LICDA. CAROL VILLATORO DE SANTISTEBAN

ANÁLISIS INSTRUMENTALDEPARTAMENTO DE FISICOQUÍMICA

ESCUELA DE QUÍMICA USAC

FASES PARA CROMATOGRAFÍA

GENERALIDADES

Fase estacionaria (FS)Fase móvil (FM)Sistema cromatográfico

Elección según propósito del análisis, características de la muestra, características de los analitos

Interacción FS-analitoPolaridad

Fases estacionarias

FASES ESTACIONARIAS

Factor clave para la SEPARACIÓNCaracterísticas de la FS

Identidad química Estructura física: (Partículas de soporte, configuración

en el espacio, tipos de interacción) Forma de contacto entre fases (plano, columnas) Configuración del soporte (partículas de relleno,

pared del capilar)

ADSORCIÓN

Fase estacionaria sólida y polar Carbonato de calcio Sílica Alúmina

Na2SiO3 +H2O + 2HCl = Si(OH)4 + 2NaCl

REPARTO

Fase estacionaria líquidaPartículas de soporte: sílica, vidrio+sílica,

polímerosFS unida físicamente o químicamente

(reparto o fase enlazada)Película superficial de fase estacionaria sobre

partícula de soporte

FASE ENLAZADA

Unión covalente soporte-FSSílica – SiloxanosEquivalente a película muy finaCaracterísticas de la partícula determinantes

para grado de sililación

AFINIDAD

Aplicación bioquímicaInteracción antigeno-anticuerpoAlta selectividad

INTERCAMBIO IÓNICO

Analitos con carga eléctricaFS (enlazada) cargada

Intercambiadores aniónicos (FS +, analito -) Intercambiadores catiónicos (FS -, analito +)

FM con contraiónCompetencia (intercambio) analito-contraión

EXCLUSIÓN O PERMEACIÓN EN GEL

Interacción FS-analito puramente físicaTamaño y forma --- Peso molecular y

conformaciónPoros o canales – recorridos distintos

Fases Móviles

FASES MÓVILES

Factor clave para la ELUCIÓNCaracterísticas de la FM

Composición química (polaridad) Estabilidad (estado físico, composición, interacción

con otras sustancias, interferencias instrumentales)

Polaridad

Armonización en las polaridades analito-FS-FM

Similitud FM-analito – tiempo de retención

Polaridad

Mezclas

Elución isocrática Uno o varios solventes

Composición constante

Elución en gradiente Dos o más solventes

Composición varía en función del tiempo

Índice de polaridad de la mezcla: sumatoria de índices individuales por fracción en volumen

INTERACCIONES

Interacciones

C. de adsorción: Analito y FM compiten por adsorberse sobre la FS Fase Normal Gradiente: aumento de polaridad

Interacciones

C. de reparto (incluyendo fase enlazada): Analito se transfiere entre FM y FS en la interfase Fase Normal

Gradiente: aumento de polaridad

Fase Reversa Gradiente: disminución de polaridad

Polaridad de la FM influye en conformación molecular de la FS

Interacciones

C. de exclusión y c. de gases: FM sólo transporta al analito libre. Poca interacción FM con FS Poca interacción FM con analito

Interacciones

C. de afinidad Elución en gradiente Fase de retención: FM sólo transporta al analito Fase de elución: FM interactúa con el analito o con la

FS FM compite con FS por enlazarse con el analito FM modifica o se une a FS, evitando la unión FS-analito.

Interacciones

C. de intercambio iónico Analito y FM compiten por adsorberse sobre la FS Elución en gradiente Fase de acondicionamiento: FM se une a FS (atracción

electrostática) Fase de retención: FM y analito compiten Fase de elución: FM interactúa con el analito o con la

FS FM se une a FS FM modifica al analito evitando la unión FS-analito

GRACIAS POR SU ATENCIÓN

FIN