5/14/2012
1
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
Pemeriksaan Laboratrium Diagnosis Cepat TB
Dalima Ari Wahono Astrawinata Divisi Mikrobiologi dan Infeksi
Departemen Patologi Klinik FKUI Laboratorium Klinik Pusat RSCM
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
DalimaAW/PatKlin/TBDay/Aprl12 2
Pendahuluan • Diagnosis TB ditegakkan atas dasar :
– Keluhan dan anamnesis – Klinis – Radiologik dan Laboratorium
• Pemeriksaan Laboratorium : – Sputum – Cairan tubuh lain : cairan otak, cairan pleura – Darah, urin, feses
• Masalah timbul tidak ditemukan dari sediaan hapus • Lanjut dengan biakan perlu 4-6 minggu • Alternatif pemeriksaan lebih cepat yang tersedia ??
5/14/2012
2
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
DalimaAW/PatKlin/TBDay/Aprl12 3
Alur pemeriksaan Lab
Biakan
PCR MTb Positip Negatip
Rapid Test Ag MTb Positip Negatip
Pemeriksaan Sediaan Langsung BTA 3x (ZN) Positip Negatip
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
DalimaAW/PatKlin/TBDay/Aprl12 4
Persyaratan PraAnalitik
• Kualitas sputum memenuhi syarat :
– Bukan saliva / ludah
– Tidak terkontaminasi saliva / ludah
– Dibatukkan dengan tekanan dari dalam
• Edukasi pasien cara penampungan :
– Kumur air matang dengan seksama 3x
– Tarik napas dalam 3x
– Tahan napas pada tarikan ke 3 sesaat
– Batukkan dengan tekanan
5/14/2012
3
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
DalimaAW/PatKlin/TBDay/Aprl12 5
• Waktu penampungan 3x : – Sewaktu ( ketika di Poli ) – Pagi ( bangun tidur, ditampung saat esok hari ) – Sewaktu ( waktu kembali ke Poli esok hari )
• Wadah penampungan : – Bersih, kering, mulut lebar, tutup ulir – Sebaiknya standar dari Lab
• Lokasi penampungan : – Di tempat terbuka, ada sinar matahari, udara bebas – Tidak boleh di WC / toilet / kamar mandi / kamar
tidur ruang periksa / ruang tertutup
Persyaratan PraAnalitik (lanjutan)
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
DalimaAW/PatKlin/TBDay/Aprl12 6
Tahapan Perwarnaan Manual Ziehl Neelsen
Sumber : Penuntun Pemeriksaan BTA, Lab RSPersahabatan
5/14/2012
4
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
DalimaAW/PatKlin/TBDay/Aprl12 7
Pelayanan Lab Klinik Pusat RSCM utk pemeriksaan sediaan hapus
• Jam buka loket rawat jalan untuk pengambilan hasil s/d jam 18.00
• Loket pelayanan Cito Lab Klinik Pusat 24 jam untuk penerimaan bahan dan pengambilan hasil
• Sediaan hapus BTA tidak termasuk pemeriksaan cito
• Waktu pemeriksaan 1 hari , hasil keesokan hari
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
DalimaAW/PatKlin/TBDay/Aprl12 8
Pemeriksaan Rapid Ag MTb Prinsip : imunokromatografi (ICT) :
Anti-MTb berlapis emas melekat pd membran selulosa
Sumber : JD Biotech
5/14/2012
5
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
DalimaAW/PatKlin/TBDay/Aprl12 9
Antibodi terhadap protein RD1, RD2, RD3
RD5 (mpt40)Rv 2345
plcC plcB plcA PPE PPE
IS 61102625 2626 2627 2628 2629 2630 2631 2632 2633 2634 2635 26362624 kb
Rv 2346/47/48
ephA Rv3618 lpqG
Rv3616 Rv3619/20 PPE PE
RD8
4061 4062 406340604059405840574056 kb
RD10Rv0221 echA1
Rv0223
0265 0266 0267 02680264
Rv0224
kb
RD9
Rv2075/76
Rv2074
Rv2073cobLcobM
2330 23332329 23322331 kb
RD12
3483 3484 3485 3486 3487 3488 3489moeB
3490 kbcys3A
sseCmoaE
Rv3120/21/22/23 Rv3124RD13
1401 1402 1403 1404 1405 1406deaD
1407 kbRv1254
Rv1255
Rv1256 Rv1257 Rv1258RD11 (phiRv2)
Rv2645/46/47 IS 6110
Rv2650/51 Rv2652/53/54 Rv2655/56/57/58/59/60/61
glyT cysT valU
valTRv2644
2970 2971 2972 2973 2974 2675 2976 2977 2978 2979 2980 2981 kb2969
RD3 (phiRv1)
REPÊÕ
Rv1573/74/75
Rv1576/77/78 Rv1579/80/81 Rv1582/83/84/85 / 86 REP
bioB17801779 1781 1782 1783 1784 1785 1786 1787 1788 1789 1790 kb
bioD 1778
Rv1571
oriC
Mycobacterium bovis BCG Pasteur 1173 P2
PPEPPEPPE
Rv3424alr IS 1532
RD6
3841 38443842 3843 3845 3846 3847 3848 kb
Rv3430
RD1PE/PPE
4359 4360 4361 kb4351 43544352 4353 4355 4356 4357 43584349 4350Rv3871 Rv3874 esat6 Rv3876 Rv3878
Rv3879 Rv3880/81
Rv3877
Rv1771200019991998 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 kb
Rv1766/67
IS9ÕRv1765
Rv1770Rv1769PE_PGRS
Rv1772 Rv1774
Rv1773
RD14
RD4
gmdA epiA Rv1513
Rv1514/15 Rv1516
Rv1517
Rv1508
Rv1509 Rv151017001699169816971696 1701 1702 1703 1704 1705 1706 1707 1708 1709 kb
Rv1505/06/07
kb
RD7 RD2
Rv1965Rv1964 mce3 Rv1967 Rv1968 Rv1969 lprM Rv1971/72/73/74/75
Rv1976
Rv1977 Rv1978
Rv1979 mpt64 nrdF Rv1982
PE-PGRS
Rv1984 Rv1985
Rv1986 Rv1987/882208 22092207 22202219221822172216221522142213221222112210 2221 2222 2223 2224 2225 2226 2227 2228 2229 2230 2231 2232
Rv1963 Rv1989
Sumber : JD Biotech
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
DalimaAW/PatKlin/TBDay/Aprl12 10
• Tidak bereaksi terhadap vaksinasi BCG
• Tidak bereaksi terhadap NTM
(Non-Tuberculosis Mycobacteria)
• Menggunakan antibodi terhdp protein spesifik MTb
RD1,RD2,RD3 (Region of Difference) yang tidak ditemukan dlm BCG
• RD 1 (early secretory antigen target 6 / ESAT-6) dan culture filtrate protein 10 /CFP10)
• RD2 (segmen 10.7-kb DNA dan gen MPT-64)
• RD3 (genom segmen 9.3-kb kuman laboratorium M. bovis dan M. tuberculosis) Sumber : JD Biotech
5/14/2012
6
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
DalimaAW/PatKlin/TBDay/Aprl12 11
• Bahan : sputum, cairan otak, cairan pleura, darah, urin
• Sensitivitas dan spesifisitas ( > 96%)
• Cepat, pengerjaan sekitar 15 menit
• Mudah dan sederhana
CATATAN :
• Tidak dianjurkan untuk pasien yang sudah mendapat terapi OAT ( tidak untuk monitoring hasil terapi )
• Harus sputum segar, tidak boleh sputum yang sudah diproses dg NaOH pH alkali merusak reagen
Sumber : JD Biotech
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
DalimaAW/PatKlin/TBDay/Aprl12 12
Model strip
5/14/2012
7
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
DalimaAW/PatKlin/TBDay/Aprl12 13
Model kaset
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
DalimaAW/PatKlin/TBDay/Aprl12 14
Hasil Trial MTb Ag Rapid Tes Lab Klinik Pusat RSCM
Hasil BTA Rapid TbAg
PCR
+ 6 6 6
- 11 11 11
Total 17 17 17 Kesesuaian ~ 74 %
Frida. Penelitian pendahuluan Rapid TbAg pada pasien tersangka TB, Dep Patologi Klinik FKUI/RSCM, 2011
5/14/2012
8
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
DalimaAW/PatKlin/TBDay/Aprl12 15
Hasil Trial MTb Ag Rapid Tes Lab Klinik Pusat RSCM Hasil BTA Rapid
TbAg PCR
+ 3 1 5
- 3 5 1
Total 6 6 6 Ketidaksesuaian ~ 26 % Sudah mendapat OAT ?
Frida. Penelitian pendahuluan Rapid TbAg pada pasien tersangka TB, Dep Patologi Klinik FKUI/RSCM, 2011
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
DalimaAW/PatKlin/TBDay/Aprl12 16
Polymerase Chain Reaction (PCR) RealTime
Spesimen
(sputum,bilasan bronkial, c.otak, urin, feses,darah,c,pleura)
DNA
Analisis
Isolasi asam nukleat
Amplifikasi DNA
5/14/2012
9
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
DalimaAW/PatKlin/TBDay/Aprl12 17
• PCR-RT multipleks amplifikasi NTM, MTB
• Tidak membedakan MTB kompleks yg terdiri
atas M.tuberculosis, M.bovis, M.bovis BCG,
M.africanum, M.microti, M.canetti, M pinnipedii
Prinsip MTB/NTM PCR-RT
Sumber : Seegene Anyplex R MTB/NTM
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
DalimaAW/PatKlin/TBDay/Aprl12 18
Prinsip MTB/NTM PCR-RT • Amplifikasi DNA menggunakan prinsip dual priming
oligonucleotide (DPO) susunan primer lebih leluasa, primer non-spesifik di blok
• PCR-RT berdasarkan 2 proses utama :
– Isolasi asam nukleat (DNA)
– Amplifikasi asam nukleat (DNA) sasaran memakai primer DPO dg alat PCR real time (RT)
• Kontrol internal (DNA plasmid) utk deteksi kemungkinan proses amplifikasi PCR terganggu
• 8-metoksipsoralen (8-MOP) menghentikan aktivitas template DNA kontaminan
Sumber : Seegene Anyplex R MTB/NTM
5/14/2012
10
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
DalimaAW/PatKlin/TBDay/Aprl12 19
TB/MDR PCR-RT Spesimen
(sputum, darah,urin, c.otak,c.pleura dll)
Asam nukleat (DNA)
Produk PCR
Deteksi dgn alat PCR-RT
Ekstraksi asam nukleat, 1 jam
Amplifikasi, Multipleks PCR 2,5jam
Deteksi RT amplikon, 40menit
Sumber : Seegene Magicplex R TB/MDR-RT
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
DalimaAW/PatKlin/TBDay/Aprl12 20
• PCR-RT multipleks amplifikasi simultan MTB,
Resisten - Isoniazid dan Resisten - Rifampicin
TB/MDR PCR-RT
Sumber : Seegene Magicplex R TB/MDR-RT
5/14/2012
11
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
DalimaAW/PatKlin/TBDay/Aprl12 21
• Amplifikasi DNA menggunakan prinsip dual priming oligonucleotide (DPO) susunan primer lebih leluasa, primer non-spesifik di blok
• Teknologi READ (REal Amplicon Detection) proses PCR multipleks memakai primer DPO (alat PCR konvensional) dan deteksi amplikon (hasil amplifikasi) langsung selama proses cycling (alat PCR-RealTime)
• PCR-RT berdasarkan 3 proses utama : – Ekstraksi asam nukleat – Amplifikasi asam nukleat sasaran memakai primer
DPO dgn alat thermal cycler – Deteksi produk amplikon memakai alat PCR real time
Prinsip TB/MDR PCR-RT
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
DalimaAW/PatKlin/TBDay/Aprl12 22
Hasil Penelitian PCR-RT dg BTA pasien tersangka TB
Hasil BTA PCR-RT
MTB 11
MTB/NTM 2
Positip 9
Negatip 16 12
Frida. Pemeriksaan PCR-RT sputum pasien tersangka TB. Dep PK,2011
5/14/2012
12
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
DalimaAW/PatKlin/TBDay/Aprl12 23
Penutup
• Beberapa pemeriksaan cepat untuk membantu diagnosis TB telah tersedia
• Kegunaan dan keterbatasan masing-masing perlu dipahami dengan benar
On the Move Against Tuberculosis, Transforming the Fight Toward Elimination of Tuberculosis
DalimaAW/PatKlin/TBDay/Aprl12 24
Top Related