PENGARUH FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOLIK

DAUN AWAR-AWAR (Ficus septica Burm. f)

TERHADAP VIABILITAS SEL DAN DAUR SEL

KANKER PAYUDARA T47D

ISHMA ALIA

08/265184/FA/08079

Latar Belakang

Prevalensi tinggi (Jemal et

al., 2011; SIRS, 2008)

Kemoterapi

Kanker

payudara

Resistensi obat, target Kemoterapi

BAHAN ALAM Awar-awar (Ficus septica Burm. f)

Resistensi obat, target

tidak spesifik (Ait-

Mohammed et al., 2011)

Latar Belakang

1. Bersifat sitotoksik pada sel

kanker HCT-8, NUGC, HONE-

1, T47D dan MCF7 (Damu et

al., 2009; Pratama, 2010; al., 2009; Pratama, 2010;

Sekti, 2009).

2. Menginduksi apoptosis

melalui penekanan ekspresi

Bcl-2 (Sekti, 2009).Daun awar-awar (Ficus septica Burm. f)

Perumusan Masalah

Apakah fraksi etil asetat ekstrak etanolik

daun Ficus septica mempunyai pengaruh

terhadap viabilitas sel kanker payudara T47D

dan seberapa besar potensinya?

1111

2222Apakah fraksi etil asetat ekstrak etanolik

daun Ficus septica mampu menghambat

daur sel kanker payudara T47D?

Tinjauan Pustaka

1. KANKER DAN KANKER PAYUDARA

Sel normal yang

mengalami transformasi

sehingga berploriferasi

secara terus menerus

Terjadi mutasi pada gen

BRCA1, BRCA2 dan p53 secara terus menerus

(Panno, 2005)

Sel kanker mampu

menghindar dari

apoptosis dan growth

supressor (Hanahan et al.,

2011)

BRCA1, BRCA2 dan p53

(Panno, 2005)

Paparan estrogen yang

tinggi (Macdonald et

al., 2005)

Tinjauan Pustaka

2. SEL T47D

Sel kanker payudara dari

jaringan duktal.

Mengekspresikan protein Mengekspresikan protein

p53 yang termutasi.

Mengekspresikan reseptor

estrogen.

(Schafer, 2000)

Tinjauan Pustaka

3. Awar-awar (Ficus septica Burm. f)

Divisi : Spermatophyta

Sub divisi : Angiospermae

Classis : Dicotyledonae

Daun awar-awar

mengandung alkaloid

fenantroindolisidin Classis : Dicotyledonae

Ordo : Urticales

Famili : Moraceae

Genus : Ficus

Spesies : Ficus septica Burm. f

(Syamsuhidayat et al., 2000)

fenantroindolisidin

(antofin, tyloforin,

ficuseptin), genistin,

fenolik, steroid,

saponin, triterpenoid

(Lansky et al., 2011).

a. Alkaloid fenantroindolisidin bersifat sitotoksik pada sel kanker HCT-

8, NUGC, HONE-1, KB-3-1, KB-IV (Damu et al., 2009; Staerk et al., 2002).

b. Ekstrak etanolik daun awar-awar bersifat toksik pada sel kanker payudara

T47D dan sel MCF7, dan mampu menginduksi apoptosis melalui

penekanan ekspresi Bcl-2 (Pratama, 2010; Sekti, 2009).

3. Awar-awar (Ficus septica Burm. f)

penekanan ekspresi Bcl-2 (Pratama, 2010; Sekti, 2009).

c. Turunan fenantroindolisidin, tyloforin mampu mampu menghambat

pertumbuhan sel kanker HepG2, HONE-1, dan NUGC-3 pada fase G1.

Antofin mampu menghambat pertumbuhan sel kanker A549 dan sel HCT

116 pada fase G0/G1 (Wu et al., 2009; Min et al., 2010).

d. Senyawa fenolik resveratrol mampu menghambat proliferasi sel kanker

MCF7 (Corre et al., 2006).

Resveratrol Fenantroindolisidin

Landasan Teori dan Hipotesis

Sitotoksik pada beberapa sel kanker dan

mampu mempengaruhi daur sel

Fraksi etil asetat ekstrak etanolik daun Ficus septica memiliki potensi cukup

tinggi dalam menghambat viabilitas sel kanker payudara T47D.

Fraksi etil asetat ekstrak etanolik daun Ficus septica mampu menghambat

daur sel kanker payudara T47D

Fraksinasi

METODE PENELITIANMETODE PENELITIAN

Metode Penelitian

Fraksinasi bertahap dengan heksana dan etil asetat

Pembuatan ekstrak etanolik daun awar-awar

Ekstraksi

Serbuk daun awar-

awarMaserasi etanol 70%

Dipekatkan diatas

penangas air

Ekstrak

etanolik

kental

Fraksinasi

Fraksi tidak larut Fraksi larut

Ekstrak

etanolik

kental

Fraksi tidak larut

heksana (FTH)

Fraksi tidak larut

etil asetat (FTLEA)

Fraksi larut etil

asetat (FLEA)

Fraksi larut

heksana

Metode Penelitian

Fraksinasi bertahap dengan heksana dan etil asetat

Pembuatan ekstrak etanolik daun awar-awar

Analisis data

Uji sitotoksisitas, uji penghambatan daur sel

Pemanenan sel T47D

MTT Assay

MTT Formazan

SPSS 16.0

Flowcytometry

ModFit LT 3.0

(Macey, 2007; McCarthy, 2007)

Propidium Iodida

HASIL DAN

PEMBAHASANPEMBAHASAN

HASIL & PEMBAHASAN

Determinasi

Ekstraksi dan Fraksinasi

Rendemen ekstrak etanolik = 10,86%

Rendemen

Rendemen ekstrak etanolik = 10,86%

Rendemen fraksi larut etil asetat (FLEA) =1,97%

Rendemen fraksi tidak larut etil asetat (FTLEA) = 5,91%

Uji Sitotoksik FLEA

Kontrol FLEA 1 µg/mL FLEA 10 µg/mL FLEA 50 µg/mLKontrol FLEA 1 µg/mL FLEA 10 µg/mL FLEA 50 µg/mL

FLEA 100 µg/mL FLEA 250 µg/mL FLEA 500 µg/mL FLEA 700 µg/mL

Uji Sitotoksik FLEA

50

60

70

80

90

Via

bil

ita

s S

el (

%)

Nilai IC50 FLEA =

0

10

20

30

40

1 10 50 100 250 500 700

Via

bil

ita

s S

el (

%)

Konsentrasi FLEA (µg/mL)

Nilai IC50 FLEA =

13,72 µg/mL

Uji Sitotoksik FTLEA

Kontrol FTLEA 1 µg/mL FTLEA 10 µg/mLKontrol FTLEA 1 µg/mL FTLEA 10 µg/mL

FTLEA 250 µg/mL FTLEA 500 µg/mL FTLEA 700 µg/mL

Uji Sitotoksik FTLEA

80

100

120

140

Via

bil

ita

s S

el (

%)

0

20

40

60

80

1 10 250 500 700

Via

bil

ita

s S

el (

%)

Konsentrasi FTLEA (µg/mL)

Nilai IC50 FTLEA =

4175,80 µg/mL

Perlakuan IC50 (µg/mL) Keterangan

FLEA 13,72 -

FTLEA 4175,80 -

EDA 13 Pratama et al. (2011)

FTH 9,3 Pratama (2012)

Ekstrak dikatakan mempunyai potensi

sebagai agen anti kanker apabila nilai IC50

dibawah 30 µg/mL (Joshi et al., 2011)

Uji Penghambatan Daur Sel

Kontrol FLEA 7 µg/mL

PerlakuanSub G1

(%)

Jumlah sel tiap fase

G1 (%) S (%) G2/M (%)

Kontrol 3,59 37,33 47,31 15,36

FLEA 7 µg/mL 41,91 46,21 35,64 18,15

Kemungkinan Mekanisme

Antofin menurunkan ekspresi

cyclin E, cyclin D dan CDK4

(Min et al., 2010)

Akumulasi fase G1Tyloforin menurunkan ekspresi

cyclin D1 dan cyclin A2

(Wu et al., 2009)

Resveratrol meningkatkan ekspresi

protein WAF1/p21 (Ahmad, 2001)

KESIMPULAN DAN SARANKESIMPULAN DAN SARAN

KESIMPULAN

Fraksi larut etil asetat ekstrak etanolik daun awar-awar

memiliki potensi lebih tinggi dalam menghambat viabilitas

sel T47D dengan nilai IC50 sebesar 13,72 µg/mL, sedangkan

nilai IC50 fraksi tidak larut etil asetat ekstrak etanolik daun

awar-awar sebesar 4175,80 µg/mL.awar-awar sebesar 4175,80 µg/mL.

Fraksi larut etil asetat ekstrak etanolik daun awar-awar

konsentrasi 7 µg/mL mampu menghambat daur sel T47D

pada fase G1.

SARAN

Perlu dilakukan identifikasi profil kandungan senyawa yang terdapat

dalam fraksi larut etil asetat ekstrak etanolik daun awar-awar untuk

mengetahui kemungkinan senyawa yang memiliki efek sitotoksik.

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai mekanisme aksi fraksi Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai mekanisme aksi fraksi

larut etil asetat ekstrak etanolik daun awar-awar dalam menghambat

daur sel dengan menggunakan variasi konsentrasi, serta mekanisme

molekuler yang terlibat.

Pengujian fraksi larut etil asetat ekstrak etanolik daun awar-awar

secara in vivo perlu dilakukan untuk melihat keselarasan hasil antara uji

in vitro dan in vivo.

TERIMAKASIH

Struktur senyawa

(1) Ficuseptin B, C, D, (2) Ficuseptin A, (3) 10R,13aR-tylocrebrin N-oksida;

10R,13aR-tyloforin N-oksida, (4) 10S,13aS-isotylocrebrin N-oksida, (5)

10S,13aR-antofin N-oksida; 10S,13aR-isotylocrebrin N-oksida; 10S,13aR-

tylocrebrin N-oksida; 10S,13aR-tyloforin N-oksida,

(6) Genistin, (7) Kumarin (Lansky et al., 2011).

Saponin

Resin

Klorofil

Nekrosis dan apoptosis

Nekrosis Apoptosis

Membran sel Mengalami kerusakan Integritas membran masih

terjaga

Nukleus Degradasi DNA secara acak Kondensasi kromatin, DNA

laddering, fragmentasi inti

Sitoplasma Terjadi pembengkakan sel

Kemungkinan Mekanisme

Penurunan ekspresi Bcl-2

(Sekti, 2009)

Apoptosis

Antofin meningkatkan ekspresi TNF- α

(Wu et al., 2009)

Pengaruh berbagai ekstrak terhadap sel T47D

Perlakuan IC50 (µg/mL) Keterangan

Ekstrak daun sambung nyawa 90 Jenie dan Meiyanto, 2007

Ekstrak propolis 34,67 Syamsudin et al., 2009

Ekstrak herba leunca 47 Anindyajati, 2011

Fraksi kloroform daun sirih merah 105,43 Kurniawan, 2006

Fraksi etil asetat daun sambung nyawa 31 Jenie, 2007

Fraksi heksana daun sambung nyawa 40 Jenie, 2007

Perlakuan Indeks Seletivitas Keterangan

Fraksi kloroform daun sirih merah 3,02 Kurniawan, 2006

Fraksi heksana daun awar-awar 3,1 Pratama, 2012

Perhitungan sel

10 µl = 1 ml= 104 /ml

Jumlah sel = sel hitung X 104 = 100 x104 =106 /ml

Sel akan ditanam: 5000x100= 5 106/106= 5ml (ambilSel akan ditanam: 5000x100= 5 106/106= 5ml (ambil

dari suspensi sel 5 ml)

Yang dibutuhkan : 100 x100 well= 10000 µl= 10 ml

Maka ad sampai 10 ml

Jumlah reagen

• Bahan:

• FBS = 10%

• Penisilin-strep = 1%

• Tripsin 0,25% 450 µl

• MTT =0,5mg/ml• MTT =0,5mg/ml

• DMSO max=1%

• SDS =10% dalam 0,1 N HCl

• Propidium iodida= 50 µg/ml

• Rnase = 50 µg/ml

• Triton X = 0,1%

Pemanenan Sel

Uji Flowcytometry

Pemanenan selBaca dengan FACS Calibur

� profil cell cycle

Transfer suspensi ke

flowcyto-tubeSelSelSelSel dipulihkandipulihkandipulihkandipulihkan6 well plate

28/11/2014

Masukkan eppendrof

Perlakuan

Pengambilan sel�

cuci PBS, buang

Tambah reagen

flowcytometry

Inkubasi 24 jam

Bungkus

alufoil+vortex

Buang PBS

105°C 30 menit + 1-2 g ekstrak

5-10 mm

Metode Susut Pengeringan

Oven 105°C

hingga bobot tetap

Pendinginan

dalam eksikator

Bobot tetap: selisih 2 kali

penimbangan tidak lebih

dari 0.25%