Mikroskopis Pemeriksaan Susu dan

Karakterisasi Bakteri Susu dan Sel

Mikroskop telah digunakan untuk mengamati dan menghitung bakteri dan sel-sel somatik dalam susu mentah sejak awal 1900-an. Hal ini telah terbukti menjadi alat yang berharga untuk industri susu. Prosedur susu smear digunakan saat ini diuraikan secara rinci dalam edisi terbaru dari Metode Standar untuk Pemeriksaan Produk Susu (yaitu, SMEDP, 17 ed) dan referensi lainnya. Untuk menghitung sel somatik, Cell Hitungan Direct mikroskopis somatik (DMSCC) dianggap sebagai metode referensi resmi yang digunakan untuk tujuan peraturan untuk jumlah susu langsung dan / atau kalibrasi instrumen elektronik yang disetujui. Prosedur peraturan untuk sel somatik diuraikan secara rinci dalam terbaru FDA 2400 Form. Dengan pengecualian dari jenis sel dihitung, prosedur bentuk 2400 dapat digunakan untuk bakteri juga. Sementara Direct mikroskopis rumpun Hitungan (DMCC) untuk bakteri tidak dianggap sebagai tes resmi untuk bakteri hitungan, itu digunakan di seluruh industri susu untuk memperkirakan koloni bakteri pembentuk unit (yaitu, "gumpalan") dalam sampel susu mentah yang diambil dari peternakan, truk tangki atau fasilitas penyimpanan tanaman. The DMCC yang paling banyak digunakan untuk layar pasokan susu mentah yang masuk (yaitu, tangki-truk) untuk menentukan apakah susu memiliki beban bakteri diterima atau hukum dan telah menjadi diterima di beberapa negara sebagai metode hukum untuk penolakan susu tidak dapat diterima. Selain menyediakan perkiraan jumlah bakteri dan sel-sel somatik, metode mikroskopis langsung juga telah digunakan sebagai pemecahan masalah panduan dalam upaya untuk mengidentifikasi jenis umum bakteri hadir dalam sampel susu. Mempersempit jenis dominan kontaminan dalam sampel kadang-kadang dapat memberikan memimpin untuk sumber potensial atau penyebab cacat mikroba. Panduan dengan foto-foto jenis bakteri yang tersedia pada awal tahun 1929 dengan sebuah pamflet dikembangkan oleh Dr Breed, salah satu pencetus metode DMC. Brosur lain yang terkenal di industri susu di timur laut adalah Vermont Ekstensi Buletin Susu Di bawah mikroskop, yang dikembangkan oleh Atherton dan Dodge pada tahun 1970 brosur ini, yang tidak lagi di media cetak, disajikan gambar jenis bakteri sering terlihat dalam susu yang dikaitkan dengan kekurangan potensial dalam metode produksi peternakan sapi perah, termasuk peralatan kotor, prosedur kebersihan sapi yang buruk, mastitis dan pendinginan miskin. Sementara panduan ini yang berguna, mereka yang paling efektif ketika jumlah dalam susu yang tinggi. Hal ini juga harus menunjukkan bahwa beberapa jenis bakteri dari sumber yang sangat berbeda dapat muncul sangat mirip dengan Pap mikroskopis langsung mengakibatkan pekerjaan menebak di terbaik. Dalam banyak kasus Namun, dimungkinkan untuk mempersempit potensi penyebab bakteri tinggi counts menggunakan mikroskop sebagai alat. Halaman-halaman berikut gambar mikroskopis hadir dan ringkasan beberapa tipe bakteri yang umumnya terkait dengan susu dan produk susu mentah. Sementara gambar organisme ini seperti yang muncul dengan DMCC disajikan, hati-hati harus digunakan ketika menggunakan mikroskop sendiri ketika mencoba untuk mengkarakterisasi jenis bakteri dan mikroorganisme lain yang terkait dengan cacat susu. Informasi lebih lanjut mengenai kelompok-kelompok umum organisme disertakan dengan foto-foto yang akan membantu pengguna mengidentifikasi lebih lanjut apa yang mereka lihat di bawah mikroskop dan mungkin di piring agar. Tes tambahan yang dapat digunakan dengan koloni dari plate agar, termasuk noda Gram, pewarnaan spora, uji katalase dan uji oksidase juga dijelaskan. Kelompok-kelompok yang dibahas meliputi:Coccus Bulat berpasangan dan rantai (Gram-positif, katalase negatif, kokus) ............ p. 2 Coccus Bulat dalam kelompok dan tetrad (Gram-positif, katalase positif, kokus) ......... p. 3 Bakteri berbentuk batang (Gram-negatif, katalase positif batang) .............................. .. p. 4 Batang kecil lainnya, tidak membentuk spora batang (yaitu Bacillus), lactobacillus) ................................. p. 5 Ragi, Molds, Prototheca ........................................................................ .. p. 5 Tes Auxiliary (Gram, pewarnaan spora, tes katalase & oksidase) ......................... p. 6 Disusun oleh: SC Murphy, Sr Ekstensi Asosiasi Departemen Ilmu Pangan, Universitas Cornell

Gambar. 1 rantai pendek kokus dari pendinginan miskin dan / atau peralatan kotor. Sumber yang mungkin Mastitis.

Gambar. 2 Pasang cocci dari pendinginan miskin dan / atau peralatan kotor. Sumber yang mungkin Mastitis.

Gambar. 3 rantai panjang S. agalactiae sebagai akibat dari infeksi mastitis, hubungan dengan sel-sel somatik.

Gambar. 4. kasus parah infeksi S. agalactiae dari sapi masing-masing menunjukkan hubungan erat dengan sel.Cocci BOLA; PASANG ATAU RANTAI Ketika sejumlah besar pasangan (diplococci) atau rantai pendek (streptokokus) bakteri bulat (cocci) yang diamati dalam susu mentah, kemungkinan penyebab termasuk pendinginan miskin dan / atau peralatan kotor. Streptococci Lingkungan yang menyebabkan mastitis juga dapat muncul sebagai rantai pendek atau pasangan sementara rantai yang sangat panjang yang khas dari Streptococcus agalactiae. Ketika mastitis adalah penyebabnya, sel-sel bakteri dapat diamati dalam hubungan dengan sel-sel somatik (leukosit). Dengan mastitis dan pendinginan miskin, noda susu mungkin muncul sebagai sebagian besar salah satu jenis bakteri, sementara jumlah tinggi dari peralatan yang kotor akan lebih mungkin mengandung campuran jenis bakteri (termasuk batang, kokus dalam kelompok). Informasi Teknis: Gram-positif, kokus, 0,5-1,2 mikron dalam diameter Terjadi pada pasangan atau rantai dari berbagai panjang Katalase negatif, oksidase biasanya negatif Koloni pada SPC agar biasanya putih, kecil, bawah permukaan Beberapa strain bertahan pasteurisasi, sebagian besar tidak Beberapa strain dapat tumbuh perlahan-lahan di bawah pendinginStreptococcus, Lactococcus dan Enterococcus spesies yang paling umum Gram-positif, kokus katalase-negatif yang terjadi pada susu. Sel umumnya terlihat berpasangan (diplokokus) atau rantai dari berbagai panjang. Mereka mudah dikenali dalam apusan susu; meskipun membedakan antara tipe tertentu mungkin sulit. Lactococcus (laktat streptokokus) yang terlibat dalam fermentasi susu (misalnya, keju) serta dalam pembusukan produk susu. Mereka umum di alam dan lingkungan susu dan sering dikaitkan dengan bahan tanaman termasuk feed dan bahan tempat tidur. Mereka juga dapat berkembang di tanah susu peralatan buruk dibersihkan. Organisme ini tidak tumbuh atau tumbuh lambat, di bawah pendingin, meskipun mereka tumbuh sangat baik dalam susu pada suhu yang lebih tinggi. Pendinginan yang buruk, terutama ketika suhu melebihi 50-60 F, sering menyebabkan proliferasi organisme ini, terlihat pada apusan susu sebagai pasangan dan / atau rantai kokus. Organisme ini mungkin bertanggung jawab untuk "asam" (keasaman tinggi) atau "mabuk" cacat dalam susu. Enterococcus (streptococci kotoran) sering dikaitkan dengan tinja, meskipun mereka bertahan dengan baik di lingkungan lain. Mereka tampak mirip dengan Lactococcus. Mereka mungkin berhubungan dengan pendinginan miskin, peralatan kotor dan dalam kasus yang jarang mastitis.Strain Streptococcus dianggap sebagai penyebab umum mastitis termasuk strain menular (S. agalactiae), menyebar dari sapi ke sapi, dan strain lingkungan (S. uberis, S. dysgalactiae) dikontrak dari lingkungan (misalnya, tempat tidur). S. agalactiae sering muncul dalam rantai panjang, yang mungkin atau tidak mungkin, akan terlihat terkait dengan sel-sel somatik. Lainnya streptococci mastitis dapat dilihat sebagai pasangan atau rantai dari berbagai panjang menyerupai organisme di atas dua angka (1 & 2).

Gambar. 5. Micrococcus dalam pembentukan klaster yang terkait dengan tanah yang terus-menerus pada peralatan susu.

Gambar. 6 Micrococcus dalam pembentukan tetrad yang terkait dengan tanah yang terus-menerus pada peralatan susu.

Gambar. 7 Staphylococcus aureus yang terkait dengan sel-sel somatik dalam susu dari sapi yang terinfeksi.

Gambar. 8 Susu smear paket tetrad bakteri pembentuk terkait dengan mastitis.Cocci BOLA; KELOMPOK, PASANG ATAU tetrad Kokus dalam kelompok (stafilokokus) atau 2 x 2 pengaturan (tetrad) yang paling sering dikaitkan dengan gigih miskin pembersihan (misalnya, batu susu, film) atau dalam beberapa kasus sapi mastitic. Organisme ini juga dapat dilihat sebagai sel tunggal atau berpasangan, yang dapat membuat sulit untuk membedakan mereka dari kelompok streptococci, meskipun sel mungkin lebih besar. Secara umum, mereka jarang diamati dalam susu mentah sebagai pencemar tunggal, atau dalam jumlah yang tinggi, kecuali mungkin ketika seekor sapi dengan infeksi Staphylococcus menumpahkan sejumlah besar dengan susu nya. Bakteri yang paling umum dalam kelompok ini termasuk strain Micrococcus dan Staphylococcus (Staph.). Informasi Teknis - Micrococcus: Gram-positif cocci, diameter 0,5-2,0 mikron Terjadi sebagai cluster, tetrad atau pasangan Katalase positif, oksidase positif Koloni pada SPC biasanya buram, putih, kuning, orange Beberapa strain bertahan pasteurisasi Beberapa strain dapat tumbuh perlahan-lahan di bawah pendingin (jarang)Micrococcus spp. yang umum dalam susu sebagai bagian dari flora alami sapi, meskipun mereka umumnya hadir dalam jumlah yang rendah. Peningkatan jumlah beberapa strain telah dikaitkan dengan batu susu, retak atau bagian karet tua dan daerah lain terus-menerus membersihkan miskin. Strain ini sering thermoduric (yaitu, bertahan pasteurisasi) dan umumnya tidak dianggap flora alami sapi. Mereka mungkin ada dalam lingkungan susu, termasuk tempat tidur. Micrococcus spp. jarang mencapai angka yang signifikan dalam susu mentah. Namun, angka mencapai tingkat yang cukup untuk mempengaruhi jumlah segar susu pasteurisasi, meskipun jarang di atas batas-batas hukum. Beberapa strain dapat tumbuh lambat dalam susu didinginkan. Informasi Teknis - Staphylococcus: Gram-positif, kokus, diameter 0,5-2,0 mikron Terjadi sebagai tunggal sel, pasangan, kelompok, tetrad Katalase positif, oksidase negatif Koloni pada SPC agar biasanya buram, abu-abu putih Umumnya tidak bertahan pasteurisasi Jangan tumbuh di bawah pendinginStaphylococcus spp. juga sering ditemukan dalam susu mentah sebagai bagian dari flora alami sapi, meskipun secara umum dalam jumlah yang rendah. Alunan Staph. aureus berhubungan dengan mastitis menular dan dapat ditumpahkan ke dalam susu, meskipun pengaruh pada jumlah tangki massal tidak biasa seperti dengan spesies streptokokus mastitic. Staph lain. spesies juga menyebabkan mastitis. Mereka mungkin ada dalam lingkungan susu, termasuk tempat tidur, meskipun sebagian besar strain terkait dengan kulit sapi dan personil mungkin susu. Potensi tumbuh pada peralatan kotor ada, tapi ini belum terdokumentasi dengan baik. Kebanyakan strain tidak dianggap thermoduric atau psychrotrophic.

Gambar. 9. Pseudomonas regangan dari susu mentah yang disimpan di pendingin marjinal untuk jangka waktu yang panjang.

Gambar. 10 bakteri Coliform dari susu mentah, jenis virus ini adalah batang kecil. Batang Coliform akan bervariasi dalam ukuran.

Gambar. 11. Coliform bakteri dari sapi mastitic dengan SCC tinggi dan tanda-tanda klinis.

Gambar. 12 Gram-noda Pseudomonas spp. diisolasi dari susu mentah. Sel berwarna merah dengan Gram-noda.SHORT - BATANG MEDIUM; SINGLES, PASANG Rod bakteri berbentuk (basil) yang umum di susu mentah, meskipun sering sulit untuk membedakan antara jenis. Mereka jenis yang paling sering dikaitkan dengan jumlah tinggi dalam susu mentah adalah batang terutama Gram-negatif dan mencakup psychrotrophs (misalnya, Pseudomonas) dan bakteri coliform. Dalam smear susu, ini muncul sebagai pendek batang menengah, tumbuh secara tunggal atau berpasangan. Beberapa strain menunjukkan bi-polar pewarnaan (noda gelap di ujung). Organisme ini dalam susu mentah yang paling sering dikaitkan dengan kontaminasi akibat pembersihan dan sanitasi prosedur miskin serta sumber lingkungan dan miskin kebersihan pra-pemerahan. Pendinginan Marginal dapat menyebabkan strain psychrotrophic meningkat.

Bakteri Gram-negatif tersebar luas di alam. Spp Pseudomonas. sering dikaitkan dengan pasokan air yang tidak diobati, meskipun mereka yang umum di lingkungan dan akan tumbuh dengan baik pada peralatan pemerahan kotor. Bakteri coliform dan bakteri Gram-negatif pada umumnya, telah ditemukan dalam jumlah tinggi dalam bahan tempat tidur. Miskin pra-milking prosedur kebersihan mungkin menjadi sumber organisme ini meskipun jumlah tinggi langsung dari puting kotor akan langka. Sementara coliform sering dikaitkan dengan pupuk kandang, beberapa strain berkembang di lingkungan dan peralatan pada buruk dibersihkan seperti halnya Gram-negatif lainnya. Hitungan di susu mentah yang dihasilkan dari peralatan kotor dan / atau buruk dibersihkan mungkin rendah. Namun, Pseudomonas strain yang mencemari susu dari sumber ini yang paling sering bertanggung jawab untuk tinggi Awal Inkubasi (PI) jumlah. Diperpanjang pendinginan memilih untuk bakteri psychrotrophic, yang sering mendominasi susu mentah di pabrik. Bakteri coliform tertentu dan batang Gram-negatif lainnya adalah penyebab umum mastitis dan dapat ditumpahkan ke dalam susu dari sapi yang terinfeksi, meskipun hal ini tidak biasa seperti dengan streptokokus mastitic. Strain tertentu dari Pseudomonas dapat menyebabkan mastitis, tetapi ini relatif jarang dan pengaruh shedding ke dalam susu belum terdokumentasi dengan baik.Informasi Teknis - Pseudomonas, bakteri terkait: Gram-negatif batang, 0,5-1,0 oleh 1,5-5,0 mikron Terjadi secara tunggal atau berpasangan, beberapa strain noda bi-polar Katalase positif, oksidase-positif Koloni pada SPC biasanya tembus, berbagai pigmen - Besar koloni permukaan melingkar yang umum - Beberapa strain menghasilkan pigmen diffusible (hijau) Jangan bertahan pasteurisasi Paling psychrotroph umum Informasi Teknis - Coliform, bakteri terkait: Gram-negatif batang, 0,5-1,0 oleh 1,5-5,0 mikron Terjadi secara tunggal atau berpasangan, beberapa strain noda bi-polar Katalase positif, oksidase negatif Koloni pada SPC biasanya tembus, sering berlendir - Koloni permukaan besar yang umum Koloni pada media Coliform (Vrba) merah gelap Jangan bertahan pasteurisasi Beberapa strain psychrotrophic

Gambar 13. Susu smear Gram-positif Bacillus regangan menunjukkan kemiripan dengan Gram-negatif batang.

Gambar. 14. Spore Stain Gram-positif Bacillus regangan menunjukkan pertumbuhan vegetatif dan spora.

Gambar. 15. Susu smear tunas ragi (atas) dan cetakan filamen (bawah) dari tanah susu umur.

Gambar 16 Gram-noda Prototheca diisolasi dari susu sapi dengan mastitis.GRAM POSITIF-BATANG; BERBAGAI PANJANG DAN UKURAN Bakteri Gram-positif berbentuk batang umumnya tidak terjadi pada angka tinggi dalam susu mentah meskipun beberapa strain mungkin kontaminan yang signifikan. Bacillus, Paenibacillus, Microbacterium dan Lactobacillus adalah yang paling umum. Organisme ini umum di lingkungan susu, meskipun mereka umumnya tidak tumbuh secepat dalam susu sebagai kelompok dibahas sebelumnya. Bacillus spp dan Paenibacillus. ditemukan lebih sering di kedua susu mentah dan pasteurisasi. Ini adalah spora pembentuk, yang sebagian besar bertahan pasteurisasi. Beberapa strain batang Gram-positif psychrotrophic, terutama pembentuk spora, meskipun mereka tidak tumbuh secepat Gram-negatif psychrotrophs yang tidak bertahan pasteurisasi. Namun, mereka memiliki potensi untuk menjadi organisme pembusukan signifikan ketika kontaminasi pasca-pasteurisasi dicegah. Ini cenderung menjadi organisme hardy yang lebih mungkin untuk bertahan hidup selama prosedur pembersihan dan sanitasi dan kondisi ekstrim lainnya (misalnya, pengeringan). Informasi Teknis - Rods Gram-positif:Gram-positif batang, berbagai lebar, panjang Terjadi secara tunggal, berpasangan atau sebagai end-to-end rantai Batang dari beberapa strain memiliki tumpul atau kuadrat berakhir Katalase, oksidase, morfologi koloni bervariasi Beberapa strain menghasilkan spora (yaitu, Bacillus, Paenibacillus) Beberapa strain bertahan pasteurisasi Beberapa strain psychrotrophic RAGI DAN CETAKAN Ragi dan jamur umumnya tidak terjadi dalam jumlah besar dalam susu mentah meskipun jika tanah susu tetap dalam wilayah uncleanable dari sistem pemerahan, organisme ini, terutama ragi, dapat menjadi signifikan. Beberapa ragi mungkin terlibat dalam mastitis meskipun ini relatif jarang terjadi. Ragi, yang jauh lebih besar dari kebanyakan bakteri, yang bulat untuk oval dan umumnya menunjukkan reproduksi pemula. Cetakan yang paling sering muncul sebagai filamen besar. Kedua ragi dan jamur akan tumbuh pada SPC agar meskipun tingkat pertumbuhan umumnya lebih lambat untuk sebagian besar cetakan. Kedua jenis organisme yang umum di alam.Prototheca Prototheca spp. adalah achlorophyllic (tidak mengandung klorofil) alga (tumbuhan mikroskopik) yang dapat menyebabkan mastitis pada hewan susu. Sumber primer meliputi tanah, tanaman, air (esp. Stagnan) dan kotoran. Organisme ini muncul sel bola sebagai besar yang mungkin mudah keliru untuk sel somatik. Mereka juga tumbuh di SPC agar dan telah bertanggung jawab untuk jumlah tinggi dalam susu.