Diinginkan

200-239 Cukup tinggi

240 Tinggi Kolesterol LDL < 100 Optimal

100-129 Jauh atau di atas optimal

130-159 Cukup tinggi

160-189 Tinggi

190 Sangat tinggi Kolesterol HDL < 40 Rendah

60 Tinggi < 150 Normal

Trigliserida 150-199 Cukup tinggi

200-499 Tinggi

500 Sangat tinggi

Sumber : Wells et al., 2009

Tabel 2.4 Kisaran kolesterol normal dan hiperkolesterol pada tikus

Lipid plasma Kisaran yang ideal (mg/dl) Hiperkolesterol (mg/dl)

Kolesterol total 80 -100 115 200

LDL 10 80 100 150

HDL 40 60 20 40

Trigliserida 60 145 150 200

Sumber : Eshrat, 2002 ; Bani, 2006

2.3.2 Dislipidemia dan Aterosklerosis

Selain kadar kolesterol plasma yang diyakini sebagai faktor utama yang

mendorong aterosklerosis, saat ini triasilgliserol juga merupakan faktor risiko yang

berdiri sendiri. Aterosklerosis ditandai oleh penimbunan kolesterol dan ester

kolesteril dari lipoprotein plasma ke dinding arteri. Penyakit yang menyebabkan

peningkatan berkepanjangan kadar VLDL, IDL, kilomikron remnan, dan LDL dalam

darah (seperti: diabetes mellitus, nefrosis lipid, hipotiroidisme, dan penyakit

18

dislipidemia lainnya) sering disertai oleh aterosklerosis. Terdapat hubungan terbalik

antara kadar HDL dan penyakit jantung koroner sehingga rasio LDL:HDL merupakan

parameter prediktif yang penting. Hal ini konsisten dengan fungsi HDL dalam

transpor kolesterol terbalik (Botham dan Mayes, 2009:248).

2.4 Statin

Statin adalah obat yang berperan sebagai kompetitif inhibitor terhadap 3-

hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A (HMG CoA) reductase, yaitu enzim yang

berfungsi untuk biosintesis kolesterol. Penurunan kadar kolesterol menginduksi sel

hati untuk meningkatkan reseptor LDL sehingga jumlah LDL yang dimetabolisme

dalam hati. Statin mampu menurunkan LDL dan meningkatkan HDL plasma

(Suyatna, 2009).

2.4.1 Pembagian Obat Golongan Statin

Dalam golongan statin terdapat beberapa macam obat yaitu Simvastatin,

Lovastatin, Atorvastin, Cerivastatin, Fluvastatin, Mevastatin, Pitavastatin,

Pravastatin, Rosuvastatin (Tjay dan Kirana, 2007). Berbagai obat statin yaitu

fluvastatin, lovastatin, simvastatin, atorvastatin, dan rosuvastatin mengalami

biotransformasi oleh isozim cytochrome P450 dalam hati, tetapi pravastatin tidak

melalui jalur metabolisme cytochrome P450.

a. Simvastatin

Simvastatin merupakan nama generik obat, sedangkan nama dagangnya adalah

Zocor. Simvastatin adalah obat penurun kolesterol yang bekerja dengan menghambat

produksi kolesterol di hati dan usus, menurunkan kolesterol darah secara keseluruhan

dan menurunkan kadar LDL darah. Indikasi penggunaan simvastatin adalah untuk

penderita hiperkolesterolemia primer, pasien yang tidak cukup memberikan respon

terhadap diet, mengurangi kejadian klinis, memperlambat progresif aterosklerosis

koroner pada pasien penyakit jantung koroner dan penderita kadar kolesterol 5,5

mmol/l atau lebih. Kontra indikasi sediaan ini adalah untuk wanita hamil, menyusui,

19

pasien dengan penyakit hati aktif atau peningkatan serum transaminase yang tidak

dapat dijelaskan penyebabnya. Dosis tunggal awal adalah 10 mg/hari. Dalam interval

kurang dari empat minggu dosis dapat menyesuaikan dalam kisaran lazim 10-40

mg/hari. Penderita penyakit jantung koroner awal 20 mg/hari. Efek samping

simvastatin adalah pusing, sakit kepala, konstipasi, diare, dispepsia, mual, ruam kulit,

nyeri abdomen, nyeri dada, gangguan penglihatan, hepatitis dan anemia. Pemakaian

simvastatin dalam jangka waktu yang lama menyebabkan gangguan fungsi kognitif

seperti amnesia, transient global amnesia, aphasia dan gangguan memori jangka

pendek.

Simvastatin merupakan prodrug dalam bentuk lakton yang harus dihidrolisis

terlebih dulu menjadi bentuk aktifnya yaitu asam -hidroksi di hati, lebih dari 95%

hasil hidrolisisnya akan berikatan dengan protein plasma. Konsentrasi obat bebas di

dalam sirkulasi sistemik sangat rendah yaitu kurang dari 5%, dan memiliki waktu

paruh 2 jam. Sebagian besar obat akan dieksresi melalui hati. Pemberian obat

dilakukan pada malam hari (Witztum, 1996).

b. Lovastatin

Lovastatin merupakan salah satu obat penurun kolesterol golongan statin.

Lovastatin sebagai agen hipokolesterolemia mampu menurunkan kadar kolesterol

serum, LDL, trigliserol dan VLDL dalam darah (Albert, 1989). Obat golongan ini

sangat efektif untuk mengobati dislipidemia karena merupakan inhibitor kompetitif

dari 3-hidroksi-3-metilglutaril-koenzim-A (HMG-KoA) reduktase (Goodman and

Gilman, 2001). Lovastatin merupakan agen penurun kolesterol yang diisolasi dari

Aspergillus terreus (Merck, 2005). Obat golongan statin ini dapat menurunkan

biosintesis kolesterol dengan cara menghambat secara kompetitif enzim HMG-KoA

reduktase. Enzim ini merupakan enzim yang mengkatalisis konversi HMG-KoA

menjadi mevalonat, suatu prekursor sterol, termasuk kolesterol. Efek tersebut dapat

meningkatkan katabolisme fraksional LDL maupun ekstraksi prekursor LDL oleh

hati, sehingga mengurangi simpanan LDL plasma. Oleh sebab itu, ekstraksi lintas

pertama oleh hati dari obat tersebut cukup besar, maka efek utamanya terjadi di hati

20

(Katzung, 2006). Lovastatin di metabolisme oleh hidroksilasi dan dieksresi melalui

empedu, sedangkan sekitar 80% suatu dosis oral muncul dalam tinja, ini

menggambarkan eksresi obat dalam empedu sebaik obat yang tidak diabsorpsi. Efek

samping akut lovastatin rendah. Disfungsi hepar terlihat sekitar 2% pasien

(Raharjo,2009).

c. Atorvastatin

Atorvastatsin merupakan molekul garam kalsium trihidrat, sebuah molekul

kalsium atorvastatin yang mengikat tiga molekul air. Atorvastatin merupakan salah

satu zat aktif penurun kolesterol darah golongan statin atau penghambat/inhibitor

HMG-CoA reduktase, yaitu senyawa yang dapat menghambat konversi enzim HMG-

CoA reduktase menjadi mevalonat sehingga menghambat pembentukan kolesterol

endogen. Berbeda dengan prodrug lakton lovastatin dan simvastatin, atorvastatin

memiliki 3 asam hidroksil aktif dan tidak memerlukan hidrolisis in vivo. Atorvastatin

dan metabolit aktifnya yang secara struktur serupa dengan HMG-CoA berkompetisi

untuk menempati sisi aktif HMG-CoA reduktase. Penurunan konsentrasi kolesterol

total dan LDL dihasilkan oleh dosis biasa atorvastatin yang secara substansial

menghasilkan penurunan lebih besar dibandingkan dengan monoterapi dengan

antilipemik lainnya. Dalam sebuah studi terkontrol dan tak terkontrol rata-rata

penurunan kolesterol total 17-46%, 25-61% LDL, dan 10-37% trigliserida pada

pasien dengan hiperkolesterolemia primer yang menerima atorvastatin 2,5-80 mg/hari

selama setidaknya 6 minggu, dan mengalami peningkatan HDL sekitar 3-12%. Pada

pasien dengan dislipidemia disertai hipertensi yang menerima kombinasi tetap

atorvastatin (10-80 mg) dan amlodipin (5-10 mg) konsentrasi LDL serum turun

sebesar 33-49% setelah terapi selama 8 minggu. Atorvastatin menghasilkan

penurunan konsentrasi kolesterol total LDL lebih besar bila dibandingkan dengan

statin lainnya (fluvastatin, lovastatin, simvastatin dan pravastatin) (McEvoy, 2008).

Waktu paruh atorvastatin adalah 14 jam. (Suyatna, 2007).

d. Rosuvastatin

21

Rosuvastatin adalah salah satu obat golongan inhibitor HMG-CoA reduktase

atau lebih dikenal dengan golongan statin. Mekanisme kerja dalam menurunkan

kolesterol adalah melalui penghambatan sintesis kolesetrol dalam hati, dengan

meghambat enzim HMG-CoA reduktase. Hasilnya terdapat penurunan kolesterol dan

peningkatan reseptor LDL, sehingga kadar LDL di dalam sirkulasi menurun.

Penurunan produksi LDL menyebabkan penghambatan sintesis VLDL di hati, yang

merupakan prekursor LDL.

Rosuvastatin merupakan golongan obat statin yang tergolong baru di pasaran,

disetujui oleh FDA pada bulan Agustus 2003. Kelebihan rosuvastatin adalah

memiliki efek peningkatan HDL lebih tinggi dari golongan statin lainnya seperti

simvastatin dan atorvastatin (McTaggart, 2008), menghambat HMG-CoA reduktase

lebih besar dari obat golongan statin lainnya, hidrofisilitas dan selektivitas untuk

masuk dan aktif di hepar, memiliki waktu paruh yang panjang yaitu 20-24 jam,

mengalami metabolisme minimal pada sitokrom P-450, tidak ada metabolisme

signifikan pada sistem sitokrom 3A4, ini menandakan potensi yang rendah untuk

interaksi antar obat, dan tidak ada perbedaan efek farmakologis rosuvastatin

sehubungan dengan pemberian dosis pada siang atau malam hari, umur, jenis

kelamin, dan masuknya makanan (Sargowo, 2005).

Di Indonesia, sediaan rosuvastatin yang disetujui oleh FDA adalah tablet 5 mg,

10 mg, 20 mg, dan 40 mg dengan indikasi untuk mengatasi hiperkolesterolemia.

Adapun indikasi lengkap yang disetujui, yaitu rosuvastatin diindikasikan sebagai

terapi tambahan jika upaya diet dan olah raga tidak mencukupi, bagi pasien dengan

hiperkolesterolemia primer (tipe IIa), termasuk Heterozygous Familial

Hypercholesterolaemiaatau Mixed Dyslipidemia (tipe Iib), dan diindikasikan pada

pasien dengan Homozygot Familial Hypercholesterolaemia sebagai tambahan upaya

diet dan terapi penurunan lipid (Badan POM RI, 2006).

22

2.5 Kenikir

2.5.1 Taksonomi

Gambar 2.5 Kenikir (Cosmos caudatus)

Kingdom : Plantae

Divisi : Magnoliophyta

Kelas : Magnoliopsida

Ordo : Asterales

Famili : Asteraceae

Genus : Cosmos

Spesies : caudatus Kunth

Jenis : Cosmos caudatus H.B.K

2.5.2 Morfologi

Kenikir merupakan tanaman perdu, semusim, tidak berkayu dengan batang

yang tumbuh tegak berwarna hijau keunguan. Kenikir memiliki daun yang majemuk,

bersilang berhadapan, bentuk menyirip, ujung runcing, tepi rata dan berwarna hijau

atau hijau kekuningan. Bunga tanaman kenikir merupakan bunga majemuk yang

memiliki tangkai bunga, berbentuk seperti cawan, serta memiliki kelopak di bagian

23

bawah bunga berwarna hijau yang berbentuk seperti lonceng. Biji tanaman kenikir

keras dan kecil, berbentuk jarum, berwarna hitam, dan memiliki panjang sekitar 1 cm

(van den Bergh, 1994).

2.5.3 Manfaat

Daun dan pucuk daun kenikir dapat diambil dan dikonsumsi sebagai sayuran

karena mengandung banyak air, serat, dan mineral (van den Begh, 1994). Hasil

penelitian Ragasa et al. (1997), menunjukkan bahwa daun kenikir yang diekstrak

dengan kloroform memiliki aktivitas antimikroba yang baik terhadap penghambatan

Staphylococcus aureus, Saccharomyces cereviseae, dan Candida albicans.

Daun kenikir (Cosmos caudatus) mengandung saponin, flavonoid, polifenol

dan minyak atsiri (Fuzzati et al., 1995). Identifikasi kandungan flavonoid yang

dilakukan oleh Batari (2007) menggunakan daun tanaman kenikir yang berasal dari

pasar lokal di daerah Kabupaten Bogor, Jawa Barat. Hasil penelitian tersebut

menunjukkan bahwa daun tanaman kenikir yang diekstrak dengan kloroform

mengandung senyawa fenol dan flavonoid berturut-turut sebagai 152,01 mg dan

52,18 mg per 100 g sampel segar. Nilai tersebut membuktikan bahwa daun tanaman

kenikir dapat dijadikan sebagai alternatif bahan obat karena memiliki kemampuan

antioksidan yang tinggi. Pada penelitian yang dilakukan oleh Shui et al. (2005),

dengan menggunakan uji free radical spiking (dengan menggunakan instrumen

HPLC/MS), diketahui bahwa kenikir memiliki aktivitas antioksidan yang sangat

tinggi, yaitu setara dengan sekitar 2400 mg asam askorbat per 100 gram sampel segar.

Komponen antioksidan utama yang diidentifikasi merupakan senyawa polar, yaitu

golongan dari proantosianidin yang berbentuk sebagai dimer hingga heksamer,

quercetin glikosida, klorogenik, neo-klorogenik, dan asam kriptoklorogenik.

Penelitian mengenai kandungan komponen-komponen quercetin dan quercetin

glikosida pada ekstrak kenikir dengan metanol, juga dilakukan di Malaysia pada

bulan Juli 2000 (Israf et al, 2003).

24

Penelitian mengenai efek flavonoid dan quersetin terhadap kadar lipid tikus

yang diberi diet dislipidemia, didapatkan bahwa terjadi peningkatan kadar kolesterol

HDL, penurunan kadar kolesterol LDL dan trigliserida (Ricardo et al., 2001).

Sedangkan pada penelitian lain dikatakan bahwa quercetin dapat meningkatkan kadar

kolesterol HDL sampai 28,6% pada tikus yang diberi diet tinggi lemak (Yugarani et

al., 1992). Mekanisme kerja senyawa flavonoid dalam meningkatkan kadar HDL

serum adalah dengan cara meningkatkan aktivitas Lechitin-Cholesterol Acyl

Taransferase (LCAT) dan meningkatkan produksi apo A-1. Apolipoprotein A-1

bertugas sebagai kofaktor enzim untuk LCAT serta sebagai ligan untuk interaksi

dengan reseptor lipoprotein dalam jaringan. Enzim LCAT merupakan enzim yang

dapat mengonversi kolesterol bebas menjadi ester kolesterol yang lebih hidrofobik,

sehingga ester kolesterol dapat berikatan dengan partikel inti lipoprotein untuk

membentuk HDL baru dan akan meningkatkan kadar HDL serum, sehingga dengan

peningkatan Apo A-1 diharapkan dapat meningkatkan kadar kolesterol HDL serum

(Baba et al., 2007; Rousset, 2010; dan Vijayakumar, 2006). Senyawa flavonoid juga

dapat meningkatkan jumlah kolesterol HDL dengan cara meningkatkan pelepasan

kolesterol dari makrofag dan meningkatkan ekspresi ATP-binding cassette (ABCA-1)

(Helal et al., 2013). Senyawa flavonoid juga dapat menurunkan kadar kolesterol total

dan trigliserida darah adalah dengan cara menghambat HMG-CoA reduktase yang

berfungsi sebagai pengkatalis dalam pembentukan kolesterol (Lewis, 2005).

Daun kenikir juga memiliki kandungan minyak atsiri yang dapat menurunkan

rasio LDL:HDL. Minyak atsiri memiliki bahan aktif DADS yang dapat menghambat

kerja HMG-CoA reductase sehingga menyebabkan penurunan sintesis kolesterol dan

meningkatkan reseptor LDL. Hal ini menyebabkan kadar LDL plasma menurun dan

terjadi supresi terhadap produksi apo B-100. Produksi apo B-100 berhubungan

terbalik dengan produksi apo A-1, sehingga supresi terhadap Apo B-100 akan

meningkatkan produksi apo A-1 (Murray, 2003).

25

2.6 Diet Tinggi Lemak

Terdapat beberapa macam cara pembuatan pakan dan penentuan lamanya

pemberian diet untuk tikus dislipidemia :

a. Campuran kuning telur bebek sebanyak 4 ml/hari dan lemak babi 180 gram/100

gram ransum untuk 18 ekor tikus diberikan melalui sonde lambung selama 7 hari

(Fatimah, 2007).

b. Diet aterogenik yang akan meningkatkan kadar kolesterol pada tikus dengan

mentode Constantinides, menggunakan 0,006 mg adrenalin inisial intravena dan

diet 5 mg kuning telur intermitten selama 14 hari (Maliya, 2006).

c. Pemberian diet campuran minyak babi dan kuning telur bebekdengan

perbandingan 1:1 (v/v) yang dicampur dengan kolesterol murni 2%. Dosis yang

diberikan sebanyak 1 ml/100gBB secara oral setiap hari selama 30 hari

(Chasanah, 2014).

Pada penelitian ini cara diet dislipidemia yang digunakan adalah cara pertama

karena bahan yang digunakan mudah didapat dan tidak membutuhkan waktu yang

lama untuk memberi diet dislipidemia pada tikus.

26

Flavonoid 1. Menghambat kerja enzim

HMG CoA reduktase

2. Penurunan sintesis

kolesterol di hati

3. Penurunan sintesis ApoB

4. Meningkatkan reseptor

LDL di hati

5. Meningkatkan sintesis

apo A-I di hati

Diet tinggi kolesterol

Tikus Dislipidemia

Ekstrak etanol daun

kenikir

Rosuvastatin

1. Meningkatkan aktivitas LCAT

(Lechitin Cholesterol Acyl

Taransferase)

2. Meningkatkan produksi apo A-1

3. Meningkatkan pelepasan

kolesterol dari makrofag

4. Meningkatkan ekspresi ATP-

binding cassette (ABCA-1)

5. Menghambat kerja enzim HMG

CoA reduktase

2.7 Kerangka Teori

Gambar 2.6 Kerangka Teori

27

2.8 Kerangka Konsep

Keterangan :

Gambar 2.7 Kerangka konsep

= Variabel bebas

= Menurunkan

= Meningkatkan

Diet dislipidemia

Rosuvastatin

Produksi apo A-I

hepar HDL Plasma

Produksi apo A-I

intestinum Makrofag

ABCA-1 LCAT

HDL nascent Permukaan HDL3

LCAT

Ekstrak daun kenikir

Flavonoid

28

Pada tikus dislipidemia yang diberi diet tinggi kolesterol, diberikan ekstrak

etanol daun kenikir dan rosuvastatin. Pada ekstrak daun kenikir didapatkan

kandungan flavonoid. Flavonoid dapat menghambat kerja enzim HMG-CoA

reduktase, meningkatkan aktivitas Lechitin-Cholesterol Acyl Taransferase (LCAT)

dan meningkatkan produksi apo A-1. Apoprotein A-1 bertugas sebagai kofaktor

enzim untuk LCAT serta sebagai ligan untuk interaksi dengan reseptor lipoprotein

dalam jaringan. Enzim LCAT merupakan enzim yang dapat mengonversi kolesterol

bebas menjadi ester kolesterol yang lebih hidrofobik, sehingga ester kolesterol dapat

berikatan dengan partikel inti lipoprotein untuk membentuk HDL baru dan akan

meningkatkan kadar HDL serum (Baba et al., 2007; Rousset, 2010; dan Vijayakumar,

2006). Senyawa flavonoid juga dapat meningkatkan ekspresi ATP-binding cassette

(ABCA-1) (Helal et al., 2013).

Pemberian rosuvastatin dapat menghambat kerja enzim HMG-CoA reduktase

dalam hati sehingga dapat menurunkan produksi kolesterol. Penghambatan terhadap

HMG-CoA reduktase menyebabkan penurunan sintesa kolesterol dan meningkatkan

jumlah reseptor LDL (Jansen, 1997). Hal ini menyebabkan kadar LDL plasma

menurun dan terjadi supresi terhadap produksi apo B-100. Produksi apo B-100

berhubungan terbalik dengan produksi apo A-1, sehingga supresi terhadap produksi

apo B-100 akan menyebabkan kenaikan kadar apo A-1. Apoprotein A-1 bila

berikatan dengan fosfolipid dan kolesterol dalam jumlah minimal akan membentuk

pre- HDL yang selanjutnya akan menjadi HDL matur, sehingga kenaikan apo A-1

dapat menyebabkan kenaikan kadar HDL (Jansen, 1997).

. Pemberian rosuvastatin dapat menghambat kerja enzim HMG-CoA reduktase

dalam hati sehingga dapat menurunkan produksi kolesterol. Pemberian ekstrak daun

kenikir dan rosuvstatin diharapkan dapat meningkatkan kadar HDL dan memperbaiki

kondisi dislipidemia.

29

2.9 Hipotesis Penelitian

Hipotesis dalam penelitian ini adalah pemberian terapi ekstrak etanol daun

kenikir (Cosmos caudatus) dan rosuvastatin dapat meningkatkan kadar HDL serum

tikus yang diberi diet dislipidemia.

30

BAB 3. METODE PENELITIAN

3.1 Jenis Penelitian

Jenis penelitian yang dilakukan adalah eksperimental laboratoris (True

experimental design), disebut sebagai true experiment karena dalam desain ini

peneliti dapat mengontrol semua variabel luar yang mempengaruhi jalannya

eksperimen. Penelitian ini menggunakan desain pre and post randomized controlled

group design. Dalam desain ini terdapat 4 kelompok yang masing-masing dipilih

secara random (R). Dua kelompok sebagai kelompok kontrol dan dua kelompok

lainnya diberi perlakuan (X).

3.2 Tempat dan Waktu Penelitian

Pemeliharaan hewan coba, diet dislipidemia, perlakuan pada hewan percobaan,

dan pengambilan sampel darah dilakukan di Laboratorium Biomedik Fakultas

Kedokteran Gigi Universitas Jember. Ekstraksi daun kenikir dilakukan di

Laboratorium Biologi Fakultas Farmasi Universitas Jember. Pemeriksaan kadar HDL

dilakukan di Laboratorium Biomol dan Biokimia Fakultas Kedokteran Universitas

Jember. Penelitian ini berlangsung selama 4 minggu pada bulan Oktober November

2014.

3.3 Populasi dan Sampel Penelitian

Populasi dan sampel pada penelitian ini adalah

3.3.1 Populasi

Populasi pada penelitian ini adalah Rattus novergicus jantan galur Wistar.

31

3.3.2 Sampel

Kriteria sampel yang digunakan pada penelitian ini adalah sebagai berikut:

a. Rattus novergicus jantan galur Wistar.

b. Tikus berwarna bulu putih dan sehat (bergerak aktif).

c. Umur 2 - 3 bulan.

d. Berat rata-rata 150 gram, dengan rentang 100-250 gram.

Pada penelitian ini terdapat kriteria inklusi dan ekslusi yang bertujuan untuk

membuat homogen sampel yang akan digunakan. Kriteria inklusi sampel penelitian

yang digunakan adalah sampel yang mengalami peningkatan berat badan dan kadar

HDL serum menurun setelah pemberian diet dislipidemia. Sedangkan kriteria

eksklusi sampel penelitian adalah tikus yang mati karena sakit selama masa adaptasi,

diet, dan pemberian terapi.

3.3.3 Jumlah Sampel

Perhitungan jumlah sampel menggunakan rumus Federer sebagai berikut:

(t-1) (r-1) 15

(4-1) (r-1) 15

3 (r-1) 15

3r-3 15

3r 18

R 6

Keterangan:

t : jumlah kelompok

r : jumlah sampel per kelompok

Besar sampel yang dibutuhkan berdasarkan perhitungan dengan rumus di atas

minimal sebanyak 6 ekor tikus untuk masing-masing kelompok. Jadi, dalam

penelitian ini jumlah sampel yang digunakan untuk 4 kelompok adalah 24 ekor tikus.

32

3.4 Rancangan Penelitian

Rancangan penelitian yang digunakan dalam penelitian ini adalah randomized

pre and post test controlled group design, dengan 2 kelompok kontrol dan 2

kelompok perlakuan. Secara skematis rancangan penelitian dijelaskan pada Gambar

3.1.

K(-) Opre(-) Opost(-)

Po A

K1 Opre1 Opost1

K2 Opre2 Opost2

K(+) Opre(+) Opost(+)

Keterangan:

Po = populasi

R = randomisasi

K(-) = kelompok kontrol negatif K1,2 = kelompok perlakuan 1,2

K(+) = kelompok kontrol positif

I

= diet dislipidemia (kuning telur bebek 4 ml/hari sonde oral +

lemak babi 1,43gram per hari)

Opre(-) = observasi pre test kelompok kontrol negatif

Opre1 = observasi pre test kelompok perlakuan 1

Opre2 = observasi pre test kelompok perlakuan 2

Opre(+) = observasi pre test kelompok kontrol positif

P1 = perlakuan kelompok 1 (ekstrak daun kenikir 0,4 mg/gramBB)

P2

= perlakuan kelompok 2 (ekstrak kenikir 0,2 mg/kgBB + rosuvastatin

0,00045 mg/gramBB)

P(+) = perlakuan kelompok kontrol positif (rosuvastatin 0,0009 mg/gramBB)

Opost(-) = observasi post test kelompok kontrol negatif

Opost1 = observasi post test kelompok perlakuan 1

Opost2 = observasi post test kelompok perlakuan 2

Opost(+) = observasi post test kelompok kontrol positif

A = analisis data

Gambar 3.1 Rancangan penelitian

I

P1

R

I

I P2

I P(+)

33

3.5 Variabel Penelitian

3.5.1 Variabel Bebas

Daun kenikir dan rosuvastatin.

3.5.2 Variabel Terikat

Kadar HDL serum setelah terapi dengan esktrak daun kenikir dan rosuvastatin.

3.5.3 Variabel Terkendali

Jenis hewan coba, umur hewan coba, berat badan hewan coba, jenis kelamin,

pemeliharaan dan perawatan hewan coba, dosis ekstrak daun kenikir dan rosuvastatin.

3.6 Definisi Operasional

a. Daun kenikir diperoleh dari Kabupaten Jember dan dipasarkan di pasar

tradisional. Daun dipilih yang masih berwarna hijau (selain daun kenikir muda

pada ujung batang). Ekstrak dibuat dari daun kenikir yang dikeringkan dan

diekstraksi dengan metode maserasi Ekstraksi dilakukan dengan menggunakan

pelarut etanol 96%.

b. Rosuvastatin 10 mg dengan merk Crestor yang diproduksi PT Astra Zeneca

c. Kadar HDL diperoleh dengan menggunakan metode CHOD-PAP dengan

prinsip spektrofotometri enzimatis dari darah retroorbita dan jantung tikus

dengan kadar normal HDL plasma darah tikus yaitu 35 mg/dl (Schaerfer et al.

dalam Hartoyo et al., 2008).

d. Na CMC 1% digunakan untuk melarutkan bahan (rosuvastatin dan ekstrak

kenikir) yang didapat dari Fakultas Farmasi Universitas Jember

34

3.7 Alat dan Bahan Penelitian

3.7.1 Alat

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain :

a. Kandang, tempat makan, dan minum tikus

b. Timbangan untuk menimbang pakan dan berat badan tikus

c. Neraca OHAUS untuk menimbang dosis ekstrak daun kenikir dan dosis

rosuvastatin

d. Instrumen pembuatan ekstrak daun kenikir dengan metode maserasi antara

lain blender, rotatory evaporator, dan almari pengering.

e. Lemari pendingin untuk menyimpan ekstrak daun kenikir

f. Instrumen untuk melarutkan Na-CMC antara lain gelas ukur, pengaduk, dan

labu spirtus

g. Spuit yang telah dimodifikasi untuk memasukkan ekstrak dan rosuvastatin

ke mulut tikus.

h. Tabung mikrokapiler untuk pengambilan darah tikus melalui sinus orbital

i. Tabung EDTA untuk menampung sampel darah tikus

3.7.2 Bahan

a. Pakan turbo 521

b. Bahan diet dislipidemia antara lain kuning telur bebek dan lemak babi.

c. Ekstrak daun kenikir

d. Rosuvastatin 10 mg

e. Na-CMC

f. Obat anestesi Ketamine

35

3.8 Prosedur Penelitian

3.8.1 Perlakuan Hewan Uji

Hewan uji dipelihara dalam 24 kandang dan satu kandang berisi 1 tikus. Tikus

diadaptasi dengan keadaan laboratorium selama 7 hari dan diberi pakan turbo 521

sebanyak 20 gram per ekor per hari dan air diberi ad libitum. Sisa pakan ditimbang

setiap hari sebelum diganti dengan pakan yang baru. Penimbangan berat badan

dilakukan seminggu sekali dan setiap sebelum diterapi.

Pada hari percobaan, semua hewan uji ditimbang dan masing-masing diberi

tanda pengenal pada ekornya, kemudian 24 ekor tikus dibagi menjadi 4 kelompok

berdasarkan sistem lottre dan diambil secara acak untuk proses randomisasi. Masing-

masing kelompok terdiri dari 6 ekor, yaitu :

1 : kontrol negatif, tikus diberi diet dislipidemia dan pakan turbo 521.

2 : perlakuan 1, tikus yang diberi diet dislipidemia, pakan turbo 521, dan

diberi terapi ekstrak kenikir 0,4 mg/gramBB.

3 : perlakuan 2, tikus yang diberi diet dislipidemia, pakan turbo 521, dan

diberi terapi ekstrak kenikir 0,2 mg/gramBB + rosuvastatin 0,00045

mg/gramBB. Terapi ekstrak kenikir diberikan minimal 2 jam setelah

pemberian rosuvasttain.

4 : kontrol positif, tikus yang diberi diet dislipidemia, pakan turbo 521 dan

diberi terapi rosuvastatin 0,0009 mg/gramBB.

3.8.2 Pemberian Diet Dislipidemia

Diet dislipidemia pada hewan uji menggunakan metode yang telah digunakan

pada penelitian Fatimah (2007) yaitu dengan pemberian campuran kuning telur bebek

sebanyak 4 ml per hari dan lemak babi 180 gram/100 gram ransum untuk 18 ekor

tikus diberikan melalui sonde lambung selama 7 hari.

Pada penelitian ini sampel yang digunakan sebanyak 24 ekor tikus dan lama

diet adalah 7 hari, sehingga komposisi yang diberikan adalah lemak babi sebanyak

36

1,43 gram per tikus per hari ditambah dengan kuning telur 4ml per hari dan diberikan

melalui sonde lambung.

3.8.3 Pembuatan Ekstrak Daun Kenikir

Metode yang digunakan pada pembuatan ekstrak daun kenikir adalah metode

maserasi. Cara ini merupakan metode yang mudah digunakan untuk menarik

komponen-komponen yang terkandung dalam sampel dengan cara merendam

simplisia dengan pelarut. Perendaman simplisia akan mengakibatkan pemecahan

dinding dan membran sel akibat perbedaan tekanan antara di dalam dan di luar sel

sehingga metabolit sekunder atau zat aktif yang berada di dalam sitoplasma akan larut

(warna penyari menjadi merah kehitaman) karena adanya perbedaan konsentrasi

antara larutan zat aktif di dalam sel dan di luar sel (Darwis, 2000). Pelarut yang

digunakan pada penelitian ini adalah etanol 96% karena merupakan pelarut universal

yang dapat melarutkan senyawa polar maupun non polar sehingga diharapkan dengan

menggunakan pelarut etanol 96% zat aktif yang diperlukan tertarik sepenuhnya.

Cara pembuatan ekstrak:

Daun kenikir dicuci bersih dan dirajang kasar kemudian ditiriskan dengan cara

dibolak-balik secara berkala. Setelah ditiriskan, dikeringkan dengan suhu 50 ,

kemudian dihaluskan dengan blender hingga menjadi simplisia. Simplisia dimaserasi

dengan etanol 96% sebanyak 2x, masing-masing dilakukan dalam 24 jam. Pada

maserasi pertama perbandingan simplisia:pelarut yaitu 1:3, dan untuk maserasi kedua

perbandingannya 1:2. Filtrat dan ampas dipisahkan, filtrat dikumpulkan untuk

dievaporasi menggunakan Rotatory Vacum Evaporator (RVE) dengan suhu 50 dan

kecepatan 180 rpm.

37

3.8.4 Pembuatan Larutan Na CMC 1%

Na CMC (NatriumCarboxymethyle Cellulose) merupakan suspending agent

yang digunakan untuk mensuspensikan bahan-bahan obat yang mempunyai sifat tidak

larut dalam air. Larutan Na CMC yang akan digunakan untuk penelitian adalah

larutan Na CMC 1% b/v. Larutan Na CMC 1% b/v dibuat dengan cara menimbang

Na CMC sebanyak 1 gram kemudian dilarutkan dalam 100 ml aquadest hangat.

3.8.5 Penetapan Dosis Ekstrak Daun Kenikir

Dosis ekstrak kenikir yang digunakan pada penelitian ini adalah 400 mg/kgBB

tikus, ditetapkan berdasarkan hasil trial sebelumnya. Dosis yang digunakan

ditentukan berdasarkan dosis efektif dan dosis toksik yang telah diketahui melalui

penelitian sebelumnya. Berdasarkan penelitian Perumal et al (2013) tentang efek

daun kenikir (Cosmos caudatus Kunth) terhadap profil lipid hewan yang diberi diet

dislipidemia disimpulkan bahwa dosis 200 mg/kgBB selama 4 minggu secara efektif

mampu memperbaiki profil lipid, menurunkan level glukosa, menormalkan jumlah

total kolesterol, trigliserida, menurunkan kolesterol LDL dan indeks aterogenik.

Berdasarkan penelitian Norazlina et al (2013) dosis toksik kenikir adalah 500 mg/kg

BB selama 7 hari.

3.8.6 Penetapan Dosis Pemberian Rosuvastatin

Dosis rosuvastatin yang dikonsumsi oleh manusia adalah 10-40 mg per hari.

Namun penggunaan rosuvastatin tahap awal adalah sebesar 10 mg per hari.

Perhitungan konversi dosis manusia (70 kg) ke tikus (200 gram) adalah 0,018. Data

hasil konversi dosis yang digunakan untuk tikus adalah

38

Dosis untuk tikus :

10 mg x 0,018 = 0,18 mg/200 gramBB

= 0,0009 mg/gramBB

3.8.7 Pengambilan Sampel Darah

Pengambilan sampel darah untuk pemeriksaan kadar HDL serum sebelum dan

setelah diet dislipidemia dilakukan melalui sinus retroorbita. Sebelum mengambil

sampel darah, tikus dianestesi terlebih dahulu dengan ketamine 0,2 ml intra muskular,

kemudian sampel darah diambil melalui sinus retroorbitalis dengan tabung

mikrokapiler. Masing-masing tikus diambil sampel darah sebanyak 2 mL.

Pengambilan sampel darah untuk pemeriksaan kadar HDL serum setelah

perlakuan diambil dari jantung bagian ventrikel dextra. Sebelum mengambil sampel

darah, tikus dianestesi terlebih dahulu dengan etanol. Pengambilan sampel darah

masing-masing tikus sebanyak 2 mL.

3.8.8 Pemeriksaan Kadar HDL Serum

Pemeriksaan kadar HDL serum dilakukan dengan metode CHOD-PAP

(Cholesterol Oxidase Phenol Aminoantipyrin): enzymatic photometric test dengan

prinsip kerja kolesterol dan esternya dibebaskan dari lipoprotein melalui reaksi

oksidasi dan hidrolisis. Kolesterol esterase menghidrolisis ester dan H2O2 dibentuk

dari kolesterol dalam proses oksidasi enzimatik oleh kolesterol oksidase, H2O2

bereaksi dengan 4-amino antipyrine dan phenol kemudian dengan katalisator

peroksidase membentuk quinonimine berwarna yang menjadi indikator reaksi

kolorimetri (Ratna, 2007).

Pemeriksaan dilakukan dua kali, yaitu pemeriksaan pertama dengan metode

presipitasi menggunakan reagen HDL, kemudian dilakukan pemeriksaan kedua untuk

39

mengetahui kadar HDL serum dengan menggunakan reagen kolesterol. Hasil

pemeriksaan kedua diperiksa menggunakan alat spektrofotometer dengan panjang

gelombang 546nm kemudian didapatkan nilai absorbansi sampel.

Penghitungan kadar HDL serum menggunakan rumus:

Konstanta standar = 200 mg/dl

3.9 Analisis Data

Data yang diperoleh dianalisis secara komputerisasi dengan Uji One Way

ANOVA menggunakan Software Statistical Product and Servive Solution 21 PS

(SPSS 21) dengan taraf signifikan p

40

3.10 Alur Penelitian

Gambar 3.2 Alur Penelitian

24 ekor tikus wistar jantan

Tikus diadaptasi selama 7 hari

Randomisasi

Kelompok

Kontrol Negatif

Kelompok

Kontrol Positif

Kelompok

Perlakuan II

Kelompok

Perlakuan I

Pemberian diberi diet dislipidemia dengan memberikan kuning telur bebek 4

ml per hari secara sonde per oral dan lemak babi 1,43 gram per hari selama 7

hari

Pengambilan sampel darah untuk mengetahui kadar HDL pre test

Analisis Data

Pengambilan sampel darah untuk mengetahui kadar HDL post test

Pemberian

rosuvastatin

0,0009

mg/gramBB

selama 14

hari

Pemberian

ekstrak daun

kenikir

(Cosmos

caudatus)

0,4

mg/gramBB

selama 14

hari

Pemberian

ekstrak daun

kenikir

(Cosmos

caudatus) 0,2

mg/gramBB

+

rosuvastatin

0,00045

mg/gramBB

selama 14

hari

Hasil

41

3.11 Ethical Clearance

Persetujuan etik penelitian (ethical clearance) terhadap prosedur yang akan

dilakukan diajukan ke komisi etik penelitian Fakultas Kedokteran Universitas

Jember.

42

BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Penelitian

4.1.1 Hasil Ekstraksi Daun Kenikir (Cosmos caudatus)

Jumlah daun kenikir segar yang akan diekstraksi adalah 302,4 gram, kemudian

daun dikeringkan sehingga berat daun menjadi 248,27 gram. Daun kenikir kering

dihaluskan hingga didapatkan simplisia 256,39 gram. Hasil ekstraksi simplisia

dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol 96% didapatkan 35,50 gram

ekstrak kental.

Rendemen ekstrak dihitung berdasarkan perbandingan berat akhir (berat ekstrak

yang dihasilkan) dengan berat awal (berat biomassa sel yang digunakan) dikalikan

100%. Berdasarkan penghitungan tersebut didapatkan hasil rendemen ekstrak daun

kenikir 13,85%.

4.1.2 Hasil Pengukuran Kadar HDL Serum Tikus

Berdasarkan hasil pemberian diet dislipidemia selama 7 hari didapatkan kadar

rata-rata HDL serum sebelum dan sesudah diet pada Tabel 4.1

Tabel 4.1 Rata-rata kadar HDL serum sebelum dan sesudah pemberian diet dislipidemia

Kategori Rata-rataSD (mg/dl) (mg/dl) % Sebelum Sesudah

HDL serum 41,489,44 32,709,20 - 8,78 21%

SD: Standar Deviasi

Berdasarkan Tabel 4.1 diketahui bahwa rata-rata kadar HDL serum tikus awal

sebelum diberi diet memiliki nilai normal yaitu sebesar 41,48 mg/dl, setelah diberi

43

diet rata-rata kadar HDL serum tikus mengalami penurunan sebesar 8,78 mg/dl

menjadi 32,70 mg/dl. Nilai tersebut menunjukkan bahwa kadar HDL serum tikus

telah tergolong dalam klasifikasi dislipidemia menurut Hartoyo et al. (2008) yang

menyebutkan bahwa kadar normal HDL serum tikus adalah >35 mg/dl.

Data yang dihasilkan setelah pemberian terapi berupa rata-rata kadar HDL pada

4 kelompok penelitian (kontrol negatif, perlakuan 1, perlakuan 2, dan kontrol positif)

disajikan pada Tabel 4.2 dan Gambar 4.1.

Tabel 4.2 Rata-rata kadar HDL serum

Kelompok Pre-Test

(mg/dl SD)

Post-Test

(mg/dl SD) (mg/dl) %

Kontrol Negatif 43,21 9,87 34,88 2,71 -8,3 -19,2%

Perlakuan 1 27,13 6,84 39,63 6,08 12,50 46%

Perlakuan 2 30,60 4,18 32,48 6,27 1,88 6,1%

Kontrol Positif 28,65 5,68 39,15 6,07 10,5 36,6%

SD: Standar Deviasi

Berdasarkan Tabel 4.2 maka dapat diperoleh diagram rata-rata kadar kolesterol

HDL serum sebagai berikut:

Gambar 4.1 Diagram batang rata-rata kadar HDL serum

43,219,87

27,136,84 29,852,88 28,655,68

34,882,71

39,636,08

32,486,27

39,156,07

0

10

20

30

40

50

60

K(-) P1 P2 K(+)

Ra

ta-r

ata

HD

L s

eru

m

44

Keterangan:

K(-) = Kelompok kontrol negatif dengan pemberian diet dislipidemia.

P1 = Kelompok perlakuan I dengan pemberian diet dislipidemia dan terapi

ekstrak etanol daun kenikir 0,4 mg/gramBB.

P2 = Kelompok perlakuan II dengan pemberian diet dislipidemia dan terapi

ekstrak etanol daun kenikir 0,2 mg/gramBB dan rosuvastatin 0,00045

mg/gramBB.

K(+) = Kelompok kontrol positif dengan pemberian diet dislipidemia dan terapi

rosuvastatin 0,0009 mg/gramBB.

Pada kelompok K(-) didapatkan rata-rata kadar HDL setelah diet dislipidemia

sebesar 43,21mg/dl dan setelah mendapatkan perlakuan sebesar 34,88 mg/dl.

Perubahan rata-rata kadar HDL dari sebelum dan setelah perlakuan adalah mengalami

penurunan sebesar 8,3 mg/dl.

Rata-rata kadar HDL pada kelompok P1 setelah diet dislipidemia sebesar

27,13 mg/dl dan setelah mendapatkan perlakuan didapatkan hasil sebesar 39,63

mg/dl. Perubahan kadar HDL secara rata-rata dari sebelum dan setelah perlakuan

adalah mengalami peningkatan sebesar 12,50 mg/dl.

Hasil pemeriksaan kelompok P2 didapatkan rata-rata kadar HDL setelah diet

dislipidemia sebesar 30,60 mg/dl dan setelah mendapatkan perlakuan didapatkan

hasil sebesar 32,48 mg/dl. Perubahan rata-rata kadar HDL sebelum dan setelah

perlakuan adalah mengalami peningkatan sebesar 1,88 mg/dl.

Pada kelompok K(+) didapatkan rata-rata kadar HDL setelah diet dislipidemia

sebesar 28,65 mg/dl dan setelah mendapatkan perlakuan didapatkan hasil sebesar

39,15 mg/dl. Perubahan kadar HDL secara rata-rata dari sebelum dan setelah

perlakuan adalah mengalami peningkatan sebesar 10,5 mg/dl.

Rata-rata kadar kolesterol HDL kelompok P1 pada Gambar 4.1 menunjukkan

bahwa hasil yang diperoleh lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok lain (K(-),

P2, dan K(+)). Kelompok P1 dan P2 dengan nilai delta rata-rata kadar HDL pre test

dan post test, yaitu 12,50 mg/dl dan 1,88 mg/dl, memiliki pengaruh dalam

output (2)

Documents

Transcript of output (2)