3. pembuatan biakan murni

8/12/2019 3. pembuatan biakan murni

1/17

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Populasi mikroba di alam sekitar kita sangat besar dan sangat kompleks. Beratus-ratus

spesies berbagai mikroba biasanya menghuni bermacam-macam bagian tubuh kita,

termasuk mulut, saluran pencernaan dan kulit. Sebagai contoh, sekali bersin dapat

menyebarkan beribu-ribu mikroorganisme. Alam sekitar kita, udara, tanah dan air juga

dihuni kumpulan mikroorganisme. Penelitian yang layak mengenai mikroorganisme

dalam berbagai habitat ini memerlukan teknik untuk memisahkan populasi campuran

yang rumit atau biakan campuran, menjadi spesies-spesies yang berbeda-beda sebagai

biakan murni. Biakan murni terdiri dari suatu populasi sel yang semuanya berasal dari

satu sel induk (Pelczar, 1986)

Di alam, populasi mikroba merupakan populasi campuran dari berbagai

mikroorganisme atau disebut juga biakan campuran. Teknik biakan murni digunakan

untuk memisahkan berbagai macam bakteri tersebut. Untuk dapat memperoleh biakan

murni digunakan beberapa teknik biakan yaitu metode cawan tuang, metode cawan

sebar, dan metode cawan gores (Dwidjoseputro, 1994).

Dalam keadaan sebenarnya (di alam bebas) boleh dikatakan tidak ada bakteri yang

hidup tersendiri dan terlepas dari spesies lainnya. Sering kali bakteri patogen kedapatanbersama-sama bakteri saprobe. Yang terakhir ini boleh disebut penyerbu yang

membawa (secondary invaders). Mungkin juga bakteri patogen yang membawa

(Dwidjoseputro, 1994).

Oleh karena itu dilakukan praktikum pembuatan biakan murni untuk dapat menambah

keterampilan dan pengetahuan mengenai cara dan teknik pembuatan biakan murni,

dengan menggunakan metode cawan gores (streak plate) serta mengetahui prinsip dan

manfaat dari biakan murni tersebut.


2/17

1.2 Tujuan

a. Untuk mengetahui prinsip praktikum biakan murni.b. Untuk mengetahui prinsip metode cawan gores.c. Untuk mengetahui manfaat biakan murni.


3/17

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

Untuk menelaah bakteri di laboratorium kita harus menumbuhkan mereka dalam biakan

murni. Biakan murni adalah biakan yang sel-selnya berasal dari pembelahan satu sel

tunggal. Media agar merupakan substrat yang sangat baik untuk memisahkan campuran

mikroorganisme sehingga masing-masing jenisnya menjadi terpisah-pisah. Teknik yang

digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme pada media agar memungkinkannya

tumbuh dengan agak berjauhan dari sesamanya, juga memungkinkan setiap selnya

berhimpun membentuk koloni. Semua sel dalam koloni itu sama, dianggap semuanya

itu merupakan keturunan (progeni) satu mikroorganisme dan karena itu mewakili apa

yang disebut mikrobiologi biakan murni (Pelczar, 1986).

Populasi mikroba di alam sekitar kita sangat besar dan kompleks. Beratus-ratus spesies

mikroba biasanya menghuni bermacam-macam bagian tubuh kita, termasuk mulut,

saluran pencernaan dan kulit. Mereka terdapat dalam jumlah yang sangat banyak.

Sebagai contoh, sekali bersin dapat menyebarkan beribu-ribu mikroorganisme. Satu

gram feses dapat mengandung jutaan bakteri. Alam sekitar kita, udara, tanah dan air

juga dihuni kumpulan mikroorganisme. Penelitian mengenai mikroorganisme dalam

berbagai habitat memerlukan teknik untuk memisahkan populasi campuran yang rumit

atau biakan campuran, menjadi spesies-spesies yang berbeda-beda sebagai biakan

murni. Biakan murni terdiri dari suatu populasi sel yang semuanya berasal dari satu sel

induk (Pelczar, 1986).

Mikroorganisme dibiakkan di laboratorium pada bahan nutrientyang disebut medium.

Banyak sekali medium yang tersedia macamnya yang dipakai tergantung pada banyak

faktor, salah satu diantaranya ialah macam mikroorganisme yang akan ditumbuhkan

(Pelczar, 1986).

Andaikan kita ingin mengisolasi biakan murni bakteri dari mulut kita. Maka liur itu

diinokulasikan sedikit saja pada media yang cocok sehingga sel-sel mikroba tumbuh


4/17


5/17

3. Teknik Dilusi (Pengenceran)Tujuan dari teknik ini adalah melarutkan atau melepaskan mikroba dari substratnya

kedalam air, sehingga lebih mudah penanganannya. Sampel yang telah diambil

kemudian disuspensikan dalam akuades steril. Teknil dilusi sangat penting dalam

analisa mikrobiologi. Karena hampir semua metode penelitian dari penghitungan

jumlah sel mikroba menggunakan teknik ini, seperti: TPC (Total Plate Counter)

(Darmadi, 2008).

Ada beberapa tahap yang harus dilakukan sebelum melakukan teknik penanaman

bakteri (inokulasi), yaitu:a. Menyiapkan Ruangan

Ruang tempat penanaman bakteri harus bersih dan keadaannya harus steril agar

tidak terjadi kesalahan dalam pengamatan atau percobaan.

b. Pemindahan Dengan PipetCara ini dilakukan dalam penyelidikan air minum atau untuk penyelidikan diambil 1

ml. Contoh yang akan diencerkan oleh air sebanyak 99 ml murni.

c. Pemindahan Dengan Kawat InokulasiUjung kawat ini sebaiknya dari platina atau nikel. Dalam melakukan penanaman

bakteri kawat ini terlebih dahulu dipijarkan sedangkan sisinya, tungkai cukup

dilewatkan api saja setelah dingin kembali kawat tersebut disentuhkan lagi dalam

api (Pelczar, 1986).

Beberapa Indikasi pembiakan bakteri pada laboratorium mikrobiologi meliputi

1. Pengasingan (isolasi) mikroba pada biakan bakteri.2. Menunjukkan sifat khas mikroba.3. Untuk menentukan jenis mikroba yang diisolasi dengan cara-cara tertentu.4. Untuk mendapatkan bahan bakteri yang cukup untuk membuat antigen dan

percobaan serologi lainnya.

5. Menentukan kepekaan kuman terhadap antibiotik.6. Menghitung jumlah kuman.


6/17


7/17

bersama-sama bakteri saprobe. Yang terakhir ini boleh disebut penyerbu yang

membawa (secondary invaders). Mungkin juga bakteri patogen yang membawa. Untuk

menentukan siapa pembawa dan siapa yang dibawa diberikan pedoman. Untuk

menyendirikan suatu spesies ada dikenal dengan beberapa cara yaitu:

a. Dengan pengenceranCara ini pertama-tama dilakukan oleh Lister dalam tahun 1865. Ia berhasil

memelihara biakan murni Streptococcus lactisyang diisolasikannya dari susu yang

sudah masam. Suatu sampel dari suatu suspensi yang berupa campuran bermacam-

macam spesies diencerkan dalam suatu tabung tersendiri. Dari enceran ini kemudian

diambil barang 1 ml untuk diencerkan lagi. Kalau perlu, dari enceran yang kedua inidiambil 1 ml untuk diencerkan lebih lanjut. Jika dari pengenceran yang ketiga ini

diambil 0,1 ml untuk disebarkan pada suatu medium padat, kemungkinan besar kira

akan mendapatkan beberapa koloni tumbuh dalam medium tersebut, tetapi mungkin

juga kita hanya memperoleh satu koloni saja. Dalam hal yang demikian ini kita

memperoleh satu koloni murni, dan selanjutnya spesies ini dapat kita jadikan biakan

murni. Kalau kita belum yakin, bahwa koloni tunggal yang kita peroleh itu murni,

kita dapat mengulang pengenceran dengan menggunakan koloni ini sebagai sampel.

b. Dengan penuanganRobert Koch (1843 - 1905) mempunyai metode yang lain, yaitu dengan mengambil

sedikit sampel campuran bakteri yang sudah diencerkan dan sampel ini kemudian

disebarkan di dalam suatu medium dari kaldu dan gelatin encer. Dengan demikian

diperoleh suatu biakan murni. Setelah medium itu mengental, maka selang beberapa

jam kemudian tampaklah koloni-koloni yang masing-masing dapat dianggap murni.

Dengan mengulang pekerjaan seperti diatas ini, maka akhirnya akan diperoleh

biakan murni yang lebih terjamin.

c. Dengan penggesekanMetode ini sekarang banyak digunakan, karena tidak begitu memakan waktu, hanya

dengan ini maka bakteri anaerob tidak dapat tumbuh. Jika ujung kawat inokulasi

dibengkokkan, kemudian ujung itu setelah disentuhkan ke padat, maka beberapa

waktu kemudian daripada itu (kurang lebih setelah 12 jam) akan tampaklah koloni-


8/17

koloni yang letaknya tersebar di permukaan medium, jika diadakan pemindahan

sampel dari suatu koloni yang letaknya terpencil, maka akan diperoleh suatu biakan

murni.

d. Dengan mengucilkan satu sel (single cell isolation)Jika kita mempunyai alat yang dapat menyangkut suatu bakteri dari sekian banyak,

dengan tidak ada bakteri lain yang ikut. Alat semacam itu ada, meskipun cara

menggunakannya tidak gampang. Alat itu berupa mikropipet yang ditempatkan pada

tangan-tangan suatu micromanipulator. Dengan mikropipet dibuat beberapa tetesan

bergantung pada suatu kaca penutup. Jika tampak suatu tetesan hanya mengandungsatu bakteri, maka dengan lain mikropipet tetesan tersebut dipindahkan ke suatu

medium encer dengan maksud supaya bakteri tersebut berkembangbiak dulu.

Kemudian dari sini dapat diperoleh biakan murni. Metode ini sangat memerlukan

kesabaran, lagi pula, micromanipulatoritu sangat mahal.

e. Dengan inokulasi hewanMetode ini didasarkan atas suatu kenyataan, bahwa tidak semua bakteri dapat

tumbuh di dalam tubuh seekor hewan. Misal kita ambil dahak dari seseorang yang

disangka menderita TBC. Jika dahak ini disuntikkan ke dalam tubuh tikus putih,

maka bakteri-bakteri saprobe yang ikut serta itu tidak akan bertahan, sehingga

kemudian kita peroleh semata-mata basil TBC saja. Biakan Pneumococcus murni

dapat diperoleh dengan jalan demikian juga. Bakteri yang ketinggalan dalam tubuh

tikus yang sakit atau mati itu akhirnya dapat dipindahkan ke dalam medium yang

sesuai. Inokulasi yang dapat dilakukan di dalam kulit (intracutaneous), dapat di

bawah kulit (subcutaneous), dapat di dalam otot (intrainuscular), dapat di dalam

rongga tubuh atau lain-lain tempat lagi (Dwidjoseputro, 1994).


9/17

BAB III

METODOLOGI PRAKTIKUM

3.1 Waktu dan Tempat

Praktikum biologi dan mikrobiologi berjudul media pertumbuhan mikroba dilaksanakan

pada hari Rabu, tanggal 7 November 2012 pada pukul 15.00 - 16.30 WITA dan

pengamatan dilakukan pada hari Jumat, tanggal 9November 2012 pada pukul 15.00 -

16.00 WITA di Laboratorium Rekayasa Lingkungan Fakultas Teknik Universitas

Mulawarman Samarinda.

3.2 Alat dan Bahan

3.2.1 Alat-Alat

1. Tabung reaksi2. Lampu bunsen3. Cawan petri4. Jarum ose5. Inkubator6. Korek api7. Rak tabung reaksi8. Labu erlenmeyer9. Oven10.Batang pengaduk11.Alat tulis12.Serbet

3.2.2 Bahan-Bahan

1. NA (Nutrient Agar)2.

PDA (Potato Dextrose Agar)

3. Bakteri


10/17

4. Alkohol 70%5. Aquadest6. Kertas label7. Sabun8. Alumunium foil9. Tissue

3.3 Cara Kerja

3.3.1 Metode Cawan Gores Pada Cawan Petri1. Dibakar jarum ose hingga berpijar.2. Dibakar terlebih dahulu cawan petri sebelum dibuka.3. Diambil bakteri dari cawan petri menggunakan ujung jarum ose.4. Sebelum cawan petri yang berisi media NA dibuka, cawan petri harus dibakar

terlebih dahulu.

5. Digoreskan perlahan di cawan petri sesuai dengan urutan penggoresan yang diawalidenganfirst streak.

6. First streak, menggunakan jarum ose digoreskan pada media NA di cawan petridengan goresan pertama digores secara rapat.

7. Second streak, menggunakan jarum ose digoreskan pada media NA di cawan petridengan goresan kedua digores agak jarang.

8. Third streak, menggunakan jarum ose digoreskan pada media NA di cawan petridengan goresan ketiga digores jarang.

9. Ketiga jenis goresan dilakukan secara tidak terputus dan selalu menyambung darigoresan pertama hingga goresan ketiga.

10.Diinkubasi cawan petri yang telah digores pada suhu 370C selama 24 jam.11.Diamati pertumbuhan koloninya.

3.3.2 Metode Cawan Gores Pada Tabung Reaksi (Media PDA Miring)

1. Jarum ose disterilkan dengan menggunakan lampu Bunsen.2. Dibakar terlebih dahulu cawan petri sebelum dibuka.3. Diambil bakteri dari cawan petri menggunakan ujung jarum ose.


11/17

4. Sebelum tabung reaksi yang berisi media PDA dibuka, tabung reaksi harus dibakarterlebih dahulu.

5. Jarum ose yang telah terdapat bakteri digoreskan pada media PDA miring padatabung reaksi.

6. Mulut tabung reaksi ditutup menggunakan alumuniunfoil.7. Diinkubasi tabung reaksi yang telah digores pada suhu 370C selama 48 jam.8. Diamati pertumbuhan koloninya.


12/17

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Pengamatan

Tabel Pengamatan Biakan Murni

No. Gambar Keterangan

1

Media NA1. Streak

2. Kontaminan

3. Media Rusak

2Media PDA

1. Kontaminan

4.2 Pembahasan

Pada percobaan pertama yaitu metode cawan gores pada cawan petri. Pertama dibakar

jarum ose hingga berpijar. Sebelum mengambil bakteri di cawan, cawannya dibakar

dahulu di dekat lampu Bunsen. Kemudian diambil bakteri dari cawan petri

menggunakan ujung jarum ose. Sebelum cawan petri yang berisi media NA dibuka,

cawan petri harus dibakar terlebih dahulu. Setelah itu digoreskan perlahan di cawan

petri sesuai dengan urutan penggoresan yang diawali dengan first streak. First streak,menggunakan jarum ose digoreskan pada media NA di cawan petri dengan goresan


13/17

pertama digores secara rapat,second streak, dengan goresan kedua digores agak jarang,

lalu third streak, goresan ketiga digores jarang. Dari ketiga jenis goresan ini dilakukan

secara tidak terputus dan selalu menyambung dari goresan pertama hingga goresan

ketiga. Kemudia diinkubasi cawan petri yang telah digores pada suhu 370C selama 24

jam. Setelah diamati pertumbuhan koloninya, goresan yang dilakukan kurang terlihat,

dan hanya terdapat kontaminan serta media yang rusak.

Pada percobaan yang kedua yaitu metode cawan gores pada tabung reaksi (media PDA

miring). Hal yang pertama dilakukan sama seperti pada percobaan yang pertama, yaitu

jarum ose disterilkan dengan menggunakan lampu bunsen hingga berpijar. Lalu dibakarterlebih dahulu cawan petri sebelum dibuka. Kemudia diambil bakteri dari cawan petri

menggunakan ujung jarum ose. Sebelum tabung reaksi yang berisi media PDA dibuka,

tabung reaksi harus dibakar terlebih dahulu. Lalu jarum ose yang telah terdapat bakteri

digoreskan pada media PDA miring pada tabung reaksi. Setelah itu mulut tabung reaksi

ditutup menggunakan alumuniun foil. Diinkubasi tabung reaksi yang telah digores pada

suhu 370C selama 48 jam. Setelah diamati, hasilnya hanya terdapat kontaminan.

Laminar air flow cabinetadalah suatu alat yang digunakan dalam pekerjaan persiapan

bahan tanaman, penanaman, dan pemindahan tanaman dari satu botol ke botol yang lain

dalam kultur in vitro. Alat ini diberi nama Laminar Air Flow Cabinet, karena

meniupkan udara steril secara kontinu melewati tempat kerja sehingga tempat kerja

bebas dari debu dan spora-spora yang mungkin jatuh kedalam media, waktu

pelaksanaan penanaman. Aliran udara berasal dari udara ruangan yang ditarik ke dalam

alat melalui filter pertama (pre-filter), yang kemudian ditiupkan keluar melalui filter

yang sangat halus yang disebut HEPA (High Efficiency Particulate Air), dengan

menggunakan blower.

Terdapat beberapa faktor kesalahan yang terjadi dalam praktikum, yaitu pada saat akan

menggoreskan jarum ose ke media, yang seharusnya jarum ose didiamkan sesaat setelah

dipanaskan agar goresan yang dilakukan terlihat atau mendapatkan hasil yang

diinginkan dan pada saat menggoreskan jarum ose ke media yang kurang benar dan

kurangnya ketelitian sehingga tidak mendapatkan hasil yang diinginkan.


14/17

Dalam praktikum yang dilakukan menggunakan metode cawan gores (streak plate)

metode ini sulit digunakan karena proses penggoresan yang cukup lama dan sulit,

sehingga memudahkan terjadinya kontaminasi dan kegagalan. Prinsip metode ini yaitu

mendapatkan koloni yang benar-benar terpisah dari koloni yang lain, sehingga

mempermudah proses isolasi.

Biakan murni adalah biakan yang sel-selnya berasal dari pembelahan satu sel tunggal.

Prinsip dari biakan murni yaitu biakan murni sangat diperlukan untuk mempelajari

mikroorganisme di dalam laboratorium. Biakan murni dapat diperoleh melalui tiga cara

yaitu, metode cawan sebar (spread plate), metode cawan tuang (pour plate) dan metodecawan gores (streak plate). Proses pemisahan atau pemurnian dari mikroorganisme lain

perlu dilakukan karena semua pekerjaan mikrobiologis, misalnya telaah dan identifikasi

mikroorganisme, memerlukan suatu populasi yang hanya terdiri dari satu macam

mikroorganisme saja. Teknik tersebut juga dikenal dengan isolasi mikroba.


15/17

BAB V

PENUTUP

5.1 Kesimpulan

a. Prinsip dari biakan murni yaitu biakan murni sangat diperlukan untuk mempelajarimikroorganisme di dalam laboratorium. Biakan murni dapat diperoleh melalui tiga

cara yaitu, metode cawan sebar (spread plate), metode cawan tuang (pour plate) dan

metode cawan gores (streak plate).

b. Prinsip metode cawan gores (streak plate) yaitu mendapatkan koloni yang benar-benar terpisah dari koloni yang lain, sehingga mempermudah proses isolasi.

c. Manfaat dari biakan murni yaitu mendapatkan 1 jenis spesies dan mempelajarimorfologi, fisiologi, biokimia, genetika, atau kegiatan apapun dari mikroba yang

hanya dapat dilakukan apabila kita telah mempunyai isolasi murni atau biakan

murni.

5.2 Saran

a. Diharapakan untuk praktikum selanjutnya menggunakan metode selain metodecawan gores, yaitu metode cawan sebar dan metode cawan tuang agar dapat

mengetahui perbedaan antara metode yang satu dengan metode yang lain.

b. Diharapkan untuk praktikum selanjutnya menggunakan media lain selain NA danPDA yaitu telur agar terdapat perbedaan pertumbuhan biakan murni.


16/17

DAFTAR PUSTAKA

1. Anonymous. 2010. Jenis-Jenis Pemindahan Mikroba. http://www.scrib.com.Diakses tanggal 8 November 2012. Pukul 19.20.

2. Darmadi. 2008.Infeksi Nosokomial. Salemba Medika: Jakarta.3. Dwidjoseputro, D. 2009.Dasar-Dasar Mikrobiologi. Djambatan: Jakarta.

4.

Pelczar, Michael J, dan Chan. 1986. Dasar-Dasar Mikrobiologi. UniversitasIndonesia Press: Jakarta.
http://www.scrib.com/http://www.scrib.com/


17/17

3. pembuatan biakan murni

Documents

Transcript of 3. pembuatan biakan murni