Coloum Pada HPLC

Kolom pada Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT/HPLC) merupakan bagian yang sangat penting, sebab separsi atau pemisahan komponen-komponen sampel akan terjadi di dalam kolom.

Oleh sebab itu, harus diperhatikan dengan seksama tiga hal berikut :

• Pemilihan kolom yang sesuai,• Pemeliharaan kolom,• Uji terhadap spesifikasi kolom (walaupun kolom

tersebut merupakan kolom yang siap pakai).

Kolom akan menjadi penentu keberhasilan pemisahan komponen-komponen sampel serta hasil akhir analisis dengan HPLC.

Columns

Columns

Kolom pada HPLC dibuat lurus (tidak dibuat melingkar sebagaimana kolom pada Kromatografi Gas ataupun bentuk U). Hal ini dimaksudkan untuk efisiensi kolom;

Kolom adalah tabung baja stainless dikalibrasi lurus yang panjangnya antara 3 dan 15 cm dan pada dinding bagian dalam kadang-kadang dilapisi dengan material inert seperti kaca atau PEEKÂ ®.

Fase stasioner diadakan di kolom antara dua cakram berpori masing-masing terletak di kaki (Gambar 3.6). Diameter internal kolom, untuk waktu yang lama standar di 4,6 mm. (yang membutuhkan laju aliran fase gerak antara 0,5 sampai 2 mL/min).

Gambar 3.6 Standar kolom dan kolom penjaga untuk HPLC. The precolumn tergantikan mencegah menyumbat dari kolom analisis sementara memperluas seumur hidup dan melestarikan kinerjanya.

Sekarang ada banyak pilihan kolom dengan nama seperti narrow-bore (2-4 mm ID), microbore (1-2mm), packed capillaries <1mm, yang mengalir turun hanya sedikit L/min dan karena itu memerlukan pompa khusus dan detektor.

Kolom ini tidak hanya sempit, secara substansial mengurangi jumlah fase gerak hanya beberapa tetes saja cukup untuk mengelusi semua senyawa, tetapi juga meningkatkan resolusi dengan mengurangi difusi di dalam kolom. Kolom tersebut sama-sama memiliki kepekaan lebih besar dan memungkinkan kombinasi HPLC-MS.

Untuk memperpanjang umur kolom, seringkali didahului oleh suatu precolumn atau penjaga kolom, pendek (0,4-1 cm), dan dikemas dengan fase diam yang sama seperti kolom analitis (Gambar 3.6). Precolumn ini, yang mempertahankan senyawa dengan Rf = 0, secara berkala berubah. Hal ini juga dianjurkan sebelum analisis, solusi untuk lulus sampel melalui filter ukuran pori kurang dari 0,5 mikrom.

Pengaruh suhu terhadap kualitas pemisahan untuk waktu yang lama telah diabaikan. Sekarang, instrumen HPLC dilengkapi dengan kolom yang temperatur termostatik dikendalikan. Hal ini meningkatkan reproduktifitas analisis dan menawarkan parameter lebih lanjut dari pemisahan untuk dipertimbangkan (Gambar 3.7).

Gambar 3.7 Pengaruh suhu kolom terhadap pemisahan senyawa. Analisis yang senyawa campuran dengan menggunakan kurs fase aliran yang sama mobile pada tiga suhu yang berbeda (a) 25 C, (b) 35 C, (c) 45 C.

Terima Kasih

Gambar 3.5 Dua langkah suntikan memasukkan sebuah loop. (a). Loading dari loop, (b) Injeksi ke kolom. Skema dari katup 7125 model dari Rheodyne Inc Sebagian besar injectors sekarang otomatis.

Pemisahan HPLC yang andal dan dapat direproduksi bahkan bagi masalah analisis paling menantang dalam riset, pengembangan dan kontrol kualitas, juga dalam analisis lingkungan, klinis dan biokimia. Beberapa dekade inovasi produk difokuskan pada memberikan pada pelanggan alat pemisahan HPLC terbaik, yang terwujud dalam rangkaian komprehensif kolom HPLC kualitas tinggi dari Merck.

Dengan kolom Chromolith®, Anda dapat melakukan pemisahan yang cepat dan kuat menggunakan sistem HPLC standar, berkat teknologi silika monolitik yang unik dan telah dipatenkan. Untuk semua senyawa polar dan hidrofobik, teknologi hak milik zwitterionic SeQuant™ ZIC®-HILIC memberikan pemisahan HPLC langsung dengan fleksibilitas tinggi dalam kondisi pemisahan pilihan. Selektivitas yang diseimbangkan secara optimal dari Purospher® menjadikannya pilihan sempurna untuk pengembangan metode fase terbalik pada beragam lab.