7/21/2019 biotek-jurnal

http://slidepdf.com/reader/full/biotek-jurnal 1/3

2. Bahan dan metode

2.1. sampel

Air liur, air mani, dan sampel urin dikumpulkan dari 20 pendonor yang sehat, dan sampel air

liur dibuat dengan menjilati kertas saring. Bakteri kulit dikumpulkan dari 20 pendonor yang

sehat dengan menyeka kulit dengan kapas basah. Sampel cairan vagina dikumpulkan dari 9 pendonor sehat dengan kapas sabbing. !"in tertulis diperoleh dari semua peserta yang

memberikan sampel.

 jenis bakteri yang digunakan dalam penelitian ini adalah S. salivarius A#$$ 1%&19, S.

mutans A#$$ %'((), S. mitis A#$$ (2&9, S. sanguinis A#$$ 10''(, Bacillus subtilis

A#$$ ((%%, *scherichia coli A#$$ %'21), +seudomonas aeruginosa A#$$ 2)'%, Serratia

marcescens A#$$ )100, dan Staphylococcus aureus A#$$ 2'92%. jenis tersebut dibeli dari

-icrobiologics St. $loud, -/. Streptokokus yang dikultur di -itissalivarius agar B!,

3i4co 5aboratories, 3etroit, -!, dan bakteri yang tersisa dikultur dalam /utrient agar B!.

2.2. ekstraksi 3/A6ntuk ekstraksi 3/A, kami menggunakan '0 ml cairan tubuh, 'mm 7 ' mm kertas 4ilter,

atau dalam '0 ml air. Bakteri kontrol disuspensikan dalam '0 ml air. Sampel direbus pada 9)0$ dalam tabung mikrocentri4uge. 6ntuk melisiskan sel bakteri, sampel diinkubasi dengan

100 ml dari 200 6 8 ml mutanolysin Sigma, St. 5ouis, - dan 20 ml dari 100 mg 8 ml

liso"im Sigma pada '0 $ selama (0 menit, dilanjutkan dengan pengobatan dengan 20 ml

+roteinase : ;iagen, #okyo, <epang, dan 1)0 ml Bu44er A#5 ;iagen pada '( )$ selama

(0 menit. :ami lalu menambahkan 200 ml Bu44er A5 ;iagen sebelum inkubasi pada suhu

0 0$ selama 10 menit dan menambahkan 200 ml etanol. 3/A dimurnikan menggunakan :it

;!Aamp -ini ;iagen sesuai dengan protokol produsen dan dielusi dengan 1'0 ml air, yang

kemudian terkonsentrasi sampai %0 ml.

2.%. kondisi +$= 

+rimer oligonukleotida yang digunakan dalam penelitian ini dirancang oleh oshino dkk. >9?

dan tercantum dalam #abel 1. +$= dilakukan pada 20 ml campuran reaksi yang mengandung

0,' polymerase 6 Ampli#a@ *mas 3/A Applied Biosystems, kota oster, $A, 0,' m-

oligonukleotida primer, 3/A #emplate, dan old S#A= 10 7 Bu44er +romega, -adison,

C!. +$= ampli4ikasi dilakukan dalam sistem eneAmp +$= 900 9(00 modus emulasiD

Applied Biosystems diprogram untuk 11 menit pada 9' 0$ dan %' siklus 1 menit pada 9& 0$

untuk denaturasi, 1 menit pada ('0

$ untuk anil, dan 1 menit di 20

$ untuk ekstensi. :ondisi+$= yang identik diterapkan untuk kedua set primer. +roduk +$= diidenti4ikasi oleh 2,0E

elektro4oresis gel agarosa setelah pearnaan dengan SFB=G reen #akara, :yoto, <epang.

2.&. :onvensional aamilase deteksi

-etode patiagarosa digunakan sebagai bentuk konvensional deteksi amilase. Salah satu

tablet 6ji /eoAmilase 3aiichi :imia -urni, #okyo, <epang hancur dan ditangguhkan

dalam '0 ml 1,0E larutan gel agarosa. 5arutan kemudian dituangkan ke gelas dan gel dengan

 pendinginan. Sebuah spesimen dipotong 'mm 7 ' mm ditempatkan pada gel dan diinkubasi pada % 0$. asil positi4 dide4inisikan sebagai deteksi dicerna pati setelah 2 jam.

7/21/2019 biotek-jurnal

http://slidepdf.com/reader/full/biotek-jurnal 2/3

2.'. spesimen 4orensik 

:ami menggunakan sampel berikut sebagai sampel 4orensik tiruan untuk menguji aplikasi

4orensik metode kamiD 10 dari puntung rokok, 10 kapas gau"es menyeka kulit menjilat, enam

dari noda air liur disimpan selama ( tahun di atas kertas saring, dan noda campuran semen

dan air liur 10H 1 berdasarkan volume pada kertas 4ilter. :ami <uga digunakan penyeka airliur dari % anjing dan satu kucing sebagai hean umum dan memeriksa apakah S. salivarius

dan S. mutans yang terdeteksi pada hean menggunakan metode kami. :ami berusaha untuk

mengekstrak 3/A dari 2mm 7 2 mm dan ' mm 7 ' mm dari puntung rokok, dan 'mm 7 '

mm kasa, dan kertas saring.

tabel 1

6rutan primer yang digunakan dalam penelitian ini.

ambar. 1. Sensitivitas metode +$=, diperiksa dengan menggunakan 3/A kromosom

dimurnikan dari a salivarius S. dan b S. mutans. <umlah 3/A template yang digunakan di

setiap jalur adalah sebagai berikutH jalur -, 100bp penanda massa molekulD jalur 1, 1 ngD

7/21/2019 biotek-jurnal

http://slidepdf.com/reader/full/biotek-jurnal 3/3

 jalur 2, 100 pgD jalur %, '0 pgD jalur &, 2' pgD lane ', 10 pgD jalur (, ' pgD jalur , 2,' pgD lane

),1 pgD jalur 9, '00 4g.