ISOLASI, IDENTIFIKASI, DAN UJI BIOAKTIVITAS METABOLIT SEKUNDER

EKSTRAK n-HEKSAN SPONS Petrosia alfiani ASAL SPERMONDE ARCHIPELAGO

Pembimbing Utama : Prof. Dr. H. Hanapi Usman, MSPembimbing Pertama : Dr. Hj. Hasnah Natsir, M.Si

Seminar Proposal Penelitian

OLEH

Muhammad Syarif Aqa’idH311 08 855

Latar Belakang

Aspek filosofi Kmia Organik Bahan Alam

Bahan Alam Darat Bahan Alam Laut

SDA Laut

Keanekaragaman Biota Laut

Karang Spons Alga

Genus Petrosia

Petrosia alfiani

Rumusan MasalahSenyawa metabolit sekunder apa yang terdapat pada ekstrak n-heksan spons P. alfiani?

Bagaimana struktur molekul metabolit sekunder yang terdapat pada ekstrak n-heksan spons P. alfiani?

Bagaimana bioaktivitas senyawa metabolit sekunder hasil isolasi terhadap bakteri Staphylococus aureus dan jamur Candida albicans?

Maksud Penelitian

Penelitian ini dimaksudkan untuk mengetahui kandungan senyawa

metabolit sekunder yang terdapat pada ekstrak n-heksan spons P.

alfiani dan bioaktivitasnya.

Tujuan PenelitianMengisolasi senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam ekstrak n-heksan spons P. alfiani.

Menguji bioaktivitas senyawa metabolit sekunder hasil isolasi.

Manfaat Penelitian

1 •Memberikan informasi tentang jenis dan potensi senyawa metabolit sekunder spons P. alfiani dan eksplorasi potensi ekologi kimia bahan alam laut yang memiliki prospek yang menjanjikan di Indonesia sebagai negara bahari.

2 •Kemungkinan ditemukannya senyawa baru dalam P. alfiani mengingat spesies ini tergolong baru dan Dasar bagi pengembangan penelitian-penelitian lanjutan tentang spons P. alfiani.

3 •Memberikan pengalaman praktis maupun teoritis bagi peneliti.

Tinjauan Pustaka

Fitokimia Genus Petrosia

Kandungan Alkaloid

Kandungan Steroid

Kandungan Turunan Asam

Fenilasetat

Kandungan Alkaloid

Spongouridine Manzamine A

N

NH

N

H

N

OH

8-hydroxymanzamine A

N

NH

N

H

N

OH

OH

Manzamine F

N

NH

N

H

N

OH

OH

O 1-deoxyircinol A (baru)

N

H

N

OH

N

(CH2)5

HO

(CH2)5

N

H

O

petrosin

N

(CH2)5

HO

(CH2)5

N

H

O

Petrosin A

xestomanzamine A

N

NH

O

N

N

Nigricinol (baru)

N

NH

NH

O

NH2

N

(CH2)5

HO

(CH2)5

N

H

O

petrosin B xestospongin A

N

O

(CH3)6H(CH2)6

N

O

H

renierone R=OMe O-demethylrenierone R=OH

cribrostatin (baru)

N

O

O

O

NH

HO3S

O

24ξ-ethyl-cholesta-5-en-3β-ol 24ξ-ethyl-cholesta-8(9)-en-3β-ol

5α,8α-epidioxy-24ξ-ethyl-cholesta-6-en-3β-ol

Lembehsterols A Lembehsterols B

Kandungan Steroid

Phenylacetic acid p-hydroxyphenylacetic acid p-hydroxyphenylacetic acid methylester

p-hydroxyphenylacetic acid ethylester p-hydroxyphenylacetic acid butylester (baru)

Kandungan Turunan Asam Fenilasetat

Metode Penelitian

Bahan-bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah spons P. alfiani, pelarut yang berkualitas teknis yang telah didestilasi seperti metanol (CH3OH), kloroform (CHCl3), etil asetat (EtOAc), dan n-heksana (C6H14). Pelarut metanol (CH3OH) dan n-heksana (C6H14) yang berkualitas (p.a) digunakan pada proses rekristalisasi. Adsorben kolom kromatografi seperti silika gel 60 GF254 (Merck), G 60 (230-400 Mesh), 60 PF254 (Merck), kieselgel 60 F254 0,25 mm (Merck), plat KLT, dan FeCl3 5 % sebagai penampak noda. Dimetil sulfoksida (DMSO), bakteri E. coli, Staphylcocus aureus, jamur Candida albicans, serta pereaksi Liberman-Burchard.

Bahan

Alat-alat yang digunakan adalah alat-alat gelas yang lazim digunakan dalam laboratorium, alat destilasi, corong Buchner, chamber untuk wadah KLT, pipa kapiler untuk penotol, alat kolom kromatografi (KKV, KKG, dan KKT) untuk fraksinasi ekstrak dari proses maserasi, beberapa alat instrumentasi seperti oven, lampu UV 254-365 nm, neraca analitik, evaporator, alat penentuan titik leleh, spektroskopi FTIR, dan mikroskop.

Alat

Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini mulai dilakukan pada bulan Mei 2011 sampai bulan April 2012. Proses sampling dilakukan di Pulau Barrang Lompo sedangkan identifikasi sampel, preparasi sampel, isolasi dan pemurnian dilakukan di Laboratorium Kimia Organik FMIPA UNHAS. Uji bioaktivitas dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran UNHAS dan analisis spektroskopi FT-IR dilakukan di Laboratorium Kimia Terpadu Jurusan Kimia FMIPA UNHAS.

Kawasan Perairan Spermonde Archipelago

Observasi lapangan

Metode Makroskopis dan Mikroskopis

Serbuk kering sampel

Identifikasi spesimen

Pengumpulan, pengolahan sampel

Maserat metanol

Ekstrak etilasetatEkstrak n-heksan

Isolat-isolat

Isolat murni

Isolat-isolat

Isolat murni

Isolat antimikroba

Rumus struktur molekul isolat

Ekstrak kloroform

o Maserasi

o Ekstraksi Cair-Cair

o Penetapan pelarut dgn KLTo Isolasi dgn teknik KKV

Diagram Alir Penelitian

2,5 Kg serbuk spons P. alfiani

Maserat MeOH (148,5 g)

- Dimaserasi dgn MeOH selama 1x 24 Jam berulang kali- Maserat MeOH dipekatkan dgn evaporator rotary

Ekstrak n-heksan Ekstrak CHCl3

- Diuji bioaktivitas-Di partisi cair-cair dengan n-heksan, kloroform, dan etil asetat-Masing-masing ekstrak diuapkan pelarutnya dgn evaporator rotary

Ekstrak etil asetat

Uji Bioaktivitas

Ekstrak total n-heksan(7,5314 g)

FA(0,4807 g)

FB(2,3416 g)

FC(1,3715 g)

FD(1,8077 g)

FE(0,7225 g)

FF(0,6453 g)

FG(0,0591 g)

FH(0,7063 g)

- Dianalisis KLT - Fraksinasi dengan KKV dgn eluen campuran n-Hx dan EtOAc (99,5 %:0,5 %) dengan peningkatan kepolaran

38 Fraksi

- Monitoring dgn KLT (spot dgn Rf sama digabung)

1,3715 g FC(Crude kristal berwarna kuning)

-Rekristalisasi dgn metanol panas-Disaring

Residu(kristal jarum)

Filtrat

Kristal murni

-Uji kemurnian dgn tiga sistem eluen-Uji titik leleh

-Uji golongan-Uji Bioaktivitas-Analisis FTIR

Senyawa-1

Bagan Isolasi Senyawa 1

0,6453 g FF

-Difraksinasi dgn teknik KKG-Dielusi dengan eluen campuran n-heksan:EtOac (8:2)

37 Fraksi(FF1-37)

FF12-16

(padatan kuning)FF36

(crude kristal putih kekuningan)

-Rekristalisasi dengan n-heksan panas-Disaring

kristal Filtrat

Kristal murni

Senyawa-2

-Uji golongan-Uji bioaktivitas-Analisis FTIR

-Uji kemurnian dgn tigasistem eluen

-Uji titik leleh

Kristal murni

Senyawa-3

-Uji golongan-Uji bioaktivitas-Analisis FTIR

-Uji kemurnian dgn tigasistem eluen

-Uji titik leleh

Bagan Isolasi Senyawa 2 dan 3

THANKS FOR YOUR ATTENTION

37%

21%18%

9%

6% 6%

2% 1%

Data (Jha dan zi-Rong, 2004 dalam Rasyid, 2009)

sponscoelenterata mikroorganismealgaechinodermatatunikatamoluskabryozoa

Gambar Petrosia alfiani

Domain : EukaryotaKingdom : AnimaliaSubkingdom : Radiata Infrakingdom : Spongiaria Phylum : PoriferaSubphylum : Cellularia Class : Demospongiae Subclass : Ceractinomorpha Order : Haplosclerida Suborder : Petrosina Family : Petrosidae Genus : PetrosiaSpecific name : alfiani Scientific name : Petrosia alfiani

Taksonomi