PEMERIKSAAN HITUNG JUMLAH TROMBOSIT METODE MANUAL

Hari/tanggal : Rabu, 19 & 26 November 2014

Praktikum : VIII dan IX

I. TUJUAN

a. Tujuan Instruksional Umum

1. Untuk mengetahui jumlah sel trombosit dalam darah.

2. Untuk mengetahui metode perhitungan jumlah sel trombosit dalam darah.

b. Tujuan Instruksional Khusus

1. Untuk mengetahui dan memahami perhitungan jumlah sel trombosit dalam darah

dengan metode kamar hitung Improved Neubauer dibawah mikroskop.

2. Untuk dapat melakukan perhitungan jumlah sel trombosit dalam darah dengan

metode kamar hitung Improved Neubauer dibawah mikroskop.

3. Untuk dapat menginterpretasikan hasil perhitungan jumlah sel trombosit dalam

darah.

II. METODE

Metode yang digunakan dalam praktikum menghitung jumlah sel trombosit adalah

dengan metode manual yaitu dengan kamar hitung Improved Neubauer.

III. PRINSIP

Darah diencerkan dengan larutan rees ecker dengan jumlah pengenceran 200x, serta

diwarnai dengan larutan tertentu, lalu sel darah dihitung dalam kamar hitung Improved

Neubauer dibawah mikroskop.

IV. DASAR TEORI

1. Definisi Darah

Darah merupakan gabungan dari cairan, sel-sel dan partikel yang menyerupai

sel, yang mengalir dalam arteri, kapiler dan vena yang mengirimkan oksigen dan zat-

zat gizi ke jaringan dan membawa karbondioksida dan hasil limbah lainnya. Darah

terdiri dari elemen-elemen berbentuk dan plasma dalam jumlah setara. Elemen-

elemen berbentuk tersebut adalah sel darah merah (eritrosit),sel darah putih (leukosit),

dan keping darah (trombosit). ( Elizabeth J.Corwin, 2013).

2. Pengertian Trombosit

Trombosit adalah fragmen atau kepingan-kepingan tidak berinti dari

sitoplasma megakariosit yang berukuran 1-4 mikron dan beredar dalam sirkulasi

darah selama 10 hari. Gambaran mikroskopik dengan pewarnaan Wright – Giemsa,

trombosit tampak sebagai sel kecil, tak berinti, bulat dengan sitoplasma berwarna

biru-keabu-abuan pucat yang berisi granula merah-ungu yang tersebar merata.

Trombosit memiliki peran dalam sistem hemostasis, suatu mekanisme faal

tubuh untuk melindungi diri terhadap kemungkinan perdarahan atau kehilangan darah.

Fungsi utama trombosit adalah melindungi pembuluh darah terhadap kerusakan

endotel akibat trauma-trauma kecil yang terjadi sehari-hari dan mengawali

penyembuhan luka pada dinding pembuluh darah. Mereka membentuk sumbatan

dengan jalan adhesi (perlekatan trombosit pada jaringan sub-endotel pada pembuluh

darah yang luka) dan agregasi (perlekatan antar sel trombosit).

3. Pemeriksaan Trombosit

Tujuan pemeriksaan hitung trombosit :

·      Evaluasi produksi trombosit.

·      Mengetahui efek kemoterapi atau radiasi terhadap produksi trombosit.

·      Diagnosis dan monitor trombositosis atau trombositopenia.

·      Konfirmasi jumlah trombosit cara langsung dengan Rees-Ecker.

Bahan pemeriksaan yang dianjurkan untuk pemeriksaan hitung trombosit

adalah darah EDTA. Antikoagulan ini mencegah pembekuan darah dengan cara

mengikat kalsium dan juga dapat menghambat agregasi trombosit. Hitung trombosit

dapat dilakukan dengan metode :

a. Metode secara langsung

Menggunakan kamar hitung yaitu dengan mikroskop fase kontras dan

mikroskop cahaya dan juga otomatis. Secara mikroskopik trombosit tampak

refraktil dan mengkilat berwarna biru muda/lila lebih kecil dari eritrosit serta

berbentuk bulat, lonjong atau koma tersebar atau bergerombol.

Pemeriksaan hitung jumlah trombosit cara langsung dapat menggunakan

larutan pengencer Rees ecker dan Amonium oksalat 1%. Larutan pengencer Rees

ecker memiliki kelebihan dibandingan dengan Amonium oksalat 1%, yaitu :

- Eritrosit tidak dilisiskan, maka disamping dapat dilihat trombosit juga

dapat dilihat sel eritrosit

- Trombosit lebih jelas terlihat karena kandungan BCB di dalam reagen

Rees ecker yang dapat mewarnai trombosit sehingga jelas

Namun karena harga Rees ecker yang lebih mahal, beberapa laboratorium masih

menggunakan amonium oksalat sebagai larutan pengencer dengan alasan lebih

ekonomis. Kesalahannya dapat terjadi karena faktor teknis atau pengenceran yang

tidak akurat, adalah pencampuran yang belum merata dan adanya perlekatan

trombosit atau agregasi.

Penghitung sel otomatis mampu mengukur secara langsung hitung

trombosit selain hitung lekosit dan hitung eritrosit. Sebagian besar alat

menghitung trombosit dan eritrosit bersama-sama, namun keduanya dibedakan

berdasarkan ukuran. Partikel yang lebih kecil dihitung sebagai trombosit dan

partikel yang lebih besar dihitung sebagai eritrosit. Dengan alat ini, penghitungan

dapat dilakukan terhadap lebih banyak trombosit.

Sumber kesalahan :

- Jumlah lekosit lebih dari 100.000/mm3

- Fragmentasi eritrosit yang berat

- Cairan pengencer berisi partikel-partikel eksogen

- Sampel sudah terlalu lama didiamkan sewaktu pemrosesan atau apabila

trombosit saling melekat.

b. Hitung trombosit secara tidak langsung

Cara ini menggunakan sediaan apus darah yang diwarnai dengan pewarna

Wright, Giemsa atau May Grunwald. Sel trombosit dihitung pada bagian sediaan

dimana eritrosit tersebar secara merata dan tidak saling tumpang tindih.

Metode hitung trombosit tak langsung adalah metode Fonio yaitu jumlah

trombosit dibandingkan dengan jumlah eritrosit, sedangkan jumlah eritrosit itulah

yang sebenarnya dihitung. Cara ini sekarang tidak digunakan lagi karena tidak

praktis, dimana selain menghitung jumlah trombosit, juga harus dilakukan hitung

eritrosit.

Penghitungan trombosit secara tidak langsung yang menggunakan sediaan

apus dilakukan dalam 10 lp x 2000 atau 20 lp x 1000 memiliki sensitifitas dan

spesifisitas yang baik untuk populasi trombosit normal dan tinggi (trombositosis).

Menghitung jumlah trombosit pada sediaan apus darah yang telah diwarnai. Cara

ini cukup sederhana, mudah dikerjakan, murah dan praktis.

Keunggulan : dapat mengungkapkan ukuran dan morfologi trombosit, tetapi

Kekurangan : perlekatan ke kaca obyek atau distribusi yang tidak merata di

dalam apusan dapat menyebabkan perbedaan yang mencolok dalam

perhitungan konsentrasi trombosit.

Hitung trombosit adekuat apabila apusan mengandung satu trombosit per dua

puluh eritrosit, atau dua sampai tiga trombosit per lapang pandang besar (minyak

imersi). Pemeriksaan apusan harus selalu dilakukan apabila hitung trombosit

rendah karena penggumpalan trombosit dapat menyebabkan hitung trombosit

rendah palsu.

Uji laboratorium untuk menilai kualitas trombosit adalah agregasi

trombosit, retensi trombosit, retraksi bekuan, dan antibody anti trombosit.

Sedangkan uji laboratorium untuk menilai kuantitas trombosit adalah masa

perdarahan (bleeding time) dan hitung trombosit.

4. Masalah Klinis Penurunan dan Peningkatan Trombosit

Penurunan :

ITP, myeloma multiple, kanker (tulang, saluran gastrointestinal, otak), leukemia

(limfositik, mielositik, monositik), anemia aplastik, penyakit hati (sirosis, hepatitis

aktif kronis), SLE, DIC, eklampsia, penyakit ginjal, demam rematik akut.

Pengaruh obat : antibiotik (kloromisetin, streptomisin), sulfonamide, aspirin

(salisilat), quinidin, quinine, asetazolamid (Diamox), amidopirin, diuretik tiazid,

meprobamat (Equanil), fenilbutazon (Butazolidin), tolbutamid (Orinase), injeksi

vaksin, agen kemoterapeutik.

Peningkatan :

Polisitemia vera, trauma (fraktur, pembedahan), paskasplenektomi, karsinoma

metastatic, embolisme pulmonary, dataran tinggi, tuberculosis, retikulositosis,

latihan fisik berat. Pengaruh obat : epinefrin (adrenalin)

Trombositopenia ringan : 100.000 – 150.000 per mm3 darah.

Perdarahan spontan : < 40.000 per mm3 darah

Perdarahan setelah trauma : > 50.000 per mm3 darah

Perdarahan berat : < 10.000 per mm3 darah

Dilihat dari segi klinik, penurunan jumlah trombosit lebih memerlukan perhatian

daripada kenaikannya (trombositosis) karena adanya resiko perdarahan.

V. ALAT DAN BAHAN

a. Alat

Haemocytometer dengan pipet thoma eritrosit

Mikroskop

Syringe

Tabung reaksi

b. Bahan

Darah EDTA

Tissue

Aquadest

c. Reagen

Larutan Ress – Ecker, komposisi terdiri dari :

Sodium citrate

Brilliant Crecyl Blue

Aquadest

VI. CARA KERJA

1. Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan

2. Kamar hitung improved neubauer disiapkan dibawah mikroskop dan ditutup dengan

kaca penutup.

3. Dihisap sampel darah dengan pipet thoma eritrosit sampai tanda 0.5 , kemudian

disusul dengan larutan pengencer sampai tanda 101

4. Dikocok pipet pengencer (dengan membentuk angka 8)

5. 3-4 tetes pertama dibuang kemudian kamar hitung diisi dengan tetesan berikutnya

secukupnya

6. Dibiarkan beberapa menit agar sel mengendap

7. Dilakukan penghitungan sel dalam kamar hitung 4 kotak W

Jumlah trombosit = 500 N/cmm

VII. NILAI RUJUKAN

Nilai Rujukan Normal Jumlah Trombosit

Laki-Laki Dewasa 150.000 – 440.000 sel/mm3

Wanita Dewasa 150.000 – 400.000 sel/mm3

VIII. HASIL PENGAMATAN

a. Data Pasien

Nama : Prandingga

Usia : 19 th

Jenis Kelamin : Laki - laki

Jenis Pemeriksaan : Hitung Jumla Trombosit

b. Pengamatan Dibawah Mikroskop

Kamar hitung dibawah mikroskop

( dihitung pada 4 kotak W )

Pembesaran lensa objektif 10x Pembesaran lensa objektif 40 x

c. Perhitungan

Diketahui :

Pengenceran : 500 x

Volume Kotak W : 0,4 mm

Trombosit yang dihitung : 937 sel

Jawab :

Trombosit = 937 x 500

= 468.500 sel/mm3

Jadi, jumlah trombosit yang dihitung sebanyak 468.500 sel/mm3 dan nilai

tersebut berada diatas batas normal

IX. PEMBAHASAN

Pada praktikum kali ini, dilakukan hitung jumlah trombosit dengan metode manual

menggunakan kamar hitung Imroved Neubauer. Jumlah yang dihitung menggunakan

metode ini adalah jumlah sel trombosit per millimeter kubik (mm³) atau per mikroliter

darah. Bahan pemeriksaan yang digunakan untuk pemeriksaan hitung trombosit kali ini

adalah darah EDTA. Antikoagulan ini dapat mencegah pembekuan darah dengan cara

mengikat kalsium dan juga dapat menghambat agregasi trombosit, sehingga dapat atau

baik digunakan dalam pemeriksaan hematologi dan DL.

Hitung trombosit menggunakan metode manual pada praktikum kali ini dilakukan

dengan melakukan pengenceran terhadap darah ke dalam larutan yang mengandung

Brilliant Crecyl Blue, sehingga sel trombosit akan tercat berwarna biru muda. Namun,

pada pengamatn ini praktikan tidak menemukan sl trombosit yang tercat atau terwarnai

wterlalu kecil pada sarna biru muda. Hal ini mungkin karena disebabkan sel trombosit

terlalu kecil pada saat dilakukan pengamatan sehingga mata pengamat tidak melihatnya.

Pada saat pemipetan dan pencampuran darah dengan pengencer, pipet yang digunakan

adalah pipet thoma untuk eritrosit. Darah yang diencerkan dengan pipet thoma eritroit

akan akan mengalami pengenceran hingga 200x. Penggunaan pipet thoma eritrosit

karena sel trombosit jumlahnya cukup banyak dalam darah dan berukuran sangat kecil

serta mencegah bergerombolannya sel trombosit yang diamati, maka dari itu dilakukan

pengenceran 200x untuk mempermudah pengamatan dan perhitungan.

Setelah dilakukan pengenceran, darah dan larutan pengencer dihomogenkan. Pada

saat penghomogenan, pipet thoma dikocok secara perlahan agar sel darah tidak lisis.

Apabila sel lisis, maka pada saat pengamatan akan sulit membedakan kotorsn dengan sel.

Kemudian 3 – 4 tetes pertama larutan dibuang karena hanya mengandung larutan

pengencer saja.

Diperhatikan pada saat penetesan larutan pada kamar hitung dipastikan agar tipis dan

merata untuk mencegah penumpukan sel pada salah satu kamar hitung. Kamar hitung

yang digunakan untuk menghitung sel trombosit adalah pada bagian kotak hitung untuk

leukosit. Hal ini dikarenakan pada kotak hitung leukosit lebih besar dibandingkan dengan

kotak hitung eritrosit dan sel trombosit tersebut ukurannya sangat kecil sehinggan

digunakan kotak untuk hitung leukosit untuk mempermudah pengamatan dengan

menggunakan mikroskop dan mencegah kesalahan pembacaan dan perhitungan.

Dalam proses menghitung jumlah trombosit, darah diencerkan hingga 200x dan

dihitung pada 4 kotak untuk hitung leukosit dimana keempat kotak tersebut memiliki

volume 0,4 mm3. Untuk menentukan jumlah sel/mm3 darah dapat dilakukan perhitungan

sebagai berikut:

Trombosit = x jumlah sel yang dihitung

= 500 x jumlah sel yang ditemukan / mm3

Maka dari itu, jumlah sel trombosit yang dihitung pada 4 kotak W dikalikan 500 untuk

menentuka jumlah sel / mm3 darah.

Dari hasil pengamatan dan perhitungan yang telah dilakukan, hasil yang didapat dari

hitung trombosit pada sampel darah atas nama Prandingga adalah sebanyak 468.500 sel/

mm3 darah. Dari angka tersebut, jumlah trombosit pasien diatas batas nilai rujukan

normal.

Adapun faktor – faktor yang mempengaruhi temuan laboratorium :

1. Penggunaan sampel darah kapiler menyebabkan hitung trombosit cenderung lebih

rendah.

2. Penundaan pemeriksaan lebih dari 1 jam menyebabkan perubahan jumlah trombosit.

3. Perbandingan volume dengan antikoagulan tidak sesuai

4. Pengambilam sampel darah yang lamban menyebabkan menyebabkan trombosit saling

melekat, (agregasi) dan dapat juga disebabkan tidak segera mencampur antikoagulan

dengan darah.

5. Faktor subjektifitas dan kejelian pengamatan serta kualitas alat merupakan faktor utama

dalam hasil pemeriksaan trombosit menggunakan metode manual kamar hitung kali ini .

Masalah klinis yang ditimbulkan apabila :

1. Penurunan Jumlah : Myeloma, ITP, leukemia, anemia aplastik, SLE, penyakit

hati, penyakit ginjal, demam rematik akut, pengaruh obat : antibiotik, aspirin

sulfanomide, injeksi vaksin.

2. Peningkatan Jumlah : Polisitemia, vena, trauma (fraktur/pembedahan) dataran

tinggi, TBC, retikolositosis, latihan fisik berat, pengaruh obat : efinefrin (adrenalin).

X. KESIMPULAN

1. Dalam pemeriksaan jumlah trombosit digunakan pipet thoma eritrosit dengan cara

memasukkan darah EDTA sampai skala 0,5 dan ditambahkan reagen Ress- Ecker hingga

skala 101dihomogenkan lalu diletakkan pada kamar hitung dengan pembacaan pada 4

kotak leukosit.

2. Jumlah trombosit yang ditemukan pada W1= 240 sel, W2= 232 sel, W3 = 223 sel, W4 =

242 sel , sehingga jumlah total sel sebanyak 937 sel.

3. Dari jumlah perhitungan yang dilakukan, jumlah trombosit pasien atas nama Prandingga

yaitu 468.000 sel/mm3 darah dan jumlah tersebut berada diatas batas normal.

XII. DAFTAR PUSTAKA

Putra, Trio Adoratee L. 2012. Efek Pemberian Asam Asetil Salisilat (Aspirin) Dosis 80

mg terhadap Hiperagregasi Trombosit pada Pasien Stroke Iskemik Kasus Baru.

[Jurnal].http://repository.usu.ac.id/bitstream/123456789/31462/4/Chapter

%20II.pdf diakses pada tanggal 16 November 2014

Hesti. 2012. Pembentukan trombosit thrombocytopoiesis. [Online].

http://hesti21.wordpress.com/2012/12/23/pembentukan-trombosit-

thrombocytopoiesis/. Diakses pada tanggal 18 November 2014

Maryana, Ika. [Online]. http://digilib.unimus.ac.id/files/disk1/106/jtptunimus-gdl-

ikamaryani-5251-1-bab1.pdf . Diakses pada tanggal 18 November 2014

Anonim. 2013. Pemeriksaan Hitung Trombosit Metode Amonium Oxalat. [Online].

http://praktekanalislab.blogspot.com/2013/10/pemeriksaan-hitung-trombosit-

metode.html Diakses pada tanggal 18 November 2014

Adisti Wulandari dan Siti Zulaikah. 2012. Trombosit Dengan Otomatis. [Online].

http://aakmalang.blogspot.com/p/hitung-trombosit-dg-otomatis.html. Diakses

pada tanggal 18 November 2014

Denpasar, 12 Januari 2015

Praktikan,

Analis Kesehatan

LEMBAR PENGESAHAN

Mengetahui,

Pembimbing I

Rini Riowati, Bsc

Pembimbing II

I Ketut Adi Santika, A.Md. AK

Pembimbing III

Luh Putu Rinawati, A.Md.AK

Pembimbing IV

Ni Made Sri Dwijastuti, A.Md.AK