Post on 28-Aug-2021
USULAN PENELITIAN DOSEN
EFEK DIURESIS EKSTRAK ETANOL AKAR KEMANGI HUTAN
(Ocimum sanctum, Linn) PADA TIKUS PUTIH JANTAN
Oleh:
Apt. Yohana Krisostoma Anduk Mbulang, S.Farm., M.Farm
0813099201
UNIVERSITAS CITRA BANGSA
KUPANG
September 2020
HALAMAN PERSETUJUAN
Nama penelitian: Efek Diuresis Ekstrak Etanol Akar Kemangi Hutan (Ocimum
Sanctum, Linn) Pada Tikus Putih Jantan
Peneliti
a. Nama : apt. Yohana Krisostoma Anduk Mbulang,
S.Farm., M.Farm
b. NIDN : 0813099201
c. Jabatan Fungsional :-
d. Program Studi : Sarjana Farmasi
e. Nomor HP : 081236220863
f. Alamat Surel (email) : ayepa92@gmail.com
Bersama ini, kami menyatakan bahwa usulan penelitian ini asli dan layak untuk
diajukan dan kami menjamin terlaksananya penelitian ini.
Kupang, 07 September 2020
Menyetujui,
Ketua LPM Universitas Citra Bangsa Kepala Bidang P2M
Dr. Drs. Abdul Majid, M.Kes Vinsensius B. Lemaking, S.KM., M.Kes
Mengetahui,
Rektor Universitas Citra Bangsa
(Prof. Dr. Frans Salesman, SE., M.Kes)
HALAMAN PENGESAHAN
EFEK DIURESIS EKSTRAK ETANOL AKAR KEMANGI HUTAN (Ocimum
sanctum, LINN) PADA TIKUS PUTIH JANTAN
apt. Yohana Krisostoma Anduk Mbulang, S.Farm., M.Farm
Telah diujikan dan dipertanggung jawabkan didepan tim pakar/reviewer pada
Hari:
Mengesahkan,
Ketua LPM Universitas Citra Bangsa Kepala Bidang P2M
Dr. Drs. Abdul Majid, M.Kes Vinsensius B. Lemaking, S.KM., M.Kes
Mengetahui,
Rektor Universitas Citra Bangsa
(Prof. Dr. Frans Salesman, SE., M.Kes)
IDENTITAS DAN URAIAN UMUM
1. Judul penelitian : Efek Diuresis Ekstrak Etanol Akar Kemangi Hutan
(Ocimum Sanctum, Linn) Pada Tikus Putih Jantan
2. Tim Peneliti :
No Nama Jabatan Bidang Keahlian
1 apt. Yohana Krisostoma Anduk
Mbulang, S.Farm., M.Farm
Ketua Farmasi Sains minat
Bahan Alam
2 - - -
3. Objek Penelitian : Penelitian ini dilakukan untuk melihat efek diuresis
ekstrak etanol akar kemangi hutan (Ocimum Sanctum, Linn) Pada Tikus Putih
Jantan
4. Masa Pelaksanaan :
Mulai : September 2020
Berakhir : Februari 2020
5. Usulan Biaya Penelitian: Rp. 10.375.000,-
6. Lokasi Penelitian : Laboratorium Universitas Citra Bangsa
7. Instansi lain yang terlibat: Fakultas pertanian Agroteknologi Universitas Nusa
Cendana , Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Nusa Cendana &
Laboratorium kimia Universitas Widya Mandira Kupang
PERNYATAAN ORISINALITAS
Yang bertanda tangan dibawah ini:
Nama : apt. Yohana Krisostoma Anduk Mbulang, S.Farm., M.Farm
NIDN : 0819118802
Alamat : Perumahan Puri Cendana, TDM II
Dengan ini menyatakan:
1. Karya ini adalah asli dan belum pernah diajukan dalam penelitian manapun.
2. Karya ini adalah murni gagasan, rumusan dan penelitian sendiri.
3. Karya ini tidak terdapat karya atau pendapat yang telah ditulis atau
dipublikasikan orang lain, kecuali secara tertulis jelas dicantumkan sebagai
acuan dalam naskah dengan disebutkan nama pengarang dan judul buku asli
serta dicantumkan dalam daftar pustaka.
4. Pernyataan ini dibuat dengan sesunggunya dan tanpa paksaan dari pihak
manapun.
5. Apabila dikemudian hari terdapat penyimpangan dan ketidaksesuaian dalam
pernyataan ini maka bersedia mengembalikan dana yang telah diberikan dan
sanksi lain yang telah disepakati.
Kupang, September 2020
Peneliti
apt. Yohana Krisostoma Anduk Mbulang, S.Farm., M.Farm
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ........................................................................................ i
HALAMAN PERSETUJUAN ......................................................................... ii
HALAMAN PENGESAHAN .......................................................................... iii
IDENTITAS DAN URAIAN UMUM ............................................................ iv
HALAMAN PERNYATAAN ......................................................................... v
KATA PENGANTAR ..................................................................................... vi
DAFTAR ISI .................................................................................................... vii
DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... ix
DAFTAR TABEL ............................................................................................ x
DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... xi
BAB I PENDAHULUAN ............................................................................. 1
1.1. Latar Belakang .......................................................................... 1
1.2. Perumusan Masalah ................................................................... 9
1.3. Tujuan Penelitian ....................................................................... 9
1.4. Manfaat Penelitian ..................................................................... 9
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ..................................................................... 10
2.1. Tanaman kemangi ........................................................................ . 10
2.1.1. Konsep kemangi hutan ...................................................... 10
2.1.2. Klasifikasi tanaman kemangi hutan .................................. 10
2.1.3. Penamaan Tanaman Kemangi hutan ................................. 11
2.1.4. Morfologi tanaman kemangi ............................................. 11
2.1.5. komponen kimia ............................................................... 14
2.1.6. Manfaat ............................................................................. 15
2.2. Senyawa metabolit sekunder ........................................................ 15
2.2.1. Alkaloid .......................................................................... 15
2.2.2. Flavonoid ......................................................................... 20
2.2.3.Saponin .............................................................................. 23
2.2.4. Tanin ................................................................................. 25
2.2.5. Triterpenoid dan Steroid ................................................... 28
2.3. Metode Ekstraksi Simplisia ........................................................... 33
2.4.1. Simplisia ........................................................................... 33
2.4.2. Ekstraksi ............................................................................ 33
2.4.3. Maserasi ............................................................................ 37
2.4.4. Pelarut ............................................................................... 37
2.5. Analisis Komponen Senyawa Kimia ............................................. 38
2.5.1. Kromatografi Lapis Tipis.................................................. 38
2.6. Diuretik .......................................................................................... 44
2.6.1. Pengertian Diuretik ........................................................... 44
2.6.2. Proses Terjadinya Diuresis ............................................... 44
2.6.3. Mekanisme Kerja Diuretik ................................................ 45
2.6.4. penggolongan Diuretik ..................................................... 46
2.6.5. Furosemid ......................................................................... 48
2.7. Hewan Uji ..................................................................................... 49
2.7.1. Morfologi Hewan Uji ........................................................ 49
2.8. Kerangka Konsep .......................................................................... 51
2.9. Hipotesis ........................................................................................ 52
BAB III. METODE PENELITIAN.................................................................. 53
3.1. Desain dan Rancangan Penelitian .............................................. 53
3.2. Populasi dan Sampel .................................................................. 53
3.2.1.Populasi .............................................................................. 53
3.2.2. Sampel .............................................................................. 53
3.2.3. Sampling ........................................................................... 54
3.3. Variabel Penelitian ...................................................................... 54
3.4 Definisi Operasional Variabel ................................................. 54
3.5. Alat, Bahan dan Hewan Uji ...................................................... 54
3.5.1. Alat .................................................................................... 54
3.5.2. Bahan ................................................................................. 55
3.5.3. Hewan Uji .......................................................................... 55
3.6. Jalannya Penelitian..................................................................... 55
3.6.1. Pengambilan Sampel ........................................................ 55
3.7. Uji Efek diuresis ......................................................................... 60
3.7.1.Pembuatan Larutan ............................................................ 60
3.7.2. Penentuan dosis Furosemid .............................................. 60
3.7.3. Penentuan dosis akar Kemangi ......................................... 60
3.7.4. perlakuan Hewan uji ......................................................... 60
3.8. Analisa Statistik ........................................................................ 61
BAB IV. BIAYA DAN JADWAL PENELITIAN .......................................... 63
A. Anggaran Biaya .......................................................................... 63
B. Jadwal Penelitian ........................................................................ 63
DAFTAR PUSTAKA…. ................................................................................. 64
LAMPIRAN ..................................................................................................... 68
DAFTAR TABEL
Nomor Judul Halaman
Tabel 2.1. Nama Kemangi Hutan Dari Beberapa Negara ............................... 68
Tabel 2.2. Nama Kemangi Hutan Dari Beberapa Daerah ...............................
DAFTAR GAMBAR
Nomor Judul Halaman
Gambar 2.1. Daun Kemangi Hutan .................................................................. 68
Gambar 2.2. Batang Kemangi Hutan ...............................................................
Gambar 2.3. Bunga Kemangi Hutan ................................................................
Gambar 2.4. Buah Kemangi Hutan ..................................................................
Gambar 2.5. Akar Kemangi Hutan ..................................................................
Gambar 2.6. Komponen Kimia Kemangi Hutan ..............................................
Gambar 2.7. Struktur Beberapa Senyawa Alkaloid .........................................
Gambar 2.8. Struktur Beberapa Jenis Senyawa Flavanoid ..............................
Gambar 2.9. Struktur Dasar Senyawa Saponin Steroid dan Triterpenoid........
Gambar 2.10. Reaksi Senyawa Saponin dan Air .............................................
Gambar 2.11. Struktur Senyawa Tanin Terhidrolisis dan
Tanin Terkondensasi .................................................................
Gambar 2.12. Reaksi Senyawa Tanin dan Gelatin ...........................................
Gambar 2.13. Struktur Senyawa Steroid dan Triterpenoid ..............................
Gambar 2.14. Reaksi Lieberman Burchard ......................................................
Gambar 2.15. Struktur Molekul Etanol ............................................................
Gambar 2.16. Struktur Kimia KLT ..................................................................
DAFTAR LAMPIRAN
Nomor Judul Halaman
Lampiran 1. Perhitungan Dosis Furosemid dan Volume Pemberiannya
Pada Tikus ................................................................................... 68
Lampiran 2. Perhitungan Variasi Dosis Ekstrak Akar Kemangi Hutan
Dan Volume Pemberian Pada Tikus ...........................................
BAB 1
PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang
Masalah kesehatan yang terjadi pada kalangan masyarakat yang cukup
dominan diberbagai negara adalah semakin banyaknya penderita tekanan
darah tinggi atau hipertensi, khususnya pada penduduk yang tinggal di kota-
kota besar. Hal ini disebabkan karena masyarakat cenderung memilih gaya
hidup yang tidak sehat, seperti mengonsumsi makanan cepat saji, alkohol
dan merokok. Hipertensi sering disebut sebagai the silent deseases karena
tidak menimbulkan tanda dan gejala(Dalimartha et al., 2008).
Hipertensi adalah faktor risiko tersering penyebab infark miokard, stroke,
gagal jantung, fibrilasi arteri, diseksi aorta, dan penyakit arteri perifer. Ini
adalah salah satu penyakit kronis paling umum yang dihadapi dunia
(Schutte A et al., 2013) dan tetap menjadi penyebab utama kematian di
seluruh dunia dan salah satu masalah kesehatan masyarakat terbesar di
dunia.
Hipertensi merupakan kelainan yang ditandai dengan meningkatnya
tekanan darah yang mempunyai risiko tinggi yang memicu kelainan pada
jantung dan ginjal penyebab utama kejadian hipertensi biasa dipicu oleh
meningkatnya kadar natrium dalam darah. Salah satu sediaan yang
digunakan untuk menanggulangi hipertensi ialah diuretik. Salah satu
sediaan yang dapat digunakan untuk meningkatkan laju urinasi dan
meningkatkan pembentukan volume air seni. istilah diuresis mempunyai dua
pengertian, pertama menunjukkan adanya penambahan volume urine yang
diproduksi dan yang kedua menunjukkan jumlah pengeluaran (kehilangan)
zat-zat terlarut dalam air. Fungsi utama diuretik adalah memobilisasi cairan
edema yang berarti mengubah keseimbangan cairan sedemikian rupa
sehingga volume cairan ekstrasel kembali menjadi normal (Katzung 2007).
Diuretik membantu ginjal membuang garam dan air yang akan
mengurangi volume cairan diseluruh tubuh sehingga menurunkan tekanan
darah. Diuretik juga menyebabkan pelebaran pembuluh darah. Diuretik
menyebabkan hilangnya kalium melalui air kemih sehingga kadang
diberikan tambahan kalium atau obat penahan kalium (Susilo dan Wulandari
2011).
Meskipun banyak obat antihipertensi baru dengan khasiat yang lebih
baik telah diperkenalkan ke pasaran, obat tersebut masih memiliki efek
samping yang serius. Di satu sisi, nutrisi dan latihan fisik menjadi semakin
penting dalam pengobatan hipertensi. Di sisi lain, perhatian baru-baru ini
difokuskan pada sediaan herbal dan mineral yang secara tradisional
digunakan sebagai agen terapeutik potensial dalam pencegahan dan
pengelolaan penyakit kardiovaskular.
Kemangi merupakan tumbuhan tahunan yang termasuk dalam famili
Lamiaceae dan kebanyakan tumbuh di daerah tropis seperti India, Afrika,
dan Asia Selatan (Chang X et al., 2009). Dalam pengobatan tradisional,
kemangi digunakan untuk mengobati banyak gangguan seperti kecemasan,
diabetes, sakit kepala, nyeri saraf, kejang dan penyakit kardiovaskular
termasuk hipertensi (Umar A et al., 2010). Setiap bagian tanaman
digunakan sebagai obat untuk mengobati sakit kepala, batuk, diare,
sembelit, kutil, cacingan, gagal ginjal, dan masalah pencernaan (G. Tsasi et
al., 2017). Kandungan kimia yang berhasil diisolasi dari kemangi antara lain
terpenoid, alkaloid, tanin, saponin glikosida, asam askorbat dan flavonoid
(Syeda B et al., 2012. Penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Preethi G,
et al. (2013) ekstrak etanol 70% dari daun kemangi hutan (Ocimum
sanctum, Linn) pada dosis 250 mg/kg dan 500 mg/kg BB tikus terbukti
memiliki aktivitas diuresis. Hal ini diduga karena dalam kemangi terdapat
senyawa flavonoid. Flavonoid merupakan salah satu dari metabolit sekunder
yang mempunyai khasiat sebagai diuresis dengan mekanisme merangsang
aliran darah regional atau vasidilatasi awal atau menghambat reabsorbsi air
dan anion pada tubulus (Juniora, 2010). Salah satu cara untuk mendapatkan
zat tersebut adalah dengan metode ekstraksi sehingga diperoleh ekstrak
yang mengandung kadar flavonoid yang tinggi.
Ekstrak adalah sediaan cair, kental dan kering yang dibuat dengan
mengestraksi atau menyari simplisia nabati hewani atau nabati dengan
menggunakan penyari yang cocok, diluar pengaruh cahaya matahari.
Pembuatan sediaan ekstrak dimaksudkan agar zat berkhasiat dalam
simplisia terdapat dalam bentuk yang mempunyai kadar yang tinggi dan hal
ini memudahkan dosisnya (Anief, 2003)
Berdasarkan uraian diatas, peneliti tertarik untuk melakukan penelitian
mengenai Uji Efek ekstrak etanol akar kemangi hutan (Ocimum sanctum,
Linn) pada Tikus Putih Jantan.
1.2. Rumusan masalah
Berdasarkan latar belakang masalah tersebut di atas, maka dapat disusun
permasalahan sebagai berikut:
1. Apakah ekstrak akar kemangi hutan (Ocimum sanctum) memiliki efek
diuresis pada tikus putih jantan?
2. Pada dosis berapa dari ekstrak etanol akar kemangi hutan (Ocimum
sanctum) yang memiliki efek diuresis yang paling optimal pada tikus
putih jantan?
1.3. Tujuan penelitian
Tujuan dari penelitian ini adalah :
1. Mengetahui efek diuresis ekstrak etanol akar kemangi hutan (Ocimum
sanctum).
2. Mengetahui dosis yang paling efektif dari ekstrak etanol akar kemangi
(Ocimum sanctum) sebagai diuresis pada tikus putih jantan
1.4. Manfaat penelitian
1. Penelitian ini dapat memberikan informasi ilmiah mengenai efek
diuresis akar kemangi hutan (Ocimum sanctum)
2. Memberi informasi dosis ekstrak akar dan batang kemangi hutan
(Ocimum sanctum) yang efektif diuresis pada tikus putih jantan
3. Menjadi rujukan untuk dikembangkan pada penelitian lanjutan
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1. TANAMAN KEMANGI HUTAN
2.1.1. Konsep Kemangi Hutan
Ocimum sanctum yang biasanya dikenal sebagai “Tulsi”dalam
bahasa Hindia dan “Holy Basil” dalam bahasa Inggris adalah ramuan
paling suci bagi umat Hindu di Indiadan milik keluarga (Labiatae)
(Kirtikar dan Basu 1975 : Rainaet al., 2013). Kemangi hutan adalah
tanaman asli India, Iran dan sekarang dibudidayakan di Mesir,
Prancis, Hongaria, Italia, Maroko, AS. Ocimum sanctum secara
alami ditemukan liar di daerah tropis dan subtropis di dunia. Ocimum
sanctum tumbuh subur di iklim hangat dan sedang. Kemangi adalah
ramuan aromatik, tumbuh rendah, daunnya berwarna hijau terang
sampai ungu, dan tumbuh di iklim tropis yang hangat (Khrisna et al.,
2014).
Kemangi hutan memiliki distribusi yang luas, meliputi seluruh
India hingga 1.800 m di Himalaya dan sejauh pulau Andaman
Nicobars (Kirtikar dan Basu 1975:Rainaet al., 2013). Tanaman ini
didistribusikan secara luas di Asia, dan juga ditemukan di Australia,
Afrika Barat dan beberapa negara Arab (Pistrick et al., 2001: Raina
et al., 2013).
2.1.2. Klasifikasi Tanaman Kemangi Hutan
Klasifikasi dari tanaman kemangi hutan menurut Kulkarni dan
Adavirao (2018) adalah sebagai berikut :
Regnum : Plantae
Divisio : Magnoliophyta
Classis : Magnoliopsida
Orde : Lamiales
Family : Labiatae
Genus : Ocimum
Species : Sanctum
2.1.3. Penamaan Tanaman Kemangi Hutan
Kemangi hutan mempunyai nama yang berbeda-beda di berbagai
negara dan daerah tertentu, antara lain :
Tabel 2.1 Nama Kemangi Hutan dari beberapa Negara
Asal Nama Lokal
Inggris Holy basil / sacred basil
Hindi Tulsi
Sansekerta Tulasi
Gujarati Tulsi
Sumber : Kulkarni dan Adavirao (2013: 107)
Tabel 2.2 Nama Kemangi Hutan dari beberapa Daerah
Asal Nama Lokal
Sumatera Ruku-Ruku, Ruruku
Jawa Klampes, Lampes, Kemangen, Koroko
Nusa Tenggara Uku-Uku
Sulawesi Balakama
Maluku Lufe-Lufe, Kemangiutan
Sumber : Khrisna et al. (2014)
2.1.4. Morfologi tanaman kemangi hutan
a. Daun
Daun tunggal, berhadapan, dan tersusun dari bawah keatas.
Pajang tangkai daun 0,25-3 cm dengan setiap helaian daun yang
berbentuk bulat telur sampai elips, memanjang, dan ujung
meruncing atau tumpul. Pangkal daun pasak sampai membulat,
dikedua permukaan berambut halus, Tepi daun bergerigi lemah,
bergelombang atau rata (Sudarsono dkk., 2002).
Gambar 2.1 Daun Kemangi Hutan
b. Batang
Tanaman yang banyak tumbuh didaerah tropis ini merupakan
herba tegak atau semak, tajuk membulat, bercabang banyak,
sangat harum dengan tinggi 0,3-1,5cm. batang pokoknya tidak
jelas, berwarna hijau sering keunguan, dan berambut atau tidak
(Sudarsono dkk., 2002).
Gambar 2.2 Batang Kemangi Hutan
c. Bunga
Bunga kemangi tersusun pada tangkai bunga berbentuk
menegak. Bunganya jenis hemafrodit, berwarna putih dan berbau
sedikit wangi. Bunga majemuk berkarang dan di ketiak daun
ujung terdapat daun pelindung berbentuk elips atau bulat telur
dengan panjang 0,5-1 cm. Kelopak bunga berbentuk bibir, sisi
luar berambut kelenjar, berwarna ungu atau hijau, dan ikut
menyusun buah. Mahkota bunga berwarna putih dengan benang
sari tersisip di dasar mahkota dan kepala putik bercabang dua
namun tidak sama (Sudarsono dkk., 2002).
Gambar 2.3 Bunga Kemangi Hutan
d. Buah
Buah berbentuk kotak berwarna coklat tua, tegak dan tertekan
dengan ujung membentuk kait melingkar. Panjang kelopak buah
6-9 mm. biji berukuran kecil, bertipe keras, coklat tua, dan waktu
diambil segera membengkak, tiap buah terdiri dari empat biji.
Gambar 2.4 Buah Kemangi Hutan
e. Akar
Tanaman kemangi hutan memiliki akar tunggang dan
berwarna putih kotor. (Mangoting dkk., 2005; Sudarsono dkk.,
2002)
Gambar 2.5 Akar Kemangi Hutan
2.1.5. Komponen Kimia
Komponen utama dari kemangi hutan adalah tanin (4,6%) dan
minyak atsiri (hingga 2%). Jumlah unsur utama minyak atsiri
bervariasi sesuai dengan distribusi geografis dan variasi bahan
tanaman sumber: eugenol (hingga 62%), metyleugenol (hingga
86%), dan α- dan β-caryophyllene (hingga 42%), methylchavicol,
linalool dan 1,8-cineole (WHO, 2002).
Kemangi hutan juga mengandung alkaloid, glikosida, saponin,
tanin, sejumlah besar vitamin C, asam maleat, asam sitrat dan asam
tartarat (Anggarwal and Mali, 2015).
Gambar 2.6 Komponen Kimia Kemangi Hutan
Sumber : WHO (2002)
2.1.6. Manfaat
Kemangi hutan telah digunakan selama ribuan tahun dalam
Ayurveda, dalam ilmu kedokteran Hindu, untuk khasiat
penyembuhan yang beragam (Krishna et al., 2014).
Hasil penelitian Samak dkk (2007) menunjukkan bahwa ekstrak
daun kemangi hutan dengan dosis 25, atau 50 mg/kg berat badan
dapat menurunkan LDL-Kolesterol, kolesterol dan trigliserida di
hati dan aorta pada kelinci albino jantan yang diberi kolesterol
0,5g/hari selama 45 hari.
Kemangi hutan dapat berfungsi sebagai obat dan pencegahan
untuk sindrom pernafasan akut yang parah (SARS) yang
penggunaannya dengan cara akar tanaman kemangi
hutandihancurkan kemudian direbus dengan bubuk kunyit selama
beberapa menit, setelah itu disaring. Mengkonsumsi dua sendok
ramuan ini dua kali sehari akan menyembuhkan SARS dan
mencegah tertular penyakit (Aggarwal dan Mali, 2015).
2.2. Senyawa Metabolit sekunder
2.2.1. Alkaloid
a. Konsep Alkaloid
Alkaloid merupakan senyawa yang terdapat pada berbagai
spesies tumbuhan berupa garam asam organik, seperti asam
asetat, asam malat, asam oksalat, asam suksinat, atau beberapa
asam tumbuhan spesifik lainnya (Kar, 2013: 427).
b. Sumber dan Klasifikasi Alkaloid
1) Sumber Alkaloid
Sumber utama alkaloid adalah pada tumbuhan
angiospermae dan gimnospermae.Terutama pada biji, daun,
ranting dan kulit kayunya.Kadaralkaloid yang terkandung
pada masing-masing bagian berbeda-beda. Kulit kayu adalah
bagian yang paling banyak terdapat senyawa alkaloidnya yang
mengandung 10-15% alkaloid (Robinson, 1995:283).
2) KlasifikasiAlkaloid
Alkaloid di klasifikasi menjadi 4 kelompok, antara lain:
a) Klasifikasi Biosintetis
Alkaloid ini merupakan hasil penelitian pada tumbuhan
secara biosintetis, yang dikelompokan berdasarkan
prekursor yang sama, tetapi memiliki distribusi taksonomi
dan aktifitas farmakologi berbeda.
Contoh:
a. Alkaloid indol yang diturunkan dari triptofan
b. Alkaloid piperidin yang diturunkan dari lisin
c. Alkaloid pirolidin yang diturunkan dari ornitin
d. Alkaloid feniletilamin yang diturunkan dari tirosin
e. Alkaloid imidazol yang diturunkan dari histidin
b) Klasifikasi Kimia
Alakaloid diklasifikasikan berdasarkan kriteria inti
heterosiklik utama, antara lain:
1) Alkaloid pirolidin, contohnya higrin
2) Alkaloid piperidin, contohnya lobelin
3) Alkaloid pirolizidin, contohnya senesionin
4) Alakloid tropana, contohnya atropin
5) Alakloid kuinolin, contohnya kuinin
6) Alakloid isokuinolin, contohnya morfin
7) Alakloid aporfin, contohnya boldin
8) Alakloid indol, contohnya ergometrin
9) Alakloid imidazol, contohnya pilokarpin
10) Alakloid diazosin, contohnya lupanin
11) Alakloid purin, contohnya kafein
12) Alakloid steroid, contohnya solanadium
13) Alakloid amino, contohnya efedrin
14) Alakloid diterpen, contohnya akonitin
c) Klasifikasi Farmakologis
Contoh:
1) Morfin sebagai analgestik narkotik
2) Kuinin sebagai anti malaria
3) Striknin sebagai rangsangan refleks
4) Lobelin sabagai stimulant pernapasan
5) Boldin sebagai koleretik dan laksatif
6) Akonitin sebagai neuralgia
7) Pilokarpin sebagai senyawa anti glaukoma dan miotik
8) Ergonovin sebagai oksitoksik
9) Efedrin sebagai bronkodilator
10) Narkein sebagai analgesik (narkotik) dan antitusif
d) Klasifikasi Taksonomik
Klasifikasi khusus ini berdasarkan kategori taksonomik.
Taksa yang paling umum adalah genus, subgenus, spesies,
subspesies, dan sebagainya. Klasifikasi taksonomik
mencakup banyak alkaloid khususnya berdasarkan pada
distribusi masing-masing dalam berbagai famili tumbuhan.
Beberapa contoh umum famili tumbuhan dan berbagai
spesies yaitu:
1. Alkaloid Cannabinaceae, contohnya Cannabis sativa
Linn (ganja, mariyuana)
2. Alkaloid Rubiaceae, contohnya Cinchona Sp (kinin),
Mitragyana speciosa Korth (katum, kratum, kutum)
3. Alkaloid Solananceae, contohnya Atropa belladonna L
(deadly nights head, belladona), Capsicumannum L
(cabaimanis, paprika), Mandragora officinaru L
(mandrak, tomat), Nicotiana glauca R. Grah (pohon
tembakau) (Kar, 2013: 449-450).
Beberapa struktur senyawa alkaloid disajikan pada
gambar berikut :
c. Sifat Fisika Dan Kimia Alkaloid
1) Sifat Fisika Alkaloid
Senyawa alkaloid yang telah diisolasi mempunyai sifat fisik
yang berbeda dan berupa padatan kristal garam dan titik lebur
tertentu, misalnya kokain dengan titik lebur 98°C. Ada
senyawa alkaloid yang tidak mempunyai bentuk yang teratur
(amorf) dan ada yang berupa cairan seperti nikotin dan konim.
Pada senyawa alkaloid yang lain kebanyakan tidak berwarna
tetapi ada senyawa alkaloid yang kompleks mempunyai warna
seperti aromatik, misalnya berberin berwarna kuning dan
betanin berwarnamerah.
Senyawa alkaloid mempunyai warna tertentu juga dapat
larut dalam pelarut tertentu. Pada umumnya, senyawa alkaloid
hanya dapat larut dalam pelarut organik. Meskipun beberapa
Gambar 2.7 Struktur Beberapa Senyawa Alkaloid
(Achmad, 1986: 48)
pseudoalkaloid larut dalam air.
2) Sifat Kimia Alkaloid
Senyawa alkaloid bersifat basa, tergantung adanya
pasanganelectron bebas pada atom nitrogen. Jika suatu
gugus fungsional pada posisi yang berdekatan dengan atom
nitrogen bersifat melepaskan elektron, misalnya gugus alkil,
elektron pada atom nitrogen akan menarik senyawa alkil
sehingga senyawa nitrogen lebih bersifat basa. Sebaliknya jika
suatu gugus fungsional yang berdekatan dengan atom
nitrogen bersifat menarik elektron, misalnya gugus karbonil,
maka kesediaan elektron berkurang dan pengaruh yang
ditimbulkan adalah alkaloid dapat bersifat netral atau bahkan
bersifat asam.
Kebasaan senyawa alkaloid menyebabkan senyawa
tersebut sangat mudah mengalami dekomposisi, terutama
oleh panas sinar matahari dengan adanya oksigen. Hasil
reaksi sering berupa N-oksida. Pembentukan garam dengan
senyawa organik seperti tartarat, sitrat, atau senyawa anorganik
seperti asam hidroklorida atau sulfat sering mencegah
dekomposisi (Robinson, 1995:284-285).
d. Manfaat Alkaloid
Alkaloid dapat dimanfatkan untuk mengobati penyakit asma,
mengurangi rasa sakit akibat asam urat, sebagai antibiotik (untuk
sakit tenggorokan, infeksi kulit), meningkatkan daya pikir,
menurunkan sekresi dan motilitas lambung (Robinson, 1995:283).
e. Identifikasi Alkaloid
Analisis senyawa alkaloid pada suatu ekstrak menggunakan
beberapa reagen seperti reagen Mayer, Wagner dan lain-lain
sebagai berikut:
1. Reagen Mayer
Reagen Mayer dibuat menggunakan KI 6 gram yang
dilarutkan dalam aquades sebanyak 10 mL dan HgCl2 1,358
4 (aq)
gram yang dilarutkan dalam 60 mL aquades, kemudian kedua
larutan KI dan HgCl2 dicampur dan ditambahkan aquades
hingga volume larutan 100 mL.
Reaksi kimia reagen Mayer:
4 KI(aq)+HgCl2(aq) ‹ K2HgI4(aq) +2KCl(aq)
K2HgI4(aq) 2K+
(aq) + HgI2-
Hasil reaksi menunjukan positif mengandung senyawa
alkaloid apabila terdapat endapan putih dalam suasana sedikit
asam (Mulyono, 2005:71). Reaksi alkaloid dengan reagen
Mayer sebagai berikut:
2. ReagenWagner
Reagen Wagner dibuat menggunakan KI 5 gram dan serbuk
I2 4 gram, dilarutkan dalam aquades 100 mL. Reaksi kimia
reagen Wagner sebagai berikut:
4 KI(aq) + HgCl2(aq) K2HgI4 (aq) + 2KCl(aq)
K2HgI4 (aq) 2K+(aq) + HgI4
2-(aq)
Hasil reaksi menunjukan positif mengandung senyawa
alkaloid apabila terdapat endapan coklat dalam suasana sedikit
asam (Mulyono, 2005:65). Reaksi alkaloid dengan reagen
Wagner sebagai berikut:
2.2.2. Flavonoid
a. Konsep Flavonoid
Flavonoid merupakan jenis senyawa yang mengandung fenol
yang banyak terdapat di alam pada tanaman tingkat tinggi.
Flavonoid banyak ditemukan pada bagian tumbuhan seperti
bunga, daun, ranting, buah, kayu, kulit kayu, dan akar. Golongan
flavonoid dapat digambarkan sebagai deretan senyawa C6-C3-C6.
Artinya, kerangka karbon terdiri dari dua gugus C6 (cincin
benzena tersubsitusi). Deretan senyawa ini dapat menghasilkan 3
jenis struktur yakni 1,3 diaril propana (flavonoid), 1,2 diaril
propana (isoflavonoid), dan1,1 diaril propana (neoflavonoid)
(Robinson, 1995:191; Achmad, 1986:2-3).
b. Sumber dan Klasifikasi Flavonoid
1. Sumber Flavonoid
Flavonoid terdapat pada seluruh dunia tumbuhan mulai
dari fungus sampai angiospermae. Pada tumbuhan tinggi,
flavonoid terdapat baik dalam bagian vegetatif maupun dalam
bunga (Robinson, 1995:191).
2. Klasifikasi Flavonoid
Senyawa flavonoid memiliki beberapa turunan yang
sangat bergantung pada tingkat oksidasi rantai propana
diantaranya flavonon, flavanonol, flavon, flavonol, isoflavon,
kalkon, dan sebagainya. Beberapa jenis flavonoid serta
struktur dasar masing-masing jenis disajikan pada Gambar
2.8 berikut ini :
Gambar 2.8 Struktur Beberapa Jenis Flavonoid
Sumber: (Achmad, 1986:16)
c. Sifat Fisika dan Kimia Flavonoid
1. Sifat Kimia Flavonoid
Flavonoid banyak ditemukan sebagai glikosida dan
bersifat basa apabila bereaksi dengan asam mineral
menghasilkan garam flavilium yang berwarna (Achmad,
1986:17).
2. Sifat Fisika Flavonoid
Senyawa flavonoid merupakan zat yang berwarna merah,
ungu, dan biru dan sebagian zat berwarna kuning yang
banyak ditemukan dalam tumbuhan. Flavonoid larut dalam
air, eter, kloroform dan dapat diekstraksi dengan etanol 70%
(Achmad, 1986:17).
d. Manfaat Flavonoid
Manfaat flavonoid pada tumbuhan ialah sebagai pengatur
tumbuh, pengaturan fotosintesis, kerja antimikroba dan antivirus.
Flavonoid banyak digunakan untuk pengobatan tradisional karena
memilik efek terhadap macam-macam organisme. Flavonoid
merupakan komponen aktif tumbuhan untuk mengobati gangguan
fungsi hati sebagai antioksidan dan berfungsi menetralisir radikal
bebas dan dengan demikian meminimalkan efek kerusakan pada
sel dan jaringan tubuh. Radikal bebas adalah molekul yang sangat
reaktif dan tidak stabil akibat telah kehilangan elektron
(Robinson, 1995:191, 193).
e. Idetifikasi Flavonoid
Analisis flavonoid menggunakan pereaksi-pereaksi antara lain:
1. Reagen Wilsater Sianidin
Reagen Wilsater Sianidin dibuat menggunakan larutan
HCl dan serbuk magnesium (Mg). Hasil reaksi menunjukan
positif mengandung senyawa flavonoid apabila terdapat warna
merah, kuning atau orange yang dihasilkan. Reaksi HCl dalam
air sebagai berikut:
HCl(aq) H+
(aq) + Cl-(aq)
Reaksi yang terjadi antara serbuk magnesium dengan
larutan HCl sebagai berikut:
Mg(s) + 2H+(l) Mg2+
(aq) + H2(g)
Reaksi flavonoid dengan reagen Wilstater Sianidin sebagai
berikut:
1) Jika tidak tercampur dengan pigmen lain, flavonoid dapat
dideteksi dengan uap amonia dan akan memberikan warna
spesifik untuk masing-masing golongan. Falavon dan
flavonol akan memberikan warna kuning sampai kuning
kemerahan. Antosianin berwarna merah biru sedangkan
flavononol menimbulkan warna orange dan coklat.
2) Pereaksi aluminium klorida dapat membentuk kompleks
dengan flavonoid menimbulkan warna kuning. Reaksi
antara AlCl3 dengan golongan flavonoid membentuk
kompleks antara gugus hidroksil dan keton yang
bertetangga atau dengan gugus hidroksil yang saling
bertetangga.
2.2.3. Saponin
a) Konsep Saponin
Saponin merupakan senyawa dalam bentuk glikosida yang
terikat dengan steroid atau triterpena. Senyawa saponin tersebar
luas pada tumbuhan tingkat tinggi. Saponin diberi nama demikian
karena sifatnya yang menyerupai sabun atau “sapo” (Robinson,
1995:157).
b) Sumber dan Klasifikasi Saponin
1. Sumber Saponin
Senyawa saponin banyak dijumpai pada tanaman. Saponin
juga ditemukan dalam Gymnostemma pentaphyllum (Genus
Gymnostemma, Famili Cucurbitaceae) dalam bentuk yang
disebut Gipenosida, dan ginseng (Genus Panax, Famili
Araliaceae) dalam bentuk yang disebut ginsenosida. Di dalam
keluarga-keluarga tersebut, golongan senyawa saponin
dijumpai dalam berbagai bagian tanaman antara lain daun,
batang, akar, biji, bunga dan buah (Robinson,1995:157)
2. Klasifikasi Saponin
Saponin dibedakan atas dua jenis yaitu saponin steroid dan
saponin triterpenoid. Saponin steroid tersusun atas inti steroid
(C27) dengan molekul karbohidrat. Saponin steroid dihidrolisis
menghasilkan satu aglikon yang dikenal sebagai sapogenin.
Saponin triterpenoid tersusun atas inti triterpenoid dengan
molekul karbohidrat. Dihidrolisis menghasilkan suatu aglikon
yang disebut sapogenin.
Struktur senyawa saponin dapat disajikan sebagai berikut:
(Robinson, 1995:157).
Gambar 2.9 Struktur Dasar Senyawa Saponin
Steroid dan Triterpenoid
Sumber : (Robinson, 1995:157)
c) Sifat Fisika dan Kimia Saponin
1. Sifat Kimia Saponin
Menghemolisa eritrosit, merupakan racun kuat untuk ikan
dan amfibi, membentuk persenyawaan dengan kolesterol dan
hidroksi steroid, sulit untuk dimurnikan dan diidentifikasi dan
mempunyai berat molekul relatif tinggi (Robinson, 1995:157).
2. Sifat Fisika Saponin
Saponin mempunyai rasa pahit, dalam air membentuk busa
yang stabil.
d) Manfaat Saponin
Manfaat saponin sebagai berikut:
Mengusir kolesterol di usus besar sebelum terserap ke dalam
alirandarah.
Berfungsi sebagai pembersih sekaligusantiseptik.
Mampu mengikat kolesterol dalam darah (Robinson,
1995:157).
e) Identifikasi Saponin
Uji saponin dilakukan dengan metode Forth yaitu dengan cara
memasukan sampel ke dalam tabung reaksi, ditambahkan
aquades, dikocok selama 30 detik. Diamati perubahan yang
terjadi. Apabila terbentuk busa yang mantap (tidak hilang selama
30 detik) maka identifikasi menunjukan adanya saponin.
Timbulnya busa pada uji Forth menunjukan adanya glikosida
yang mempunyai kemampuan membentuk buih dalam air yang
terhidrolisis menjadi glukosa dan senyawa lainya (Robinson,
1983: 157). Reaksinya sebagai berikut:
Gambar 2.10 Reaksi Senyawa Saponin dan Air
Sumber : (Robinson, 1983 : 158)
2.2.4. Tanin
a. Konsep Tanin
Tanin merupakan bagian yang tersebar luas dalam tanaman,
seperti daun, buah yang belum matang, batang dan kulit kayu.
Pada buah yang belum matang, tanin digunakan sebagai energi
dalam proses metabolisme dalam bentuk oksidasi tanin. Tanin
dapat dikatakan sebagai sumber asam pada buah (Robinson,
1995:71).
b. Sumber dan Klasifikasi Tanin
1. Sumber Tanin
Tanin tersebar pada seluruh bagian tumbuhan, seperti pada
daun, batang, kulit kayu, dan buah. Distribusi tanin hampir
diseluruh spesies tanaman dan biasanya ditemukan pada
gymnospermae dan angiospermae. Tanin terletak pada
vakuola atau bagian permukaan tanaman (Robinson,
1995:71).
2. Klasifikasi Tanin
Tanin diklasifikasikan sebagai tanin terhidrolisis dan tanin
terkondensasi. Tanin terhidrolisis mengandung ikatan ester
yang dapat terhidrolisis jika dididihkan dalam asam klorida
encer. Hasil hidrolisis ester adalah gula sederhana seperti
glukosa, dan asam polifenolat seperti asam kuinat, asam
fenolat dan asam galat (Robinson, 1995:71).
Tanin terkondensasi atau disebut proantosianidin,
merupakan polimer dari katekin (flavan-3-ol) dan
leukoantosianidin (flavan-3,4-diol). Senyawa-senyawa ini
termasuk kelompok senyawa flavonoid yang tersebar luas di
alam, dimana struktur senyawanya sebagai berikut:
(Robinson, 1995:193).
Gambar 2.11 Struktur Senyawa Tanin Terhidrolisis dan Tanin
Terkondensasi
Sumber : (Robinson,1995:73,193)
c. Sifat Fisika dan Kimia Tanin
1. Sifat Fisika Tanin
Sifat fisika tanin sebagai berikut:
a. Merupakan senyawa kompleks dalam bentuk campuran
polifenol yang sukar dipisahkan sehingga sukar
mengkristal.
b. Tanin dapat diidentifikasikan dengankromatografi.
c. Senyawa fenol dari tanin mempunyai aksi adstrigensia,
antiseptik dan pemberiwarna.
2. Sifat Kimia Tanin
Sifat kimia tanin sebagai berikut:
a. Apabila dilarutkan ke dalam air, tanin akan membentuk
koloid yang memiliki rasa asam dansepat.
b. Mengendapkan larutan alkaloid.
c. Larutan alkali tanin mampu mengoksidasioksigen.
d. Mengendapkan protein dari larutannya dan bereaksi
dengan protein yang tidak dipengaruhi oleh
enzimprotiolitik.
d. Manfaat Tanin
Manfaat tanin antara lain:
1. Sebagai pelindung pada tumbuhan pada saat masa
pertumbuhan bagian tertentu pada tanaman, misalnya buah
yang belum matang, pada saat matang taninnya hilang.
2. Sebagai anti hama bagi tanaman sehingga mencegah
serangga danfungi.
3. Digunakan dalam proses metabolisme pada bagian tertentu
tanaman.
4. Efek terapinya sebagai adstrigensia jaringan hidup misalnya
pada gastrointestinal kulit.
5. Efek terapi yang lain sebagai antiseptik pada jaringan luka,
misalnya luka bakar, dengan cara mengendapkan protein.
6. Sebagai pengawet dan penyamak kulit.
7. Reagensia di Laboratorium untuk deteksi gelatin, protein dan
alkaloid.
8. Sebagai antidotum (keracunan alkaloid) dengan cara
mengeluarkan asam tamak yang tidak larut.
e. IdentifikasiTanin
Analisis tanin dilakukan mengunakan gelatin. Tanin dapat
mengendapkan gelatin (protein). Hasil reaksi menunjukkan positif
mengandung senyawa tanin apabila terdapat endapan coklat
(Harborne, 1987: 133). Reaksi senyawa tannin dan gelatin sebagai
berikut :
O
OH
HO
OH
OHOH
2-(3,4-dihydroxyphenyl)chroman-3,5,7-triol
+ NC
O
C
H
HN
H
C
O
C
H
CH3
H2N
CHO
NH
CH
CCH2
HN
O
CH2NH
CH2
C
CO
NH
NHNH2
CO
N
C
CH
CH2
CH2
C OO
OH
NHH2C C
O
N
CH
O
Gelatin
NC
O
C
H
H
N
H
C
O
C
H
CH3
H2N
CH
O
N
H
C
H
C
CH2
HN
O
CH2
NH
CH2
C
C
O
NH
NH
NH2
C
O
N
C
CH
CH2
CH2
C OO
OH
NHH2C C
O
N
CH
O
O
O
HO
OH
OHOH
H
O
OH
HO
O
OHOH
H
O
OH
HO
OH
OOH
HO
OH
HO
OH
OOH
H
Ikatan hidrogen antaratanin
dan gelatin
Ikatan hidrogen antara tanindan gelatin
Tanin mengendap
Gambar 2.12 Reaksi Senyawa Tanin dan Gelatin
Sumber: (Harborne, 1987: 133)
2.2.5. Triterpenoid dan Steroid
a. Konsep Triterpenoid dan Steroid
Triterpenoid merupakan senyawa yang kerangka karbonnya
berasal dari enam unit isoprena dan secara biosintesis
diturunkan dari hidrokarbon C30 asiklik. Senyawa ini berstruktur
siklik yang relatif kompleks, kebayakan berupa alkohol, aldehida,
atau asam karboksilat (Harborne, 1987: 174). Sterol merupakan
triterpena yang kerangka dasarnya sistem cincin siklo pentane
perhidrofenantrena (Harborne, 1987:174). Nama sterol dipakai
khusus untuk alkohol, tetapi karena semua steroid tumbuhan
berupa alkohol dengan gugus hidroksil pada C-3, maka sering kali
disebut sterol (Robinson, 1995: 154).
b. Sumber dan Klasifikasi Triterpenoid dan Steroid
1. Sumber Triterpenoid dan Steroid
Triterpenoid tersebar luas dalam damar, gabus dan kutin
tumbuhan. Triterpenoid yang penting adalah hidrokarbon
skualena, yang diisolasi untuk pertama kali dari minyak
hati ikan hiu, tetapi ditemukan juga dalam minyak nabati
(misalnya minyak zaitun). Salah satu senyawa triterpenoid
yang paling dikenal adalah lanosterol terdapat dalam
lemak wol, khamir dan beberapa senyawa tumbuhan tinggi
(Robinson, 1995: 152).
2. Klasifikasi Triterpenoid dan Steroid
Triterpenoid dapat dibagi menjadi 4 golongan senyawa
yaitu triterpen sebenarnya, steroid, saponin dan glikosida
jantung. Menurut asalnya senyawa steroid dibagi atas:
a. Zoosterol, yaitu steroid yang berasal dari hewan misalnya
kolesterol.
b. Fitosterol, yaitu steroid yang berasal dari tumbuhan
misalnya sitosterol dan stigmasterol (Harborne, 1987:148-
149).
Adapun struktur dasar steroid dan triterpenoid sebagai berikut:
Gambar 2.13 Struktur Senyawa Steroi dan Triterpenoid
(http://www.chemspider.com/Chemical-Structure.8229811.html)
c. Sifat Fisika dan sifat Kimia Triterpenoid dan Steroid
1. Sifat Fisika Triterpenoid dan Steroid
Pada temperatur kamar, triterpenoid dan steroid
merupakan cairan tidak berwarna, tetapi jika teroksidasi.
Warna triterpenoid akan berubah menjadi gelap. Triterpenoid
dan steroid mempunyai bau yang khas, indeks bias tinggi,
kebanyakan merupakan senyawa optik aktif, kerapatan lebih
kecil dari air, larut dalam pelarut organik seperti eter dan
alkohol (Sirait,2007:213).
2. Sifat Kimia Triterpenoid dan Steroid
Triterpenoid dan steroid merupakan senyawa tidak jenuh
(rantai terbuka ataupun siklik). Isoprenoid kebanyakan
bentuknya kiral dan terjadi dalam dua bentuk enantiomer
(Sirait, 2007:213).
d. Manfaat Triterpenoid dan Steroid
Senyawa triterpenoid dan steroid memiliki komponen aktif
sebagai obat yang digunakan untuk terapi penyakit diabetes,
gangguan mensturasi, patukan ular, gangguan kulit, kerusakan
hati dan malaria (Robinson, 1983:154).
e. Identifikasi Triterpenoid dan Steroid
Analisis triterpenoid dan steroid banyak digunakan ialah
reaksi Lieberman-Burchard (anhidrat asetat-H2SO4 pekat),
dengan kebanyakan triterpena dan sterol memberikan warna
hijau-biru (Sirait, 2007:213). Reaksinya sebagai berikut :
Gambar 2.14 Reaksi Lieberman-Burchard
(Sirait, 2007:213)
2.3. Sifat Fisikokimia
2.3.1. Massa Jenis
Massa jenis atau Density (ρ) didefinisikan sebagai massa persatuan
volume. Massa jenis merupakan sifat khas dari suatu zat murni. Massa
jenis rata-rata setiap benda merupakan total massa dibagi degan total
volumenya. Secara matematis dapat dituliskan sebagai berikut:
Keterangan:
: Massa jenis
m : Massa
V : Volume
Satuan internasional untuk massa jenis adalah 3m
Kg. Kadang-kadang
massa jenis dinyatakan dalam 3cm
g. Seperti yang diketahui bahwa
3
3
33
10
)100(
10001
cm
g
cm
g
m
kg
, maka massa jenis yang dinyatakan dalam
3cm
g harus dikalikan 1000 untuk memberi hasil dalam
3m
kg.
Cara mencari massa jenis dalam sistem MKS (Meter, Kilogram,
Sekon atau detik) dan cgs (sentimeter, gram, sekon atau detik) yang
merupakan sistem satuan internasional yaitu:
Dalam MKS: v
m dengan satuan )(
3m
kg
Dalam cgs: v
m dengan satuan )(
3cm
g
Massa jenis suatu zat tidak ditentukan oleh massa, volume, dan
bentuk benda, melainkan ditentukan oleh jenis zat. Massa jenis suatu
bahan obat memiliki hubungan terhap aktivitasnya di dalam tubuh
manusia. Semakin besar massa jenis suatu bahan obat menunjukan
molekul obat semakin besar, hal ini berpengaruh terhadap proses difusi
obat dalam sel tubuh semakin lama.
2.3.2. Kelarutan
Kelarutan atau solubilitas merupakan kemampuan suatu zat terlarut,
agar larut dalam suatu pelarut. Kelarutan dinyatakan dalam jumlah
maksimum zat terlarut yang larut dalam suatu pelarut pada
kesetimbangan. Larutan hasil disebut larutan jenuh. Daya larut zat
berbeda-beda, tergantung sifat zat terlarut dan pelarutnya. Ada beberapa
zat yang mudah larut dan ada pula yang sukar larut. Kelarutan dapat
dinyatakan dalam gram zat terlarut per 100 mL atau 100 gram pelarut
(Santoso, 2008:86).
Faktor-faktor yang mempengaruhi kelarutan:
a. Pengaruh Jenis Zat
Zat-zat dengan struktur kimia yang mirip umumnya dapat saling
bercampur dengan baik, sedangkan zat-zat yang struktur kimianya
berbeda umumnya kurang dapat saling bercampur. Senyawa bersifat
polar akan mudah larut dalam pelarut polar, sedangkan senyawa
nonpolar akan mudah larut dalam pelarut nonpolar. Misalnya alkohol
dan air bercampur sempurna, air dan eter bercampur sebagian,
sedangkan minyak dan air tidak bercampur (Santoso, 2008:87).
b. Pengaruh Temperatur
Kelarutan gas umumnya berkurang pada temperatur yang lebih
tinggi. Misalnya jika air dipanaskan, timbul gelembung-gelembung
gas yang keluar dari dalam air, sehingga gas yang terlarut dalam air
menjadi berkurang. Kebanyakan zat padat kelarutannya lebih besar
pada temperatur yang lebih tinggi. Ada beberapa zat padat yang
kelarutannya berkurang pada temperatur yang lebih tinggi, misalnya
natrium sulfat dan serium sulfat (Santoso, 2008:87).
c. Pengaruh tekanan pada kelarutan
Perubahan tekanan pengaruhnya kecil terhadap kelarutan zat cair
atau padat. Perubahan tekanan sebesar 500 atm hanya merubah
kelarutan NaCl sekitar 2,3% dan NH4Cl sekitar 5,1%. Kelarutan gas
sebanding dengan tekanan parsialgas itu (Santoso, 2008:88).
Kelarutan suatu kelompok senyawa obat bahan alam erat
hubungannya dengan aktivitas obat tersebut dalam tubuh manusia.
Polar atau non polarnya suatu senyawa yang masuk ke dalam tubuh
akan menentukan larutnya senyawa tersebut terhadap cairan tubuh
manusia. Apabila senyawa yang masuk ke dalam tubuh bersifat polar
maka akan larut dalam cairan tubuh yang bersifat polar, sebaliknya
apabila senyawa yang masuk ke dalam tubuh bersifat non polar
maka akan larut dalam cairan tubuh yang bersifat non polar
(Siswandono, 1998:7).
2.3.3. Titik Didih
Titik didih adalah suhu pada saat tekanan uap sama dengan tekanan
atmosfer. Titik didih cairan tergantung besarnya tekanan atmosfer.
Makin besar tekanan atmosfer, makin tinggi suhu yang diperlukan
untuk memberikan tekanan uap yang dapat menandinginya. Titik didih
pada tekanan 1 atm (760 torr) dinamakan titik didih normal. Titik didih
merupakan salah satu sifat fisika yang dapat digunakan untuk
memperkirakan secara tidak langsung kuatnya gaya tarik antarmolekul
dalam cairan. Cairan yang gaya tarik antarmolekulnya kuat memiliki
titik didih yang tinggi (Brady, 1999: 562-563).
2.4. Metode Ekstraksi Simplisia
2.4.1. Simplisia
Simplisia adalah bahan alam yang telah dikeringkan yang
digunakan untuk pengobatan dan belum mengalami pengolahan,
kecuali dinyatakan lain suhu pengeringan tidak lebih dari 60°C
(BPOM, 2014). Simplisia dibedakan menjadi simplisisa nabati,
simplisia hewani dan simplisia pelikan atau mineral.
Simplisia nabati adalah simplisia yang berupa tanaman utuh,
bagian tanaman atau eksudant tanaman.Simplisia hewani adalah
simplisia yang berupa hewan utuh, bagian hewan atau zat-zat berguna
yang diperoleh dari hewan piaraan atau hewan liar. Simplisia pelican
atau hewani adalah simplisia yang berupa bahan pelican atau mineral
yang belum diolah atau telah diolah dengan cara sederhana dan belum
berupa zat kimia murni (Endarini, 2016).
Simplisia yang aman dan berkhasiat adalah simplisia yang tidak
mengandung bahaya kimia, mikrobiologis dan bahaya fisik, serta
mengandung zat aktif yang berkhasiat. Ciri simplisia yang baik adalah
dalam kondisi kering (kadar air < 10%), untuk simplisia daun, bila
diremas bergemerisik dan berubah menjadi serpihan, simplisia bunga
bila diremas, bergemerisik dan berubah menjadi serpihan atau mudah
dipatahkan, dan simplisia buah dan rimpang (irisan) bila diremas
mudah dipatahkan. Ciri lain simplisia yang baik dalah tidak berjamur,
dan berbau khas menyerupai bahan segarnya (Herawati dkk., 2012 :
Hartini dan Wulandari, 2016).
2.4.2. Ekstrasi
Ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat
larut sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan
pelarut cair. Simplisia yang diekstrak mengandung senyawa aktif yang
dapat larut dan senyawa yang tidak dapat larut seperti serat,
karbohidrat, protein dan lain-lain. Senyawa aktif yang terdapat dalam
berbagai simplisia dapat digolongkan ke dalam golongan minyak
atsiri, alkaloid, flavonoid dan lain-lain. Dengan diketahuinya senyawa
aktif yang dikandung simplisia akan mempermudah pemilihan pelarut
dan cara ekstraksi yang tepat. Simplisia yang lunak seperti rimpang
dan daun mudah diserap oleh pelarut, karena itu pada proses ekstraksi
tidak perlu diserbuk sampai halus. Simplisia yang keras seperti biji,
kulit kayu dan kulit akar susah diserap oleh pelarut, karena itu perlu
diserbuk sampai halus (Depkes RI, 2000).
Menurut Depkes RI (2000) ekstraksi dibagi menjadi 2 kelompok
yaitu :
1. Ekstraksi dengan menggunakan pelarut
a. Cara dingin
1. Maserasi
Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia dengan
menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau
pengadukan pada temperatur ruangan (kamar). Secara
teknologi termasuk ekstraksi dengan prinsip metode
pencapaian konsentrasi pada keseimbangan.
2. Perkolasi
Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru
sampai sempurna (exhaustive extraction) yang umumnya
dilakukan pada temperatur ruangan. Proses terdiri dari
tahapan pengembangan bahan, tahap maserasi antara, tahap
perkolasi sebenarnya (penetesan/penampungan ekstrak), terus
menerus sampai diperoleh ekstrak (perkolat) yang jumlahnya
1- 5 kali bahan.
b. Cara panas
1. Refluks
Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur
titik didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut
terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik.
Umumnya dilakukan pengulangan proses pada residu
pertama sampai 3-5 kali sehingga dapat termasuk proses
ekstraksi sempurna.
2. Soxhlet
Soxhlet adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu
baru yang umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga
terjadi ekstraksi kontinu dengan jumlah pelarut relatif
konstan dengan adanya pendingin balik.
3. Digesti
Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan
kontinu) pada temperatur yang lebih tinggi dari temperatur
ruangan (kamar), yaitu secara umum dilakukan pada
temperatur 40 - 50°C.
4. Infus
lnfus adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperature
penangas air (bejana infus tercelup dalam penangas air
mendidih, temperatur terukur 96-98°C) selama waktu tertentu
(15 - 20 menit ).
5. Dekok
Dekok adalah infus pada waktu yang lebih lama (~30°C)
dan temperatur sampai titik didih air.
6. Destilasi uap
Destilasi uap adalah ekstraksi senyawa kandungan
menguap (minyak atisiri) dari bahan (segar atau simplisia)
dengan uap air berdasarkan peristiwa tekanan parsial
senyawa kandungan menguap dengan fase uap air dari ketel
secara kontinu sampai sempurna dan diakhiri dengan
kondensasi fase uap campuran (senyawa kandungan menguap
ikut terdestilasi) menjadi destilat air bersama senyawa
kandungan yang memisah sempuma atau memisah sebagian.
2. Cara ekstraksi lainnya
a. Ekstraksi berkesinambungan
Proses ekstraksi yang dilakukan berulangkali dengan
pelarut yang berbeda atau resirkulasi cairan pelarut dan
prosesnya tersusun berturutan beberapa kali. Proses ini
dilakukan untuk meningkatkan efisiensi (iumlah pelarut) dan
dirancang untuk bahan dalam jumlah besar yang terbaqi
dalam beberapa bejana ekstraksi.
b. Superkritikal karbondioksida
Penggunaan prinsip superkritik untuk ekstraksi serbuk
simplisia, dan umumnya digunakan gas karbondioksida.
Dengan variabel tekanan dan temperatur akan diperoleh
spesifikasi kondisi polaritas tertentu yang sesuai untuk
melarutkan golongan senyawa kandungan tertentu.
Penghilangan cairan pelarut dengan mudah dilakukan karena
karbondioksida menguap dengan mudah, sehingga hampir
langsung diperoleh ekstrak .
c. Ekstraksi Ultrasonik
Getaran ultrasonik (> 20.000 Hz.) memberikan efek
pada proses ekstrak dengan prinsip meningkatkan
permiabilitas dinding sel, menimbulkan gelembung spontan
(cavitation) sebagai stres dinamik sertamenimbulkan fraksi
interfase. Hasil ekstraksi tergantung pada frekuensi getaran,
kapasitas alat dan lama proses ultrasonikasi.
d. Ekstraksi energi listrik
Energi listrik digunakan dalam bentuk medan listrik, medan
magnet serta "electric-discharges" yang dapat mempercepat
proses dan meningkatkan hasil dengan prinsip menimbulkan
gelembung spontan dan menyebarkan gelombang tekanan
berkecepatan ultrasonik.
2.4.3. Maserasi
Maserasi berasal dari bahasa latin “macerate” yang berarti
merendam, sehingga maserasi adalah suatu sediaan cair yang dibuat
dengan cara merendam bahan nabati menggunakan pelarut bukan air
atau pelarut setengah air seperti etanol ecer selama waktu tertentu
(Marjoni, 2016).
Maserasi dibuat dengan cara merendam bagian tanaman secara
utuh atau yang sudah digiling kasar dengan pelarut dalam bejana
tertutup pada suhu kamar selama sekurang-kurangnya 3 hari dengan
pengadukan berkali-kali sampai semua bagian tanaman yang dapat
larut melarut dalam cairan pelarut. Campuran ini kemudian disaring
dan ampas yang diperoleh dipres untuk memperoleh bagian cairnya
saja. Kemudian cairan yang diperoleh dijernihkan dengan penyaringan
atau dekantasi setelah dibiarkan selama waktu tertentu (Endarini,
2016).
2.4.4. Pelarut
Pelarut adalah zat yang berada pada larutan dalam jumlah yang
besar, sedangkan zat lainnya dianggap sebagai zat terlarut. Pelarut
yang digunakan pada proses ekstraksi haruslah merupakan pelarut
terbaik untuk zat aktif yang terdapat dalam sampel atau simplisia,
sehingga zat aktif dapat dipisahkan dari simplisia dan senyawa lainnya
yang ada dalam simplisia tersebut. Hasil akhir dari ekstraksi ini adalah
didapatkannya ekstrak yang hanya mengandung sebagian besar dari
zat aktif yang diinginkan. Pelarut yang digunakan dalam proses
ekstraksi memiliki beberapa sifat penting, antara lain: kemampuan
melarutkan, kecepatan menguap, trayek didih, berat jenis dan
flashpoint (Marjoni, 2016).
Etanol merupakan pelarut yang bersifat polar. Etanol dapat
melarutkan berbagai macam zat aktif seperti alkaloid, glikosida, dan
minyak atsiri. Selain itu, etanol juga dapat berfungsi sebagai
antimikroba dengan menghambat kerja dari enzim, menghalangi
pertumbuhan jamur dan bakteri. Keuntungan dari penggunaan etanol
sebagai pelarut adalah ekstrak yang dihasilkan lebih spesifik, dapat
bertahan lama, karena selain sebagai pelarut etanol juga berfungsi
sebagai pengawet (Marjoni, 2016).
Gambar Struktur Molekul Etanol
Sumber : Wusnah dkk. (2016)
2.5. Analisis Komponen Senyawa Kimia
2.5.1. Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Kromatografi lapis tipis (KLT) merupakan metode pemisahan
campuran analit degan mengelusi analit melalui lempeng kromatografi
lalu melihat komponen/analit yang tepisah denganpenyemprotan atau
pengecatan. Dalam bentuk yang sederhana, lempeng-lempeng
kromatografi lapis tipis dapat disiapkan di laboratoium, lalu lempeng
diletakan pada wadah dengan ukuran yang sesuai. Selanjutnya
kromatogram hasil dapat discanning secara visual. Dalam bentuk yang
lebih canggih, terdapat berbagai jenis lempeng kromatografi lapis
tipis. Tektik penotolan sampel, termasuk alat penotolan sampel yang
diotomatisasi, tempat pengembangan, alat pendeteksi, serta penyerap
(fase diam). Pada kromatografi lapis tipis fase diam berupa lapisan
yang seragam (uniform) pada permukaan bidang datar yang didukung
oleh lempeng kaca, aluminium, atau lepeng plastik. Fase gerak
sebagai pelarut pengembang akan bergerak sepanajng fase diam
karena pengaruh kapiler pada pengembangan secara mekanik, atau
karena pengaruh gravitasi pada pengembangan secara menurun.
Beberapa keuntungan kromatografi lapis tipis sebagai berikut :
1. Kromatografi lapis tipis banyak digunakan untuk tujuan analisis.
2. Identifikasi pemisahan komponen dapat dilakukan dengan preaksi
warna, fluoresensi, atau dengan cara radiasi menggunakan sinar
UV.
3. Dapat dilakukan elusi secara menaik, menurun, atau dengan cara
elisi dua dimensi.
4. Ketepatan penentuan kadar akan lebih baik karena komponen yang
akan ditentukan merupakan bercak yang tidak bergerak (Gandjar
dan Rhoman, 2012: 329).
Struktur kimia KLT dapat dilihat pada gambar dibawah ini:
Gambar 2.15Struktur Kimia KLT
Sumber :(Gandjar dan Rhoman, 2012: 329)
Komponen-komponen yang terdapat dalam kromatografi lapis tipis
antara lain:
a. Fase diam atau penjerap
Fase diam yang digunakan dalam kromatografi lapis tipis (KLT)
merupakan penyerap berukuran kecil dengan diameter partikel 10-
30 µm, semakin kecil ukuran rata-rata partikel fase diam dan
semakin sempit kisaran fase diam, maka semakin baik kinerja
kromatografi lapis tipis dalam hal efisiensi dan resolusinya.
Penjerap yang paling sering digunakan adalah silika, serbuk
selulosa, sementara mekanisme sorpsi yang utama pada
kromatografi lapis tipis adalah partisi dan adsorbsi. Lempeng
kromatografi lapis tipis telah tersedia di pasaran dengan berbagai
ukuran dan telah ditambah dengan reagen fluoresen untuk
memfasilitasi deteksi bercak solut (Gandjar dan Rohman,
2012:334). Beberapa fase diam yang sering digunakan dalam KLT
(Gandjar dan Rohman, 2012:335-341) antara lain :
1) Silica gel
Silica gel merupakan penyerap yang paling sering digunakan
dalam kromatografi lapis tipis. Silica gel disiapkan dengan
hidrolisis natrium silikat dengan asam polisilikat yang
mengalami kondensasi dan polimerisasi lebih lanjut
menghasilkan bahan silica gel.
Daya pisah dan efisiensi pemisahan yang diperoleh
tergantung pada ukuran dan distribusi ukuran partikel. Daya
pisah akan meningkat seiring dengan semakin seragam dan
kecilnya ukuran partikel. Lempeng kromatografi lapis tipis silica
gel yang beredar di pasaran mempunyai rata-rata ukuran partikel
10 m dengan kisaran ukuran partikel yang lebih sempit.
Lempeng-lempeng kromatografi lapis tipis tersedia dengan
indikator fluoresen (bahan yang berfluoresensi atau berpendar),
yang biasanya berupa seng silikat atau fosfor yang diaktivasi
oleh mangan, yang akan mengemisikan suatu fluoresensi hijau
ketika diradiasi/disinari dengan lampu UV pada panjang
gelombang 254 nm. Senyawa-senyawa yang mampu menyerap
sinar UV akan muncul sebagai bercak-bercak.
2) Keiselguhr (Celit)
Keislguhr (Celit) merupakan tanah yang tersusun atas
organisme laut mikroskopik yang kaya akan silica dan disebut
dengan diatom. Bahan ini mempunyai polaritas dan luas
permukaan yang besar. Keiselguhr sendiri tidak mempunyai
sifat absorptive yang kuat, tetapi keiselguhr dapat dilapiskan
pada fase diam cair berlilin; karena alasan inilah maka bahan ini
digunakan sebagai pendukung fase diam dalam kromatografi
partisi. Keislguhr (Celit) yang dilapiskan dengan cairan paraffin
digunakan dalam uji farmakope untuk trigliserida dan asam-
asam lemak dalam minyak.
3) Alumina
Alumina (aluminium oksida) merupakan penyerap yang kuat
dan dapat beerfungsi sebagai penukar ion amfoterik, tergantung
pada sifat permukaan dan pelarut yang digunakan.
4) Serbuk selulosa
Lapisan-lapisan serbuk selulosa merupakan agregasi partikel-
partikel dengan ukuran yang sangat kecil sehingga diperlukan
aliran fase gerak yang lebih banyak dengan difusi senyawa-
senyawa terlarut yang kecil. Selulosa mengandung air yang
teradsorbsi yang tertahan pada struktur glukopiranosa dengan
ikatan hidrogen. Dengan demikian pemisahan terjadi melalui
mekanisme partisi. Bahan-bahan selulosa hamper digunakan
secara eksklusif untuk pemisahan senyawa-senyawa hidrofilik
seperti asam amino dan gula.
b. Fase gerak atau pelarut pengembang
Fase gerak merupakan medium angkut yang terdiri atas satu
atau beberapa pelarut. Fase gerak bergerak di dalam fase diam,
yaitu suatu lapisan berpori, karena ada gaya kapiler. Profil pada
pemisahan kromatografi lapis tipis dapat dimodifikasi dengan
mengubah rasio distribusi, mengubah komposisi fase gerak,
memperhatikan polaritas dan kekuatan elusinya.
Sistem yang paling sederhana adalah campuran dua pelarut
organik karena daya elusi campuran kedua pelarut tersebut dapat
mudah diatur sedemikian rupa sehingga pemisahan dapat terjadi
secara optimal. Pelarut/fase gerak yang digunakan harus cukup
murah dan mempunyai kemurnian yang sangat tinggi karena
kromatografi lapis tipis merupakan teknik yang sensitif. Daya elusi
fase gerak harus diatur sedemikian rupa sehingga harga Rf terletak
antara 0,2-0,8 untuk memaksimalkan pemisahan (Gandjar dan
Rohman, 2012: 342).
c. Aplikasi (penotolan) sampel
Suatu sampel ditotolkan pada lempeng kromatografi lapis tipis.
Lempeng kromatografi lapis tipis tidak boleh rusak selama
penotolan sampel.Biasanya ditotolkan 1-10 µl larutan. Untuk
menotolkan disarankan agar menggunakan mikropipet berujung
runcing, khusus berskala 1 µl dan bervolume 10 µl (Stahl, 1985 :
10). Pemisahan pada kromatografi lapis tipis akan lebih optimal
jika sampel yang ditotolkan berada dalam bercak yang sekecil dan
sesempit mungkin. Apabila sampel yang ditotolkan terlalu banyak
maka akan menurunkan resolusi (Gandjar dan Rohman, 2012:345).
d. Pengembangan kromatografi lapis tipis
Pengembangan adalah proses pemisahan senyawa akibat pelarut
pengembang merambat naik dalam lempeng kromatografi lapis
tipis. Pemisahan senyawa dilakukan dalam suatu bejana
kromatografi (chamber) yang telah dijenuhkan dengan uap eluen.
Tujuan penjenuhan bejana kromatografi adalah untuk memperoleh
homogenitas atmosfer dalam bejana, sehingga dapat meminimalisir
penguapan pelarut pada lempeng kromatografi lapis tipis selama
dalam pengembangan (Stahl, 1985:11).
Bejana kromatografi harus dalam keadaan tertutup setelah eluen
dimasukkan dan saat lempeng kromatografi lapis tipis dimasukkan
setelah penotolan, bejana tidak boleh dibiarkan terbuka terlalu
lama, karena jika terbuka lama maka dapat menyebapkan
penyebaran elusi tidak merata atau tidak horisontal. Pada saat
dimasukkan ke dalam bejana, lempeng kromatografi lapis tipis
yang telah ditotoli harus tercelup kurang lebih 0,5-1 cm. Tinggi
eluen dalam bejana harus berada di bawah totolan pada lempeng
kromatografi lapis tipis (Gandjar dan Rohman, 2012:346).
e. Deteksi bercak/noda
Bercak pemisahan pada kromatografi lapis tipis umumnya
merupakan bercak yang tidak berwarna, sehingga untuk
penentuannya dapat dilakukan dengan cara kimia maupun fisika.
Secara kimia dapat dilakukan dengan mereaksikan bercak dengan
suatu pereaksi tertentu melalui penyemprotan sehingga bercak
menjadi jelas menujukkan adanya suatu kelompok senyawa
tertentu. Cara fisika yang dilakukan adalah engan proses radioaktif
dan fluorensi dibawa sinar ultra violet (UV) dengan panjang
gelombang 254 atau 366 nm (Gandjar dan Rohman, 2012:351).
Dalam kromatografi lapis tipis dan kromatografi kertas, hasil
yang diperoleh digambarkan dengan mencantumkan nilai Rf yang
merujuk pada migrasi relatif analit terhadap ujung depan fase gerak
atau eluen. Nilai Rf dapat didifenisikan sebagai:
(Gandjar dan Rohman, 2012: 330)
Pemisahan kromatografi lapis tipis dikendalikan oleh rasio
distribusi komponen dalam sistem fase diam/ penyerap dan elen
tertentu. Pemisahan pada kromatografi lapis tipis dapat
dimodifikasi dengan mengubah rasio disribusi dengan mengubah
kompoen fase gerak dengan memperhatikan polaritas dan kekuatan
elusinya. Berikut adalah beberapa petunjuk dalam memilih dan
mengoptimalisasi fase gerak:
1. Fase gerak harus mempunyai kemurnian yang sangat tinggi
karena kromatografi lapis tipis merupakan teknik yang sensitif.
2. Daya elusi gerak harus diatur sedemikian rupa sehingga harga
Rf terletak antara 0,2-0,8 untuk memaksimalkan pemisahan.
3. Untuk pemisahan dengan menggunakan fase diam polar seperti
silika gel, polarisasi fase gerak akan menentukan keceparan
mugrasi solut yang berarti juga menentukan nilai Rf.
Penambahan pelarut yang bersifat sedikit polar seperti dietil
eter ke dalam pelarut non polar seperti metil benzena akan
meningkatkan harga Rf secara signifikan.
Solut-solut ionik dan solut-solut polar lebih baik digunakan
campuran pelarut sebgai fase geraknya seperti campuran air dan
metanol dengan perbandingan tertentu. Penambahan sedikit asam
etanoat atau amonia masing-masing akan meningkatkan solut-solut
bersifat basa dan asam (Gandjar dan Rohman, 2012: 342).
2.6. Diuretik
2.6.1. Pengertian Diuretik
Diuretik adalah obat yang dapat menambah kecepatan
pembentukan urin. istilah diuresis mempunyai dua pengertian,
pertama menunjukkan adanya penambahan volume urin yang
diproduksi dan yang kedua menunjukkan jumlah pengeluaran
(kehilangan) zat-zat terlarut dan air. Fungsi utama diuretik adalah
untuk memobilisasi cairan edema, yang berarti mengubah
keseimbangan cairan sedemikian rupa sehingga volume cairan
ekstrasel kembali menjadi normal.
Diuretik berperan dalam penurunan tekanan darah yang terjadi
setelah penggunaan senyawa ini berlangsung 2 fase. Penurunan
tekanan darah mula-mula terjadi akibat peningkatan eksresi natrium.
Konsentrasi ion natrium terjadi penurunan akibatnya volume plasma
dan volume menit jantung akan turun, sebaliknya tekanan perifer
(secara reflektoris) agak naik. Pada fase kedua, volume plasma akan
dinormalkan kembali dan eksresi natrium akan hampir sama dengan
harga awal terapi. Penurunan tekanan darah pada fase ini
kemungkinan terutama disebabkan oleh kurangnya kandungan
natrium dalam dinding pembuluh (Nurihardiyanti et al., 2015).
2.6.2. Proses Terjadinya Diuresis
Proses diuresis dimulai dengan mengalirnya darah kedalam
glomeruli (gumpalan kapiler), yang terletak dibagian luar ginjal.
Dinding glomeruli inilah yang bekerja sebagai saringan halus yang
secara pasif dapat dilintasi air, garam dan glukosa. Ultrafiltrat yang
diperoleh dari filtrasi dan mengandung banyak air serta elektrolit
ditampung di wadah, yang mengelilingi setiap glomerulus seperti
corong (kapsul Bowman) dan kemudian disalurkan ke pipa kecil.
Tubuli ini terdiri dari bagian proksimal dan distal, yang letaknya
masing-masing dekat dan jauh dari glomerulus, kedua bagian ini
dihubungi oleh sebuah lengkungan (Henle’s loop). Di sini terjadi
penarikan kembali secara aktif dari air dan komponen yang sangat
penting bagi tubuh, seperti glukosa dan garam-garam, antar lain ion
Na+. Zat–zat ini dikembalikan pada darah melalui lapiler yang
mengelilingi tubuli. Sisanya yang tak berguna seperti “sampah”
perombakan metabolisme protein untuk sebagian besar tidak diserap
kembali.
Akhirnya filtrat dari semua tubuli ditampung di suatu saluran
pengumpul (ductus colligens), di mana terutama berlangsung
penyerapan air kembali. Filtrat akhir disalurkan ke kandung kemih
dan ditimbun sebagai urin. Dengan demikian ultrafiltrat yang setiap
harinya dihasilkan rata-rata 180 liter oleh seorang dewasa,
dipekatkan sampai hanya lebih kurang 1 liter air kemih. Sisanya,
lebih dari 99% direabsorbsi dan dikembalikan pada darah. Dengan
demikian suatu obat yang cuma sedikit mengurangi reabsorbsi
tubuler, misalnya dengan 1% mampu melipatgandakan volume
kemih (Tjay et al., 2007).
2.6.3. Mekanisme Kerja Diuretik
Menurut Tjay et al (2007) kebanyakan diuretika bekerja dengan
cara mengurangi natrium dan air sehingga pengeluarannya lewat
kemih. Obat-obat ini bekerja khusus terhadap tubuli, tetapi juga di
tempat lain, yaitu :
a. Tubuli Proksimal
Ultrafiltrat mengandung sejumlah besar garam yang di sini
direabsorbsi secara aktif untuk kurang lebih 70%, antara lain ion
Na+ dan air, begitu pula glukosa dan ureum. Karena reabsorbsi
berlangsung secara proporsional, maka susunan filtrat tidak
berubah dan tetap isotonis terhadap plasma. Diuretika osmosis
(manitol, sorbitol) bekerja di sini dengan merintangi reabsorbsi
air dan juga natrium.
1) Lengkungan Henle
Di bagian atas dari henle’s loop ini 25% dari semua ion
Cl- yang telah difiltrasi direabsorbsi secara aktif, disusul
dengan reabsorbsi pasif dari Na+ dan K+ tetapi tanpa air,
hingga filtrat menjadi hipotonis. Diuretika lengkungan
seperti furosemida, bumetida dan etakrinat, bekerja
terutama di sini dengan merintangi transpor Cl- dan
demikian reabsorbsi Na+. Pengeluaran K+ dan air juga
diperbanyak.
2) Tubuli Distal
Di bagian pertama segmen ini Na+ direabsorbsi secara
aktif pula tanpa air hingga filtrat menjadi lebih cair dan
lebih hipotonis. Senyawa thiazida dan klortalidon bekerja di
tempat ini dengan memperbanyak ekskresi Na+ dan Cl-
sebesar 5-10%. Di bagian kedua segmen ini, ion Na+
ditukarkan dengan ion K+ atau NH4+, proses ini
dikendalikan oleh hormon anak ginjal aldosteron. Antagonis
aldosteron (spironolakton) dan zat-zat pengehmat kalium
(amilorida triamteren) bertitik kerja di sini, dengan
mengakibatkan eksresi Na+ dan retensi K+.
3) Saluran Pengumpul
Hormon antidiuretik ADH (vasopresin) dari hipofisis
bertitik kerja di sini dengan jalan mempengaruhi
permeabilitas bagi air dan sel-sel saluran ini.
2.6.4. Penggolongan Diuretik
Menurut Tjay et al. (2007) pada umumnya diuretika dibagi
menjadi beberapa golongan, yaitu :
a. Diuretika Lengkungan: Furosemida, bumetanida dan
etakrinat
Obat-obat ini berkhasiat kuat dan pesat tetapi agak singkat
(4-6 jam). Banyak digunakan pada keadaan akut, misalnya
udema otak dan paru-paru. Obat-obat ini memperlihatkan kurva
dosis efek curam, artinya apabila dosis dinaikkan efeknya akan
bertambah.
b. Derivat Thiazida: hidroklorothiazida, klortalidon,
mefrusida, indapamida dan klopamida
Efek dari obat-obat ini lebih lemah dan lambat, tetapi
bertahan lebih lama (6-48 jam) dan terutama digunakan pada
terapi pemeliharaan hipertensi dan kelemahan jantung. Obat-
obat ini memiliki kurva dosis efek yang datar, artiya apabila
dosis optimal dinaikkan lagi efeknya (diuresis) tidak bertambah.
c. Diuretika Penghemat Kalium: antagonis aldosteron
(sprionolakton, kanrenoat, amilorida dan triamteren)
Efek dari obat-obat ini hanya lemah dan khusus digunakan
terkombinasi dengan diuretika lainnya guna menghemat eksresi
kalium. Aldosteron menstimulasi reabsorbsi Na+ dan eksresi K+,
proses ini dihambat secara kompetitif (saingan) oleh obat-obat
lain. Amilorida dan triamteren dalam keadaan normal hanya
lemah dan efek eksresinya mengenai Na+ dan K+. Tetapi pada
penggunaan diuretika lengkungan dan thiazida terjadi eksresi
kalium dengan kuat, maka pemberian bersama dari penghemat
kalium ini menghambat eksresi K+ dengan kuat pula. Mungkin
juga eksresi dari magnesium dihambat.
d. Diuretik Osmotis: manitol dan sorbitol
Obat-obat ini hanya direabsorbsi sedikit oleh tubuli, hingga
reabsorbsi air juga terbatas. Efeknya adalah diuresis osmotis
dengan eksresi air kuat dan reatif sedikit eksresi Na+. Terutama
manitol, yang hanya jarang digunakan sebagai infus intravena
untuk mengeluarkan cairan dan menurunkan tekanan intraokuler
(pada glaucom), juga untuk menurunkan volume CCS (cairan
cerebrospinal) dan tekanan intracranial (dalam tengkorak).
e. Perintang Karbonanhidrase: asetazolamida
Zat ini merintangi enzim karbonanhidrase di tubuli
proksimal, sehingga di samping karbonat, juga Na+ dan K+
dieksresikan lebih banyak, bersamaan dengan air. Khasiat
diuretiknya hanya lemah, setelah beberapa hari terjadi
tachyflylaxine, maka perlu digunakan secara selang-seling.
2.6.5. Furosemid
Gambar Struktur Furosemid
Sumber : Ganiswarna (2001)
Diuretik kuat mempunyai mula kerja dan lama kerja yang lebih
pendek dari tiazid. Diuretik kuat bekerja dengan cara menghambat
reabsorpsi elektrolit di ansa Henle asendens bagian epitel tebal,
tempat kerjanya di permukaan sel epitel bagian luminal (yang
menghadap ke lumen tubuli). Pada pemberian secara lV obat ini
cenderung meningkatkan aliran darah ginjal tanpa disertai
peningkatan filtrasi glomerulus. Perubahan hemodinamik ginjal ini
mengakibatkan menurunnya reabsorpsi cairan dan elektrolit di tubuli
proksimal serta meningkatnya efek awal diuresis. Peningkatan aliran
darah ginjal ini relatif hanya berlangsung sebentar. Dengan
berkurangnya cairan ekstrasel akibat diuresis, maka aliran darah
ginjal menurun dan hal ini akan mengakibatkan meningkatnya
reabsorpsi cairan dan elektrolit di tubuli proksimal.
Furosemid dan bumetanid mempunyai daya hambat enzim
karbonik anhidrase karena keduanya merupakan derivat sulfonamid,
seperti juga tiazid dan asetazolamid, tetapi aktivitasnya terlalu lemah
untuk menyebabkan diuresis di tubuli proksimal. Bioavailabilitas
furosemid 65%.
Diuretik kuat terikat pada protein plasma secara ekstensif,
sehingga tidak difiltrasi di glomerulus tetapi cepat sekali disekresi
melalui sistem transport asam organik di tubuli proksimal. Dengan
cara ini obat terakumulasi di cairan tubuli dan mungkin sekali di
tempat kerja di daerah yang lebih distal lagi.
Sebagian besar furosemid diekskresi melalui ginial dalam bentuk
utuh dan dalam konjugasi dengan senyawa sulfhidril terutama sistein
dan N-asetilsistein, sebagian kecil dalam bentuk glukuronid.
Furosemid lebih banyak digunakan daripada asam etakrinat,
karena gangguan saluran cerna yang lebih ringan dan kurva dosis
responsnya kurang curam. Diuretik kuat merupakan obat efektif
untuk pengobatan udem akibat gangguan jantung, hati atau ginjal.
Sebaiknya diberikan secara oral, kecuali bila diperlukan diuresis
yang segera, maka dapat diberikan secara lV atau lM. Pemberian
parenteral ini diperlukan untuk mengatasi udem paru akut. Pada
keadaan ini perbaikan klinik dicapai karena terjadi perubahan
hemodinamik dan penurunan volume cairan ekstrasel dengan cepat,
sehingga alir balik vena dan curah ventrikel kanan berkurang. Untuk
mengatasi udem refrakter, diuretik kuat biasanya diberikan bersama
diuretik lain, misalnya tiazid atau diuretik hemat K+. Pemakaian dua
macam obat diuretik kuat secara bersamaan merupakan tindakan
yang tidak rasional.
Obat furosemid ini tersedia dalam bentuk tablet 20, 40, 80 mg
dan preparat suntikan. Umumnya pasien membutuhkan kurang dari
600 mg/hari. Dosis anak 2 mg/kgBB, bila perlu dapat ditingkatkan
menjadi 6 mg/kgBB.
2.7. Hewan Uji
2.7.1. Morfologi Hewan Uji
Tikus termasuk binatang pengerat yang merugikan dan termasuk
hama terhadap tanaman petani. Sekali beranak tikus dapat
menghasilkan sampai 15 ekor, namun rata-rata 9 ekor. Nama lain
hewan ini di berbagai daerah di Indonesia antara lain di
Minangkabau orang menyebutnya menit, sedangkan orang Sunda
menyebutnya beurit. Tikus albino (tikus putih) banyak digunakan
sebagai hewan percobaan di laboratorium (Akbar, 2010: 4).
2.7.2. Klasifikasi Hewan Uji
Klasifikasi tikus putih adalah sebagai berikut (Akbar, 2010: 4-5) :
Kingdom : Animalia
Filum : Chordata
Kelas : Mammalia
Ordo : Rodentia
Subordo : Odontoceti
Familia : Muridae
Genus : Rattus
Spesies : Rattus norvegicus
Gambar 2.21. Tikus Putih
Sumber : Akbar (2010)
2.7.3. Karakteristik Hewan Uji
Tikus putih memiliki beberapa sifat yang menguntungkan sebagai
hewan uji penelitian diantaranya perkembangbiakannya cepat,
mempunyai ukuran yang lebih besar dari menit, mudah dipelihara
dalam jumlah yang banyak. Tikus putih juga memiliki ciri-ciri
morfologis seperti albino, kepala kecil, dan ekor yang lebih panjang
dibandingkan badannya, pertumbuhannya cepat, temperamennya
baik, kemampuan laktasi tinggi, dan tahan terhadap arsenik tiroksid
(Akbar, 2010: 5).
2.8. Kerangka Konsep
Diuretik
Obat Herbal Obat Sintetik
Diuretika
Lengkungan
Diuretik thiazida
Diuretik hemat
kalium
Diurettik osmotis
Diuretik
Karbonanhidrase
EFEK DIURESIS EKSTRAK ETANOL AKAR
KEMANGI HUTAN (Ocimum sanctum, Linn) PADA
TIKUS PUTIH JANTAN
Tikus 25 ekor Sampel akar kemangi hutan
(Ocimum sanctum)
Dibagi dalam 5 kelompok yang
terdiri dari 5 ekor
Variasi dosis ekstrak akar
kemangi hutan
Kontrol normal
aquadest 0,2 ml
Kontrol positif
Diberi
furosemid
0,104 mg/g BB
Kelompok III
Diberi ekstrak
etanol akar
kemangi hutan
35 mg/g BB
Kelompok III
Diberi ekstrak
etanol akar
kemangi hutan
70 mg/g BB
Kelompok III
Diberi ekstrak
etanol akar
kemangi hutan
105 mg/g BB
Pengujian aktivitas diuresis
Analisis data
2.9. Hipotesis
Hipotesis yang ditarik dari penelitian ini adalah sebagai berikut:
1. Ekstrak akar kemangi hutan ocimum sanctum memiliki efek diuresis
2. Dosis yang paling optimal dalam memberikan efek diuresis adalah
dosis 105mg/g BB tikus
BAB III
METODE PENELITIAN
3.1. Desain dan Rancangan Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan desain post
test-only control design. Hewan uji dalam penelitian ini dibagi dalam 2
kelompok, yaitu kelompok kontrol dan kelompok uji yang dipilih secara acak.
Kelompok kontrol terdiri dari kelompok kontrol positif dan kelompok kontrol
negatif. Sedangkan kelompok uji terdiri dari kelompok uji I, kelompok uji II
dan kelompok uji III.
Rancangan dalam penelitian ini adalah sebagai berikut:
1. Kelompok kontrol negatif (-), diberikan suspensi Na CMC 0,5 %.
2. Kelompok positif (+), akan diberikan furosemid dengan dosis 5,2 mg/kg
BB
3. Kelompok uji I, diberikan ekstrak etanol 70% akar kemangi hutan dengan
dosis 35 mg/g BB
4. Kelompok uji II, diberikan ekstrak etanol 70% akar kemangi hutan dengan
dosis 70 mg/g BB
5. Kelompok uji III, diberikan ekkstrak etanol 70% akar kemangi hutan
dengan dosis 105 mg/g BB
3.2. Populasi, Sampel dan Sampling
3.2.1. Populasi
Populasi adalah wilayah generalisasi yang terdiri atas obyek dan
subyek yang mempunyai kualitas dan karakterisik tertentu yang
ditetapkan oleh peneliti untuk mempelajari dan kemudian ditarik
kesimpulannya (Sugiyono, 2013). Populasi yang digunakan dalam
penelitian ini adalah tanaman kemangi hutan (Ocimum sanctum) yang
diambil secara acak di Desa Hoanoa Kecamatan Noelbaki Kabupaten
Kupang.
3.2.2. Sampel
Sampel adalah bagian dari jumlah dan karakterisik yang dimiliki
oleh populasi tersebut (Sugiyono, 2013). Sampel yang digunakan dalam
penelitian ini adalah akar dan batang kemangi hutan.
3.2.3. Sampling
Teknik pengambilan sampel dalam penelitian ini adalah simple
random sampling yaitu sampel diambil secara acak tanpa
memperhatikan strata yang ada dalam populasi itu (Sugiyono, 2013).
3.3. Variabel Penelitian
Variabel utama dalam penelitian ini adalah ekstrak akar kemangi hutan
yang diduga memiliki aktivitas analgesik.
3.3.1. Variabel bebas
Dalam penelitian ini, yang menjadi variabel bebas adalah ekstrak etanol
akar kemangi hutan (Ocimum sanctum).
3.3.2. Variabel terikat
Dalam penelitian ini, yang menjadi variabel terikat adalah efek diuresis
ektrak etanol akar kemangi hutan
3.3.3. Variabel Terkendali
Dalam penelitian ini, yang menjadi variabel terkendali adalah kondisi
fisik dari tikus yaitu berat badan dan jenis kelamin.
3.4. Definisi Operasional.
a. Akar kemangi hutan adalah bagian dari tanaman kemangi hutan yang
tumbuh di sekitar Desa Hoanoa, Kecamatan Noelbaki Kabupaten
Kupang.
b. Ekstrak etanol akar kemangi hutan adalah ekstrak kental yang diperoleh
dari proses ekstraksi akar kemangi hutan dengan metode maserasi
menggunakan pelarut etanol 70%.
c. Efek diuresis dihitung dari jumlah urin yang sudah tampung setiap 6 jam
selama 24 jam.
3.5. Alat, Bahan, dan Hewan Uj
1. Alat
Alat yang digunakan untuk maserasi yaitu botol yang berwarna gelap
ukuran 1000 ml tertutup, kain flanel, corong, gelas, mortir dan stamper,
oven, alat penimbang digunakan timbangan listrik AEG-120 Shimadu,
vaccum rotary evaporator, alat timbang tikus , alat suntik oral tikus , alat
yang digunakan untuk uji diuresis adalah jarum sonde lambung, botol
penampung urine, alat pengukur waktu (stopwatch). Alat untuk persiapan
dosis yaitu pipet tetes, labu erlenmeyer, beaker glass, mortar, stamper,
neraca analitik.
2. Bahan
a. Bahan sampel
Bahan sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah akar
kemangi hutan (Ocimum sanctum) yang diambil di Desa Hoanoa
Kecamatan Noelbaki Kabupaten Kupang.
b. Bahan kimia
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah akar dan batang
kemangi hutan (Ocimum sanctum), etanol 70%, HCl 2N, pereaksi
Mayer, pereaksi Wagner, pita Mg, HCl pekat, NaOH 1M, kloroform,
asam asetat glasial, H2SO4 pekat, FeCl3, Na CMC 0,5%, furosemid,
aquadest.
3. Hewan Uji
Hewan uji yang digunakan adalah tikus jantan galur wistar yang berumur
1-1,5 bulan dengan berat badan 150-200 g yang sehat dan tidak cacat, yang
diperoleh dari Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Nusa Cendana
Kupang.
3.6. Jalannya Penelitian
3.6.1 Pengambilan sampel
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah akar kemangi
hutan yang diperoleh dari desa Hoanoa, Kecamatan Noelbaki,
Kabupaten Kupang.
3.6.2 Determinasi Tanaman Kemangi Hutan
Determinasi tanaman dalam tahap penelitian adalah menetapkan
kebenaran sampel kemangi hutan (Ocimum sanctum) yang berkaitan
dengan ciri-ciri makroskopis dan mencocokan morfologis yang ada
dalam tanaman yang akan diteliti. Determinasi dilakukan di Fakultas
Pertanian Jurusan Agroteknologi, Universitas Nusa Cendana Kupang.
3.6.3 Pengeringan Tanaman Kemangi Hutan
Akar kemangi hutan yang sudah diambil dibersihkan dengan air
suling kemudian dikeringkan dengan oven pada suhu 40°C selama ± 4
hari dengan parameter kadar air kurang dari 10%. Pengeringan ini
bertujuan untuk mengurangi bekerjanya enzim dan perubahan kimia
yang dapat menurunkan mutu serta memudahkan dalam proses
penyerbukan.
3.6.4 Pembuatan serbuk akar kemangi hutan
Akar kemangi hutan yang sudah kering kemudian digiling sampai
menjadi serbuk halus, lalu diayak dengan ayakan nomor 20.
Gambar 3. Skema pembuatan serbuk
3.6.5 Pembuatan Ekstrak Etanol 70% Akar Kemangi Hutan
1. Timbang 250 g akar kemangi hutan yang sudah dihaluskan
2. Masukkan akar kemangi hutan yang sudah dihaluskan kedalam
labu erlenmeyer 5000 mL.
3. Tambahkan 2500 mL etanol 70%, sampai menutupi seluruh bagian
serbuk simplisia.
4. Tutup rapat labu erlenmeyer dengan aluminium foil, kocok
campuran hingga merata.
Dicuci, kemudian dikeringkan
Akar kemangi hutan
Bahan kering
Serbuk kering akar kemangi hutan
Diserbuk dan diayak dengan pengayak nomor 20
5. Ekstrak disimpan selama 3 hari terhindar dari cahaya matahari dan
diletakan pada suhu ruangan serta sesekali digojok.
6. Rendaman simplisia disaring menggunakan corong dan kertas
saring.
7. Filtrat diuapkan menggunakan evaporator, untuk mendapatkan
ekstrak kental.
8. Ekstrak siap digunakan untuk identifikasi fitokimia antara lain:
alkaloid, flavonoid, saponin, tanin, triterpenoid dan steroid serta uji
aktivitas ekstrak pada tikus.
3.6.6 Uji Susut Pengeringan Ekstrak Etanol 70% Akar Kemangi Hutan
Penentuan susut pengeringan pada ekstrak bertujuan untuk
memberikan batasan maksimal atau rentang tentang besarnya senyawa
yang hilang pada proses pengeringan. Pengujian susut pengeringan
ekstrak akar kemangi hutan dilakukan dengan menggunakan metode
susut pengeringan (Depkes RI, 2000):
1. Panaskan botol timbang dangkal tertutup pada suhu 105 ºC selama
30 menit
2. Masukkan ±1-2 g ekstrak akar kemangi hutan kedalam botol
timbang yang sudah dipanaskan
3. Keringkan pada suhu 105 ºC dengan alat desikator
4. Lanjutkan pengeringan dan timbang pada jarak 1 jam sampai
perbedaan antara 2 penimbangan berturut-turut tidak lebih dari
0,25%
3.6.7 Analisis Komponen Fitokimia Ekstrak Etanol 70% Akar Kemangi
Hutan
1. Analisis Flavonoid
a. Masukkan 2 mL ekstrak etanol 70% akar kemangi hutan dalam
tabung reaksi dan di panaskan.
b. Tambahkan serbuk magnesium dan tambahkan HCl 1 mL
c. Jika terbentuk larutan warna berwarna merah menunjukkan
adanya flavonoid (Simaremare, 2014).
2. Analisis Triterpenoid dan Steroid
a. Masukkan 1 mL ekstrak etanol 70% akar kemangi hutan dalam
tabung reaksi.
b. Tambahkan 0,5 mL kloroform, dan tambahkan 0,5 mL asam
asetat anhidrida.
c. Campuran tersebut ditetesi 2 mL asam sulfat pekat melalui
dinding tabung tersebut.
d. Bila terbentuk warna hijau kebiruan menunjukkan adanya
steroid. Bila terbentuk cincin kecoklatan atau violet
menunjukkan adanya triterpenoid (Simaremare, 2014).
3. Analisis Saponin
a. Masukkan 1 mL ekstrak etanol 70% akar kemangi hutan
kedalam tabung reaksi.
b. Tambahkan 10 mL aquadest.
c. Setelah itu kocok kuat selama 30 detik.
d. Jika terbentuk busa tidak hilang selama 30 detik, maka
menunjukan adanya saponin.
4. Analisis Tanin
a. Masukkan 0,01 mg ekstrak etanol 70% akar kemangi hutan ke
dalam tabung reaksi, tambahkan 10 mL aquadest, aduk sampai
homogen.
b. Tambahkan sedikit gelatin.
c. Apabila terdapat endapan coklat maka ekstrak positif
mengandung tanin.
5. Analisis Alkaloid
a. Siapkan reagen Mayer.
1. Larutan A: larutkan 1,358 g HgCl2 dalam 60 mL aquadest.
2. Larutan B: larutkan 3 g KI dalam 10 mL aquadest. Tuang
larutan A dalam larutan B, encerkan dengan aquadest
sampai volume larutan menjadi 100 mL.
b. Siapkan reagen Wagner.
1. Larutkan 6 g KI dalam 100 mL aquadest.Tambahkan 2 g I2
dan aduk hingga campuran homogen.
2. Siapkan 2 buah tabung reaksi yang bersih. Beri label A dan
B pada setiap tabung.
c. Masukkan 0,01 mg ekstrak etanol 70% akar dan batang kemangi
hutan ke dalam masing-masing tabung A dan B.
d. Tambahkan 0,5 mL HCl 2% pada tabung A. Kocok campuran
hingga homogen.
e. Tambahkan 2-3 tetes reagen Mayer ke dalam tabung A.
f. Tambahkan 2-3 tetes reagen Wagner ke dalam tabung B.
g. Jika pada tabung A terbentuk endapan putih dan tabung B
terbentuk endapan coklat maka ekstrak positif mengandung
alkaloid.
3.6.8 Analisis Komponen Senyawa Kimia Ekstrak Etanol 70% Akar
Kemangi Hutan
a. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Ekstrak Etanol 70% Akar
Kemangi Hutan
1. Plat kromatografi lapis tipis (KLT) dipanaskan dalam oven
pada suhu 100 0C selama 30 menit.
2. Plat KLT didinginkan di udara terbuka selama 1 jam
3. Potong plat kromatografi lapis tipis (KLT), dengan panjang 5
cm dan lebar 2 cm.
4. Beri garis batas bawah 1 cm dan batas atas 0,5 cm dengan
pensil.
5. Masukkan 8 mL metanol dan 2 mL aseton ke dalam botol
chamber, ditutup, dan diaduk sehingga homogen.
6. Biarkan beberapa menit. Campuran metanol-aseton digunakan
sebagai eluen atau fase geraknya.
7. Larutkan 0,01 mg ekstrak etanol 70% akar kemangi hutan
dalam tabung reaksi kecil dan tambahkan 5 mL metanol dalam
tabung reaksi tersebut.
8. Campurkan ekstrak dan etanol hingga homogen.
9. Totolkan campuran ekstrak etanol 70% akar kemangi hutan
pada plat kromatografi lapis tipis (KLT) pada batas bawah, lalu
keringkan beberapa menit
10. Masukkan plat kromatografi lapis tipis (KLT) ke dalam botol
chamber yang telah berisi fase gerak
11. Biarkan beberapa menit, sampai ekstrak yang dibawa oleh fase
gerak mendekati batas atas pada plat kromatografi lapis tipis
(KLT).
12. Angkat kertas kromatografi lapis tipis (KLT) dari botol
chamber.
13. Biarkan beberapa menit.
14. Amati noda hasil pada plat kromatografi lapis tipis (KLT)
menggunakan lampu UV pada panjang gelombang 254 nm.
15. Buatlah lingkaran noda pada plat kromatografi lapis tipis
(KLT).
16. Amati warna noda.
3.6.9 Uji Efek Diuresis
1. Pembuatan larutan
Larutan stok yaitu suspensi CMC 0,5%. Serbuk CMC ditimbang
500 mg kemudian dilarutkan dalam air suling panas sambil diaduk
pada volume 100 ml.
2. Penentuan dosis furosemid
Penetapan ini didasarkan pada dosis terapi manusia. Untuk
manusia (70 kg) sekali minum = 40 mg. Berdasarkan rasio luas
permukaan badan tikus dan manusia didapat angka konversi
sebesar 0,0018. Maka konversi dosis manusia ke tikus dengan berat
200 g adalah = 0,0018 x 40 mg = 0,72 mg/ 200 g BB. Furosemid
yang diberikan pada kelompok tikus yang merupakan kontrol
tunggal adalah 0,72 mg/200 g BB.
3. Penentuan dosis ekstrak akar kemangi
Dosis ekstrak akar kemangi pada tikus yang digunakan pada
penelitian sebelumnya yaitu dosis 250 mg/kg BB tikus (Pai Preethi
et al.,2013). Variasi dosis yang digunakan adalah dosis I (35
mg/200 g BB), dosis II (70 mg/200 g BB), dosis III (105 mg/200 g
BB). Ekstrak akar kemangi ditimbang dan dibuat suspensi dengan
CMC0,5% kemudian siap untuk diujikan pada hewan uji.
4. Perlakuan hewan uji
Hewan uji yang digunakan adalah tikus putih dengan berat rata-
rata 200-250 gram. Jenis kelamin yang dipilih adalah jantan. Tikus
ditimbang dan masing-masing diberi tanda pengenal selanjutnya
tikus dipuasakan terlebih dahulu selama 48 jam.
Hewan uji dibagi dalam 5 kelompok dimana masing – masing
kelompok terdiri atas 5 ekor tikus. Skema pengujian dapat dilihat di
gambar 5.
Kelompok I : Diberi aquadest 1 ml sebagai kontrol normal
Kelompok II : Diberi furosemid sebagai kontrol positif 0,104
mg/g BB
Kelompok III : Diberi ekstrak etanol akar kemangi hutan 35 mg/g
BB
Kelompok IV : Diberi ekstrak etanol akar kemangi hutan 70 mg/g
BB
Kelompok V : Diberi ekstrak etanol akar kemangi hutan 105
mg/gBB
3.7. Analisa statistik
Tahap pertama adalah uji mengetahui ada tidaknya perbedaan bermakna
pada parameter antara kelompok perlakuan dengan berbagai perbandingan
dosis. Urutan uji yang dilakukan pertama-tama adalah uji distribusi normal
dengan menggunakan informasi dari uji kolmogorov-smirnov. Data memiliki
distribusi normal jika nilai p > 0,05 dan memiliki distribusi yang tidak normal
jika p < 0,05.
Jika data terdistribusi normal pengujian dilanjutkan dengan uji
homogenitas varian untuk mengetahui kesamaan varian data. Varian data
sama jika p > 0,05, sedangkan tidak sama jika p > 0,05. Ketika varian data
dinyatakan sama berarti uji selanjutnya yang sudah dilakukan sudah valid
untuk menggunakan uji parametrik.
Langkah selanjutnya dilakukan uji uji Anova satu jalan. Dari uji akan
didapatkan informasi ada tidaknya perbedaan bermakna antara kelompok
Gambar 5. Skema prosedur perlakuan hewan uji
Analisa data
Penampungan urin selama 6 jam
Kelompok tikus (25 ekor)
Adaptasi selama 7 hari
Dipuasakan seama 48 jam, tetap diberi minum
kontrol normal
aquadest 1 ml
5 ekor tikus
Kontrol positif
Diberi
furosemid
sebagai kontrol
positif 0,104 mg/g BB
5 ekor tikus
Kelompok III
Diberi ekstrak
etanol akar
kemangi hutan 35
mg/g BB
Kelompok IV
Diberi ekstrak
etanol akar
kemangi hutan 70
mg/g BB
Kelompok V
Diberi ekstrak
etanol akar
kemangi hutan
105 mg/g BB
Pengukuran volume urin tiap 6 jam, selama 24 jam
perlakuan. Bila p < 0,05 memiliki arti bahwa terdapat perbedaan bermakna
antara kelompok, sedangkan jika p > 0,05 memiliki arti bahwa tidak terdapat
perbedaan bermakna antar kelompok apapun. Apabila terdapat perbedaan
bermakna maka dilakukan uji Tukey post hoc test untuk mengetahui
sebenarnya kelompok-kelompok mana yang memilki perbedaan itu.
BAB IV
BIAYA DAN JADWAL PENELITIAN
4.1. Anggaran biaya
No. Jenis Pengeluaran Biaya yang Diusulkan
1. Honorarium untuk pelaksana, petugas
laboratorium, pengumpul data, pengolah data,
penganalisis data, honor operator, dan honor
pembuat system (maksimum 30% dan
dibayarkan sesuai ketentuan)
Rp. 1.000.000
2. Pembelian bahan habis pakai untuk ATK,
fotocopy, surat menyurat, penyusunan
laporan, cetak, penjilidan laporan, publikasi,
pulsa, internet, bahan laboratorium (pellarut,
reagen), plat KLT, hewan uji, langganan
jurnal (maksimum 60%)
Rp. 6 .375.000
3. Perjalanan untuk biaya survey/sampling data,
seminar/workshop DN-LN, biaya akomodasi-
konsumsi, perdiem/lumpsun, transport
(maksimum 40%)
Rp. 500.000
4. Sewa untuk peralatan/mesin/ruang
laboratorium, kendaraan, kebun percobaan,
peralatan penunjang penelitian lainnya
(maksimum 40%)
Rp. 1.500.000
Jumlah Rp. 9.375.000
4.2. Jadwal Penelitian
Tabel 2. Jadwal Penelitian
No Uraian Percapaian per Bulan
Sep Okt Nov Feb
1 Persiapan
2 Pelaksanaan
3 Pengolahan dan Analisa Data
4 Pembuatan Laporan
5 Seminar Hasil
6 Laporan Akhir dan Publikasi
DAFTAR PUSTAKA
1. Chang X, Alderson PG, Wright CJ. Enhanced UV-B radiation alters basil
(Ocimum basilicum L.) Growth and stimulates the synthesis of volatile oils. J
Horticulture Forestry. 2009;1(2):27–31. [Google Scholar]
2. Schutte A, Van Rooyen J, Huisman H, Krunger H, De Malan NT, Ridder JH.
Dietary risk markers that contribute to the aetiology of hypertension in black
South African childerens. The THUSA BAMMA study. J Hum Hypertens.
2003;17:29–35. doi: 10.1038/sj.jhh.1001508. [PubMed] [CrossRef] [Google
Scholar]
3. Umar A, Imam G, Yimin W, Kerim P, Tohti I, Berke B, et al.
Antihypertensive effects of Ocimum basilicum L. (OBL) on blood pressure in
renovascular hypertensive rats. Hypertens Res. 2010;33(7):727–30. doi:
10.1038/hr.2010.64. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
4. G. Tsasi, T. Mailis, A. Daskalaki et al., “The effect of harvesting on the
composition of essential oils from five varieties of Ocimum basilicum L.
cultivated in the Island of Kefalonia, Greece,” Plants, vol. 6, no. 3, 2017.
View at: Google Scholar
5. S. Khair-ul-Bariyah, D. Ahmed and M. Ikram. Ocimum Basilicum: A Review
on Phytochemical and Pharmacological Studies. 2012. Pakistan Journal of
Chemistry 2(2):78-85.
6. S. K. Marwat, M. S. Khan, S. Ghulam, N. Anwar, G. Mustafa, and K. Usman,
“Phytochemical constituents and pharmacological activities of sweet Basil-
Ocimum basilicum L. (Lamiaceae),” Asian Journal of Chemistry, vol. 23, no.
9, pp. 3773–3782, 2011. View at: Google Scholar
7. A Kumar, A Rahal , S Chakraborty, R Tiwari, S K Latheef , K Dhama,
Ocimum sanctum (Tulsi): a miracle herb and boon to medical science – A
Review. International Journal of Agronomy and Plant Production, 2013;
4(7): 1580-1589
8. R Miller, S Miller, Tulsi Queen of Herbs India’s Holy Basil, 2003.
9. Dalimartha, S. 2014. Tumbuhan Sakti Atasi Asam Urat. Jakarta: Penebar
Swadaya.
10. [Depkes RI] Ditjen POM. (1995). Farmakope Indonesia. Edisi IV. Jakarta:
Departemen Kesehatan RI. Halaman 157
11. Ditjen POM. 2014. Farmakope Herbal Indonesia. Edisi V. Jakarta:
Departemen Kesehatan RI.
12. Akbar, Budhi. (2010). Tumbuhan Dengan Kandungan Senyawa Aktif yang
Berpotensi Sebagai Bahan Antifertilitas. Jakarta: Adabia Press. Hal. 4, 5
13. Sugiyono. (2017). Metode Penelitian Kuantitatif, Kualitatif dan R & D.
Bandung : Alfabeta.
14. Raina, Archana et al. (2013). Chemical Characterization of ROMA
Compounds in Essential Oil Isolated From “Holy Basil” (Ocimum
tenoiflorum L.) Groown in India. Genet Resour Crop Evol, 60(2013):1727.
15. Khrisna, Sai et al. (2014). “Tulsi”-The Wonder Herb (Pharmacological
Activities of Ocimum sanctum). American Journal of Ethnomedicine,
1(1):89-90.
16. Kulkarni, Kaushik & Adavirao, Belvotagi. (2018). A review on: Indian
traditional shrub Tulsi (ocimum sanctum): The unique medicinal Plan.
Journal of Medicinal Plants Studies, 6(2):106-107.
17. Sudarsono dkk. (2002). Dalam Tumbuhan Obat II. Yogyakarta: Universitas
Gajah Mada Sekip Utara. Hal. 41
18. Mangoting, Daniel et. al. (2005). Tanaman Lalapan Berkhasiat Obat.
Penebar Swadaya. Jakarta.
19. World Health Organization. (2002). WHO Monographs on Selected
Medicinal Plants. Volume 2. World Health Organization Geneva. Halaman:
209.
20. Anggarwal, Ankur & Mali, Rakesh. (2015). Ocimum tenuiflorum – A
Medicinal Plants with its versatile uses. .International Journal of Recent
Advancesin Science and Technology, 2(2) : 1, 2.
21. Samak, Geetha et al. (2007). Hypolipidemic Efficacy Of Ocimum Sanctum In
The Prevention Of Atherogenesis In Male Albino Rabbits. Pharmacology
online, 2(2007):124
22. Kar, Ashutosh. (2013). Farmakognosi dan Farmakobioteknologi. Jakarta.
EGC. Hal. 427, 449, 450
23. Robinson, T., 1995, Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi, Edisi IV,
Diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata, ITB, Bandung. Hal : 71, 73, 152,
154, 157, 158, 191, 193, 283, 284, 285
24. Achmad, S. A. 1986. Kimia Organik Bahan Alam, Materi 4 : Ilmu Kimia
Flavanoid. Karunika Universitas Terbuka. Jakarta. Hal : 2, 3, 16,17, 48
25. Mulyono. (2005). Membuat Reagen Kimia di Laboratorium. Jakarta. Bumi
Aksara. Hal : 65, 71
26. Harborne, J. B. (1987). Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern
Menganalisa Tumbuhan. Penerbit ITB. Bandung. Hal. 133, 148, 149, 174
27. Sirait M. (2007). Penuntun Fitokimia Dalam Farmasi. Bandung : Intitut
Twknologi Bandung. Hal. 213
28. Santoso B. (2008). Fisiologi dan Biokimia Pada Komoditi Panenan
Hortikultura. Yogyakarta: Kanisius. Hal. 86, 87, 88,
29. Siswandono, Bambang, S. (1998). Prinsip-Prinsip Rancangan Obat.
Surabaya: Airlangga University Press. Hal. 7
30. Brady, J. E dan Humiston. (1999). General Chemistery Principle and
Structure, 4th Edition, New York : John Willey & Sons, Inc. Hal. 562, 563
31. Hartini dan Wulandari. (2016). Buku Panduan Praktikum Farmakognosi dan
Fitokimia. Yogyakarta: Universitas Sanata Dharma. Hal : 7
32. Depkes RI. 2000. Farmakope Herbal Indonesia Edisi 1. Jakarta: Departemen
Kesehatan Republik Indonesia. Hal xxv, xxvi, 172, 174 175.
33. Endarini, Lully. (2016). Farmakognosi dan Fitokimia. Jakarta: Kementrian
Kesehatan Republik Indonesia. Hal. 11, 13 dan 145
34. Marjoni. (2016). Dasar-Dasar Fitokimia untuk Diploma III Farmasi. Jakarta
: Trans Info Media. Hal. 29, 30, 31, 39.
35. Wusnah dkk. (2016). Proses Pembuatan Bioetanol Dari Kulit Pisang Kepok
(Musa acuminata B.C) Secara Fermentasi. Jurnal Teknologi Kimia Unimal,
5(1):59.
36. Gandjar, I.G & Rohman, A., (2012). Analisis Obat Secara Spektroskopi dan
kromatografi. Yogyakarta: Pustaka Pelajar : 329, 330, 335, 336, 337, 338,
339, 340, 341, 342, 345,346, 351,
37. Sthal, E., (1985). Anallisis Obat Secara Kromatografi dan Mikroskopi,
diterjemahkan Oleh Kosasih Padwinata dan Iwang Soediro, 3-17, ITB,
Bandung.
38. Nurihardiyanti et al. (2015). Aktivitas Diuretik Kombinasi Ekstrak Biji
Papaya (Caricca papaya L.) dan Biji Salak (Salacca zalacca varietas zalacca
(Gaert) Voss) Pada Tikus Jantan Galir Wistar. 1;(2).
39. Ganiswara, R., Setyabudy, R., Suyanto, F. & Nafrialdi, P., (2001),
Farmakologi dan Terapi, Edisi 4. Jakarta, Bagian Farmakologi UI, Gaya
Baru.
40. Tikus Putih Penelitian. Hewan Percobaan. http://tikusputihpenelitian.com/
hewan-percobaan/ (diakses 7 September 2020)
LAMPIRAN
Lampiran 1. Perhitungan dosis furosemid dan volume pemberian pada tikus
Dosis maksimal orang dewasa dengan berat badan 70 kg dari obat furosemid
adalah 40 mg, dikonversikan ke tikus yang berat badannya 200 gram, dengan
menggunakan faktor konversi tikus yaitu 0,0018.
Dosis pemberian = 40 mg x 0,0018
= 0,72 mg/200 gr BB
Berat obat total = x
Contoh :
Tabel 1. Volume pemberian pada tikus dosis furosemid
No Berat Badan Tikus (gram) Volume Oral (mL)
1 X
2 X
3 X
4 X
5 X
Lampiran 2. Perhitungan variasi dosis ekstrak akar kemangi hutan dan volume
pemberian pada tikus
Perhitungan dosis
Dari hasil penelitian sebelumnya bahwa dosis 250 mg/kg BB tikus (Pai Preethi et
al.,2013).
5. Perhitungan sediaan ekstrak akar kemangi hutan dosis I :
Dosis I = 35 mg/g BB
Dosis ekstrak akar kemangi hutan dalam 10 mL larutan stok :
Contoh :
Tabel 2. Volume pemberian pada tikus ekstrak I
No Berat Badan Tikus (gram) Volume Oral (mL)
1 X
2 X
3 X
4 X
5 X
6. Perhitungan sediaan ekstrak akar kemangi hutan dosis I :
Dosis II = 70 mg/g BB
Dosis ekstrak akar kemangi hutan dalam 10 mL larutan stok :
Contoh :
Tabel 2. Volume pemberian pada tikus ekstrak II
No Berat Badan Tikus (gram) Volume Oral (mL)
1 X
2 X
3 X
4 X
5 X
7. Perhitungan sediaan ekstrak akar kemangi hutan dosis III :
Dosis III = 105 mg/g BB
Dosis ekstrak akar kemangi hutan dalam 10 mL larutan stok :
Contoh :
Tabel 2. Volume pemberian pada tikus ekstrak III
No Berat Badan Tikus (gram) Volume Oral (mL)
1 X
2 X
3 X
4 X
5 X