BAB IPENDAHULUAN

1.1 Latar BelakangPemeriksaan laboraturium untuk menunjang diagnosis suatu penyakit bisa dilakuakn dengan berbagai macam uji biokimia. Pemeriksaan laboraturium bisa dilakukan dengan menggunakan cairan tubuh maupun jaringan tubuh untuk mendiagnosis penyakit. Uji biokimia dapat dilakukan untuk menguatkan diagnosis terhadap penyakit pada hati, ginjal, dan bagiaan tubuh lainnya. Contoh uji biokimia untuk penyakit hati salah satunya bisa dilakukan pemeriksaan SPGT atau SGOT.Ada dua enzim yang dapat digunakan sebagai parameter kerusakan sel hati. Dan enzim tersebut adalah adalah aspartat aminotransferase (AST/SGOT) dan alanin aminotransferase (ALT/SGPT). SGPT adalah singkatan dari Serum Glutamic Piruvic Transaminase dan SGOT merupakan singkatan dari Serum Glutamic Oxaloacetic Transaminase. Kedua enzim tersebut secara normal terdapat di hati. Dan peningkatan kadar enzim-enzim dalam plasma darah mengambarkan adanya kerusakan sel hati.

1.2 Tujuan Praktikum :Memperlihatkan dan memahami konsep aktivitas spesifik enzim Glutamat PiruvatTransaminase (GPT) dan Glutamate Oksaloasetat Transaminase (GOT).

BAB IITINJAUAN PUSTAKA

2.1 Pengertian2.1.1Hati2.1.1.1 Anatomi HatiHati adalah organ intestinal terbesar dengan berat antara 1, 2 1, 8 kg atau kurang lebih 25 % berat badan orang dewasa yang menempati sebagian besar kuadran kanan atas abdomen dan merupakan pusat metabolisme tubuh dengan fungsi yang sangat kompleks. Batas atas hati berada sejajar dengan ruang interkostal V kanan dan batas bawah meyerong ke atas iga IX kanan ke iga VIII kiri. Permukaan posterior hati berbentuk cekungan dan terdapat celah transversal sepanjang 5 cm dari sistem porta hepatis. Omentum miror terdapat mulai dari sistem porta yang mengandung arteri hepatik, vena porta dan duktus koledokus. Sistem porta terletak di depan vena kava dan di balik kandung empedu.Permukaan anterior yang cembung dibagi menjadi 2 lobus oleh adanya perlekatan ligamentum falsiform yaitu lobus kiri dan lobus kanan yang berukuran kira-kira 2 kali lobus kiri. Pada daerah antara ligamentum falsiform dengan kandungan empedu di lobus kanan kadang-kadang dapat ditemukan lobus kuadran dan sebuah daerah yang disebut sebagai lobus kuadratus yang biasanya tertutup oleh vena kava inferior dan ligamentum venosum pada permukaan posterior. Hati terbagi dalam 8 segmen dengan fungsi yang berbeda. Pada dasarnya, garis Cantlie yang terdapat mulai dari vena kava sampai kandungan empedu telah membagi hati menjadi 2 lobus fungsional dan dengan adanya daerah dengan vaskularisasi relatif sedikit, kadang-kadang dijadikan batas reseksi. Pembagian lebih lanjut menjadi 8 segmen didasarkan pada aliran cabang pembuluh darah dan saluran empedu yang dimiliki oleh masing-masing segmen.Secara mikroskopis di dalam hati manusia terdapat 50.000 - 100.000 lobuli. Setiap lobulus terbentuk heksagonal yang terdiri atas sel hati berbentuk kubus yang tersusun radial mengelilingi vena sentralis. Di antara lembaran sel hati terdapat kapiler yang disebut sinusoid yang merupakan cabang vena porta dan arteri hepatika. Sinusoid dibatasi oleh sel fagositik (sel kupffer) yang merupakan sistem retikuloendotelial dan berfungsi menghancurkan bakteri dan benda asing lain di dalam tubuh. Jadi hati merupakan salah satu organ utama pertahanan tubuh terhadap serangan bakteri dan organ toksik.Hepatosit meliputi kurang lebih 60% sel hati, sedangkan sisanya terdiri dari sel-sel epithelial system empedu dalam jumlah yang bermakna dan sel-sel parenkimal yang termasuk di dalamnya endotelium, sel kuffper dan sel stellata yang berbentuk seperti bintang.Sel-sel lain yang terdapat dalam dinding sinusoid adalah sel fagositik. Sel Kupffer yang merupakan bagian penting sistem retikuloendothellial dan sel stellata disebut sel itu, limfosit atau perisit. Yang memiliki aktifitas miofibroblastik yang dapat membantu pengaturan aliran darah. Sel kupffer lebih permeabel yang artinya mudah dilalui oleh sel-sel makro dibandingkan kapiler-kapiler yang lain Sinusoidal disamping sebagai faktor penting dalam perbaikan kerusakan hati. Peningkatan aktifitas sel-sel stellata tampaknya merupakan faktor kunci dalam pembentukan jaringan fibrotik di dalam hati.Selain cabang - cabang vena porta dan arteri hepatika yang mengelilingi bagian perifer lobulus hati, juga terdapat saluran empedu yang membentuk kapiler empedu yang dinamakan kanalikuli empedu yang berjalan diantara lembar sel hati (Perhimpunan Dokter Spesialis Penyakit Dalam Indonesia, 2006).

2.1.1.2Fisiologi HatiHati mempunyai fungsi yang sangat beraneka ragam. Sirkulasi vena porta yang menyuplai 75% dari suplai asinus memegang peran penting dalam fisiologi hati, terutama dalam hal metabolisme karbohidrat, protein dan asam lemak. Telah dibuktikan bahwa pada zona-zona hepatosit yang memperoleh oksigen yang lebih baik (zona 1) mempunyai kemampuan glukoneogenesis dan sintesis glotation yang lebih baik dibandingkan dengan zona 3. Fungsi utama hati adalah pembentukan dan ekskresi empedu. Hati mengekskresikan ampedu sebanyak satu liter per hari ke dalam usus halus. Unsur utama empedu adalah air ( 97%), elektrolit, garam empedu. Walaupun bilirubin (pigmen empedu) merupakan hasil akhir metabolisme dan secara fisiologis tidak memiliki peran aktif, tapi penting sebagai indikator penyakit hati dan saluran empedu, karena bilirubin dapat memeberi warna pada jaringan dan cairan yang berhubungan dengannya. Hati juga berperan dalam metabolism bilirubin, 75% dari total Bilirubin di dalam tubuh diproduksi oleh sel darah yang hancur, sisanya oleh dihasilkan dari katabolisme protein heme, dan juga oleh inaktivasi eritropoeisis sumsum tulang. Bilirubin yang tidak terkonjugasi bersama dengan albumin ditranspor ke sirkulasi sebagai suatu kompleks dengan albumin, walaupun sejumlah kecil dialirkan ke dalam sirkulasi secara terpisah. Bilirubin diubah dari larut lemak menjadi larut air di hati. Kemudian masuk ke sistem pencernaan dalam bentuk empedu ke duodenum dan dieksresikan menjadi sterekobilin. Melalui sirkulasi menuju ke ginjal dan dieksresikan dalam bentuk urobilin.Hasil metabolisme monosakarida dari usus halus diubah menjadi glikogen dan disimpan di hati (glikogenesis). Dari depot glikogen ini disuplai glukosa secara konstan ke darah (glikogenesis) untuk memenuhi kebutuhan tubuh. Sebagian glukosa dimetabolisme dalam jaringan untuk menghasilkan tenaga dan sisanya diubah menjadi glikogen (yang disimpan pada otot) atau lemak (yang disimpan dalam jaringan subkutan).Fungsi hati dalam metabolisme protein adalah menghasilkan protein plasma berupa albumin (yang diperlukan untuk mempertahankan tekanan osmotik koloid), protombin, fibrinogen dan faktor bekuan lainnya. Fungsi hati dalam metabolisme lemak adalah menghasilkan lipoprotein, kolesterol, fosfolipid dan asam asetoasetat. Hati juga merupakan organ dimana terjadi glukoneogenesis dan pembentukan karbohidrat dari prekursor seperti alanine, gliserol, dan oksaloasetat, glikogenolisis dan glikogenesis.Hati menerima lipid dari sirkulasi sistemik dan memetabolisme kilomikron. Fungsi hati selain itu adalah sebagai endokrin yang mensintesis 25 hidroksilase vitamin D. Sedangkan fungsi immunologinya adalah untuk perkembangan limfosit B fetus, pembuangan kompleks imun sirkulasi, pembuangan limfosit T CD 8 teraktifasi, fagositosis dan presentasi antigen, produksi lipopolysaccaride binding protein, pelepasan sitokin (TNF dan interferon), transport immunoglobnulin A. Fungsi lain yaitu kemampuan untuk regenerasi sel sel hati dan pengaturan angiogenesis (Perhimpunan Dokter Spesialis Penyakit Dalam Indonesia, 2006).Hati mempunyai kemampuan untuk memetabolisme, detoksifikasi, dan menginaktivasi substansi eksogen, seperti obat, metabolism obat, insektisida, dan substansi endogen seperti steroid, dan mengubah ammonia menjadi urea untuk diekskresi dari tubuh.Enzim yang dihasilkan oleh hepatosit yaituAlanine Aminotransferase (ALT) atau Serum Glutamic Pyruvic Transaminase (SGPT), dan Aspartate Aminotransferase (AST) atau Serum Glutamic Oksaloasetat Transaminase (SGOT).SGPT terdapat pada sel darah merah, otot jantung, otot skelet, ginjal dan otak. Sedangkan SGOT ditemukan pada hati. Enzim tersebut akan keluar dari hepatosit jika terdapat peradangan atau kerusakan pada sel tersebut. Kedua enzim ini dapat meningkat karena adanya gangguan fungsi hati, dan penanda kerusakan sel lainnya, yang salah satu penyebabnya adalah proses infeksi yang disebabkan oleh virus.Sintesis protein berlangsung di reticulum endoplasma yang kasar, sedangkan sekresi protein berlangsung di reticulum endoplasma yang kasar dan yang halus. Retikulum endoplasmic juga ikut berperan dalam konjugasi protein dengan lemak.2.1.2SGOT dan SGPTSGPT adalah singkatan dari Serum Glutamic Piruvic Transaminase, SGPT atau juga dinamakan ALT (alanin aminotransferase) merupakan enzim yang banyak ditemukan pada sel hati serta efektif untuk mendiagnosis destruksi hepatoseluler. Enzim ini dalam jumlah yang kecil dijumpai pada otot jantung, ginjal dan otot rangka. Pada umumnya nilai uji SGPT/ALT lebih tinggi daripada SGOT/AST pada kerusakan parenkim hati akut, sedangkan pada proses kronis didapat sebaliknya.SGOT adalah singkatan dari Serum Glutamic Oxaloacetic Transaminase, Sebuah enzim yang biasanya hadir dalam dan jantung sel-sel hati. SGOT dilepaskan ke dalam darah ketika hati atau jantung rusak. Tingkat darah SGOT ini adalah demikian tinggi dengan kerusakan hati (misalnya,dari hepatitis virus ) atau dengan kegagalan terhadap jantung (misalnya, dari serangan jantung). Beberapa obat juga dapat meningkatkan kadar SGOT. SGOT juga disebut aspartateaminotransferase (AST).Ada banyak faktor yang bisa menyebabkan kenaikan SGOT-SGPT. Rusaknya sel-sel otot bisa disebabkan oleh banyak hal, misalnya aktivitas fisik yang berat, luka, trauma, atau bahkan kerokan. Ketika kita mendapat injeksi intra muskular (suntik lewat jaringan otot), sel-sel otot pun bisa mengalami sedikit kerusakan dan meningkatkan kadar enzim transaminase ini. Dibandingkan dengan SGOT, SGPT lebih spesifik menunjukkan ketidakberesan sel hati, karena SGPT hanya sedikit saja diproduksi oleh sel nonliver. Biasanya, faktor nonliver tidak menaikkan SGOT-SGPT secara drastis.

2.2Etiologi2.2.1SGPT dan SGOTEnzim Transaminase atau disebut juga enzim aminotransferase adalah enzim yang mengkatalisis reaksi transaminasi. Terdapat dua jenis enzim serum transaminase yaitu serum glutamat oksaloasetat transaminase dan serum glutamat piruvat transaminase (SGPT). Pemeriksaan SGPT adalah indikator yang lebih sensitif terhadap kerusakan hati dibanding SGOT. Hal ini dikarenakan enzim GPT sumber utamanya di hati, sedangkan enzim GOT banyak terdapat pada jaringan terutama jantung, otot rangka, ginjal dan otak (Cahyono 2009).Enzim aspartat aminotransferase (AST) disebut juga serum glutamat oksaloasetat transaminase (SGOT) merupakan enzim mitokondria yang berfungsi mengkatalisis pemindahan bolak-balik gugus amino dari asam aspartat ke asam -oksaloasetat membentuk asam glutamat dan oksaloasetat (Price & Wilson,1995).Enzim GOT dan GPT mencerminkan keutuhan atau intergrasi sel-sel hati. Adanya peningkatan enzim hati tersebut dapat mencerminkan tingkat kerusakan sel-sel hati. Makin tinggi peningkatan kadar enzim GPT dan GOT, semakin tinggi tingkat kerusakan sel-sel hati (Cahyono 2009).Kerusakan membran sel menyebabkan enzim Glutamat Oksaloasetat Transaminase (GOT) keluar dari sitoplasma sel yang rusak, dan jumlahnya meningkat di dalam darah. Sehingga dapat dijadikan indikator kerusakan hati (Ronaldet al.2004).Kadar enzim AST (GOT) akan meningkat apabila terjadi kerusakan sel yang akut seperti nekrosis hepatoseluler seperti gangguan fungsi hati dan saluran empedu, penyakit jantung dan pembuluh darah, serta gangguan fungsi ginjal dan pankreas (Price & Wilson,1995). GOT banyak terdapat pada mitokondria dan sitoplasma sel hati, otot jantung, otot lurik dan ginjal (Sagita A 2006).

2.3Manifestasi KlinisDalam uji SGOT dan SGPT, hati dapat dikatakan rusak bila jumlah enzim tersebut dalam plasma lebih besar dari kadar normalnya.Kondisi yang meningkatkan kadar SGPT/ALT adalah :1. Peningkatan SGOT/SGPT > 20 kali normal : hepatitis viral akut, nekrosis hati (toksisitasobat atau kimia)1. Peningkatan 3-10 kali normal : infeksi mononuklear, hepatitis kronis aktif, sumbatanempedu ekstra hepatik, sindrom Reye, dan infark miokard (SGOT>SGPT)1. Peningkatan 1-3 kali normal : pankreatitis, perlemakan hati, sirosis Laennec, sirosisbiliarisMasalah klinis SGOT (Serum Glutamic Oxaloacetic Transaminase):1. Penurunan kadar: kehamilan, diabetik ketoasidosis, beri-beri.1. Peningkatan kadar : Infark miokard akut (IMA), ensefalitis, nekrosis hepar, penyakit dan trauma muskuloskeletal, pankreatitis akut, ekslampsia, gagal jantung kongestif (GJK). Obat-obat yang dapat meningkatkan nilai AST : Antibiotik, narkotik, vitamin (asam folat, piridoksin, vitamin A), antihipertensi (metildopa [Aldoment], guanetidin), teofilin, golongan digitalis, kortison, flurazepam (Dalmane), indometasin (Indocin), isoniazid (INH), rifampisin, kontrasepsi oral, salisilat, injeksi intramuskular (IM) (Joyce, 1997).Masalah klinis SGPT(Serum Glutamic Piruvic Transaminase):1. Peningkatan Kadar :Peningkatan paling tinggi : Hepatitis (virus) akut, hepatoksisitas yang menyebabkan nekrosis hepar (toksisitas obat atau kimia); agak atau meningkat sedang : sirosis, kanker hepar, gagal jantung kongesif, intoksisitas alkohol akut; peningkatan marginal : infrak miokard akut (IMA).Antibiotik, narkotik, metildopa (Aldomet), guanetidin, sediaan digitalis, indometasin (Indocin), salisilat, rifampisin, flurazepam (Dalamane), propanolol (Inderal), kontrasepsi oral, timah, heparin(Joyce, 1997)

2.4Uji Fungsi HatiPemeriksaan kadar serum glutamik piruvit transaminase atau Alanin aminotransferase (SGPT atau ALAT) dan kadar serum glutamik oksaloasetik transaminase atau aspartat aminotransferase (SGOT atau ASAT) adalah salah satu dari banyaknya tes fungsi hati lain. Kedua tes ini mengukur kadar enzim yang terdapat dalam hati, jantung dan otot (Hasan, 2008).Kadar ALT/SGPT seringkali dibandingkan dengan AST/SGOT untuk tujuan diagnostik. ALT meningkat lebih khas daripada AST pada kasus nekrosis hati dan hepatitis akut, sedangkan AST meningkat lebih khas pada nekrosis miokardium (infark miokardium akut), sirosis, kanker hati, hepatitis kronis dan kongesti hati (Akatsuki, 20009).SGOT banyak terdapat dalam mitokondria dan dalam sitoplasma, sedangkan SGPT hanya terdapat dalam sitoplasma. Oleh karena itu, untuk proses lebih lanjut, terjadi kerusakan membran mitokondria yang akan lebih banyak mengeluarkan SGOT atau AST, sedangkan untuk proses akut SGPR atau ALT lebih dominan dibanding SGOT atau AST (Panil, 2007).1. Komposisi Reagen dalam pengukuran SGPT:1. R1:Tris buffer (132,5 mmol/L), L-alanine (687,5 mmol/L), LDH ( 2.300 u/L) Sodium azide (0,095 %).1. R2: Tris Buffer, NADH, Ketoglutarat, Sodium azide1. Komposisi Reagen dalam pengukuran SGOT:1. R1: Triss Buffer (105 mmol/L), L-Aspartate (330 mmol/L), MHD ( 825 u/L Sodium azide (0,095%), LDH.1. R2: Triss buffer (20 mmol/L), NADH (1.320 u/L), -ketoglutarat (66 mmol/L), Sodium azide (0,095%).1. Faktor yang dapat mempengaruhi temuan laboratorium :1. Pengambilan darah pada area yang terpasang jalur intra-vena dapat menurunkan kadar1. Trauma pada proses pengambilan sampel akibat tidak sekali tusuk kena dapatmeningkatkan kadar1. Hemolisis sampel1. Obat-obatan dapat meningkatkan kadar : antibiotik (klindamisin, karbenisilin,eritromisin, gentamisin, linkomisin, mitramisin, spektinomisin, tetrasiklin), narkotika(meperidin/demerol, morfin, kodein), antihipertensi (metildopa, guanetidin), preparatdigitalis, indometasin (Indosin), salisilat, rifampin, flurazepam (Dalmane), propanolol(Inderal), kontrasepsi oral (progestin-estrogen), lead, heparin. Aspirin dapat meningkatkan atau menurunkan kadar

2.5Nilai Rujukan Data Klinis1.SGOT1. Dewasa: 5-40U/mL(Frankel), 4-36IU/L,16-60U/mLpada 30oC(Karmen),8-33U/Lpada 37oC(unitSI), padawanitanilainya agak sedikit lebih rendah dari pria. olahraga mempengaruhi peningkatan kadar serum.Anak: Bayi baru lahir : Empat kali dari nilai normal.1. Lansia: Sedikit lebih tinggi dari orang dewasa (Joyce, 1997)2.SGPT1. Dewasa:5-35 U/mL (Frankel), 5-25mU/mL (Wrobleweski). 8-50 U/mL pada suhu 300C (Karmen), 4-35 U/L pada suhu 370S (unit S1).Anak:bayi : dapat dua kali tinggi orang dewasa; Anak: sama dengan dewasa.1. Lansia:agak lebih tinggi dari dewasa (Joyce, 1997)3. INTERPRETASI DATA KLINIS1. Nilai normal SGOT (Serum Glutamic Oxaloacetic Transaminase)untuk orang dewasa adalah laki-laki : 0 37 U/L dan perempuan : 0 31 U/L.1. Nilai normal SGPT(Serum Glutamic Piruvic Transaminase)untuk orang dewasa adalah untuk laki-laki : 0 42 U/L, perempuan : 0 32 U/L

BAB IIIMETODOLOGI PRAKTIKUM

3.1Tanggal Pelaksanaan PraktikumTanggal: 14 November 2014 Pukul: 11.00-13.00Tempat: Laboratorium Biokimia Klinis FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

3.2Alat dan BahanAlat: 1. Spektrofotometer dan cuvet1. Tabung vacutest1. Jarum suntik1. Alcohol pads1. Mikropipet

Bahan:1. Plasma darah1. Reagen 1 :- Tris Buffer pH 7,5 100 mmol/L- L-Alanin 500 mmol/L- LDH 1200 U/L1. Reagen 2 :- 2-oxoketoglutarat 15 mmol/L1. NADH 0,18 mmol/L

3.3Prosedur KerjaDarah diambil sebanyak 3 ml (hindari hemolysis), masukan dalam tabung vacutest, lalu disentrifugasi untuk mendapatkan plasmareagen dan cuvet dihangatkan pada temperature yang diinginkan (37C) dan konstan Sampel dipipet sebanyak 100 L kedalam tabung, ditambahkan reagen 1 sebanyak 1000L, dicampurkan lalu diinkubasi 5 menit pada temperature yang dikehendaki, kemudian ditambahkan 250 L Reagen 2

Dibaca absorbansinya pada panjang gelombang 365 nm setelah 1 menit dan pada saat yang sama mulai dihitung waktu dengan stopwatchReagen dan sampel dicampurkanDibaca kembali absorbansi dengan pasti setelah 1 menit, 2 menit , dan 3 menitdilanjutkan perhitungan :A menit x 1765Hal ini dilakukan dua kali pada pengujian untuk SGPT dan SGOT

BAB IVHASIL DAN PEMBAHASAN

0. Hasil0. Uji SGPT (Serum Glutamat Piruvat Transaminase) atau ALT (Alanin Transaminase)Waktu (menit)Absorbansi

01,0140

11,0570,043

21,0440,013

31,0450,001

Rata2 = 0,019

1. Perhitungan : Rata2 1765 0,019 1765 = 33,535 U/L1. Kesimpulan : kadar SGPT sampel menunjukkan bahwa kadar tersebut melebihi batas kadar SGPT normal pada wanita 17 U/L

0. Uji SGOT (Serum Glutamat Oksaloasetat Transaminase) atau AST (Aspartate Transaminase)Waktu (menit)Absorbansi

01,1070

11,1090,002

21,1090

31,1090

Rata2 = 6,67 10-4

1. Perhitungan :Rata2 1765 6,67 10-4 1765 = 1,177 U/L1. Kesimpulan : kadar SGOT sampel menunjukkan bahwa kadar tersebut masih berada pada kadar SGOT normal pada wanita 15 U/L

0. Pembahasan Pada praktikum ini dilakukan uji pemeriksaan SGPT/SGOT. Hal ini dilakukan untuk memperlihatkan dan memahami konsep aktivitas enzim Serum Glutamic Piruvic Transaminase) (SGPT) dan Serum Glutamic Oxaloacetic Transaminase (SGOT). Kedua enzim tersebut merupakan enzim yang mengkatalisis pemindahan reversible satu gugus amino antara suatu asam amino dan suatu asam alfa-keto yang disebut aminotransferase atau transaminase. Enzim SGPT atau Alanin Aminotransferase (ALT) adalah enzim yang ditemukan dalam konsentrasi tinggi di hepatosit (sel hati), sedangkan ginjal, jantung, dan otot rangka mengandung kadar sedang. ALT dalam jumlah yang lebih sedikit dijumpai di pancreas, paru, limpa dan eritrosit. Sementara enzim SGOT atau Aspartat Aminotransferase (AST) terdapat di hati, miokardium, dan otot rangka; eritrosit juga memiliki AST dalam jumlah sedang.Dalam percobaan ini pertama-tama diambil sampel darah dari probandus dengan menggunakan jarum suntik sebanyak 3 ml dan dimasukkan kedalam vaccutest. Sampel darah harus dihindari dari hemolisis karena akan mempengaruhi pengukuran. Kemudian sampel tersebut di sentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm untuk mendapatkan serum darah. Dalam serum darah ini terdapat enzim SGOT dan SGPT karena SGOT dan SGPT yang dihasilkan dari sel hati akan disalurkan juga ke darah, dimana darah ini menjadi media penyaluran enzim transaminase untuk membantu metabolisme kimiawi di jaringan lain.Kemudian dilanjutkan dengan memasukan 100 U/L serum darah ke dalam masing-masing tabung dan dimasukan GOT reagen 1 ke dalam 6 tabung masing-masing sebanyak 500 U/L. Dalam GOT reagen 1 terkandung tris buffer pH 7,5 yang berfungsi menstabilkan dan mempertahankan pH yang diinginkan selama reaksi, sehingga aktivitas enzim GOT tetap berfungsi dengan baik karena kinerja enzim sangat sensitif terhadap perubahan pH. Selain itu pada reagen 1 terkandung L-aspartat, LDH dan MDH. Laspartat berfungsi sebagai substrat asam amino yang akan direaksikan oleh enzim GOT menjadi L-glutamat dan oksaloasetat dan LDH dan MDH akan ikut membantu dalam mereduksi oksaloasetat menjadi malat. Inkubasi ini bertujuan agar reaksi yang terjadi antara reagen dan plasma dapat berjalan sempurna. Setelah proses inkubasi kemudian ditambahkan GOT reagen 2. Reagen 2 ini mengandung 2-oxoketoglutarat yang akan bereaksi dengan L-aspartat menghasilkan L-glutamat dan oksaloasetat dan NADH pengukur perubahan aksaloasetat menjadi malat. Dilanjutkan dengan proses inkubasi selama 1 menit lalu ukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer UV pada panjang gelombang 365 nm, karena pada panjang gelombang tersebut, sampel akan memberikan serapan maksimum. Pengukuran sampel menggunakan spektrofotometer UV/Vis juga dikarenakan mempunyai sensitivitas yang relatif tinggi dan pengerjaanya mudah sehingga pengukuran yang dilakukan cepat serta mempunyai spesifisitas yang baik. selanjutnya absorbansi juga diukur pada menit ke 0, 1, 2 ,3 dan menit ke 4.Prinsip kerja yang terjadi dari pendeteksian GOT adalahaminotransferase (AST) mengkatalis transaminasi dari L aspartate dana- kataglutarate membentuk L glutamate dan oxaloacetate. Oxaloacetate direduksi menjadi malate oleh enzym malate dehydrogenase (MDH) dan niconamideadenine dinucleotide (NADH) teroksidasi menjadi NAD. Banyaknya NADH yang teroksidasi, berbanding langsung dengan aktivitas AST dan diukur secara fotometrik menggunakan spektrofotometer UV. Hal yang sama dilakukan untuk memeriksa kadar SGPT. Masukan 100 U/L serum darah ke dalam masing-masing tabung dan dimasukan GPT reagen 1 ke dalam 6 tabung masing-masing sebanyak 500 U/L. Dalam GPT reagen 1 terkandung tris buffer pH 7,5 yang berfungsi menstabilkan pH selama reaksi sehingga aktivitas enzim GPT tetap berfungsi dengan baik karena kinerja enzim sangat sensitif terhadap perubahan pH. Selain itu pada reagen 1 terkandung L-alanin dan LDH. Lalanin berfungsi sebagai substrat asam amino yang akan direaksikan oleh enzim GPT menjadi L-glutamat dan piruvat sementara LDH berperan dalam dan membantu dalam mereduksi piruvat menjadi laktat. Setelah itu diinkubasi selama 5 menit di suhu ruangan. Setelah proses inkubasi kemudian ditambahkan GPT reagen 2, reagen 2 ini mengandung 2-oxoketoglutarat yang akan bereaksi dengan L-alanin menghasilkan L-glutamat dan piruvat. Sedangkan NADH berfungsi menjadi pengukur perubahan piruvat menjadi laktat. Dilanjutkan dengan proses inkubasi selama 1 menit lalu diukur menggunakan spektrofotometer UV pada panjang gelombang 365 nm, lalu ukur pada menit ke 0,1,2 dan menit ke 4.Prinsip dalam pengukuran SGPT ini adalah Alanine aminotransferase (ALT) mengkatalis transiminasi dari L alanine dana- kataglutarate membentuk l glutamate dan pyruvate yang terbentuk di reduksi menjadi laktat oleh enzym laktat dehidrogenase (LDH) dan nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) teroksidasi menjadi NAD. Banyaknya NADH yang teroksidasi hasil penurunan serapan (absobance) berbanding langsung dengan aktivitas ALT dan diukur secara fotometrik.Berdasarkan hasil pemeriksaan kadar SGPT/SGOT pada probandus yang dilakukan dilaboratorium pada suhu ruangan 25oC, diketahui bahwa probandus memiliki kadar SGPT: 33,535 U/L dan SGOT: 1,177 U/L. Hasil ini dapat dibandingkan dengan hasil pemeriksaan SGPT/SGOT dari literatur. Adapun Nilai rujukan Kadar SGPT dan SGOT yang normal pada suhu 25 sebagai berikut :Laki-LakiPerempuan

SGPT (UI/L)