Neurotropik Virus

PCR telah terbukti menjadi alat yang ampuh untuk menyelidiki meningitis dan ensefalitis

disebabkan oleh berbagai virus. Dalam penyakit saraf kebutuhan cepat dan dapat diandalkan

diagnosis untuk memberikan dasar yang rasional untuk kemoterapi dan batas prosedur yang

tidak perlu dan terapi tidak relevan telah mendorong pembangunan. Berbagai macam virus yang

berhubungan dengan saraf penyakit termasuk herpes simplex virus (HSV); sitomegalovirus

(CMV); varicella-zoster virus (VZV); Epstein- Barr Virus (EBV); manusia herpes virus 6 (HHV-

6), sedangkan Enterovirus kelompok, termasuk echoviruses, polioviruses, dan

coxsackieviruses, adenovirus, JC dan BK virus; arenaviruses; paramyxoviruses, rabies, dan

arbovirus. Mengingat besar jumlah virus berpotensi neuroinvasive dan karena dari volume

terbatas spesimen diagnostik yang paling berguna- cerebrospinal fluid (CSF)-sejumlah PCR

multipleks memiliki telah dikembangkan (12-15, 82, 102). Kelayakan skrining simultan untuk

virus, bakteri, dan parasit dalam contoh CSF dari pasien dengan aseptik meningitis atau

ensefalitis telah dijelaskan (82). Studi ini oleh Baca dkk. (82) digunakan tiga PCR multipleks

bersarang untuk deteksi HSV dan VZV; EBV dan HHV-6, dan anggota kelompok Enterovirus

dan jenis echovirus 22 dan 23. Dalam Selain itu, dua uniplex PCR digunakan untuk deteksi

CMV dan JC virus. Dalam total 2.233 spesimen CSF dari 2162 pasien, PCR positif pada

spesimen 147 dari 143 pasien (6,6% dari semua pasien) termasuk enterovirus (77 pasien),

HSV-1 (20 pasien), VZV (7 pasien), HSV tipe 2 (HSV-2) (6 pasien), CMV (3 pasien), JC virus

(2 pasien), dan HHV-6 (1 pasien). Semua tes PCR tetap negatif dengan 28 spesimen kontrol

CSF. Sensitivitas klinis dan spesifisitas PCR ini tidak ditentukan karena penuh klinis informasi

ini tidak tersedia untuk semua pasien. A nested PCR multipleks untuk mendeteksi dan

diferensiasi HSV-1 dan -2 berdasarkan ukuran produk PCR juga telah dijelaskan (14). Dalam

analisis prospektif, sebanyak 417 CSF spesimen yang diperoleh dari 395 pasien berturut-turut

dengan klinis kecurigaan HSV ensefalitis, meningitis, atau meningoencephalitis diuji dengan

PCR multipleks. Pengujian positif HSV-1 pada 11 spesimen (2,6%) dari 10 pasien dan untuk

HSV-2 dalam 4 spesimen (1,0%) dari 3 pasien; tidak koinfeksi dengan kedua jenis dilaporkan.

PCR multiplex yang sama digunakan untuk tes total 178 sampel CSF diperoleh dari 171 pasien

dengan klinis dicurigai infeksi virus herpes (15). Alat tes itu positif untuk HSV-1 di tiga sampel

(1,7%) dari dua pasien (1,2%) dan untuk HSV-2 dalam satu sampel, dan satu pasien diuji positif

dalam uniplex CMV nested PCR. Sebuah prosedur yang serupa dengan mendeteksi DNA dari

kedua virus (HSV-1 dan -2) diterapkan Sampel CSF dari 918 human immunodeficiency virus

(HIV) - terinfeksi pasien dengan gejala neurologis (22). Pada pasien untuk siapa diagnosis

dikonfirmasi di otopsi, tes itu positif untuk HSV-1 atau -2 untuk 19 pasien (2%), menghasilkan

sensitivitas dan spesifisitas 100 dan 99,6%, masing-masing. Multiplex nested PCR pertama

untuk deteksi dan ketikan herpesvirus (HSV-1 dan -2, VZV, CMV, HHV-6, dan EBV)

diterapkan untuk CSF dari pasien dengan meningitis, ensefalitis, dan klinis sindroma lain (102).

Dengan memanfaatkan konsentrasi equimolar primer menyejajarkan 39 berakhir dengan salah

satu dari dua konsensus wilayah dalam DNA polimerase herpesvirus gen dan 59 diakhiri dengan

urutan yang terkait atau tidak terkait setiap agen akan diperkuat, putaran pertama amplifikasi

menghasilkan fragmen 194-bp yang mengindikasikan keberadaan herpes-

virus. Putaran kedua menggunakan campuran primer amplifikasi berisi nonhomolog dan primer

tipe-spesifik yang dipilih dari daerah yang berbeda dari DNA polimerase selaras herpesvirus gen

manusia menghasilkan suatu produk dengan yang berbeda ukuran untuk setiap virus yang terkait.

Metode ini diperkuat sesuai virus dalam sel yang terinfeksi dan dalam lima sampel klinis (HSV-1

PCR-positif CSF dari pasien dengan ensefalitis, HSV-2 positif PCR-CSF dari pasien dengan

meningitis, VZV budaya-positif vesikular cairan dari pasien dengan herpes zoster, CMV kultur

urin-positif dari pasien terinfeksi kongenital, dan EBV darah perifer PCR-positif dari pasien

dengan sindrom lymphoproliferative). Selain itu, penggunaan primer menargetkan kawasan

konsensus memungkinkan pengakuan baru, manusia herpesvirus belum terdeskripsikan. Deteksi

dari 194-bp fragmen setelah reaksi pertama dengan tidak ada sinyal positif di babak kedua

amplifikasi dapat mencerminkan deteksi dari virus herpes manusia baru. Tes selanjutnya

dimodifikasi untuk termasuk langkah reverse transkripsi dan pasangan primer untuk mendeteksi

Enterovirus cDNA (12). PCR ini kemudian dievaluasi di 21 pasien dengan penyebabnya baik

ditandai meningitis aseptik dan ensefalitis. HSV DNA terdeteksi di sembilan pasien, DNA VZV

terdeteksi pada 6 pasien, dan enterovirus RNA terdeteksi pada 6 pasien. Tes selanjutnya

dievaluasi pendeteksian virus ini sama di sampel CSF oleh calon

studi 200 pasien penyakit saraf-diduga memiliki infeksi virus. Enterovirus terdeteksi pada 49 pasien, HSV terdeteksi pada 3 pasien, VZV terdeteksi pada 6 pasien, CMV terdeteksi pada 12 pasien, EBV terdeteksi pada 2 pasien, CMV dan HSV terdeteksi pada satu pasien AIDS dengan ensefalitis, dan CMV dan EBV terdeteksi di lain AIDS pasien dengan polyradiculomyelitis. Untuk deteksi echovirus 30 pada 50 pasien dengan meningitis aseptik, multipleks reverse transcription (RT)-PCR lebih sensitif (90% sensitivitas) dari kultur sel (sensitivitas 26%) dan Amplicor EV tes (sensitivitas 86%). Studi-studi ini menunjukkan utilitas ini multiplex RT-PCR

untuk deteksi enterovirus dan herpesvirus dalam sampel CSF dari pasien dengan berbagai neurologis manifestasi dan manfaat dari teknik ini di pasien manajemen dan desain terapi antivirus. Di Inggris, PCR multipleks bersarang untuk deteksi HSV-1, dan -2 VZV, dan enterovirus, keempat sebagian penyebab umum meningitis virus dan ensefalitis, adalah dikembangkan dan dievaluasi dengan menggunakan total 1.683 berturut-turut Sampel CSF (81). Pengujian positif 138 (8,2%) dari spesimen (enterovirus dalam 51 sampel, HSV-2 di 33 sampel, VZV dalam 28 sampel, dan HSV-1 dalam 25 sampel). Dari 51 pasien positif RNA Enterovirus, 17 masih bayi kurang dari 6 tua di infeksi SSP yang terdeteksi sebagai bagian bulan dari layar infeksi umum dan 34 pasien anak yang lebih tua dan orang dewasa yang telah ensefalitis dan meningitis. Dalam kelompok positif untuk VZV (28 pasien), 16 pasien meningitis dan 10 telah ensefalitis klinis namun detailnya tidak tersedia untuk 2 pasien. HSV-1 terdeteksi pada dua bayi kurang dari 6 bulan dan 23 orang dewasa (22 telah ensefalitis dan 1 telah sebuah meningitis lymphocytic jinak). The HSV-2-positif pasien (33 pasien) termasuk lima bayi kurang dari 6 bulan, dua orang dewasa dengan meningoencephalitis, dan 26 pasien lebih dari 6 tua dengan meningitis lymphocytic jinak bulan. Tes ini cocok untuk dipakai secara rutin di laboratorium diagnostik terbukti dan menyoroti pentingnya skrining untuk lebih dari satu virus pada pasien dengan meningitis dan ensefalitis Meskipun studi yang dijelaskan di atas (13-15, 81, 82, 102) menghasilkan hasil yang memuaskan dalam hal penyaringan simultan untuk virus terkait manifestasi neurologis (misalnya herpesvirus), PCR multipleks yang digunakan dikembangkan suatu bersarang strategi. Yang terakhir ini seperti yang dijelaskan sebelumnya dapat meningkatkan kemungkinan hasil positif palsu karena pencemaran dan mungkin juga mempersulit otomatisasi. Sebuah studi baru-baru ini (63) menggunakan sebuah PCR yang menghalangi penggunaan primer bersarang untuk simultan amplifikasi DNA herpesvirus. uji ini, disebut PCR konsensus, menggunakan sepasang primer "tangga", yang didasarkan pada urutan konsensus yang dipilih dari dalam DNA polimerase gen dan adalah 76 86% identik dengan genomik urutan dari enam herpesvirus (HSV-1, HSV-2, CMV, EBV, VZV, dan HHV-6) yang dapat menginfeksi SSP. Setiap tangga primer yang digunakan terdiri campuran equimolar dari 11 oligonukleotida sesuai dengan urutan konsensus: semua primer memiliki 59 akhir yang sama tetapi diperpanjang untuk 20 hingga 30 nukleotida di arah 39. Produk PCR dianalisis dengan hibridisasi dalam pelat mikro menggunakan virus-spesifik, biotinylated oligonukleotida probe.PCR konsensus dievaluasi menggunakan 142 sampel CSF sebelumnya diuji denganstandar uniplex PCR. Delapan belas sampel (12,7%) positif oleh uniplex PCR, dan 37 (26%) diuji positif oleh konsensus PCR, termasuk 3 sampel yang koinfeksi (CMV, VZV, dan HSV-2; VZV dan HSV-2, dan CMV dan HHV-6). Dari CSF 142 sampel, 103 diklasifikasikan sebagai negatif oleh kedua uniplex PCR dan PCR konsensus. Selain itu, tes menunjukkan diagnostik tinggi dalam beberapa kasus ditemukan untuk menjadi positif untuk virus yang tes tidak diminta oleh dokter. Masalah dalam mengevaluasi semua multipleks tersebut studi PCR adalah bahwa sebagian besar tidak termasuk lengkap detail pasien. Jadi, sementara hasil positif telah banyak berkaitan dengan penyakit klinis yang kompatibel, hasil positif tidak dilaporkan pada semua pasien dengan kondisi yang sama. Namun demikian, PCR multipleks mendeteksi spesimen lebih positif dan lebih cepat dari teknik konvensional seperti budaya atau serologi. Namun, prosedur

terakhir ini baik sensitif atau lambat dan membuat tolak ukur yang tidak memuaskan ("standar emas") terhadap yang untuk mengukur ketepatan PCR multipleks. Karena PCR uniplex memilikidata yang tersedia dan dengan demikian lebih baik diperkuat untuk nilai klinis, hasil PCR multipleks harus dibandingkan dengan PCR uniplex untuk memastikan bahwa PCRmultipleks memiliki sensitivitas setara, spesifisitas, dan klinis relevansi.