LAPORAN PEMBUATAN PREPARAT MALARIA

Judul : Pembuatan preparat malariaHari,Tanggal : Tujuan: -Mahasiswa dapat membuat sediaan darah tipis dan darah tebal - Mahasiswa dapat melakukan pewarnaan terhadap sediaan darah tipis dan tebal dengan menggunakan cat giemsa 10 %.Metode : Pembuatan Preparat Malaria Sediaan darah tipis Sediaan darah tebalPrinsip : a) Pembuatan sediaan tetes tebalDarah kapiler diambil secara aseptis lalu diteteskan 12 mikron pada kaca objek. Kemudian darah dibuat melingkar dari luar ke dalam 1x1 cm. Dibiarkan sampai mengering.b) Pembuatan sediaan tetes tipisDarah kapiler diambil secara aseptis lalu diteteskan 6 mikron pada kaca objek. Kemudian darah dihapuskan dengan kaca objek lain hingga membentuk seperti lidah kucing. Lalu dibiarkan hingga mengering.c) Pewarnaan sediaan darah tetes tebal dan tipis dengan Giemsa 10 %Sediaan tetes tebal dihemolisa dengan aquades selama 3 menit. Sediaan tetes tipis difiksasi dengan metanol p.a selama 3 menit. Lalu masing-masing ditambahkan giemsa 10 % dan dibiarkan 30 menit. Kemudian dibilas dengan aquades. Sel eritrosit yang terinfeksi parasit malaria dapat terlihat kelainan morfologinya.Alat Dan Bahan:A. Alat1. Objek glass2. Cover glass3. Rak pewarnaan4. Auto click5. Beaker glass 50 mL6. Pipet tetes7. Pipet ukur 1 mL dan 10 mL8. Ball pipet9. Botol semprotB. Bahan1. Larutan warna Giemsa 10%2. Aquadest3. Metanol p.a4. Buffer phosfat pH 6,85. Alkohol 70%6. Lancet7. Kapas kering8. Alkohol swab9. Tissue10. Label11. Preparat malaria12. Oil imersiCara Kerja :A. Pengambilan Sampel Darah Kapiler1. Alat dan bahan disiapkan2. Kaca objek dibersihkan dengan alcohol 70% (jika ada sebaiknya digunakan alcohol 96%)3. Kaca objek diberi label (nama, umur, jenis kelamin, tanggal pembuatan)4. Jari tengah atau jari manis (tangan kiri) pasien didesinfeksi dengan alcohol swab5. Ujung jari dibendung dengan cara ditekan, namun jangan dipijat pijat6. Bagian pinggir jari pasien ditusuk dengan lanset steril dengan bantuan auto click.7. Darah yang pertama keluar dihapus dengan tissue8. Darah yang keluar berikutnya diteteskan pada objek glass secara terpisah untuk sediaan darah tebal (12 m) dan sediaan darah tipis (6 m)

B. Pembuatan Sediaan Tetes Tebal1. Tetesan darah dilebarkan dari luar ke dalam dengan diameter + 1 cm menggunakan salah satu ujung kaca objek lain yang bersih2. Dibiarkan sampai mengering.

C. Pembuatan Sediaan Tetes Tipis1. Pada tepi tetesan darah, diletakkan tepi kaca objek lain yang bersih dengan membentuk sudut 30o 40o sehingga darah akan menyebar ditepi kaca objek lain tersebut.2. Bila darah telah menyebar rata, maka kaca objek yang digunakan untuk membuat apusan didorong perlahan membentuk apusan darah yang tipis dan rata dengan ujung berbentuk lidah.3. Apusan darah dikeringkan

D. Pembuatan Cat Giemsa 10%1. 1 mL Giemsa dimasukkan ke dalam gelas beaker dengan pipet ukur.2. Dilarutkan dengan 9 mL Buffer Fosfat pH 6,83. Larutan Giemsa 10% dihomogenkan dan ditutup dengan aluminium foil

E. Pewarnaan Tetes Tebal dengan Giemsa 10%1. Sediaan darah diletakkan di rak pewarnaan dan diatur jaraknya 2. Sediaan darah tebal diteteskan dengan aquades secara merata, dibiarkan sampai lisis ( + 3 menit )3. Aquades ditiriskan 4. Sediaan diteteskan dengan larutan Giemsa 10% secara merata, lalu dibiarkan 30 menit5. Setelah 30 menit, warna Giemsa ditiriskan dan sediaan dibilas dengan aquades6. Sediaan dibiarkan kering dalam suhu ruang

F. Pewarnaan Tetes Tipis dengan Menggunakan Giemsa 10%1. Sediaan darah diletakkan di rak pewarnaan dan diatur jaraknya 2. Sediaan darah tipis diteteskan dengan methanol p.a secara merata, dibiarkan + 5 menit3. Setelah 5 menit metanol ditiriskan 4. Sediaan diteteskan dengan larutan Giemsa 10% secara merata, lalu dibiarkan 30 menit5. Setelah 30 menit, warna Giemsa ditiriskan dan sediaan dibilas dengan aquades6. Sediaan dibiarkan kering dalam suhu ruang

Hasil Praktikum :

Pembahasan :Sebelum pemeriksaan, dilakukan terlebih dahulu pengambilan sampel darah tepi. Pengambilan sampel darah tepi dilakukan pada jari tengan dan jari manis tangan kiri karena tangan kiri lebih sedikit bekerja dibandingkan tangan kanan. Sebelum pengambilan darah, jari yang akan ditusuk didesinfeksi dengan kapas alkohol 70% atau dengan alkohol swab agar terbebas dari bakteri. Desinfeksi dilakukan dengan mengusap/memutar alkohol swab dari dalam ke luar secara searah. Hal ini bertujuan agar kotoran yang sudah dibersihkan tidak kembali lagi kebagian yang sudah dibersihkan.Saat pengambilan darah, jari ditekan agar terbendung pada bagian yang akan ditusuk. Jari ditusuk dengan lanset dengan bantuan autoclick dimana kedalaman penusukan disesuaikan dengan jari pasien. Darah yang keluar pertama dihapuskan dengan tissue. Hal ini bertujuan untuk meminimalisir kontaminasi oleh alkohol. Darah berikutnya diteteskan secara terpisah pada kaca objek. Untuk sediaan darah tebal diteteskan 12 mikron darah ( 3 tetes) sedangkan untuk sediaan darah tipis diteteskan 6 mikron darah ( 2 tetes).Dalam Praktikum ini, pengambilan sampel darah tepi diambil dar pasien Coratry Shovariah (19 thn). Tetesan darah yang diambil kemudian dihapuskan menjadi sediaan apus tebal dan apus tipis.Perbedaan sediaan apus tebal dan tipis : Sediaan apus tebalLebih banyak membutuhkan darah. Jumlah selnya lebih banyak dalam satu lapang pandang. Dalam sediaan ini, lebih mudah menginfeksi yang ringan. Sediaan apus tipisLebih sedikit membutuhkan darah. Sediaan apus tipis yang baik bentuknya seperti lidah. Dalam sediaan ini, morfologi parasit lebih jelas dan perubahan pada eritrosit dapat terlihat jelas.Kriteria Preparat yang baik:1. Lebar dan panjangnya tidak memenuhi seluruh kaca benda sehingga masih ada tempat untuk pemberian label2. Penebalannya nampak berangsur-angsur menipis dari kepala ke ekor3. Ujung atau ekornya tidak membentuk kepala robek4. Tidak berlubang-lubang karena bekas lemak masih ada diatas kaca objek5. Tidak terputus-putus karena gerakan gesekan yang ragu-ragu6. Tidak terlalu tebal atau tidak terlalu tipisSetelah itu apusan darah dikeringkan dalam kamar bebas debu. Setelah kering sediaan segera diwarnai dengan Giemsa 10%. Prinsip pewarnaan giemsa adalah presipitasi hitam yang terbentuk dari penambahan larutan metilen biru dan eosin yang dilarutkan didalam metanol. Pengecatan Giemsa dilakukan dengan menggunakan Giemsa 10% . Larutan ini dapat dibuat dengan melarutkan 1 ml Giemsa dengan 9 ml Buffer Phosphat pH 6,8. Sebaoknya larutan Buffer Phosphat yang digunakan dengan pH 7,2 agar memperoleh hasil pewarnaan yang baik.Sediaan darah tipis difiksasi dengan metanol p.a. dengan cara diteteskan dan dibiarkan 3 menit. Sedangkan sediaan darah tebal dihemolisis dengan aquadest sampai seluruh hemoglobin hilang ( 3 menit). Setelah itu sediaan ditetesi dengan larutan Giemsa 10% sampai menutupi seluruh permukaan dan dibiarkan selama 30 menit. Sediaan darah dibilas dengan aquades yang mengalir sehingga larutan Giemsa turut mengalir dengan air. Dengan demikian tidak ada sisa cat yang mengendap pada sediaan darah. Sediaan darah tpis yang difiksasi dengan metanol p.a. bertujuan untuk melekatkan sel-sel darah dan mikroorganisme pada kaca objek, menon-aktifkan mikroorganisme dan mengawetkan mikroorganisme pada slide.Hal-hal yang perlu diperhatikan dalam pewarnaan Giemsa adalah1. Dalam pengeringan sediaan darah tebal tidak boleh dipanasi karena tindakan ini menyebabkan eritrosit susah dihemolisis pada proses pewarnaan.2. Pewarnaan tidak boleh >24 jam setelah kering, karena jika terlalu lama didiamkan eritrosit sukar dihemolisis saat pewarnaan.3. Metanol tidak boleh menegnai sediaan tetes tebal karena akan membuat bagian tersebut terfiksasi dan hasil pewarnaan tidak sesuai keinginan.4. Hati-hati membilas sediaan tetes tebal karena bagian tersebut tidak terfiksasi dan tidak menempel pada objek gelas5. Sediaan darah tipis tidak boleh terkena aquades agar sel-sel darah tidak lisis.

Kesimpulan :