8/3/2019 Arti Metabolisme Protein
1/23
Eur. J. Biochem. 97, 251 -256 (1979)
Kontrol hormonal Metabolisme Glikogen
Protein fosforilasi Fosfatase Inhibitor-1 in vivo di Respon untuk Adrenalin
J. Gordon Foulkes dan COHEN Philip
Departemen Biokimia, University of Dundee
(Diterima 9 Januari 1979)
Inhibitor-1 telah terbukti terfosforilasi di otot rangka in vivo. Pada hewan yang diberi normal
tingkat fosforilasi adalah 31 i 7% dan nilai ini meningkat 70% f 12 menyusul
intravena suntikan adrenalin.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa fosforilasi inhibitor-1 mungkin sama sama pentingnya dengan
fosforilasi kinase fosforilasa dalam mengangkat tingkat fosforilasa a. Peran
inhibitor-I dalam metabolisme dibahas
Siklik AMP awalnya diidentifikasi sebagai heatstable
senyawa yang terbentuk dalam hati dalam menanggapi
adrenalin, yang dapat menggantikan hormon dalam meningkatkan
proporsi hati fosforilasa di
homogenat [l]. Penemuan ini berarti bahwa siklus
AMP baik harus mengaktifkan fosforilasa kinase yang
dikonversi b fosforilasa ke, atau menghambat fosforilasa
fosfatase yang dikonversi fosforilasa sebuah
untuk h. Selanjutnya, ditemukan bahwa jika fosforilasa
kinase diinkubasi dengan Mg-ATP kegiatan itu
meningkat dan bahwa reaksi ini dirangsang oleh
siklik AMP [2]. Pada akhirnya, hal ini menyebabkan penemuan
protein siklik-AMP-tergantung enzim kinase,
8/3/2019 Arti Metabolisme Protein
2/23
yang merupakan jejak kontaminan endogen di suci
persiapan kinase fosforilasa, bertanggung jawab
untuk fosforilasi dan aktivasi enzim
131. Temuan ini menyarankan bahwa adrenalin merangsang
glikogenolisis melalui urutan reaksi
ditunjukkan di bawah ini, dan sekarang ada bukti-bukti
bahwa masing-masing peristiwa berlangsung di otot rangka
di vivh (ditinjau dalam [4,5]).
Dibesarkan Caz terfosforilasi Diaktifkan Ditinggikan
Adrenalin fosforilasa protein siklik --- phospho-
AMP kinase kinase sebuah rylase
Temuan ini tidak mengecualikan Namun kemungkinan
AMP siklik yang mungkin juga meningkatkan tingkat
fosforilasa melalui penghambatan fosforilasa
fosfatase, dan kepentingan dalam regulasi
~ ~ ~
EnzymPs. Fosforilasa (EC 2.4.1.1); kinase fosforilasa
(EC 2.7.1.38); protein kinase (EC 2.7.1.37); phosphatase protein
(EC 3.1.3.-); glikogen sintase (EC 2.4.1.11).
Singkatan. Siklik AMP, adenosin 3 ': 5'-monophosphate.
fosfatase fosforilasa diintensifkan berikut
kesadaran bahwa ini hanyalah salah satu kegiatan dari
enzim multifungsi disebut protein phosphatase 1
[S]. Enzim ini juga yang mengkatalisis dephosphorylation
dari fosforilasa kinase dan glikogen sintase [4-71,
8/3/2019 Arti Metabolisme Protein
3/23
dan oleh karena itu masing-masing melakukan dephosphorylation yang
reaksi yang menghambat glikogenolisis atau mengaktifkan
sintesis glikogen. Perubahan dalam kegiatan ini
enzim sehingga akan diharapkan untuk mempengaruhi
keadaan fosforilasi beberapa yg menukar satu sama lain
enzim.
Setelah laporan oleh Brandt et al. [8,9] bahwa hati
dan otot ekstrak mengandung trypsinlabile tahan panas
protein (s) yang menghambat fosfatase fosforilasa,
Huang dan Glinsmann menunjukkan
adanya dua inhibitor protein-stabil panas fosforilasa
fosfatase dalam otot rangka, yang mereka
disebut inhibitor-1 dan inhibitor-2. Mereka membuat kunci
pengamatan bahwa inhibitor-1 hanya menghambat fosforilasa
fosfatase ketika terfosforilasi oleh
siklik-AMP-dependent protein kinase [lo, 11 1.
Inhibitor-1 telah dimurnikan untuk homogenitas dalam
laboratorium dan struktur dan interaksi dengan
protein fosfatase-1 telah ditandai secara ekstensif
[12-161. Namun pertanyaan yang beredar utama
yang harus dijawab sebelum peran fisiologis
inhibitor-1 dapat dianggap sebagai keprihatinan didirikan,
fosforilasi protein ini in vivo. Dalam hal ini
kertas kami menunjukkan bahwa inhibitor-1 memang terfosforilasi
dalam otot rangka in vivo dan bahwa derajat
8/3/2019 Arti Metabolisme Protein
4/23
dari fosforilasi meningkat drastis oleh adrenalin.
Sebuah account awal bagian dari pekerjaan ini
disajikan [17].
252 Fosforilasi Inhibitor-1 di viw
PROSEDUR PERCOBAAN
E. \-l "Strategi rimental
Dalam rangka untuk memperkirakan tingkat fosforilasi
protein in vivo perlu untuk mengekstrak jaringan
bawah kondisi yang mencegah fosforilasi lebih lanjut
dan dephosphorylation dari mengambil tempat, tetapi
yang tidak merusak aktivitas biologis. Ini adalah
biasanya dicapai oleh homogenisation di hadapan
EDTA dan natrium fluoride. EDTA chelates
ion magnesium dan menghambat kinase protein, sedangkan
natrium fluorida merupakan inhibitor kuat protein
fosfatase. Pada penelitian ini, alternatif
prosedur untuk menghancurkan enzim interconverting
dapat digunakan, mengingat stabilitas ekstrim
inhibitor-1 menjadi asam. Inhibitor-1 tidak dipercepat atau
tidak aktif ketika jaringan otot yang diambil dalam
1,5 - 2'5 () asam triklorasetat. Selanjutnya, sejak
inhibitor-1 hanya protein phosphatase inhibitor dalam
nya terfosforilasi bentuk, tingkat fosforilasi
dapat diukur lebih sederhana, dengan melaksanakan
pengujian sebelum dan sesudah fosforilasi maksimal dengan
8/3/2019 Arti Metabolisme Protein
5/23
siklik-AMP-dependent protein kinase.
Muterials
L-Epinefrin (adrenalin) dan sapi pankreas
insulin diperoleh dari Sigma Chemical Co
(Poole, Dorset, Inggris), L-askorbat asam dari BDH
Chemicals Ltd (Poole, Dorset, Inggris) dan [Y-~ ~ PIATP
dari Pusat Radiokimia (Amersham, Bucks,
Inggris). Natrium pentobarbitone dibeli sebagai
20 ",, (w / v) larutan dari bulan Mei Sr Baker (Dagenham,
Essex, Inggris) dan Sephadex GlOO (kelas prima)
dari Pharmacia G.B. Ltd (London, Inggris).
Preparat setiap proteinnya ion Pro
Semua protein diisolasi dari kelinci kerangka
otot. Fosforilasa b [Aku 81, fosforilasa kinase
[I91 dan inhibitor-1 [I21 telah dimurnikan untuk homogenitas
dan fosforilasa 32P-label telah disiapkan dari
fosforilasa b fosforilasa menggunakan kinase dimurnikan
dan [)-. 32P] ATP [6]. Protein fosfatase-1 dimurnikan
300 - 400 kali lipat, dan disimpan pada - 20 "C, dalam 50 mM
Tris-HCl / l O mM. EDTA pH 7.0 (25 "C) (buffer A),
mengandung 50 mM mercaptoethanol, 6 mM MnC12
dan 50'x gliserol [20]. Subunit katalitik siklik-
AMP-protein kinase tergantung sangat dimurnikan
dengan kromatografi pada CM Sephadex [21]. Protein
ditentukan dengan metode Bradford [26].
8/3/2019 Arti Metabolisme Protein
6/23
Pengujian Protein-Fosfatase 1 dan Inhibitor-I
Pengukuran ini dilakukan seperti yang dijelaskan
sebelumnya [6,12]. Satu unit protein fosfatase-I
adalah jumlah yang melepaskan 1,0 nmol fosfat
per menit dari fosforilasa 32P-label yang, di bawah
kondisi standar. Satu unit inhibitor-1 adalah bahwa
jumlah yang menghambat 0,02 unit protein fosfatase
Saya sebesar 50% dalam uji standar.
Fosforilasi dan Aktivasi Inhibitor-I
Inhibitor-aku maksimal terfosforilasi dengan inkubasi
dengan subunit katalitik dari siklik-AMPdependent
protein kinase dan Mg-ATP. inkubasi ini
mengandung subunit katalitik cukup untuk mengatasi
kehadiran inhibitor protein spesifik siklik-
AMP-dependent protein kinase yang mencemari
inhibitor-1 pada tahap awal dalam pemurnian [12].
Dephosphorylation dari Inhibitor-I
Inhibitor-I dephosphorylated dan tidak aktif oleh
protein fosfatase-1 di hadapan mangan
ion [13]. Fraksi yang mengandung inhibitor-1 (0,05 ml)
karena itu diinkubasi dengan 0,15 unit protein
fosfatase-I (0,05 ml) dalam buffer A mengandung 6 mM
MnC12 dan 1,0 mg albumin bovine serum / ml. The
dephosphorylation inhibitor-1 telah selesai dalam
2 jam kondisi ini.
8/3/2019 Arti Metabolisme Protein
7/23
Injeksi 'Adrenalin
Adrenalin dilarutkan dalam 10 mM asam askorbat.
Sebuah alikuot 0,1-ml (250 pg) ditambahkan untuk 3,0 ml 10%
natrium pentobarbitone dan campuran itu disuntikkan
ke dalam vena telinga marjinal perempuan Selandia Baru
Kelinci putih (3 -4 kg bobot badan). Kontrol percobaan
dilakukan dengan cara yang sama kecuali
adrenalin yang dihilangkan.
Injeksi Insulin
Insulin dilarutkan dalam 3 mM HCI dan glukosa
dilarutkan sebagai solusi 20 (w / v) dalam 0,1 5 M NaC1.
Glukosa (2 g / kg berat badan) ini dikelola intraperitoneal
dan insulin (3 unit / kg berat badan)
disuntikkan ke dalam vena telinga marjinal 10 menit kemudian. Setelah
min 25 lebih lanjut, hewan-hewan diberi dosis yang mematikan
dari pentobarbitone natrium. Dalam percobaan kontrol
penyuntikan kedua glukosa dan insulin dihilangkan.
Isolasi Inhibitor-I setelah aktivasi dalam vivo
Pada 45 detik setelah suntikan, kelinci itu exsanguinated,
dikuliti, dan otot dari tungkai belakang
dan kembali dihapus, dan ditempatkan di es. Otot
(Sekitar 700g) adalah cincang dan homogen pada rendah
kecepatan dalam blender Waring dalam 4 jilid. dari% es dingin 1,5 ', atau
2 '%; trikloroasetat acid/4.0 mM EDTA, seluruh
J. G. Foulkes dan P. Cohen 253
8/3/2019 Arti Metabolisme Protein
8/23
operasi yang selesai dalam 8 menit yang asli
injeksi.
homogenat itu disentrifugasi pada 6000 g x untuk
45 menit dan supernatan (pH 2,5 f 0,1) tertuang
melalui wol kaca. Solusi 100% (b / v) triklorasetat
asam kemudian ditambahkan perlahan ke supernatan
untuk memberikan konsentrasi akhir 15% (b / v).
Setelah berdiri pada 4 C selama paling sedikit 3 jam, suspensi
itu disentrifugasi pada 20000 g x selama 10 menit. Supernatan
dibuang, endapan resuspended di
0,5 M Tris-HCl pH 8.0 (25 C) dan suspensi
disesuaikan dengan pH 7,4 dengan 10 hidroksida amonium M
untuk memberikan volume akhir 200 ml. Suspensi itu
didialisis di 4 '; C selama 20 jam, terhadap 5 mM Tris-HCI
pH 8.0 (25-C) dengan satu perubahan buffer dialisis. The
endapan berat dihapus oleh sentrifugasi pada
20000 x g selama 10 menit (langkah 1) dan supernatant
dipindahkan ke botol kaca 200 ml kerucut. labu The
direndam dalam bak air mendidih selama 15 rnin dan
didinginkan sampai 4 C di es. Ini diendapkan protein
dihilangkan dengan sentrifugasi pada 20000 xg selama 10 menit
dan supernatan lyophilised. The beku-kering
bahan dilarutkan dalam 20 ml air (langkah 2) dan
amonium sulfat padat ditambahkan untuk membawa solusi
untuk kejenuhan 60 2,. Setelah berdiri di 4 "C selama 4 jam,
8/3/2019 Arti Metabolisme Protein
9/23
suspensi disentrifugasi pada 20.000 xg selama 20 menit,
endapan dipekatkan dalam 200 mM Tris-HC1 pH 7,5 /
O 1 mM. EDTA (langkah 3), dan didialisis semalam terhadap
buffer ini mengandung 45 '%, etanol pada 4 C. The diendapkan
protein dihapus oleh sentrifugasi pada
20000 xg selama 10 menit dan supernatan didialisis
melawan buffer A untuk menghapus etanol, dan lyophilised.
Bahan beku-kering yang dipekatkan di
air (langkah 4) dan dikenakan gel filtrasi Sephadex
GlOO prima diequilibrasi dalam buffer A (langkah 5).
HASIL
Kegiatan 'Inhibitor-aku
di trikloroasetat-Asam E.utructs
dari 'Skeletal Muscle
1,5-15 Y4) asam trikloroasetat ekstrak otot
ditemukan mengandung 1,0 x lo6 unit inhibitor-1
per 1000 g jaringan berikut fosforilasi maksimal
protein dengan kinase siklik-AMP-dependent. Ini adalah
serupa dengan yang diperoleh oleh prosedur standar
yang melibatkan homogenisation dalam larutan encer
EDTA pada pH 7,0 dilanjutkan dengan perlakuan panas pada 90 "C
[12]. Aktivitas spesifik inhibitor-1 pada tahap ini
(Langkah 1) adalah 3-4 kali lipat lebih tinggi daripada yang diperoleh setelah
pemanasan ekstrak encer EDTA otot pada 90'C
(Tabel 1) [12]. Jika 1,5 - 15 (x triklorasetat ekstrak
8/3/2019 Arti Metabolisme Protein
10/23
dipanaskan dalam penangas air mendidih-selama 15 menit,
aktivitas spesifik meningkat menjadi 12.000-16.000 unit / mg
menunjukkan bahwa inhibitor-1 sudah terwakili 7 -% 9 ',
protein pada tahap ini (Tabel 1).
Tabel 1. Purificution Qf inhihitor-l ufier phosp IOR ~ ~ lutictiini vivo
750 g otot kelinci digunakan dalam persiapan masing-masing. Kegiatan Tertentu
diukur setelah fosforilasi maksimal dengan siklik-AMPdependent
protein kina:
Volume langkah khusus phos-Yield
Kegiatan phorylation
A. Kontrol Atiii? Iol.v
1. 2 - 15 'I),: trichloro-
2. Perlakuan panas
3. 60 '%, amonium
ekstraksi asam asetat
dan konsentrasi
sulfat
pengendapan
natant
eluat
4. Etanol 45 super-
5. Sephadex GI00
B. ADRC, iiaIinc,-trentrtl
1. 2-15 ', 7) trikloroasetat
ekstraksi asam
8/3/2019 Arti Metabolisme Protein
11/23
2. Perlakuan panas
dan konsentrasi
3. 60 ';:, amonium sulfat
pengendapan
4. 45 yd3 etanol supernatant
5. Sephadex GI00
eluat
I
196
20
2.0
2.5
180
20
2.0
2.7
3 200
12000
29 000
46000
145000, '
4 300
I6 000
52 000
83000
8/3/2019 Arti Metabolisme Protein
12/23
148 000 "
33
31
36
38
32
58
57
59
60
56
100
95
44
24
100
95
53
26
Aktivitas spesifik tabung puncak
Fosforilasi Qf Inhibitor-I in vivo
Fosforilasi Persentase inhibitor-1
diukur setelah langkah 1 dari pemurnian, dengan
membuat tiga pengukuran berikut. Pertama,
aktivitas inhibitor diukur tanpa pretreatment apapun;
8/3/2019 Arti Metabolisme Protein
13/23
kedua, aktivitas inhibitor total diukur
setelah fosforilasi maksimal oleh katalitik
subunit protein kinase siklik-AMP-dependent;
ketiga, aktivitas inhibitor diukur setelah
maksimal dephosphorylation oleh protein-fosfatase 1.
Percobaan khas diilustrasikan dalam Gambar 1 dan
Ringkasan hasil diberikan dalam Tabel 2. Ketika
bahan diperoleh pada langkah 1 diinkubasi dengan protein
fosfatase-I, aktivitas inhibitor benar-benar
hancur (Gambar l), menunjukkan bahwa inhibitor-2
absen. Sejak inhibitor-2 dapat diendapkan dengan 15?
8/3/2019 Arti Metabolisme Protein
14/23
protein fosfatase-1 solusi dipanaskan di 1OO'C selama 2 menit untuk menonaktifkan protein fosfatase
dan kemudian diinkubasi selama
lebih 90 menit dengan protein kinase dan Mg-ATP (0). t segitiga menunjukkan incubations kontrol di
mana protein kinase (v) atau protein fosfatase-
1 (V) dihilangkan
trikloroasetat asam, dan kemudian dipanaskan pada 90 C selama
15 menit, serupa tingkat fosforilasi diamati
dengan hasil yang ditunjukkan pada Tabel 2.
Konfirmasi bahwa Fosfatase Protein Inhibitor
Terdeteksi pada Langkah 1 Apakah Identik dengan Inhibitor-1
Inhibitor protein fosfatase terdeteksi pada
langkah 1 benar-benar dihancurkan oleh inkubasi dengan
protein fosfatase-1, dan inhibitor tidak aktif
sepenuhnya bisa diaktifkan kembali oleh inkubasi dengan
katalitik subunit protein siklik-AMP-dependent
kinase dan Mg-ATP (Gbr. 1).
Untuk membuktikan bahwa bahan penghambatan di
langkah 1 itu identik dengan inhibitor-1, sebuah prosedur baru
dikembangkan untuk memperoleh sangat murni inhibitor
1, yang tidak seperti prosedur standar [12] copurified
baik terfosforilasi dan dephosphorylated
bentuk protein. Hasil dari penelitian ini adalah
diringkas dalam Tabel 1. Hal ini dapat dilihat bahwa persentase
fosforilasi tetap konstan di seluruh
prosedur di kedua kontrol dan adrenalinetreated
persiapan. Pada langkah terakhir filtrasi, gel
8/3/2019 Arti Metabolisme Protein
15/23
Sephadex G100, yang hambat co materi-dielusi
dengan inhibitor-1 dengan nilai / V Vo dari 1,45 (Gbr.2). The
alasan untuk kegiatan total yang lebih rendah dari inhibitor-1 di
Gambar. 2 B adalah karena berukuran lebih kecil alikuot dimuat.
Aktivitas spesifik pada tahap ini (145000-150000
unit / mg) hanya sedikit lebih rendah dari inhibitor murni-1
terisolasi oleh prosedur standar (1 80.000 unit / mg
[12]), dan elektroforesis di 10 gel polyacrylamide
di hadapan natrium sulfat dodesil menunjukkan
utama protein-pewarnaan band dengan mobilitas dibedakan
dari inhibitor-1 (tidak digambarkan). Ketika
Tabel 2. Phosphorylution # / inhibitor-1 in vivo
Persentase inhibitor-aku dalam bentuk terfosforilasi aktif
diukur setelah langkah 1 dari pemurnian seperti yang dijelaskan dalam teks.
Percobaan biasanya dilakukan menggunakan dua atau tiga
hewan, huruf a percobaan untuk f menunjukkan dilakukan dalam
jangka waktu 60 menit pada hari yang sama
Percobaan Inhibitor dalam bentuk diaktifkan dari
Normal insulin-adrenalinefed
diperlakukan diperlakukan
kontrol hewan hewan
..
o / / 0
32 "58
33 23 68
8/3/2019 Arti Metabolisme Protein
16/23
34 23 76
42 24 90
24 32 '69
23 '25 59'
Standar deviasi 31 f 7 25 f 4 70 f 12
gel diiris dan diuji tanpa inkubasi sebelumnya
dengan protein kinase siklik-AMP-dependent dan Mg-
ATP, aktivitas inhibitor ditemukan mengelusi di
posisi pita protein-pewarnaan utama (tidak
ilustrasi).
DISKUSI
Hasil yang dijelaskan dalam makalah ini menunjukkan
bahwa-1 adalah inhibitor fosforilasi pada kelinci rangka
J. G. Foulkes dan P. Cohen 255
otot in vivo dan bahwa tingkat fosforilasi
meningkat drastis oleh adrenalin. Tingkat fosforilasi
rata-rata 31 k 7 "/; pada hewan makan normal,
dan nilai ini meningkat menjadi 70 12 pada hewan yang
telah disuntik dengan adrenalin. Toth et al. [22]> nd
Tao et al. [23] juga melaporkan bahwa adrenalin
meningkatkan konsentrasi inhibitor tahan panas
dari fosfatase fosforilasa dalam otot rangka tikus
in vivo tetapi mereka tidak menetapkan bahwa protein ini
8t A
Aku
8/3/2019 Arti Metabolisme Protein
17/23
L
0 x) 40 60 80 00 120
Elusi volume (RNL)
Gambar. 2. Gc.1, jiltrution inhibitor-aku pi-c, purution.s. Aliquot dari
materi dari kontrol (A) atau adrenalin yang diobati (B) binatang
dikenakan gel filtrasi Sephadex (300-100 prima (45 x 2,5 cm)
diequilibrasi dalam buffer A (langkah 5). Fraksi yang diuji untuk
protein phosphatase inhibitor aktivitas langsung (O), setelah preincubation
dengan protein kinase siklik-AMP-dependent dan Mg-ATP (0)
dan setelah preincubation dengan protein fosfatase-I dan mangan
ion (v). Tingkat aliran 18 ml / jam dan fraksi 2,0-2,5-ml
dikumpulkan.
inhibitor-1, juga tidak menentukan tingkat fosforilasi
protein.
Kami telah menunjukkan sebelumnya bahwa inhibitor-1 adalah
terfosforilasi oleh protein siklik-AMP-dependent
kinase in vitro pada tingkat yang sama dengan fosforilasa kinase
dan glikogen sintase [14] yang merupakan mapan
fisiologis substrat untuk enzim ini di
otot (lihat [4,5] untuk review). Konsentrasi
inhibitor-I di otot (01:05) sebanding dengan fosforilasa
kinase (14:05) dan glikogen sintase
(14:08) dan lebih tinggi dari protein cncentration
fosfatase-1 [13]. Karena hambatan konstan
(KJ adalah 1,5-2 nM in vitro [13], ada cukup jelas
8/3/2019 Arti Metabolisme Protein
18/23
inhibitor-1 untuk menghambat sebagian besar
protein fosfatase-1 pada otot. Selain itu,
inhibitor-1 menghambat fosfatase fosforilasa,
fosforilasa kinase fosfatase dan glikogen sintase
fosfatase kegiatan protein fosfatase-1
dengan cara yang sama, menunjukkan bahwa perubahan
keadaan fosforilasi inhibitor-1 akan
diharapkan untuk mengatur keadaan fosforilasi
beberapa enzim yg menukar satu sama lain. Hasil ini,
ditambah dengan pekerjaan ini, memberikan bukti yang kuat
bagi keterlibatan inhibitor-1 di kontrol
glikogenolisis oleh adrenalin. Nampaknya bahwa
fosforilasi inhibitor-1 mungkin sama sebagai
penting sebagai aktivasi fosforilasa yang
kinase dalam peningkatan fosforilasa tingkatan oleh
adrenalin (Gbr. 3).
Kami telah menyarankan bahwa protein fosfatase-1 adalah
mungkin enzim yang dephosphorylates inhibitor
1 in vivo [5]. Alasan untuk membuat pernyataan ini
adalah bahwa-inhibitor 1 tidak menghambat dephosphorylation sendiri
oleh protein fosfatase-1, bahkan pada konsentrasi
setinggi 13:00 [5,13]. Selanjutnya,
itu dephosphorylated dengan konstanta kinetik yang sama
kepada mereka untuk dephosphorylation substrat lainnya
ini [13] enzim. Hal ini menunjukkan bahwa inhibitor-1 dapat
8/3/2019 Arti Metabolisme Protein
19/23
menjadi substrat yang dephosphorylated preferentially
in vivo.
Adrenalin
Diaktifkan
siklik-AMP-dependent
Aku
Diaktifkan terfosforilasi Aku n t c i v e t d
Layang - n aku t c i v e t d '
fosforilasa p U r t o e i n fosfatase-I
Gambar. 3. Stiniulution dari glj.cogenoly.si.s dalam otot rangka melalui phosphorylution simultanrous
dari phosphoryluse inhibitor-I, kinusc, und
gljcogrrt sj.11 thase
256 JG Foulkes dan P. Cohen: Fosforilasi Inhibitor-I di iliiw
Inhibitor-aku seharusnya tidak hanya membuat keadaan
fosforilasi enzim yg menukar satu sama lain dari
glikogen sangat peka terhadap kecil metabolisme
perubahan dalam konsentrasi intraselular siklik
AMP, tetapi juga untuk perubahan kecil dalam kegiatan
protein fosfatase-1 (asalkan protein fosfatase
Saya adalah enzim yang dephosphorylates inhibitor
1 in vivo). Selain itu, karena protein fosfatase
Aku dephosphorylates situs terfosforilasi oleh protein
lain daripada protein kinase siklik-AMP-dependent
kinase [6], inhibitor-1 mungkin merupakan mekanisme
memperkenalkan kontrol oleh AMP siklik menjadi protein
yang terfosforilasi oleh kelas-kelas lain
8/3/2019 Arti Metabolisme Protein
20/23
protein kinase. Bukti terbaru menunjukkan protein yang
fosfatase-1 mungkin terlibat dalam pengaturan
selain metabolisme glikogen, dalam jaringan proses
selain otot [24]. Dalam hal ini inhibitor-1 bisa
memiliki peran yang lebih luas, tergantung pada jaringan distribusi tersebut.
Tidak ada bukti bahwa inhibitor-1 dapat diaktifkan
oleh protein kinase lain selain siklus-AMPdependent
protein kinase. Oleh karena itu akan menjadi
bunga untuk menguji pengaruh insulin pada keadaan
fosforilasi inhibitor-I in vivo, mengingat
mengklaim bahwa menghasilkan insulin penghambat siklik-
AMP-dependent protein kinase dalam otot [25]. Tabel 2
menunjukkan hasil percobaan awal sedikit
yang pengaruh insulin pada tingkat fosforilasi
inhibitor-1 telah diselidiki. Setelah suntikan
insulin, tingkat phoysphorylation adalah
25 47
8/3/2019 Arti Metabolisme Protein
21/23
ekstremitas persiapan.
Karya ini didukung oleh hibah dari Penelitian Medis
Dewan, London dan Asosiasi Diabetes Inggris. Gordon
Foulkes adalah penerima beasiswa pascasarjana dari
Medical Research Council dan Philip Cohen adalah penerima
Wellcome Trust Fellowship Khusus.
DAFTAR PUSTAKA
Aku. Robinsin, G. A,, Butcher, Sutherland Sr RW, EW (1971)
di AMP siklik, hal 1 - 16. Academic Press, New York.
2. Krebs, G. E.. Cinta, D. S., Batvold, G. E.. Trayser. K. A.,
Mayer, WL Sr Fischer, EH (1964) Bioc / iemi.stry, 3,1022 -
1033.
3. Walsh, D. A.. Perkins, JP Krebs &, EG (1968) J. Biol.
Chem. 243, 3763-3765.
4. Nimmo, H. G. Cohen Sr. P. (1977) Adv. C, / ~ 'Ul' Clic lYJtidlR,. Cs.
5. Cohen, P. (1 978) Curr. Top. Ci4l. RcJgul. 14, 11 8-196.
6. Antoniw, J. F., Nimmo, H. G., Yeaman. S. Cohen J. Sr. P.
7. Cohen, P., Nimmo, G. A. Antoniw Sr. J. F. (1977) B ~ (JC / I ~ aku J. V J.
8. Brandt, H., Killilea, SD Lee Sr, EYC (1974) Bioclicw?.
9. Brandt, A.. Lee, E. Y. Killilea C. Sr. S. D. (1975) Bioc, / wr??.
10. Huang, Glinsmann Sr FL, WH (1976) FEBS Lrtt. 62.
1 1. Huang, F. L. Sr Glinsmann, W. H. (1976) Eur. J. Biochem. 70,
12. Nimmo, G. A. Sr Cohen, P. (1978) Eur. J. Biochm 7?. 87, 341 -
13. Nimmo, G. A. Cohen Sr. P. (1978) Eur. J. Bioc, hem. 87, 353 -
14. Cohen, P., Rylatt, D. Nimmo B. Sr. G. A. (1977) FEBS L.c, tt.
8/3/2019 Arti Metabolisme Protein
22/23
15. Shenolikar, S., Foulkes, JG 91 Cohen, P. (1978) Bioi.liem.
Soc. Truns. 6, 935-937.
16. Cohen, P., Nimmo, GA, Shenolikar, S. Sr Foulkes, JG
(1978) dalam Cyclic A'ucleotides di Cell Ri, gulution (Wollenberger,
A., Krause, E. G. Pinna Sr. L., eds) Tekan Pergamon,
Oxford, hal 161-169.
17. Foulkes, JG Sr Cohen, P. (1979) 3 Eropa S oii ~ wzpo.sium
Hormon Cell und Regulution ut Lr Bisc1imher.g I978 (van
der Molen. H. G., Dumont, J. E. Sr Numez, J., eds) Elsevier:
Tekan Holland Utara Biomedis, hal 115-126.
18. Fischer, H. Sr E. Krebs, E. G. (1958) J. Bio /. Chem. 231.
19. Cohen, P. (1973) Eur. J. Biochem. 34, 1 - 14.
20. Antoniw, J. F. Sr Cohen, P. (1976) Eur. J. Biochem. 68,45-54.
21. Beavo, J. A,, Bechtel, Krebs Sr PJ, EG (1974) Met1zod.s
Enzymol. 38, 299-308.
22. Toth, G.. Gergely, P., Parsadanian, H. K. Sr Bot. C. (1977)
Actu Biochim. Biophys. Acud. Sci. Hung. 12. 389-398.
23. Tao. S., Huang, F. L.. Lynch, Glinsmann SC A., W. H. (1978)
24. Burchell, A,, Foulkes, J. G., Cohen. P. T. W., Condon, G. D.
25. Larner. J., Huang, L. C.. Brooker, G., Murad, Sr F. Miller, T.
26. Bradford, M. M. (1976) Dan. Bioclzem. 72. 248-254.
8, 145-166.
(1 977) Bioclzen?. J. 162, 423-433.
162.435 - 444.
Biophys. RRS. Commun. 68. 45 - 54.
8/3/2019 Arti Metabolisme Protein
23/23
Biophys. R1J.s. Commun. 63, 950-956.
326-329.
41 9 -426.
351.
365.
76, I82 - 186.
65-71.
Biochem. J. 176, 347-350.
Sr Cohen, P. (1978) FEBS Biarkan /. 92. 68-72.
B. (1974) Fed. Proc. 33, 261.
JG Foulkes dan Cohen P., Departemen Biokimia, Institut Ilmu Kedokteran, Universitas Dundee,
Dundee. Inggris, 4HN DDL