KUMPULAN EMBAHASAN

  PEMBAHASAN

Pada praktikum kali ini, kita akan membahas tentang skrining fitokimia, dimana nantinya

akan diidentifikasi beberapa golongan senyawa dari suatu ekstrak tumbuhan yang tidak diketahui

identitasnya. Dalam praktikum ini kita akan mengidentifikasi senyawa golongan alkaloid,

flavonoid, glikosida saponin, triterpenoid dan steroid, polifenol dan tannin serta golongan

antrakinon.

Identifikasi Senyawa Golongan Alkaloid

Alkaloid sekitar tahun 5500 telah diketahui, merupakan golongan zat tumbuhan sekunder

yang terbesar. Tidak ada satupun istilah alkaloid yang memuaskan, tetapi pada umumnya

alkaloid mencakup senyawa yang bersifat basa yang mengandung satu atau lebih atom nitrogen,

biasanya dalam gabungan, sebagai dari system siklik. Alkaloid sering beracun bagi manusia dan

banyak yang mempunyai kegiatan fisiologi yang menonjol, jadi digunakan secara luas dalam

bidang pengobatan. Alkaloid biasanya tidak berwarna, seringkali bersifat optic aktif.

Kabanyakan berbentuk Kristal tetapi hanya sedikit yang berupa cairan (misalnya nikotina) pada

suhu kamar.

Menurut Hegnauer bahwa “alkaloid adalah zat yang sedikit atau lebih toksik yang

memiliki aktivitas utama terhadap system saraf pusat, memiliki karakter dasar, mengandung

nitrogen heterosiklik dan disintregasi dalam tanaman dari asam amino atau turunannya.

Keberadaannya terdistribusi dalam kingdom tumbuhan.” Fungsi alkaloid dalam tumbuhan masih

sangat kabur, meskipun masing-masing senyawa telah dinyatakan sebagai pengatur tumbuh, atau

penghalau atau penarik serangga. Teori yang menyatakan bahwa alkaloid merupakan bentuk

penyimpan nitrogen dalam tumbuhan, sekarang ini tidak lagi diterima.

Alkaloid biasanya diperoleh dengan cara mengekstraksi bahan tumbuhan memakai air

yang diasamkan dan melarutkan alkaloid sebagai garam atau bahan tumbuhan dapat dibasakan

dengan natrium karbonat dan sebagainya dan basa bebas diekstraksi dengan pelarut organic

seperti kloroform, eter dan sebagainya. Beberapa alkaloid yang dapat menguap seperti nikotina

dapat dimurnikan dengan cara penyulingan uap dari larutan yang dibasakan. Larutkan dalam air

yang bersifat asam dan mengandung alkaloid dapat dibasakan dan alkaloid diekstraksi dengan

pelarut organic sehingga senyawa netral dan asam yang mudah larut dalam air tertinggal dalam

air.

Bukti kualitatif untuk menunjukkan adanya alkaloid dan pencirian kasar dapat diperoleh

dengan menggunakan berbagai pereaksi alkaloid. Beberapa pereaksi yang digunakan adalah

pereaksi Mayer, pereaksi Wagner, pereaksi Asam Silikotungsat 5%, pereaksi Asam Tanat 5%,

pereaksi Dragendorff, perekasi iodoplatinat dan larutan asam pikrat jenuh.

Dalam praktikum yqang kami lakukan dalam pengidentifikasian golongan senyawa

alkaloid dengan menggunakan 2 cara yaitu reaksi pengendapan dan kromatografi Lapis Tipis.

a.    Reaksi Pengendapan

Ekstrak sebanyak 0.32 gram ditambah 5 mL HCl 2 N, dipanaskan di atas penangas air selama 2 –

3 menit, sambil diaduk. Setelah dingin ditambah 0.3 gram NaCl, diaduk rata kemudian disaring.

Filtrate yang diperoleh ditambah 5 mL HCl 2 N dan dibagi menjadi 3 bagian yang sama yaitu

larutan A, B dan C. Penambahan NaCl ini bertujuan untuk mengendapkan protein yang dapat

menyebabkan terjadinya positif palsu. Dalam penambahan NaCl ini terjadi salting out dari

protein. Dalam reaksi pengendapan alkaloid ini digunakan 2 macam peraksi, yaitu :

1)      Pereaksi Mayer

Pereaksi Mayer ini mengandung Kalium Tetraiodomerkurat dan paling banyak digunakan untuk

mengidentifikasi alkaloid karena pereaksi ini memberikan endapan dengan hamper semua

alkaloid. Larutan A yang ditambah dengan +8 tetes pereaksi Mayer ternyata tidak menimbulkan

endapan (negatif). Hal ini berarti bahwa dalam sampel tidak mengandung alkaloid.

2)      Pereaksi Wagner

Peraksi wagner ini mengandung iodium dalam Kalium Iodida. Pereaksi ini juga paling sering

digunakan untuk mengidentifikasi senyawa golongan alkaloid. Larutan B yang ditambah

dengan + 3 tetes pereaksi wagner menghasilkan larutan yang tidak mengandung endapan. Hal ini

menandakan bahwa dalam sampel tidak terdapat endapan.

b.   Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi Lapis Tipis merupakan suatu metode pemisahan suatu senyawa berdasarkan pada

sifat polar dan nonpolar. Dalam KLT ada yang bertindak sebagai fase diam dan fase gerak. Fase

diam pada identifikasi ini adalah lempeng Kiesel gel GF 254 yang bersifat polar, sedangkan fase

gerak terdiri dari campuran Etil aseta – Metanol – Air dengan perbandingan ( 9 : 2 : 2 ) yang

bersifat non polar.

Awalnya larutan IC dari hasil pembagian pada preparasi sampel ditambah dengan NH4OH 28%

sampai larutan menjadi basa, kemudian diekstraksi dengan 5 mL kloroform bebas air lalu

disaring. Tujuan penambahan NH4OH pada sampel IC adalah untuk memberikan suasana basa

pada sampel. Kebanyakan alkaloid bersifat basa yang tergantung pada pasangan electron pada

nitrogen. Jika gugus fungsional yang berdekatan dengan nitrogen bersifat melepaskan electron,

maka ketersediaan electron pada nitrogen naik dan senyawa bersifat basa. Sebaliknya jika gugus

fungsional yang berdekatan bersifat menarik electron maka ketersediaan pasangan electron

berkurang dan pengaruh yang ditimbulkan alkaloid dapat bersifat netral atau bahkan bersifat

sedikit asam.

Tujuan eksitasi koroform adalah agar senyawa golongan alkaloid dapat larut dalam kloroform

dan terpisah atau terhindar dari zat-zat lain yang dapat mengganggu proses identifikasi dan tidak

larut dalam kloroform. Filtrate dari proses penyaringan yang berada pada fase kloroform

diuapkan sampai kering. Selanjutnya hasil penguapan dilarutkan dalam methanol dan siap untuk

pemeriksaan dengan KLT. Sampel ditotolkan pada lempeng KLT (+ 2 kali penotolan) dengan

menggunakan pipa kapiler. Setelah itu dieluasi dengan eluen yang sudah dipersiapkan

sebelumnya. Setelah proses eluasi selesai maka dilakukan penyemprotan larutan penampak noda

pada lempeng. Pereaksi penampak noda yang menunjukkan adanya alkaloid adalah

menggunakan pereaksi Dragendorft.

Ketika pereaksi warna disemprotkan pada lempeng KLT pada awal penotolan dan daerah

pergerakan eluen dari sampel yang dianalisis tidak terlihat adanya warna jingga yang

menunjukkan adanya alkaloid dalam ekstrak. Dari hasil penampakan spesifik yang menunjukkan

tidak adanya warna jingga pada lempeng KLT maka dapat diketahui bahwa sampel ekstrak

tumbuhan yang diberikan tidak mengandung senyawa golongan alkaloid.

Identifikasi Senyawa Golongan Terpenoid, Triterpenoid, Sapogenin Steroid dan Steroid

Bebas

Senyawa terpenoid berasal dari molekul isoprene CH2=C(CH3)-CH=CH2 dan kerangka

karbonnya dibangun oleh penggabungan dua atau lebih satuan C5 ini. Lalu senyawa terpenoid

dipilah-pilah menjadi beberapa golongan berdasarkan jumlah satuan yang terdapat dalam

senyawa tersebut. Terpenoid terdiri dari beberapa macam senyawa, mulai dari komponen minyak

atsiri yaitu monoterpen dan seskuiterpen yang mudah menguap (C10 dan C15). Diterpen yang lebih

sukar menguap (C20). Senyawa tidak menguap yaitu triterpenoid dan sterol (C30) serta pigmen

karotenoid (C40).

Secara kimia terpenoid umumnya larut dalam lemak dan terdapat pada sitoplasma sel

tumbuhan. Kadang minyak atsiri terdapat di sel kelenjar khusus pada permukaan daun dan

kromoplast di dalam bunga. Biasanya terpenoid diekstraksi dari jaringan tumbuhan dangan eter,

eter minyak bumi atau kloroform dan dapat dipisahkan secara KLT pada silica gel. Tapi

seringkali ada kesulitan waktu mendeteksi dalam skala mikro karena kebanyakan senyawanya

tidak berwarna dan tidak ada pereaksi kromogenik yang peka. Untuk itu, dilakukan

penyemprotan dengan anisaldehid asam sulfat lalu dipanaskan untuk menampakkan noda.

Senyawa triterpenoid adalah senyawa yang kerangka karbonnya berasal dari 6 satuan

isoprene dan secara biosintesis diturunkan dari hidrokarbon C30 asiklik yaitu skualena.

Triterpenoid dapat dipilih menjadi 4 golongan senyawa triterpena sebenarnya, steroid, saponin

dan glikosida jantung. Saponin dan glikosida jantung merupakan triterpena atau steroid yang

terdapat sebagai glikosida. Pada pemeriksaan triterpen harus dilakukan hidrolisis untuk

membebaskan aglikon bila ada glikosida. KLT dilakukan pada silica gel memakai pengembang

n-heksana : etilasetat (4:1) dengan pendeteksi antimony klorida dalam CHCl3 atau anisaldehid

asam sulfat yang dipanaskan. Beberapa campuran triterpena tidak mudah dipisahkan dengan cara

trersebut, misalnya  amirin dan  amirin hanya dapat dipisahkan dengan baik bila

dikromatografi memakai n-butanol dan NH4OH 2M (1:1).

Banyak terpenoid dan steroid alcohol terdapat di alam bukan sebagai alcohol bebas tapi

sebagai glikosida. Namun senyawa tersebut telah digolongkan menjadi glikosida tertentu yaitu

steroid, saponin, glikosida jantung dan lain-lain. Di alam dikenal dua jenis saponin yaitu

glikosida triterpenoid alcohol dan glikosida struktur steroid tertentu yang mempunyai rantai

samping spiroketal. Kedua jenis saponin ini larut dalam air dan etanol, namun tidak dalam eter.

Aglikonnya disebut sapogenin yang diperoleh dari hidrolisis dalam suasana asam atau

menggunakan enzim dan tanpa bagian gula. Untuk uji sapogenin ekstrak dihidrolisis dengan HCl

selama 2-6 jam, dinetralkan dan lakukan ekstraksi dengan n-heksana larutan dipekatkan lalu di

KLT pada silica gel memakai pengembang etil asetat dan n-hekasana (1:4). Selanjutnya

sapogenin dideteksi berupa bercak merah jambu setelah plat KLT disemprot dengan antimony

klorida dalam HCl pekat atau dengan anisaldehid asam sulfat dan dipanaskan. Sapogenin yang

berlaman tidak mudah dipisahkan dengan KLT. Missal, memisahkan diosgenin dari yamogenin

diperlukan metode pengembangan sinambung memakai metil diklorida dan eter (4:1) selama 8

jam.

Steroid adalah triterpen yang kerangka dasarnya system cincin sklopentana

perhidrofenantrena. Steroid umumnya berada dalam bentuk bebas sebagai glikosida sederehana.

Untuk pendeteksian steroid dengan metode KLT cukup dengan melarutkannya dengan etanol

lalu bercak nodanya disemprot dengan anisaldehid asam sulfat dan dipanaskan. Jika ekstrak

positif mengandung steroid, maka akan timbul noda merah uingu atau ungu.

Pada praktikum kali ini, kami menggunakan beberapa uji antara lain :

a.    Reaksi Uji Buih

Pada metode identifikasi menggunakan uji buih yaitu dengan cara memasukkan +0.3 gram dalam

tabung reaksi kemudian ditambahakan air suling 10 mL, kocok selama 30 detik. Jika terjadi buih

yang stabil selama lebih dari 30 menit dengan tinggi 3 cm diatas permukaan larutan pada tabung

reaksi maka ekstrak yang kita uji mengandung saponin. Pada sampel yang diidentifikasikan

positif mengandung buih stabil lebih dari 30 menit dengan tinggi + 3,5 cm di atas permukaan

cairan. Hal ini menunjukkan bahwa sampel yang diujikan mengandung saponin.

b.    Reaksi Uji Salkwoski

Pada uji Salkoswki, memasukkan 0.3 gram ekstrak dalam tabung reaksi yang dilarutakan dalam

15 mL etanol. Tujuannya adalah untuk memisahkan gugus steroid dengan gugus senyawa lain.

Digunakan etanol dikarenakan etanol merupaka pelarut yang universal karena dapat memisahkan

senyawa dari yang bersifat polar sampai non polar. Selain itu, etanol dapat memisahkan

komponen steroid secara optimal, aman dalam pemakaian, tidak merusak komponen senyawa,

tidak berbahaya bagi lingkungan, oekonomis serta mudah didapatkan. Setelah larutan ekstrak

homogeny, campuran dibagi menjadi 3 bagian yaitu IIA, IIB dan IIC. Larutan IIA digunakan

sebagai blanko, IIC ditambahakan 1-2 mL H2SO4 pekat melalui dinding tabung reaksi. Tujuan

penambahan ini untuk memutuskan ikatan gula pada senyawa. Jika ikatan gula terlepas maka

adanya steroid bebas pada sampel akan ditandai dengan adanya cincin yang berwarna merah.

Apabila hal ini tidak muncul maka tidak mengandung steroid bebas. Pada ekstrak yang

didiujikan positif mengandung steroid. Hal in i ditandai adanya cincin berwarna merah.

c.    Reaksi Uji KLT Sapogenin/triterpenoid

Dalam proses skrining sapogenin steroid dengan menggunakan KLT, pertama-tama kami

menambahkan ektrak yang telah dimasukkan dalam tabung reaksi dengan HCl pekat kemudian

dipanaskan dengan heater diluar ruangan karena HCl pekat bersifat korosif, selama 2 jam.

Penambahan ini bertujuan untuk membebaskan aglikonnya (sapogenin) dari suatu ikatan

glikosida. Sapogenin merupakan salah satu bentuk dari saponin yang terikat atau membentuk

ikatan glikosida dengan senyawa lainnya. Sedangkan fungsi dari pemanasan selama 2 jam adalah

untuk membantu dan mempercepat putusnya (hidrolisis) sapogenin dari ikatan glikosidanya.

Setelah dilakukan pemanasan  selama 2 jam, maka hasil hidrolisis ekstrak tersebut didinginkan

kemudian ditambahkan dengan ammonium. Sapogenin bersifat asam, penambnahan ini

mempunyai sifat basa yang akan menetralkan larutan. Setelah dinetralkan, dilakukan ekstraksi

dengan menggunakan n-heksana sebanyak 3 kali. Tujuan dari pengekstrakan ini adalah untuk

memisahkan sapogenin dan senyawa lainnya. Dalam pengekstrakan tersebut akan terbentuk 2

lapisan. Lapiasan yang diambil adalah lapisan n-heksana, karena sapogenin cenderung larut

dalam n-heksana. Kemudian dilakukan penguapan untuk menghilangkan n-heksana tadi.

Kemudian dilakukan penotolan sampel ke lempeng KLT. Dengan fase gerak n-heksana dan etil

asetat. Melihat bahan yang digunakan dalam fase diam dan fase geraknya, proses KLT yang kita

gunakan ini adalah normal fase, karena fase diam yang kita gunakan bersifat polar sedangkan

fase geraknya bersifat nonpolar.

Setelah proses eluasi selesai maka lempeng dikeringkan kemudia disemprot dengan penampak

noda anisaldehid asam sulfat. Jika terdapat penamapakan noda berwarna ungu mengidentifikasi

bahwa sampel mengandung sapogenin dan dapatr diukur besarnya Rf. Pada sampel ekstrak

mengandung sapogenin steroid/triterpenoid. Hal ini ditunjukkan dengan adanya noda warna

ungu dengan tinggi noda 7,7 cm dan Rf 0,96.

d.   Identifikasi Terpenoid atau Steroid Bebas secara KLT

Uji kandungan steroid atau terpenoid bebas dalam ekstrak simplisia dilakukan dengan

menggunakan kromatograrfi lapis tipis. KLT merupakan metode kromatografi yang paling

sederhana. Fase diam yang digunakan berupa lapisan tipis dan fase gerak berupa cairan. Bercak

atau noda yang dihasilkan ditandai, jika tidak tampak dapat dialkukan penyemprotan dengan

pereaksi penampak noda tertentu. Metode termudah adalah dengan menggunakan nilai Rf yaitu

perbandingan jarak tepuh noda dengan jarak tempuh eluen dalam sistem kromatografi.

Pertama – tama ekstrak ditambah dengan beberapa tetes etanol, sehingga didapat fase organik.

Etanol dipilih katrena secara umum etanol merupakan pelarut yang dianggap dapat melarutkan

seluruh golongan metabolit sekunder, termasuk terpenoid dan steroid bebas. Dalam identifikasi

ini, tidak dilakukan proses hidrolisis karena bentuk terpenoid dan steroidnya adalah bentuk

bebas, tidak memiliki ikatan glikosida seperti pada sapogenin steroid atau triterpenoid yang

sebelum diidentifikasi harus diputus terlebih dahulu ikatannya.

Langkah selanjutnya, fase organik ditotolkan ± 4 μl pada lempeng KLT, dalam praktikum kali

ini digunakan Kiesel Gel GF 254 sebagai fase diamnya. Kemudian lempeng KLT diproses dalam

chamber yang berisi eluen yaitu n-heksana – etil asetat ( 4 : 1 ) sebagai fase gerak. Pemilihan

eluen dengan komposisi tersebut berdasarkan kemampuannya untuk meminimumkan pengotor

dan menghasilkan noda yang terpisah dengan baik. Setelah eluen mencapai batas elusi, lempeng

KLT kemudian dikeringkan. Lempeng disemprot dengan pewarna noda anisaldehid asam sulfat

dan kemudian dipanaskan. Adanya terpenoid atau steroid bebas ditunjukkan dengan terjadinya

warna merah ungu, atau ungu. Noda pada lempeng KLT berwarna ungu, hal tersebut

menunjukkan bahwa ekstrak simplisia mengandung terpenoid atau steroid bebas.

Dari hasil praktikum yang telah dilakukan didapatkan bahwa pada lempeng KLT tidak

didapatkan hasil berwarna merah ungu. Hal tersebut menunjukkan bahwa ekstrak yang

diidentifikasi tidak mengandung terpenoid atau steroid bebas.Identifikasi Senyawa Golongan

Flavonoid

Flavonoid terutama berupa senyawa yang larut dalam air, dapat diekstraksi dengan etanol

70% dan tetap ada lapisan air setelah ekstrak ini di kocok dengan eter. Flavonoid berupa

senyawa fenol, karena itu warnanya berubah bila ditambahkan  basa atau amoniak. Jadi senyawa

ini mudah dideteksi pada kromatogram atau dalam larutan.

Penggolongan jenis flavonoid dalam jaringan tumbuhan mula – mula didasarkan kepada

telaah sifat kelarutan dan reaksi warna. Kemudian diikuti dengan pemeriksaan ekstrak tumbuhan

yang telah dihidrolisis, secara kromatografi satu arah, dan pemeriksaaan ekstrak etanol secara

dua arah. Akhirnya flavonoid dapat dipisahkan dengan cara kromatografi. Komponen masing –

masing diidentifikasi dengan membandingkan kromatografi dan spektrum, dengan memakai

senyawa pembanding yang sudah dikenal.

Pada uji flavonoid, yang pertama dilakukan adalah uji reaksi warna. Reaksi warna diawali

dengan mengekstraksi ekstrak dengan n-heksana berkali – kali sampai ekstrak n-heksana tidak

berwarna. Hal ini untuk memisahkan senyawa – senyawa lain yang mengganggu

pengidentifikasian flavonoid. Kemudian residu dilarutkan dalam etanol yang merupakan pelarut

universal yang juga dapat melarutkan flavonoid. Larutan ini dibagi menjadi 4 bagian yang

digunakan untuk blanko, uji bate-smith dan metclaft, uji wilstaterdan uji kromatografi lapis tipis

(KLT), yaitu IIIA, IIIB, IIIC, dan IIID.

Pada uji bate-smith dan metclaft larutan IIIB ditambahkan dengan 0,5 mL HCl pekat untuk

menghidrolisis dan memutus ikatan glikosoda. Hidrolisis ini untuk menghidrolisis

antosianin   menjadi aglikon antosianin, yaitu antosianidin. Tetapi  tidak ada perubahan warna

yang terjadi. Kemudian larutan tersebut dipanaskan diatas penangas air untuk mempercepat

terjadinya hidrolisis. Setelah itu, diamati perubahan warna yang terjadi.

Dari hasil praktikum ini didapatkan warna merah. Hal itu menunjukkan bahwa ekstrak D

mengandung leukoantosianin, dimana adanya leukoantosianin ditunjukkan dengan adanya warna

merah terang atau ungu.

Selanjutnya pada uji wilstater, larutan IIIC ditamabah 0,5 mL HCl pekat dan 4 potong

magnesium. Penambahan ini untuk reaksi reduksi menjadikan suatu flavonol, flavanon, flavonon

dan xanton. Penambahan asam akan menyebabkan perubahan warna ketika reduksi berlangsung.

Kemudian larutan tersebut diencerkan dengan air suling dan ditambah dengan butanol sehingga

terbentuk 2 lapisan antara larutan fase butanol yang ada pada bagian bawah. Diamati warna yang

terjadi diantara kedua cairan (pada tiap lapisan). Tetapi tidak terjadi perubahan warna dan dapat

dikatakan bahwa ekstrak D tidak mengandung flavonol, flavon atau flavonon.

Selanjutnya dilakukan uji KLT, dengan fase diam kiesel gel GF 254, fase gerak butanol-

asam asetat glasial-air ( 4 : 1 : 5 ) dengan penampak noda uap amoniak. Larutan IIID ditotolkan

pada lempeng sebanyak 4 μl atau sampai totolan berwarna, tetapi tidak sepekat warna ekstrak.

Kemudian lempeng dieluasi dalam chamber, ditunggu hingga garis batas pada lempeng.

Kemudian diangin – anginkan dan diuapkan diatas uap amoniak sampai terbentuk warna kuning

yang segera hilang (reversible).Tetapi pada percobaan yang telah dilakukan, tidak terdapat warna

kuning pada lempeng KLT. Sehingga didapatkan bahwa ekstrak D tidak mengandung flavonoid. 

Keganjilan pada beberapa uji ini adalah uji reaksi warna bate-smith dan metclaf

menunjukkan hasil positif dan pada uji wilstater dan uji KLT menunjukkan hasil yang negatif.

Hal ini dimungkinkan terjadi reaksi yang menyebabkan terjadinya positif palsu. Adanya

positif palsu ini mungkin disebabkan karena hidrolisis yang kurang sempurna atau reduksi

magnesium yang kurang, serta kurangnya pembentukan pigmen warna. Sehingga tidak dapat

memberikan warna yang sesuai pada uji wilstater. Dan pada uji KLT dimungkinkan masih ada

pengganggu sehingga tidak memunculkan hasil yang positif.

Identifikasi Senyawa Golongan Polifenol dan Tanin

Senyawa polifenol adalah suatu senyawa yang berasal dari tumbuhan, dimana salah satu

cirinya adalah mengandung cincin aromatik yang tersubstitusi oleh dua atau lebih gugus fenol.

Dua gugus fenol, hidrolisis dan terkondensasi terdiri dari tanin yang merupakan suatu zat yang

penting secara ekonomi sebagai agen untuk menghaluskan kulit dan juga penting untuk tujuan

kesehatan. Baru – baru ini ditemukan adanya fakta – fakta yang mendukung nilai potensialnya

sebagai sitotoksik dan atau sebagai agen antineoplastic.

Tanin dapat berfungsi sebagai astringent dan memiliki kemampuan untuk menyamak kulit.

Secara kimia, tanin adalah ester yang dapat dihidrolisis oleh pemanasan dengan larutan asam

sampai menghasilkan senyawa fenol, biasanya merupakan derivate atau turunan dari asam garlic

dan gula.

Untuk identifikasi senyawa golongan polifenol dan tanin dapat dilakukan dengan 2 cara

yaitu dengan cara reaksi warna dan juga melalui kromatografi lapis tipis.  

Pada identifikasi senyawa golongan polifenol dan tanin yang pertama dilakukan adalah

dengan mencampurkan ekstrak sebanyak 0,3 gram dengan 10 ml aquadest panas. Proses ini

dilakukan untuk mempercepat reaksi dengan adanya pemanasan. Kemudian larutan tersebut

diaduk dan dibiarkan sampai suhu kamar. Kemudian ditambahkan 4 tetes 10% NaCl, kemudian

diaduk dan disaring. Penambahan NaCl bertujuan untuk menghilangkan pengotor dan protein,

sehingga mencegah terjadinya negatif palsu pada uji warna. Filtrat kemudian dibagi menjadi tiga

bagian masing – masing ± 4 ml dan disebut sebagai larutan IVA, IVB, dan IVC.

Kemudian dilakukan uji ferriklorida, yaitu larutan IIIA digunakan sebagai blanko dan

larutan IIIC yang ditambahkan dengan beberapa tetes ferriklorida (FeCl3) ± 2-3 tetes maka akan

terjadi perubahan warna menjadi warna hijau kehitaman. Warna hijau kehitaman tersebut

merupakan endapan tanin yang dihasilkan oleh penambahan ferriklorida sehingga terjadi reaksi

kimia antara ferriklorida dan gugus fenol dari tanin. Oleh karena itu pada uji ferriklorida ini

menunjukkan hasil yang positif. Sehingga dapat dikatakan bahwa dalam ekstrak D mengandung

tanin.

Untuk mengetahui lebih jelas apakah ekstrak D mengandung tanin atau polifenol maka

dilanjutkan dengan uji gelatin. Larutan IVA digunakan sebagai blanko, kemudian larutan IVB

ditambahkan dengan sedikit larutan gelatin dan 5 ml larutan NaCl 10%. Jika terjadi endapan

putih menunjukkan adanya tanin. Hal tersebut terjadi karena gelatin maupun dengan reagen

garam-gelatin merupakan indikasi adanya tanin. Dasar untuk reaksi ini adalah terbentuknya

endapan antara protein / gelatin dan tanin, dimana reaksi menjadi lebih sensitif dengan

penambahan NaCl untuk meningkatkan “salting out” dari kompleks protein-tanin. Tapi pada

praktikum yang telah dilakukan, dengan uji gelatin ini tidak menunjukkan adanya endapan

berwarna putih. Sehingga dapat dinyatakan bahwa ekstrak D tidak mengandung polifenol.

Ekstrak D positif mengandung polifenol karena pada uji ferriklorida menunjukkan hasil

yang positif dan uji gelatin menunjukkan hasil yang negatif.

Uji selanjutnya adalah kromatografi lapis tipis. Sebagian larutan IVA digunakan untuk

pemeriksaan KLT. Larutan IVA ditotolkan pada lempeng KLT ± 4 μl. Pada uji dengan KLT ini

digunakan fase diam kiesel gel GF 254. Dan fase gerak berupa larutan kloroform-etil asetat ( 1 :

9 ) dan pereaksi penampak noda dengan pereaksi FeCl3.Melihat fase diam dan fase gerak yang

digunakan dalam identifikasi ini, fase KLT yang digunakan adalah normal phase, karena sifat

silika gel adalah polar, sedangkan fase geraknya bersifat non polar. Lempeng yang telah

ditotolkan larutan IVA dan standar dieluasi dengan fase gerak. Setelah eluasi selesai, lempeng

KLT dikeringkan dan diberi pereaksi FeCl. Pemberian penampak noda FeCl menimbulkan warna

hitam. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak D mengandung polifenol. Data ini juga diperkuat dari

uji ferriklorida yang menunjukkan hasil yang positif.

Identifikasi Senyawa Golongan Antrakinon

 Golongan kuinon alam terbesar terdiri atas antrakuinon. Beberapa antarkuinon merupakan

zat warna penting dan yang lainnya sebagai pencahar. Keluarga tumbuhan yang kaya akan

senyawa jenis ini adalah Rubiaceae, Rhamnaceae, Polygonaceae.

Untuk mengidentifikasi senyawa antrakuinon dilakukan uji borntrager. Awalnya ekstrak

ditambah air suling untuk melarutkan senyawa yang terkandung didalamnya lalu disaring untuk

memisahkan senyawa pengotornya. Filtrat yang diperoleh di ekstrak dengan toluena dan dikocok

kuat sehingga senyawa antrakinon akan terlarut dalam fase toluennya. Hasil ekstraksi dibagi

menjadi dua yaitu larutan VA dan VB. Larutan VA digunakan sebagai blanko. Dan larutan VB

ditambah amoniak dan dikocok. Warna merah menunjukkan adanya senyawa antrakinon. Tapi

dari hasil percobaan yang dilakukan pada uji borntrager ini tidak didapatkan larutan menjadi

berwarna merah. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak D tidak mengandung antrakinon.

Selanjutnya dilakukan uji modifikasi borntrager. Ekstrak sebanyak 0,3 gram ditambahkan

dengan 1 ml KOH 5N dan 1 ml H2SO4 encer. KOH berfungsi sebagai pemberi suasana basa

dan  berfungsi untuk menghidrolisis glikosida dan mengoksidasi antron atau antranol menjadi

antrakinon. Sedangkan H2SO4 berfungsi sebagai pemberi suasana asam. Sehingga didapatka

senyawa dengan suasana netral dengan adanya penmbahan H2SO4. Kemudian larutan tersebut

dipanaskan dan disaring. Filtrat kemudian ditambahkan asam asetat glasial 1 – 2 tetes, kemudian

di ekstraksi dengan 3 mL toluena. Ekstraksi bertujuan untuk menghidrolisis antrakuinon, yaitu

memisahkan antara glikon dan aglikonnya. Fase toluen diambil dan dibagi menjadi dua bagian,

yaitu larutan VIA dan VIB. Larutan VIA digunakan sebagai blanko. Larutan VIB ditambahkan

ammoniak. Ammoniak berfungsi untuk memberikan suasana basa. Warna merah atau merah

muda pada lapisan alkalis menunjukkan adanaya antrakinon. Tetapi pada hasil praktikum ini

tidak terjadi perubahan warna menjadi warna merah. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak d tidak

mengandung senyawa antrakinon.

 Selanjutnya dilakukan uji KLT. Fase diam yang digunakan adalah kiesel gel GF 254,

dengan fase gerak toluena-etil asetat-asam asetat ( 75 : 24 : 1 ) dan dengan penampak noda

larutan KOH 10% dalam metanol. Sampel yang ditotolkan merupakan larutan VA yang

digunakan sebagai blanko pada uji borntrager. Larutan ditotolkan sampai tampak warna, tetapi

tidak terlalu pekat, yang dalam hal ini ditotolkan ± 2 μl. Kemudian lempeng dieluasi dalam

chamber yang berisi eluen. Setelah selesai eluasi, lempeng diambil dan dikeringkan. Setelah

kering diberi penampak noda dengan disemprotkan larutan KOH 10% dalam metanol untuk

menampakkan noda, dan noda yang timbul berwarna kuning. Hal itu menunjukkan adanya

antrakuinon. Tapi dalam praktikum yang dilakukan tidak didapatkan noda berwarna kuning. Hal

ini menunjukkan bahwa ekstrak D tidak mengandung antakuinon.

IV.              HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1  HASIL PENGAMATAN

Hasil uji skrining fitokimia dari ekstrak daun dan batang seledri, daun jambu biji, serta buah cabe, bisa dilihat pada table 1 berikut ini:

Tabel 1. Hasil skrining fitokimia dari daun seledri, daun jambu biji, dan buah cabe.

SampelDaun Seledri Daun jambu biji Buah Cabe

Uji FitokimiaAlkaloid - - -Saponin + ++ -Tannin ++ +++ +Flavanoid (H2SO4) - - -Flavanoid(HCl+Mg)

- + -

Flavanoid (NaOH) +++ - +Triterpenoid - - -Steroid - - -

4.2  PEMBAHASAN

Skrining fitokimia merupakan cara sederhana untuk melakukan analisis kualitatif kandungan senyawa yang terdapat dalam tumbuhan. Pada praktikum ini skrining yang dilakukan terbatas pada uji alkaloid, uji flavanoid, saponin, tannin, triterpenoid dan steroid. Setiap golongan senyawa metabolit skunder yang terkandung dalam tumbuhan memiliki cirri dan karakter tersendiri. Dengan mempelajari sifat kimia dari masing-masing golongan metabolit sekunder tersebut maka muncullah suatu metode atau cara untuk mengetahui adanya senyawa tertentu dalam tumbuhan tersebut.            Dalam uji fitokimia kita menggunakan pereaksi yang berbeda untuk setiap golongan yang akan di uji. Demikian halnya dengan pelarut yang digunakan pada proses isolasi semestinya menggunakan pelarut yang berbeda. Penggunaan pelarut yang berbeda ini didasarkan pada sifat kepolaran dari senyawa yang akan di isolasi dan selanjutnya di skrining. Penggunaan pelarut yang tidak sesuai akan mempengaruhi hasil yang diperoleh. Boleh golongan senyawa tertentu tidak akan Nampak pada skrining yang kita lakukan, atau bahkan kita tida mendapatkan senyawa yang kita inginkan.

            Pada praktikum ini pelarut yang kita gunakan untuk mengisolasi senyawa yang ada dalam tumbuhan itu yaitu pelarut air. Yang mana air ini memiliki sifat yang sangat polar sehingga memungkinkan dapat mengambil semua senyawa yang terkandung dalam sampel kita meskipun ada beberapa senyawa yang tidak dapat terambil.            Proses ekstraksi dari semua sampel tumbuhan dilakukan secara seragam, baik ekstrak yang akan digunakan untuk uji flavanoid, saponin, tannin, tritrpenoid, dan steroid. Yaitu dengan menggunakan pelarut air dan dipanaskan selama 25 menit. Kemudian disaring sehingga bias kita pisahkan antara ekstrak dan residunya. Perbedaan proses ekstraksi dilakukan hanya pada ekstrak yang akan digunakan untuk uji alkaloid. Dalam hal ini, pelarutnya yang digunakan yaitu methanol.            Berdasarkan prosedur yang ada, waktu pemanasan juga berfariasi untuk beberapa ekstrak yang akan digunakan pada setiap ujinya. Secara teoritis lama waktu pemanasan akan berpengaruh pada kadar atau kandungan senyawa tertentu yang terdapat pada ekstrak yang kita lakukan. Boleh jadi senyawa yang kita inginkan mengalami perubahan dan modifikasi akibat pemansan yang terlalu lama, atau boleh jadi senyawa yang kita inginkan belum terekstrak karena proses pemanasa yang kurang lama.            Untuk uji alkaloid, dari ketiga herbal diatas menunjukan hasil yang negative. Pada uji ini, sampel yang telah dihaluskan diekstrak dengan menggunakan methanol dan dipanaskan selama 25 menit. Kemudian ditambahkan dengan reagen meyer dan setelah didiamkan selama sepuluh menit ternyata ketiga-tiganya tidak menunjukan adanya endapan. Hal ini menunjukan hasil negative untuk uji alkaloid pada ketiga herbal tersebut. Berdasar beberapa referensi yang saya dapatkan ketiga herbal tersebut memang tidak mengandung alkaloid untuk daerah lain.

Pengujian saponin dilakukan dengan cara mengocok ekstrak air yang didapat kemudian didiamkan selama sepuluh menit jika terdapat busa menunjukan uji positif untuk saponin. Jumlah kadar busa menunjukan kadar saponin yang ada pada ekstrak tersebut. Dari ketiga ekstrak tersebut yang menunjukan positif saponin adalah daun jambu biji dan daun seledri. Untuk daun seledri menurut dedewijaya (2007) mengandung saponin. Hal ini sesuai dengan hasil yang saya dapatkan yaitu positif satu untuk uji saponin. Sedangkan pada daun jambu biji, saya tidak menemukan literature yang mengatakan bahwa daun jambu biji mengandung saponin. Hal ini mungkin saja terjadi akibat pengaruh letak geografis Papua yang berbeda dengan daerah lain. Selain dari itu, kandungan saponin ini yang juga memberikan effect anti bakteri disamping taninnya. Itulah sebabnya daun jambu biji bias digunakan sebagai obat diare.

Ketiga herbal sampel ini menunjukan hasil yang positif untuk uji tannin. Warna yang ditunjukan adalah biru kehitaman. Urutan kadar tannin dari ketiga herbal dimulai dari positif 1,2 dan 3 adalah buah cabe, seledri, dan daun jambu biji. Kandungan tannin tertinggi terdapat pada daun jambu biji. Untuk daun jambu biji dari daerah lain juga mengandung tannin. Kandungan tannin ini yang menyebabkan daun jambu biji sangat aktif dalam mengobati diare. Kandungan tannin dari cabe, tidak ditemukan pada beberapa literatur yang lain.

Untuk uji flavanoid, pada praktikum ini dilakukan tiga uji yaitu menggunakan H2SO4, NaOH, dan HCl+Mg. penggunaan H2SO4 untuk uji flavanoid, akan memberikan warna merah jika ekstrak menagndung flavonoid. Sementara untuk NaOH kita akan mendapatkan warna kuning jika ekstrak mengandung falvonoid. Sedangkan untuk penggunaan HCl+Mg maka akan memberikan warna merah.

Penggunaan H2SO4  ketiga herbal tidak memberikan warna merah, hal ini berarti bahwa ketiga herbal tersebut tidak mengandung flavanoid. Sementara untuk NaOH, daun seledri menunjukan positif 3 sedangkan buah cabe menunjukan positif 1. Ketiga pereaksi memiliki

reaksi yang spesifik untuk jenis flavonoid tertentu. Jika ekstrak tidak menunjukan hasil positif pada salah satu pereaksi flavonoid, berarti jenis dari flavonoid yang terkandung dalam ekstrak   tersebut tidak memberi efek pada pereaksi tersebut.

Kandungan flavonoid pada herbal seledri asal manokwari menunjukan hasil yang sama untuk daerah asal lain. Demikian juga dengn ekstrak daun jambu biji juga sama mengandung flavonoid.

Pengujian troterpenoid dan steroid merupakan satu kesatuan uji, hanya saja efek yang diberikan berbeda untuk triterpenoid dan steroid. Triterpenoid akan memberikan warna merah atau ungu sementara untuk steroid akan memberikan warna hijau. Dari ketiga ektsrak herbal, tidak menunjukan hasil positif, baik untuk triterpenoid, maupun steroid.

Susi indriani mengatakan bahwa ekstrak daun jambu biji mengandung steroid. Tetapi hasil saya menunjukan hasil negative. Hal ini bisa terjadi karena pengaruh pelarut yang digunakan yaitu air sehingga kurang bisa melarutkan senyawa steroid yang merupakan turunan dari lipid.  Demikian halnya untuk ekstrak buah cabe, seharusnya dia mengandung steroid tetapi karena pelarutnya terlalu polar sehingga tidak dapat mengambil senyawa steroid yang bersifat non polar.Untuk kandungan triterpenoid, pada ketiga herbal tidak ditemukan literature yang mangatakan bahwa cabe, daun seledri, dan daun jambu biji mengandung  triterpenoid.