�
�
PENETAPAN KADAR NIKOTIN DALAM EKSTRAK ETANOLIK DAUN TEMBAKAU VORSTENLANDEN BAWAH NAUNGAN DAN NA OOGST
SECARA KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI FASE TERBALIK
Skripsi
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm)
Program Studi Farmasi
Oleh: Dina Christiana Dewi
NIM : 088114014
FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA 2012
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
��
�
PENETAPAN KADAR NIKOTIN DALAM EKSTRAK ETANOLIK DAUN TEMBAKAU VORSTENLANDEN BAWAH NAUNGAN DAN NA OOGST
SECARA KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI FASE TERBALIK
Skripsi
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm)
Program Studi Farmasi
Oleh: Dina Christiana Dewi
NIM : 088114014
FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA 2012
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
���
�
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
����
�
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
���
�
HALAMAN PERSEMBAHAN
��������������� �������������� ����������
����������� ����������������������������
�� ����������������������� ����
���������� ���������� ���������� ���������� ����
Kupersembahkan karyaku ini untuk kedua orang tuaku Yohanes Agus Yunanto,
Veronika Sri Mulyani, Kakaku Mada Prabawa, Sahabatku, Almamaterku
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
��
�
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
���
�
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
����
�
PRAKATA
Puji dan syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa yang telah melindungi
dan memberikan berkat rahmat-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi
yang berjudul “Penetapan Kadar Nikotin Dalam Ekstrak Etanolik Daun
Tembakau Vorstenlanden Bawah Naungan dan Na Oogst Secara Kromatografi
Cair Kinerja Tinggi Fase Terbalik” sebagai salah satu syarat memperoleh gelar
Sarjana Farmasi (S.Farm) di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma
Yogyakarta.
Keberhasilan penulis dalam menyelesaikan skripsi ini tidak lepas dari
dukungan, bantuan, dan motivasi dari banyak pihak. Penulis mengucapkan terima
kasih yang sebesar-besarnya kepada:
1. Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas
Sanata Dharma Yogyakarta.
2. Bapak Jeffry Julianus, M.Si selaku Dosen Pembimbing yang memberikan
saran, masukan, kritikan dan solusi kepada penulis selama penyusunan skripsi
ini.
3. Ibu Christine Patramurti, M.Si., Apt. selaku Dosen Penguji yang telah
memberikan masukan, kritik, solusi dan motivasi kepada penulis untuk skripsi
ini.
4. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si selaku Dosen Penguji yang memberikan
masukan, kritik, saran dan solusi yang bermanfaat kepada penulis untuk skripsi
ini.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
�����
�
5. Ibu Rini Dwi Astuti, M.Sc., Apt. selaku Kepala Laboratorium Fakultas Farmasi
Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.
6. PT. Perkebunan Nusantara XIX (Persero) Klaten atas sumbangan daun
tembakau Vorstenlanden Bawah Naungan dan Na Oogst yang berguna dalam
penelitian.
7. Segenap dosen dan karyawan atas ilmu dan pengalaman sehingga berharga
dalam proses penyusunan skripsi.
8. Seluruh staff laboratorium, keamanan dan kebersihan di Fakultas Farmasi
Universitas Sanata Dharma Yogyakarta, terutama Mas Bimo, Pak Parlan, dan
Mas Kunto yang telah membantu dan memberikan dukungan selama
pelaksanaan penelitian ini.
9. Perpustakaan Universitas Sanata Dharma atas koleksi buku-buku dan fasilitas
internet sehingga mempermudah penulis dalam memperoleh bahan-bahan yang
dibutuhkan dalam penulisan skripsi ini.
10. Keluargaku tercinta, Bapak Agus Yunanto, Ibu Sri Mulyani, Mas Mada
Prabawa yang tidak pernah berhenti memberikan semangat dan doa sampai
akhirnya terselesaikannya skripsi ini.
11. DF. Fani Rista Maji, Bernadet Brigita dan Leonardus Damar yang selalu
mendukung, menghibur, memberikan perhatian dan menemani penulis dalam
menyelesaikan penulisan skripsi ini.
12. Ayesa Syenina dan Amelia Ernesta selaku teman seperjuangan, sahabat dan
teman berbagi cerita, terima kasih atas semangat, perhatian, motivasi, diskusi
dan doa yang diberikan selama penelitian dan penyusunan skripsi.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
���
�
13. Teman-teman skripsi nikotin KLT-Densito: Novi, Citra, Helen atas diskusi,
dukungan dan kerjasamanya selama penelitian.
14. Teman-teman di laboratorium : Felicia, Prasilya, Sasa, Susan, Nona, Sari, Tere
dan Wiwi atas dukungan dan keceriaan dalam melakukan penelitian.
15. Teman-teman KKN Alternatif XXXIX Tematik di Desa Pariwiata Pindul atas
keceriaan, kerjasama dan dinamika yang telah diberikan.
16. Teman-teman FST-A dan kelompok praktikum A, terima kasih atas kerjasama,
dukungan dan keceriaan selama perkuliahan dan praktikum.
17. Teman-teman Fakultas Farmasi angkatan 2008, terima kasih atas pengalaman,
keceriaan dan kebersamaan yang tidak bisa terlupakan.
18. Teman-teman Fakultas Farmasi, terima kasih atas kebersamaan.
19. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu.
Penulis menyadari masih banyak terdapat kekurangan dalam
penyusunan skripsi ini. Oleh karena itu, penulis mengharapkan kritik dan saran
untuk membantu penulis dalam penyempurnaan skripsi ini. Akhir kata, semoga
skripsi ini bermanfaat bagi pembaca.
Yogyakarta, 9 November 2011
Dina Christiana Dewi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
��
�
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ................................................................................... i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ......................................... ii
HALAMAN PENGESAHAN ..................................................................... iii
HALAMAN PERSEMBAHAN ................................................................. iv
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ..................................................... v
LEMBAR PERNYATAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ......... vi
PRAKATA .................................................................................................. vii
DAFTAR ISI ............................................................................................... x
DAFTAR TABEL ....................................................................................... xv
DAFTAR GAMBAR .................................................................................. xvi
DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................... xviii
INTISARI .................................................................................................... xix
ABSTRACT ................................................................................................ xx
BAB I PENGANTAR ................................................................................. 1
A. Latar Belakang ..................................................................................... 1
1. Permasalahan ................................................................................ 4
2. Keaslian Penelitian ........................................................................ 4
3. Manfaat Penelitian ........................................................................ 4
B. Tujuan Penelitian ................................................................................. 5
BAB II PENELAAHAN PUSTAKA.......................................................... 6
A. Tembakau ............................................................................................. 6
1. Keterangan Botani ........................................................................ 6
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
���
�
2. Deskripsi Tanaman ....................................................................... 6
a. Akar .......................................................................................... 6
b. Batang ...................................................................................... 6
c. Daun ......................................................................................... 6
d. Bunga ....................................................................................... 6
e. Buah ......................................................................................... 7
3. Tanaman C3 .................................................................................. 7
B. Nikotin ................................................................................................. 9
Simplisia dan Penanganan Daun Tembakau ........................................ 11
1. Simplisia .......................................................................................... 11
2. Penanganan Daun Tembakau .......................................................... 11
a. Sortasi Pendahuluan .................................................................... 11
b. Penyejunan .................................................................................. 11
3. Curing .............................................................................................. 12
a. Penguningan .............................................................................. 12
b. Pengikatan Warna .................................................................... 12
c. Pengeringan Lembar Daun ....................................................... 12
d. Pengeringan Gagang ................................................................ 12
C. Ekstraksi ............................................................................................... 13
1. Ekstrak .......................................................................................... 13
2. Ekstraksi ........................................................................................ 13
3. Cairan Penyari ............................................................................... 13
4. Soxhlet .......................................................................................... 14
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
����
�
5. Penguapan Ekstrak Cair ................................................................ 15
D. Spektrofotometri UV............................................................................ 15
1. Transisi � � �* ............................................................................ 16
2. Transisi n� �* ............................................................................. 16
3. Transisi n��* dan ���* ............................................................. 17
E. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi ....................................................... 18
1. Definisi dan Instrumentasi ............................................................ 18
2. Analisis Kualitatif dan Kuantitatif ................................................ 21
F. Landasan Teori ..................................................................................... 22
G. Hipotesis .............................................................................................. 23
BAB III METODOLOGI PENELITIAN.................................................... 24
A. Jenis dan Rancangan Penelitian ........................................................... 24
B. Variabel ................................................................................................ 24
1. Variabel bebas ............................................................................... 24
2. Variabel tergantung ....................................................................... 24
3. Variabel pengacau ......................................................................... 24
C. Definisi Operasional ............................................................................ 24
D. Bahan Penelitian .................................................................................. 25
E. Alat Penelitian ...................................................................................... 25
F. Tata Cara Penelitian ............................................................................. 26
1. Pembuatan Buffer Asetat .............................................................. 26
2. Pembuatan Fase Gerak .................................................................. 26
3. Pengambilan dan Pembuatan Sampel ........................................... 26
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
�����
�
4. Pembuatan Larutan Baku Nikotin ................................................. 26
5. Pembuatan Panjang Gelombang Serapan Maksimum .................. 27
6. Pembuatan Kurva Baku Nikotin ................................................... 27
7. Pembuatan HCl Encer ................................................................... 28
8. Pembuatan NaOH 4 M .................................................................. 28
9. Preparasi Sampel ........................................................................... 28
10. Ekstraksi Daun Tembakau ............................................................ 28
11. Penetapan Kadar Nikotin dalam Sampel ...................................... 29
G. Analisis hasil ........................................................................................ 29
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................... 31
A. Pembuatan Fase Gerak ......................................................................... 31
B. Pengambilan dan Pembuatan Sampel .................................................. 33
C. Pembuatan Larutan Baku Nikotin ........................................................ 35
D. Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum .......................... 35
E. Pembuatan Kurva Baku Nikotin .......................................................... 37
F. Ekstraksi Secara Soxhletasi dan Penguapan Ekstrak Cair ................... 38
G. Optimasi Waktu Ekstraksi Nikotin dalam Serbuk Daun Tembakau .... 39
H. Ekstraksi dengan Waktu Optimum 8 jam ............................................ 42
I. Preparasi Sampel .................................................................................. 45
J. Analisis Kualitatif Nikotin ................................................................... 47
K. Penetapan Kadar Nikotin dalam Ekstrak Etanolik Daun Tembakau .. 50
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ...................................................... 54
A. Kesimpulan ...................................................................................... 54
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
����
�
B. Saran .............................................................................................. . 54
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................. 55
LAMPIRAN ................................................................................................ 58
BIOGRAFI PENULIS ............................................................................... 82
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
���
�
DAFTAR TABEL
Tabel I. Karakteristik pelarut yang digunakan dalam KCKT ........... 20
Tabel II. Hasil pengukuran AUC sampel dengan varisi waktu
ekstraksi sampel dengan soxhlet ......................................... 42
Tabel III. Hasil pengukuran AUC ekstraksi serbuk daun tembakau
jenis VBN dan NO dengan soxhlet selama 8 jam ............... 45
Tabel IV. Penetapan kadar nikotin dalam ekstrak etanolik daun
tembakau kedua sampel ....................................................... 50
Tabel V. Uji Normalitas ..................................................................... 51
Tabel VI. Uji t tidak berpasangan ........................................................ 52
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
����
�
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Daun tembakau VBN dan NO .............................................. 7-8
Gambar 2. Struktur alkaloid dalam daun tembakau .............................. 8
Gambar 3. Struktur nikotin .................................................................... 8
Gambar 4. Struktur nikotin dan asetilkolin ........................................... 9
Gambar 5. Jalur biosinesis dengan modifkasi ....................................... 10
Gambar 6. Alat soxhlet .......................................................................... 14
Gambar 7. Diagram tingkat energi elektronik ....................................... 16
Gambar 8. Pengaruh pelarut polar pada transisi � � �*....................... 17
Gambar 9. Pengaruh pelarut polar pada transisi n � �* ....................... 17
Gambar 10. Instrumentasi KCKT ........................................................... 18
Gambar 11. Nikotin dalam bentuk terion ................................................ 33
Gambar 12. Spektra � maksimum 3 seri konsentrasi .............................. 36
Gambar 13. Struktur kromofor cincin piridin ......................................... 37
Gambar 14. Grafik hubungan antara konsentrasi analit dengan AUC .... 37
Gambar 15. Proses ekstraksi dengan alat soxhlet .................................... 38
Gambar 16. Kromatogram optimasi waktu ekstraksi 7, 8, 9, 10 jam ...... 40
Gambar 17. Kromatogram ekstraksi kedua jenis daun tembakau
dengan waktu optimum 8 jam ............................................. 42
Gambar 18. Reaksi antara nikotin dengan asam klorida ......................... 46
Gambar 19. Reaksi antara nikotin hidroklorida dengan NaOH .............. 46
Gambar 20. Struktur bagian polar dan non polar .................................... 47
Gambar 21. Interaksi nikotin dengan fase diam oktadesilsilan ............... 48
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
�����
�
Gambar 22. Interaksi nikotin dengan fase gerak
buffer asetat:metanol:asetonitril (40:54:6) .......................... 48
Gambar 23. Kromatogram baku nikotin dan sampel .............................. 49
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
������
�
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Sertifikat analisis baku nikotin E.Merck ......................... 59
Lampiran 2. Surat keterangan dan infomasi tembakau ....................... 60
Lampiran 3. Perhitungan pergeseran pKa nikotin dan pH .................. 63
Lampiran 4. Perhitungan polaritas fase gerak ..................................... 64
Lampiran 5. Spektrum nikotin ............................................................ 65
Lampiran 6. Hasil Perolehan AUC seri baku nikotin .......................... 66
Lampiran 7. Penimbangan serbuk kering dan ekstrak kental
daun tembakau untuk optimasi lama waktu ekstraksi ... 67
Lampiran 8. Kromatogram hasil optimasi lama waktu ekstraksi
dengan soxhlet ............................................................... 68
Lampiran 9. Penimbangan serbuk kering dan ekstrak kental daun
tembakau untuk optimasi lama waktu ekstraksi ............. 72
Lampiran 10. Kromatogram hasil penetapan kadar nikotin dalam
ekstrak etanolik daun tembakau NO dan VBN ................ 74
Lampiran 11. Perhitungan kadar nikotin dalam ekstrak etanolik
daun tembakau ................................................................ 77
Lampiran 12. Data Uji Statistik ............................................................. 79
Lampiran 13. Kromatogram blanko pelarut buffer asetat:metanol
: asetonitril (40:54:6) ...................................................... 81
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
����
�
PENETAPAN KADAR NIKOTIN DALAM EKSTRAK ETANOLIK DAUN TEMBAKAU VORSTENLANDEN BAWAH NAUNGAN DAN NA OOGST SECARA KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI FASE
TERBALIK
INTISARI
Nikotin merupakan alkaloid yang ditemukan dalam tanaman tembakau (Nicotiana tabaccum) dan memiliki efek farmakologis yang berpotensi dalam pengobatan. Ekstrak daun tembakau yang mengandung nikotin dapat dijadikan sediaan farmasi. Penelitian ini bertujuan untuk penetapan dan membandingkan kadar nikotin dalam ekstrak etanolik daun tembakau tembakau Vorstenlanden Bawah Naungan dan Na Oogst dengan menggunakan metode kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) fase terbalik.
Penelitian ini mengikuti jenis dan rancangan penelitian non eksperimental deskriptif. Sistem kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) menggunakan kolom fase diam oktadesilsilan (C18), fase gerak buffer asetat:metanol:asetonitril (40:54:6), detektor UV pada � maks 260 nm (Ernesta, 2011). Parameter validasi metode meliputi selektifitas, linearitas, akurasi, presisi dan rentang pada konsentrasi 0,05-0,09 ppm (Syenina, 2011).
Hasil penelitian menunjukkan kadar rata-rata nikotin dalam ekstrak etanolik daun tembakau Vorstenlanden Bawah Naungan adalah 2,790x10-3 % b/b ± 2,744x10-5 dengan nilai CV= 0,9835% dan Na Oogst adalah 1,316x10-3 ± 2,775x10-6 dengan nilai CV = 0,2109%. Nilai CV yang diperoleh memenuhi syarat presisi yang baik yaitu <2%. Hasil analisis statistik menggunakan uji t tidak berpasangan menunjukkan bahwa kadar nikotin rata-rata antara kedua sampel berbeda signifikan. Kata kunci : nikotin, tembakau Vorstenlanden Bawah Naungan, tembakau Na
Oogst, KCKT fase terbalik, penetapan kadar.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
���
�
DETERMINATION NICOTINE CONTAINED IN ETHANOLIC EXTRACT OF TOBACCO LEAF VORSTENLANDEN UNDER SHADE AND NA OOGST USING REVERSED PHASE HIGH PERFORMANCE
LIQUID CHROMATOGRAPHY
ABSTRACT
Nicotine is an alkaloid found in tobacco (Nicotiana tabaccum) plant and it has pharmacological effects which is potential for medical importance. The extract of tobacco leaves that contains nicotine can be made into pharmaceutical products. This research aims to amount and compare nicotine in ethanolic extract of tobacco leaves Vorstenlanden Under Shade and Na Oogst can be determined by using reversed phase HPLC system that have been optimized and validated. This research is conducted with a descriptive non-experimental plan and design. The HPLC system used for the quantitative analysis of nicotine consists of octadecylsilane (C18) as the stationary phase, mixture of acetate buffer:methanol :acetonitrile (40:54:6), UV detector with � max of 260 nm (Ernesta, 2011). The parameters of method validation used in this research are selectivity, linearity, accuracy, precision and range of concentration 0.05-0.09 ppm (Syenina,2011). The results of this research of average levels of nicotine contained ethanolic extract of tobacco leaves Vorstenlanden Under Shade 2.790x10-3 % w/w ± 2.744 x10-5 with a CV of 0.9835% and Na Oogst 1.316x10-3 %w/w ± 2.775x10-
6 with a CV of 0.2109%. The value of CV obtained qualifies for good precision which is <2%. The results of statistical analysis using unpaired t test showed that amount of nicotine on average between the two samples are significantly different. Key word : nicotine, tobacco Vorstenlanden Under Shade , tobacco Na Oogst,
reversed phase-HPLC, determination.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
BAB I
PENGANTAR
A. Latar Belakang
Nikotin merupakan senyawa alkaloid yang banyak ditemukan pada
tanaman tembakau (Nicotiana tabacum) dengan kadar 0,3 sampai 5% dari berat
kering tembakau dari hasil biosintesis di akar dan terakumulasi di daun (Anonim,
2011). Nikotin mampu merangsang pelepasan neurotransmitter (serotonin dan
dopamine) dan menyeimbangkan kerja dari neurotransmitter tersebut, karena jika
terjadi ketidakseimbangan dapat menyebabkan depresi. Selain itu, nikotin
berpotensi dalam mengobati penyakit Alzheimer dan penyakit Parkinson
(Anonim, 2006).
Besarnya potensi nikotin tersebut memiliki peran dalam bidang
kesehatan, sehingga memungkinkan untuk dikembangkan sebagai sediaan farmasi
yang terlebih dahulu dibuat dalam ekstrak.
Varietas Vorstenlanden merupakan salah satu varietas tanaman
tembakau. Varietas Vorstenlanden yang dikembangkan oleh PT. Perkebunan
Nusantara X merupakan keturunan pertama (F1) dari hasil perkawinan galur TV
38 dan G. TV 38 yaitu Timor Vorstenlanden dengan no 38 dan kode G adalah
tembakau yang ditanam di daerah Gayamprit dengan nama Vorsetenlanden
Bawah Naungan (VBN) dan Na Oogst (NO).
VBN ditanam pada bulan Juni mulai panen bulan Juli, diberikan waring
atau naungan, adanya sistem pengairan sedangkan tembakau NO penanaman
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
pada pertengahan bulan September dan mulai panen akhir Oktober, tidak
diberikan waring atau naungan, pengairannya mengandalkan air hujan, namun
jika tidak ada hujan tetap diberikan pengairan buatan. Naungan mempengaruhi
intesitas cahaya matahari pada tanaman tembakau yang berpengaruh pada kadar
nikotin.
Penelitian ini dilakukan untuk analisis kuantitatif kadar nikotin dalam
ekstrak etanolik daun tembakau VBN dan NO dan mengetahui perdebaan kadar
nikotin dalam ekstrak etanolik kedua daun tembakau. Daun tembakau diektraksi
dengan menggunakan metode soxhletasi dengan cairan penyari etanol. Metode
soxhletasi dipilih karena pengerjaannya mudah, jumlah cairan penyari yang
diperlukan lebih sedikit daripada metode ekstraksi lainnya, proses sirkulasi yang
berkesinambungan sehingga senyawa yang tersari lebih banyak. Cairan penyari
yang digunakan adalah etanol karena dapat melarutkan alkaloid basa, panas yang
dibutuhkan untuk pemekatan lebih rendah (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat
dan Makanan, 1986).
Metode KCKT dipilih untuk menetapkan kadar nikotin dalam ekstrak
etanolik tembakau karena metode ini selektif dalam memisahkan senyawa
multikomponen dengan hasil pemisahan yang baik, dan waktu yang relatif
singkat. Detektor yang digunakan adalah UV karena nikotin memiliki struktur
kromofor dan memiliki serapan maksimum pada panjang gelombang teoritis 262
nm (Cordell, 1981).
Penelitian ini merupakan tahap akhir dari serangkaian penelitian
penetapan kadar nikotin dalam ekstrak etanolik daun tembakau yang meliputi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
tahap optimasi dan validasi metode. Pada penelitian tentang optimasi metode
penetapan kadar nikotin dalam ekstrak etanolik daun tembakau dengan metode
KCKT fase terbalik menggunakan kolom fase diam oktadesilsilan (C18) dan fase
gerak buffer asetat:metanol:asetonitril (40:54:6), kecepatan alir 1,2 mL/menit,
detektor UV pada panjang gelombang maksimum 260 nm dengan nilai resolusi
1,5679, tailing factor 1,25, jumlah lempeng teoritis 2247,163 dan nilai HETP
0,0111 (Ernesta, 2011). Pada tahap validasi penetapan kadar nikotin dalam
ekstrak etanolik daun tembakau dengan metode KCKT fase terbalik memenuhi
parameter selektivitas dengan nilai resolusi (Rs) 1,531, linearitas dengan nilai
koefisien korelasi (r) 0,9996, presisi dan akurasi pada konsentrasi 0,05 dan 0,09
ppm, rentang konsentrasi 0,05-0,09 ppm (Syenina, 2011).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
1. Permasalahan
Permasalahan yang dapat dirumuskan berdasarkan latar belakang tersebut
antara lain:
a. berapakah kadar nikotin dalam ekstrak etanolik daun tembakau VBN dan NO?
b. apakah kadar nikotin dalam ekstrak etanolik daun tembakau VBN dan NO
berbeda bermakna?
2. Keaslian Penelitian
Berdasarkan penelusuran literatur yang dilakukan, maka penetapan kadar
nikotin dalam ekstrak etanolik daun tembakau VBN dan NO dengan metode
KCKT fase terbalik belum pernah dilakukan. Penelitian tentang penetapan kadar
nikotin yang pernah dilakukan adalah penetapan kadar nikotin dalam sampel
biologis menggunakan metode kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT),
kromatografi gas, spektrofotometri massa, dan kromatografi cair-MS (LC-MS)
(Nakajima, Yamamoto, Kuroiwa, Yokoi, 2000), penetapan kadar nikotin dalam
daun tembakau VBN dan NO dengan metode spektrofotometri UV oleh PT.
Perkebunan Nusantara X (Persero).
3. Manfaat penelitian
a. Manfaat metodologis. Hasil dari penelitian ini diharapkan dapat
memberikan alternatif metode penetapan kadar nikotin dalam ekstrak etanolik
daun tembakau VBN dan NO yaitu menggunakan metode kromatografi cair
kinerja tinggi (KCKT) fase terbalik.
b. Manfaat praktis. Hasil dari penelitian ini diharapkan dapat menambah
informasi dalam dunia farmasi dan masyarakat tentang kadar nikotin dalam
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
�
�
ekstrak etanolik daun tembakau VBN dan NO dengan metode kromatografi cair
kinerja tinggi (KCKT) fase terbalik dan perbandingan kadar antara kedua jenis
tembakau tersebut.
B. Tujuan Penelitian
Tujuan dilakukan penelitian ini adalah untuk mengetahui
a. kadar nikotin yang terdapat dalam ekstrak etanolik daun tembakau VBN dan
NO dengan menggunakan metode KCKT fase terbalik.
b. mengetahui perbedaan kadar nikotin dalam ekstrak etanolik daun tembakau
VBN dan NO.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
�
�
BAB II
PENELAAHAN PUSTAKA
A. Tembakau
1. Keterangan Botani
Tanaman tembakau ( Nicotiana tabaccum L. ) termasuk dalam famili
Solanaceae (Cahyono, 1998).
2. Deskripsi tanaman
a. Akar, tanaman tembakau merupakan tanaman berakar tunggang yang
tumbuh tegak ke pusat bumi. Akar tunggangnya dapat menembus tanah
kedalaman 50-75 cm, akar serabutnya dapat menyebar ke samping dan memiliki
bulu-bulu akar. Perakaran akan berkembang baik jika tanahnya gembur, mudah
menyerap air
b. Batang, tanaman tembakau memiliki bentuk batang agak bulat, agak
lunak tetapi kuat, semakin ke ujung semakin kecil. Ruas-ruas batang mengalami
penebalan yang ditumbuhi daun
c. Daun, tanaman tembakau memiliki tulang daun menyirip, bagian tepi
daun agak bergelombang dan licin. Lapisan atas daun terdiri atas lapisan palisade
parenkim dan spongy parenkim pada bagian bawah. Jumlah daun dalam satu
tanaman 28-32 helai (Hanum, 2008).
d. Bunga, tanaman tembakau memiliki bunga yang tersusun dalam
tandan, kelopak banyak buluh dengan banyak gigi yang tidak sama panjang,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
mahkota bunga yang berbentuk terompet, tepinya berlekuk 5, panjang yang tidak
sama (1 lebih pendek dari yang lainnya)
e. Buah, tanaman tembakau memiliki bakal buah yang berada di atas
dasar bunga dan terdiri atas dua ruang yang dapat membesar. Jika masak pecah
dengan membelah ruang (Tjitroepomo, 1994).
3. Tanaman C3
Cahaya matahari berperan dalam proses fotosintesis, fotorespirasi dan
respirasi suatu. Kebutuhan intesitas cahaya berbeda untuk setiap jenis tanaman
dikenal tiga tipe tanaman yaitu : C3, C4 dan CAM. Tanaman C3 adalah kelompok
tanaman yang memiliki kebutuhan terhadap cahaya matahari rendah. Ketika
tanaman C3 mendapatkan cahaya tinggi/berlebih pada siang hari, stomata
tertutup, fotorespirasi meningkat sehingga 02 diikat oleh Ribulosa Bi Phospat
(RUBP) menghasilkan senyawa Phospho Gliseric Acid (PGA) yang memiliki 3
atom C pada proses pengikatan C02 oleh yang terjadi secara spontan sehingga
energi yang dihasilkan untuk proses fotosintesis rendah (Anonima, 2011).
Naungan yang diberikan pada tanaman tembakau VBN bertujuan untuk
mengurangi intensitas cahaya sebesar 30% sehingga cahaya yang diperoleh
tanaman tersebut sebesar 70% (PT. Perkebunan Nusantara XIX (Persero), 1998).
a
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
�
���b�Gambar 1. Daun tembakau (a) VBN dan (b) NO (PT. Perkebunan XIX, 1998)
Nikotin merupakan salah satu alkaloid yang terdapat dalam tanaman
tembakau ( Nicotiana tabaccum L. ). Alkaloid lain yang terdapat dalam tembakau
adalah nornikotin, anatabin dan anabasin.
Gambar 2. Struktur alkaloid dalam daun tembakau (Domino, 1999)
B. Nikotin
N
CH3 Gambar 3. Struktur kimia nikotin
Nikotin merupakan senyawa tak berwarna hingga kuning pucat, bersifat
sangat higroskopis. Nikotin dapat berubah warna (fotodegradasi) menjadi coklat
apabila terkena paparan sinar matahari dan udara. Berbau tajam serasa terbakar.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
�
�
Sangat larut dalam alkohol, kloroform, eter, petroleum eter, kerosin, dan minyak
(The Merck Index, 1989).
Nikotin
N- N+
HCH3
Asetilkolin
�CH3 C
O_
OH2C
H2C N+(CH3)3
Gambar 4. Struktur nikotin dan asetilkolin (Domino, 1999)
Kemiripan nikotin dan asetilkolin terletak pada atom N piridin pada
nikotin yang merupakan pendonor elektron yang memiliki kesamaan dengan keto
oksigen pada gugus asetilkolin. Muatan positif atom N kuarterner pada asetilkolin
memiliki kesamaan muatan positif atom N cincin pirolidin nikotin
(Domino,1999).
Menurut Whagner (2003), asetilkolin (ACh) merupakan satu jenis
neurotransmiter yang berperan dalam regulasi sistem saraf tubuh dan membawa
pesan dari ke otak. Nikotin di dalam tubuh mampu menyalin asetilkolin, sehingga
setiap reseptor yang diarahkan untuk menanggapi asetilkolin merespon nikotin
juga. Dengan cara ini, nikotin dapat memicu pelepasan neurotransmiter lain.
Nikotin dapat memerintah kelenjar adrenal untuk melepaskan adrenalin,
pembuluh darah melepaskan norephinefrin menyebabkan tekanan darah
meningkat. Namun dari beberapa penelitian, nikotin berpotensi untuk terapi
penyakit Alzheimer, demetia Parkinson. Pada penyakit Parkinson, nikotin mampu
meningkatkan kemampuan kognitif dan motorik penderita (Anonimb, 2011).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
Gambar 5. Jalur biosintesis nikotin dengan modifikasi (Anonim, 2010)
Gambar di atas merupakan jalur biosintesis nikotin. D-glukosa
merupakan produk fotosintesis yaitu sukrosa (karbohidrat disakarida) yang
mengalami hidrolisis menjadi D-glukosa dan fruktosa. D-glukosa tersebut siap
dipecah dalam proses glikolisis menjadi asam piruvat. Asam piruvat akan
dirombak untuk masuk dalam siklus krebs menjadi asetil Co-A. Asetil Co-A
berikatan dengan oksaloasetat dan menghasilkan citrat sampai �-ketoglutarat. �-
ketoglutarat menghasilkan 2 asam amino yaitu L-glutamate dan L-arginin yang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
menghantarkan ke prekusor biosintesis nikotin yaitu L-ornithine (Salisbury dan
Ross, 1995).
Kadar nikotin yang diperoleh dengan menggunakan metode
spektrofotometri-UV dalam daun tembakau VBN sebesar 1,4135 dan NO sebesar
0,867% (PT.Perkebunan Nusantara XIX (Persero), 1998).
C. Simplisia dan Penanganan Daun Tembakau
1. Simplisia
Simplisia adalah bahan alamiah yang dipergunakan sebagai obat yang
belum mengalami pengolahan apapun juga dan kecuali dinyatakan lain simplisia
merupakan bahan yang dikeringkan (Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan
Makanan, 1979).
2. Penanganan Daun Tembakau
Kegiatan yang harus dilakukan pada penanganan daun tembakau setelah
dipanen adalah sortasi pendahuluan, penyejunan, pengolahan untuk mendapatkan
hasil akhir yang baik
a. Sorasi pendahuluan, daun tembakau yang telah dipetik dan terkumpul
di tempat yang teduh disortasi terlebih dahulu sebelum tahap pengolahan daun.
Tujun dari sortasi pendahuluan yaitu : memudahkan proses pengolahan dan
memudahkan dalam pengelompokkan ke dalam kualitas menurut mutu
b. Penyejunan, kegiatan penataan daun tembakau dengan cara menusuk
bagian pangkal gagang daun/ibu tulang daun atau pada bagian ruas batang di
antara dua dua daun. Tujuan dari penyejunan yaitu : memudahkan dalam penataan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
di ruang pengering/pengolahan dan mencegah daun tidak saling melekat ketika
kelembapan tinggi sehingga daun mengering secara merata
c. Curing, proses curing bertujuan melepaskan air dari daun tembakau
dari kadar air 80-90% menjadi 10-15% dan perubahan warna dari zat hijau daun
menjadi warna orange (Cahyono, 1998).
3. Tahapan proses curing
a. Penguningan, proses perubahan warna dari warna hijau menjadi warna
kuning karena hilangnya zat hijau daun ke zat kuning daun dan terjadi penguraian
zat tepung menjadi gula. Perubahan ini terjadi pada suhu 32-42ºC berlangsung
selama 55 sampai dengan 58 jam
b. Pengikatan warna, proses ketika seluruh daun sudah berwarna kuning
orange dari lembar daun sampai tulang daun, maka secara perlahan suhu
dinaikkan. Suhu yang digunakan 43-52ºC waktu yang diperlukan sekitar 18 jam
c. Pengeringan lembar daun, proses ini bertujuan untuk mengurangi
kadar air di dalam lembar daun dengan cara menaikkan suhu 53-62ºC. Ciri-ciri
proses ini, daun sudah terasa kering apabila dipegang, namun tulang daun masih
terasa basah, daun terlihat keriput atau keriting. Waktu yang dibutuhkan lebih
kurang 30-32 jam
d. Pengeringan gagang, proses ini dilakukan pada suhu 63-72ºC yang
memerlukan waktu normal 30-32 jam. Ciri-ciri tahapan ini selesai apabila seluruh
tulang daun sudah kering dan jika ditekuk batangnya akan patah dan berbunyi
krek (Hanum, 2008).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
D. Ekstraksi
1. Ekstrak
Ekstrak adalah sediaan pekat yang diperoleh dengan mengekstraksi zat
aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang
sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau
serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah
ditetapkan (Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan,1995).
Ekstrak tumbuhan merupakan material yang diperoleh dengan cara
menyari bahan tumbuhan dengan pelarut tertentu. Terdapat beberapa jenis ekstrak
yaitu : ekstrak cair, ekstrak kental, dan ekstrak kering (Saifudin, 2011).
2. Ekstraksi
Ekstrak diperoleh dengan cara ekstraksi. Ekstraksi adalah kegiatan
penarikan zat aktif yang dapat larut sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat
larut dengan pelarut cair. Pemilihan pelarut dan cara ekstraksi yang tepat dapat
dipermudah dengan mengetahui terlebih dahulu zat aktif yang dikandung
simplisia. Ekstraksi dipengaruhi oleh derajat kehalusan serbuk dan perbedaan
konsentrasi. Jika hanya dengan mencelupkan serbuk simplisia ke dalam pelarut,
maka ekstraksi tidak akan sempurna karena terjadi kesetimbangan antara larutan
zat aktif di luar sel dan larutan zat aktif di dalam sel (Direktorat Jendral
Pengawasan Obat dan Makanan, 1986).
3. Cairan Penyari
Pemilihan cairan penyari harus mempertimbangkan banyak faktor.
Cairan penyari yang baik harus memenuhi kriteria berikut : murah dan mudah
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
diperoleh, stabil secara fisika dan kimia, bereaksi netral, tidak mudah menguap
dan tidak mudah terbakar, selektif yaitu mudah menarik zat berkhasiat yang
dikehendaki, tidak mempengaruhi zat yang berkhasiat dan diperbolehkan oleh
peraturan (Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan, 1986).
Etanol dipertimbangkan sebagai penyari karena lebih selektif, kapang
dan kuman sulit tumbuh dalam etanol 20%, tidak beracun, netral, absorpsinya
baik dan panas yang digunakan untuk pemekatan lebih sedikit. Etanol dapat
melarutkan alkaloid basa, minyak menguap, glikosida, kurkumin (Direktorat
Jendral Pengawasan Obat dan Makanan, 1986).
4. Soxhletasi
Soxhlet adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang
dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinyu dengan jumlah
pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik. Penyarian dengan
soxhletasi menggunakan larutan yang dipanaskan terus menerus sehingga zat aktif
yang tidak tahan pemanasan kurang cocok (Direktorat Jendral Pengawasan Obat
dan Makanan, 2000).
Gambar 6. Alat Soxhlet (Anonimc, 2011)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
Cairan penyari diisikan pada labu alas bulat, serbuk simplisia
ditempatkan pada kertas saring dan diletakkan pada tabung. Cairan penyari
dipanaskan hingga mendidih, kemudian uap penyari akan naik ke atas melalui
pipa samping, kemudian diembunkan kembali oleh pendingin tegak. Cairan turun
ke labu melalui tabung yang berisi serbuk simplisia. Cairan penyari sambil turun
melarutkan zat aktif serbuk simplisia, karena terdapat sifon sehingga setelah
cairan mencapai permukaan sifon, seluruh cairan akan kembali ke labu (Direktorat
Jendral Pengawasan Obat dan Makanan, 1986).
5. Penguapan Ekstrak Cair
Ekstrak cair yang memiliki konsistensi cair dan kandungan pelarutnya
yang masih tinggi dapat diubah menjadi bentuk ekstrak kental. Proses pengentalan
ini dapat dilakukan melalui penguapan dengan menggunakan alat Vacuum Rotary
Evaporator. Cara kerjanya yaitu perputaran labu dalam sebuah pemanas pada
temperatur dan kecepatan putar tertentu, akan menguapkan cairan yang
terkandung dalam ekstrak. Pengaturan dalamnya pencelupan ke dalam penangas
air, suhu penangas, hampa udara dan suhu pendingin membuat kondisi optimal
dapat terpenuhi sehingga proses pengentalan ekstrak dapat berlangung cepat
(Voight, 1994).
E. Spektrofotometri UV
Spektrofotometri UV adalah teknik analisis spektroskopik yang
menggunakan sumber radiasi elektromagnetik ultra violet dekat (190-380 nm)
dengan memakai instrumen spektrfotometer (Mulja dan Suharman, 1995).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
Jika suatu molekul dikenakan radiasi elektromagnetik (REM) maka
molekul akan menyerap REM yang energinya sesuai. Interaksi antara molekul
dengan REM akan meningkatkan energi potensial elektron pada tingkat keadaan
tereksitasi. Transisi elektronik yang terjadi diantara tingkat energi dalam suatu
molekul yaitu transisi ���*, n��*, n��* dan ���*.
Gambar 7. Diagram tingkat energi elektronik (Gandjar dan Rohman, 2007)
1.Transisi � � �*
Energi yang diperlukan untuk transisi ini besarnya sesuai dengan energi
sinar yang frekuensinya terletak diantara UV vakum (>180 nm) sehingga kurang
begitu bermanfaat untuk analisis dengan cara spektrofotometri UV-Vis
2. Transisi n� �*
Jenis transisi ini terjadi pada senyawa organik jenuh yang mengandung
atom-atom yang memiliki elektron bukan ikatan (elektron n). Energi yang
diperlukan untuk transisi n� �* lebih kecil dibanding transisi � � �* sehingga
sinar yang diabsorpsi memiliki panjang gelombang lebih panjang (150-250 nm)
3. Transisi n��* dan ���*
Untuk memungkinkan jenis transisi ini, maka molekul organik harus
mempunyai gugus fungsional yang tidak jenuh sehingga ikatan rangkap dalam
gugus tersebut memberikan orbital phi yang diperlukan (Gandjar dan Rohman,
2007).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
Pelarut dapat mempengaruhi transisi n��* dan ���*, hal ini berkaitan
dengan adanya perbedaan kemampuan pelarut untuk mensolvasi antara keadaan
dasar dengan keadaan tereksitasi (Gandjar dan Rohman, 2007).
Gambar 8. Pengaruh pelarut polar pada transisi ���* (Gandjar dan Rohman, 2007)
Molekul yang menunjukkan transisi ���*, keadaan dasar lebih non
polar dibandingkan keadaan eksitasi. Jika pelarut polar digunakan pada molekul
yang mengalami transisi ini, maka menyebabkan pelarut polar berinteraksi lebih
kuat dengan keadaan tereksitasi dibandingkan keadaan dasar, sehingga perbedaan
energi transisi ���* pada pelarut polar ini lebih kecil. Menyebabkan terjadinya
pergeseran panjang gelombang yang lebih besar dibandingkan panjang gelombang
semula (pergeseran bathokromik) (Gandjar dan Rohman, 2007).
Molekul yang menunjukkan transisi n��*, keadaan dasar lebih polar
dibandingkan keadaan tereksitasi. Pelarut akan berikatan hidrogen dengan
pasangan elektron yang tidak berpasangan pada molekul dalam keadaan dasar
dibandingkan pada molekul dalam keadaan tereksitasi (Gandjar dan Rohman,
2007).
Gambar 9. Pengaruh pelarut polar pada transisi n��* (Gandjar dan Rohman, 2007)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
Terjadinya eksitasi elektronik pada panjang gelombang yang
memberikan absorbansi yang maksimum disebut panjang gelombang maksimum.
Penentuan panjang gelombang maksimum yang tetap dapat digunakan untuk
identifikasi molekul yang bersifat karakteristik sebagai data sekunder, sehingga
spektrum UV-Vis dapat untuk tujuan analisis kualitatif dan kuantitatif (Mulja dan
Suharman, 1995).
F. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)
1. Definisi dan Instrumentasi
Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) atau biasa disebut juga
dengan HPLC (High Performance Liquid Chromatography) merupakan teknik
pemisahan yang diterima secara luas untuk analisis bahan obat, baik dalam bulk
atau dalam sediaan farmasetik, serta dalam cairan biologis (Rohman, 2009).
Instrumentasi KCKT pada dasarnya terdiri atas : wadah fase gerak, pompa,
alat untuk memasukkan sampel (tempat injeksi), kolom, detektor, wadah
penampung buangan fase gerak, dan suatu komputer atau integrator atau perekam
(Rohman, 2009). Instrumentasi KCKT dapat dilihat pada gambar 10.
Gambar 10. Instrumentasi KCKT (Kazakevich and Nair, 1996)
a. Wadah fase gerak dan fase gerak, alat KCKT yang baru dilengkapi
dengan satu atau lebih wadah gelas, yang mengandung 500 mL atau lebih fase
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
� �
�
� �
�
gerak. Sonikasi (penghilangan gas) biasanya dilakukan terlebih dahulu pada fase
gerak untuk menghilangkan gas yang mungkin terdapat di dalamnya. Adanya gas
dapat menyebabkan flow rate yang tidak reprodusibel serta dapat mengganggu
detektor (Skoog, Holler, Crouch, 1998). Fase gerak atau eluen biasanya terdiri
atas campuran pelarut yang dapat bercampur yang secara keseluruhan berperan
dalam daya elusi dan resolusi
Fase gerak yang sering digunakan adalah campuran metanol atau
asetonotril dengan air atau dengan larutan buffer. Untuk analit yang bersifat asam
atau basa lemah, peranan pH sangat penting karena jika pH fase gerak tidak diatur
maka analit akan mengalami ionisasi sehingga ikatan dengan fase diam akan
menjadi lemah jika dibandingkan dengan bentuk tidak terionisasi, spesies yang
terionisasi akan terelusi lebih cepat (Rohman dan Ganjar, 2007).
Pelarut yang digunakan dalam analisis menggunakan KCKT detektor UV
hendaknya memiliki UV cut-off yang jauh dari panjang gelombang serapan analit.
Hal ini karena pada panjang gelombang tersebut kepekaan detektor UV sangat
lemah (Mulja dan Suharman, 1995). Karakteristik beberapa pelarut yang sering
digunakan pada analisis menggunakan KCKT disajikan pada tabel I.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
Tabel I. Karakteristik beberapa pelarut yang digunakan dalam KCKT Pelarut Indeks
polaritas
Nilai eluotropik UV cut-
off (nm) Alumina C18 Silika
Heksan 0.1 0.01 - 0.00 195
Sikloheksan 0.2 0.04 - - 200
Toluen 2.4 0.29 - 0.22 284
Tertrahidrofuran 4.0 0.45 3.7 0.53 212
Etil Asetat 4.4 0.58 - 0.48 256
Aseton 5.1 0.56 8.8 0.53 330
Metanol 5.1 0.95 1.0 0.7 205
Asetonitril 5.8 0.65 3.1 0.52 190
Dimetilformamida 6.4 - 7.6 - 268
Dimetilsulfoksida 7.2 0.62 - - 268
Air 10.2 - - - 190
b. Pompa, dalam alat KCKT pompa yang memenuhi syarat wadah pelarut,
yakni : pompa harus inert terhadap fase gerak. Pompa yang digunakan sebaiknya
mampu memberikan tekanan sampai 5000 psi dan mampu mengalirkan fase gerak
dengan kecepatan alir 3 mL/menit (Rohman, 2009).
c. Tempat penyuntikan sampel, sampel-sampel cair dan larutan
disuntikkan secara langsung ke dalam fase gerak yang mengalir di bawah tekanan
menuju kolom. (Gandjar dan Rohman, 2007).
d. Kolom, kolom merupakan bagian KCKT yang terdapat fase diam di
dalamnya. Oktadesilsilan (C18) merupakan fase diam yang paling banyak
digunakan karena mampu memisahkan senyawa-senyawa dengan kepolaran yang
rendah, sedang, maupun tinggi. Oktil atau rantai alkil yang lebih pendek lagi lebih
sesuai untuk pelarut yang bersifat polar (Rohman, 2009).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
Pada KCKT fase diam berupa silika yang dimodifikasi secara kimiawi,
silika yang tidak dimodifikasi, atau polimer-polimer stiren dan divinil benzen.
Permukaan silika adalah polar dan sedikit asam karena adanya residu gugus
silanol (Si-OH). ODS atau C18 merupakan fase diam yang paling banyak
digunakan karena mampu memisahkan senyawa-senyawa dengan kepolaran yang
rendah, sedang, maupun tinggi. Silika yang tidak dimodifikasi akan memberikan
waktu retensi yang bervariasi karena adanya kandungan air yang digunakan
(Gandjar dan Rohman, 2007).
e. Detektor, persyaratan detektor KCKT adalah sensitivitas yang tinggi,
rentang sensitivitas (10-8 – 10-15 analit/detik), kestabilan dan reprodusibilitas yang
baik memberikan respon yang linier terhadap konsentrasi analit, dapat bekerja dari
temperatur kamar sampai 400oC, tidak terpengaruh oleh perubahan temperatur
dan kecepatan dari fase gerak, mudah didapat dan mudah dioperasikan, selektif
terhadap berbagai macam analit di dalam fase gerak, tidak merusak sampel, dapat
menghilangkan zone broadening dengan adanya pengaruh minimal internal
volume (Mulja dan Suharman, 1995).
2. Analisis Kualititatif dan Kuantitatif
Analisis kualitatif KCKT berupa pengamatan waktu retensi (tR) senyawa
baku dan senyawa yang tidak diketahui dibandingkan dengan cara kromatografi
secara berurutan dalam kondisi alat yang stabil dengan perbedaan waktu
pengoperasian antara keduanya sekecil mungkin (Gandjar dan Rohman, 2007).
Untuk KCKT kuantifikasi dapat dilakukan dengan mengukur tinggi
puncak atau dengan luas puncak. Tinggi puncak diukur sebagai jarak dari garis
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
dasar ke puncak maksimum. Sedangkan luas puncak diukur sebagai hasil kali
tinggi puncak dan lebar pada setengah tinggi (W1/2) (Gandjar dan Rohman, 2007).
G. Landasan Teori
Tanaman tembakau merupakan kelompok tanaman C3. Tanaman C3
adalah tanaman yang kebutuhan terhadap intensitas cahaya rendah. Cahaya
matahari berperan dalam proses fotorespirasi, fotosintesis dan respirasi tumbuhan.
Pada siang hari tanaman C3 (tanaman tembakau) mendapatkan intensitas cahaya
yang tinggi menyebabkan terjadinya pengikatan CO2 secara spontan oleh RDP hal
ini disebabkan O2 lebih banyak sehingga CO2 yang berperan dalam proses
fotosintesis sedikit, karbohidrat (CH2O)n yaitu D-glukosa hasil hidrolisis dari
sukrosa sebagai produk fotosintesis dan substrat respirasi berkurang sehingga L-
ornithine yang dihasilkan dari tahap Glikolisis dan Siklus Krebs sebagai prekusor
biosintesis nikotin berkurang.
Tanaman tembakau VBN adalah tanaman yang diberikan naungan
sehingga intensitas cahaya yang diterima lebih sedikit dibandingkan tembakau
NO yang tidak diberi naungan.
Proses ektraksi dengan menggunakan soxhlet menghasilkan ekstrak daun
tembakau yang mengandung nikotin. Nikotin memiliki efek farmakologis yang
menguntungkan yaitu mampu meningkatkan kemampuan kognitif dan motorik.
Nikotin memiliki kromofor pada cincin piridin sehingga dapat dideteksi
kadarnya menggunakan spekrofotometri-UV, diperoleh kadar nikotin terdapat
dalam daun tembakau VBN sebesar 1,413% dan NO sebesar 0,867%.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
Metode kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) fase terbalik dapat
digunakan untuk menetapkan kadar nikotin dalam ekstrak etanolik daun tembakau
VBN dan NO karena metode ini selektif dalam memisahkan senyawa
multikomponen dengan waktu yang relatif singkst. Metode KCKT fase terbalik
ini telah dioptimasi dan divalidasi.
Penetapan kadar dilakukan dengan membandingkan nilai AUC (Area
Under Curve) antara sampel ekstrak etanolik daun tembakau dengan AUC standar
baku nikotin. Persamaan kurva baku nikotin yang didapat merupakan kurva
hubungan antara konsentrasi baku nikotin dengan nilai AUC yang dihasilkan,
dinyatakan dengan y = bx + a, dimana y adalah AUC dan x adalah kadar nikotin,
maka AUC sampel dimasukkan dalam persamaan, kemudian kadar dari sampel
nikotin dalam ekstrak etanolik daun tembakau dapat diketahui.
H. Hipotesis
Terdapat perbedaan kadar nikotin dalam ekstrak etanolik daun tembakau
VBN dan NO.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
���
�
BAB III
METODE PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian ini mengikuti jenis penelitian non eksperimental deskriptif,
karena tidak terdapat intervensi terhadap subyek uji.
B. Variabel Penelitian
1. Variabel bebas pada penelitian ini adalah ekstrak etanolik daun tembakau VBN
dan NO.
2. Variabel tergantung pada penelitian ini adalah kadar nikotin yang terdapat
dalam ekstrak etanolik daun tembakau VBN dan NO.
3. Variabel pengacau pada penelitian ini adalah
a. kemurnian pelarut, sehingga digunakan pelarut pro analysis yang memilki
kemurnian tinggi.
b. larutan baku nikotin yang bersifat mudah teroksidasi oleh udara dan
cahaya, diatasi dengan menggunakan alumunimum untuk menutupi alat-
alat gelas.
c. pH pelarut dan fase gerak yang dikendalikan dengan buffer pada pH 4.
C. Definisi Operasional
1. Sistem kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) yang digunakan dalam
penelitian ini menggunakan kolom fase diam oktadesilsilan (C18) dan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
komposisi fase gerak buffer asetat:metanol:asetonitril (40:54:6) dengan
kecepatan alir 1,2 mL/menit.
2. Ekstrak etanolik daun tembakau yang digunakan adalah VBN dan NO.
3. Kadar nikotin dalam 1 gram ekstrak dinyatakan dalam satuan % b/b ± SD.
D. Bahan Penelitian
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini memiliki kualitas pro
analysis kecuali dinyatakan lain yakni baku nikotin (E. Merck), ammonium asetat
(E. Merck), natrium asetat (E. Merck), asam asetat glasial (E. Merck), asetonitril
(E. Merck), metanol (E. Merck), natrium hidroksida 4M (E. Merck), kloroform (E.
Merck), asam klorida (teknis), etanol (teknis), aquades, aquabides dan ekstrak
etanolik daun tembakau VBN dan NO.
E. Alat Penelitian
Alat yang digunakan adalah Spektrofotometer UV-Vis (merek Optima
SP-300 Plus), seperangkat alat KCKT fase terbalik terdiri : pompa (merek
Shimadzu LC-10 AD No.C20293309457 J2) dengan sistem elusi gradien, detektor
UV-Vis (merek Shimadzu SPD 10 AV No.C20343502697 KG), kolom C-18
merek Bondapack C-18 dengan panjang kolom 25 cm No.P61271BO2,
seperangkat alat komputer (merek Dell Vostro 220, printer merek HP D2566),
alat ultrasonikator (Retsch tipe T640 no 935922013), membran filter Whatman
ukuran pori 0,45 �m dan diameter 47 mm, nerca analitik merek Ohaus, milipore,
mikropipet, indikator pH, seperangkat alat gelas.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
F. Tata Cara Penelitian
1. Pembuatan buffer asetat (pH 4)
Buffer asetat dibuat dengan cara menimbang 0,1683 g ammonium asetat,
0,5599 g natrium asetat dan diambil 0,406 mL asam asetat glasial. Ketiga zat
tersebut dimasukkan ke dalam labu takar 250,0 mL kemudian dilarutkan dengan
aquabides hingga batas tanda. (Larutan buffer ini harus selalu dibuat baru untuk
mencegah tumbuhnya mikroorganisme).
2. Pembuatan fase gerak
Campuran fase gerak yang digunakan untuk penelitian ini adalah
campuran buffer asetat:metanol:asetonitril (40:54:6). Masing-masing larutan fase
gerak disaring dengan menggunakan kertas saring Whatman dengan bantuan
pompa vakum, kemudian diultrasonikasi selama 15 menit.
3. Pengambilan dan pembuatan sampel
Sampel yang digunakan berupa lembaran daun tembakau kering VBN dan
NO. Teknik pengambilan yaitu daun tembakau diambil secara acak mewakili
setiap deret tanaman tembakau di lahan PT. Perkebunan Nusantara X (Persero)
Klaten, dan dilakukan proses penyerbukan.
4. Pembuatan larutan baku nikotin
a. Pembuatan larutan stok nikotin. Larutan stok nikotin 2 ppm dibuat
dengan cara mengambil sebanyak 10 �L baku nikotin dan dimasukkan dalam labu
ukur 5,0 mL. Encerkan dengan fase gerak hingga tanda.
b. Pembuatan seri larutan baku nikotin. Lima seri larutan baku nikotin
dibuat dengan konsentrasi 0,01; 0,03; 0,05; 0,07; 0,09 ppm dengan cara
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
mengambil larutan stok nikotin dengan mikropipet sebanyak 25; 75; 125; 175;
225 �L, dimasukkan dalam labu ukur 5,0 mL dan diencerkan dengan fase gerak
(buffer asetat:metanol: asetonitril) hingga tanda. Larutan disaring dengan milipore
dan diawaudarakan selama 15 menit.
5. Penetapan � maksimum
Tiga seri larutan baku nikotin dengan konsentrasi 0,005; 0,007; 0,009
ppm. Masing-masing konsentrasi dibaca absorbansinya pada panjang gelombang
225-325 nm. Panjang gelombang yang digunakan adalah panjang gelombang yang
memberikan serapan terbesar dan sama pada 3 seri konsentrasi larutan baku
nikotin.
6. Pembuatan kurva baku nikotin
Seri larutan baku dengan konsentrasi 0,01; 0,03; 0,05; 0,07 dan 0,09
ppm, masing-masing larutan disaring dengan menggunakan milipore kemudian
diultrasonikasi selama 15 menit dan 20 µL dari masing-masing larutan
diinjeksikan pada sistem KCKT fase terbalik dengan fase diam C18 dan fase gerak
buffer asetat:metanol:asetonitril (40:54:6) pada kecepatan alir 1,2 mL/menit. Dari
kromatogram diperoleh luas area nikotin untuk masing-masing konsentrasi. Luas
area ini kemudian diplotkan terhadap konsentrasi nikotin untuk memperoleh
regresi linear dengan persamaan y = bx + a.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
7. Pembuatan HCl encer
Asam klorida pekat (HCl P) 22,6 mL dimasukkan dalam labu takar 10,0
mL kemudian encerkan dengan aquabidest hingga tanda.
8. Pembuatan NaOH 4 M
Natrium hidroksida pro analisis (NaOH p.a) ditimbang sebanyak 4 g dan
dimasukkan dalam labu takar 25,0 mL larutkan dan encerkan dengan aquabidest
hingga tanda.
9. Preparasi Sampel
Ekstrak kental daun tembakau VBN dan NO ditimbang kurang lebih
seksama 1 g, dilarutkan dalam 10 mL asam klorida encer dengan bantuan
ultrasonikator selama 30 menit hingga semuanya larut. Kemudian larutan
ditambah 10 mL kloroform dalam corong pisah, dilakukan penggojogan selama 5
menit hingga terbentuk 2 lapisan, lapisan kloroform (fase bawah) dibuang.
Kemudian ditetesi NaOH 4M hingga pH larutan 11-12, setelah itu ditambahkan
10 mL kloroform lanjutkan ekstraksi selama 5 menit. Lapisan kloroform diuapkan
di ruang asam hingga semua kloroform teruapkan (tersisa residunya). Residu
kemudian dilarutkan dengan fase gerak ke dalam labu takar 5,0 mL dan
diencerkan dengan cara pipet 100 �L larutan ke dalam labu takar 10,0 mL hingga
tanda. Saring dengan milipore dan diawaudarakan selama 15 menit. Dilakukan
replikasi lima kali dari kedua jenis sampel.
10. Ekstraksi daun tembakau
a.Optimasi lama waktu ekstraksi. Serbuk daun tembakau VBN dan NO
ditimbang kurang lebih seksama 20 g. Kemudian dibungkus dengan kertas saring
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
� �
�
� �
�
dan dimasukkan dalam tabung soxhlet dengan 130 ml etanol teknis 96% dalam
LAB. Optimasi lama waktu ekstraksi dilakukan pada waktu 7; 8; 9; dan 10 jam
dengan suhu waterbath 80-90 ºC. Filtrat yang didapat diuapkan dengan vacuum
rotary evaporator pemanas waterbath pada suhu 65 ºC selama 10 menit hingga
diperoleh ekstrak agak kental dan dituangkan dalam cawan porselin. Diuapkan di
atas waterbath suhu 80ºC. Didapat ekstrak kental tembakau.
b. Ekstraksi daun tembakau hasil optimasi. Dilakukan prosedur yang
sama dengan optimasi lama waktu ekstraksi dengan menggunakan waktu optimal
ekstraksi selama 8 jam.
11. Penetapan Kadar Nikotin dalam Sampel
Sampel yang dipreparasi diinjeksikan sebanyak 20 µL ke dalam sistem
KCKT yang telah dioptimasi sehingga didapatkan kromatogram sampel dan
dibaca AUC dari masing-masing replikasi. Masukkan hasil AUC ke persamaan
regresi linear baku nikotin dari hasil validasi sehingga diperoleh kadar sampel.
G. Analisis Hasil
Analisis kualitatif dengan membandingkan waktu retensi sampel dengan
baku nikotin. Analisis kuantitatif dapat dihitung dengan memasukkan AUC
sampel ke dalam persamaan regresi linear yang diperoleh dari kurva baku nikotin
hasil validasi y = bx + a. sehingga didapat kadarnya. Satuan kadar nikotin adalah
%b/b ± SD.
Selanjutnya dilakukan analisis statistik dilakukan untuk melihat apakah kadar
nikotin dalam ekstrak etanolik daun tembakau VBN dan NO berbeda bermakna
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
atau tidak. Uji statistik yang digunakan adalah uji normalitas Shapiro-Wilk untuk
mengetahui data yang diperoleh normal atau tidak, uji t tidak berpasangan untuk
mengetahui kadar yang diperoleh dari kedua sampel tersebut berbeda bermakna
atau tidak.
�
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
���
�
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
Penetapan kadar nikotin dalam ekstrak etanolik daun tembakau VBN dan
NO dapat dianalisis menggunakan metode kromatografi cair kinerja tinggi
(KCKT) fase terbalik karena metode yang digunakan telah dioptimasi dan
divalidasi terlebih dahulu pada awal penelitian.
Pada tahap optimasi diperoleh kondisi optimum yaitu kolom fase diam
oktadesilsilan (C18) dan fase gerak buffer asetat:metanol:asetonitril (40:54:6),
kecepatan alir 1,2 mL/menit, detektor UV pada panjang gelombang maksimum
260 nm dengan nilai resolusi 1,5679, tailing factor 1,25; jumlah lempeng teoritis
2247,163 dan nilai HETP 0,0111 (Ernesta, 2011).
Pada tahap validasi metode diperoleh bahwa metode KCKT fase terbalik
memenuhi parameter validasi meliputi selektifitas dengan nilai resolusi (Rs)
1,531, linearitas dengan nilai koefisien korelasi (r) 0,9996, presisi dan akurasi
pada konsentrasi 0,05 dan 0,09 ppm. Metode KCKT fase terbalik ini memenuhi
kriteria validasi metode pada rentang konsentrasi 0,05-0,09 ppm (Syenina, 2011).
A. Pembuatan Fase Gerak
Fase gerak yang digunakan dalam penelitian ini diperoleh dari hasil
optimasi yaitu buffer asetat:metanol:asetonitril (40:54:6). Berdasarkan
kepolarannya, sistem kromatografi yang digunakan adalah sistem kromatografi
fase terbalik karena fase gerak lebih polar dibandingkan fase diam oktadesilsilan.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
Menurut (Kazakevich, 2007) fase gerak yang paling sering digunakan untuk
pemisahan KCKT fase terbalik adalah modifikasi metanol dan asetonitril karena
memiliki eluent strenght yang kuat. Metanol memiliki eluent strenght 1,0
sedangkan asetonitril memiliki eluent strenght 3,1. Semakin besar nilai eluent
strenght, semakin besar kemampuan elusinya sehingga waktu retensi dari sampel
menjadi semakin singkat.
Buffer asetat adalah salah satu komponen dalam fase gerak yang
digunakan dalam penelitian ini terdiri dari asam lemah (asam asetat glasial) dan
basa konjugatnya (natrium asetat dan amonium asetat) yang bertujuan agar nikotin
(senyawa yang akan dianalisis) mudah terion. Pemilihan buffer berdasarkan nilai
pKa dari senyawa yang akan dianalisis. Menurut Kazakevich dan LoBrutto
(2007), pH buffer yang digunakan ± 2 unit dari pKa analit agar analit berada
dalam bentuk tunggal yakni bentuk terion atau bentuk molekul utuh.
Nikotin memiliki nilai pKa 8,5 (Landoni, 1991). Dalam penelitian ini,
buffer asetat dibuat pada pH 4. Campuran fase gerak terdapat 54 % metanol dan
6% asetonitril. Setiap penambahan 10 % senyawa organik mengalami penurunan
pH yaitu 0,2 unit sehingga pKa nikotin mengalami pergeseran 7,3 dan pH dari
buffer asam mengalami pergeseran sebanyak 1,2 unit ke atas. Pada penelitian ini,
pH dari buffer yang digunakan 2 unit di bawah pKa nikotin agar nikotin menjadi
bentuk terion sehingga lebih cepat terelusi oleh fase gerak (Kazakevich dan
LoBrutto, 2007). Sehingga pH dari buffer asetat maksimum 4,1 agar nikotin tetap
dalam bentuk terion.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
N
N
CH3
H2O / H+
N
NH3C H
+
Gambar 11. Nikotin dalam bentuk terion
Masing-masing komponen dari fase gerak disaring menggunakan kertas
Whatman dengan bantuan pompa vakum untuk menghilangkan partikel asing
dalam larutan fase gerak yang dapat menyumbat kolom, kemudian larutan
diawaudarakan menggunakan ultrasonikator untuk menghilangkan gelembung
udara yang mempengaruhi tekanan pada pompa KCKT yang berpengaruh pada
waktu retensi.
B. Pengambilan dan Pembuatan Sampel
Tujuan penelitian ini adalah untuk membandingkan kadar nikotin dalam
ekstrak etanolik daun tembakau VBN dan NO. Teknik pengambilan yaitu daun
tembakau diambil secara acak mewakili setiap deret tanaman tembakau di lahan
PT. Perkebunan Nusantara X (Persero) Klaten.
Tanaman tembakau merupakan kelompok tanaman C3. Tanaman C3
adalah tanaman yang kebutuhan terhadap intensitas cahaya rendah. Pemberian
naungan pada tanaman tembakau untuk mengurangi intensitas cahaya sebesar
30%, sehingga intensitas cahaya yang diperoleh tanaman tembakau sebesar 70%
(PT.Perkebunan Nusantara XIX (Persero), 1998).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
Kadar nikotin yang terdapat pada berat kering tembakau 0,6-3% dengan
proses biosintesis di akar dan terakumulasi di daun, sehingga pada penelitian ini
bagian tanaman tembakau yang digunakan adalah bagian daun.
Proses pembuatan simplisia merupakan salah faktor untuk menjamin
keseragaman senyawa aktif, keamanan dan kegunaan. Proses pembuatan simplisia
meliputi : sortasi basah, pencucian, perajangan dan pengeringan (Direktorat
Jendral Pengawasan Obat dan Makanan, 1985). Tahap penanganan daun
tembakau setelah dipanen tidak jauh berbeda dengan proses pembuatan simplisia
meliputi : sortasi pendahuluan dengan cara memisahkan daun tembakau
berdasarkan ukuran dan kecacatan daun yang bertujuan memperoleh keseragaman
mutu, tahap selanjutnya penyejunan dan proses curing. Tahapan tersebut tidak
dilakukan oleh peneliti, melainkan dilakukan oleh PT. Perkebunan Nusantara X,
sehingga daun tembakau VBN dan NO untuk penelitian ini sudah diperoleh berupa
lembaran daun tembakau yang berwarna orange dan kering.
Proses penyerbukan daun tembakau untuk memperkecil ukuran partikel.
Proses penyerbukan daun tembakau dilakukan di Lembaga Pusat Penelitian
Terpadu (LPPT) UGM dengan ukuran lubang pengayakan serbuk 1mm. Tujuan
dari pengayakan untuk memperoleh serbuk sedikit halus, tidak lolos dari kertas
saring yang akan digunakan untuk ekstraksi. Menurut Farmakope Indonesia edisi
IV, ukuran lubang pengayak 1,00 mm menunjukkan nomor pengayak 18. Derajat
halus serbuk dalam Farmakope Indonesia edisi III dinyatakan dengan nomor
pengayak. Apabila derajat halus suatu serbuk dinyatakan dengan satu nomor,
dimaksudkan bahwa semua serbuk dapat melalui pengayak dengan nomor
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
tersebut. Nomor pengayak 18 berarti semua serbuk dapat melalui pengayak nomor
18.
C. Pembuatan Larutan Baku
Larutan baku nikotin dibuat dengan melarutkan sejumlah tertentu baku
nikotin E.merck dalam pelarut. Pelarut yang digunakan adalah sama dengan fase
gerak yaitu buffer asetat:metanol:asetonitril (40:54:6), untuk menghindari
terjadinya perbedaan solvent strength antara pelarut dan fase gerak. Solvent
strenght merupakan salah satu faktor yang mempengaruhi waktu retensi.
Pembuatan larutan stok baku nikotin dengan konsentrasi 2 ppm,
kemudian dibuat 5 seri konsentrasi larutan baku nikotin yaitu : 0,01; 0,03; 0,05;
0,07 dan 0,09 ppm.
D. Penetapan Panjang Gelombang Serapan Maksimum
Penentuan panjang gelombang maksimum bertujuan untuk memperoleh
panjang gelombang analisis yang dapat memberikan serapan maksimum dari
nikotin. Penetapan panjang gelombang nikotin dilakukan dengan menggunakan
spektrofotometer UV pada rentang panjang gelombang 225 – 325 nm karena
menurut Cordell panjang gelombang maksimum nikotin 262 nm. Pengukuran
�maks dilakukan pada 3 seri konsentrasi yaitu rendah (0,005 ppm), tengah (0,007
ppm), dan tinggi (0,009 ppm). Dapat dilihat hasil spektra panjang gelombang
nikotin dari 3 seri konsentrasi pada gambar 12.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
Gambar 12. A = konsentrasi 0,005 ppm absorbansi 0,205, � maksimum 260 nm; B =
konsentrasi 0,007 ppm, absorbansi 0,333, , � maksimum 260 nm dan C = konsentrasi 0,009 ppm, absorbansi 0,374, � maksimum 260 nm
Dari ketiga gambar spektra nikotin yang diperoleh terlihat bahwa bentuk
spektra yang dihasilkan pada tiga level konsentrasi sama. Panjang gelombang
yang menghasilkan serapan maksimum nikotin terletak pada 260 nm. Menurut
Mulja, 1995 penentuan panjang gelombang maksimum yang pasti (tepat) dapat
digunakan sebagai data sekunder (analisis kualitatif).
Syarat suatu senyawa dapat dianalisis oleh spektrofotometer UV adalah
memiliki kromofor. Nikotin memiliki kromofor pada cincin piridin.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
�
Gambar 13. Kromofor cincin piridin
E. Pembuatan Kurva Baku Nikotin
Pembuatan kurva baku telah dilakukan pada tahap validasi. Kurva baku
menunjukkan hubungan antara AUC dengan konsentrasi analit pada beberapa seri
baku. Dalam penelitian ini dibuat tiga replikasi kurva baku, kemudian dipilih
persamaan regresi linear yang memberikan nilai koefisien korelasi (r) dengan
kriteria r � 0,999 (Center for Drug Evaluation and Research, 1994). Diperoleh
persamaan regresi linear y = 20708810x + 82847,5 dengan nilai koefisien korelasi
yaitu 0,9996. Persamaan regresi linear ini digunakan untuk menghitung kadar
nikotin dalam ekstrak daun tembakau.
Berdasarkan grafik hubungan pada gambar (14) antara konsentrasi analit
(baku nikotin) dan AUC baku terlihat bahwa semakin meningkatnya konsentrasi
baku nikotin, semakin meningkat AUC baku.
Gambar 14. Grafik hubungan antara konsentrasi nikotin dengan AUC
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
F. Ekstraksi secara Soxhletasi dan Penguapan Ekstrak Cair
Serbuk daun tembakau diekstraksi dengan metode soxhletasi dengan cara
sejumlah serbuk dijahit dengan menggunakan kertas saring agar tetesan-tetesan
dari cairan penyari dapat membasahi kertas saring sehingga dapat menyari serbuk
daun tembakau tersebut. Cairan penyari yang digunakan adalah etanol 96% karena
nikotin larut dalam etanol, sangat efektif dalam menghasilkan jumlah bahan aktif
yang optimal dan tidak beracun (Voight, 1994). Prinsip metode soxhletasi adalah
pemanasan yang menyebabkan cairan penyari naik ke atas, diembunkan oleh
pendingin menjadi tetesan-tetesan yang akan turun ke tabung berisi sebuk yang
telah dibungkus kertas saring. Cairan penyari akan menetes melarutkan zat aktif
jika volume tetesan telah mencapai permukaan, seluruh pelarut akan turun
kembali ke labu alas bulat sehingga sirkulasi terjadi berulang-ulang yang akan
menghasilkan penyarian yang baik.
Gambar 15. Proses ekstraksi dengan alat soxhlet
Tahap selanjutnya dilakukan penguapan ekstrak cair karena kandungan
pelarutnya masih tinggi. Penguapan ekstrak dengan meggunakan vacuum rotary
evaporator (VRE) mempercepat penguapan pelarut. Pada penelitian ini, suhu
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
� �
�
� �
�
yang digunakan adalah 65ºC yang dilakukan selama 10 menit. Setelah diperoleh
ekstrak cair yang lebih pekat hasil evaporasi, dipekatkan kembali dengan
diuapkan di atas waterbath pada suhu 80ºC hingga diperoleh ekstrak kental.
Sampel dalam cawan ditutup aluminium foil dan disimpan dalam desikator.
G. Optimasi Waktu Ekstraksi Nikotin dalam Serbuk Daun Tembakau
Tujuan dari optimasi waktu ekstraksi nikotin dari serbuk daun tembakau
untuk mendapatkan waktu ekstraksi yang paling optimum sehingga nikotin
terekstraksi seluruhnya. Metode yang digunakan untuk penelitian ini adalah
soxhletasi karena pengerjaannya mudah, cepat, cairan penyari yang digunakan
lebih sedikit daripada metode ekstraksi lain dan secara langsung diperoleh hasil
ekstraksi yang lebih pekat (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan,
1986).
Variasi optimasi waktu ekstraksi pada penelitian ini adalah 7; 8; 9; 10
jam. Optimasi waktu 7 jam digunakan sebagai waktu optimasi terendah karena
dilakukan orientasi ekstraksi terlebih dahulu selama 5 jam diperoleh hasil yaitu
cairan penyari yang terdapat pada tabung soxhlet berwarna hijau tua (pekat).
Berdasarkan Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan (1986), optimasi
dikatakan sempurna jika cairan penyari pada tabung soxhlet tidak berwarna.
Ekstrak kental dari masing-masing waktu ekstraksi dikumpulkan, dilanjutkan
preparasi sampel dan diinjek ke instrument KCKT. Diperoleh hasil kromatogram
dan respon AUC pada gambar 16.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
A
B
C
D
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
E
F
G
H
Keterangan gambar 16 = A: 7 jam-1, B: 7 jam-2, C: 8 jam-1, D: 8 jam-2,
E: 9 jam-1, F: 9 jam-2, G: 10 jam-1, H: 10 jam-2
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
Tabel II. Hasil pengukuran AUC sampel dengan variasi waktu ekstraksi sampel dengan soxhlet
Waktu (jam)
7 A 7 B 8 A 8 B 9 A 9 B 10 A 10 B
AUC 1072305 1135700 1228904 123771 916992 942139 659037 644588
Berdasarkan hasil yang diperoleh pada gambar 15 dan tabel II
menunjukkan peningkatan respon AUC pada 7 jam ekstraksi ke 8 jam ekstraksi,
dan terjadi penurunan respon AUC pada 9 jam ekstraksi dan 10 jam ekstraksi,
maka waktu optimum proses ekstraksi dengan soxhlet adalah 8 jam karena
menghasilkan respon AUC paling tinggi. Hal ini dimungkinkan terdapat pengaruh
lama waktu ekstraksi terhadap stabilitas dari nikotin. Suhu yang harus
diperhatikan dalam panci pemanas antara 85 – 87ºC, proses ekstraksi terjadi
secara berkesinambungan. Pelarut diperbolehkan berada di dalam refluks selama 8
jam (Raymond et al., 1991).
H. Ekstraksi dengan Waktu Optimum 8 jam
Berdasarkan data yang diperoleh dari optimasi waktu ekstraksi,
dilanjutkan dengan ekstraksi Vorstenlanden Bawah Naungan dan Na Oogst
dengan waktu optimum ekstraksi selama 8 jam. Hasil kromatogram dan respon
AUC dari kedua sampel dapat dilihat pada gambar 17 dan tabel III.
A
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
B
C
D
E
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
F
G
H
I
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
J Gambar 16 = A:NO 1; B:NO 2; C:NO 3; D:NO 4; E:NO 5; F:VBN 1; G:VBN 2; H:VBN 3;
I:VBN 4; J:VBN 5.
Tabel III. Hasil pengukuran AUC ekstraksi serbuk daun tembakau jenis VBN dan NO dengan soxhlet selama 8 jam
Replikasi AUC
Na Oogst Vorstenlanden 1 627977 1258549
2 628873 1232800
3 626067 1231498
4 628265 1238593
5 628560 1232771
I. Preparasi Sampel
Ekstrak etanolik daun tembakau terdapat senyawa alkaloid selain nikotin
misalnya anabasin, anatabin, dan nornikotin. Ekstraksi dilakukan untuk
meminimalkan campuran senyawa yang terdapat dalam ekstrak daun tembakau.
Sampel yang berupa ekstrak kental ditimbang ± 1 gram dilarutkan dalam HCl
encer dengan bantuan ultrasonikator selama 30 menit. Pada tahap ini nikotin yang
terkandung dalam sampel akan bereaksi dengan asam klorida membentuk nikotin
hidroklorida yang larut dalam fase air, kemudian ditambahkan kloroform
sebanyak 10 mL, diekstraksi menggunakan corong pisah. Penambahan kloroform
untuk menarik senyawa-senyawa non polar.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
N
N
CH3
+
N
NH3C HHCl
nikotin asam klorida nikotin hidroklorida
-Cl+
�Gambar 18 . Reaksi antara nikotin dengan asam klorida
Fase air yang mengandung nikotin hidroklorida ditampung dan
ditambahkan 8 mL NaOH 4 M mencapai pH 11-12, agar nikotin hidroklorida
kembali dalam suasana basa atau ke bentuk molekulnya�� Sehingga dengan
penambahan kloroform yang kedua nikotin akan terlarut dalam fase kloroform.
N
N
H3C H+-Cl
�� + NaOH
�
N
N
CH3
+ NaCl + H2OGambar 19. Reaksi antara nikotin hidroklorida
dengan NaOH
Penambahan 10 ml kloroform dan diekstraksi menggunakan corong pisah
(5 menit), kemudian fraksi kloroform ditampung dan diuapkan di ruang asam
hingga tersisa residu nikotin, karena titik didih nikotin adalah 247°C sehingga
nikotin tidak ikut menguap bersama kloroform. Residu dilarutkan menggunakan
fase gerak dan dilakukan pengenceran sepuluh kali lipat untuk memperoleh
respon analit yang masuk dalam area under curve (AUC) kurva baku . Pada
larutan sampel masih terdapat senyawa lain yang larut dalam fase kloroform yang
akan dipisahkan pada analisis menggunakan KCKT. Larutan sampel disaring
dengan penyaring millipore dan diawaudarakan dengan utrasonikator untuk
Nikotin hidroklorida NaOH Nikotin
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
menghilangkan gelembung udara, adanya gelembung udara dapat menggangu
mengganggu proses pemisahan sampel.
J. Analisis Kualitatif Nikotin
Waktu retensi atau waktu tambat yang dinyatakan dalam satuan waktu
(menit) merupakan parameter analisis kualitatif dalam KCKT. Waktu retensi
adalah waktu yang dibutuhkan analit saat diinjek sampai keluar dari kolom dan
terdeteksi oleh detektor (Mulja dan Suharman, 1995).
Waktu retensi (tR) suatu analit sangat dipengaruhi oleh interaksi analit
dengan fase diam dan fase gerak. Jika waktu retensi analit semakin singkat maka
interaksi analit lebih besar dengan fase gerak dibandingkan dengan fase diam.
Dalam penelitian ini, fase diam yang digunakan kolom oktadesilsilan (C18) yang
bersifat non polar dan fase gerak yang digunakan adalah buffer
asetat:metanol:asetonitril (40:54:6) bersifat lebih polar dibandingkan fase diam.
Dari sistem kromatografi fase terbalik, senyawa polar akan terelusi terlebih
dahulu daripada senyawa non polar sehingga waktu retensinya lebih singkat.
Dilihat dari strukturnya pada gambar (20), nikotin memiliki bagian polar
dan non polar. Bagian polar terdapat pada cincin piridin dan pirolidin dan bagian
non polar terdapat pada metil.
�Gambar 20. Struktur nikotin dengan bagian polar dan non polar
�� � ��� ����
�
�� ����
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
Nikotin memiliki bagian polar yang akan berinteraksi melalui interaksi
hidrogen dengan fase gerak, sedangkan bagian non polarnya akan berinteraksi
secara Van der Waals dengan rantai alifatis fase diam oktadesisilan (C18).
Gambar 21. Interaksi nikotin dengan fase diam oktadesilsilan (C18)
Nikotin akan berinteraksi dengan fase gerak buffer
asetat:metanol:asetonitril (40:54:6) melalui interaksi hidrogen dan ionik. Interaksi
hidrogen terjadi pada atom nitrogen cincin piridin, sedangkan interaksi ionik
terjadi pada atom nitrogen cincin pirolidin yang terprotonasi karena suasana asam
dari buffer asetat. Karena interaksi hidrogen dan ionik lebih kuat dibandingkan
interaksi Van der Waals antara bagian non polar nikotin dengan fase diam,
sehingga nikotin dapat terelusi dari kolom.
����������
�������� ��!��
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
� �
�
� �
�
N
N+
Ch3
H
HO
H3C HO
H CH3
HO
H3CH
O- NH4+
OH
CH3C O
Amonium asetat
AquaOH
H H C CH3
Metanol
Asetonitril
OC
CH3OAsam asetat
Interaksi ionik
= Interaksi hidrogen
ONa C
O
CH3
Natrium asetat
�Gambar 22. Interaksi nikotin dengan fase gerak buffer asetat:metanol:asetonitril (40:54:6).
Hasil validasi pada gambar (22) diperoleh kromatogram baku nikotin
dengan tR yaitu 2,017 menit dan hasil penetapan kadar diperoleh kromatogram
sampel dengan tR pada puncak I yang hampir sama dengan baku pada puncak I
yaitu 1,970 menit, dapat dipastikan adanya nikotin dalam sampel ekstrak daun
tembakau. Menurut Snyder, kondisi kromatografi seperti kecepatan alir,
temperatur, komposisi fase gerak dan tekanan yang stabil menghasilkan tR yang
stabil pula. Variasi waktu retensi yang diperbolehkan <0,02-0,05 menit.
�
a
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
b
Gambar 23. (a) kromatogram baku nikotin tR = 2,017 menit dan (b) kromatogram sampel ekstrak etanolik daun tembakau tR = 1,970 menit
Ketika analisis penetapan kadar nikotin pump pressure pada instrument
KCKT 115 kgf/cm2 berbeda dengan validasi metode 110 kgf/cm2, hal ini
disebabkan karena penggunaan kolom yang bergantian oleh 2 kelompok sehingga
pressure tidak stabil. Semakin besar tekanan semakin singkat waktu retensinya,
karena semakin kuat kemampuan fase gerak untuk mendorong analit (nikotin)
keluar dari kolom. Data yang diperoleh benar karena tR sampel lebih singkat
dibandingkan tR baku.
K. Penetapan Kadar Nikotin dalam Ekstrak Etanolik Daun Tembakau VBN dan NO
Penetapan kadar nikotin dalam ekstrak etanolik daun tembakau dihitung
berdasarkan persamaan kurva baku yang diperoleh dari validasi. Presisi yang
dinyatakan dengan nilai koefisien variasi (CV) merupakan parameter dalam
mengukur suatu metode untuk mendapatkan hasil yang reprodusibel. Perhitungan
kadar nikotin dari kedua sampel pada tabel berikut :
Tabel IV. Perhitungan kadar nikotin dalam ekstrak etanolik daun tembakau kedua sampel
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
Jenis ekstrak Replikasi Kadar %b/b
Keterangan
Na Oogst
1 0,001316 Rata-rata =1,316 x 10-3
SD = ± 2,775 x 10-6
CV = 0,2109%
2 0,001318 3 0,001311 4 0,001317 5 0,001317
Vorstenlanden
Bawah Naungan
1 0,002838 Rata-rata = 2,790 x 10-3
SD = ± 2,744 x 10-5
CV = 0,9835%
2 0,002776 3 0,002773 4 0,002790 5 0,002775
Data penetapan kadar diperoleh rata-rata kadar nikotin dalam ekstrak
etanolik daun tembakau Vorstenlenden Bawah Naungan 2,790 x 10-3 ± 2,744 x 10-
5 % b/b dengan nilai CV = 0,9835% dan Na Oogst adalah 1,316 x 10-3 ± 2,775x10-
6 % b/b dengan nilai CV = 0,2109 %. Kadar nikotin yang didapatkan dalam
penelitian ini merupakan kadar nikotin dalam 1 gram ekstrak yang digunakan,
dengan demikian kelemahan dalam penelitian ini adalah tidak dilakukan
penimbangan terhadap jumlah total ekstrak kental tembakau yang dihasilkan
dalam sekali ekstraksi sebelum dilakukan preparasi sampel sebanyak 1 gram.
Setelah diperoleh nilai CV dari kedua sampel, maka dilanjutkan uji
statistik yang bertujuan untuk mengetahui data yang diperoleh berbeda bermakna
atau tidak. Syarat dilakukan uji t tidak berpasangan adalah data yang didapatkan
merupakan data yang terdistribusi normal, oleh karena itu dilakukan uji
normalitas terlebih dahulu. Uji normalitas data yang digunakan adalah Shapiro-
Wilk dengan nilai kemaknaan (p) > 0,05. Shapiro-Wilk digunakan karena jumlah
sampel pada penelitian ini � 50 (Dahlan, 2009).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
Pada tabel V dapat disimpulkan data kadar kedua ekstrak tembakau
terdistribusi normal karena pada tabel Sig. VBN memiliki nilai p = 0,454 dan NO
nilai p = 0,126.
Tabel V. Uji Normalitas Tests of Normality
jenis
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
Kadar VBN .310 5 .130 .908 5 .454
NO .319 5 .106 .824 5 .126
a. Lilliefors Significance Correction
Tahap selanjutnya untuk mengetahui rata-rata kadar nikotin dalam
ekstrak etanolik daun tembakau jenis VBN dan NO berbeda bermakna atau tidak,
maka dilakukan uji uji t tidak berpasangan dengan taraf kepercayaan 95%.
Dari tabel VI diperoleh hasil bahwa varians data kedua jenis ekstrak
sama karena memiliki nilai p >0,05 yang ditunjukkan dengan Sig. 0,059. Untuk
mengetahui data kedua kelompok berbeda bermakna atau tidak, ditunjukkan
dengan kolom sig.(2-tailed) baris kedua (equal variences not assummed) jika p
<0,05 terdapat perbedaan bermakna.
Tabel VI. Uji t tidak berpasangan
������������������ ����
� ����������
��������
�����������
�������� ����������������������� ����
� �
� �
��� � ������������������
����!��"����������
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
� �
#� ��$%� �� ���
��$%�
&'�
����
�(�
� ���
"����������
���%�������
"���������� ��) ��� * �����
+��� �����
��������
������
,%-..� %/��� 00�%�'1� -� %///� %//0,1,2//� %////0'..1� %//0,,20�0� %//0�/./,��
�����
��������
����
������
� �
00�%�'1� ,%/-'� %///� %//0,1,2//� %////0'..1� %//0,,/202� %//0�/-�-,�
Kadar nikotin yang terdapat dalam ekstrak etanolik daun tembakau
Vorstenlanden Bawah Naungan lebih besar daripada daun tembakau Na Oogst
hal ini disebabkan besarnya pengaruh cahaya.
Tanaman tembakau merupakan kelompok tanaman C3. Tanaman C3
adalah tanaman yang kebutuhan terhadap intensitas cahaya rendah. Proses
fotosintesis menghasilkan karbohidrat (CH2O)n sebagai produk fotosintesis yang
bertindak sebagai substrat respirasi. Jalur biosintesis nikotin diawali tahap
glikolisis D-glukosa selanjutnya siklus krebs. D-glukosa dan D-fruktosa adalah
hasil hidrolisis sukrosa dengan bentuan enzim invertase. Glikolisis adalah
perombakan glukosa menjadi asam piruvat, selanjutnya asam piruvat menjadi
asetil CoA sebagai substrat untuk daur Krebs. Salah satu hasil asetil CoA yang
berikatan dengan oksaloasetat adalah asam �-ketoglutarat, menghasilkan salah
satu senyawa pemula/prekusor asam amino yaitu L-arginin, menghantarkan ke
prekusor biosintesis pada nikotin yaitu L-ornithine.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
Dari penjelasan di atas, reaksi yang terjadi dipengaruhi oleh adanya kerja
enzim yang dapat meningkatkan kecepatan reaksi (katalis) dan lebih spesifik
sehingga reaksi yang terjadi dapat dikendalikan dengan terbentuknya senyawa
tertentu (Salisbury dan Ross, 1995). Salah satu faktor yang mempengaruhi
aktivitas enzim adalah cahaya yang berpengaruh terhadap suhu. Pada suhu yang
melebihi atau dibawah suhu normal enzim, kerja enzim tidak efektif sehingga
tidak tersedia cukup substrat yang memiliki energi untuk bereaksi.
Dapat disimpulkan bahwa fungsi naungan pada tanaman VBN adalah
mengurangi intensitas cahaya yang berpengaruh terhadap efektifitas kerja enzim
sehingga menghasilkan substrat yang lebih banyak sehingga nikotin yang
terbentuk lebih besar. Sehingga kadar nikotin dalam ekstrak etanolik daun
tembakau VBN lebih besar daripada daun tembakau NO.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
��
�
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
1. Dari hasil penelitian yang diperoleh, dapat disimpulkan bahwa rata-rata kadar
nikotin dalam ekstrak etanolik daun tembakau VBN = 2,790x10-3± 2,744x10-5
% b/b dan Na Oogst = 1,316x10-3± 2,775x10-6 % b/b.
2. Hasil analisis statistik kadar nikotin dalam ekstrak etanolik kedua daun
tembakau berbeda bermakna yaitu daun tembakau VBN lebih besar
dibandingkan daun tembakau NO.
B. Saran
1. Ditambahkan Standar Internal dalam preparasi sampel untuk penetapan kadar
nikotin sebagai faktor koreksi .
2. Perlu dilakukan penimbangan terhadap berat total jumlah ekstrak kental yang
dihasilkan dalam sekali ekstraksi sehingga kadar yang didapat setara berat
serbuk daun tembakau yang diekstraksi.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
DAFTAR PUSTAKA
Anonim, 2010, Biosynthesis of Alkaloid Derived From Ornithine, Lysine and Nicotine,http://www.genome.jp/kegg/pathway/map/map01064.html, diakses tanggal 27 Oktober 2011.
Anonim (a), 2011, Tanaman C3, www.litbang.deptan.go.id/unker/one/462, diakses
tanggal 23 Desember 2011. Anonim (b), 2011, Nicotine for Alzheimer’s, http://www.wchstv.com/newsroom/
healthy forlife/2450.shtml, diakses tanggal 7 September 2011. Anonim (c), 2011, Soxletat extractor, http://www.sst.ums.edu.mydatafileiw7zkh8 wepCp, diakses tanggal 7 Maret 2011. Cahyono, B., Drs., 1998, Tembakau Budidaya dan Analisis Usaha Tani, Kanisius,
Yogyakarta, pp. 9-10. Center for Drug Evaluation and Research, 1994, Reviewer Guidance Validation of
Chromatographic Methods, Food and Drug Admisnistration, Rockville, pp. 12.
Cordell, Geoffrey,A., 1981, Introduction to Alkaloids, John Willey&Sons., Inc.,
Canada, pp.85. Dahlan, M.S., 2009, Statistik untuk Kedokteran dan Kesehatan, Salemba Medika,
Jakarta, pp.45-57, 53, 60-65. Direktorat Jenderal Pengawasan Obatdan Makanan, 1979, Farmakope Indonesia,
jilid III, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, pp.XXX, 9, 777.
Direktorat Jenderal Pengawasan Obatdan Makanan, 1985, Cara Pembuatan
Simplisia, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, pp.1-22. Direktorat Jenderal Pengawasan Obatdan Makanan, 1986, Sediaan Galenik,
Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, pp. 3-7, 26. Direktorat Jenderal Pengawasan Obatdan Makanan, 1995, Farmakope Indonesia
jilid IV, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, pp. 7, 1134. Direktorat Jenderal Pengawasan Obatdan Makanan, 2000, Parameter Stander
Umum Ekstrak Tumbuhan Obat cetakan I, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, pp. 1, 10-11.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
�
�
Domino, E.F., 1999, Pharmacological Significance of Nicotine, in Gorrod, J.W.,
and Jacob, P., Analytical Determination of Nicotine and Their Compounds and Their Metabolites, Chapter 1, Elsevier, Italy, pp. 5, 14.
Ernesta, A., 2011, Optimasi Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Fase T
Terbalik Pada Penetapan Kadar Nikotin Dalam Ekstrak Etanolik Daun Tembakau, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
Gandjar, I. G. Dan Rohman, A., 2007, Kimia FarmasiAnalisis, PustakaPelajar,
Yogyakarta, pp. 230-234, 344-345, 381. Hanum, C., 2008, Teknik Budidaya Tanaman jilid 3, Teknik Budidaya Tembakau
bab X, Direktorat Jenderal Manajemen Pendidikan Dasar dan Menegah Departemen Pendidikan Nasional, Jakarta, pp.425, 431-435.
Harborne, J.B., 1987, Phitochemical methods, diterjemahkan oleh Padmawinata,
Kosasih dan Soediro, Iwang, hal. 19-21, Penerbit ITB, Bandung. Whagner, H.L., 2003, The Health Effects of Nicotine and Smoking, in Triggle,
D.J., Nicotine-Drugs the Straight Facts, Chapter 3, University Pofessor School of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences State University of New York, Buffalo, pp. 45-48.
Kar, A., 2005, Pharmaceutical Drug Analysis, New Age Publications, India, pp.
454, 462. Kazakevich, Y., dan LoBrutto R., 2007, HPLC for Pharmaceutical Scientists,
John Wiley & Sons, Inc., New Jersey, pp. 15, 192. . Landoni, J.H., 1991, Nicotine, http://www.inchem.org/documents/pims/chemical/ nicotine.htm#SectionTitle:32%20Chemical%20structure, diakses tanggal 18
Februari 2011. Mulja, M. danSuharman, 1995, Analisis Instrumental, UniversitasAirlangga,
Surabaya, pp. 26, 31, 259. PT. Perkebunan Nusantara XIX (Persero), 1998, Tembakau Vorstenlanden, PT.
Pekebunan Nusantara XIX (Persero) Bidang Penelitian, Klaten. Raymond, W.R., Hale, R.W., 1991, United States Patents Process For Isolating
Plant Extract Fractions, Philip Morris Incorporated, New York, pp. 11-12.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
Skoog, D.A., West, D.M., Holler, F.J., 1994, Analytical Chemistry, Sixth edition,
Saunders College Publishing, USA, pp. 386. Snyder, L.R., Kirkland, J.J., and Glajch, J.L., 1997, Practical HPLC
MethodDevelopment, Second edition., Wiley & Sons, Inc., New York, pp. 313, 507.
Syenina, A., 2011, Validasi Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Fase
Terbalik pada Penetapan Kadar Nikotin Dalam Ekstrak Etanolik Daun Tembakau, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
The Merck Index, 1989, The Merk Index An Encyclopedia OF Chemicals, Drugs
and Biological, Eleventh edition, Merck & Co., Inc., USA, pp.6434. Tjitrosoepomo, Gembong, 1994, Taksonomi Tanaman Obat-Obatan, Universtitas
Gadjah Mada Press, Yogyakarta, pp. 341-342. Voight, 1994, Lehrbuch Der Pharmazeutischen Technologie, diterjemahkan oleh
Soewandhi, S.N., hal. 579-580, Universitas Gajah Mada Press.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
LAMPIRAN
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
�
�
������0%� �������������3�������& 4 3(�5+����+�����
�
�
�
�
�
�
�
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
������'%������+�����$���������������5+��6�������������� �
�
7 %7�89�:*; 3; �; * �3; 383�<�&7�8��84 (�
:�"3; = �7�; ��� �3; �
7�; ��� �3; �9�3 �; �
>�%�7��+�; �%0� ���%?#@&/'1'(�.'''.2�9������1,00�����A����5�$B+�����C ����+�%����
Klaten, 29 Agustus 2011
No : KC – INSIP/11.262 Lampiran : -,-. Hal : Bahan Penelitian (Tembakau Jenis VBN dan NO) Kepada : Yth. Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Di Yogyakarta
Menindaklanjuti hasil konsultasi Mahasiswa Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma yang melalukan penelitian, dengan ini kami berikan bahan penelitian berupa krosok daun tembakau jenis VBN dan NO serta data pendukung lainnya. Demikian untuk dipergunakan sebagai bahan penelitian.
Penelitian Klaten,
( Erna Anastasia D.E.,SP )
Nopeg.00101480 Tindasan :
1. Sdr. Dina Christiana Dewi 2. Sdr. Amelia Ernesta 3. Sdr. Ayesa Syenina 4. Sdr. Helena Angelina 5. Sdr. Novi Chairio 6. Sdr. Citra Dewi Ariani
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
TEMBAKAU Vorstenlanden Bawah Naungan (VBN)
Tembakau VBN mulai penanaman Juni dan mulai panen Juli. Pemanenan
dilakukan 3 hari sekali 2 lembar daun, jumlah daun per pohon 22 lembar daun.
Panen dilakukan kira-kira 40 hari sampai daun tembakau habis.
Data Pengamatan Pertumbuhan Tanaman Tembakau VBN MT.TAHUN : 2010/2011
Nomor Pengamatan Contoh daun 1 1 Tinggi tanaman (cm) 170 2 Jumlah daun (lembar) 22 3 Besar batang (cm) 1,7 4 Panjang daun (cm) 60 5 Lebar daun (cm) 37 6 Indek daun (cm) 0,62 7 Luas daun (g/cm) 1,494,35 8 Panjang ruas (cm) 10 9 Tebal daun (cm) 0,2
Foto Daun Tembakau VBN
�
�
�
�
�
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
Tembakau Na Oogst (NO)
Tembakau NO mulai penanaman pertengahan September dan mulai panen akhir
Oktober. Pemanenan dilakukan 3 hari sekali 2 lembar daun, jumlah daun per
pohon 22 lembar daun. Panen dilakukan kira-kira 40 hari sampai daun tembakau
habis.
Data Pengamatan Pertumbuhan Tanaman Tembakau NO MT.TAHUN : 2010/2011
Nomor Pengamatan Contoh daun B 1 Tinggi tanaman (cm) 100 2 Jumlah daun (lembar) 22 3 Besar batang (cm) 1,8 4 Panjang daun (cm) 44 5 Lebar daun (cm) 28 6 Indek daun (cm) 0,64 8 Panjang ruas (cm) 6 9 Tebal daun (cm) 0,28
Foto daun Na Oogst
���������� �
�
�
�
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
Lampiran 3. Perhitungan pergeseran pKa nikotin dan pH buffer
berdasarkan Kazakevich dan LoBrutto (2007)
Untuk senyawa basa dengan setiap penambahan pelarut senyawa organik
sebanyak 10% terjadi pergeseran Ph 0,2 unit ke bawah.
Cara-cara menghitung :
1. Menghitung ke bawah pergeseran pKa nikotin :
pKa nikotin = 8,5
pelarut organik dalam sistem 60% (metanol:asetonitril = 54:6), sehingga
0,2 x 6 = 1,2
8,5 – 1,2 = 7,3
2. Menghitung pH agar nikotin dalam bentuk ionik :
pH = -2 unit pKa nikotin
7,3 – 2 = 5,3
3. Pergeseran ke atas pH dari buffer dengan penambahan pelarut organik :
0,2 x 6 = 1,2
4. Menghitung pH maksimum buffer yang dibuat agar nikotin dalam bentuk
terion :
5,3 – 1,2 = 4,1. Sehingga pH buffer yang dibuat � 4,1
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
Lampiran 4. Perhitungan Kepolaran Fase Gerak
Diketahui:
Asetonitril dengan log P = 0,17 ; indeks polaritas = 5,8
Metanol dengan log P = -0,027 ; indeks polaritas = 5,1
Aquabidest dengan indeks polaritas = 10,2
Fase gerak : Buffer asetat : metanol : asetonitril (40 : 54 : 6)
Indeks polaritas =
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
�
�
Lampiran 5. Spektrum Nikotin
�
�
�
A = konsentrasi 0,005 ppm absorbansi 0,205, � maksimum 260 nm;
B = konsentrasi 0,007 ppm, absorbansi 0,333, , � maksimum 260 nm;
C = konsentrasi 0,009 ppm, absorbansi 0,374, � maksimum 260 nm
�
�
�
�
�
�
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
�
�
Lampiran 6. Hasil Perolehan AUC seri baku nikotin
Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Konsentrasi (ppm)
AUC Konsentrasi (ppm)
AUC Konsentrasi (ppm)
AUC
0,01 312810 0,01 385360 0,01 293732 0,03 599259 0,03 753585 0,03 719507 0,05 1042346 0,05 1205207 0,05 1092432 0,07 1395814 0,07 1646918 0,07 1522805 0,09 1780515 0,09 2098121 0,09 1962964 A = 93157,55 B = 18659825 r = 0,9985 y = 18659825x + 93157,55
A = 138124,45 B = 21594275 r = 0,9993 y = 21594275x + 138124,45
A = 82847,5 B = 20708810 r = 0,9996 y = 20708810x + 82847,5
��
�
Grafik hubungan antara konsentrasi nikotin dengan AUC
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
Lampiran 7. Penimbangan Serbuk Kering dan Ekstrak Kental Daun
Tembakau Untuk Optimasi Lama Waktu Ekstraksi
Penimbangan serbuk kering tembakau Vorstenlanden Bawah Naungan
(Jam) 7 -A 7-B 8-A 8-B 9-A 9-B 10-A 10-B
Timbangan kasar
Beker kosong (g) 62,53 44,89 58,23 45,09 58,24 58,23 61,19 45,09
Beker + serbuk (g) 82,54 64,90 78,24 65,10 78,24 78,24 81,20 65,10
Timbangan analitik
Beker + serbuk (g) 82,5492 64,9028 78,2490 65,1108 78,2435 78,2437 81,2062 65,1025
Beker + sisa (g) 62,5488 44,9024 58,2488 45,1103 58,2439 58,2435 61,2059 45,1022
Berat serbuk (g) 20,0004 20,0004 20,0002 20,0005 19,9996 20,0002 20,0003 20,0003
Penimbangan ekstrak kental tembakau Vorstenlanden Bawah Naungan
(Jam) 7 -A 7-B 8-A 8-B 9-A 9-B 10-A 10-B
Timbangan kasar
Beker kosong (g) 62,53 61,23 63,68 54,66 33,42 63,15 63,37 62,53
Beker + serbuk (g) 63,64 62,34 64,79 55,77 34,42 64,31 64,79 63,65
Timbangan analitik
Beker + serbuk (g) 63,6467 62,2326 64,7937 55,7743 33,4205 64,3116 64,7943 63,6555
Beker + sisa (g) 62,6466 62,2324 63,7933 54,7741 32,4203 63,3115 63,7942 62,6552
Berat serbuk (g) 1,0001 1,0002 1,0004 1,0002 1,0002 1,0001 1,0001 1,0003
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
Lampiran 8. Kromatogram hasil optimasi ekstraksi dengan soxhletasi selama
7,8,9 dan 10 jam (replikasi 2x)
a. Kromatogram waktu ekstraksi 7 jam A
b. Kromatogram waktu ekstraksi 7 jam B
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
�
�
�
�
c. Kromatogram waktu ekstraksi 8 jam A
d. Kromatogram waktu ekstraksi 8 jam B
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
e. Kromatogram ekstraksi 9 jam A
f. Kromatogram ekstraksi 9 jam B
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
g. Kromatogram waktu ekstraksi 10 jam A
h. Kromatogram waktu ekstraksi 10 jam B
Hasil pengukuran AUC sampel dengan variasi waktu ekstraksi sampel dengan soxhlet
Waktu (jam)
7 A 7 B 8 A 8 B 9 A 9 B 10 A 10 B
AUC 1072305 1135700 1228904 123771 916992 942139 659037 644588
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
Lampiran 9. Penimbangan Serbuk Kering dan Ekstrak Kental Daun
Tembakau VBN dan NO untuk Penetapan Kadar Jenis tembakau Berat awal Berat serbuk Diameter saringan
VBN 961 gram 871,79 gram 1 mm
NO 1817 gram 1686,84 gram 1 mm
1. Penimbangan serbuk kering tembakau VBN
Replikasi I II III IV V
Timbangan kasar
Beker kosong 58,23 g 45,09 g 44,89 g 49,12 g 44,89 g
Beker + serbuk 78,24 g 65,10 g 64,90 g 69,22 g 64,90 g
Timbangan analitik
Beker + serbuk 78,2490 g 65,1108 g 64,9047 g 69,2256 g 64,9027 g
Beker + sisa 58,2488 g 45,1103 g 44,9043 g 49,2255 g 44,9020 g
Berat serbuk 20,0002 g 20,0005 g 20,0004 g 20,0001 g 20,0007 g
Penimbangan ekstrak kental tembakau VBN
Replikasi I II III IV V
Timbangan kasar
Beker kosong 63,68 g 54,66 g 44,88 g 62,39 g 49,10 g
Beker + serbuk 64,79 g 55,77 g 45,90 g 63,41 g 50,19 g
Timbangan analitik
Beker + serbuk 64,7937 g 55,7753 g 45,8952 g 63,4113 g 50,1945 g
Beker + sisa 63,7933 g 54,7751 g 44,8949 g 62,4110 g 49,1940 g
Berat serbuk 1,0004 g 1,0002 g 1,0003 g 1,0003 g 1,0005 g
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
2. Penimbangan serbuk kering daun tembakau Na Oogst
Replikasi I II III IV V
Timbangan kasar
Beker kosong 49,19 g 54,65 g 49,18 g 49,18 g 49,18 g
Beker + serbuk 69,20 g 74,66 g 69,19 g 69,19 g 69,19 g
Timbangan analitik
Beker + serbuk 69,2055 g 74,6620 g 69,1984 g 69,1926 g 69,1967 g
Beker + sisa 49,2052 g 54,6616 g 49,1982 g 49,1925 g 49,1962 g
Berat serbuk 20,0003 g 20,0002 g 20,0002 g 20,0001 g 20,0005 g
Penimbangan ekstrak kental tembakau Na Oogst
Replikasi I II III IV V
Timbangan kasar
Beker kosong 61,15 g 62,28 g 44,86 g 54,35 g 45,20 g
Beker + serbuk 62,17 g 63,29 g 44,88 g 55,65 g 46,11 g
Timbangan analitik
Beker + serbuk 62,1656 g 63,2904 g 45,8810 g 55,6458 g 46,1176 g
Beker + sisa 61,1554 g 62,2900 g 44,8807 g 54,6455 g 45,1174 g
Berat serbuk 1,0002 g 1,0004 g 1,0003 g 1,0003 g 1,0002 g
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
Lampiran 10. Kromatogram Penetapan Kadar Nikotin dalam Ekstrak
Etanolik Daun Tembakau VBN dan Na Oogst
a) Na Oogst Replikasi 1
b) Na Oogst Replikasi 2
c) Na Oogst Replikasi 3
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
d) Na Oogst Replikasi
e) Na Oogst Replikasi 5
f) VBN Replikasi 1
g) VBN Replikasi 2
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
��
�
h) VBN Replikasi 3
i) VBN Replikasi 4
j) VBN Replikasi 5
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
Lampiran 11. Perhitungan kadar nikotin
1. Contoh Perhitungan Kadar Nikotin dalam Ekstrak Etanolik Daun Tembakau
Seluruh fase kloroform diuapkan dalam almari asam, kemudian dilarutkan dalam
5 mL pelarut. Diambil 100 µL dan diencerkan dalam labu ukur 10,0 mL dengan
pelarut hingga tanda.
A. Diperoleh AUC VBN 1 = 1258549, kemudian dimasukkan dalam persamaaan
kurva baku Y = 20708810x + 82847,5.
Y = 20708810x + 82847,5
1258549 = 20708810x + 82847,5
B. Untuk mengetahui nikotin dalam 5 mL, maka
Kadar dinyatakan dalam % b/b
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
2. Data Perhitungan Kadar
3. Tabel Kadar Nikotin
Jenis ekstrak Replikasi Kadar %b/b Keterangan
Na Oogst
1 0,001316 Rata-rata = 1,316 x 10-3
SD = ± 2,775 x 10-6
CV = 0,2109%
2 0,001318 3 0,001311 4 0,001317 5 0,001317
Vorstenlanden Bawah Naungan
1 0,002838 Rata-rata = 2,790 x 10-3
SD = ± 2,744 x 10-5
CV = 0,9835%
2 0,002776 3 0,002773 4 0,002790 5 0,002775
AUC kadar (ppm) (µg/ml) µg/g
(dalam5ml)
%b/b
(g/100 g)
VBN 1 1258549 0,056773 5,677301 5,677301 28,37516 0,002838
VBN 2 1232800 0,05553 5,552963 5,552963 27,75926 0,002776
VBN 3 1231498 0,055467 5,546676 5,546676 27,72506 0,002773
VBN 4 1238593 0,055809 5,580936 5,580936 27,89631 0,002790
VBN 5 1232771 0,055528 5,552823 5,552823 27,75024 0,002775
NO 1
627977
0,026324
2,632356
2,632356
13,15915
0,001316
NO 2 628873 0,026367 2,636682 2,636682 13,18077 0,001318
NO 3 626067 0,026231 2,623132 2,623132 13,11304 0,001311
NO 4 628265 0,026337 2,633746 2,633746 13,1661 0,001317
NO 5 628560 0,026352 2,635171 2,635171 13,17322 0,001317
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
� �
�
� �
�
Lampiran 12. Data Uji Statistik
1. Uji Normalitas
Tests of Normality
jenis
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
kadar VBN .310 5 .130 .908 5 .454
NO .319 5 .106 .824 5 .126
a. Lilliefors Significance Correction
Uji normalitas data yang digunakan adalah Shapiro-Wilk dengan nilai
kemaknaan (p) > 0,05, kadar kedua ekstrak tembakau terdistribusi normal karena
pada tabel Sig. VBN memiliki nilai p = 0,454 dan NO nilai p = 0,126.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
2. Uji t tidak berpasangan
Independent Samples Test
Levene's
Test for
Equality of
Variances t-test for Equality of Means
95% Confidence Interval of
the Difference
F Sig. t df
Sig. (2-
tailed)
Mean
Difference
Std. Error
Difference Lower Upper
kadar Equal variances
assumed
4.833 .059 119.527 8 .000 .001474600 .000012337 .001446151 .001503049
Equal variances
not assumed
119.527 4.082 .000 .001474600 .000012337 .001440616 .001508584
Varians data kedua jenis ekstrak sama karena memiliki nilai p >0,05
yang ditunjukkan dengan Sig. 0,059. Data kedua kelompok berbeda bermakna
ditunjukkan dengan kolom sig.(2-tailed) baris kedua (equal variences not
assummed) jika p <0,05 terdapat perbedaan bermakna.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
Lampiran 13. Kromatogram Blanko Pelarut
Buffer Asetat:aMetanol:Asetonitril (40:54:6)
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
���
�
�
�
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
��
�
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
���
�
�
BIOGRAFI PENULIS
SD Maria Asumpta Klaten (1996-2002), SLTP Pangudi Luhur 1 Klaten (2002-2005), SMA Negeri 1 Klaten (2005-2008) dan pada tahun 2008 melanjutkan pendidikan di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dhrma Yogyakarta. Selama kuliah penulis mengikuti kegiatan dan organisasi antara lain : panitia pelantikan apoteker angkatan XIX dan XX, pengabdian masyarakat bersama dosen tentang Hipertensi dan Diabetes Melitus, sebagai committe dalam program pertukaran pelajar 2010 dan asisten dosen mata kuliah praktikum Kromatografi (2011).
Penulis skripsi yang berjudul “Penetapan Kadar Nikotin Dalam Ekstrak Etanolik Daun Tembakau Jenis VBN dan NO Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Fase Terbalik” memiliki nama lengkap Dina Christiana Dewi. Penulis lahir di Klaten pada tanggal 29 Desember 1989 sebagai putri kedua pasangan Agus Yunanto dan Sri Mulyani. Pendidikan formal yang pernah ditempuh penulis adalah TK Indriayasana, TK Maria Asumpta Klaten (1995-1996), SD Maria Asumpta Klaten (1996-2002),
�
�
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
Top Related