ADLN - Airlangga Digital Library Network ADL - Airlangga ...

BAB X

TINJAUAft FUSTAKA

Slfat fisika dan Jribnia glukosa (8).

Sebelum membicarakan berbagai metoda penentuan -

glukosa dalsm darah, akan jelas apabila terlebih dahulu

diketahui beberapa sifat-sifat fisika d«n kimia glukosa.

Bidalam larutan glukosa terdapat dalam bentuk pi-

ranosa aldehid dan enediol yang berada dalam keseimbang-

an. Bentuk mana yang lebih banyak terdapat tergantung da

rl derajat keasaman larutan dan pelarut.

Meskipun glukosa merupakan suatu aldoheksosa akan

tetapi struktur aldehid ini tidak stabil dan hanya sedi-

kit yang berada didalaa larutan* Didalam larutan alkali

bentuk enediol paling banyak terdapat, dan adanya bentuk

ini menyebabkan glukosa mempunyai slfat mereduksi* Pada

larutan yang netral atau asam lemah struktur yang lebih

banyak adalah hemiacetal yakni suatu bentuk dimana atom

karbon yang pertama dan kelima dihubungkan oleh suatu

jembatan oksigen, sehingga menghasilkan ikatan yang sta-

bil, dikenal sebagai bentuk piranosa.

Bentuk dari struktur rantai yang

4

ADLN - Airlangga Digital Library Network

Skripsi


Skripsi Perbandingan Penetapan Kadar Glukosa di Dalam Serum Antara Metoda Somogyi ... Sri Suharmiandari

5

dart etca karbon pertama maua eSssikeii gltiftosa rangu

ayoi dx*& aacsa tHmtulc yxmg borboda yaitu c< dim r1

Icopiranooa.

Glukosa jsurnl ywg diperoleb da*£ kristaliisasi larutan

pckat doliaa air p»da r»uhu kanas? atfbagien becer bercda da

1m bentuk. j gitikopiraiiosa#

Sodang p lVglukopiranGnit dapnt dibuat dengan teistaliaa-

si larutan pakat daloa air pada auha diatas 9S°0eleiuB*

Glukosa nOTpiHiyni egftct (ktom karbon yang asimetris,

Adaay® enpat «too kaiftoii yang aoiiastfclB ioi ircnuagk&s&m

glufcosa ccsapttny&i siTat oematesr Mdsmg cabaya yang ttexkS} tap, q l I gltifccea yens mtlMirula dilarutkcm n*nrpunya£ ro- tad speoifik ( oO^® » 112° dfarana kexmdim berfcuraog Mngga pada kodadtffcaa yang tetap ( « 52°* tfesoaa- zm ini dikenal sabagai Exut&ix>ta*sit sebagai haoil dari ko

Bettrabcngan besitulc D-glukapirsmosa dan ^ l>-glukopi- rimor-a* Pada fceadaan ini 36 *1 dari pada gLu&ona terdapat dftlm bentmk c< X>~gliikop5>ranosa d m 6& $S dalaffl bcntwJt -

IH&ufcopironaseu

Gl^koea dfdal&a tubo£u

1* Suabcr gl kosa didal&n tnbuh (6)«

Msfcaoan ccrupaJcan sru&ber glukose yang paling -

beoor, terutaaa yong bsrasal dari hidrat ©rang* Sejsfc da

rl isuittt tddrat ea?aiig ya»£ talob dicorna oleb cnaysa ani-

laoo ysng dibuat oloh glandula parotis* Bldaloa ubus ha-


Skripsi



6

lus hampir semua hidrat arang dipecah menjadi tiga hekso-

sa yaitu glukosa» fruktosa dan galaktosa. Ketiga heksosa

ini diserap diusus halus masuk kedaiam peredaran darah.

Glikogen hepar dapat pula diubah menjadi glukosa

dengan bantuan enzym spesifik yaitu glukosa 6 fosfatase

yang hanya terdapat didalam hepar* Otot tidak mempunyai

ensym ini oleh karena itu glikogen otot tidak dapat beru-

bah menjadi glukosa* Glikogen hepar yang menjadi glukosa

ini hanya 3-5 % dari metabolisme glukosa total*

Meskipun hanya sedikit tetapi mempunyai arti yang sangat

pen ting dalam keadaan dlmana tubuh mendadak membutuhkan

glukosa*

Glukosa dapat pula dibentuk dari zat-zat karbon

yang terbuat dari metabolisme lemak, protein dan hidrat

arang. Proses ini terutama terjadi didalam hepar dan le-

bih dikenal dengan peristiwa glukoneogenesis. Banyaknya

glukosa dari glukoneogenesis ini lebih kurang sepuluh ka-

li glukosa yang dibuat dari glikogen* Jadi jelaslah bahwa

glukoneogenesis mempunyai arti yang penting didalam meta-

bolisme glukosa.

2. Glukosa air seni*

Didalam air seni terdapat metabolit-metabolit -

sebagai hasll metabolisme tubuh* Disamping itu kadang-ka-

dang juga dike temukan metabolit tertentu yang secara nor-

mal tidak ada ataupun dalam jumlah yang sangat kecil*


Skripsi



7

Demikian pula halnya dengan glukosa, dalaa keadaan nor-

nal kadar glukoce dalaa air seni sangat kecil eekali bah

ken haapir dopat dikatakan tidak «da (2, 5, 11)#

Jika diketeiauka» glukosa dalasi air sen! atecu lebih dike-

nal dengan istilah glukosuria, «aka hal ini merupaken ke

lainan patologis atau gangguan fisiologis» (10,13)«Sal ah eatu kelaintm yang erat eekali hubungsmnya dengan

glufcosuria adalah diabetes ctellitus*

TJsru&nya pada penderita ini ak«n diketesrukan &da~v

nya glukosa dalam air seni dengan kadar yang cukup ting*

gi hingga 8 gram % (15)«

3* Glukosa dalan aerum.

Kadar glukosa serum Berupakan resultant* dari

fektor yang hendak aemecah glukosa untuk pemakaian 3axinj£

an dengan f aktor peabuatan dan penyerapan glukosa dalaa

serum. Zadar glukosa serua normal orang puasa bervariasi

dari ?0 hingga 100 mgAOQ ml dari seluruh serum vena (1) ♦

Apabila makan Mdrat arang dalam jumlah yang banyak, naka

kadar glukosa naik hingga kurang lebih 150 ng prosen da-

lan waktu setengah hingga satu jas dan normal kexabali ki-

ra-kira dua 4an setelah makan, (6). Agar supaya kadar gala

sefuai normal, penkreas aengeluarkaa insulin dalam jumlah

yang cukup banyak. Hekaniasie pengeluaran insulin ini ter-

gantung dari konsentraai glukosa didalaa eorun. Bila ka-

dar glukosa serum naik cel-sel fb Langerhans jaendapat ati-


Skripsi



8

xnxlasi untuk acnbuat insulin yang lebih banyak, oodangfcan

bila. kooudian glukoaa somn turun, produkoi laoni in «son»-

run den eplnephrin dikeluaxtean dari glandula cuprarenalia

yang aenstteulir glikogenolisls dari hepar sehingga ter-

capailah kadar glukoaa yeng normal*

Pada gin j el yang sehat glukooa dlfiltrasi melalui

glomerulus dan diserap kembali ditubulue proxircalis* Un-

tuk glukosa, ginjal mempunyai kspaisitas penyereptm keaba-

11 yang makeiiaum berkisar antara 140 mg Mngga ISO rag /

100 ml serum (6, 5, 10)«

5* Tahapan cara penentuan glukosa dalca tubuh (7)«

tahapan pemeriksaan-peneriksaan yang diperlukan untuk

menunjang diagnosa klinis gangguan metabolisme hidrat

nrsng ialah *

1* Pemeriksaan air seni reduksi dan kalau perlu adanya

ke to bodies dalam air seni*

2. Pemeriksaan glukoea dareh dalam keadaan puaoa atau

dua jam sesudah makan glukosa.

5* Jika masih tizabul keragu-raguan dilanjutkan dengan

pemeriksaan oral glukosa toleranai test (OGTT) atau

dspat dilanjutkan dengan cortison glukosa toleransi

* test (COTP)*

4# Hacea cara geaeriksaan glukosa dal an serun dalam kea-

daan puasa dibagi menjadi lina prinaip : (9)*

1* Okaidasi redukei.


Skripsi



9

2. bergantung pada peiabentukan vam dengan fenol dan

as am sulfat peteat*

3* Kondensasi aldooa aromatik aaina.

4* Kacas-Bftcam cara dengan reaksi kinia.

5* &zy»atlk.

4*1. Prinsip oksidasi redaksi.

Prinsip oksidasi reduksi dibagi menjadi beberapa

raeccn, yaitu *

a. Sebagai oksidator a&aa pikrat*

Jfetoda ini tidak digunakan lagi karam tidak

spesifik»

b. Sebagai oksidator farri sianida.

Metoda ini dibagi menjadi beberapa macan cara

kerja s

1* fitraai oksidasi redukai secara langsung.

Metoda ini dilakukan sebagai berikut yaitu,

filtrat darah yang tidak mengandung protein

ditambahkan tetes demi tetes kedalam larut-

an ferri sianida basa yang panas aaispai var

na kuning bilang.

2m Vaktu menghilangkan wama &arir>ferri siani-

da.

Balon metoda ini digunakan ferri aianida -

yang jamiahnya lebih kecil dari glukosa *

yang akan ditentukan*


Skripsi



10

Salas keadaan demikian maka waktu untuk -

penghilangan vima bervariasi terbalik de-

ngan logaritma konsentrasi glukoea.

3. Penghitungan kelebihan ferri sianida.

Pada metoda ini glukosa ditentukan dari per

bedaan ferri sianida sebelum dan sesudah -

reaksi miaalnya t

dilakukan dengan titrasi lodometri dan pe-

nentuan ferri sianida secara fotometrl.

4. Penuai tungan ferro sianida.

Pada metoda ini glukosa ditentukan berdau

ear pad* jualah ferro sianida yang terben-

tuk, cara ini dapat dilakukan misalnya de-

ngan titrasi menggunakan ion ceri dan ti-

trasi secara manganimetri.

3. Penghitungan secara potentionetri dengan

menggunakan elektro da ferri-ferro sianida,

e. Sebagai oksidator adalah pereaksi cfcembage.

Prinsip aetoda ini adalah pereaksi tembaga da-

lam larutan alkeli panas dengan adanya gluko-

sa maka tei^iryang terkandung akan berubah

menjadi-fcenba vi., kemudian faba ai yang terjadi

kan dioksidasi oleh ion hidroksida (OH) mem-

bentuk febag&i hidroksida yang berwarna kuaing.

Adanya panas ekan merubah feba^i hidroksida -


Skripsi



11.

menjadifetecai oksida yang bervama neraiu

Metoda in i pada dasaroya lebih spesifik darl

pada metoda y&ng aenggimakan oksidator ferri

sianida karena potential okcidani reduk&inya

lebih rcndah. Sebagai contoh x oksidator far-

ri sianida lebih audoh mengoksidasi senyawa

lain selain gala,

Beraacam-nacafi «odifikaai dari peroakai temba-

ga*. ini didapatkan a el ana th. 1920-1930» ter-

utama yang terkenal adalah : Folia, Benedict,

dan Sonogyi.

Metoda ini dibagi nenjadi beberapa macam :

1« Penghitungan warna yang dihasilkan oleh po-

re akai f enol dari Folia Denis.

2* Penghitungan warn yang dihasilkan oleh ton

fonolibdat.

Pada kondisi yang casual ortho fonforic dan

as an oolibd&t terkondensasi membentuk kom-

pleks heteropoli yaitu xaolibdifooforic atau

an am fosfoaolibdat. Seduksl dari as am £oafo

raolibdat oleh oksida menghasilkan ao-

libdenum biru yaitu suatu senyava yang bo~

luo diketahui komposioicya dengan pasti*

Pada th* 1920 metoda yang paling banyak di-

gunakan adalah ltolin~Wu yaitu metoda yang

zienggunakan pengendap protein asam tungotat


Skripsi



12

dan metoda Somogyi yang menggunakan pengen

dap protein seng hidroksida.

3m Beaks! wsra fosfotungstat*

4. Reaksi warna arcenomolibdat •

Kelson dalam th. 1944 melaporkan pongguna-

an arsenomolibat yang dikombinasikan de-

ngan pereaksi tembaga dari Somogyi yang ke-

mudian disebut metoda Somogyi-Neleon.

Wama dari arsenomolibdat adalah lebih sta

bil dan lebih sensitif dari pada yang di-

bentruk oleh fosfomolibdat*

% BeaJ&si wama neokuproina.

6. Titrasi Iodometri.

4*2« Prinsip yang tergantung pada pembentukan wama -

dengan fenol dan as an sulfat pekat»

Hetoda ini berdasarkan pada pembentukan hidroksi

metil furtural bila glukosa dipanaskan dengan a-

sam kuat* Selanjutnya dilakukan penghitungan se-

cara fotometri dari wama yang dihasilkan pada

kondensasi gugusan aldehid dari hidroksi metil

furfural dengan senyawa fenol.

Senyava fenol yang digunakan adalah :c<naftolf re

eorsinoly dan anthron.

4*3* Prinsip kondensasi aldosa aromatik am in a.


Skripsi



13

Hetoda ini berdasar pada reek si, glukosa dan se*-

nyawa aldooa yeng lain akan terkondensasi dengan

aromatik amin d&lam larutan aaem asetat panas -

menghasilkan suatu glikosilaaina*

Eeaksi ini pertama kali digunakan untuk glukosa

dalam darah yang sudah mengalami deproteinasi t

dengan menggunakan asam para anino salisilat dan

asam asetat glasiol*

Juga dapat digunakan asam para amino bensoat dan

meta amino fenol*

4.4* Prinsip nacam~aacam cara dengan reakai kimia*

Pada metoda ini dllakukan penghitungan secara Jto

tometri dari waraa yang dihasilkan oleh pereaksi

pereaksi kimia yang telah digunakan untuk penen-

tuan glukosa dalam cairan biologis*

4,5* Fringjp enayoatik*

Sidak satupim dari aetoda-metoda yang telah di-

bicarakan diatas mempunyai apesifitas yang mut**

lak untuk glukosa.

Pada metoda ini pertama kali digunakan yeast (ra

gi)f yaitu ditentukan perbedaan sntara gula yang

tereduksi sebelum dan sesudah peragian* Kejelek-

an dari metoda ini ditemukan oleh Hiller pada

th* 192$ yang mengamati bahwa peragian darah nor

mal akan meninggalkan suatu endapan yang akan


Skripsi



14

ttereduksi ferrl sianida dan'tefr*; . Faktor-faktor

lain yang membatasi keepeeifikan metoda ragi ini

adalah t

a. gula-gula lain yang ada dalam darah "normal i'-.

kut 'diragikan.

b* gula-gula fosfat Juga difermentasikan.

Spesifitau yang tinggi didebatkan dengan menggu-*

nakan en*ym yang aural yang bereaksi dengan glu-

kosa tetapi tidak bereaksi dengan hidrat arang -

lain»

Glukosa okaidase ditemukan oleh JSuller dalam th.

1928» yang spesifik untuk glukosa dan perke-

cualian juga bereaksi terhadap 2 desoksi D glu-

kosa yang teroksidasi lebih kurang 12 %f tetapi

gala ini tidak terdapat dalam aerum*

Beakai oksidasi dari glnkosa okeid&ae adalah ae-

bagai berikut :

C H 3.0 H CHtOW

H1.0».


Skripsi



15

Spesifitas yang tinggi dari glukosa oksidase un-

tuk p D glukosa dap at dilihat dari fabel dibawah

ini*

label kecepatan oksidasi oleh glukosa oksidase »

sdsalnya pada pemberian glukosa 100*

Gula Kecepatan oksidasi

B glukosa 100

oC D glukosa 0*64

Galaktosa 0*14

Kaltooa 0f98

B aylosa 0,03

D dan L arabinosa 0

D Fruktosa 0

2 Deoksi D Glukosa 12

Glukosa 1 fosfat 0

Glukosa S fosfat 0

Reakei ini negatif terhadap u B glukosa dan ini -

harus dipertimbangkan karena dal am larutan, glu-

kosa terdapat dalam keseimbangan 36 % dal am ben-

tuk oc. dan 64 % dalam bentuk (& •

Untuk mencapai hasil yang menyeluruh maka semua'

glukosa harus diubah menjadi bentuk ^ •

Penggunaan pertema kali dari metoda ini untuk glu

kosa dal am cairan biologis dilakukan pada penen-

tuan eat-zat pereduksi sebelum dan sesudah reak-


Skripsi



16

si dengan glukosa oksidace*

Penentuan langsung secara f o tome t ri dari glukosa

dapat dilakukan melalui penggunaan suatu eneya

coupled dlmana H2Q2 yang terbentuk dlsenycntakan

melalui peroksidase kepada suatu zat warna pena*

rima 02* Genyawa-senyawa yang digunakan sebagal

penerima 02 adalah t orto dianiedina, orto anisi^

dina, orto toluidina» indofenol, dietilparofeni-

lenediaciina* adrenalin* dan ABTS (diomonium 2f2(

a zino-bis (3 etil bensothiazolina 6-sulfo»at) •

Matoda enssyaatik lain adalah dengan Menggunakan

hexokinaee dan glukosa 6 foafat dehidrogenase un-

tuk nerubah glukosa menjadi 6 fosto glukonat* E^-

aksi yang terjadi adalah sebagai berikut c1 ~ " ' " - " i

iU&OSCL CjJLuiu»s-L .6- P0 4

HAop :

G - ("osfoi I

TtADPH yang terjadi dapat dihitung pada naiknya re-

oopan pada 340 atau 366 n».

ftetoda ezuymatlk lain adalah ensya acyl fosfat ya-

itu D glukosa 6 fosfo transferase.

5* Untuk Hiejabcndin ran metoda Somogyi Releon dengan meto-

da Ena paatik Glukosa Oksidase steka kedua metoda terse*

but perlu ditinjau secara terperinci*


Skripsi



17

5*1* Hetoda SoTO^yl arelffi.ni (4)

5*1*1« Prinsip t

Prinslp Betoda Ini adalah glukosa dala* -

larutan alk ell panas* mereduksi larutan te^ba

Ca jqc nenjadl . Larutan ■fctepi. £ ini de-

ngan pereaksi ere «no sollbdat trembentruk

kompleks yang berwarna blru* Varna yang -

terbentuk dlukur Intensitasnya pada alat

kolorlaeter Klett Sunerson dengan menggu-

nakan filter Mjmu

5.I.2. Reakal klnla t

HC;° C-OK| || CHiOH

U C.oH C -OH

*O.CH 0 -mo.CM ^ _>C^ +HC-OH h c - o h A«oe^fc

HC-OH H '_OH <•»>«)I , * C - © H£«*0* CW*o« H C -OH

IC M *. O

cu + + c°v*)" ---? Cu.CoH )

A. Cv, Con) ___> WaO Cu * °

^ Y*-U|*SO 0 tc4‘-«-

Cm 1.0 H - C ^ O ^ \ O M -- > U)*A*a.

MsO^V|^ A»t


Skripsi



18

5*1*3« lebalkan metoda Somogyi Holson «

a* Wetoda ini andah dikerjakan*

b* Pereakal-pereakai yang dipakai sudah di

dapat*

c* Biayanya morah.

Kahuxukan darl matoda Goaogyi Kelson s

a* Vaktu yang diperlukan untuk mengerjakan

metoda ini agak lama# yaitu knrang !•-

bih eetengah jam*

to* Selain melibatkan gtakoaa acbagai sat

yang dloUldosl, jugt Mlibattai redok-

tor-redwktor lain dalcm serum yang ikut

terokaidaal miaalnya t

vitamin C9 glutation dan cabagalnya*

5*2* Metoda Bmqrmatik Glukoaa Oksidaae s

5*2*1. Prlnaip s (9)

(i X> Gl«ke« dioksidasi oleh «j. gltiko-

M okoldaaa (60S) menjadi asam gltikonat

dan H202* Kemudian H202 yang terjadi direak-

sikan dangan pereaksi varna ABTS (dlamonlum

2,2' asino-bla (3 «t 11 benxoathiazollna-6

culfonat) *

Varna yang terjadi dlnkor intenaltaanya pM

da alat spektrofotometer dengan panjang e

lombang terpilih*


Skripsi



19

Pada n©toda ini aelsin proses tercabut di

ata© disartai dengan proses pengubahan

Kebalkan netoda Ri»yaatik Glukosa Oksidaset

a* Hetoda ini hanya nelibatkon glukosa da*

£a sebagai sat yang dioksidasi, sedeng-

kan raduktor-reduktor lain dales eeru*

tldak ikut bereakai.

b. Vaktu yang diperlukan untuk mengerjakan

metoda ini relatif singkat yaitu hanya

kurang lebih 15 aenit.

Keburukan «otoda JSassyrmtik Glukosa Oksidaset

a* Pereaksi yang digunakan relatif aohal.

b. Perenksi metoda ini berasal dari luar

negeri yang mempunyai tanggal kadaluww

ea relatif aingfcat, dan dari luar nego-

ri pengangkutannya kedalam negeri noa-

butuhkan waktu.

D glukosa aonjadi /3 v glukoca*

5*2.2# Reakfii Klala t

HfcO>_POPtffcO* -V <*s&TS


Skripsi



BAB n

ME30DA KEBJA

!• Penentuan ketolitlan» ketepatan» dan penentu*an kadar

glukoea serum dengan leader leblh rendah dari harga -

noraal, harga normal dan lebih tlnggl dari harga narw

nal dengan metoda SN»

1.1* Priaslp (4)

Prinsip pada metoda S3S Ini adalah t

Olukooa sebagai reduktor (karena dalam ctruktur

molekulnya terdapat gugusan aldehida) mereduksi

larutan -fenh jidalo» suasana alkali panas* Semudi-

an yang telah direduksi ini dengan pereak-

si arsenomolibdat isenbentuk koaplex yang berwar-

na biru. Warn*. biru ini diukur intensitasnya d*»

ngan alat kelorimeter Klett Bummerson dengan fil^

ter hijau*

1-2* Bahan penelitian#

1«2*1. Penentuan ketelitian metoda EB s

Untuk mengetahui ketelitian metoda SS ba-

hen penelitiannya adalah aerum penderita

yang aonorikeakan kadar glukooa darahnya

20;


Skripsi



SI

ke Laboratorium Patologi Klinik R* S. Dr*

Soetono.

Pengambilan darah ini dilakukan oleh pa-

ra medis Laboratorium tersebut pada pagi

hari aetelah penderita puaca selama ce-

puluh o ampai duabeloo jam sebelumnya, di

aabil dari darah vena taiJpa antikoagulan

sia.

Kemudian segera dipisahkan ©rythrocitnya

dan diambil sermanya.

«famlah serum yang diperiksa adalah 30 ha

ah dengan pedoman kadar glukosanya pada

pemeriksaan di Laboratorium tersebut dan

pemeriksaan dilakukan dua kall tiap se-

rum.

Kemudian dibandingkan terhadap metoda G0D.

Penderita yang diambil darahnya adalah

laki-laJci dewasa umur dlatas 20 tahun*

1.2.2, Penentuan ketepatan metoda SH $

Untuk mengetahui ketepatan dari metoda i-

ni digunakan Precilip. Precilip merupakan

serum kontrol y«mg mengandung kadar glu-

kosa tertentu dan mempunyai batas batas

tertentu*

Pemeriksaan terhadap Frecilip ini dilaku-


Skripsi



22

ka» setiap hari dan setiap hari dilakukan

tiga kali pemeriksa&u

Bila rata-rata dari tiga pemeriksaan terse^

but masih masuk di dalam batas batas glu-

kosa Precilip berarti metoda SI? nasih baik*

Kemudian dibandingkan terhadap metoda GO D.

1*2* 3« Penentuan kadar glukosa serum dengan. kadar

lcbih rendah dari harga normal* harga nor-

mal dan leblh tinggi dari harga normal*

Bahan penelitiannya adalah coma untuk ke-

telitian hanya di sini kami ambil harga ra

ta ratanya den digolong-golongfcan masing -

masing sepuluh buah eerum untuk kadar lc-

bih rendah dari harga normal* harga normal*

dan leblh tinggi dari harga normal*

Harga normal untuk metoda 5R adalah 70 -

100 miligram per 100 ml serum (7)«

Kemudian dibandingkan terhadap metoda GOD*

1*3« larutan pereaksi (4)*

1.3.1. X*arutan Barium Hidroksida 0*3

Dibuat dengan cara melarutftan 45 gram Ba

(OH) 3*8 H20 dalaa air ailing ad 1 liter*

1*3*2* Larutan Seng Sulfat 5 %*

Bibuat dengan cara melarutkan 50 gram ZnS04

C ‘V.7H20 dalam alr suling ad 1 liter.


Skripsi



23

1*5*3* Larutan pereaksi Te m b a g a ;

a. Larutan 28 gm Dinatrium Fosfat dan 40

gram Kalium Jlatrium Tortrat dalam 700

xsl air suling.

b* Tambahkan 100 ni l K Hatrium Hidroksida

dan kocoklah oeuspai larut semua*

c* Tambahkan dengan hati-hati dan dengen

pengadukan yang tetap. 80 »1 larutan Ku

pri SulTat 10 %•

d* Setelah r at a tambahkan Katriua Sulfat

anhidrous sebanyak 180 gram dan kocok

serta campurlah «ampai rata dan larut*

e* Kemudian encezkan dengan air suling -

sanpai garis b at as 1 liter* kocok saB-

pai rata.

f* Diamkan selama 4Q am dan saringlah ka-

lau porlu*

1*3*4* liarutan pereaksi Areenomolibdat :

a* Tambahkan 30 gram Jtanonium :Moiibdat ke-

dalam 900 ml air suling dan kocoklah

samp&i larut*

b* Tambahkan dengan hati hati 42 ml A-sam

Su.lfat pekat dengan pengadukan yang t«>

tap.

c* Kemudian ditambahkan 6 gram Dlnatrium


Skripsi



24

Arsenat ymg »engandung 7 air kristal,

yang dllarutkan dalan 50 ml air saling

dan aduklah sampai larut.

d. Keaudiem pindahkan dalam botol bertutup

berwarna coklat dan diaskan dalan inku-

bator pada 3?°C aelaaa 24 sarcpai 46 dan.

1.4. Alat-alat s

- Alat-alat gala#

- kabung Folin Wu de&gan batas 25 al*

- Inkubator dengan teraoaeter.

- Alat pexmaing dsn alat paaanaa.

• Alat kolorinoter Klett SumaerRon.

1*5. Pelaksanaan (4)

a. Dipipet 0,1 Bil serum maeukkan kedalaa tabung

yang telah dliei air suling 1,5 nl, kocok sa»»

pai rata.

b. Teabahkan 0,2 s&l Bariua Hidroksida 0,3 ft.

c* aabahkan 0,2 utl larutan Seng Sulfat 5 %» ko-

cok sampai rata.

d. Setelah 3-5 aenit dipixsingkan dalan alat pau-

sing 3-10 mcnit.

e. Piltrat diambil 1 ml masukkan kcdalan tabung

Folin Vu yang mempunyai batas 25 al.

f• Dalan tabung tersebut kemudian ditambahkan 2

ml larutan pereaksi Tembaga* kocok aaapai rata.


Skripsi



25

g* Sebagal blanko adaleh 2 ml laruten pereaksi -

Ttenbstgst naatd&on kedalc» tabung Polin Wu jrang

mempunyai bataa 25 &X*

h. Blanko dan nompel masukkan berasma-ccrna dalan

air nendidih selama 15 menit*

i» Dinginkon dengan bantu an air dingin.

j* Setelah dingin tambahkan 2 bX larutan pereak-

si Arseno Kdllbdat kocok b ampai ratav kenudi-

an tambahkan olr miling sampoi garis tanda 25

Bl» kocok campai rat«u

k. Diaakan beberapa lana esspal w&rnanya etabil,

nafiukkon kuvat, baca reeaparmjra dengan alat

k©lorim«tor Klott Simerson dengan filter hi-

Jaa*

2. Penentuan ketelitian» ketepatan» dan penentuan kadar»

glukosa cerum dengan kadar leblh rmdah dari harga «»

normal» harga normal» dan leblh tinggl dari harga. nor

nal dengan metoda GOP»

2*1. Prinsip <9)*

Prinoip pada metoda GOD adalah t

D glukosa dlokeidaei dengan «mzyn glukosa ok-

sidase dengan adanya oksigen dan media air mee-

bentuk asan glukonat dan hidrogen peroksida. '

Hidrogen peroksida yang terjadi direaksikan de-

ngan ABTS terjadi waraa biru* reaksi ini dika- ‘


Skripsi



26

taliGix oleh enzym peroksidase* Wama yang tiabul

ditakur intensitasnya pada alat cpektrofotoaeter

dengan menggunakan pan^ang geloabang 560 m«

Pcailihan pan^eng golonbemg ini berdasarkan pada

ketentuan cara kerja pada reagcnsia Kid Tect Con-

bination Glukosa dari Boehringer Kaxmheim dinana

dilaksanakan pada panjang gelombang yang dipilih

ant&ra 560 eampai dengan 620 nm dibuat kurra baka

dari 7 konsentrasi yang pada panjang gelombang «- 560 nm & dianati resapannya. Haail nememahi hokum

Beer dm Lambert, dengan demikian panjang gelom-

b&ng yang dipakai adalah 560 nau

2*2* Bahan penelitian i

Bahan penelitian pada metoda GOD untuk ketelitian,

ketepatan, maupun untuk penentuan kadar glukosa

serua lebih rendah dari harga normal, harga nor-

mal, lebih tinggi dari harga noinal cama dengan

untuk metoda ETf ( dengan catatan satu bahan pene-

' lition untuk kedua taetoda tersebut ) •

Eesmdian basil penelitian dari metoda GOB ini di-*

bandingkan terhadap haail dari aetoda HIT*

2*5» Heagensia i

Eeagensla Seat Combination Glukosa dari Boehringer

Mannhoim yang terdiri dari :Buffer, Eneym dan Chromogen* •


Skripsi



27

- fosfat buffer 100 nil! stolekul / 11 tor, pH 7*0 *

- aicya perofcuidaoe lebih besar atau ©sma dengcn

0,8 U / si*

- Knsym glukosa olcsidase lebih beeas* at&u oanta

dengon 1OT / ail*

- ABTS 1,0 ng / ml*

2*4*Alat-alat I

Al&t-alat gelae

- Inkubctor dengan termonoter /V- Spektrofotoaeter Column Junior II//6/35

2*5* Pelaksanaan c

&• Pipet seapel asruA 0*02 al masukkan kodala*

takung*

tom Sebagal blanko adalah larutan Hatriu» Klorida

0,9 % cebanyak 0*03 ml naotfkftan kedalam ta~

bung*

c* Saupel den blanko oastng-masing dlta&bah reo~

gonoia Teat Combination Glukoea Aorl Boehri-

nger Mannhetn yang dilarutkan dalam larutan

tfatriua Klorlda 0*9 sebanyak 5 ral*

d* Sesudlan aasukkan dalaa inkubator dengan sutou

37°C selama 10 »«nit#

o* Dinglnkan oebentar*

f * Kcttudian dtukur intensitas memonya dengan a


Skripsi



23

lot Spoktrofotosetar Colcaan Junior XX 6/35

dengan panjaag gelonbang $60 rat*

3* gerban&tnftan he oil dari metoda gg dengan metoda COD *

3«1* ffntuk ketelitian t

Hasil reeapon dari aetiap percobaan dor! metoda

SU cuiupun dari metoda GOB dicatat. Koaudian di-

hitung kadaraya dengan dikembalikan ke persamaan

kwva baJcu*

Kurva baku dari metoda SN ciaupun dari aetoda GOD

dibuat dengan cara melarutkan 7 konsentrasi glu-

kosa p.a. kemudian dikerjakan seperti mengerjakan

scrapel den dicatat resapannya*

Kemudian dicari hubungan linier antara kadar dan

resapannya dengan menggunakan ruisug koefficien «•

korelaei (16) i

* * £ (ag) » i. (x) + (y) / H[{£ C*2) - £2<3E) / B }{£ (y2) - ?-2<y) /b }]

S

Jika "r" perhitungan lebih beaar dari V tabel'

oenunjulekan ad&nya korelaei dari titik-titik yang

bersangkutan dan titik-titik ini diperhitungkan

dari persa&aan garis regrosi dengan rusus (16).

y-y * * ( jw )


Skripsi



29

* * 1 (afr) - £ (g?« i (y) M £ C**} - £2 (*) /B

Piaana» a * fcoefficUo arah studs ragreal.

x - kedto glultosfii p.a« dal» aili nai /

100 al*

y • snqid

S * Junlah saapal*

Koawdlan dlbaadln^an baoil aetoda «3J dsn aatoda

GOD daagan run» t

CV * d_*. 100.J** —._x

cv » co6ftiei«s v«isi«D 0tt

3 • rata-rata kessluxuban aaliolh darl

2 parcobasa haail eotiagi «**£>#1 Ca

rl a««»li!©-msia| 5 aatoda.

x * rc.t*-#afca ke selamban kadar da*l 3

parcobasn aatiap saapal dari analog

asaoins ««toda.

Sirt aatoda 9 dihitung dongas paraaaastn taroabut,

fluga darl aatoda 0 0 S dihitung dangan peraaaaan t«

oobut.

Kemu&lan baoil darl ksfiua aatoda taroobut dibanding

leant dioana catoda 7 1 0 9 aoabarikan harga 07 yang -


Skripsi



lebih kecii menceraiakan ketelitian yang lebih

besar*

Untuk katgpatan t

Sairi tiga $«11 percobaan untuk masing»msing »e-

toda yang dikerjakan setiap hari dicatat resapan

nyaf dikesbalikan ke persamaan kurva baku* di«o»»

bil harga rata-ratanya, bila a&eih aaouk dldalaa

batas-batas kadar glukosa Precilip maka netoda

tersebut masih balk*

Kemudian dibandingkan heail dari metoda SH de-

ngan hasil dari aetoda GOD dengan rumus t

m * d x 100

X

CV * cooffialen variance

3 m rata-rata keseluruhan seliolh dari

pexfeedaen hasil percobaan untuk m&»

sing-meelng metoda dengan kadar Pre

cilip yang sebenarnya*

m m kadar glukosa Pracillp yang sebenar

nya*

Dari metoda SR dihitung dengan persamaan tersebut,

juga dari metoda GOD dihitung dengan peraamaan -

tersebut*

Ecnudian hasll dari kedua netoda tersebut diban-


Skripsi



31

dlngfcon, dimana metoda yang aemberlkast harga CV

ymg l«bih ©encoraiftkon ketep&tan yang lebih b**

ssr*

3*3* ntuk yenonfruan glukosa corum d»ngon kadar lebih

rendah darl harga aormal» harga normal» dan lebih

tlnggl dari hargg normal»

IUtoil kadar rata-rata darl metoda &R dan metoda

GO© darl eaffiptl untuk ketelitian digolongrg&long*

kan maclng~ma®lng 10 derum untuk kadar glukosa Iji

bih r®ndoh darl harga normals normal* dan lebih

tlsggl darl harga normal*

&enmdiefl kadua motoda yang teleh digolong-golong-

kan dibandingfecn dengaa patred ftf toot ot aigii-

ficancy dangem ruciuo £ (14)

d * rata-rata porbedaan haeil sampel untuk

ko&txa metoda»

n * tamlah sanpel

6 * £d2 - <£d)2 /a

a - I2

£ d * jumlah kwadrat perbedaan hasil aampel dfr

rl kedua aetoda tersebut»


Skripsi



32

( £ d) * kwadrat dari auralah perbedaan h&sil cam

pel kedua metoda tersebut*

n * Jumlah oampa1.

Bila 't* percobaan lebih besar dari *tf tabel ber

arti kedua raetoda tereebut nenpunyai perbedaan

yang bermakna*

Bila 't* percobaan lebih kectl 't1 tabel berarti

kedua aetoda tersebut tak mempunyai perbedaan ~

yang bexmekna,

4* Bahan-bahan yang digunakan untuk pelaksanaan kedua »e*

toda tersebut»

- Beagensia ?est Combination Glukosa dari Boehringer

Hannheim*

Vo Batch * s 64717500

Tanggai kadaluwarsa t 1 Karet 1979

* Hatriu® klorida, pro analisa ( B* Merck» Paraatadt)

** Glukosa, pro analisa (B* Merck, Darmstadt )

- Sang Sulfat (heptahidrat), pro analisa (£• Herckf

Darmatedt)

- Kalium Natrium lartrat ( tetrahidrat), pro analisa

(£*Werck, Parnstadt)

- Barium hidroksida ( oktahidrat ) v pro analisa ( 8»

Merck, Dorastedt )

- Hatrium sulfat (anhidroue )t pro analisa (E.Kerek ,

Boxmatadt).


Skripsi



Hatriuia Hidroksida, pro analisa ( TJ*C*B )

Kuprl Bulfat ( pentahidrat ), pro cnalisa ( E#Mercfc,

Danantadt )♦

Anmonivm Moiybd&t*

Aoan &ulfat pek&t, pro an alien ( £.n*rck, Dorootadt )

Binatrlw Eoofat, pro analisa ( E* Merck, Darmstadt) •

Biaatrium Arsanat (heptahidrat), pro analisa (E*Merck

Baraatadt )•

Natrium Flourida, pro analisa (E.Herck, Barastadt )•

Prfteilip dari Boehzdnger Maimhoim*


Skripsi



ADLN - Airlangga Digital Library Network ADL - Airlangga ...

Documents

Transcript of ADLN - Airlangga Digital Library Network ADL - Airlangga ...