Rapid, large-scale generation of Ds transposant lines and analysis of the Ds insertion sites in rice

12
TECHNICAL ADVANCE Rapid, large-scale generation of Ds transposant lines and analysis of the Ds insertion sites in rice Chul Min Kim 1,y , Hai Long Piao 1,y , Soon Ju Park 1,y , Nam Soo Chon 1,y , Byoung Il Je 1,y , Bingyao Sun 1,2,4,y , Sung Han Park 1 , Jin Young Park 1 , Eun Jin Lee 1 , Min Jung Kim 1 , Woo Sik Chung 1,2 , Kon Ho Lee 1,2 , Young Suk Lee 3 , Jeung Joo Lee 3 , Yong Jae Won 5 , GiHwan Yi 5 , Min Hee Nam 5 , Young Soon Cha 6 , Doh Won Yun 6 , Moo Young Eun 6 and Chang-deok Han 1, 1 Division of Applied Life Science, BK21 Program, Plant Molecular Biology & Biotechnology Research Center (PMBBRC), Gyeongsang National University, Jinju 660-701, Korea, 2 Environmental Biotechnology National Core Research Center, Gyeongsang National University, Jinju 660-701, Korea, 3 Department of Applied Biology and Environmental Sciences, Gyeongsang National University, Jinju 660-701, Korea, 4 College of Life Sciences, Suzhou University, Suzhou 215006, China, 5 Rice Division, Yeongnam Agricultural Research Institute, Milyang 627-803, Korea, and 6 Rice Functional Genomics Team, National Institute of Agricultural Biotechnology, RDA, Suwon 441-707, Korea Received 10 February 2004; accepted 24 March 2004. For correspondence (fax 82 55 759 9363; e-mail [email protected]). y The ®rst six authors contributed equally to the paper. Summary Rapid, large-scale generation of a Ds transposant population was achieved using a regeneration procedure involving tissue culture of seed-derived calli carrying Ac and inactive Ds elements. In the F 2 progeny from genetic crosses between the same Ds and Ac starter lines, most of the crosses produced an independent germinal transposition frequency of 10±20%. Also, many Ds elements underwent immobilization even though Ac was expressed. By comparison, in a callus-derived regenerated population, over 70% of plants carried independent Ds insertions, indicating transposition early in callus formation. In the remaining population, the majority of plants carried only Ac. Most of the new Ds insertions were stably transmitted to a subsequent generation. An exceptionally high proportion of independent transposants in the regen- erated population means that selection markers for transposed Ds and continual monitoring of Ac/Ds activities may not necessarily be required. By analyzing 1297 Ds-¯anking DNA sequences, a genetic map of 1072 Ds insertion sites was developed. The map showed that Ds elements were transposed onto all of the rice chromosomes, with preference not only near donor sites (36%) but also on certain physically unlinked arms. Populations from both genetic crossing and tissue culture showed the same distribution patterns of Ds insertion sites. The information of these mapped Ds insertion sites was deposited in GenBank. Among them, 55% of Ds elements were on predicted open-reading frame (ORF) regions. Thus, we propose an optimal strategy for the rapid generation of a large population of Ds transposants in rice. Keywords: Ac, Ds, rice, insertional mutagenesis, mapping, regeneration. Introduction Insertional mutagenesis has been a powerful strategy for assessing gene function. In maize, well-characterized trans- posable elements have traditionally been used to clone genes for which only phenotypic information is available (Walbot, 2000). Under certain conditions, endogenous mobile elements in rice such as MITE (Jiang et al., 2003; Kikuchi et al., 2003; Nakazaki et al., 2003) and Tos (Hirochika, 1997) have been used to generate gene-tagged populations. Anther culture, but not scutella/embryo cul- ture, greatly enhances the mobility of MITE (Kikuchi et al., The Plant Journal (2004) 39, 252±263 252 ß 2004 Blackwell Publishing Ltd doi: 10.1111/j.1365-313X.2004.02116.x

Transcript of Rapid, large-scale generation of Ds transposant lines and analysis of the Ds insertion sites in rice

��������� �����

������ ����� �� ������� �� �� ����������� ���� ����������� �� �� �� �������� ���� �� ��

���� ��� ������� ��� ��� �������� ���� �� �������� �� ��� �������� !���� "� ����� !����� �����#�$��� ��� ��� ��������� %��� ������ &�� ��� ��� ��� ��� ����� '�� ��� ������#� ��� �� ���#� %��� ��� �(� ��� ��� �(�

%�� �� '��)� *��+�� %�)� ��� � ��)� %��� ���� ���,� -�� '�� %��,� ��� %��� &��, ���

�������� ��������������� �� ��� ���� �������� ���� �������� ����� ��������� ������� � ������������� ������� !����� "���� !#�

$��������� %������� &���������� '��(� ))*+,*�� �������-������������ ������������� %������� !��� ������� !������ $��������� %������� &���������� '��(� ))*+,*�� ������.��������� �� ��� ������� �� -������������ ��������� $��������� %������� &���������� '��(� ))*+,*�� ������/!������ �� ���� ��������� ��0��� &���������� ��0��� ��1**)� !�����1 ��� ��������� 2������� ����������� ������� 3��������� ������� )�,+4*.� ������ �� ) ��� 5��������� $������� 6���� %������� 3�������� �� ����������� �������������� �� ��7�� //�+,*,� �����

�� ����� �� �������� ����� � ����� �� ��� � ���� ��!� !���"�!#��# � $%�& �'� (( )(* *+,+� �-.��/ ���#0#!#1�� 1"#� � 2�3 ���� 4�"� "�& ����!�" !#�������� �5��//� �! ��� �����

�������

������ ����� �� ������� �� � �� ����������� ���������� +�� � ��.� ���� � �������� ��� ���

��.��.�� ����� ����� �� ������.� ���� ������ �� ��� ��� ��. �� �����/ "� �� 0# ����� ����

��� ����� 1�+� �� ��� �� ��� �� ������ ����� ���� �� �� ����� ����� � �� ��������

������ ������������� ��2�� � �� �34#35/ 6���� ���� �� ����� ����+�� ����1���7����� .�

����� �� +�� 8�����/ !� ���������� �� � ���������.� ������ ����������� �.� 935 �� ������

����� �������� �� ���������� ���� ���� ������������� ���� �� ����� ���������/ "� �� �������

����������� �� ��:����� �� ������ ����� ���� ��/ ���� �� �� �+ �� ��������� +� ���1�� ����������

�� � ��1�2��� �������/ 6� 8 ��������� ��� ���������� �� �������� ������������ �� �� ���

���� ���������� ���� ���� �� ���� ������ ��� ��������� �� ��� �������� ��������� �� ��;��

� ��.���� ��� ��� � ������� 1 �2����/ !� �����7�� �#<9 ���=����� - 6 �2�� �� � ��� ���

�� �39# �� �������� ���� +�� �.����/ >� ��� ���+� ���� �� ����� +� ��������� ���� ��� ��

�� �� ���������� +��� ����� ��� ���� ��� ����� ���� ?(,5@ 1�� ���� �� ����� ����� ����

������� ����/ ����������� ���� 1��� ��� ������ ��� ����� ����� ���+� �� ��� ������1�����

������� �� �� �������� ����/ >� ����������� �� ��� ����� �� �������� ���� +�� ������� ��

*�!���/ 6��� ���� ))5 �� �� ����� +� �� ���� �� ��������� ���� ?A�0@ �����/

>���� + ������ �� ������� ������ ��� �� ����� ������� �� � ��� ���������� �� �� ������������

�� �� /

��+����B ��� ��� �� � ���������� ��������� ������� ��������/

"������ ����

�#"����!#�/ .���1�#�"�" ��" ���# � �!6��%�/ "�����1� %!�

�""�""�#1 1�#� %�# ��!# �# .��7�8 6�//- ���� ����7�� ���#"-

�!"��/� �/�.�#�" ���� �������!#�//� ���# �"�� �! /!#�

1�#�" %!� 6�� � !#/� ���#!���� �#%!�.���!# �" ����/��/�

$9�/�!�8 ����3 :#��� �����# !#����!#"8 �#�!1�#!�"

.!��/� �/�.�#�" �# �� � "� � �" �36- $;��#1 �� �� 8 ���+�

<�2� �� �� �� 8 ���+� ��2�7�2� �� �� 8 ���+3 �#� 6��

$���! ��2�8 �**)3 ���� ���# �"�� �! 1�#����� 1�#�-��11��

�!��/���!#" �#���� �/����8 ��� #!� " ���//�=�.���! �/-

����8 1����/� �#��# �" ��� .!��/��� !% �36- $<�2� �� �� �� 8

6�� ����� '������ $����3 (<8 �(�>�,+

�(� � ���� ?/� 26�// @��/�"��#1 ���

�!�A �� ����=B �+,(-+�+C ���� ����, &

���+3 �" �#���� �/���� �" 2#!6# �! ��!�� � .�#� ���/!��

�/�#�" $D!#!8 �*'+38 � .�B!� /�.�����!# !% �"�#1�36- �" /!6

�� !���� !% �� �""��� /����/ 1�#�" ��� �#�!1�#!�" ����!-

���#"�!"��/� �/�.�#� 6���,8 6�� � �" .!��/�7�� �#���

/!#1-���. �//�" �/����8 ��" ���# �"�� �! ��!�� � �#

�&��#"��� !//� ��!# !% ��1�#������ �/�#�" $����! �� �� 8

���+3 �!6����8 �� ��"� !% � /�.���� #�.��� !% !��1�#�/

�!#!� "���"8 6�� �!��/���!#" �# !#/� �/�� � .�#!� �!/� �#

1�#!.�-6��� .���1�#�"�" �! ����8 �-�� �#� ��� .��7�

�=�� ���#"�!"��/� �/�.�#� "�"��. ���� ���# ���/�7�� �"

.��# �#"����!#�/ .���1�#" �# �� � � .��# ���6�� 2 !% �

�-�� " ��.� �" ���� ���8�������-.������� ���#"%!�.�-

��!# �# �� � ��5����" �&��#"��� %� �/����" �#� �" ��.� �#�

/��!� �#��#"��� �# !#���"�8 ��� �=�� "�"��. !%%��" ���

����#��1� !% 1�#�����#1 #�6 �//�/�" �� "� !#���� ���#"-

�!"���!# %�!. � "�#1/� ��11�� 1�#�8 �#� !���/���#1 ���#!-

���� 6��� 1�#!���� �# �� �"���/�"��� �� ��� �"� !%

�������#�" �! �#��# � ��� �%4 ��# � !% 1�#� ���� ��!#8

����# �� 1�#�-��11�#1 "�"��." $� � � ������!#8 1�#�8 !�

�#��# �� ����3 ���� ���# �.�/!��� �# %�# ��!#�/ �� �

1�#!.� "�����" �# �#��# �� ���� ����!�" � 6��2 .�#�.�/

��!.!��� %�"�� �! ��� !��#-�����#1 %��.� $D��3 !% �

���!���� 1�#� ?� %�"�#1 � +(E .�#�.�/ ��!.!��� 6��� �

"��!#1 ���#" �����!# %� �!� !#���#�#1 ��� ���"� ��-��#�-

�#1 �!.��# F��� �#� ��� @�, � ������!# �!.��# %�"�!#8 �

F���=@�,>:�E "�"��. ��" ���# !#"��� ��� �" �#��# ��

���� $9� �� �� 8 ���+3 :"�#1 � 1�#� ���� ��8 ��� /! �/�7���!#

!% � %�"�!# !% ��� ���!���� 1�#� 6��� � �!"� 1�#� ��" ���#

�&�.�#�� �! ���#��%� ��� �!"� 1�#� $���# �� �� 8 �***� F�� !

�� �� 8 ����� :�������� �� �� 8 ����3 �" �#��# ��" �#

%�# ��!# �# ������ !���#����!# �#� �� � !#"������/� ��"��# �

%�!. ��� 1�#�- !��#1 ��1�!#8 �#��# �� ����" "�!6 ��1���

%��5��# � !% 1�#� ���� ��!# ���# 1�#� ����" $E�#����"�#

�� �� 8 �**(� 9� �� �� 8 ���+3 �!6����8 �#��# ��-�������

1�#�" ��� !%��# #!� �""! ����� 6��� .�����!# ���#!����"

�/"! �# 1�#�-��#"� ��1�!#"8 �� .�1�� #!� �� ��"� �! ���#��%�

��� 1�#� ��"�!#"��/� %!� ��� �&���""�!# !% � ���!����

� ������!# ��11�#1 ��" ���# ���/��� �# �� � �! !��� !.�

��� /�.�����!# !% /!""-!%-%�# ��!# " ���#"8 6���� ���#!-

����" .�� #!� �� !�"����� �� ��"� !% %�# ��!#�/ ����#-

��# � !% 1�#�" !� /����/��� !% /!""-!%-%�# ��!# $;�!#1 �� �� 8

����3 �# .��7� �#� ��8� ����8 �=��8 �" �# �#"����!#�/

���� /�8 �" .��#/� ��!��1���� �� 1�#��� .�#���/���!#8

"� � �" �!""�#1 �#� "�/4#18 �#� �" ���/�7�� �" � /!6- !��

.���1�# �#� 1���# �=�� �!��/���!# 6���!�� "�/� ��!#

���""��� �" � .�&���� !% ���#"�!"�� �#� �#���#"�!"��

�/�#�" �!��!���8 �# .��7�8 ��� 1��.�#�/ ���#"�!"���!# !%

� �" �"��//� (>��G �# � 1���# �!��/���!#8 �/��!�1� ���"

%��5��# � �����" ����#��#1 !# ��� !��1�#�/ �#"����!# "���

�����%!��8 ��� �%4 ��# � !% �#�=��-��11�#1 "�"��. /��1�/�

����#�" !# ��� "�/� ��!# " ��.� %!� ���#"�!"�#�" �#� !#

��� !#��!/ !� .��#��#�# � !% �=�� � ������ �# ���" ���!��8

6� "�!6 ���� �# �� �8 ����� 1�#�����!# !% � /��1� #�.��� !%

�� ���#"�!"�#� /�#�" �# �� � !.�/�"��� �� !.��#�#1

1�#��� �!""�" �#� ��1�#�����!# ��! �����" ��� ����#-

��1�" �#� �!��#���/ /�.�����!#" !% 1�#�����#1 � �!��/���!#

!% �� ���#"�!"�#�" ��� �/�#� ��1�#�����!# ��� ��" �""��

������

-���8�������� �� � �� " ����� �� ���������� ��

�������� ������������ �����

�! 1�#����� �# �#"����!# .���#� "�"��. �# �� �8 � �6!-

�/�.�#� "�"��. !.���"�#1 �# �..!��/� � �/�.�#�8

6�� � "���/��" ���#"�!"�"� �! .!��/�7� � #!#-���!#!.!�"

�� �/�.�#�8 6�" �"�� ��� ��� +(E ��!.!��� 6�" �"��

�! ����� �&���""�!# !% ���#"�!"�"� %�!. �# � ��

$��1��� ��3 ��� �� !#"��� � �����" � ������/ �#��!# 6���

����� �/���#����� "�/� � � ���!�" %�"�� �! F:E �#� � �

1�#�8 �#"����� �#�! �� $��1��� ��3 � �#� �� 6��� "���-

����/� �#��!�� �� �#�! �� � ��� �# ���8�������� �-��

�� �!� �! �"���/�"� � "������ /�#�"8 �6! /�#�" !#���#�#1

� "�#1/� !�� !% � 6��� "�/� ��� %�!. ���#"1�#� �/�#�"

���� 6��� !��1�#�//� ���#"%!�.�� �� � �-�� ����!��#1 �

1�#� ���� ��=� $���# �� �� 8 �***3 ��� �&���""�!# !% � �#

���"� /�#�" 6�" !#4�.�� �� �..�#!�/!� �#�/�"�" �!� ��

0��� �/ ��� � $�3 �#� �� $�3 �-�� �� �!�" �#� E!�����# �#�/�"�" %!�1��.�#�/ ���#"�!"�� �� $���3 �# �� �/�#�" $ 3 $�3 ��� ��� +(E ��!.!��� 6�" �"�� �! �&���"" � �� � ���#" �����!#���.�#��!� %�!. �!���! ��!���# �#�����!� �� $@����3 6�" %�"�� �! ��� +� �#� !%� �� ���! ��!.� @�(� $�EE:-E:��AA@�(�AA�� EE:+��3 6�" �"�� �" �"�/� ��!# .��2�� $�3 ��� F:E ���!���� 1�#� �#� ��� ?�� "�/� ��!# .��2�� 6��� �#"������#�! �� ��� ?��- !��#1 ��1�!# �" �&���""�� �� � ��!.!��� �#� � ���-.�#��!� %�!. ��� �� 1�#� �#� ! �!��#� "�#�����"�8 ��"�� ����/�8 %�!. ������8�������� �� �/�".�� -���� "���" ��� �#�� ���� 6��� ���!6" $ 3 E!�����# �������7���!# �"�#1 � F:E ��!�� 6�" ���%!�.�� 6��� -����-��1�"��� �� %�!. H�1 /����" !% �� �/�#�" �# !��1�#�/ �� �� � �-���#"����!# "��� $D�� ��3 �" �#�� ���� 6��� �# ���!6 ��� �������7���!# "�1#�/ !%1��.�#�/ ��� �" �&�� ��� �! �� �" "��!#1 �" ���� !% ��� !��1�#�/ �� �/�.�#� ����� �-�� �#"����!# "���8 6��/� "!.��� ��� �" �&�� ��� �! �&����� � .� �6��2�� "�1#�/ I�J .��2" � ��� 6��� � 6��2�� �������7���!# "�1#�/ ���# ���!���� ���#"�!"�� �/�.�#�" ���"� /�2�/� ��H� � /��� "!.��� ���#"�!"���!#���#�"

$��������� �� �������� �� " ����������� �� ���� �(+

� ?/� 26�// @��/�"��#1 ���8 6�� ����� '������8 $����38 (<8 �(�>�,+

"������ /�#�"8 �� �#����#��#� �/�#�"8 !% 6�� � �� � ������ �

"�#1/�- !���� �/�.�#� �#� "�!6�� %�// %����/��� �#� #!�.�/

���#!����8 6��� "�/� ��� �%��� �!""�#1 �! � /�#�"8 ���

H�1 $�����.!"�3 /����" !% ��� �� �/�#�" 6��� �&�.�#�� %!�

"!.��� .!��/��� !% ��9 ��� .!��/��� !% �� �.!#1 ��� ��

/�#�" ������ $���� #!� "�!6#3 ��� ����� .!"� � ������ /�#�"

6��� �"�� �" "������ /�#�" %!� ���" "���� �! ���/���� ���

1��.�#�/ ���#"�!"���!# ���� !% ��8 �6! /�#�" ���� �&�������

��� ��1��"� /���/ !% "!.��� ���#"�!"���!# � ������ �# H�1

/����" !% �� �/�#�"8 "+ �#� ")8 6��� �"�� �! �#"��� �#

� ����� �""�"".�#� !% ��� 1��.�#�/ ���#".�""�!# %��-

5��# � !% ��8 �� � �� �/�#� 6�" �#�������//� �#�/�7�� ��

E!�����# �/!� �#�/�"�" �! ��"��#1��"� ���6��# "!.���

�#� 1��.�#�/ ���#"�!"���!#"8 ��� �������7���!# "�1#�/ !%

�� � #�6 �� ��#� 6�" !.����� 6��� ���� !% �# �/�.�#�

�� �# !��1�#�/ �#"����!# "��� ��2� ��� �!#!� �� �/�.�#�8

1��.�#�//� ���#"�!"�� �� �/�.�#�" ��� ������� %�!. ���

�����!�" 1�#�����!# �����%!��8 ��� �������7���!# "�1#�/ !%

1��.�#�//� ���#"�!"���� �" �&�� ��� �! �� �" "��!#1 �" ����

!% ��� !��1�#�/ �� �/�.�#� �� ��� �-�� �#"����!# "��� �"

"!.��� ���#"�!"���!# !% �=�� ! ��" /��� �# ����/!�.�#�8

!#/� ".�// "� �!�" �# ��� �/�#� ���� #�6 �� �#"����!#"

�����%!��8 "!.��� �//� ���#"�!"�� �� �" �&�� ��� �! �&�����

� .� � 6��2�� "�1#�/ ���# ������ 1��.�#�//� ���#"�!"�� !�

��� !��1�#�/ �� �/�.�#� $��1��� � 3 ����� ��#���� �#�

4%���# �� �/�#�" %�!. +� "+ �� �/�#�" �#� �,( �� �/�#�"

%�!. �( ") �� �/�#�" 6��� �#�/�7�� $���/� ��3 D����//8 �)

�#� �'G !% "+ �#� ") �� �/�#�"8 ��"�� ����/�8 ������

1��.�#�//� ���#"�!"�� �� �!6����8 .!�� ��-#�1�����

�/�#�" 6��� !�"����� ���# 6�" �&�� ��� ��� %��5��# �

!% �#����#��#� �� ���#"�!"���!# 6�" �����.�#�� !# ���

��"�" !% ���#"�!"�� �� �!/�.!����"."8 �" �����/�� ��

E!�����# �#�/�"�"� ,( �#� ,)G !% 1��.�#�//� ���#".�����

�� �/�.�#�" ��� �#�5�� �� �!/�.!����"." �#� �����%!��

��!"� %�!. �#����#��#� ���#"�!"���!# �# "+ �#� ")8

��"�� ����/� ��� !����// %��5��# ��" !% �#����#��#� 1��.-

�#�/ ���#"�!"���!# �# ��� "+ �#� ") �� �!��/���!#" 6��� �'

�#� ��G8 ��"�� ����/� :"�#1 "�/%-��!1�#� %�!. ��� "�! 2"

��" ����� �# ���/� ��8 6� �������� ��� �!//�#���!# !# �

/��1� " �/� �! 1�#����� � /��1� "+ �� �!��/���!# �! !����#

�����/�� �#%!�.���!# !# ��� �� ���#"�!"���!# "����" !% ���"�

�/�#�"8 1�#!.� �� 6�" !����#�� %�!. �� )�� �#�������/

�� ��!1�#� ���� ��� ���# "�/%-��!��1���� %�!. +(�� ��

�/�#�" D% ���"�8 �� �)� �� �/�#�" 6��� "� �""%�//� �#�-

/�7�� �� E!�����# �������7���!# �! .�&�.�7� �#����#��#�

1��.�#�//� ���#"�!"�� �� �/�.�#�"8 !#/� ����� !� %!�� ��

"���/�#1" 6��� 1�!6# �! .������� %�!. �� � �� �/�#�

�!6����8 �" /�"��� �# ���/� ��8 ��� %��5��# � !% 1��.�#�/

���#"�!"���!# !% �� �# ��� �� 1�#�����!# 6�" �� �G8 6�� � �"

/!6�� ���# ���� !�"����� %!� ��� �����!�" �!//�#���!# �"�#1

��� "�.� 1�#��� �!"" $�'G� "�� ��!��3

���� �� ��8����� �� "

�# .�#� /�#�" ���!�1� "� �""��� 1�#�����!#"8 /!"" !%

"!.��� ���#"�!"���!# !% �� �# ��� H�1 /��% 6�" %��5��#�/�

!�"����� �# ��8 ��8 �#� /���� 1�#�����!#" �"�� ��//�8 6�

���� ��� /!"" !% "!.��� ���#"�!"���!# !%�� ���6��# �� �#�

��" ���!!# �/����" $���� #!� "�!6#3 ���!!# �/����" 6���

��-1�!6# %�!. #�6 ��//��" �%��� ��� �/." !% �� �/�#�" 6���

�� (>�( . ��!�� ��� 1�!�#� E!�����# �������7���!#

�����/�� ���� ���"� /�#�" "�!6�� #! ���� ���/� "!.���

���#"�!"���!# !% ��8 �#� ���� 1��.�#�//� ���#".����� ��

6�" #!� ���"�#� �# ��� "��"�5��#� 1�#�����!# $��1��� ��3

>�1� �� �#�/�"�" !% 1��.�#�/ �� ���#"�!"���!# �# �� �/�#�" %�!. � �#� �� "������ /�#�" �# ���� ����

�� /�#� $�� �/�#�"=�� /�#�"3

�/�""�"

D#/� !��1�#�/ ��8 G$K=�!��/ ��3

���#"�!"�� �� $���3

�! ���8 G $K=�!��/ ��3���8 G $K=�!��/ ��3�#����#��#� ���#"����!#"�8 G

"+ $+�(=+�3 �, $'�=+�(3 �) $'(=+�(3 ,( �) $��'=+�(3") $�,(=�(3 �* $'�=�,(3 �' $+�=�,(3 ,) ++ $(�=�,(3

��#����#��#� �� �#"����!# 6�" �����.�#�� �� �!/�.!����". ���� ��� �� E!�����# �������7���!# ��(G �" ��� �&�� ��� ��/��

>�1� �1 �#�/�"�" !% 1��.�#�/ �� ���#"�!"���!# �# �� �/�#�" %�!. � �#� �� "������ /�#�" �# ���� ����

�� �)� �� �/�#�" %�!. +(�� �� !% � "+ /�#��

F��.�#�//� ���#"�!"�� �� �! �� �#� !��1�#�/ �� $�# /���#1 "!.��� �//� � ���� ��8 G3

��)+ $�� �G3 *�*' $'' 'G3

��.!#1 � �!��/ !% �� )�� �� �/�#�"8 �� �)� 6��� "� �""%�//� �#�/�7�� �� E!�����# �������7���!#

� ?/� 26�// @��/�"��#1 ���8 6�� ����� '������8 $����38 (<8 �(�>�,+

�(� !��� ��� ��� �� �/

��� �!""���/��� ���� ���" /!"" !% �� � ������ .�1�� �� ��"��

�� ��� ��"�# � !% � .��� �#� ��!���# 6�" �&�.�#��

�!�����# �#� �..�#!�/!� �#�/�"�" �#�� ���� ���� �

.��� $��1��� ��3 �#� ��!���# $��1��� � 3 � �.�/���� �#

���"� �� �#� ���� /�#�" �����%!��8 �� �� !.�" �#� ����

���# �# ��� ���"�# � !% � .��� �#� ��!���#

:��� �������� �� �� ��� ��� " ����������� �� �

�������� �� ���������� �����

�# �� �8 �&����.�#��/ ��! �����" %!� 1�!6�#1 �/�#�/��" %�!.

�//� ������� %�!. ��� "���" ��� 6�// �"���/�"��� �#� ���

"�%4 ��#�/� �!��"� �! ��!�� � � /��1� #�.��� !% �/�#�"

6����# � "�!�� ����!� !% ��.� �! ����� �/�#� ��1�#�����!#

�" � �!��#���/ ��-.������� 1�#�-��11�#1 "�����1�8 ��� %!/-

/!6�#1 ���� ����"�� " !% �� ������!� 6��� ���/�����A $�3

6��� %��5��# � !% ���#"�!"���!# !�/� �� !�"����� �# �//�"

������� �/�#�"L $��3 6������ ���#"�!"�#�" %�!. ��� "�.�

�//� ��!"� %�!. �#����#��#� �� �#"����!# ���#�"L �#� $���3

6������ �� �/�.�#�" !% ��� �� 1�#�����!# �# �� "���/�

���#".����� �! � "��"�5��#� 1�#�����!#L � /��1� �!��/���!#

!% �� �/�#�" 6��� ��1�#������ %�!. �!.!7�1!�" � �#�

�#� ���� "+ !� "�( "���" ��� �� ���#"�!"���!# %��5��# �

6�" �����.�#�� %!� �� � ��1�#������ �/�#� �� �/�.�#�"

���#"�!"�� �# �//�" �// /�#�" ���!� �! �/�#�/�� �#������!#

"�!�/� %!�. "���/� 1�#��� �//� �#�%!�. �/�#�" �#�8 �# ���"

.�##��8 �� "�.�/�� �! 1��.�#�//� ���#"�!"�� �� �������

%�!. 1�#��� �!""�" �� ���#"�!"���!# 6�" �#�/�7�� ��

E!�����# �#�/�"�" �# ��+� �#� ���� �� �/�#�" ������� %�!.

�//�" �/���� !% � ="+ �#� � ="�( "���"8 ��"�� ����/�

$���/� �3 �1��#8 #�6 ���#"�!"���!#" 6��� �����.�#�� !#

��� ��"�" !% "�.�/�� "�1#�/ �#��#"��� �! ��� �#���#"�!"��

����#��/ "�1#�/ �.!#1 ��� �!��/ �� �!��/���!#8 '�G !%

�/�#�" %�!. ��� � ="+ /�#� �#� )�G !% �/�#�" %�!. ���

� ="( /�#� ������ #�6 �� �#"����!#" �!���/�8 !#/� � ".�//

�!���!# !% �/�#�" ������ !#/� ��� !��1�#�/ �#���#"�!"�� ��

0��� #/ ����.�#���!# !% �� "!.��� ���#"�!"���!# $�3 �#� ���� ��!# !% � ��� $�3 �#� ��!���# �&���""�!# $ 3 �# �#� ���� �� /�#�" �����#1 � $�3 E!�����# �#�/�"�"A -����-��1�"��� 1�#!.� �� %�!. �� �#� �+ "���/�#1" �����#1 � �#� �� 6�" ��!��� 6��� F:E ����� �" #! ���� ���/� "�1#�/ �& ��� %!����� %�!. ��� !��1�#�/ �� �/�.�#� $���!63 $�3 �!�����# �#�/�"�"A �!��/ �//�/�� ��� 6�" ��!��� 6��� � :������ �� %��1.�#� %�!. � ���� �" #!� ���"�#� �# �� ���"� � �#� �� �+ /�#�" ��� !% ��� "�.�1�#��� �� 21�!�#� �" #!�.�/ �/�#�" $�=�3 � ��# .��� 6�" �"�� �" � !#��!/ $ 3 �..�#!�/!� �#�/�"�"A �!��/ �//�/�� ��!���#" 6��� �&��� ��� �# ��� ���"�# � !% EE �#� ?�� � ��!���# 6�" ���� ��� 6��� �# �-� �#��"���. ��� �&�� ���"�7� !% � ��!���# �" �#�� ���� �" � 6���� ���!6 �#� �# �� ���� ��� �# �/�#�" �����#1 � ��� #!� �# ��� 6�/� ����

>�1� # ��� .!��/��� !% �� �# ��1�#������ �� �/�#�"

�� /�#�"

���#"�!"�� ��� D#/� !��1�#�/ !� "!.��� ��� �! ��

G E�.�/� K=��� �!��/ K G E�.�/� K=��� �!��/ K G E�.�/� K=��� �!��/ K

"+ '� *�,=��+� � ��=��+� �' ���=��+�"�( )� )��=���� + +�=���� �, �)�=����E���AA�� ,* )�=��� �� ��=��� �� ��=���

�?�"�� !# �������7���!# �#��#"���8 �� �/�.�#�" ���#"�!"�� ����#1 ��""�� �/���� 6��� ��%�#�� �" ��!"� 6��� � �������7���!# "�1#�/ ���� 6�"�" "��!#1 �" ���� !% ��� !��1�#�/ �� �/�.�#� �� ��� �-�� �#"����!# "��� �E!.��� �� �/�.�#�" �&����� � 6��2�� "�1#�/ ���# !��1�#�/ �/�.�#�" � "�#1/�- !�� �� 6�" /! ���� �� � /! �" �# !��#1 � ��!���# 2�#�"� �����#1 �# ��� �!.��#

� ?/� 26�// @��/�"��#1 ���8 6�� ����� '������8 $����38 (<8 �(�>�,+

$��������� �� �������� �� " ����������� �� ���� �((

�/�.�#� �/"!8 �' �#� �,G !% ��� "+ �#� "�( �!��/���!#8

��"�� ����/�8 ������ � ��� #!� ��8 6�� � .�� ���� ���#

��"�� �� ��� /!"" !% �� �%��� �& �"�!#

�# ������!#�/ �//�"-������� �/�#� �!��/���!# 6�" 1�#-

������ %�!. � /�#� �����#1 � �!#!� �� �#"����!# �# � �� �

1�#� �# !��#1 �# E��-/�2� 2�#�"� ���" �� /�#� 6�" "��-

B� ��� �! ��� "�.� ��""�� �/���� ��! �"" ��" ����� ��!��

%!� �/�#� ��1�#�����!# � �!��/ !% ��� �/�#�" 6��� ��1�#��-

���� �#� �#�/�7�� �� E!�����# �#�/�"�" �# ���" �!��/���!#8

,*G !% ��� �/�#�" ������ �� /��"� !#� #�6/� ���#"�!"�� ��

�#� ��G !#���#�� !#/� � D����//8 .!�� ���# )�G !% ���

��1�#������ �/�#�" ������ �� �/�.�#�" ���� ��� ���#

���#"�!"�� ���!� �! �/�#�/�� �#������!# %�!. �//� @/�#�"

�����#1 !#/� � ��� "�" �����/� �! ��� "�/� ��!# �1�#�

?�E�� !� @@� $"�� ��1��� ��3 �.!#1 ��� ��1�#�����!#

�!��/���!# ��"�"��#� �! "� � � ����� ���8 **8 *,8 �#� ',G

������ ���#"�!"�� �� �# "+8 "�(8 �#� E��� �!��/���!#"8

��"�� ����/� �����%!��8 "�/� ��!# %!� ��� �� �/�.�#� ���/�"

� �/�#� �!��/���!# 6��� �# �& ����!#�//� ��1� %��5��# � !%

��-���#"�!"�� �/�#�"8 6�� � �!�" #!� #� �""���/� ��5����

%������ "�/� ��!# %!� ���#"�!"�� ��

�! �&�.�#� 6������ ��1�#������ �/�#�" %�!. ��� "�.�

�//�" ������ � !..!# �� �/�.�#�8 �#�������/ �� �/�#�"

������� %�!. � "�#1/� �//�" 6��� �#�/�7�� �� E!�����#

�������7���!# �#� ����� �� �!/�.!����"." 6��� !.�����

��1��� + "�!6" E!�����# �#�/�"�" !% ��� �� ��!4/� !%

"�����/ �� �/�#�" ������� %�!. �� � !% ��� %!�� ��%%���#�

�//�" �/����" E���2�#1/�8 �/.!"� �// !% ��� �� �/�#�" %�!.

�#� !#� �//�" �/���� ������ #�6 �� �#"����!#" ���"

�#�� ���" ���� �� � #�6 �� 6�" ������� %�!. � ��%%���#�

�// /�#� �# ��� "�.� �//�" �# ������!#8 ����� ������# ������

�.!#1 ��%%���#� �//� �#� �/����"8 �/��!�1� ����� 6���

�����# ���#�" �# ��� !�� #�.��� !% ���#"�!"�� �� �/�-

.�#�" �.!#1 ��%%���#� �/����" �" "�!6# �# ��1��� +8

�/�#�" %�!. �//�" I�J !� I J ��#��� �! ���� .!�� ���#"�!"��

!���" !% ��� �� �/�.�#� !.����� 6��� ����!.�#�#�/�

"�#1/� ���#"�!"���!#" �# �/�#�" ������� %�!. �//�" I�J8

�/�#�" %�!. �//�" I�J .!�� %��5��#�/� ������ ��� !��1�#�/

�!#!� �� �/�.�#� !.����� 6��� �/�#�" %�!. ��� !����

�//�" �/����" ��� ���#".�""�!# !% �� 6�" �#"�� ��� �# ��

�/�#�" �! �����.�#� 6������ ��� �� �/�.�#�" !% �� �/�#�"

�# �� "���/� .��#���#�� �# ��� "��"�5��#� 1�#�����!# �#

!���� �! !����# �# �"��.��� !% ��� %��5��# � !% ���#".�""�!#

!% �� �/�.�#�" %�!. �� �/�#�" �! ��� "��"�5��#� �� 1�#-

�����!#8 ,, �� �/�#�" �#� ����� �� ��!1�#� 6��� �#�/�7�� ��

E!�����# �������7���!# �# ,, �� .����� �/�#�"8 � �!��/ !% ���

�� �/�.�#�" 6��� ���#��4�� �" ���#"�!"�� ��"�� !# ���

#�.��� !% ��#�" 6��� "�.�/�� �������7���!# "�1#�/ �#��#"���

�! �# !��1�#�/�� D# �����1�8 ��1�� �! #�#� �� ��!1�#� 6���

�&�.�#�� %�!. �� � �� �#�������/

� �!��/ !% ((� �� �/�#�" 6��� �#�/�7�� �! �����.�#� �!6

.�#� �� �/�.�#�" ���"�#� �# �� .����� �/�#�" 6��� ���#"-

.����� �! ��� �� 1�#�����!# �#� �! �����.�#� �!6 .�#�

#�6 �/�.�#�" 6��� ���"�#� !#/� �# ��� �� 1�#�����!# ���

�� �������7���!# ��!4/�" !% �� �/�#�" 6��� !.����� 6���

��!"� !% �� �/�#�" D% ���"� ��� �� �/�.�#�"8 ��, �� �/�-

.�#�" 6��� ���� ��� �.!#1 ����� �� ��!1�#� D����//8 *(G

�� �/�.�#�" ���"�#� �# ��1�#������ �/�#�" 6��� ���#"-

.����� �#�! ��� #�&� 1�#�����!# D�� !% ,, �� �/�#�"8 !#/�

"�& �/�#�" ��!�� �� #�6 �� �/�.�#�" �# �� 1�#�����!# D#�

#�6 �� �/�.�#� "�1��1���� �# �� � !% "�& /�#�" ��1��� �

!.����" ��� �� ��!4/� ���6��# �#�������/ �� �/�#�" �#�

����� �� ��!1�#� �!"� ���#"�!"�� �� �/�.�#�" !% �� �/�#�"

6��� 6�// "�1��1���� �# ��� �� 1�#�����!# �.�!���#�/�8

��1� "!.��� � ������ 6�" #!� ���� ��� �� E!�����# �����-

��7���!# �# ��� /����" !% �� �#� �� �/�#�" E� � "���/�

���#".�""�!# !#4�.�� ���� .�#� �� �/�.�#�" 6��� ���#"-

�!"�� ��%!�� �/�#� �#������!#8 6�� � "�11�"�" ���� �� � ��

�/�#� !�/� �!��#���//� �� .��#���#�� �" �# �#����#��#�

���#"�!"�#� /�#� ���"8 !�� ���� �#�� ��� ���� �/�#� ��1�#-

�����!# ��� ��""�� �/���� �" � �!6��%�/ .���!� %!� 1�#����-

�#1 �� �!��/���!#" �# �� �

0��� $/ E�1��1���!# !% �� �# ��� �� 1�#�����!# !% ��1�#������ �/�#�" �� 6�" �&�.�#�� �# ����#��/ �� �/�#�" �/!#1 6��� �� ��!1�#� �/�#�" �!"����#"�!"���� �/�.�#�" !% �� �/�#�" 6��� ���#".����� �#� "�1��1���� �# ����� 1�#�����!#

0��� (/ E!�����# �������7���!# �! ���� � �� �# �/�#�" ��1�#������ %�!. �//�" �/���� �+ ��!1�#� "���" �����#1 � �#� �#� ���� �� 6��� �# ������ !# �/����.���� �! �#�� � �//� �!�� ��%%���#� �//� $�>�3 6��� ��!��1���� �#� ���#"-%����� !#�! �/�#�/��-�#�� �#1 .���� �� ���#"�!"���!# ������#" 6��� �&�.-�#�� �# �#�������/ �/�#�/��" ������� %�!. �� � ��%%���#� �//�" �" 6�// �" %�!.��� "�.� �//�" �# !��1�#�/ �� �� � �-�� �#"����!# "��� �" �#�� ���� 6��� �#���!6

� ?/� 26�// @��/�"��#1 ���8 6�� ����� '������8 $����38 (<8 �(�>�,+

�(, !��� ��� ��� �� �/

!���������� �����8����� �� "

�# ���" "����8 %!�� �!��/���!#" 6��� ��!�� �� �# 6�� � ��

�/�.�#�" 6��� ���#"�!"�� ������ �# �//� !� ����#1 #!�.�/

�/�#� ����/!�.�#� ��!. ��� "+ /�#�8 �6! ��%%���#� �!��-

/���!#" 6��� ��!�� �� �� 1�#��� �!""�#1 �#� ��""��

�/���� �6! ������!#�/ �� �!��/���!#" 6��� ��������

��� ��""�� �/���� %�!. ��� !��1�#�/ �-�� /! �"8 �# /�#�

"�(8 �#� %�!. � /�#� !#���#�#1 �� �/�.�#� �#"����� �#�!

��� 1�#� ;� < �#���"� @�� $�@��3 �#� ����-@�� 6���

���%!�.�� �! ���#��%� �� "�5��# �" H�#2�#1 ��� �� /! �

�!� .�"" ��!�� ��!# !% ��-H�#2�#1 ��8 ����-@�� 6�"

���.���/� �.�/!��� ��� ���.�� "��" %!� �.�/�4 ���!# !%

��� (� !� +� �#�" !% �� �#� !���.�/ ��������� ��1�#�����

$�3 ���.�� "��" ��� ��" ����� �# �����/ �# I�&����.�#��/

��! �����"J E� !#���� @�� ��!�� �" 6��� "�5��# ��

������ �� ���� � "�5��# �#1 !� %!//!6�#1 "�� /!#�#1 �#�!

�/�".�� �� �!�" ������� "�5��# � �#%!�.���!# 6�" ��-

������� %�!. �� � 1�#!.� ������"�" $E�#1�#��8 �!#"�#�!8

���#�8 !� �F@ !% ;���#3 @�� ��!�� �" ���� "�!6�� ���

"�.� .!��/��� �" !��1�#�/ �� /! � 6��� �& /���� %�!.

��� .����#1 �!��/���!# �// �/�.�#�" /! ���� 6����#

+ 2�� !% �� � !���� 6��� %������ �#"�� ��� �! �����.�#�

6������ ��%%���#� @�� ��!�� �" ������� %�!. ��� "�.�

�� �/�.�#� /�� �! ��� �""�1#.�#� !% ��%%���#� �#"����!#

���#�"

� �!��/ !% ��*)��-H�#2�#1 �� "�5��# �" 6��� �#�/�7��

�"�#1 ����!�" �� � "�5��# � ������"�" �# /���#1 ���

"�5��# �" !% �� �!#!� "���"8 ��(* /! � ��!�� �� .�� ��"

��!. ���" �#�/�"�"8 ��)� �� �#"����!#" 6��� /! �/�7�� �! �

1�#��� .�� �# �!��� �! ?��=@�� "�5��# �" $�!"��� ��

����A==666 ��1� !�13 $���/� +3 D#� ��#���� �#� ������-

����� /! � !�/� #!� �� .����� ��� ��"� !% ��� �� /! �

$(G3 ��� "�5��# � .�� ��" �! ��� �-��8 �#�� ���#1 ����

���"� �/�.�#�" ��� ��-�#"����� 6����# ��� !��1�#�/�� �!#!�

"���" D% ��� �( �/�.�#�" ������� %�!. � �!#!� /�#� �����#1

" �# ��� ;� < 1�#�8 !#/� � ��� ��-�#"����� �#�! ���

;� < /! �" $���/� +3 �!� �� � /! �"8 ��� 1�#��� .��2��

/!"�"� �! ��� �� �#"����!# "��� 6����# � ?��=@�� /!#� 6�"

�""�1#�� �" ��� /! �" !% ��� �� �/�.�#� !# ��� 1�#���

.�� "�!6# �# ��1��� ( ���" .�� !#���#" �,�8 (��8

��(8 �#� �� �� �/�.�#�" ������� %�!. 1�#��� �!""�"8

"+ ��""�� �/����8 "�(8 �#� ;� <8 ��"�� ����/� ���

"�5��# �"8 ��!.!"!.� #�.���"8 �#� @��=?�� � �"-

"�!# #�.���" !% ���"� .������� /! � ���� ���# ���!"����

�# F�#?�#2

������8����� ������� �� " ��������� �����

"�( �#� ;� < ��� /! ���� !# ��� /!#1 ��. !% ��!.!-

"!.� �� �#� ��� "�!�� ��. !% ��!.!"!.� �8 ��"�� ����/�

��� H�#2�#1 �� %�!. ��� "+ /! �" !�/� #!� �� .�����

�" "��# �# ��1��� (8 ��� ��#"�"� �� /�"��� 6�" !�"�����

��!�#� ��� �!#!� /! �" !% "�( �# ��� �6! ��%%���#� �!��-

/���!#" ������� %�!. ��� "+ /�#�8 ��� ��#"�"� �� /�"���"

6��� ���"�#� !# ��� "�!�� ��. !% ��!.!"!.� +� ���"

/! ���!# �" !#"������ �! �� ��� !��1�#�/ "+ "��� �! �#�/�7�

��� %��5��# � !% /�#2�� ���"�" �#/�#2�� ���#"�!"���!# !% ���

�=�� %�.�/� �# �� �8 �� �#"����!# "���" 6��� /�""�4�� �"

%!//!6"A $�3 ��!"� $� 'G3 ���� ��� ��-�#"����� �#"��� �-�� !�

� �!"� 1�#� $;� <3� $��3 ��!"� $+� �G3 /! ���� !# ��� "�.�

��!.!"!.� �" ��� �� �!#!� "���"� �#� $���3 ��!"� $,� �G3

/! ���� !# !���� ��!.!"!.�" $���/� +3 ����/� ��G !% ���

���#"�!"�� �� �/�.�#�" ��/!#1�� �! ��� 4�"� �6! /�""�"

�! %������ ���� ����7� /�#2�� ���#"�!"���!#"8 ��� ��"�����-

��!# !% �#"����!# "���" 6����# (� � !% �!#!� "���" !% "+ �#�

"�(8 ��"�� ����/�8 �" �//�"������ �# ��1��� ,$�8�3 ?� ��"� !%

��� "�!�� /�#1�� !% ��!.!"!.� ��E8 ��� ��"�������!# !% ��

�/�.�#�" ������� %�!. ��� "�( �!#!� "��� !�/� !#/� ��

�����.�#�� �� �! �� � ��!&�.�/ �! ��� �!#!� "���

$��1��� ,�3 �.!#1 ��� �!��/ �� �#"����!# "���" .����� �#

���" "����8 ��+ �#� '( �� /! � 6��� 1�#��� �//� /�#2�� �! ���

�!#!� "���" !% "+ �#� "�(8 ��"�� ����/� $��1��� ,�8�3 �#

"�..���8 ��� %��5��# ��" !% /!"�/� /�#2�� �#"����!# "���"8

>�1� ( �"�������!# !% ���, ���#"�!"�� �� �/�.�#�"�8 ��/����� �! ���"� �/ /�#2�1�

E!�� �

�! ���!#

�� �-�� !� ;� <8G $K=�!��/3

D# ��� "�.� ��!.!"!.�8G $K=�!��/3

D# ��� !���� ��!.!"!.�"8G $K=�!��/3

"+F�#��� �!""�" , � $�'=�'�3 +( � $**=�'�3 (' � $�,+=�'�3��1�#�����!# � � $�+=(,�3 ++ ( $�'*=(,�3 ,� � $+(�=(,�3

"�( � ) $��=�()3 +� � $''=�()3 ,� � $�()=�()3�� �� ;� < � � $�=�(3 �' � $)=�(3 ,' � $�)=�(3

�!��/ � ' $(�=���,3 +� � $+'+=���,3 ,� � $,'*=���,3

��%��� ��##�#1 ��� %/�#2�#1 �� "�5��# �" !% ��� �!��/ ��*) �� �/�.�#�" ���!�1� �� � ������"�"8 �# /���#1 ��� "�5��# �" !% �� �!#!� "���"8��(* /! � ��!�� �� .�� ��" �.!#1 ���.8 ��)� �#� (� /! � 6��� /! ���� !# �� � ��!.!"!.�" �#� !��1�#�/ �!#!� "���"8 ��"�� ����/� �����.��#�#1 �++ /! � !�/� #!� �� .�����

� ?/� 26�// @��/�"��#1 ���8 6�� ����� '������8 $����38 (<8 �(�>�,+

$��������� �� �������� �� " ����������� �� ���� �()

�# /���#1 ��-�#"����!# �#�! ��� �-��8 6��� ++ + �#� +) 'G

�# "+ �#� "�(8 ��"�� ����/� ��� ��#"�"� �� /! ���!#"

6��� �� �!#!� "���" ��� ��"�������!# !% /�#2�� �#"����!# "���"

6�" ��/�����/� ���# 6����# (� � !# ������ "��� !% ��� "+

�!#!� "��� �#� 6����# �� �#� (� � !# ��� ��!&�.�/ �#�

��"��/ "���" !% ��� "�( �!#!� "���8 ��"�� ����/� �!6����8 ��

"�!�/� �� .�#��!#�� ���� ��� ��1�!# ��!&�.�/ �! ��� �#-

��!.��� ��� "!.�6��� /�"" �� �#"����!# "���" ���# ���

��"��/ ��1�!# �# �!�� /�#�" D����//8 ��� ��"�������!# ������#

!% �� �#"����!# "���" 6�" "�.�/�� �.!#1 ��� ��%%���#� /�#�"

�! �#���"��#� ��� ��"�������!# ������#" !% �#/�#2�� �#"��-

��!# "���"8�� �/�.�#�" 6��� /�""�4�� �#�! ���"� �//� /�#2��

$� � !# ��� "�.� ��!.!"!.� �" ��� �!#!� "���3 �#�

���"� �//� �#/�#2�� $� � !# ��%%���#� ��!.!"!.�"3 /! �-

��!#" $���/� +3 ��� �&�� ��� %��5��# � !% �#"����!# "���" !#

�# �� � ��!.!"!.� ��. 6�" �/ �/���� �"�#1 ��� ����! !%

��� ���"� �/ /�#1�� !% � ��!.!"!.� ��. ��/����� �! ���

�!��/ /�#1�� !% �#/�#2�� ��!.!"!.�" ��1��� ,$ 3 �//�"-

�����" ��� ����! !% � ���/ �! �&�� ��� %��5��# � !% ��� ��

��." !% �� ��!.!"!.�" ��� !����// ��"�������!# !% ��

�/�.�#�" ���� ���#"/! ���� !#�! ��%%���#� ��!.!"!.�"

6�" ��/�����/� ���# �!6����8 "!.� ��." /���/� ��� .!��

�#"����!# "���" ���# !����" ?��6��# ��� �6! "+ �!��/�-

��!#"8 ����� 6��� !..!# ���%���#���/ ��." > ��!.!-

"!.�" ��8 )�8 '�8 �#� ��� ��� .!�� �#"����!# "���" ���#

�&�� ���8 �#� ��!.!"!.�" +E8 +�8 ��8 �#� *� 6��� ���-

%���#���/ ���1��" %!� ��� "�( �!#!� "��� �" "��# �# ��1��� (8

���"� /�"���" 6��� /! ���� 6����# ����!&�.���/� ��( �

!# �E8 �(� � !# +E8 )( � !# ��8 �#� '� � !# )E D��

���� "���!�� ��� �����!�" #!��!# ���� "� � #!#-��#�!.

��"�������!# ��H� �" �# �#���/��#1 ��!.!"!.� !���� ��

�#������"�8 6��# ���#"�!"���!# ������#�/� ��2�" �/� �

$!!#�� �� �� 8 �**�3 �# "�..���8 ��� ��-.����#1 ��"�/�"

�#�� ��� ������ �" ���#"/! ���� !#�! �// !% ��� ��!.!"!.�"

0��� )/ F�#��� .�� !% ��)� �� �/�.�#�" %�!. %!�� �!��/���!#" ��� .�� !#���#" �,��� �/�.�#�" ������� %�!. 1�#��� �!""�" $1���# /�#�"38 (�� %�!. "+ /�#� ��""�� �/���� �/�#�" $��� /�#�"38 ��( %�!. "�( /�#� ��""�� �/�����/�#�" $�/�� /�#�"38 �#� �� %�!. ��� " �# ��� ;� < $�/� 2 /�#�" "�!6# �� �!� �/!#1 6��� �#��!.���"3 ��� �#��!.��� !% �� � ��!.!"!.� �" �#�� �����" � 4//�� �� /� !# ��� �!� !% ��� .�� �� /! � 6��� �/� �� !# ��� 1�#��� .�� �!"��� �# ����A==666 ��1� !�1 ���� 6�" �#��1����� 6��� ?��=@��"�5��# �"

� ?/� 26�// @��/�"��#1 ���8 6�� ����� '������8 $����38 (<8 �(�>�,+

�(' !��� ��� ��� �� �/

6��� ���%���# � #��� �!#!� "���"8 �" 6�// �" "!.� "���" !#

���"� �//� �#/�#2�� ��."

5��������� �������������� �� "+������� ����

:"�#1 1�#� ����� ��!# ��!1��."8 �EF���� �#� F���-

���<8 !� ��� �##!����� "�5��# �" /�"��� �# ��?�8 �� �

�� !% ��)� �� �#"����!#" 6�" �#�/�7�� �#� 1�!���� �"

�#"����!#" �#�! ������ 1�#� !� �#���1�#� ��1�!#" �!

%������ /�""�%� ��� /! ���!# !% � �� �#"����!# "���8 1�#�

��1�!#" 6��� ���������/� ������� �#�! ��� %!//!6�#1 �����

��1�!#"A � ��!.!��� ��1�!# $+ 2�� ��"����. !% � ����� ���

���#" �����!# "���� "���38 ���#" �����!# ��1�!# $D��38 �#� �

���.�#��!� ��1�!# $� 2�� �!6#"����. !% � ����� ���

�!/�$�3 "���3 ��#� ��#���� �6�#��-�6! �� /! � 6���

/! ���� �# 1�#� ��1�!#" 6��/� �(� 6��� �# �#���1�#�

��1�!#" �# �����/8 �* +8 (( �8 �#� �� )G 6��� /! ����

6����# � ��!.!���8 � ���#" �����!# $D��38 �#� � ���.�#��!�

��1�!#8 ��"�� ����/� �# �!��/8 ',G !% ��� �� �#"����!#"

6��� �#"����� �#�! ����� ��� 1�#� ��1�!#" ��� !�"����-

��!# ���� ��� .�B!���� !% �� /! � 6��� /! ���� 6����# 1�#�

��1�!#" �" !.�����/� 6��� ��� �����!�" ���!�� ����

����!&�.���/� '�G !% �// 1�#� ���� �#"����!#" ��� 6����#

1�#�" �# ��8� ���� $������#""�#8 �**'3 ���# ��!�1�

',G !% �� �#"����!# "���" 6��� /! ���� �# 1�#� ��1�!#"8

!#� "�!�/� !#"���� ��� %� � ���� ��� �� /! � �&�.�#�� �#

���" "���� 6��� !#/� ��!"� ���� !�/� �� �.�/�4�� �� @��

�� �" �!""��/� ���� .�#� �� /! � .�1�� #!� �� �"!/���� �"�#1

����#� @�� �� �#�5��" �� ��"� !% !.�/�& "��� ����" !%

���1�� "�5��# �"

0��� ,/ �"�������!# !% �#"����!# "���" 6����# (� � !% ��� !��1�#�/ �#"����!#" �# ��� "+ /�#� $�3 �#� "�( /�#� $�3 �#� ��� ����!" !% ���"� �//� �#/�#2���� �#"����!#"���" !# �� ��!.!"!.�/ ��." %�!. ��� "+ $ 3 �#� "�( $�3 �!#!� "���" $�3 �6! ��#���� �#� %!���-����� �#"����!# "���" 6����# (� � !% ��� ��!&�.�/ �#� ��"��/ "���" !% �# !��1�#�/ "+ �!#!� "��� ��� "�!6# ��� ����� �/ �&�" �#�� ���"��� #�.��� !% �#"����!#" �� � 1���# /! ���!# ��� �!��7!#��/ /�#� �#�� ���" ��"��# � $ �3 %�!. ��� !��1�#�/ �!#!� "��� $�3 ?� ��"� !% ��� "�!�� /�#1�� !% ��!.!"!.� ��E8 ��� ��"�������!# !% '( �� /! � !�/� !#/� �� �����.�#�� �� �! �� � ��!&�.�/ �#� (� � ��"��/ !% ��� �!#!�"��� $ 8 �3 ��� �&�� ��� %��5��# � $G� !��# ���"3 !% �#"����!# "���" !# � ���"� �//� �#/�#2�� ��!.!"!.� ��. 6�" �/ �/���� ��"�� !# ��� ����! !% ��� ���"� �/ /�#1��!% ��� ��. �! ���� !% ��� !���� �#/�#2�� ��!.!"!.�" ��� !�"����� %��5��# ��" $G3 !% ���"� �//� �#/�#2���� �/�.�#�" !# �� � ��. ��� "�!6# �" 4//�� ���" "+�#�� ���" �� ����#� "���" %�!. � "+ �!#!� "��� ��� 1�#��� �!""�#1 �#� ��1�#�����!# $ 3 "�( �#�� ���" �� �#"����!#" �# ��1�#������ �/�#�" %�!. � "�( �!#!�"��� $�3

� ?/� 26�// @��/�"��#1 ���8 6�� ����� '������8 $����38 (<8 �(�>�,+

$��������� �� �������� �� " ����������� �� ���� �(*

�������� ��� �������� � �����+����� " ����������

�������� 8� ���8����� ������� �������� �� ����

������������ ���� ����

?�"�� !# ��� ���� ��" ����� ��!��8 6� ��!�!"� ��� %!//!6-

�#1 "�����1� %!� �����8 /��1�-" �/� 1�#�����!# !% �� ���#"-

�!"�#�" �# �� � $��1��� )3 �� �/�#�" �����#1 � �#� �#� ����

�� %�!. 1�#��� �!""�" �# �� "�/� ��� �#� ����/!��� �#�!

�!.!7�1!�" /�#�" %!� �/�#� ��1�#�����!# ��� ��""�� �/����

�����#�/�8 6� ��� ����/!��#1 ��� �=�� /�#�" �# 6�� � ��

�/�.�#�" ��� ���#/� ��"�������� !��� ��� �� �� � ��!.!-

"!.�" ��� "���" !% ���"� /�#�" 6�// �� "��B� ��� �! ��""��

�/���� �! �#�� � �//� %!� �/�#� ��1�#�����!# �!#"�����#1

���� !��� )�G !% �/�#�" ������� %�!. ��""�� �/���� ����

���#"�!"�� �� �/�.�#�"8 �#� ���� (� �/�#�/��" �# �� ��"�/�

��!�� �� %�!. �//�" %�!. � "�#1/� "��� �# �� 6��2"8 !#/�

�'( "���" ��� ��5����� �! 1�#����� �� ��� �#����#��#� ��

/�#�"

-�� ������

�������� �� ����������� �� � ������������ ��������

�# !���� �! �%4 ��#�/� !������ �# �=��-.������� 1�#�-

��11�#1 "�"��. ���� ��/��" .��#/� !# 1�#��� ��! �����"

"� � �" �!""�#1 �#� "�/4#18 �%%� ���� "�/� ��!# .��2��" %!�

���#"�!"���� "�!�/� �� �.�/!��� �#� ��� � ������ !%�=��

"�!�/� �� .!#��!��� !#��#��//� ���" "���� �#� �#!����

���!�� �� :�������� �� �� $����3 "�!6�� ���� 1��.�#�//�

���#"�!"�� �� ��� !����#�� �� � ���� !% (>��G �# ��� ��

1�#�����!# �����%!��8 �% "�/� ��!# .��2��" ��� �.�/!���

���� ��� �%%� ���� �# " ���#�#1 � /��1� �!��/���!#8 ���#"�!-

"�#� �!��/���!#" �# �� ����/!��� !# � /��1� " �/� �#

�� !�" "� � �" ��8� ����8 ���:=��� $E�#����"�# �� �� 8

�**(3 �#� ��! ��!.� @�(�=��)�� $��""��� �� �� 8 �***3 ����

���# "� �""%�//� ���/�7�� �" #�1����� "�/� ��!# .��2��"

�1��#"� � �#� �#���#"�!"�� �� 9� %!�#� ���� ��!-

��!.� @�(�=��)�� �" #!� � ��/���/� .��2�� �! " ���# �

/��1� �!��/���!# !% �� � $"�� E���/�.�#���� �������/3

��� �&��#� �! 6�� � ��� �"� !% 1�#��� �!""�#1 !#���-

����" �! ��� ����/!�.�#� !% � ��1�/� "�������� �#"����!#�/

�!��/���!# ����#�" /��1�/� !# ����/���/��� !% "�/� ��!#

.��2��" ���� ��� �%%� ���� %!� /��1�-" �/� " ���#�#1 �# ���"

"����8 6� ��!�!"�� �# ������!#�/ "�����1� %!� �# �=��-

.������� 1�#�-��11�#1 "�"��. ���" "�����1� !��� !.�"

��� ��5����.�#� %!� .��2��" �#� !#1!�#1 .!#��!��#1 !%

�=�� � ������ �# .��7� �#� �� �8 �/�#� ��1�#�����!# %�!.

�//� ��� ��""�� �/���� ��� ������" "�/�#� !� �#� ���� � �#�

�� ���#"�!"��/� �/�.�#�" $<�. �� �� 8 ����� @�" �2� �� �� 8

�*')3 �# �� �8 1�!6�#1 �/�#�/��" %�!. �//� ������� %�!. ���

"���" �# �� ������ !�� !# � /��1� " �/� 6����# � "�!��

����!� !% ��.� �������.!��8 .!"� ��1�#������ �/�#�" ���

%����/� D��� )�G !% ��� �� �/�.�#�" 6��� .!��/�7�� %�!.

�#����#��#� �//� �// /�#�" ��%!�� �#������!# !% �/�#�/��" �#�

!�/� �� .��#���#�� �" �#����#��#� /�#�" �������.!��8

��� ��.��#��� !% ��� �!��/���!# .!"�/� ������ !#/� �

�����%!��8 ���/� ���!# !% ��� "�/� ��!# .��2�� !�/� /��� �!

��� �/�.�#���!# !% .!"� #!#-���#"�!"�#� �/�#�"8 �#� %������

"�/� ��!# �1��#"� #!#-���#"�!"�� �� .�1�� #!� �� #� �"-

"��� D�� ���/�.�#��� ���� "�11�"��� ���� !����// ���#"�!-

"���!# %��5��# � ��� ��1�#�����!# ��! ����� %�!. � ����

/�#�" 6�" !.�����/� �#� ���# "!.�6��� ��1��� ���#

%��5��# ��" !����#�� %�!. �#� ���� �� /�#�" !% ���" "����

$���� #!� "�!6#3

���# ��!�1� � �//�" �# �����!# ����!� !% � .!#��" �!�"

#!� ��!�� � �#� !���� ��!�/�." �# %����/��� �#� 1�!6�� !%

/���-������� �/�#�/��"8 �� �" /�2�/� ���� ���"� �/���� !#��-

��!#" 6!�/� �#�� � "!.��� �������!# E� � �������!#" /���

�! �!��#���/ .�����!# �# ��1�#������ �/�#�" ����8 6� %!�#�

���� � �-.!#�� �# �����!# !% �//� �#�� �� !#� �! �6! #�6

6���, ����!���#"�!"��/� �/�.�#�" $���� #!� "�!6#38 6�� �

�" !#"�"��#� 6��� � �����!�" ���!�� $���! ��2�8 �**)3

�����%!��8 � ��1�#������ �!��/���!# !�/� �!��#���//� �&��-

��� .!�� ���#!���� �������!# ���# ��� !#� 1�#������ ��

1�#��� �!""�#1 ���" �" � .�B!� �#� !..!# /�.�����!# !%

�/�#� ��1�#�����!#

�������� �� �������� ����������� �� �� � ="

������� ��������

��� ������#" !% �� ��"�������!# 6��� ���� "�.�/�� �.!#1

"�����/ �!��/���!#" ������� �� ������ 1�#��� �!""�#1 !�

Starters for Crosses

Ac/+ Ds/+

Ac/- Ds/- Ac/- tDs/-

tDs/-

Ac/Ac iDs/iDsStarters

for

Regeneration

Ac/Ac iDs/iDs

XAc

F1

Ds

F2

0��� 9/ � "�����1� �! �����/� 1�#����� � /��1�-" �/� �� ���#"�!"�#� �!��-/���!# �# �� � �� �/�#�" �����#1� �#� �#� ������ %�!. 1�#��� �!""�#1" ��� "�/� ��� �#�����/!��� �#�! �!.!7�1!�" /�#�" %!� �/�#� ��1�#�����!# ��� ��""�� �/���� �# �����1� !% �(G !% ��� �� �!��/���!# �#� !��� )�G !% ��� �� �!��/���!#��� �&�� ��� �! ���� ���#"�!"�� �� ��� �#�� ���" �# �#� ���� �� �/�.�#�6��/� ��� �#�� ���" � ���#"�!"�� ��

� ?/� 26�// @��/�"��#1 ���8 6�� ����� '������8 $����38 (<8 �(�>�,+

�,� !��� ��� ��� �� �/

��""�� �/���� ��� %��5��# ��" !% /�#2�� �#"����!# "���"

!�"����� �# ���" "���� $+,G3 6��� /!6�� ���# ���� $,+G3

!�"����� �# .��7� $�!6�����6���� �� �� 8 ����3 �/"!8 ���"

"���� "�!6�� ���� �� ���#"�!"�" !#�! �// !% ��� ��!.!-

"!.�" 6��� ���%���# � #��� �!#!� "���" �#� "!.� ���"�-

�//� �#/�#2�� ��." �� �#�/�8 �#"����!# "���" !% �-�� �#�

�� �/�.�#�" ���� ���# ���� ����7�� �# �� � $�# �� �� 8 ���+�

���# �� �� 8 ���+� <!/�"#�2 �� �� 8 ����3 �/!#1 6��� !��

6!�28 )�>'�G �� �/�.�#�" 6��� %!�#� �# 1�#� ��1�!#"8

�#��� �#"����!# "���" 6��� %!�#� !��� �// ��� ��!.!"!.�"

6��� ���%���#���/ ��1�!#" ���#6��/�8 %!� �-�� �#"���"8

(�>,�G 6��� %!�#� �# 1�#� ��1�!#" �����%!��8 �� ��#�" �!

�� �#"����� �#�! 1�#� ��1�!#" �!6����8 �� .�1�� �� .!��

���%���#���/ �#"����!# "���" ���# �-��8 6�� � !�/� �� �

���� !% �&�/�#���!# 6�� �� �" %!�#� �# 1�#� ��1�!# .!��

%��5��#�/� ���# �-��

?� ��"� !% ���"�� ��"�������!# !% �#"����!# /! �8 �� �"

�""�#���/ �! ����� �# ���#/� ��"�������� �!��/���!# !%

!��1�#�/ �� �/�.�#�" ���!�1�!�� ��� �� � 1�#!.�9 �!�

"�������!# .���1�#�"�"8 6� ��!�!"� �! ����/!� !��� ���

� �#� �� "������ /�#�" ���� ��� ���#/� ��"�������� !# ��� ��

��." !% ��� �� ��!.!"!.�" ���"� /�#�" "�!�/� �� "�%4-

��#� %!� "�������!# !% ��� �� � 1�#!.� �� ��� �/�#� ��1�#-

�����!# ��! ����� ��" ����� ��!�� D�� ���� "�!6�� ����

"!.� /�#�" �#���6�#� �� �#� ������!# ���# �# ��� ���"�# �

!% � D#� .�1�� "�"�� � ���� �#� ������!# !% �� !�/� /���

�! ��� �#������!# !% F:E �&���""�!# �#� !#"�5��#�/�

��#��� ��� �%4 ��# � !% 1�#� ���� ��!# ��� F:E ������#"

�����%!��8 �� ��.��#" �! �� �����.�#�� 6������ �� �#� ��-

����!# !�/� �#���%��� 6��� ��� ���#" �����!#�/ � ������ !% �

�!"� 1�#� !� 6��� ��� �&���""�!# !% F:E ���� ��"�/�" %�!.

���#" ���� %�"�!# ���6��# � �!"� 1�#� �#� � F:E- !��#1

��1�!# �!6����8 �� "�!�/� �� �.���"�7�� ���� #!� �// ��

/�#�" �� !.� �#� �������8 �� /��"� �� ��� �+ !� �� 1�#���-

��!#"8 �# !�� �!��/���!# ���7� ��� �" � �����"�#������

�&�.�/� !% � ���#"�!"��/� �/�.�#� ���� �# �� .��#���#��

�# .�/���/� !���" �" � �����!/!1!�" �/�.�#�8 �� ��"

���# ��!��1���� �#� .��#���#�� �# �� �! �� !���" �#

��8� ���� $9�".�# �� �� 8 �**'3 �# �� �8 6�� �/�.�#�"

�#� �36- ���� ���# ��!��1���� �# .�/���/� !���" D��

�%%!�� �! .��#���# .�/�� !�� �� %��/�� .��#/� �� ��"� !%

/!6 %����/��� $���� #!� "�!6#3 �!6����8 %������ �#��"��1�-

��!# 6�// �� ��5����� �! �#���"��#� 6�� .�/�� !�� �� %��/��

�! �� ���#".����� �! "��"�5��#� 1�#�����!#" �#���#���!#-

�//�8 .�#� /��!���!���" ���� ���# 1�#�����#1 �� � ���#"�!-

"�#�" �#� �-�� /�#�" � ��1�/� "�������� �#"����!#

�!��/���!# �" � �����5��"��� %!� � ���.� �#� �1�� �/����/

"�����" !# �� � %�# ��!#�/ 1�#!.� " ��� �&����.�#��/

"�.�/� ��� !% �� � ��1�#�����!# .��#" ���� .!"� /��!��-

�!���" 6��� � �� � ��""�� �/���� %� �/��� �# ��!�� � /��1�

�!��/���!#" !% ���#"�!"���� /�#�" �# � ��/�����/� "�!�� ��.�

?� ��"� !% �� ��"�������!# ���"8 .�#� �� �!#!� "���"8

���#/� /! ���� !��� ��!.!"!.�"8 ��� #����� %!�

"�������!# .���1�#�"�" �/!#1 6��� � 1�#��� �!""�#1

"�����1�8 ���" .���!� !�/� .�2� "�1#�4 �#� !#�������!#"

�! ��� 1�#�����!# !% �#"����!# �� �!��/���!#" ���� ����

.�#� ����#��1�" !��� �-�� !� 6�� �/�.�#�"8 "� � �"

���1���� .���1�#�"�"8 %�# ��!#�/ �����"�!# %�!. 2#! 2-

!��"8 �#� 1�#�����!# !% .�/���/� �//�/�" �"�#1 � "�#1/�

�/�.�#�

&8�������� ��� ����

6+�% ������� �������������� 8� �1�!�� �����.

��� �-�� �� �!� �E?�� 6�" �"�� �! /!#� ��� �8 ��8 �#� @�(� �""����" ������� �����/�� �#%!�.���!# !# ��� � �#� �� 1�#����� �""����" 6�" ��" ����� �# � �����!�" ���!�� �� ���# �� �� $�***3 �-�� �� �!�" 6��� ���#"%!�.�� �#�! �?����� �����#1�E?� �!-�#���1����� �� %!�." 6��� !#4�.�� �� ���� ��1�"-��!#8 �" ��� "���/��� "�11�"��� �# ���#"%!�.�#1 �� � �//� 6����-�� �����#1 ��1�!.� �# ��!"��!���#"%���"� $�@�38 � ���-/�"��� .���!� !% ��""�� �/���� $���� �� �� 8 �**�3 6�" %!//!6��6��� "/�1�� .!��4 ���!#" �#"���� !% �? .����.8 �E-��"��.���� 6��� �"�� %!� ��� "�/� ��!# !% @@�-��"�"��#� �//� $�"������ �� 8 �**,3

$��7�� ��� ������

��� ���/� ��1� �#� /!6 ��.��������" ����#1 ��� "�..�� �# ���1�!6�#1 "���" �#� �# � 1���#�!�"� �� F��!#1"�#1 ����!#�/ :#�-���"��� �#� M�!#1��. ����!#�/ �1�� �/����/ E����!# 6��� ���� �//�+� �#� ����8 ��"�� ����/� �!� �!//�#���!#8 �/�#�" 6��� ���#"%�����%�!. ��� 4�/� �#�! � 1���#�!�"� �#� ��#�-�!//�#���� %!//!6�#1�.�" �/���!#

�%� %� �� ������ �����������

F�#!.� �� 6�" �������� %�!. .����� /����" !� "���/�#1"�"�#1 � ���� �&��� ��!# ��! ����� �/�5�!�" !% ( �1 !% ����4���� 6��� ��1�"��� 6��� ����!������ ��"��� ��!# �#�!#� /��"�"8"�7�-%�� ��!#���� !# � � 'G �1��!"� 1�/8 �#� ���#"%����� !#�! �#�/!# .�.���#� $F�#�E ���#8 �@!#�3 ��� �/!�" 6��� ���#�������7�� �! ��!��" �# �������7���!# ��%%�� !#���#�#1 ,� EE�8(� �#�����"8 � (G EE8 (� .� ���" $�� ' �38 �� .� ���8� � .1 ./�� "�/.!# "���. �� $���� ��#������38 �#� (G ��&���#"�/%��� ��#�/ 6�"��" !% ��� 4/���" 6��� ���%!�.�� �# � �� EE� �#�� �G EE "!/���!# %!� +� .�# �� ,(�� �!��/ �//�/�� ��� 6�"�������� �� � 1��#����. ���! ��#��� �&��� ��!# ��! ����� ��� !# �#�����!#" 6��� .��"���� �� : ��"!���# � �%�����"� �����.�#� ������ .� �!1��." !% ��� ��� /�#� 6�" %�� ��!-#���� �� �/� ��!��!��"�" !# � +G %!�.�/������ �1��!"� 1�/" ���1�/ 6�" ���#"%����� !#�! #�/!# .�.���#�" $F�#�E ���# @/�"8 �@!#�3 ��/���" 6��� �# ������ 6��� ��!��" ����!/���/�� �"�#1 ��#-�!. ���.��" �# �������7���!# ��%%�� !#���#�#1 � ( � ����@D�8 )GEE8 � .� ���8 �#� �G ?E� ��#�/ 6�"��" !% ��� 4/���" 6������%!�.�� �# � �� EE� �#� � �G EE "!/���!# %!� +� .�# �� ,(�� �!� 9�"���# �#�/�"�"8 �!��/ /��% ��!���#" 6��� �&��� ��� �� 1��#��#1��� %�!7�# /��% ��""��" �# � .!���� !#���#�#1 ��� �!.!1�#�7�#1��%%�� �� � ����! !% � ./ ��%%�� 1�� ��""�� $� � � �-$%-.!���!/�#!3����#�"�/%!#� � �� $��-�D@E38 �� ) (� �� .� ���8 ��G"� �!"�� (G ����-.�� ���!���!�#!/ $?��3� �G EE3 �%��� ������#�������!# �� )��� %!� ( .�#8 ��� �&��� �" 6��� .� �!%�1�� %!��� .�# �5��/ �.!�#� !% ��!���# "�.�/�" 6��� /!���� �#�!�� (G EE>�!/�� ��/�.��� 1�/ ��� ��!���#" ���#"%����� !#

� ?/� 26�// @��/�"��#1 ���8 6�� ����� '������8 $����38 (<8 �(�>�,+

$��������� �� �������� �� " ����������� �� ���� �,�

#���! �//�/!"� 6��� �# ������ 6��� �#��"���. �1��#"� � ��!���#$1�%� %�!. � <:�N� $:#����"���� ��# ��#8 F��.�#�33

����������� �� ���� ����� ���� ��� �

�� .����� "���" 6��� ��//�� �#� "����/�7�� 6��� ��D� �! ��!�� ��/�#�/��" %�!. �//�8 ��� "�5��#���/ �# �����!# 6�" .��� �"�#1 ���%!//!6�#1 %!�� ��""�� �/���� .���� ���"� �/���� .���� ��� ���"�.� �" ���� .�#��!#�� �# � �����!�" ���!�� �� <�. �� �� $����3A�? .����. %!� �//�" �#�� ��!#� �,-)-�� .����. %!� ���-��1�#-�����!#� �,E+-��-� .����. %!� ��1�#�����!# �� �#� �,E+-��-��.����. %!� ��1�#�����!# �� ��1�#������ �/�#�" 6��� ���#"%������#�! � �!��/� !#���#�#1 ��/%-"���#1�� �E .���� ��%!�� ���#1���#"�/�#��� �! � 1���#�!�"�

��! �� 63�+�! ������������ �� " ��������� �����

�!� �@��8 ��� %!��-��"� �����" %�����8 :�����8 �#� ���� 6��� �"�� �! !.�/���/� ��1�"� � �1 !% 1�#!.� �� E�/%-/�1���!# 6�" ���-%!�.�� �# (��-�/ ��%%�� ��1���� ��.�/���" $�(� #13 6��� ���#"��B� ��� �! "�5��#���/ #�"��� @�� ��� ���.��� �#� "� !#������!�� �" 6��� /!���� �# ��B� �#� /�#�" !# � +G �1��!"� 1�/ ���"� !#���� ��!�� �" ��� �&�� ��� �! �� "�!���� ���# ��� ���.�����!�� �" @��������!# !% ��.�/��� �� �#� @�� !#����!#"6��� ���#�� �/ �! � ���/�"��� ��!�! !/ $@������ �#� ����"8 �**'3 ��� �@�� ���.��" �"�� �! �.�/�%� "�5��# �" H�#2�#1 ��� (� �#� +�

�#�" !% �� ��� �" %!//!6"A %!� ��� (� �#�8 "(-�8 ��F������F�-���F��������F� "(-�8 �F����F�����F���������� "(-+8F���FF��������������� "(��8 ����F�����FF��FF�"(�-�8 �����FFF��F�����F���F��� "(�-�8 ��F���F���-���FF���F�� �#� "(�-+8 ���������FFF��F���F� ������.��" �"�� �! �.�/�%� ��� +� �#� !% �� ��� ��� "�.� �" ��!"���" ����� %!� ����-@�� $��/!63 �# ������!#8 ��� %!//!6�#1 ���.��"6��� �"�� %!� �.�/�4 ���!# !% ��� +� �#� !% �� !#/� %!� �@��A"+�-��(8 ����F���FFF��������FF �#� "+�-�(�8 FF���-��F��F�����FF��F

�� /�#1 !#����!#" %!� ��� ����� "�5��#���/ ����-@��" 6������#�� �/ �! !#�" ��" ����� �����!�"/� �� ��� �� �� $�**(3 �!6-����8 ��� @�� !#����!#" 6��� .!��4�� �! !����# !���.�/ �.!�#�"!% @�� ��!�� �" %�!. �� � 1�#!.� �� �������8 6��/� ��� !.-�!#�#�" �#� �!/�.�" !% ��� ���.��� @��" 6��� ���#�� �/ �! ��!"���" ����� �����!�"/�8 ��� "� !#���� �#� �������� @��" 6��� ������!�� �# � �!/�.� !% �� �/ ��� ��� ��!# !#"�"��� !% �� .� ���">��/$�� ' +38 (� .� <�/8 � .� �1�/�8 ���@" $� � .� �� �38 � � .�

" ���.��8 � .� � ���.��8 �#� � : ��5 @!/�.���"� $��<���3 �!���#��%� �� ��B� �#� �! ��8 ��� "� !#���� �#� �������� ��!�� �"6��� /!���� �# ��B� �#� /�#�" !% � +G �1��!"� 1�/ ��� ����������!�� �" ��� �&�� ��� �! �� +, �� "�!���� ���# ��� "� !#������!�� �" ��� " (� ���.��" 6��� ��� "�.� �" ��� !#�" �"�� %!��@�� ��� " +� ���.��" 6��� ��� %!//!6�#1 "�& !#�"A "+-�8��F���FF���F����FF�� "+-�8 �������F���FF���F-����FF����F� "+-+8 F����F�����FF��������F����F�"+-�8 F��������F�����F�����FF��F�FF8 "+-(8 ��F-�����FF��F�FF� �#� "+-,8 ���F��������� ��� "�5��# ��#%!�.���!# !# ��������� ��1�#����� ���.��" 6�" !����#�� %�!.��� "���� ��!����� �� �"�1�2� �� �� $�**,38 : F�!""#�2/��"$:#����"��� !% N�O �� �8 E6��7��/�#�38 �#� � ����� $:#����"���!% �/!����8 :E�3 ���"� ��� ��� %!//!6�#1A 11 �8 F��M�F-9EEF�� E���8 ����FE�9�EF9F9�� E9��8 �F9F��FE��-����E� ?�(8 9����E��FE���F� ��-�F�8 F��F�9�-F9�F9F� �E��8 F�����F9�9��E�� ��F�� F99FF�-E�9�E9��F� ��E�$�F�F+3� F9E����E��F���� 1��2��8F<M<F�<F��F�� ��-�F�8 F�F9E�E��F�F�� ?�'8

F�F�E��FE9��FF� ��-���8 FE���EF9���� ���8 ��F��-F�������FF� ���8 ������F������FF�� 9�8 �F9F��F9-������F�� �-�8 ���F�E�9�EF9F��� �-��8 �F��F�E9-F���9F��� �-�?8 �F��F�E9F���9F��� �-��8 �F��-F�E9F���9�F�� �-�8 �F��F�E9F���9�F�� �-+89F�F��F9������F�� �-�8 E�����E������F�� �#� �-(8 9��F��F9��F����F ��� %!//!6�#1 ���.�� "��" 6��� !���-.�/ %!� �.�/�4 ���!# !% ��� +� �#� !% ��A "+-�8 "+-� $!� "+-(38�#� "+-,� ��� !���.�/ � ���.��" ��� ��8 ���8 ��E� � F�F+8?�'8 ��F�8 E���8 �#� 9� :"�#1 ���"� ���.��"8 .!�� ���#*�G !% ��� +� �#�" !% �� /! � 6��� "� �""%�//� �.�/�4�� ������-@��

������ ��>������� �� �! �� ����

9��� ��� ��� !% � ��#�-��/� : .!#��!�8 ��� "� !#� @�� ��!�� �""���#�� 6��� �������. ��!.��� 6��� "/� �� !�� !% � (G �1��!"� 1�/ �� 6�" ���# �/���� �"�#1 � 2�� ��� ��"�� %�!. P��1�# �!� @��%!� ���!.��� "�5��# �#18 ��>(� #1 !% �� 6�" �.�/�4�� 6��� ���"+-, ���.��

6 ���+������

���" ��"��� � 6�" "���!���� �� � 1��#� $ !�� K �F�)�3 %�!. ��!���# ��!#�/ F�#!.� " ��#��� !% ��� ��"� ��#���� ��!#���� ��"��� �@�!1��.8 �����/� !% <!��� 9� ���#2 ��� ?��!#1���#8 ���!#9!#�!8 ��! E!!#��8 <�#1 ��;�#18 <�. ;����8 <�. ���M�!#8E��# ��#;�#18 �6�#1 �����#8 �#� �� ;�#1<� $F��!#1"�#1����!#�/ :#����"���3 %!� /�� �""�"��# � �/"!8 ��� 6!�2 !% � ��#J"/�� 6�" "���!���� �� 1��#�" !% ��� ?���# <!����� ��!B� �8 !%?�!F���# �� @�!1��. $����/ ���/!�.�#� ��.�#�"�����!#38 �#�%�!. ��� <DE��=�DE� �! ��� �#���!#.�#��/ ?�!�� �#!/!1�����!#�/ �!�� ��"��� � ��#��� $��(-���+-���-�����-�3 9������ ���� ���� .� � ��� !..�#�" �#� �#1/�"� ��!!4#1 !% ����� ?��#� �� ��� ;!�# �##�" ��#��� $:<3 �#� �6! �#!#�.!�"�����6��"

����������� �������

��� %!//!6�#1 .������/ �" ����/��/� %�!. ����A==666 �/� 26�//���/�"��#1 !.=��!�� �"=B!��#�/"="���.��=�@;=�@;���,=�@;���,". ��.0��� ��/ ���! ��!.� @�(� 1�#� �" �&���""�� �# � �#� �� /�#�"��� #!� �# 6�/�-���� �/�#�" �!��/ �//�/�� ��� %�!. "���/�#1" 6�"��!��� 6��� � ��! ��!.� @�(� �� %��1.�#� � �#��� /�#�" ���!% ��� "�.� 1�#��� �� 21�!�#� �" #!�.�/ �/�#�" $�=�3 �! "�!6�5��/ /!���#18 ��� ��?� "���#�� 1�/ �# ��� /!6�� ��#�/ "�!6" �5��/��� /!���#1 ��� "+ "������ /�#� 6�" �"�� %!� ���" �!�����#�#�/�"�" 0��� �#/ �! 1�!6�� ��%%���# � ���6��# #!�.�/ �#� �� "���-/�#1" %!//!6�#1 �)��� ���/� ���!# ��� ��.� �/8 ��)��8 6�"���/��� !# � � ��� �� +-��� �#�����/" ��� �#����/ "���� 6�" ���/����! "���/�#1" 6��� �6! /����" $��!�#� ' .3 @/�#�" 6��� ��!�!-1������ , ���" �%��� ��� ����� "�����#1 �)��� 6�" ���/��� �� � !# �#�����!# !% ��� �1.��8 �" ��" ����� �# DJ<��%�8 �� ��9 $@/�#�@��"�!/ �3)8 �)+>�'�3 ��� "!/���!# !#"�"��� !% (�G � ��!#�8 (G1� ��!/8 �#� � �(G �6��#-�� 0��� �(/ �� �#� 6�/�-���� "���/�#1" ��%!�� �����.�#� �#� +8 ,8�#� �( ���" �%��� �����.�#� 6��� ��)�� �� ��� �#����/ �����.�#�8"���/�#1" !% �!�� 1�#!����" 6��� �� ��� �6! /��% "��1� �#� ��!�#�' . ��1� �6! .!�� �����.�#�" 6��� ���/��� !# ��� +�� �#� ,����� ��� ��!�!1����" 6��� ��2�# +��8 ,��8 �(�� ��� �%��� �#����/�����.�#� �%��� �( ���"8 6�/�-���� �/�#�" �#��� /�#�" 6��� ��!�#�

� ?/� 26�// @��/�"��#1 ���8 6�� ����� '������8 $����38 (<8 �(�>�,+

�,� !��� ��� ��� �� �/

�� . ����� 6�" #! #!�� ���/� ��%%���# � ���6��# #!�.�/ �#��� "���/�#1"

���� �

6�� �/� ����� �/� ���� -/�/ �� �� $���+3 F�#�����!# �#� �#�/�"�" !%�#� "�5��# � ������"� %!� �-�� ��11�#1 /�#�" �# �� � ������������9 �((8 ����>���)

���� �/� ���� '/� '��� �/� C���� 0/� C���� �/� ���� D/� '�� %/� ����0/ ��� '�� �/ $���+3 �"�������!# �#� ���� ����7���!# !% !������� �-�� ��1" �# �� � 1�#!.� ����� '9 (,8 ��(>��+

����� �/*/� ���� �/�/� �� �/�/ �� �� $�***3 �!/� �/�� �#�/�"�" !%�� � �/�#�" ����!��#1 �# �=�� ���#"�!"��/� �/�.�#�-.�������1�#� ������#1 "�"��. ����� '9 �<8 ,�(>,��

��+����+���� �/� ����� '/� E�� C/� %��� E/� �������� �/�/ ���-����� �/�/ $����3 :"� !% ��� ���#"�!"!# � �" � 1�#�-"��� �-�#1 �#1�#� �# ��� .��7� 1�#!.� ����� !���8 �$8 )�+>)�,

-����� �/�/� !�� �+� 6/� !����� -/� ������� �/� �������� �/��� �������� &/ $�**�3 �"�������!# !% �#/�#2�� �� ���!� "���" %!����#"�!"�� � �/�.�#�" %�!. ��� �7-.�$�3 �//�/� �# .��7� $�������8 �(,8 �,�>�)*

*� �� �/� A�+����� �/!/� >���� 6/�/� 0�.����� �/� !���������� >/�������� �� �/� �����1�� �/� ��� �/�/ ��� ������ 6/$����3 ���/� �#� .�/���/� � ���#"�!"���!#" �# �� � "�����/� %!��%4 ��#� �#"����!#�/ .���1�#�"�" ����� ���9 ����9 $,8 ��(>��)

���� %/� A���� �/� ������� >/ ��� ���������� >/ $�**�3 �%4 ��#����#"%!�.���!# !% �� � $;��0� ������ � 3 .������� �� ���8�����+��� �#� "�5��# � �#�/�"�" !% ��� �!�#�����" !% ��� �-�� ����� '9 ,8 �)�>�'�

���� ����� �/ $�**)3 ����!���#"�!"!#" !% �� �A ����� ��1�/���!# �#��"� %!� 1�#!.� �#�/�"�" ����� ���9 ����9 ()8 �+�>���

"������ %/� ������ �/� A���� �/� ���� %/� ������� >/ ��� ���������� >/$�**,3 ��1� �%4 ��# � ���#"%!�.���!# !% .��7� $?�� ���� � 3.������� �� ���8�������� ����������� %��9 ����������9 �$8)�(>)(�

���� -/�/� 6�� �/� ���� �/*/� ����� �/� ���� �/�/� ����� �/� ���/�/� 6�� �/ ��� 6�� */ $����3 �-�� �#"����!#�/ .���1�#�"�" %!�� ������!# ��11�#1 �# �� � ����� �������9 �(38 �,+,>�,��

����� /� !��� C/� C���� E/� ���� ����� �/� &���� �/�/� � ��� ���/�/ ���'����� �/�/ $���+3 �# � ���� �� ���#"�!"!# %�.�/� �#�� � %�����8 $#�8 �,+>�,)

���� ��� �/� >��� ��� �/� '���� �/ ��� ������� �/%/ $���+3 ����/�#� ���� .@�#1 �" .!��/�7�� �# �#���� �/���� %�����8 $#�8�,)>�)�

���� �/�/� �� !/"/� ����� �/�/ �� �� $����3 ����!1��..�#1 !% ���� ������ !% �=�� ���#"�!"!# %�.�/� ����#1 �/�#� ��1�#�����!# �#�� � ���9 !���9 �$8 �+�>�+)

�������� >/� �7.����� "/� !� ������ -/� ������ �/�/� ����� �/������������� �/� ���� �/� ��� C/*/� ���������� F/ ������� �������/ �/ $����3 �"���/�"��#1 �# �%4 ��#� �=����11�#1 "�"��. �# �� �A /��1�-" �/� �#�/�"�" !% �� H�#2�#1"�5��# �" ����� '9 (98 +��>+��

���� %/*/� �������+�� /� A������ >/ ��� '������� �/0/ $�**(3�%4 ��#� �"!/���!# �#� .����#1 !% ��8� ���� �������� �-���#"��� B�# ��!#" �� ����.�/ �"�..���� �#���/� �� @�� ����� '9G8 �()>�,+

���������� �/6/ $�**'3 ��# ��!#�/ 1�#!.� "A ��!��#1 �/�#� 1�#�%�# ��!# �#� �&���""�!# 6��� ���#"�!"!#" ����9 %���9 �� 9 ���9&�8 <)8 ����>���,

������ 6/� >������ �/� ������� �/� ��+���� �/� >����� �/� 61� �/������7���� %/� A������� �/ ��� ���� ����� �/ $���+3 ���1�� "���"�� �4 ��� !% ��� 6���, ����!���#"�!"!# "�!6" � ���%���# � %!��#"����!# 6����# 1�#�" �#� �1��#"� �#"����!# �# ����!���#"�!"!#-�� � ��1�!#" !% ��� 1�#!.� ����� !���8 �)8 �))�>�)'�

���7���� >/� A������� %/� ����1���� 6/� %�������� �/� >������� �/� ������� �/� "���� �/ ��� >�������� >/ $���+3 �!��/�7���!# !% ����#"�!"!# �# ��� �� � 1�#!.� %�����8 $#�8 �)�>�)�

A���� �/ $�*'+3 F�#��� �������/��� �# �� � �/�#�" ��1�#������ %�!. �// �/���� �# !��� �� 6����� !������ 6�����>��� ��� !�����!�� 3��������� $@!//���8 � 8 �� 3 ?��B�#18 ���#�=��#�/�8@��/����#�"A E ��# � @��""=�#���#���!#�/ �� � ��"��� � �#"������8�� *(>���

������ 6/ ��� 6����� �/*/�/ $�**'3 ���#"�!"!# ��11�#1 6��� ���-�+3 "�"��. �# ����� � �� ��������� �������� <��9 4�@ ��8�+ ���� ���������9 $�����#�7-N������8 ; �#� E�/�#�"8 ; 8 ��"3 �!�!6�8 �;A ��.�#� @��"" �# 8 �� +�*>++'

�� ��� F/�/� ��������� �/�/ ��� *��1� �� !/*/ $�*')3 �" !�-��� !% ���#"�!"��/� �/�.�#� � ������ �.!#1 ��!1�#� !% ��""�� �/����-������� .��7� �/�#�" �������� #(G8 '��>'�)

���������� F/� ������� �/� F���� >/� ��+���� �/� ����� �/-/*/�-��� �/� ��� �/ ��� ���������� �/ $�**(3 @�����#" !%1�#� � ��!# �# �/�#� ����/!�.�#� �����/�� �� �#��# ������ �#� 1�#� ���� ���#"�!"��/� �/�.�#�" $���� ���9 <8�)*)>�'��

>������ 6/0/� ����������� �/� �������� F/� ����� �/� >����� �/6/�������� */ ��� ����� �/-/*/ $�***3 ��/���/� �#����#��#���%� ���� ��������A������� ���#"�!"!# �#"����!#" �#��8� ����A � �!!/ %!� %�# ��!#�/ 1�#!.� " ����� !���8 (8�'��>�'(�

>����� �/� �� ��.�� &/C/ ��� 0������� /F/ $�**,3 � ���#"�!"!#�#"����!# �# ��� ��8� ���� EE��, 1�#� ��"�" �# �.���!-��%� ���� /����/ .�����!# ����� '9 �38 �)*>�'*

H��������� /�/� C���� E/�/� C��� D/�/ �� �� $����3 �# ��=��1�#� �#� �#��# �� ������#1 "�"��. %!� �#"����!#�/ .���1�#�"�"�# �� � 5���9 ����� ����9 #<8 (�)>((*

'��1��� F/ $����3 E�������!# .���1�#�"�" �"�#1 .��7� ���#"�!-"!#" !���9 ;��9 ����� ����9 (8 ��+>��)

'������ &/� ������� */�/� 0����7� �/ ��� ������ �/ $�**'3 ���������!�� !% ��� ���!#!.!�" .��7� ���#"�!"��/� �/�.�#�-�=��9 ��8� ���� �������� �//!6" �%4 ��#� .���1�#�"�" ����� ���9 ����9 (98 *'*>***

'�� �/� ��� E/� %���� '/ �� �� $���+3 ���/!�.�#� !% �#��# ������ /�#�" %!� %�# ��!#�/ �#�/�"�" !% ��� �� � 1�#!.� ����� '9 ()8��'>��)

��� � �""�!# #�.���" %!� ��� "�5��# � ����A ��� �#%!�.���!# !% ��)� �� /! � 6�" ��1�"����� �" F�#?�#2 � �""�!# #�.���

%�!. �F��'+�� �! �F��*+'�

� ?/� 26�// @��/�"��#1 ���8 6�� ����� '������8 $����38 (<8 �(�>�,+

$��������� �� �������� �� " ����������� �� ���� �,+