Analisis secara

enzymatisOleh :Hendri Wasito, S. Farm., Apt.

JURUSAN FARMASI FKIKUNIVERSITAS JENDERAL SOEDIRMAN

Tinjauan umum• Pemanfaatan reaksi enzimatis dapat

digunakan untuk anaisis obat pada sampel biologis dengan mengamati jumlah produk yang dihasilkan atau jumlah koenzim yang digunakan.

• Dengan reaksi enzymatis tidak dibutuhkan tekik yang rumit dan proses pre-treatment yang panjang.

• Contoh : analisis antibiotik aminoglikosida (gentamisisn da kanamisin) dengan enzym asetil/adenil transferase yang dilabel.

Apa itu enzim ???

Enzim merupakan senyawa organik bermolekul besar yang berfungsi untuk mempercepat jalannya reaksi metabolisme di dalam tubuh tumbuhan tanpa mempengaruhi keseimbangan reaksi

Enzim tidak ikut bereaksi, struktur enzim tidak berubah baik sebelum dan sesudah reaksi tetap

Enzim merupakan biokatalisator

Bagian enzim yang aktif adalah sisi aktif dari enzim, tempat berikatannya dengan substrat pada saat reaksi katalitik

Tata nama enzimEnzim diberi nama sesuai dengan nama substrat dan

reaksi yang dikatalisis

Biasanya ditambah akhiran ase

Enzim dibagi ke dalam 7 golongan besar

Enzyme Commission of the International Union of

Biochemistry and Molecular Biology (IUBMB)

Fosfotransferase ATP : glukosa = hesokinase = EC 2.7.1.1 =

transferase. Fosfotransferase.

Fosfotransferase dengan gugus hidroksil sebagai penerima. D-

glukosa sebagai penerima gugus fosfat)

S + E (ES) (EP) E + PDiffusion& Affinity Catalysis Product release

Enzym Multiplied Immunoassay Technique (EMIT)

• Prinsip kerja : Setiap mol obat stoikiometris dengan setiap mol enzim yang dilepaskan. Setiap mol enzim bereaksi dengan substrat yang ada dan akan menghasilkan produk.

• Yang diukur adalah jumlah produk yang dihasilkan.

URIN / PLASMA

ANTIBODI

ENZIM-OBAT KONJUGAT

SUBSTRAT

SPEKTRO

Mekanisme kerja EMIT

Contoh EMIT• Substar : Glukosa-6-Phosphat• Enzim : Dehidrogenase G6P• Koenzim : NAD (Nicotinamid Adenin

Diphosphat)• Reaksi :

– substrat + enzim keilangan atom H– NAD + H NADH

• Pengamatan : λ 340-345 nm (NAD tidak memberkan absorbansi, NADH mengabsorbansi)

Kelebihan dan Kekurangan EMIT

• Reaksi cepat• Mudah diautomatisasi• Tidak perlu dilabel radioaktif

Kelebihan

Radio Immuno Assay (RIA)Analisis berdasarkan reaksi antigen-antibody (berlabel radioaktif)Selektifitasnya tinggi (antigen-antibody) dan sensifitasnya tinggi (10-100 x spektro UV)Awalnya digunakan untuk senyawa peptida dan hormon yang sulit dideteksi dengan UV.Perkembangannnya dapat untuk analisis senyawa obat.Radioisotop yang biasa digunakan : H-3, C-13, S-35, P-32, I-125, Co-60. (sebaiknya dipilih yang t1/2 panjang dan partikel yang dihasilkan lebih aman)

Contoh analisis RIA• Digoksin tak-berlabel (sampel) ditambahkan

digoksin terlabel dengan jumlah diketahui ditambahkan antibodi yang akan direaksikan antigen.

• Antigen akan sebanding dengan obat (digoksin).• Setelah 20 menit diinkubasi, komponen yang terikat

antibodi dan yang tak terikat dipisahkan dengan arang aktif, digoksin bebas akan terserap dan digoksin-antibodi terlarut. Hasil dibaca radioaktivitasnya.

• Bandingkan dengan standar yang sudah diketahui kadarnya.

• Semakin besar kadar digoksin semakin kecil digoksin terlabel yang terikat antibodi (berbanding terbalik)

Substrat Labeled Fluorescent Immunoassay (SLFI)• FDR (Fluorogenic Drug Reagent) misalnya

Umbeliferon galaktosida.• FDR jika dihidrolisis oleh enzim tertentu

maka florogeniknya akan terlepas sehingga akan dapat berfluoresensi.

FDR + AB + D

AB-FDR + AB-D

B-galaktosidase

Hidrolisis

FLUORESENSI

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA),

• ELISA also known as an enzyme immunoassay (EIA), is a biocheical technique used mainly in imunology to detect the presence of an antiody or an antigen in a sample.

• ELISA test kits can use for research and detection of drugs and/or their metabolites.

• ELISA is a widely-used method for measuring the concentration of a particular molecule (e.g., a hormone or drug) in a fluid such as serum or urine.

Hatur nuhun pisan ...Jangan lupa untuk menambah informsi sumber bahan kuliah dari sumber lainnya ...

Daftar Presentasi Tugas Jurnal Terstruktur Akhir

• Ratnawati dkk.– An LC-MS Method for The Deermnation of Cyclizin in Human Serum.

• Meliyana Perwita S. Dkk.– Identifikasi Ofloxacin dalam Seru Dengan Metode HPLC.

• Winda Ariyani dkk.– Speciation of Drugs in Blood Serum by Surfactant-Mediated HPLC/ICP-MS

with Direct Sample Injection• Afnan dan Gina Puspita S.

– Analysis of Drug and Metabolites in Blood and Urine Using Automated Disposable Pipette Extraction.

• Banu Aji Wijayanto dkk.– High-Performane Liquid Chromatography Determination of Metrotrexate in

Plasma.• Sabrina Nur F. Dkk.

– Quantification of The Plant-Derivated Hallucinogen Salvinorin in Conventional and Non-Conventional Biological Fluids by Gas Chromatography/Mass Spectrometry After Salvia Diviningrum Smoking.

• Prima A. Dan Putri D. F.– Analisis Aspirin pada Urin Relawan Wanita di Musim Dingin.