Urban airborne particulate: genotoxicity evaluation of different size fractions by mutagenesis tests...

14
Urban airborne particulate: genotoxicity evaluation of dierent size fractions by mutagenesis tests on microorganisms and comet assay Annamaria Buschini a , Francesca Cassoni b , Elena Anceschi a , Luca Pasini a , Paola Poli a, * , Carlo Rossi a a Istituto di Genetica, Universit a di Parma, Parco Area delle Scienze 11/A, 43100 Parma, Italy b Arpa Emilia-Romagna, Sezione Provinciale di Parma, Via Spalato 4, 43100 Parma, Italy Received 7 February 2000; received in revised form 8 August 2000; accepted 17 October 2000 Abstract The genotoxic eects of dierent size fractions of airborne particulate Total, PM 10 and PM 2:5 ), extracted with acetone or toluene, were evaluated by: the Ames plate test TA98 and TA100 strains, w/o S9), gene conversion and reversion w/o endogenous metabolic activation) in the Saccharomyces cerevisiae D7 strain, and the comet assay on human leukocytes. The data on human leukocytes con®rm the sensitivity of the comet assay and its applicability to assess genotoxicity in environmental samples. The PM 2:5 fraction of airborne particulate generally shows the highest concentration of DNA-damaging compounds. Genotoxic response, in all the test systems applied, is highly dependent on extraction solvent used. Acetone seems to extract compounds with more similar genotoxic responses in the three test systems used than toluene extracts. Toluene appears to extract air pollutants genotoxic on yeast and leukocytes but is mainly cytotoxic on Salmonella. Ó 2001 Elsevier Science Ltd. All rights reserved. Keywords: Ames test; Saccharomyces cerevisiae; Single cell gel electrophoresis; Extraction solvents 1. Introduction Associations between particulate matter PM) con- centrations and human health eects have been well researched, however the exact biological mechanisms underlying such eects are poorly understood. It is presumed that mutagens/carcinogens present in human lungs contribute to lung cancer. Most of these molecules are inhaled with PM through the respiratory tract and particles of dierent sizes reach de®ned regions of the pulmonary system. Airborne PM is not a single pollutant, but rather a mixture of many subclasses of pollutants with each one containing many dierent chemical species US Envi- ronmental Protection Agency, 1996). Atmospheric PM occurs as ®ne-mode and coarse-mode particles, which in addition to falling into dierent size ranges, dier in formation mechanisms Chow et al., 1994), chemical composition Fang et al., 1999), sources, and ®nal eects in humans Monn and Becker, 1997; Beeson et al., 1998; Naeher et al., 1999). The coarse fraction particles > 2:5 lm) is dominated by natural sources dust, pollen, bacteria, etc.), while the ®ne fraction particles < 2:5 lm) is dominated by anthropogenic emissions. Major components of ®ne particles are: sul- phates, strong acids, ammonium, nitrates, organic compounds, trace elements including metals), and Chemosphere 44 2001) 1723±1736 www.elsevier.com/locate/chemosphere * Corresponding author. Tel.: +39-0521-905608; fax: +39- 0521-905604. E-mail address: [email protected] P. Poli). 0045-6535/01/$ - see front matter Ó 2001 Elsevier Science Ltd. All rights reserved. PII: S 0 0 4 5 - 6 5 3 5 0 0 ) 0 0 5 5 0 - 6

Transcript of Urban airborne particulate: genotoxicity evaluation of different size fractions by mutagenesis tests...

����� �������� ����� ��� ���������� ��� ����� �� ����������� �������� �� ���������� ��� �� �������������� ���

���� �����

��������� �������� �� ��������� ������� �� � ��� �������� �� ��� !����� ��!�� � !� � ��"� ��� � #���� �

� �������� �� ����� ��������� �� ����� ����� ��� ��� ���� ���� ����� ����� ������ ���� ������� ���!� ���� ��������� �� ����� "�� ������� � ����� ����� �����

#������� $ �������� %&&&' �������� �� ������� ���� ( ����� %&&&' ������ )$ *����� %&&&

��������

+�� �������� ����� �� ������� ���� �������� �� �������� ����� �� ,+�� � !-)& ��� !-%�./� ������� 0��

������ �� � ����� 0��� ��� ���� ��� �� ���� �� �� ,+�1( ��� +�)&& ������� 02� 31/� ���� ���������� ���

��������� ,02� ���������� ����� �� ��������/ �� �� ����#������� ������� 4$ ������ ��� �� ���� ����� ��

����� ��5�����6 +�� ��� �� ����� ��5����� ���7�� �� ��������� �� �� ���� ����� ��� �� � ����� �� �

������ ���������� �� ����������� ��� ��6 +�� !-%�. ������� �� �������� ����� �� ������ � ���0� �� ������

����������� �� 48�9�������� ��������6 :������� �������� �� � �� �� ������ � ���� �� ���� � �������

�� �������� �� ��� ����6 ������ ����� � ����� �������� 0�� ���� ���� �� �������� �������� �� �� ���� ��

������ ���� ��� � ���� ������6 +� ���� ����� � ����� ��� � ���� �������� �� ���� ��� ��5����� �� ��

���� � ������� �� ��������6 � %&&) � ������ 3������ �6 � ����� ��������6

$�%����& ���� ��' ����#������� �������' 3��� � �� �� � �����������' �������� �� ����

� ���� ������

����������� ��0��� ����� �� ���� ,!-/ ���9

��������� ��� ����� ��� � ����� ���� ���� 0�

����������� ��0���� �� ���� ��� ����� ����������

����� ���� ���� ����� ��� ��� � ���������6 ; ��

������� �� �������2����������� ����� �� �����

���� �������� � ��� ������6 -�� �� ���� �� ��� ��

��� ���� �� 0�� !- ������ �� ��������� ��� ���

���� �� �� ������� ����� ����� ��7��� ������� �� ��

� ������ �����6

�������� !- �� �� � ���� � � ���� �� ����� �

������ �� ���� ���� ����� �� � ���� 0�� ���� ���

��������� ���� ������� ������� ������ ,�3 ����9

������� !������� ������� )11</6 ��������� !-

������ �� 7��9���� ��� ������9���� ���� ��� 0���� ��

������� � �� ��� ��� ������� ���� ������� ����� ��

�������� ���������� ,���0 � � 6� )11=/� �������

��������� ,���� � � 6� )111/� �������� ��� 7�� �����

�� ������ ,-��� ��� ���5��� )11$' ������ � � 6� )11('

8����� � � 6� )111/6 +�� ������ �������

,���� �� � %�. ��/ �� �������� �� ����� �������

,���� � ��� �������� ��6/� 0�� � �� 7�� �������

,���� �� � %�. ��/ �� �������� �� �����������

���������6 -�>�� �������� �� 7�� ���� �� ���� �� 9

����� ����� ������ ��������� ������� �������

��������� ���� � ����� ,��� ����� ��� �/� ���

���������� == ,%&&)/ )$%?@)$?<

0006� ������6���2 ����2����������

"������������ �����6 +� 6� A?19&.%)91&.<&(' ���� A?19

&.%)91&.<&=6

������ ������& �����B����6� ,!6 !� �/6

&&=.9<.?.2&)2C 9 ��� ���� ���� � %&&) � ������ 3������ �6 � ����� ��������6

!;;� 3 & & = . 9 < . ? . , & & / & & . . & 9 <

0���6 -�>�� ������� �� ���� 7�� ���� ��������� ���

����� ��� ��������� ������ 0�� �������� �������

��� ��� ��� �� ���� ��������� �� ��� �6

+�� 7�� �� �� ��������� ��� D�� �� �� � �������

�� ������ @������� ��������6 E�0����� ������

��� � ��� ������ �� �� ���� �������� �� � �������

�� ���� ����� �� �� � ���� ��������� ������ ���

�� �� �5� ��� ������������ �� D������ �� �������

������� � �0 ����� �� ������� ������� �� ���D��� �

����� �� ��� �� �������6 *� �� ���� ����� ���9

����� ��������� ������ ��� ������� � ��7�� ���9 ���

�������� ���5� ��� �� ���������� ��� �� ���6

3���9��� ���������� ������ ��� ����� � ����

�� ������ ���� �� ������� ��� ������ ����� �� ��

���� ���������� 0���� ��� �� � � ������ �� 48�

������ ���� ��� ���� ������� � �������6 +����

��� ��� ����� �� ��7���� �� FF����������� ���5GG

�������� ���� ��� ���� � ������� � ��� ������������

������� 0�� � ���� ��� ��� ���������� �� ��������

�� ����������� �������� ���6

-��������� �� �������� ���� �� ��������� 0��

������� ������ �� ��5������ ��� ��5������ �����9

���� ��� ���� ������ ,��� ����� �� ����� � � 6�

)11$' ������� � � 6� )11$' ������ � � 6� )11$' H��

� � 6� )11(' -������ � � 6� )11(' I�����5�� � � 6�

)11(' J��� ��� K�� )11(' 3����� 4� -������ � � 6�

)111/6 E�0����� ����� ����� ��� � ���5 �����������

��������� 0�� ��� � ���� �� �� ���� � ����� ���

���� ���� 7������� �� ���� �� ����� �������� ��9

��� �� ���������� ����� �������� �� ������ �

������ ��������� �� ��� D�� �� ��� �����������

�������� ���6

;� ��� ��������� ������ ��� �� �� !-%�. ,����� ��

���� 0�� ����������� ������� ��� ��� %�. ��/�!-)& ,����� �� ���� 0�� ����������� �������

��� ��� )& ��/� ��� �� �������� ����� �� ,+3!/0��� �� ���� �� �� ����� ���� �� !����� � �0� �� ��

���� � �� 8������ ;� �6 I� ��� ���� �� ��������

����� �� ���� �������� �� !- ,+3!� !-)& ��� !-%�./�

0���� 0��� �� ���� ��������� � �� �� ���� � ���9

��� ��� ������� 0�� ������ �� � ����6 +�� �����

����� ��� �����

� �������� ���#�������� +�1( ��� +�)&& �������

0�� ��� 0���� 31��� ,-���� ��� ����� )1(?/'

� ����#������� �������� +�9. ���� ����������

���� ��� ; �)91% ��������� ����� 0�� ��� 0����

��������� !9=.& ,!=.&/ ��������� �6�6� ���0���

��� �������� �� � ,J��������� � � 6� )1$.' !� �

� � 6� )11%' #���� � � 6� )11./'

� ���� ����� �� ����� ��5����� ,��������� � � 6�

)11.' 3���� � � 6� )11(' !� � � � 6� )111/6

+�� ���� ������ �6�6� ���� � �� �� � �����������

,3�:�/� �� � �������� ��� ���� ����� ��� 48�

������ ������� �� ��������� �� �6 ;� � 5� ��� ���9

������� � ���� ��� �� ������� �� �� 48� ��������

0����� �� � ������������ ������ ���� �� ��� ���

����� ���� ��� �� � FF����GG ��������6 +�� 3�:�

����� �� �������� � ��>�� �� �� ����������� � 9

��� ������������� ��� �� ���� ��� �� ���� ,3��

� � 6� )11<' �� ������9:����������� � � 6� )11$' -� �9�� � � 6� )11$���' -���� ���� ��� ������� )11('

3����� � � 6� )11(' I� ��� � � 6� )11(' !�����5��� � 6� )111/6

-������� ��� ������������ ����� ���� ��� ����

48� ������ ��� �� ���9��� ��D�� �� �� ������9

����6 :������� ����� ��� �� ��7��� �������� � ��

������ �� ��� �� � � �� 48� �� ������ ��� ������

�����������6 +�� ��>�� ������� �� ����9���

���������� ������ ��� ��� 48� ������� ��� ��9

������ ���������� ����������� ��6 +�� ���� ��

�� ���� �� � ����9��� ���������� �� ��� ��� ����

��������� ��������� ��� ������ L����� �� �� �������

�� 48� ������ ��� �� �������� � ���� ����9

������ ���������� ��� �������� �� ���6 +��� �� ��9

����� �� ���� ����� � �0� ��� ������� �� 48�

������ ���� � ���� �� ��>���� ������ 48� �� ��9

������ ��� 0���� ��� ���� � 0�� ��� ����������

��� ������6

+�� ��� �� ��� ���� 0�� � ��� ��� �� ������9

���� �� �� ������� ����� �� !- �� ������� ������

������ ������ �� ������ �� �� 3�:� �� ����� ��9

5����� ��� ��� � ���� ���������� ������ 0��

������� �#������� ���������� ���� ��� ������

�� ������� ��� �� �� ������� � �� ����� �� ��9

���� ������� 0�� 0� ������� ��� �� ��������

�� ����6

� ��������� �� ����� �

'(�( ���)�� ����������& ����� �������� �� *�����

���

+�� ��� ��� ��� 0�� �������� � )6. � �����

������� ���� � ���� ���� �� � ����� ��������� @���9

������ ���� 0���� ��M� ,��� ��� ����� ����� ��/ ��

������� �� �� �0� ����� �� !����� ;� �6 !����� ��

���� 0�� �� ���� �� 7��� � ��� 7 ��� ,� � =$ ��/

����� �09�� ��� ��� L�0 ��� ��� ��� ��� ��� ����

0�� +3!� !-)& -����� ��� !-%�. -����� ��� ���

����� ,+�# +��*#�� !� ���� ����5� �������� -;�

;� �/� ��������� � �3 �!� 8����� ������ ���

N�� �� 3������� ��� !����� �� -���6

+�� ��� ��� 0�� ��������� �������� � %=9�

����� ,��� ��� L�0 ) �?2�/6 +�� ��� � 7 ��� 0���

�� �� � ����� �� ���� � ��� ��6 ���� ��� � 0��

������� ��� 0� ��� �� �� ������� ���� ��� �������

0�� ������ �� � ���� ����� 3�� � �D�����6 ����

��� � 0�� ��� �������� 0�� � ����� ���������

��� ������� ��� ,.& �?2� / �� ������ �� ������

,4-3*/6

)$%= �( +���#�� � ��( � ,#����#� �� -'���. �/'�0�/�1

'('( 2��� � �������!�����

'('(�( ��� ���

+�� �������� ������ �� �������� ����� �� �����

0�� ������ ����� �( ���#�������� ������ +�1( ���

+�)&&� 0�� �� 0���� ��������� �������� ,-����

��� ����� )1(?/6 +�� ��� ������� ��� ������� ��

�������� �� �? �� ��� ��� �� ,�� �� �� ����� ������/� �� �� ��� ���� �� ����� ����� �� �� ����@

������� ������ ,��� ������ &� &6.� )� %� =� ( �? ���

�D���� ��� ���� ���2����/ �� ����� ���������� ��� 9

����6 4-3* ,)<& � 2 ��� 4-3* ���� � ������� ��

( �? ��� �D���� ��/ 0�� ���� �� � ������� �����

0������ ��������� ,.& ��2 ��/ ��� %9�����L������,%6. �� 2 ��/ 0��� ���� �� ������ ����� � 0���� ���0�� 31 ���� �������� � ,:������� � � 6� )11=/6

'('('( 3��� ������

+�� �� ��� ����� 4$ �� �( ������� ,J���������

� � 6� )1$./ 0�� ���� � �������� �� �������� ���9

D������� � �� ; �)91% ���� ��� �� ���D������� �� ��9

��� ���� ���������� � �� +�9. ���� 0�� �� 0����

���������� ��������6 �� �� � ������� ����� � ��

��������� ������ ���� �� � 0��� �������� ������ ��

��������� ���� �� ���0� �� %&O � ����� � ����9

��� �������� �� !=.& ��� �� ,!� � � � 6� )11%' #����

� � 6� )11./6 ��� 0�� ��� 0���� ���������� ���9

�� �� ��������� �� �� � ,)&( �� �2� / 0��� ����� ���

�� ������ ����� &6) -� E $6=� �� �� ������� ��

������� ������������ ,��� ������ &� )� )6.� %� %6.� ? �?

��� �D���� ��� %& ���2���� �� ���� ��� ��� +��

��� ; �� �� ����� �����/ �� ����� ��� ��� ��� 5� ���� � ������� ���5�� ,))& ��/ � ?$�� ��� % �6 � ���

�D����� ����� ���������� ��� ���� 0�� ���� � �� �� ��

�� ����7� �������� ������ ,����� �� ���������

�)&�( ��������� �� � �� �? �� ��� ��� ��/6 4-3*

,<%6. � 2� / 0�� ���� �� � ������� ����� ' %9�����9

L������ ,.& ��2� / ��� ��� �������� ����� ,)&&�-/ 0��� ���� �� ������ ����� � 0��� !=.& 0�� ��

0�� �� �������� �������� �6

��� � �� ������ �� ��� 0��� ��� ���� ����� ��

����7�� 0��� � �� � �� 0���� � ������� �� ����������

������ �� �� ������� ������� ��� � ��� 0� ������9

���� ���� ��� � 0�� ���� ��� 0��� �� ������� �� ��

����� ���� ,!���� ��� !����� )1(=/6 +�� ��� ��9

����� 0��� ���>���� � �� 3����G� �9��6

'(�( ��!� ��� !� ������#�����

I�� � � ��� �� ��� �� ������ 0�� ���������� 0���

�� �� ��� ��� �� ���� ��� ��5���� ��� ���� ,).. �-

8E=� � . �- HE�*?� &6&&. �- 8�%�4+�� E $6=/�

0����� 0�� !�3 ��� ���������� ,�)&< �� 2� / ��#!-;9)<=& ������6 -����� ��������� �� � ��� �9

������ �� ���� �� ����� �� ��� � 0��� ����� �

�� ������� ��� ,��� ������ &� )� )6.� %� %6.� ? �? ���

�D���� ��/6 +������� 0��� ��� ) � � ?$��6 8������,4-3*� .& � 2� / ��� ������ ,-� �� ��� )& ��2� /����� � 0��� � �� ��������6

� �D��� �� �� �� ��������� 0��� ���� � ����5

����� �� �� �� +���� � �� ��� ����� �����6 ������

� �D�� 0�� ���� ��� 3�:�� ������ � �������� ��9

������� � 3���� � � 6 ,)11(/6 4�������� � ���� 0���

���� �� )O ����� �� ��� ������� ��� �� 7�� ����6

+��� �� �� � ,�%� )&. �� �/ 0��� ����� 0�� �0

�� ��� ������� , -�/ ��� ���� �� �6 ���� � -�

0�� ����� �� �� � ����6 +�� �� � 0��� ���� � =���������� �� �� ���5 ,%6. - 8�� � )& �- 8�%�4+��

)& �- +���9E� � )O +���� P9)&& ��� )&O 4-3*� E

)&/6 +�� 48� 0�� � �0�� � ��0��� ��� %& ���6 �� �

����� � ������ � ���������� � 5� ��� ����� ,) �-

8�%�4+�� ?&& �- 8�*E� E )?/ ��� ���>���� �

� ����������� �� �� ���� ����� ��� %& ���6 �

&�$( Q ���) ��� ?&& ��6 � 5� � ��� � �����������

������� 0��� �������� �� �� ��� ���6 � �� ���

��������� ����� 0��� �������� ����� � �� �0 ��� �

����� �������� 48� ������6

*��� �� � ����������� ��� ���� ������� ��� ��

� ���� 0��� 0����� �� � ����� ������ ����� ,&6= - +���9

E� � E $6./6 ;������� � ������ �� ����������� ��

48� 0�� ������ 0�� )&& � ������� ������� ,% � 2� /6 +�� ��� �� 0��� �������� ����� � L��������

��������� , ��� 4�� �� %&/ �D���� 0�� �� �����9

��� 7 �� �! .).@.<& �� ��� � ������� 7 �� ! .(& ���

����� �� ������� ����� ��� ���� ����� ,����� #�9

���� %�)93����� � ������� ;� �/6 ���� �� � �� � ��� ,0�

� ���� �� ��� �/� �� ���� � ������� 0��� ��� ����

����� ������ ���������6 +�� ��� �� 0��� ����� ���

��� ���� � ���6

+�� ����� ��� ���� ����� � �0� �� � ��5� �

D�������� ��������� �� �� ���� ����� �������

�������� ���� �� �������� ������� �0���� ��

����� �� 48� ��������� ��0��� �� ���� �� ��

���� ���� ��� ��� �� �� � ���� �������� ��� ��9

������ 48� L���������� ������� �� �� �� 48�

�� ���� ��� �� �� �� ����6 +�� �� ����� ,+-/ ��

�� �������� �� �� ����������� ��� �� ������� ���

�� ����� �� ������� 48�� �6�6� �� �����O48� L���������� ������� �� �� 6 +�� ����

������� +- 0�� ������ � ������� �� ��� ��

�������� �����6

#��� � ��� ������� �� ���D����� ����������� ��

���� � �� 48� ������6 +�� �� ������� ��0��� ��9

�� ���� ��� ���� 0�� �� �� ��� �� ���� +- ��9

������2�? ��� �D���� ��� ���� �� ����@������� ������

�� ����� ���������� ��� ���� ,7�� ������ &� )6.� %� %6.�

? �? ��� �D���� ��/6

� 3!33 ( ������� ��5��� 0�� ����6 � ��������

��� ���� 0�� ���� �� ��� �� �� � � ���0��� ���9

�������' �� ��� 0��� ���� ��� ����� �� ��� ��9

�������� �� �������� ���� 0��� ���� ������� 0��� ���

�� ��� 0��� ������� ����� �� 3����G� �9��6

�( +���#�� � ��( � ,#����#� �� -'���. �/'�0�/�1 )$%.

I���� ��� ��� �� � ��� ��������� ��� ����� ���

�� ���9�������� H� �������@3������ �� 0��

����6

� �� ��� 0��� ���� � �������� ����� ����� ��

������ �� ��� ����������� ��� �� 0��� ����M����

� ���� �� ��� �� ��������� ��� �6

� �������

�(�( �*������� ����� ������ � !���*����� ��

����!�����

+�� ������� ��� ���� �� ����������� ��������

���� �� �������� ����� ��� ����� �� ����� ����

��� �� �5�� �� �������� �� �������� �� ���2� ��

�� ���� � � ���� ��� �������� �� �� ������� ���9

����� ����� � ����� �� ��� � ����� ���� �� !�E�

��� !�E9����������� �6�6� ����9!�E� ,8�� ���� )11%/6

-��� �����9����� ���������� �� ������ �� �� ����

������ ��� ���� �� �� ���� �������� ���� �� ����9

��������������� ��� ���� ����9!�E ������� ����

� �� ��� ���� �� �� ���������9��������� ��������

,E� ��� � � 6� )11%' ���� �� � � 6� )11./6 3��� �� ��

� ���� ��� �������� �� �������� ��� � 5� ������9

���� �� �0 �� ��� �� 0���� !�E�� 0���� ��� ��� �

������� �� ������ ,+������� � � 6� )1((/� ���0

�������� ������ ,-������ � � 6� )11$/6 ������ ���

� ���� ��� 0� ������� �� ���� ���D��� � ���� ��� ��

��������� �� ����������� ��� ��� 0���� ��� ��9

���� � ������ �� ������� ��������6 ������

0�� � �� ������ � ����� ���� � �� ��������

��� � ����' ��0����� ��� ������ 0�� � � �� �� ��9

���� � ����� !�E� ��� ����9 ��� ��9����9!�E�6

3��� �������� ��� �� ������� 0�� ������ �

������ ��������� � �� �� ����� �����6 ��� ����9

�� ?9���������������� � ��� �������� �������

,���� � � 6� )11$' ��� �� � � 6� )111/ ����� �� �����

������ ���� ��� ��������� �� �������� ��� � ��9

�������� ����� ������������ ,���� � � 6� )11$/6 !��9

������� ������ ��� � � ��� �� ������ ��� � ����

������ �� �� ����� �� ��� ��� �� �� �� � �������

�������� ��� ������� ������6 +�� ����� �� ��

����� ������ ������� ������� �� ������ ������� �

� �� ������������ �� ������������ !�E� ��� ����9

!�E�� 0�� � �0�� ����������� �� ������ ��� ��

I���� ����� ,-���5� � � 6� )11(/6

;� ��� ������ � ������� ��� ���� 0�� �������� �

������� ���������� �� �� �������� ����� �� �� ���

����� �� ���� ������� �� ���� 0� ������� �� 9

����6 +�� �������� �������� ��� ���������� �� ��9

���� ��� � ���� ������ ,��9�� ��� +� 9��/ 0���

������� �� �� ��������2��������� �� ������ ��

������� ��� �������� �������� �� �� ����� ��� ��

48� ������ �������� �� ����� ��5����� ������

�� �� ���� �����6

���� ������� ���� � ��� �� ,8������� )11<�

-����� ����� ��� 3������ )11$/ �� ����� ���9

����� ����� �� ,�� �������� ���� ��/ 0��� ��9

��6 ��� ���� ��� ��� ������ ��� ��������

,���6 )/� �( ������� ,+�� � )/� ��� ��5����� ,���6 %/6

+���� �� D��� � � ��� ��������� ��0��� �� �������

��� ��6

�('( ��� ��� -4�!( �.

��� ��� � )� ��9�� ��� +� 9�� ���0 � ������� �

���� �� +�1(� +�)&&� ��� +�)&&A31� 0������ ��

����� �� ��9�� ��� ���� ��� 0��� ���� �� +� 9�� ��

+�1(A31 ,� � &�&)� �9��/6 ��9�� �� ��� � % ���0����� ����� �� +�1( ,� � &�&.� �9��/� +�1(A31,� � &�&)� �9��/� +�)&&A31 ,� � &�&.� �9��/ 0�������� ����� �� +� 9�� ��� ������ �� +�)&& ,� � &�&.� �9��/6 ��� ��� � ?� �� 0� ��� �� ������ ��� ���9

���� � �� +�1( ��� +�1(A31' ��9�� �� ���� ���

��� +� 9�� �� +�)&&A31 ,� � &�&)� �9��/ ��� ����

����� �� +�)&& ,� � &�&&)� �9��/6 ��� ��� � =� +� 9���� ���� �������� ��� ��9�� �� +�1( ,� � &�&.� �9��/�+�1(A31 ,� � &�&&)� �9��/� ��� ������� � 0�� ��9�� �� +�)&& 02� 316

;� ��������� ��� �� ) ��� % ���� �� ������ � ��

���� �������� ��� ��� �� ? ��� =6 3�� �� ) ��� %

������ ��� �����9����� ,�6�6� ����9!�E�/ ��� ����9

���9����� ,�6�6� !�E�/ �������6 +��� ��� � �� ��� �

�������� � ������� ��� ��� � 0���� ��� ��� � )� ��

0���� ��� %� ������2 �� ������ ��� ? ��� =6 ;� ����

���� ��� ������� ��� ,#���� � � 6� )11./ ���0�� �0��

!�E ������������ ������ ������6

*� �� ���� ����� ���� ��� ����� �� � ��� � ��9

������6 +���� �� � ���� ��������� ��0��� �� ���9

����� ������ �� +�1(A31 ��0��� �� 0� ������ ���

��� � )� �� �� �� +�)&&A316 ;� ��� ����� ������

����� �� ���� � �� ��� �� ������� ���������� �� ��

0� ������ ,���6 )/6 3��� �������� ����� �� ���

� ���� ���� ���� ������� � �� �� 0� ������6 ���

���� �� ���� � 5� ������������� ���0�� �����9

����� �� +�)&& ����� 0������ ��� ���� 0�� �� ��9

������ �� +�1( ,�� � � 6� )11%/6 4�-����� � � 6 ,)11=/

����� �� �� 0�� � ������� ����� ��� ��� � ,��9

�� �������� �����/ ��� �����R�S����� 0��� ����

%����� �������� �� ����� +�)&& ��� �� �����

+�1(6

����������� �� � ���� ����� �� ��� � ? ���9

���� ��� ����� ����� �������� �������� ��9

���� ���� �M���� � �� +�)&& ��� �� +�1(6 +��

������� �� 31 �0��� �� �������� �����6 3�� � =

������� ������ ������ �� ������� ����� ��������

���� �M���� � ������ �� +�1(A31 ��� +�)&&A316

+� ���� ������ �� ��� � ? ��� = ������ ���������

���� ������ �� ��� � ? ������� � ���� �� ������ ��

+�)&& ��� 0�� ��� 0���� 31' ��� � = ����� ��

���� � �� ���� ���� �� +�1( ��� �� �� �������

)$%< �( +���#�� � ��( � ,#����#� �� -'���. �/'�0�/�1

���6 )6 4���@���� �� �������� ��0��� �������� �� �������� +�1( ,�/ ��� +�)&& ,�/ ������� 0�� ,A31/ �� 0���� ,�31/��������� ����� �� ��������� ��� ������ ��� � ���� ������ �� ���� �������� ����� �� ���� � ��� �� ,�� ��������

���� ��/6 4�� �� ���� ���2���� ��� ������6 +�� ����0� ������� �� ���� ����6 4���� �? ��� �D���� ��6

�( +���#�� � ��( � ,#����#� �� -'���. �/'�0�/�1 )$%$

���6 )6 ,,�����/6

)$%( �( +���#�� � ��( � ,#����#� �� -'���. �/'�0�/�1

��� ������� �� ��������� ����� �� �������� �� ��

��� �� � �����7�� �� 31 �� +�)&&6 3��� �� �� ��9

�� � ���� �� ��� ������ ��� � ������ �� �� ��� ��6

E�0����� ���� ��5��0� �������� �� ���� ������9

��� ����� ������ ��������� ��� � ���� �������

�������� ������� �� �� 0� ������6

�(�( 3��� ��� -2�)� �.

+���� ��� �� �����7��� ����� �� ��9�� ��� +� 9�� ��

��� � ) �� ������� �������� ,; �%91)/ 0������

���������� �� ��9�� �� � ��� � ������ ��� ��� +� 9�� ��

�� �������� �� ���� ���������� ,+�9./ 0�� ���

+�� � )

;�������� 0�� ,A!=.&/ �� 0���� ���������� ����� �� ��������� �� ����#������� ������� ������ �)&�( �� �� �� ��������� � ���� ������ �� ����� �������� ����� �� ��� �� ,�� �������� ���� ��/�

������ +� ����

������� �)&�( �� �2�? ��� �D���� ��

3�� �� +�9. +�9.A!=.& ; � )91% ; � )91%A!=.& +�9. +�9.A!=.& ; � )91% ; � )91%A!=.&

) $<� )=1� $ % & =$ ) %%

% ) =<$�� & % & & & )

? & & & & 1=� ).&.��� . )=?��

= & 1.� & & %$%�� )$)<��� )$ )?&��

� +�9.� ���������' ; � )91%� ��������6 ����� ��� ���������� �����7��� � ������ 0�� ����� � ������� �� � ,�9��/�� � � &�&.' �� � � &�&)' ��� � � &�&&)6

���6 %6 ���� ������ ���������� �� 48� ������ ,+-� �� �����/ �� ����� ��5����� ����� 0�� ������ ��� � ���� �������� ���� ������� �������� ����� �� ��� �� ,�� ����/6 +�� ������ ����� ,? �? ��� �D���� ��/ ��� ������6 4-3*� .& � 2� '-� �� ��� )& ��2� 6

�( +���#�� � ��( � ,#����#� �� -'���. �/'�0�/�1 )$%1

0���� !=.& ,��� ���� � � &�&.� �9��/6 ��� ��� � %��� ���������� � +�A �� ������ 0��� !=.&9�������

���� 0�� ����� 0�� ��9�� ,� � &�&)� �9��/' �� ��

���� ����� �� ������ ��� �� ��������6 ������ ��9

��� �� ��� � ? �� ��� �� � ������� �� ���� 48�

0������� �� �� ������� �� ����� �� ��������

,A!=.&/� +� 9�� ���� � ������� +�� ���� � � �����

����� ; ��6 �� � 0���� !=.& �������� ���0 � 0��5

�������� �� ��������� ,+�9./6 +�� ������ ��������

����� 0��� ������� �� +� 9�� �� ��� � =6

+���� ����� � �� ���� ����������� ��0��� ���� �

�� �������� ��� �( ������� 0�� ������ �������

��� �� ) ��� % ��� ���� �������� ��� ��� �� ? ��� =6

E�0���� ���� �� � ��� �� ���� �������� � ����� �����

������� ,0���� ���� �� ��� � ��� ��� �� ����9

������ ������ �� �� ��������/6 �����������

� ���� ����� � ����� D��� ������� �������� ���

������� ��� � ���������� �� � ���� �� �� 0� �� ����6

+�� �0 ��������� �� ���� �0���� !�E� �� 5��0�� �(

������� �� �� � � �������� !�E� � ����9�������9

��� �� ���� �� D�������� ��� ����� ���>������ ���

���� ����� ��� ,3���� ���� )11%/6 +���� �������9

������ ��� � �������� �� �������� ����� �� !�E�

����� ��� ����� ����� ��� ������ ��� ��� ���9

����� ��� �� ������� ��������6 I�� �� ���� ������

� ���� ������ �� ��� �� ? ��� = ��� ���� ����

�������� ��� ��� �� ) ��� %6 +�� +�9. ���� ,����

����������/ ����� � �� ���� �������� ��� �� ; �9)

���� ,�� ������� ��������/ ��� ��� � ���� ������6

�� ������� 0�� �1.O ��� � �� ��� �� 0���

������� �� ������� 0������ � ���� ������ ������� �

������ ����� �� ��������� �� � �� ���0��� �� �� �6�6�

0�� !=.& ��������� � �� ������ ����� ? �? ���

�D���� ��� ��� �� ) ��� % ���0�� � ������� ��� ��

���� (&@(.O� 0�� � ��������� �� � 0��� �=.O ��

��� �� ? ��� =6

� �� �� �� ���� ����� �� ���������� ��0��� 0����

��� �� ,) ��� %/ ��� ������ ��� �� ,? ��� =/ 0���

���� � ��� ��� ��� �������� ��� ������� ��������6

�(�( ,��� ����� -4�!( '.

48� ������ �� ����� �� � ������� �� �� 0�

��� �� ����� ����� � �� ������� ��� �� ����

��� �� 0������ ��� �� �� ����� �� ,1%@1.O/ ���

������� �6

;� ���������� 0�� �������� ��� �� ���� �����

�� ��� ������� �� ������ ������ �� ��� �� ) ���

% ��� ���� �������� ��� ��� �� ? ��� =6 E�0�����

��� � ���� ������� ��� � ) ����� � �� ��� ��������

��� ��� �� %� ? ��� =6 4�� ���� ��� �� )� ? ��� =�

�� �� %� ��� �� ���������� 0�� �� ��� ���� �� ����

�����6

+�� ��� ������� � ������ �������� ����� �� ��9

�� �� ��� � ) ������� � +� 9�� ,� � &�&&)� H� 9�������@3������/ 0������ ���� 0�� � ���� �� �����79

��� �������� �� �� ����� �� ��� ��� �� 0� �� ���

���� �� ������ �� ��� � %' ��� ��� �� ? ��� =� +� 9

�� ������� � �����7��� � ������ ���� ��� ��9��

,� � &�&) ��� ��� � ? ��� � � &�&&) ��� ��� � =� ��9������ �� H� �������@3������/6

!����� �� ���� ������ ��� �� � � ������ ����@

�� ��� ����� �� I�� ���� 0���� 31 ���6 � �����

��� 5��0 ���� ���������� �� ���������9����� �����

������ �� ����� ����� � ��� �� � �� ����� ������

�������� 0��� ���0� � ������ ��������� � ���� !9

=.& ������� ,����� � � 6� )11(/6

+�� ���� ����� � �� ���� �������� �0���� ��

������� � ����� �� +� 9�� �� ��� �� ? ��� = ���� ��

� ��� �� ������ �0���� ��9�� �� ��� �� ) ��� %6

�������� ����� � �� ���� �� ��� �������� �0����

��� �� ���� ����� �������� �� �� ��� � ����9

�����' ��0����� +� 9�� ����� � �� ���� ���� ���

��9�� �� ���������� �� ��� �� ? ��� = � ��

������ ����� ,���6 )/6 48� ������ �� ��5�����

������ �� ��� �� �� ��� ��� �� ��� � ������9

���6

�(5( 2�� �6)& �6%�.

���� �� �� ���� ��� �� �� �0�� ���� ����

���� � ��� �� ,3������� *������ 8�������� ���

4������� )11(/ �� �������� !- 0��� �� ���� �����

���� � ��� L�0 ��� ��� 0�� +3!� !-)&� ��� !-%�.

��� ��� �����6

�� ������� �� ������������ 0��� +3! � !-)& �!-%�. ,+�� � %/6

����������� �� ������� ���� � ��� ��� � �� ��9

��� ����� �� ���� ��� � ,�� � ��� ��� �� ��� ����

�������/� 0� ����� � ��� ��5����� ��� ���� 0��

+� 9�� ��� ������ �� ���� �� 0�� ��9�� ���

�� �� �0��� �������� �� +� 9�� ������ ��5��0�

+�� � %

������������ ,����?/ �� ����� �� ���� �� �� ���� ���� �������� ,+3!� !-)&�!-%�./

3�� �� +3! �����? !-)& �����? !-%�. �����?3������ <=6%1 =.6() ?)6<=

*����� .$6)& =?6)1 ??6&=

8������� $$6&( <%6)? =$6<=

4������� 1<61= $.6$$ .=6$<

)$?& �( +���#�� � ��( � ,#����#� �� -'���. �/'�0�/�1

�������� 0�� ����� � ��9�� ��� �� ������ ���

� �0��� �� � ��� ��� � ����� ������ �� ��������

��������� �� �� �������� ����� ��' �� ���� ���9

�� � ���0� � ���� ��������� �0���� ���� ���9

�����' ��9�� ����� � �� ��� ���� ��� +� 9�� ��

��������' ��� �� ��� ��D����� �� ��� �� D�������

��� �( ������� ��� 0�� ����� � �� ���� ��' �

����� ���� 0�� ������� � ���0� ��0��� ���� �����

��� �( �������6

8� ��� �� ������� ��������� ����� �� ��������

�� ����� 02� ����� �� ��������6 ;������� �� �����9

���2�� �� !- �� �������� +�1( ��� +�)&& �������

02� 31� ��� +�9.9��������� ��� ; �)91%9��������

�)&�( �� �2�� �� !- �� �( ������� �� ������ ,+�� �

?/6 +���� �� � 0��� ������� �� �� �������6 E�0�����

0��� ����������� �� ����� ���� ,!� � � � 6� )111/�

��7��� �� �� ��� �� ���� ������� ��� �� ���� ���9

����� ���� ��������� �6�6 �� ��������2 �? ��� �D����9

�� �� �������� ,+�1( ��� +�)&& ������� 02� 31/�

�� ������� �)&�( �� �2�? ��� �D���� �� �� �(

������� ,���� ���������� ��� ��� ������� 02�

!=.& ��������/� � ���������� ���� ��� ���� ��������

����� ��� �� ��7���� �� ��������� +3!

�� � )�=< � !-)& �� � =�?) � !-%�. �� � .�$&' �� �(�������� +3! ��� ()�%)�!-)& ��� )&)�$)� !-%�.

��� )<$�<$648� ������ �� ��5����� �� ������ �� ���6 ?' ��

�� � 0��� ��� ���� �� �� ���� �����6 �� ����� �� 0��

� 1%O6 E�0����� � ���� �� 48� ��������� 0�� �

������������ �� �� ���� ������� �6�6� ���� � �������

�� �� ��� �����7�� �� FF���� �� �GG ,:�/� 0���� 0��� ��

���������� ��� �� ����� ,+-/ �� �� ����6 +- �� ���

0��� ����� ���� 0�� ����� � ���� � ������������

�� �� ��������6 +�� ����������� �� +!3� !-)&� ���

!-%�. ���

� 3������� !-%�. � !-)& +!3 ��� ��� +- ,� �&�&&)� H� �������@3������/ ��� :� ,� � &�&.� �9��/'

� *������ !-%�. !-)&� !-)& � +!3 ,� � &�&)�H� �������@3������/ ��� +-' !-%�. � !-)&

,� � &�&)� �9��/� !-)& � +!3 ,� � &�&)� �9��/ ���:�'

� 8�������� !-%�. � !-)& +!3 ��� ��� +-

,� � &�&&)� H� �������@3������/ ��� :�

,� � &�&)� �9��/'� 4�������� !-%�. � !-)& ,� � &�&.� H� �������@

3������/� !-)& � +!3 ,� � &�&)� H� �������@

3������/ ��� +-' !-%�. � !-)& ,� � &�&)� �9��/�!-)& +!3 ��� :�6

!-%�. ����� � �� �� ��� �������� ������� ,��� 4�9

������ �� ����� � �0�� ����������� ��� +- ��

0��� � �� ����� �� �� ���� ����� �� :�� �6�6� �� ��

0�� �� ������ ������/6 +���� ����������� ��� ��9

���� �� ����������� �� ��� �� +- ,�� :�/ ������

��������� �� ��� ��� ���� �������� +!3

�� � ?.= � !-)& �� � =$< � !-%�.�� � .(< ���

+-' +!3 �� � %$ !-)& �� � ?% � !-%�. �� � <(��� :�6

�� ������� � ����� �� ���� �� 0�� ��������

0�� ��9��� 0�� � +� 9�� 0�� ���� ��� ���� ��� ����

���6 +�� ��� ��� �� ���� ���������� ��0��� ��9

�� � �� ����� ��5����� ��� �( ������� � �� �����

������� ���� �������� �� �� ���� ���� ����� ��

���� ,� � &�&)� 3������ �/6

+�� � ?

;������� �� �( ���#������� ��������� 0�� ,A31/ �� 0���� ��������� ����� �� �������� ��� �( ������� ������� �)&�(�� �� 0�� ,A!=.&/ �� 0���� ���������� ����� �� ��������� �� ������ ,��������/ ��� � ���� ,�( �������/ ������ �� �������

����� ,+3!� !-)&�!-%�./ ����� �������� ����� �� ��� ���

�������� ���#������� ,��������2�� !-/ ����#������� ������� ,������� �)&�( �� �2�� !-/3�� �� +�1( +�1(A31 +�)&& +�)&&A31 +�9. +�9.A!=.& ;;� )91% ;;� )91%A!=.&

2��

3������ &6&. &6&. &6&= &6&? (6$)�� ?.6).��� )6<?� %6(&�

*����� &6&< &6&= &6).� &6&% )6%? %61(� & &

8������� &6).�� &6)<�� &6&1� &6%1��� &6%< ))6..��� &6&? &61)

4������� &6&% &6&(� &6&= &6)1�� &6?) ).6)<��� &6&% &6=$

��)&

3������ &6)?� &6))� &6)) &6)(� )61<� ?%6$=��� &6)) ?6)%��

*����� &6&. &6&$ &6&. &6%&� )6)< )(6$.��� &6&$ &6<.

8������� &6??��� &6?&��� &6%=�� &6=?��� & %6&1� &6&? &6)1

4������� &6==��� &6=?��� &6=$��� &6$$��� )16=&��� )$6..��� &6.( ?6?)��

��%�.

3������ &6&1� &6&(� &6)& & (6.?�� .=6?<��� &6.= =6))��

*����� &6))� &6)<� &6).� &6=%�� &6<) )<6?=��� & &6)%

8������� &6%$��� &6?&��� &6%)�� &6.(��� .6&=�� ?(6%&��� &6%. %6&(�

4������� &6<$��� &6$)��� &6$&��� )6).��� )6=<� ?%6)=��� &6&1 ?6(&��

� ����� ��� ���������� �����7��� � ������ 0�� ����� � ������� �� � ,�9��/� � � � &�&.' �� � � &�&)' ��� � � &�&&)6

�( +���#�� � ��( � ,#����#� �� -'���. �/'�0�/�1 )$?)

���6 ?6 ;������� �� 48� ������ �� ����� ��5����� �� ������� ���� ����� �� ������ �� ���� ���� � ��� �� ,+3!� �� ���� ��' !-)& ����� � ����� )& ��' !-%�.����� � ����� %6. ��/6 +-� �� ������ )&?6 :�� ���� �� �6

)$?% �( +���#�� � ��( � ,#����#� �� -'���. �/'�0�/�1

� �����������

� 0��� ����� �� ������� � ,!�E� ��� !�E9������9

����� ������������������� ��� ���� ����9!�E ��9

����� � 5� ���������� �� �0 �� ��� �� 0���� !�E��

����������������� ��������� ������� �������� ��/

��� ����� �� �� ����� �������� ��� ��� ��� �

�����7��� ��� � ���5 ��� ����� �� �����6 +�� �� 9

��� �� �� ��� �� ������� �� �������� �� �������

������� �� ���� ����� � �� �� ���� �� ������ ,8�� ����

)11%/6 ;� ��� ������ 0� ��� ���� �� ����� � �����9

����� �� �������� ����� �� ���������� ��� ����9

������ �������� ���� ������� �������� �� ���� ��

�������� ������� ������ � ���� ���� �� 0�� �����

������ �� � ����6

��� � ���� ��� ������ ������ ��� ��������

������6 +�� ������� �������� �� �� ������� ������

����� ������ � 0��� ������� �� �� �� ������� ���9

������ �� �� ���� ��� ��6 +��� ������ �� ��� ��

D�������� ��� D�� ����� ���������� ��0��� ��

� ���� �� ����� �� �� ��� ������ �� ���� � ������

��� ����6 ����������� � ���� �� ���� �� � � �����

������� � � �� ��� ����� �������� 0�� � ������

������ � �� ��������6 +��� �� �������� �� �� ���9

����� ��������2�������� �������� �� �� ���� �������

��� �� ������� 0�� ����� ������ �� � ����6 +��

����� �� ���� ������� � �������� ����� � ��9

��� �� �� ��������� �� �� ��� �6 *�� ���� � ��9

����� ��� �� � �� �� ������ � ���� ��������

������� �� ���� � ������� �� �� ���� ���� ��� ��9

������6

������ ����� � ����� �������� 0�� ����

���� �� �������� �������� �� �� ���� �� ������ ����

��� � ���� ������6 E�0����� � ���� ����� � ��9

��� ���� �������7�� ��� � ����� �������� ��

���� �� � ��� ����� ��5����� �� ���� � �������

�� ��������6 �������� ���� �� ���0 ��� ����� �9

��� 0�� �( ������� ��� �� � ���� �����6

48� ������ �� ����� ��5������ ��� ���� �� ��

���� ������ ���0� � 0��� ���������6 ����������� 0�

����� � ���� ����� ���� �� ���� ���� � 0�� ���

�������� ��� ������ ������ ,�% � &�1.?(/ ��� �(

������� ��� � ���� ������ ,�% � &�1.$=/� �� �����9

��� 0�� ������� ����� ,�������� � � 6� %&&&'

���� � � � 6� )11<' 4��� � � 6� )111' ������� � � 6�

)111' -����� � � 6� )111/ ��� 0���� �� ����� ����

0�� ������� �� ����� ���������� �� �� ��� ����

�������6

�������� !- �� � ��� ������� ���� ������ ��

������ ���� ������� �������� ���������� 0��

�����D��� ������� ���������� �� �� �������6

����������� !- ������� �� ������ �� � �������

�� �� �������� ���� 0���� �� ��� ������ �� �� ����

�� �� ���� ��6 ����� ����� ������ ������� �

� �0�� � ������� �� � ��7�� ��� �� �� ����� ����9

�� � ���� �� ,�3 ����������� !������� �������

)11</6 � ��7�� ���� �� ����� �� �� ������

�������� �� ���� ������� ��� ���� � ���� �������

����6

+�� ��� D�� �� ������ �� �� ��� �� � ����

�������� �6�6� ��M�� ��� ���� ������ ������� �����9

��� ���� ������ ��6 ;� !����� � ���� �9����� �0� ��

8������ ;� �� �� �������� ������� �� � ���� ��

�� ���� �� ����� ��� D�� �� � � ���� ���� ��� �

�� ��� ������ �� ��������� �� 0�� ������� ��9

��������� ����� �� �� ���5��� �� �� �0�6

-�������� ����� �� �� ������ �� ������� ��� � 0��

����� ���� �� ������ ����� �������� ���������

�� � ������� � � �� �������� �������� �� 6

+���� ��������� ���� ��� ��� ����� ���� ����� ��

��� �� ���� ������ �� � ����6 3������ ����� �9

���� ��������� ��� ������ �� ����� ��� �������

�� �� �������� ����� �� �������� ����� ��� ��9

�������� �� ������� ��� ���� �� ������� ,#���� �

� 6� )11./6

I�� ��� ������������ �� ����� 0� �������� ��

�������� �������� �� ���� �������� �� ���� ����� ��

���� � ��� ��6 +�� � ��7�� ,!-%�./ ���� �� ���

������ � �� ��� �������� ������� �� �� ������� ��

��� ��� ���� ,��������� ����� ��� ����� ��5�9

����/6 +��� ������� �� �� ���� � ������ ��� +3!

��� ���� ������������� �� ��� �������� ��� �� ���9

����� ����� �� ����� ��� ��������� �� ���� ��

����������� ��� ����� ��� �6

*�� ���� � ��� �� ����� ���� �� ������ ��

��������� � ��� �� ������ ���� �� �������� ��9

��� ��6

4��������� �� 48�9������� �������� ������9

����� 0��� ����� �� ������� ���� �������� ��� �� 9

��� ������� ����� � �� �� ���� � �� �������

�������� ����������� ������� ���������� ���

������� ,���� �� ��� ��� ����� ���������/6 ���9

�������� �� 0��� ������� �� �� �� ������� ��������

�� ������� ���������� �� ������ 0�� �������

��������� �� ���� ������ 0���� �� ����� � ��� � ��9

��� ���������� �� �� �� �� ������� ���������� ��9

������� �� ����� ,�����9����� ���� ���������� ����

����������� �����7� 48� ������/� ��� ���������� ��

�� ��������� ,02� ����� �� ��������� �������

���� ��/6 +�� ��� ��������� �� �������� ��

�������� �������� ����� �� ����������� ���9

���� ���� �� �������� � ���� ����� �� �� � ���

�� �� �������� �� � ���� � ��� ����� �����6 +��

���� ��� ����� ������ 0� ���� ���� � �� ��������

��� �� �� � � ������ ��� D�� �� ������ 0��

������� @������ ��������6 ���������� �� ����

������ � ����� � �� � �������� ���������� �� ���

����������� �������6 �� ������� �� 0��� ������� ��

��0��� �� ���� � �� �� ������� ������� ��� �������

�� ������� ��� ���� 0�� ��������� � �� �� ����� �

� ��� ��� 0����� ��� �� ����� �� ���� ��������2

����7� ��� ���� �� ������6

�( +���#�� � ��( � ,#����#� �� -'���. �/'�0�/�1 )$??

�������� �������

�������� ���� ��� ��� ���� 0�� ������� �� ��

+�0� ������ �� !����� �� �-8� �� !����� ��� ��

-������ �� �� ����������� ;� �6

����� �� �

!-� ����� �� ����' !-%�.� ����� �� ����0�� ����������� ������� ��� ��� %6. ��'!-)&� ����� �� ���� 0�� ����������� �������

��� ��� )& ��' +3!� �� �������� ����� ��'

3�:�� ���� � �� �� � �����������' 4-3*� ���9��� �� ������' +-� �� �����' -�� �0 �� 9

��� �������' ��9��� ������ �����' +� 9��� � ���������' ; �%91) ����� ��������� �� ��� ������' +�9. ���������� ���� ����������' !=.&� ��������� !9=.& ��� ��' :�� � ���� �� 48� ��������� 0�� �

������������ �� �� ���� ������� �����7�� �� FF����

�� �GG� !�E� � ���� �� ������� ������������6

����������

��������� Q686� J��������5�� -6�6� !������� ;6:6� J�������

�6�6� -������ 36�6� ������ Q6� Q������� �6� :������ +6�

3���� � �6� %&&&6 ;�������� ���� �� �� ����� �� $�)%9

������ ����R�S���������9������� �������������� �� ��

������ ������ ��� ������ �� ���� ��� ���������� �� ����6

������ �6 ).<� )11@%&.6

������ 36� H������� 36� H������� 36� �5������ K6� -�����9

��� E6� )11$6 E��� � �������� ������ ����� ��� �����9

����� ��������� �� ������ ��� ����� ��������

���#������� K:)&=) ��� �������������� �����6 -��9

������� )%� ?$?@?$$6

�� � T6�6� K����� I6�6� I� ������ +6T6� T���� 36-6� )11%6

-������� ������� �� � ������ �� � 5� �������������6

�������6 3��6 +����� 6 %<� ?1$@?116

������ T6-6� J0�� �9H ��0������ :6� T����� �6� E������ I6�

#������� �6� -�5���� E6� -��5� E6�6� )11(6 ���������

!=.& )�)� � ��>�� !=.& ��������� �� ����� � ���

�������� ��� ��������� ������6 �������6 !������� 6

.<� ))&.@)))&6

������� I6 6� ������ 46�6� H������ 36�6� )11(6 ���9���

������������ �� ������ ��� � ���� ��� ������� ���

������ �� �� ������� ��� �� ���� � ���� �� �E3-*�

����6 ������� E�� � 3��� �� 3���6 �������6 E�� �

!�����6 )&<� ()?@(%?6

��� ��� �6�6� I���� ��� -6� ��������� 6� 3���5�� E6� ����� +6�

3��������� E6E6� )1116 48� ����� �������� ���� ��

�������� ��� � ��� ?9���������������6 -��6 #��6

=?1� ?&$@?))6

�������� :6� ����� -6� !�� �� -6� ���������� :6� :������� Q6�

-�������� �6� )11$6 -��������� ��� ������� ��� ���� ��

�������� ����� �� ���� �� ���� �� !���6 T6 �������6

!��� 6 +����� 6 *��� 6 )<� )=$@).<6

�� ������9:������������ 6� *������ 86� #���������9� ������ �6�

Q� ����� 9�� ������� �6� )11$6 48� ������ �� ����

��������� ���� ��� ���� ��� ���� ������ � �����

� ����6 �������6 -� 6 -�����6 ?&� ))@%&6

���� ��� -6� ���������� !6� ������� T6-6� 3� ����� �6-6�

)11.6 ��������9������� ������� ��� ���� �� ��������

�������� �� ����� �������� ����� �� ���� ����

����� ��� ,3���/6 ���������� ?&� $?.@$=&6

���� �� �6�6� � ������� 36� :��5�� �6� )11<6 +�� �����9

�������� �� L����D���� ���� �� ��� ��� ���� �������

���������� ���������� ���� ���������� ��� 48� ����59

��� ,���� �����/6 -��������� ))� =1$@.&=6

������� +6�6� I�� !6�6� I���� 6�6� ��� E6� ��� �6E6� H��

K6�6� )11$6 -��������� ��� � ���� �� ������� �����9

������ ����� �� ����� ���� ����� ���5��� �� � �������

�� +��0��6 -��6 #��6 ?()� ).$@)<)6

���0� T6�6� I����� T6:6� ��>��� �6-6� �� J6� �0���� 46#6�

)11=6 +����� ��� ���� ��������� �� !-%�. ��� !-)&

������ �� �� 3������ �� �������� ��� N�� �� 3���6

����6 �������6 %(� %&<)@%&(&6

4�-������ 46-6� 3�� ��� -6;6� �� � 46�6� )11=6 -�����

����� �� �������� �� ��� �� �������� ��������� ��

����� ��� � �����R�S�����6 �������6 -� 6 -���6 %=�

%<%@%$.6

4���� I6P6� 3���� E6-6� J��� E6:6� ��� �6 6� *��� �686�

)1116 :��������� �� ���������� ������������ ����� �� �

0��� ������ �� �����6 -��6 #��6 ==%� <1@$$6

����� +6� 3���5�� E6� I������� +6� E�������� +6� E��������

K6� )11$6 ?98��������������� � �0���� ������� ��9

���� ��� ������� ����� ���������� ����� �� �����

������ ��� �������� ����� ���6 �������6 3��6 +����� 6

?)� %$$%@%$$<6

���������� 46I6� * ���� !6 6� *G8�� � H6 6� )11.6 +��

���� ������ � ������������ �����06 -��6 #��6 ??1�

[email protected]

����� :6�6� ������ �686� I�� K636� ��� !6!6� K���� 46:6�

���� �6�6� )1116 �������������� �� ������� ������ ��

!-%�. ��� !-)& ������ � �� �������� ��� ���� ���� ��

����� +��0��6 3��6 +�� �������6 %?=� %&?@%)%6

�������� Q6� :������ +6� E��� 36� -����� �6� !�� � T6-6�

)1116 -��������� �� �� ����� ����� ��� ������ �����

����� �� �� ���� ���6 T6 � 6 +����� 6 )1� =%)@=?&6

:�������� 46� E�0���� 36� ���� �� �6� :��5�� �6� H���� 6�

-��������� +6� -� ����� �6� 8����� +6� *��� +6� Q����

36� J������ �6� )11=6 #������������ ��� �� ����������

�� ������� ������ ������6 -��6 #��6 ?)%� %)$@%??6

E� ���� 46� ����9������� T6� ����� T6� E������ I6!6� �5��9

���� #6� )11%6 N����7����� �� ������ �������������9

������� ������ �������� ��� ��������� ������

��������6 �������6 3��6 +����� 6 %<� %%&$@%%)?6

H��� �6K6� ������ K6I6� ����� �6K6� ��� E6� )11(6 �����9

���� ��0��� �� ������ �� � ���� �� ������� �����9

������� ��� ���������� �� �������� ����� �� ��� ��

���� +������� ���� +��0��6 �������6 #��6 $(� =?@=16

-� ���� #636� ������ �6I6� 3������ I6 6� -����� �6:6�

!��5���� I6�6� #�� #��� T6 6� )11$�6 -��������� ��

48� ������ ���� ������� � %=.& -E� � �����������

��������6 #����6 #��6 )=(� <&(@<)$6

-� ���� #636� ������ �6I6� 3������ I6 6� -����� �6:6�

!��5���� I6�6� #�� #��� T6 6� )11$�6 -��������� ��

48� ������ ���� ������� � � ����������� �������� ��

�� �� � �� ���� ������������ ���D����� ���� ,(?.6<%

��� (=$6$= -E�/6 #����6 #��6 )=(� <)(@<%$6

)$?= �( +���#�� � ��( � ,#����#� �� -'���. �/'�0�/�1

-����� 46-6� ����� �686� )1(?6 #������ ����� ��� ��

�������� ���������� ��6 -��6 #��6 ))?� )$?@%).6

-���� ����� �6 6� ������� T6H6� )11(6 48� ����� ����59

��� �� �D���� ��������� ��� �� ����� �� �� �� ��

���� ����� �� ����������� ���������6 -��6 #��6 ?11�

)?.@)=$6

-������� 36� J��������� �6� ������� 46� �� ������� �6�

����� �� !6� #��� �� 36� -����� -6� Q� ������ -6� 8�����

:6� )11(6 -��������� ��� � ���������� �� ��� ����

��������� �� ������� ��� �� ���6 �������6 -� 6 -���6

?)� =&%@=&(6

-���� �6� ���5��� 36� )11$6 ��������� ��� �������� ��

����L������� ���5���� ���� ����� �������� ��9

���� � 7�� ,!-%�./ ��� ������ ���� �� ,!-)&9%�./ ��

������ ��� ������ ���6 +����� 6 � 6 !������� 6 )..�

%=.@%.%6

-������� :6� ����� #6� !����� �� 6� -������� #6� ������

!6� 3��������� �6� -������ #6� 3��������� �6� )11$6

������� ��� ���� ��� ��� ����� ������ �� �������� ��9

��� �� ����6 T6 �������6 !��� 6 +����� 6 *��� 6 )<�

)??@)=<6

-������ 36�6� ��������� Q686� ������ Q6� Q������� �6�

:������ +6� 3���� � �6� )1116 ����� �� �� ����� �� 89

������989���� ����9������� �������������� �� ��� ���

���������� �� ���� ,���� �� ��� �*-�+ �����/6 ������

�6 )?(� ?$@==6

-���5�� Q6� Q������ 36� 3����� 86� )11(6 !���� �9�����

������� ���� ����� ������ ������6 3����6 T6 I��5

�������6 E�� � %=� =()@=(.6

8������ 6!6� E� ����� +6#6� ���5�� I636� �� ������ H6�

+������ �6I6� ����5��� -6�6� �������� �6!6� )1116 E�� ��

0����G� !�� ��������� 0�� ������ ������ ��������9

���� �� !-)&� !-%�.� 3*%�= � E

�� ��� *?6 ��6 T6 #����6

���6 ���� -��6 )<&� ))$@)%.6

8�� ���� !6�6� )11%6 -��������� ������ �� ��� �� �������9

���� �������� �� ����� �� �� ��� ����� ��� ��������6

-��6 #��6 %$<� ))$@)%?6

!����� �6-6� !����� T6-6� )1(=6 +�� ����� �� ���������� ��

������� � ����� �� ������� ���� ����#������� �������6

;�� Q���� 36� !����� T6-6 ,���6/� -��������� +�����6 �

!������ ������6 ;# !����� *������ ��� ���� 6

))1@)=$6

!�����5��� E6� 3�������5��� -6� Q� ����� �6� 4������5��� -6�

)1116 :��������� ����� �� ��� ��� �� ���� ����� ��

3 ���5�� ������ �� �� ���� ����� �� ����� �� �6

8�� ���� =<3� )<@)$6

!� �� !6� ��������� �6� ��������� 86� Q����� -6Q6� ��������

�6� ������ 36� #����� �6� )11%6 ����� ��� � ����� ��� ��

������� ���������� ������ � ��� ��� �����������

������ ������6 -��6 #��6 %1(� ))?@)%?6

!� �� !6� ��������� �6� #������ �6-6� ������ �� �6� �������� �6�

�������� ;6� #����� �6� )1116 ���� ����� � ������ ��

����������� ���������� 48� ������ �� ����� ��5�9

���� ��� �� �� � �� ��������� 0�� ������� ��� ����

���6 -��������� )=� [email protected]

#����� �6� !� �� !6� ��������� �6� �������� �6� ������ 36�

��-������ �6� )11.6 ��������� ������������ �����

������ ����� ���������� ��� ������� @������ � ����

��� �������� ����� �� ����������� � ���9��� ����

,)11&@)11=/ ���� � ������� ;� ��� �0�6 ���������� ?&�

)(%1@)(=.6

3����� 86!6� -����� -6+6� +���� #6#6� 3��������� �6 6� )11(6 �

��� � �����D�� ��� D�������� �� �0 ��� � �� 48� ���9

��� �� ��������� �� �6 ����6 �� #��6 )$.� )(=@)1)6

3��� :6� E��� � 36� E� ���� #6� 3���� � �6� E������� �6�

)11<6 4������ �� 48� ����� �� ����� �� � 0�� ��

���� ����� ��� ���� �� ������ ��� ����������6 +����� 6

�6 ((� 1)@1(6

3����� 4� -������� �6� H���� 86K6� �� ����� ��� 6#6�6�

*5����� #6�6� :���� � 6�6� )1116 :��������� ��

���������� ������� ������ �� �������� ���� �� ����

3��� !�� �� ����� 6 -��6 #��6 ==<� (?@1=6

3������ 36�6� 3����9-����� #6� ������ T6-6� ����0��5�

46�6� )11(6 48� ������ �� ����� � � ���� �� 3�� 4����

���6 -��6 #��6 ?11� <.@(.6

3���� ���� T6�6� )11%6 4����7����� �� � ���� �� �������

������������ �� �����6 T6 ;��6 -������� 6 1� .?@<%6

+�������� T6� 3� ����� 36� !���� �� E6� 35���� �6� +�55�����

6� 8���� �� +6� 3����� -6� !��>� �� Q6� 3����� -6�

E������� H6� )1((6 !� ���� ��� ������� �������� ���

���������� �� ����� �� ��� ���� ����� �� ������ ����

���� �� ��M�� ������� ��� ������ ����� ���������6

�������6 3��6 +����� 6 %%� )%%(@)%?=6

�3 ����������� !������� ������� )11<6 ��� N�� ��

������� ��� !����� �� -���6 �!� <&&2!91.2&&)��6

I�����5��� #6� E������� �6� I������ #6-6� ��������� E6�

)11(6 ����� ���� ��0��� ��9 ��� !�E ������� �� ���9

����� ���� � ��� �� ��� ���� ������� ����������6

�������� 6 �������6 3��6 =&� )%<@)?<6

I� ���� T6+6� !������ !6 6� !����� T6-6� 4����� 46#6� )11(6

��� ����� �� �� ���� ����� �� � ����� ��� �� �������

�� 48� ������ �� �� �� � �� � ������ �����������

6������ ����� 6 ,-� ����� !� ������/6 -��6 #��6 ?11�

([email protected]

J���� I6� K�� 36E6� )11(6 ����� �� 0� ��0 �������� �� ��

���������� �� ������ ������ ����� �� ����6 -��6

#��6 ))� )?)@)?$6

J���������� �6H6� H���� #6� #��������� E6� )1$.6 � ���� ���

���� ������ ������� �� ������� ����� ��������9�����

����� ���� ���������� ��� ������� ������6 -��6 #��6

%(� ?()@?((6

��������� ������� �� � ��� ����� ��� �������� ������� � ����������� �� !����� ������ �� ���������� �� ����������� ��� �� ��� �������� �������� � ��� � � ��� ����� �9��� � ��������� ����� ��� ������� ������� �������� ������ �� �� ��� �� ��� ��� � D��������2D�� ����� ��� ������� �� FF������ ������GG6

!�������� ������� �� � �������� ����� ��� ������� ���� ����� �� ���� FF����������� ��� *�������� -�9��������GG �� �� ����������� ��� !�������� #������ ������ �� ��� ��9#������� �� ������� 0�� �� ;����� ��:������ �� �� ��������� �� !���� ��� �� � �������� FF����9���GG ���������� ��� �� �� FF����������� N�� ��GG ��� �����6

"���� �������� �� � ��� ����� ��� �-8� �� �0���9�� ���� ��������� ���� ���� ��� ���������� �������� ����� ��48�� �� ����� �� ���������� �� 48�� ���������� ��90��� 48� ������ ��� ��������� �������� ��� ��� ����9������� ���������� ����� �� ���� ��� K��� ��� �� 0� �� �� ���� ����� �� ����� ��� �� �� �6

�( +���#�� � ��( � ,#����#� �� -'���. �/'�0�/�1 )$?.

#���� #��� �� � ��� ����� ��� ���������� � �� ����������� !����6 ���� ������� �� ����� 2���������� � ����� ������ ������� �� �������� � ������ �� ���������� �� �������9���� ��� ��� ����� ��� �� ������ 0�� �� �� � �� ��������� ����� �������� ������������ ��� ��������� ������9�� ��6

����� ����� �� � ��� ����� ��� �������� �������� �� E����:������ ��� ����������� -��������� � �� ��������� ��!����6 E� �� � -����� �� ��-3 ��� �:;6 E�� 0��5 ���� ���0�� �� ��������� �� ����������� ������ ������� ��� ����� ����� �� ��� ����� ����� �� ������� ���� ���� ����� ������ ������� �� ����� GG����9���GG ���������� ���6

)$?< �( +���#�� � ��( � ,#����#� �� -'���. �/'�0�/�1