Dual functionality of a plant U-rich intronic sequence element

10
Dual functionality of a plant U-rich intronic sequence element Craig G. Simpson, S. Nikki Jennings, Gillian P. Clark, Graham Thow and John W. S. Brown Gene Expression, Scottish Crop Research Institute, Invergowrie, Dundee, DD2 5DA Scotland, UK Received 16 July 2003; revised 17 September 2003; accepted 26 September 2003. For correspondence (fax 44 1382 562426; e-mail [email protected]). Summary In potato invertase genes, the constitutively included, 9-nucleotide (nt)-long mini-exon requires a strong branchpoint and U-rich polypyrimidine tract for inclusion. The strength of these splicing signals was demon- strated by greatly enhanced splicing of a poorly spliced intron and by their ability to support splicing of an arti®cial mini-exon, following their introduction. Plant introns also require a second splicing signal, UA-rich intronic elements, for ef®cient intron splicing. Mutation of the branchpoint caused loss of mini-exon inclu- sion without loss of splicing enhancement, showing that the same U-rich sequence can function as either a polypyrimidine tract or a UA-rich intronic element. The distinction between the splicing signals depended on intron context (the presence or absence of an upstream, adjacent and functional branchpoint), and on the sequence context of the U-rich elements. Polypyrimidine tracts tolerated C residues while UA-rich intronic elements tolerated As. Thus, in plant introns, U-rich splicing elements can have dual roles as either a general plant U-rich splicing signal or a polypyrimidine tract. Finally, overexpression of two different U-rich binding proteins enhanced intron recognition signi®cantly. These results highlight the importance of co-operation between splicing signals, the importance of other nucleotides within U-rich elements for optimal binding of competing splicing factors and effects on splicing ef®ciency of U-rich binding proteins. Keywords: pre-mRNA splicing, UA richness, polypyrimidine tract, mini-exon, RNA-binding protein. Introduction Precursor messenger RNA (pre-mRNA) splicing is a two- step trans-esteri®cation reaction found in all eukaryotes that accurately removes introns from primary transcripts and ligates protein coding exon sequences to produce mRNA for translation. The accuracy and ef®ciency by which introns are removed is critical for gene expression and is dependent on the sequential assembly of small nuclear ribonucleoprotein particles (snRNPs) and a range of other spliceosomal proteins on pre-mRNAs to form the spliceo- some. Assembly of the active spliceosome leads to initia- tion of cleavage at the 5 0 splice site and formation of a 2 0 -5 0 phosphodiester bond with an internal branchpoint adeno- sine found close to the 3 0 splice site. The second step involves cleavage at the 3 0 splice site, ligation of the two exons and release of the branched intron (Hastings and Krainer, 2001; Kra È mer, 1996). Essential sequence elements required for splicing are conserved among plant introns and show a strong re- semblance to metazoan splicing elements (Brown and Simpson, 1998; Lorkovic  et al., 2000; Reddy, 2001; Simpson and Filipowicz, 1996). Both plant and metazoan intron 5 0 and 3 0 splice sites consist of a 9 nucleotide (nt) (CAG: GUAAGU) and a 5 nt (GC AG:G) consensus sequence, respectively (highly conserved GU and AG dinucleotides are underlined; `:' denotes cleavage site; Brown and Simpson, 1998; Kra È mer, 1996; Lorkovic  et al., 2000). In vertebrate introns, the branchpoint sequence (CUR AY ± branchpoint adenosine is underlined) and a closely asso- ciated downstream polypyrimidine tract are essential sig- nals for ef®cient recognition of the 3 0 splice site and splicing. In plants, branchpoint sequences are also required for accurate and ef®cient splicing (Liu and Filipowicz, 1996; Simpson et al., 1996, 2000, 2002). Compared to vertebrate introns, plant introns tend to have a less prominent poly- pyrimidine tract, although they contain enriched U content between putative plant branchpoints and the 3 0 splice site (Baynton et al., 1996; Brown, 1986; Hanley and Schuler, 1988). In vertebrates, the polypyrimidine tract is bound by U2AF 65 , which along with other proteins, such as the branchpoint binding protein, recruits the U2snRNP to the The Plant Journal (2004) 37, 82±91 82 ß 2003 Blackwell Publishing Ltd doi: 10.1046/j.1365-313X.2003.01941.x

Transcript of Dual functionality of a plant U-rich intronic sequence element

���� ���������� � � ����� ���� ������������� �������

���� �� ������ �� ��� �������� ����� �� ������ ������ �� ��! ��� "� �� #� ��

���� ��������� � ���� ��� ������ � ��������� ���������� ������� ��� ��� � ������ ��

�������� �� �� ���� ������� �� ��������� ���� �������� � ��������� �������� �������������� ��� �!! ��" #� ! �� �$���� %���&�'�������������()�

�������

$� ���� �%������ ������ ��� �������%��� ����!�!� &�������!� '��(���� ����)� ������� � �����

*�������� ��! ���� �������!�� ����� �� ������� ��� �������� � ����� ������ ������ �� !����

������! *� ������� �������! ������ � � ���� �����! ���� ��! *� ���� �*��� � ������ ������ � ��

���+��� ����)�� ��� �� ���� ���!����� ����� ����� ��� ������ � ����! ������ ������ ,����

����� ��������� �� ��+���� ���� ������� -����� � ��� *�������� �����! ��� � ����)� �����

�� ���� ��� � ������ ������������ �� �� ���� ��� ���� ���� �������� ��� ������ �� ����� �

�������!�� ����� � � ,���� ����� �������� ��� !������ *�� ��� ��� ������ ������ !����!�! �

���� ����)� '��� �������� � �*����� � �� ��������� �!.����� ��! �������� *��������(� ��! � ���

�������� ����)� � ��� ���� ��������� �������!�� ������ �������! � ���!��� ��� ,���� �����

�������� �������! ,�� ����� � ����� ������ ���� ������ �������� ��� ��%� !��� ���� �� ����� � �������

����� ���� ������ ����� � � �������!�� ������ /������ %���)������ � � !������� ���� *�!��

������ �������! ���� ������� ���+������� ����� ������� ������� ��� �������� � ��������

*�� ��� ������ ������� ��� �������� � ���� ������!�� ��� ���� �������� �� ����� *�!�� �

������� ������ ������ ��! ������� � ������ ��+����� � ���� *�!�� �������

0�� �!�1 �����2�, ������� , �������� �������!�� ������ ����)�� 2�,�*�!�� ������

$���!����

*������� ������+�� �,- ����$��,-) �������+ �� � �&�$

���� �����$������.������ �������� ���� �� ��� �(�������

�/�� ��������� ������� ������� ���� ������� �����������

��� ��+���� ������� �����+ � �� ��0����� �� ������

��,- ��� ������������ 1/� ������� ��� ��.������ ��&/��/

������� ��� ������� �� �������� ��� +��� � �������� ��� ��

��������� �� �/� ��0������ �������� �� ����� ������

���������������� ��������� ����,*�) ��� � ���+� �� ��/��

������������ �������� �� ���$��,-� �� ���� �/� �������$

����� -������� �� �/� ������ ����������� ����� �� ������$

���� �� ������+� �� �/� #� ������ ���� ��� ��������� �� � �$#�

�/���/�������� ���� &��/ �� �������� �����/����� �����$

���� ���� ����� �� �/� �� ������ ����� 1/� ������ ����

�������� ������+� �� �/� �� ������ ����2 ��+����� �� �/� �&�

� ��� ��� ������� �� �/� �����/�� ������ �3�����+� ���

4������2 ���� 4��5���2 �66�)�

7�������� ��0���� �������� ��0���� ��� �������+ ���

��������� ����+ ����� ������� ��� �/�& � �����+ ��$

��������� �� ����8��� �������+ �������� �9��&� ���

�������2 �66"� :��(����; �� ���2 ���� �����2 ���� �������

��� ������&��82 �66�)� 9��/ ����� ��� ����8��� ������ #�

��� �� ������ ����� ������� �� � 6 ��������� ���) �<-=>

=?--=?) ��� � # �� �=<-=>=) �������� ��0����2

������������ �/�+/�� ��������� =? ��� -= ������������

��� ���������� @>A ������� ������+� ����� 9��&� ���

�������2 �66"� 4��5���2 �66�� :��(����; �� ���2 ���)� B�

���������� �������2 �/� �����/����� ��0���� �<?�-C D

�����/����� ��������� �� ���������) ��� � ������� ����$

������ ��&������� �������������� ����� ��� ��������� ��+$

���� ��� ��.����� ����+������ �� �/� �� ������ ���� ���

�������+� B� ������2 �����/����� ��0����� ��� ���� ��0����

��� ������� ��� ��.����� �������+ �:� ��� ������&��82 �66��

������� �� ���2 �66�2 ���2 �� )� <������� �� ����������

�������2 ����� ������� ���� �� /��� � ���� ��������� ����$

���������� �����2 ���/�+/ �/�� ������� �����/�� ? �������

���&��� ������� ����� �����/������ ��� �/� �� ������ ����

�9������ �� ���2 �66�� 9��&�2 �6"�� 3����� ��� ��/���2

�6"")� B� �����������2 �/� �������������� ����� �� ����

�� ? -��#2 &/��/ ����+ &��/ ��/�� ��������2 ��/ �� �/�

�����/����� ������+ �������2 ������� �/� ? ���,* �� �/�

�� !���� "����� � ��!) 342 " D6�

" � ��� 9���(&��� *����/��+ :��

���> �����!�E%����#$���F� ������6!��

������ �����/������ 1/� ���� �� �������������� ������ ��

����� �������+ /�� ���� ���.��� �� ������� ������ ��

�/� ������� ���������� �� ?-$���/ ��0���� �������� �����$

���� �� ����� ������ �������+ ���� ����&)� ,�����/�����2

�������� �� � ������ ��������� ����$� �� &�� �/�&� ��

�� ��������� �� � �����+ �����/����� ��� ?$���/ ��������$

������ �����2 ��� �/�� ������ ����&�� � ����������� ��.��$

���� �� � ��������� ����� �������������� ����� �������� ����

?-$���/ �������� �������� �������� �� ���2 ���2 �� )�

1/�2 ���/�+/ �������������� ������ ��� ���� ���������

�� ����� �������2 �/�� ��� ������� �� � ������� &�� �� ��

������ ���� ���������� 1/�� �� ���� �������� �� �/� ������$

������ �� ���� �� ������ ���� �������+ ������� ���&��� ������

��� ����8�� �9��&� �� ���2 �� )�

? �� ?- ���/���� �� � +������ ������ �� ����� �������

��������� ��� ��.����� ����� �������+ �=������ ��� ������&��82

�6"6)� B� ������������� ������2 ������� ��0��� �������

?- ������� �� #6G ��� ��.����� �������+ �=������ ���

������&��82 �66�)� B� ��������2 �������+ �/� �������� ���

����������� �� ?$���/ ��+���� �� � ����� �� ����� �������

��� �� �/��+�� �� �������+ ��.������ ��� ���������� �� �������

������ ����� �9������ �� ���2 �66�� <����$?������ �� ���2 �66��

=����(�&�(� �� ���2 �66�� =������ ��� ������&��82 �6"6� 4�

�� ���2 �66"� :���%�/�&��� �� ���2 �666� :� �� ���2 �66��2��

:�/���� ��� H�����2 �66!�2�� I�<���+/ ��� ��/���2

�66�� I�<���+/ �� ���2 �66�� I����� �� ���2 �66�� �������

�� ���2 ���)� I����� /��� ���� �������� &/��� ?-$���/

������+ ������� �������� &��/ ?-$���/ �������� �� �������

�/� ����+������ �� �/� �������2 �� /��� ��.�� �/� ������ �����

�� ���/ �/� #� ��� � ���� �� �/� ������� ��� �� ������ �������+������� �=������ ��� ������&��82 �6"6� :� �� ���2 �66��2��

:�/���� �� ���2 �66!� I�<���+/ �� ���2 �66�� �������

��� 9��&�2 �66�)� -� ���� ���,* ��� ������������ ���$

������� ��� ��������� �� ������2 ?-$���/ ������+ ��������

��� �/�+/� �� ������� ����� �� ����������� ��������� 1�

����2 � ������ �� �������� �?9*�2 �9*!# ��� �9*!�) &��/

��.���� ��� ?$���/ ��0����� /��� ���� �������� ��� �/��$

���������2 �� ���� ?9*� /�� ���� �/�&� �� ������ �������+

�=����(�&�(� �� ���2 �66�� :�������� �� ���2 ���2 �� �

:��(����; �� ���2 ���)# J���� �������� �� ?9*� ������

������ ������� ������� ��� ��������� ��,- ��������� �� �

��������$��������� ������ �:�������� �� ���2 ���)�

1/� ?$���/ ������+ �������� ��� �/�+/� �� ������ ��/��

�������+ �������2 ��/ �� /��,* �� �� �������� ��� ���,*�2

������+ �� ����������� ��������� B�����2 ?9*� �� �������

�� ��������� 1B-$� ��� ����� ,��"�2 &/��/ ��� ����$

������ &��/ ������� �/�� ������� ?$���/ ��0���� ��&�$

������ �� �/� #� ������ ���� ���2 ��(� ?9*� �� ������2 /���

�/� ������� �� ������� �������+ �� ������� �/�� /��� ������$

��� ������ ����� �K�� =����$4���8�( �� ���2 ���� :� =����

�� ���2 ���� *�+ �� ���2 �666)�

B� ����8��2 � �� ��.������ ����� �� ��������� ���� ��

��.���+ ������ ����� �� ����� ��������/���� �� �/� �������$

���� �9���(2 �66#� 3�����+� ��� 4������2 ���� 4��5���2

�66�� ����2 �66�2 ���)� 9��/ ������ ��� � �� �������+

��/����� ��� �������� �������� ���������� �/� ���������

�� ������ ����� �/��+/ ������������ &��/ ��/�� ������� ���$

����� 1/�2 ������ ���� ��������� ��������� ������ ���$��,-

����������� �� ����������� �/��+/ �/� �������� �� � �����

�� �������+ ��+������ ������� ���2 �� ���������2 �/� ��$���/

����� �� �������� �9���(2 �66#� 9�����&2 ���� 3�����+� ���

4������2 ���� ����2 ���� ����/ ��� L����; ����2 ���� H��+

���I�����2 �66�)� B� ������2 � �� ��.������ �� �� ���������

������ ���� ��������� ���/����� �� ������������ �� ����

������ ���� �������� �����+ � �� �(�����+2 ��� M��(��+

������ ��0����� ��$����������� ��������+ �������+ �� ��%�$

���� ������� �9��&�2 �66�� 9��&� ��� �������2 �66"�

I�<���+/ �� ���2 �66�� �����2 ���� ������� �� ���2

�66"2 �666)� B� ��������2 �/� ���/����� ��� ���������

����$� �� �������+ ������� �� � �� ��.������ ��������

�� ���2 ���)�

<������2 ���/ ����������� ��� ����������� �������+ ������

�� �/� �����+�/ �� ��������� �������+ ��+����2 �/� ����+������

�� ��������� �������� ��� �/��� ������������� -� ���� ���

���� � ������ �� ����������� �������+ ��� ��������� �3���

�� ��� �� )2 �� �����������+ �� /�& �/��� ������ ���

��+����� ��0���� �������� (��&���+� �� ������ ��+����

��� ����������+ ��������� *���� ������� ������� �&� ?$���/

�������+ ��+����> � �������������� ����� ��� ?-$���/ ��������

��������2 &/��/ /��� ��������� �������� ��� ��� ����+$

����� �� ��������� ��������� K������ � +���� ���� �� ������2 �/�

����� ��� ������� �� ����� ������ ?-$���/ �������� �� �����

���+��� �(��&�� 3���2 &� �������� � ������ ����� �� �/�

�����+2 ����������� ������ ��������� �����/����� ���

��&�������?$���/ �������2 &/��/ ����&� � �� ������+��/

���&��� ?-$���/ ��� �������������� ����� ��������� H�

�/�& �/�� ��+��/��2 �/��� ��+���� +������ ������� �������+

��.������ �� � ������ ������� ������ ��� ������� ��������

�� �� ����.���� ����$� ��� B� ��������2 �/� ?$���/ �������

������ �� �/� �������� �� � ��������� �����/����� �� ��� �� �

�������������� ������ B� �/� ������� �� � �����/�����2 �/�

��������� ?$���/ ��0���� �������� �� �� ?-$���/ ������

����� �������+ �������� H� ���/�� ����������� �/�� ��$

� �������� �� �&� ��������� ����� ?$���/ �,-$������+ ���$

����� �������� ������ ����+������ ��� �������+�

2������

��������� ���� $ %��� ����&��'�'�(��� ��� �

����� �� ��� �� ) � ���' ��� �� ����

�������+ �� �/� ������ ��������� ����$� �� ������� ��

�����+2 ����������� �������+ ��+���� ��� � �� ����+��+

�������� �� ���2 ���)� 1� � ����� &/��/�� �/� ������

��������� ������ � �����/����� ��� �������������� �����

�?��) ���� ��/���� �������+ �� � ������ ������� ������2

�/��� ��+���� &��� ��������� ���� �� ������ ���� � &/���

!���� �� � ����� ��� ��'�'�(��� ��� �� "�

� 9���(&��� *����/��+ :��2 �� !���� "�����2 � ���)2 342 " D6�

������� +��� ���+�� ��2�)� 1/�� ������ &�� ���������

�/�&� �� �� ������� &��/ ���� ��D�#G ��.������ �� �������

����������� ���+�� ��2�2 �-� ������� �� ��# �66�)� 1/� � ��

��������� �����/�����E�������������� ����� ��0���� &��

��������� !�D#6 �� ������� �� �/� ������� ������ ��

������ ���� ��0���� ���+�� ��2�� �-9�?��)� 1/�� ��������

�/������� ��������� �/� ��������� ��������� �����/�����

#� �� ��&������� �� �/� #� ������ ����2 ��� #! �� ���������

�/� �� ������ ����2 ��� �/� ��/����� ������� ������ �����/$

����� � �� ������� �� �/� �� ������ ���� ������� �� 3�:�

������ � ������� 9��&� �� ���2 �6"�)� H/�� ���������

���� ������� �����������2 �������+ ��.������ ���� �� ���G

���+�� ��2�)� 1� ��������� &/��/�� �/� �������� ��������

�� �������+ ��.������ &�� ������ �� ���������� �� �/� �����$

���� �����/�����E�������������� ����� �� �� ��������

������ ����+������ �/��+/ ��������� ?- ������� �## ��

� G) �����&��+ ����������� �� �/� ?�� �������������� �����

��0����2 �/� ��������� �����/����� - &�� ������ �� ?

���+�� ��2�� �-?��)� B� �/� ��������� ����$� �� ������2

�/�� ������� ����(� ����$� �� �������+ �������� �� ���2

���2 �� )� 3�&����2 �� �/� ����� � �� �/� ���+�� �������

������2 �/�� ������� /�� �� ������ �� �/� ��.����� �������+

�� �/� ����.�� ������� ������ ���+�� ��)� 1/�� �++�����

�/�� �/� ��������� �������+ ��.������ ��M����� �/� ��������

�� �/� ?$���/ ��+��� �� �/� ������� ������2 ��� �/�� �� �/��

����� �2 �/� ?�� �������������� ����� &�� �����+ �� �� ?-$

���/ �������� ��������

��������� ���� $ %��� ����&��'�'�(��� ��� �

��(��� ��� �� ) � �'����� (�*���

1� � ����� &/��/�� �/� ��������� ������ � ��+���� ����

������� �������+ �� �� ����.���� ����$� �� ������2 &� ���

� �������� ���������+ �&� ����� ������� &��/ ���� ���������

?- �������� ��� �������+ ��.�������� ���+�� �2 �-EE:�

������� �� ���2 �666)� 1/� .��� ������&�� �/� ������ �������

&/��� ������� ������ ���� �����) &/��� �/� ������ ������

&�� ���� � ��� ��+��� +���2 &��/ " G ?- ������� ���

�6#G �������+ ��.������ �� ������� ����������� ��������

�� ���2 �66�)� B� �/� �-EE: ��������2 �/� ������� &��� ����$

����� �� � ����/���� ����$� �� �� �� �� ���+�� �)� B�

������� �����������2 �/� ����$� �� &�� ��� ������� ���

�/� ������� ������ �������� ��������2 �� �������� �� �/�

��D�#G �������+ �� �/�� ������ ������ 1/� ���� �������+ �����

&�� ������� �� �/� ��&������� ��+��� ������2 �� �/�&�

�� �/� �������� �� � �� �� ���� ���+�� �� ������� �� ���2

�666)� 1/�2 �� �/�� ��0���� ����� �2 �/� ������� ������

&�� ��� ����+����� �� �� �������� ��0���� ��2 �������2

����+ &��/ �/� ����$� ��2 ����� �� �� � ��2 &/��/ �+$

+����� �/�� �/� ��.������� ������� ��+��� ������ ��0����

��� ��+���� ��$�������� �/� ������� ������ ��� �������+

������� ��� ����������� ���������

B���������� �� �/� ������ ��������� ������ � �����/�����E

�������������� ����� ���� �-EE: �� �/� ���� �������� ��

�� �/� ������� ������ ����� ��� ��������� �����) ����$

��� �/��� ������� �� ��������� ������� ������� ��-EE:��

��+�� �2�)� 1/� �&� ���� ������� �������� �������+ ��

�/� ������� ������� �����2 ���/ �/� ������� ��� ��+���

������� &��� ������� �� ������ �/� ����$� �� �� 6G ��

����������� ���+�� �2�)� 1/� ������ ������ ���� �� #!G

�� ����������� ������� ���/ ������� ��� �/� ����$� �� �� �

���+�� � ��$�(�����+ ������ 1/� ��������+ ��G �� ����$

������� �/�&�� �/� �������+ �� �/� ��+��� ������ ����2 ��

���� �� �-EE: ���+�� �2�)� 1/�2 �/� �����0���� �� �/�

����������� �� �/� �����/�����E�������������� ����� &��

��������� ����+������ �� �/� ������� ������2 �/��+��+ �/�

�������+ ������� ���� � ������ ��+��� ������ ������� ��

����$� �� �������� �� � ��$�(�����+�

B� �������� �� �/� ����.���� ����$� �� ����� ��� �� � ��

��.������ ���/����� ������� �� �/�� �� �/� ������ ���������

����$� �� ������2 �������+ &��� �� ��������� �� ���/ �/�

/���� 5� - ����� �������������� ����� ��/����� �������+ ��.���������) ��/������ �������������� �� �/� &/��� ������� ��-) ������ ��� ��$������+ � �� ��0���� �� �K3#�# ��� �/� ��������� �� �/� �����/����� ���?$���/ �������������� ����� ���� ������ ��������� ������ �� =��� �� ����������� ������� � �� ��0����� =��� ���� ���������� ������� ��������/���� ������ ���������� �/� ��/����� ������� ������ �����/������ 1/�����( ������ ��� �� �� �-9�?�� ��������� �/� ��������� �����/����� ��� ?��

��0����2 ������������� B� �-?��2 �/� &/��� ������ ���������� �/� �����������/������ 1/� �������+ ������ ��� ��������� �� � ����( ���� ��� ��.������������+2 �� � ���(�� ���� ��� ����.����� �������+���) ��0���� ����������� �� �- �� ������ �/� ������� ������ &��/ �/���������� �����/�����E�������������� ����� ���������� !�D�# �� ���� �/�������� ������ #� ������ ����� 9����/����� ��������� �� ������������) �������+ �������� �� ������� �������������� ���+ =7,7�<-, ���������� �1$*<� ������� ���� ������� ����������� ����������� &��/ �-2 �-9�?��

��� �-?�� ���������� ������� ���) ��� �������� �?�) ������� ��� ����$�����2 �������� �� � ��8����(�� �I)� 1/� ��8�� �����(�� ���(� ��� ��������� ������ ����� ���)�

� 9���(&��� *����/��+ :��2 �� !���� "�����2 � ���)2 342 " D6�

"! ���� �# �(��� �� ���

�����/����� ��� �������������� ������ 1/�������2 �/� ��$

������� �����/����� ��������� &�� �+��� ������ �� ?

���+�� �� �-EE: )� 1/�� ������� ��� �� �/� ���� �� ����$

� �� �������+ ��� ������������$� �� �(�����+ ���+�� �)�

1/�2 ����$� �� �������� &�� ��������� �� �/� �����$

���� ��������� �����/����� ���� #! �� ������� �� �/�

����$� �� �� ������ ���� ��� ��� �/� ��/����� �������

������ �����/����� ����� ������� �� ��� ���+���� ��������2

�++�����+ �/�� �������� ���� ������ ������� � �� ��.��$

����� 3�&����2 �/� �������+ ������� �� �/�� ����� ��� ���

����� �� �/� �������+ �/������� ����&��/ �-EE: &/��� ����

�/� ��+��� ������ &�� �������2 �� ������� �/� �������

������ &�� ����� ����+����� ��� ������� ����+ &��/ �/�

��+��� ������ ���+�� �)� 1/�2 �/� ?�� ��0���� �����

&�� ��� ���� �� ������� ��.������ �� �/� ����$� ��

��0����2 �� �������� ������� ������ ����+������2 �+$

+�����+ �/�� �� /�� �/� ������� �� ��� �� �&� ��������� �������+

��+���� ��������+ �� ��� �������� ����� ��

�� �$$ ��+��� � )�� ��� ����� �� � ��'�'�(���

��� � � � �*� � ���� ���(��� �������� � ���

������ � � �%��� � ) � )�� ���� %��� ����

1� ����������� ��� ������������2 �/� ?�� ��0���� &��

������ �� ������� �/��� ��������� �-)2 �������� �<) ��

+������� �=) ���������� �� �/� �������� �� ���/�� �

��������� ��-EE:�) �� � ������2 ���$��������� ��-EE: )

�����/������ H� /��� �/�&� ��������� �/�� � �������

�������������� ����� ��0���� �� �/� ��������� ����$� ��

��0���� �� ?!<E?�?�� 1/�������2 �/��� ������ &��� ���$

���� &/��� �/��� ������� &��� ������ �� -� ��-EE:�#2

?!-�?�)2 <� ��-EE:��2 ?!<�?�) ��� =� ��-EE:�!2 ?!=�?�)�

J��� &/��� <� &��� ��������� ��� ?�2 ��� �������� �� �/�

����$� �� ����2 ������ �� � ������ ��.������ ��G) ���$

����� �� �/� ?�� ��0���� � 6G) ���+�� ��2�)� B� ��������2

���� ����������� ��������� �������+ �� �/� ��+��� ������

����� 1/�2 �/� ���������� �� �/��� ������� �� ���������

/�� �&� �������> .���2 �� ���� �����������2 �������� �� �/�

����$� �� ������� �++�����+ �/�� � �� ����+��+ ����

����� ����2 ��� ������2 &/��� �� � �� ����+��+ �����������

������ �� �� ��������/��2 �/� ?$���/ ��+��� ��� ��� �������

�� �� ��.����� ?- ������� �� ������� ����+������ �� �/�

������� ������� 1/� ������� ������������ �� ������� ��

��������� �� ���������� &��/ �/� ?$���/ ��+��� ���������+ ��

� �������������� ����� �������� �� ���2 �� )� H/�� -�

&��� ���������2 ����� ��G �� ����������� �/�&�� � ��

�(�����+ &/��� ��G �/�&�� �������+ �� �/� ��+��� ������

����� ���+�� ��2�� �-EE:�#)� H/��=�&��� ���������2 �/�

�������� &�� �������� ���+�� ��2�� �-EE:�!)� 1/�� ����/��

�������� �������� ����$� �� �������� �++���� �/��

����/�� ��0���� ���� ������� �� � �������������� �����

�� ����& � �� ����+��+� 1/� ��/ ��&�� ����� �� �����������

&/��� ���� �/� ��+��� ������ �� ������� �� �/� - �����

�/�� �� �/� < ��=����� �� ����������&��/ /�+/�� ��.������

�� �/� ?- ��0���� �� ������� ������ ����+�������

B� �-EE: &/��� �/� �����/����� &�� ������2 �/� ?��

��0���� ���� �� �� ?-$���/ �������� �������� 1/� ����

������ �� �������� &�� ���� �� �/� ?�� ��0����> ?!-�?�

��-EE:!)2 ?!<�?� ��-EE:#) ��� ?!=�?� ��-EE:��) ���+�� �)�

�������+ �������� �� �-EE:! �/�&�� ����� "�G �� �/�

������� ����������� &��/ �/� � �� �(�����+ �/������� ���

��G &��/ ���� ��+��� ������ ������� ���+�� ��2�)� 3�&$

����2 �������+ �������� �� �/� @<A ����� ��-EE:#) �/�&�� �

�������� �� � �� �(�����+ �� !�G2 &/��� !6G �� �����������

/�� ���� �/� ��+��� ������ �������� B� �/� @=A ����� ��-EE

:��)2 ���� #G �(�����+ &�� �������� ���+�� �)� 1/�2

&/�� �/� �����/����� ��0���� &�� ������ ��/ �/��

/���� 6� - ����� �����/����� ��� �������������� ����� ����&� �������+ �� �����/���� ����$� �����) ��/������ �������������� �� ����� ������ ���������� 1/� ������� ���������� ���� &/��� ������� �-� +��� ����) ��� ��� ��+��� �:� ����( ����)+����2 ��������� �� � �� ������$� �� ��/���� �� � �-EE:)� 1/� ������� �����+��� � ��� ��� �/�&� �� +��� ��� /���/�� �� ��2 ������������� 1/���0� �������+ ����� �� �/�&� �� � �/�� ����( ����� �-EE:� �������� �/���������� �����/����� �����( ������) ��� ?�� �������������� ����� �����( �� )���������� �� ��������� ��� �-9�?�� ���+�� �)� 1/� �/��� ��������� �������+������ ������.�� �� �-EE:� �� ������� ����������� ��� �/�&� �� �/�� ����(����� ��� �/� ��������+� ����������� �� ���/ ����� �� �/� �������+ �� �/���������� �� +����� �-EE: �� �� ��������� ��� �-EE:� � ���� �/�� �/� �����/$����� �� ������ ��� �/�&� �� � &/��� ������� 1/� ��0� �������+ ����� ����/�� ���������� �� �/�&� �� � �/�� ����( �������) �������+ �������� �� �������E��+��� ������ ��������� ���+ =7,7�<-,�������� �� �1$*<� ������� ���� ������� ����������� �����������&��/ �-EE:2�-EE:� ��� �-EE: � �1$*<� ������� ��� �(����� ��()2 ������� ���) ��� �������&��/ �/� ��+��� ������ ���� ������� �� �-) ��� ���������2 �������� �� ���8� ���(�� �I)� 1/� ��8�� �� ���(�� ���(� ��� ��������� �� ���� ����� ���)�

� 9���(&��� *����/��+ :��2 �� !���� "�����2 � ���)2 342 " D6�

!���� �� � ����� ��� ��'�'�(��� ��� �� "#

�� ����$� �� �������� �������2 ���� �/� @-A ����� &��

���� �� ������ /�+/ ������ �� ������� ������ ����+������2

+����+ �/� � �� �(�����+ �/�������� J� �/� ��/�� /���2 �/�

?$���/ ������� ���������+ < �� = ���������� �/�&�� �

���+� �������� �� ��� ������� �� ������ ������� �������+�

1/��� ������ ��� ���������� &��/ �/� ?$���/ ��0����

���������+ �� � ?-$���/ �������� ������� �� �/� �������

�� �/� ��������� �����/������ 1/�2 �� �/� �������� �� �/�

��%����� �����/�����2 �/� ?�� ��0���� �� �����+ �� �

�������������� ����� �� ���� �����������2 &/��� �� �/�

������� �� �� ������ �����/�����2 �/� ��������� ��0����

���� ���� �� � ?-$���/ �������� �������2 +����+ ������������

�������+ ���������� &��/ - ��� <��������� 1/�������2 �/� ?$

���/ ��0���� /�� ��� ������������ ��������� ��

��0���� ����� � ��������+ ����������� ������������

���&��� ��������� �������+ ��+���� �� ����& ���/ ���� ��

�� ��/������

1/� ?�� ��0���� �� �-EE: ������� ����+������ �� �/�

������� ������ ��� ��� �������+ �� � �� �(�����+� ������$

���� �� ���/�� �/��� -� �� �/��� =� ������ � �� �(�����+ ��

� ��� #�G2 ������������ ���+�� �� �-EE:! ��� �-EE:��)� 1�

���/�� ����������� �/� ������������ ������� �� �/��� �����$

�����2 ���+������� - ��� = ����������� &��� ���� �� �/�

?�� ��0���� ���� �/� �� ��� �� �/� ������� �� �-EE:

���+�� !�)� 1/� ?6- ����� ��-EE:��) /�� ������ ������ ��

�(�����+ ��� �/� ?�-# ��-EE:��) ����� ������ � ��

�(�����+ �� ���� �#G ���+�� !�)� B���������� �� = ����$

��� �� �/� ���� �������� +��� ���� ������� ��������� ��

�������+� 1/� ����������� �� ���� �&� ��� .�� =� ��-EE:�2

?6= ) ��� ��-EE:�2 ?�=#) ������ � �� �(�����+ �� �! ���

!G2 ������������ ���+�� !�)� 1/��� ������ �/�& �/��&/���

? ���/���� �� ����� ?- �������� �� ��������� ��� ��/�����

�������+ ��� �/�� -� ���������� &��� �� �/�� �������2 =

������� ��%����� �� �� ������������ �� �/��� �������� ���

�������� ��/������� �� ������ ����+�������

,����������� ) �*� � �-�*%���� ������ ��� ��

��� �� ) ��� (������ �*� � ���(���

H� �� � � ������ �/� ������ �� ����� �������+ �&� ?$���/

������+ ��������2 ?9*� ��� �9*!#2 &/��/ ��� ��������

&��/ ?-$���/ �������� �������� �:�������� �� ���2 ����

:��(����; �� ���2 ���)� 1� ���� ���� ?9*� /�� ���� �/�&� ��

��M���� �������+ �� ���������+ �������+ �� ������ �������

=<$���/ �������� 1� � ����� �/��� ������ �� �������+ �� �/�

����.���� ����$� �� ������2 �/� �-EE:# �������� &�� ��$

����������� &��/ �������� ���������+ 3- ������� ��++��

�K,- ��0����� �� �/� �&� ��������� 1/� �-EE:# ��������

�������� �/� �����/����� - � ? ������� ��� �/� ?�� ��

?�<�?! �������� B� �/�� ����� �2 �/� ?$���/ ��0���� ���$

����� �� �� �������� ������� ��� �/� ����������� �� <� +����

#�G � �� �(�����+ ��� #�G �������+ �� �/� ��+��� ������

/���� 3� I������� �� �/� ?$���/ ��0���� �� �/� �������� ��� ������� �� �/� �����/����� ����� �� �������� ������ ���� ��������� ��� �������+ ��.���������) �-EE:� ��� �-EE: ������� ��������� ��� �� ��������� �� ��+�� � ���� �/�� �/� ��0���� �� �/� ?�� �������������� ����� �� �-EE:� ��� �-EE: /�� ����������� �� +��� �/��� �������� -� ��-EE:�# ��� �-EE:!)2 <� ��-EE:��2 �-EE:#) �� =� ��-EE:�!2 �-EE:��) �� �/� ����� � �� � �����/����� �����( ������) ��� �����������/����� �&/��� ������)� 1/� �������+ ������ ��� �/�&� ��/���������� �� �/� �/�� ����( ������ ����� ����� �������� &���$����������� �1$*<� ������� &/��� �/����(�� ���� ��������� ������ ����������� �1$*<� ����������) 1/� ������ �� �������+ �� �/��� �-EE: ��������� �� ������� ����������� �� ���������� �� �1$*<� ��� �/�&� +���/������ �� ��������+� ������� ������� &��/�7 ���� ��� ������� �/� �-EE:� ��� �-EE: ��������� �� ��������� 1/� ���( ��� ���������� ����$� �� ��������2 &/��� �/� �/���� ��� ���������� � �� �(�����+��� �/� &/��� ��� ���������� �������+ �� �/� ��+��� ������ ����� ,� ����$� �� �������� �� �������� �� �/� �����/����� ������� ����������

� 9���(&��� *����/��+ :��2 �� !���� "�����2 � ���)2 342 " D6�

"� ���� �# �(��� �� ���

������ 1/�2 �/� ����.�� ������� ������ �� ����+����� ��

���� #�G �� �����������2 ����&��+ � �� ������ ��������� ��

��������� ��.�������� �� �������+ ���+�� �)� J���� ����$

���� �� ���/ �������� ���������� ��������� � �� �(�����+

�� ������ ���G ���+�� #)� 7 �������� ������ �� �/� �&�

�������� &��� ������� �� �/� ����� �� H������ ����� ��

������� � ������ ���� �/� ��������� ������������� �������

��� �/�&�)� 1/�2 ����� �������� �� �/� �������� ��/�����

����+������ ��� �������+ �� �/� ����.�� ������� �������

1/�� �++���� �/�� �/��� �������� ��� �������� &��/ �/� ?$

���/ ��0���� ��� �/�� ����+���� ?$���/ ������+ ��������

��� �� �������+ �� �/� ������������ ������ �� ��� /���

��&�� ��.���� ��� �/� ?�<�?! ��0����2 �� ��� ������$

����� ��� �� ����� �������� �� �/� ���������

�������

*���� ������� ������ ���� �/��� �� ����8��� ��� ����� ��

�/��� ���������� /�+/ ?- �������2 ���������+ �� ?$���/ �� ?-$

���/ �������� +�������� ���������� �/��+/�� �/� ���+�/

�� �/� ������ �9��&� ��� �������2 �66"� =����(�&�(�

�� ���2 �66�� =������ ��� ������&��82 �6"6� :��(����; �� ���2

���� �����2 ���� ������� ��� ������&��82 �66�)2 ��� ����

��������� �������������� ������ �9������ �� ���2 �66��

9��&�2 �6"�)� 1/� ������� �� ������+��/ ���&��� ?-$���/

�������� �������� ��� ��/�� ?$���/ ��+���� ��/ �� ����$

���������� ������&�� ��� �������� ���� �/� ���������� �� �/�

������ ��������� ����$� �� ������� 1/�� ������ �������

�� �����+ ����������� �������+ ��+���� ���������+ �� �

�����/�����2 �������������� ����� ��� � �� ����+��+ �����$

������� �������� �� ���2 ���2 �� )� B� �/������� ������� ����

���� ����8��� ����$� �� �������2 &/��/ ������ �� ���$

��.� �������+ ��/����� �� �������� ��0�����2 &/��/ ���

����+����� �� +������ �� +���$�����.� �����$�����+ ���$

����� �� ��+��������$� �� �������� �� �(�����+ �I��������

��� 9���(2 �666� ���� �� ���2 ���)� 1/� ����������� �� �/��

����$� �� ������ �� ����������� �� �/��� �������+ ����$

������ /�� ����&�� ���������� �� ���/ �/� �����/�����

��� �������������� ����� ��0����� �������� �� ���2

�� )� 3��� &� ����������� �/� ������� �� �/� ���������

�������+ ��+���� �� ��/���� �������+ �� � ������ �������

������ ��� �� ������ �� ����/���� ����$� ��� 1/� ������

������ &�� ����+��� �� ������� � ����� �� ������+��/��+

���&��� �������������� ����� ��� ?-$���/ �������� �������

��������� H� �/�& �/�� �/� ��������� ?$���/ ��0���� ���

/��� ���/�� ������� ��������+ �� ��������+ �������+

��+�����

1/� ��/�������� �� �������+ �� �/� ������ ������� &/���

������� ������ �� �/� ��������� �������+ ��+���� ��������

�� �/� ?$���/ ��0���� ��� ��� �� �/� ���������� �����/$

������ 1/�� ��M����� �� �������� �� �/� ������� ?- �������

�� �/� ������2 ������+ �� ����� �/� ������ ��� ��.�����

�������+ �� ������� ����������� �=������ �� ���2 �66�)� B�

/���� 7� B��������+ - ������� �� �/� ?$���/ ��0���� ������� � �� �(�����+���) ��/������ �������������� �� �-EE: 2 &/��/ �������� �/� �������������� ����� �� ���(� �/� �����/����� �� ��������� �� ��+�� 2 ��� �/� �������+ ������ �����H/��� ��� �/���� �� �� ��������� ��������� &/��� ���������+ ������ �� +������� ��� ���������2 ������������2 /��� ���� ��������� ��� ������ �� �/� ?��

�������������� ��������) 1/� ������ �� �������+ �� �/��� �-EE: ��������� �� ������� ����������� �� ���������� �� �1$*<� ��� �/�&� +���/������ �� ��������+� ������� ������� ���������� �/� �-EE: �������� �� �������� 1/� &/��� ��� ���������� �/� =$���������+ ��������� &/��� �/� �/���� ��� ���������� �/� -$���������+ ����������

/���� 8� J���� �������� �� ?9*� ��� �9*!# ������ ������� ������ ����$���+���/������ ��� +���/�� �������������� �� �-EE:# ���� ��+�� �)2 &/��/ ���(��/� ��������� �����/����� ��� �������� � < ��������� &��(���� ?$���/�������� 1/�� ������� �� +��� � �� �(�����+ ��� ��+��� ���� �������������� �� � ����� �� ���� � > �2 �� �/� ������� �� ������������� ���������� �/�&� ���� � �� �(�����+ �� �/� �������� �� ����� ������� ?$���/ �,-$������+ �������� ?9*� ��� �9*!#� 1/� +���/ ���������� ��������+��(����� ������ �� �-EE:# ��� &/�� ��$� ������� &��/ �9*!# ��� ?9*�� �������� ����������

� 9���(&��� *����/��+ :��2 �� !���� "�����2 � ���)2 342 " D6�

!���� �� � ����� ��� ��'�'�(��� ��� �� "�

��������2 �������� �� �/� ����/���� ����$� �� �� �����������

���� �/� �������� ���������+ �/� ������� ��� ��+���

������� &�� ������� ��������� �� ���/ �/� ���������

��+����2 �������+ �� ������� � �� ����+��+ ������������ ��

��������� ��� �/� ����������$� �� ������ �������� �� ���2

���)� 1/� (�� ����������� �� �/� ����/���� ����$� �� ���$

���2 &/��/ �++����� ��� ������������ ��� �/� ���������

?$���/ ��0����2 &�� �/�� ���/�+/ ����$� �� ��������

&�� ����(�� ��������� �� �/� ��������� �����/�����2 �/�

������� ������ &�� ����� ����+����� ��� ������� �� ��

� ��$�(�����+ ������

B� �/� �������� �� �/� ��������� �����/����� �� �/�

����/���� ����$� �� ������2 ���������+ �/� < ������� ��

�/� �������������� ����� /�� ������ ������2 &/��� ���������+ -

������� ��/������ ����$� �� ��������� 9��/ ������������

��� ���������� &��/ �/� ?$���/ ��0���� /����+ � ��������$

������ ����� �������� 1/� ������� �� < ���������� �� ���$

������� ��� ?� �� ���������� �������������� ������ ��� ��

�/� ������ ��������� ����$� �� ������ /��� ���� ��������

��������� �<�����+� �� ���2 �66�� �����+�� �� ���2 �66��

������� �� ���2 ���2 �� )� ��/ ��0����� ��M��� �/�

��������� �������������� ����� ������+ ��0����� ��� ���$

������� ? -��# �?� < D� ?"� ���+/ �� ���2 �66#)2 ��� &/��/

����� /�����+�� /��� ������� ���� ������.�� �K����

�� ���2 �66")� B� ����������� ��� �����2 ������+ �� ? -��# ��

���������� �� ������������ &��/ �������� ��/ �� �/� �����/$

����� ������+ ������� �99*) ����&��+ ���������� �� ?

���,*2 ���������� ������ ��������� ��� �������+

�9��+��� �� ���2 �66�2 �66")� 1/�2 �� �/� �������� �� �

�����/�����2 &� �++��� �/�� ������+ �� �/� ?$���/ ��$

0���� �� ? -��# �� ���������� �� ����� �� ������+ ��

99* �� �/� �����/������ 1/�� �� ������ ���� ������ ���$

������ �� �/� �����/�����E�������������� ����� �� ���� ��

��������/ � ��D����+��+ ������������ ������ �/� ����$� ��2

����������+ &��/ ?����,* �� � #� ������ ���� ������ �� �/�

#� ������ ���� ���+�� ��)� 1/�� � �� ����+��+ �����������

����� �� �������+ �� �/� ��&������� ������2 �����&�� ��

�/� ����0��� �������+ �� �/� ������� ������ ��������

�� ���2 ���� ��+�� ��)�

B� �/� ������� �� �/� ��������� �����/�����2 �/� �������

������ ���������+ �/� ��������� ?$���/ ��0���� &��

����+����� ��� ������� �� �� � ��$�(�����+ ������ 1/�2

�����&��+ ������� �� �/� �����/�����2 �/� ���������� ?$

���/ ��0���� �������� �������+ �� �/� ������� ������ ��

&�� ����� �� ��������/ � �� ����+��+ �� �/� ����$� ��2

��/ �/�� ���/ ������� ��� ����$� �� ��0���� ���

������� �� � �� �(�����+� B� �/�� ��������2 ��������� -

������� ����������� ��� ?� �� ����������+ ����+������ ��

�/� ������� ������2 &/��� ��������� < ������� ������ �/�

��.������ �� �/� � ��$�(�����+ �/�������� 1/��� ������

��� ���������� &��/ �/� ?$���/ ��+��� ���������+ �� � ?-$

���/ �������� ������� ��� �������� �/��� &/��� �/� ���������

��0���� ����� �� � �������������� ������ 3���2 &� �++���

�/�� ? -��# ������+ �� �/� ?$���/ ��0���� &��� ��� ��

���������� �� 99* ������ �� �/� �����/����� �������2

����&��+ ����������� ?$���/ ������+ �������� �� �������� ���

���� �/� ?$���/ ��0����� -��/�+/2 &� �� ��� ��� (��&

� ����� /�& �/��� �������� ������� �� ������� ������

����+������ ��� �������+2 &� �++��� �/�� ������+ �� �/�

?$���/ ��0���� �� �/� ������� ������ ����&� ������������

&��/ ��/�� ?$���/ ������+ �������� �� �/� ��+��� ������

��/ �/�� �/� &/��� ��+��� �� @����A �� �/� ����������� ��

�������� ��� ������� ��+��/�� �� � ���+�� ����� ���+�� ��)�

B� � ������/������ �������� �� ?- ���/���� �� �����

�������2 ��������� �� �������� �� ������� ?$���/ ��������

� �� �� ���+�/ &��� ��������� ���� �� ������� �������+ ��.$

������ �� � ������ ������� ������2 ����������� �� &/��� ��

/���� 9� I����� �� ������������ +�������+ �������� �������+ ���������) �������+ �� �/� ����/���� ����$� ��� B� �/� �������� �� � ��������������/�����2 ������+ �� �������+ ������� ���+� ? -��#E99*) ���� � �� ����$+��+ ������������ &��/ �������+ ������� ���+� ?����,*) �� �/� #� ������ ���� ���/� ����$� ��� 1/� ��&������� ������ �� ������� �����&�� �� ������� �� �/�������� ���������) 7 �� �(�����+� B� �/� ������� �� �/� ��������� �����/�����2 �� � ������+��+ �����2 �/�?$���/ ��+��� �� ���� ��?$���/ ������+ �������� &/��/�������� &��/ ������� �������� �� �/� ��+��� ������ �� ������� ��������� ���/� ������� #� ������ �������) �������+ �� �/� ��+��� ������� B� �/� ������� �� �/� ?$���/ �������2 ��&/�� �� �� &��(���� �/��+/ ������� �< �� = ����������)2 �� ���������������2 ������+ �� ?$���/ ������+ �������� �� ������ ��/ �/�� �����/� ?$���/ ��+��� ������ �� ����+����� ��� �������� 7 �� ��0�����2 ���(+��� �� ��� ����$� ��2 &/��� �� � ��������� �����/����� ��� ����������$���� �����2 ����( ������ ��� �� � ������ �����/����� �� �������������������2 &/��� ������ ��� �� &��/ ������� ��������� ��������� ��/����������/������ ��� ������� �������������� ������2 ��+/� +��� ������ ����� � ?$���/ ������+ ��������2 &/��� ������ ��/�� ��������2 +��� �� ������������� ������ ����&�2 ������� ������������ ���&��� ?$���/ ������+ ����������� �������+ ������� ���+� ?����,*)� ?� ��� ? ���,*�2 ���+� �������� &/��������� �������+ ������ ��� �/�&� �� �/�� ����( ����� ����& �/� ���+����� 1/�/�+/�� ?- ������� �� �/� ��+��� ������ �� ��M����� �� �/� ����� �� ?$���/������+ �������� ���������� &��/ ���

� 9���(&��� *����/��+ :��2 �� !���� "�����2 � ���)2 342 " D6�

"" ���� �# �(��� �� ���

�/� ������ �/� ?$���/ ������� &�� ��������� 1/� ����� ��

��������?���������� �� �/��� �������� ���� �� �� ��&

�� D� ��2 �������� �/� ����������+ ����������&��� ��� =��

-���������2 �� ��������� �������� �/� ? ��������� ����$

������ �� �������+ �� �/��� ��������� �� �� ���� ���

�������� �������+ ����� �� �/� ������� �� ? ����������

�=����(�&�(� �� ���2 �66�)� 1/� ������������ ������ �� -

���������� ��� �/� ������ ��/������� ������� �� = �����$

����� &��� ���� �������� /��� �� ������+ �/� ?$���/

��0���� �� �/� ������� �� �/� �����/�����2 ��������+

�/� ?-$���/ �������� ������� �������� 1/�2 &/�� �/� ?$

���/ ��0���� �� ������ ��� �/� ���+���� ����/���� ����$� ��

��������2 �-EE:) �� &��(���� �� ���������� �� <� �� =�2

�/� ���0���� �� ����������� �/�&��+ � �� �(�����+ ������

�� ����� �� �������+ �� �/� ��+��� ������ ������ H/��� ��

?$���/ ������+ �������� ���� �� �/� ������� ������2 ��

������������ &��/ �/� ��+��� ������ ���� ��� ���� �/�

��+��� ������ �� ����+����� ��� ������� ���+�� ��)� 1/�� ��

���/�� �������� �� �/� ����� �� ����������� ���������+ �

&��(���� ?$���/ ��0���� &��/ ����� �������� �� ���/��

?9*� �� �9*!#�

-� ���� �����2 �/� ����������+ ������� �� < ��� - ��$

��������� �� �/� ?$���/ ��0����2 ��������+ �� &/��/�� ��

�������� �� � �������������� ����� �� ?-$���/ �������2 ���

��(��� �� ��M��� ������������ ��� ����������� ���&��� ���$

������ �����$�����+ ��������2 &/��/ �� ��� ��M��� ��0����

����� � ��� ������������ ��.������ ��� ��������� ��0������

B� �����������2 ? -��#2 *192 /��,* < ��� <?=$9* ���

71��$��(� ������� D � ������ �� /��,* ��(� �������+ ��+��$

���� �<7:�) ������ �� �������� ��� /��� ��.���� ��� ?$���/

��0���� �� �/� �������� �� ���( �� ��/�� ����������

������� �����.���� ����&��+ �/�� �� ������� ��� ������+

����� �=�����+ �� ���2 �66"� =�����/ �� ���2 �66!� =����(

�� ���2 ���� *�; ��8 �� ���2 �66�� N����� �� ���2 �66 )� ���

� �����2 *19 /�� � ���������� ��� � ��0���� ����� �/��

�������� < ���������� &��/ �� ������� ?< �����+����� ��

������� �� ���+�� ?<??�<) �������� �������� �� � ����$

������ ����� �=�����+ �� ���2 �66"� *�; ��8 �� ���2 �66�)�H/���

�������2 �/�� ������� ����&� *19 �� ������� &��/ ? -��#

��� ������+ ������+ �� ����������� ������ ���� ��������� �:��

��� *�����2 �66#� ���+/ �� ���2 �66#)� *19 ������ �� ����+�$

����� �� <7:� �������� �� ��+������ ��+���� �/�� �������

<?= ��������+ ��0����� �=����( �� ���2 ���)� 1/�2 �/�

�������+ ���� �� ����������� ������� �� �/� ������� ���&���

��0����� �� �������+ ��+���� ��� ������ ��� ��.���� ��

��������+ ������� �������� ���������2 �/� ����� �,-$������+

�������� ?9*�2 �9*!#2 �9*!� ��� ? -��#2 ��� /��� ��.����

��� ?$���/ ��0����� ���2 ���/�+/ �/��� �������� ��.������

��� ��������� ��0����� �� �(��&�2 �/��� ������� �� �������+

��� ���� �K���� �� ���2 �66"� =����(�&�(� �� ���2 �66��

:�������� �� ���2 ���� :��(����; �� ���2 ���� <�EH�92

������/�� ������)�

1/�� ����� ��������� �/� ������� �� ����� ������

�������+ �� &/�� � ?$���/ ��0���� �� � ?$���/ ��������

������� �� � �������������� ������ H� ������� ��������

��� �/� ���� ?$���/ ��0���� ���������+ �� �/��� ������$

���� ��������� &���2 ��������� �� �/� �������� �� �������

�� ��/�� �������+ ��+���� ��� ��������� ��0������ 1/�

����� �++���� �/�� ��������� ?$���/ ������+ �������� ����$

��� &��/�� ��������� ����� �� ����� ������� ��$����������� ��

������� ���/ ������� ��� ��.����� �������+� 1/�� �������$

���� &��� �� ��������� �� �������� �� �/� ��+������ ���

������� �� ����������� �������+ &/��/ ����� �������� �������$

������ ������� �� ������ ����� ��������������� ������+��+

������������ �:���82 �66"� ����/ ��� L����; ����2 ���)�

:)��������� ����!����

.��� ����&��'�'�(���*�� � � ��� � ����

����� ��

B����� ��������� &��� ����� �� �&� ��������� ��������� ����������������� 1/� .��� ��-) ��������� �/� &/��� ������� �� �������������� ���� �/� � �������� ��� �������+ �������� ������ �K3#�#�������� �� ���2 �66�)� 1/� ������ ��-EE:)2 ��������� � ����/��������$� �� ���������+ �/� &/��� ������� ������ ������������������ �� �/� ����$� �� ��� � ��� ��+��� ������ ������������&������� �� �/� ����$� �� �� �K3#�# �������� �� ���2 �666)� B����/ �����2 �/� ��0���� ---<=1-<<<<-<=-1=1112 !�D�#����&������� �� �/� ������� ������ #� ������ ���� &�� ���������&��/ 1-<1-,1<-1111���1111 ���+ �/� O��(�/��+� ����$�����$��� ���+������ (�� �������+���2 :� ����2 <-2 ?�-) �� +��������-9�?�� ��� �-EE:�� 1/� �����/����� ��������� �/�+/��+/��� ������ ��� ���������) &�� ������ �� � 1 �� +������� ����������/�� ���(�� �/� ��������� �����/�����2 �-?�� ��� �-EE: � 1/� ������������������ ����� �� �/� �&� ����� ������ ���������2 ��� �/��/�� �/� �����/����� ��������� ��� �/� ��/�� �/�� ���(� �/� �����/$�����2 &��� ������ �� ���������� �� �/��� 1 ���������� �/�+/$��+/��� �� ���� ��� ��������� �����) &��/ �/��� - ������������-EE:�# ��� �-EE:!)2 < ���������� ��-EE:�� ��� �-EE:#) �� =���������� ��-EE:�! ��� �-EE:��)� �������2 �/� �� ��� �� �/� ����$���������� ����� &�� ������ �� ���������� &��/ �� # = �� -���������� �� �/� �������� �-EE: 2 &/��/ ���(�� �/� �������������/����� ��-EE:�2 �-EE:�2 �-EE:�� ��� �-EE:��)� -�� ������&��� �������� ���+ �/� ���� ����$�������� ���+������ (��� -���� �� ��� �/� ���+����������� ��� ��� ���+������ �� ��������� ����0���� -�� ������ &��� ��0����� ���+ �/� 9�+ K�� 1���������<���� ��0�����+ (�� �� ��� �-������ 9���������2 H�����+���27�+����) �� ���.�� ��������� �/��+��� ��/������ .+��� ���/� �������� ��� ���� �� ��+��� �2 2 � ��� !�

��� �� ����'�� %' � *!��

B����� ��������� &��� ����������� ���� - ���� ��%� �( ����F���/� ��� �,- �������� �� ��������� ��������� �� ������� �� �����66�)� �1$*<� �������� &�� �� ��������� �� ������� �� ��� � ���)���+ �/� *<� ������� J"2 #�$<<<--11=11<--<<<1-< ��������&��/ �/� #� M�������� �/���/��������� �$�-I���J62 #�$==1--$=-1=<<1=11=<=-11=<� J" ����������� �� �/� 8��� ��0���� #�

�� �/� ���� �� ������ �������� ��������� ��� J6 ������������� ���/� 8��� ��0���� �� �� �/� ���� �� ������ �������� ��������� ���K3#�# �������� �� ���2 �66�)� :������� �1$*<� ������� &������������ �� � !G �������������� ��������+ +�� �� �� -9B ���K,- ��0�����+ ���/���� ��8�� �� ����� &��� ��������� ���+

� 9���(&��� *����/��+ :��2 �� !���� "�����2 � ���)2 342 " D6�

!���� �� � ����� ��� ��'�'�(��� ��� �� "6

=7,7�<-, L� �� ����&��� �-������ 9���������2 H�����+���2 ?4)�� ����������&��/=�������$�#� �1-I�-) ��8� ���������� O��$��.������ �� �1$*<� ������� &�� �� ���������� �� �/� M����$���� ���( ����� �� �/� �������� ���+����� ����� ! ������� *������0����.������ ��������/�� *<� �����.������ &�� ������ ���� ����+� �� �#D ! ������ ��� 1�0 ���������� ��8��� ��.������ &���/� ���� ��� ���/ ����$� �� �������� ��� � ������ ��������*�������+� �������� �� � ������ &�� ��������� ���� �/� ���(����� ��� ���/ ��������� ����������� ?�������� ������� &��� ������������ 7��/ �������� &�� ������ �� ����� �&� �����2 ��� �7�&��� ���������� ��� ��������� �/�� &��� ������ �/��� �� ���� ������

�*�����)� �� ����'��

?$���/ �,-$������+ ������� � �������� ��������� �?9*�$3- �����9*!#$3- �:�������� �� ���2 ���� :��(����; �� ���2 �� ) &����� �� ���������� &��/ �� �0�� ����� ����� �� �-EE:#� *����$������ &��� ����������� ��� �������+ �������� �� �-EE:# &�� ���$������ �� ��������� ������ *������ &�� � ������� ���� �������������������� �� ������+ �� #� �I 1���$< �3 ��"2 �G �E� +�������2� �I 7K1-2 �G &E� �K�2 �# �E� �$����������/���� ��� �����$�/���� ���� H������ ���� �������� &�� ��������� ���+ ����$��M��8� /����++������ ������� ��������� �� ������ ���+��$-�����/2 �� :���2 IJ2 ?�-) �� ������� �������� ��� ����������B+= ��(����� �/���/����� ���%+��� ���+��) �� ��������� ����$���� �� ���.�� ������� � �������� �� ������������

,��� ��!�������

1/�� �������/ &�� �������� �� �/� �������/ 7 ������ 7������$���� ��� ���� -������ K���������� H� &��/ �� �/��( �/� ������$���� �� K� H���( �������&��82 ��������/ I����/�� B�������2 9����2�&��8������ ��� �/� +��� �� �?9*�$3- ��� ��9*!#$3- � ������������������

2���������

#������ ��:�� ������� ����� -��������� ,��� ��! �������� -�,���66�) ?$���/ ������ ��/���� �� ������ ���� ����+������ �� ����������� !���� "# 5;2 ���D����

#������!� ��,�� ����� 0�� ,*%��� ��� 2��!� 2� ��! 2�*���� -���66�) 1/� �������+ ������ 99* ��������� �����.����� &��/ �/� ���$��,- �����/����� ��0���� ?-<?--<� ����2 <&2 �"�D�"��

#������!� ��,�� ,*%���� �� ��! 2�*���� -� ��66") - ���������������������� ���&��� ? -��# ��� �99*E��� ����������� �����/$����� ��+��� ����+������� ����� ���# 562 "#"D"���

#����� ��=� ��66#) ������+ ������ ����� &��/�� � &��������� �� �,-��-�2 52 ���D����

#���� � #��� � ���) 7 ���� �������+ ��/������> ���/����� ��������2 ��������� ��� ���� �� /��� +������ �������� �����. ��(# � # 682 ���D����

#� �� ��"��� ��6"�) - ������+� �� ������ %������ ��� ������������/ ����� ��0����� ���� ����� �������� -� �# � � ���# 5726#!6D6##6�

#� �� ��"��� ��66�)���%���� �������������� ��� ���$��,-�������+� !���� "# 5;2 ���D�"��

#� �� ��"��� ��! ������ ���� ��66") ������ ���� ��������� ������� ���$��,- �������+� ����# ���# !���� !�'��# !���� /�.�# 7&2 ��D6#�

#� �� ��"���� /�)� �� ��! /���!� ��� �� ��6"�) -������ � ����������+ �� ���$������+��$�,- ����� ������� �� � 3�:� ���������� � ������ �/., "# 82 �!6D �#"�

#� �� ��"���� ������ ����� �� � ��� ������ ����� ������������� -�!���:��*��� ��� >����� ��� �������� ���� ��!?������0��� � �� ) �������+ ��+���� ��� ������� �� ����� ������ ��������. ��(# � # ����# 3;2 �!�D�!6�

������ ����� ����� #���!��� @� ��! "��*�� @� ��66�) - �������$������ ���� ��� � ��2 ������ ��� ������ ���� ��0����� �� �������+ �����8�� !���� "# 552 � #�D� ���

��!��� ����� ������ 2��� ��! ������ ���� ��66�) ����������������� �� �/� �������������� ����� �� ���$��,- �������+� -� �#� � ���# 682 """D"6��

��� �����0��A��� /�� #������ ��/�� =� ������ ��� 0����� =��������� -����� ���B%���� �� ��! #���������� 2� � ���) 1/� �,-$������+ ������� 1B-$� �� � ����� ��������� �������+ ��+����������+ �/��+/ ������ ��0����� ��%����� �� � #� ������ �����/�#���� .�# 6;2 � "�D� 66�

���� ��� =��%�B � C�� @����B ����� �� ��! /�� �A� "� ��66")I������ ����� �� �/� ? ����� ������ ���������������� � $������ ������ ? -� ������ � ������� �� /�+/�� ������� "# .�#���(2 6432 �!���D�!����

���!� ��� -�� >�������-��A���� -�� 0������ �� =�� >��D���! /�� �A� "� ��66�) </�������������� �� �������� ������$���/ ��0���� �������� �����+ �� �������� ���+��� ��� �������������� ����+ ���$��,- �������+ �� - ���� ���(%���)*��� -� �# � � ���# 672 ��6D� ��

�!���� ���� ��! /�� �A� "� ��6"6) 1/� -?$���/ ��0������������ �� �/� ������� �� ����� ������ ���$��,-� ��� ��0������� �������+� ����2 8<2 !��D!"��

�!���� ���� ��! /�� �A� "� ��66�) K�������� ������� �� ��������������� ����������� ��� ��������� ������� �� ���$���$���+��$�,- �������+ �� ������� ��� ����� ������� �/., "# 5;2 ��#D �!!�

�!��� ��� 2*����� ���� ��! ����� ��"��� ��66") ���� �� ����/������� ���������� ������� ��� �������������� ����� ������+������� �� ���������� �� � ��+����� �$����������� � ��� �-�272 "#D����

������� -�� #��!� ���� ��! ��������� �� ��66!) 1/� �������������� �,-$������+ �����.���� �� �/� /�����+���� ������ �����$����������� < ��������� "# .�# ���(# 69&2 ���!D ���"�

������ ��� -����� ,���� ����� ��,� ��! ����� ��"��� � ���)-���+������� ��+������ �� �$������� ����������� �������+ ��<7:� �������� ��� �������������� ����� ������+ �������� �-�2&2 !!�D!#��

>���� #���� @��%���� ��� � �� ����� �������� -�� ,��)��!�%���� /��!����� 0�,�� /��%���� 2�#�� "���� ?� ��! ���A*���� ��=�� �� ) ���$���+�/ ������+�� �,- ��0����� +������ �������+����� ����������� ���# .�# 32 �D� �

>������ #�,� ��! �������� -�,� ��6"") *���� ������ ��0����� D�������� ��� �������� +���� �� �������� -� �# � �� ���# 592��#6D�����

>������� -�=� ��! 0������ ,�2� � ���) *��$��,- �������+ �� �/���& ���������� ����# ,��# ���� .�# 532 �� D��6�

0� ��>�� #���!��� @�� ������ 2��� ��!"��*�� @� ��66") ?$���/������ � ��.���+ ������ �� ����� ������� ��� ��� ������� �� �������� ����+������ ��+��� �� ���8�� !���� /�# .�# 392 #��D#"��

0��E���� ,� ��66�) 1/� ������� ��� ������� �� �������� ���������� ��������� ���$��,- �������+� ����# ���# . ��(# 982���D!�6�

=��*����� -�>�=�� ������ ����� 0��� ��,�� >�������-��A�A��� -�� 0������ � ��! /�� �A� "� � ���) ?9*�2 ������ /��,*$��(� ������� �/�� �������� �� ������� ����� ��/�+/�� ����� ������ ���$��,- ���������� �/., "# 5&2���"D��!6�

=��*����� -�>�=�� /�� F�� "��A��� 0��� ��,�� ���������� -��/�� �A� "� ��! =��%�B � C��� � �� ) ?9-� ��� ?9- 2 �&�

� 9���(&��� *����/��+ :��2 �� !���� "�����2 � ���)2 342 " D6�

6� ���� �# �(��� �� ���

�������� �/�� �������� &��/ ?9*�2 ������������� �������� �� ���$��,- ��������� �� ������� /�# ����# .�# 662 !�!�D!�#��

=��.��� ���� -���� ���*�� ��/�� #���!��� @�� "��*�� @� ��!������ ����� ���� ��666) 1��� �� �/� ������������� ����� �������� ����+������ �� � ������ ���8� +���� !���� /� .�# 752���D�!!�

=� ������ ��� =�.����� /�� ������� ��� 0����� =�� #���������� 2�����%���� �� ��! ��� �����0��A��� /� � ���) 1B-$� ��� 1B-��������� �������+ �� ����������� � ��� &��/ &��( #� ������ ����������&�� �� � ?$���/ ������/ �� �/��� �&� ���$��,-�� "# .�#���(# 6492 !���"D!��!��

=�� �� ��! ������ �� ��66#) ��+������ �� ����������� �� ������ ������������� �� ����������� �������+ �������� �-�2 52 �!D !#�

=�� >��D� ��! /�� �A� "� ��66�) I�����+ �� �����/��������������� ������� ���$��,-� � ������� �� ����� ������ !����"# &2 �"�D�"6�

=��A� ,��� ��66") -���������� �������+ �� ���$��,-> ����������$��� �����0����� ��� ���/������ �� ��+������� ����# ���#�����# 362 �6D��#�

=��%�B � C���� 0��� ��,�"�� =��*�����-�>�=� ��! /�� �A�"�� ���) *��$��,- �������+ �� /�+/�� ������� ����� !���� � # 82���D����

=��%�B � C���� "��A��� 0��� ��,�� =��*����� -�>�=� ��! /��� �A� "� � �� ) �9*!# ��� �9*!�2 �&� ���+���������$�����.�/��,*$��(� �������� ����������+ &��/ �����-)� �,- �� ����� ������� ������ �-�2 92 ����D�� !�

=�� >�� -��������� ,��� ��! �������� -�,� ��66��) �� ������ ������������� �� ����� ����� ����� �� ��������$���������� /�# ����.�# 532 !!"#D!!6��

=�� >�� -��������� ,��� ��! �������� -�,� ��66��) 7 �������� �����8� -�/� ������������ �� ������� ������ !���� "# 32 �6�D!���

=�������� 0�2�� ����� �� ��! "��*�� @� ��66!) ,����� ���$���$���+��$�,- ���������+ �� /�+/�� ������� !��# -� �# � �� ���#742 �!6D�6��

=�������� 0�2� ��!"��*�� @� ��66!�) -������� �� -$���/ ���?$���/��0���� ��������� �/� �������+ ��.������ �� � ������� ���� �� ����8� ������� !���� /� .�# 672 !!6D!���

=�������� 0�2� ��! "��*�� @� ��66!�) B����� �������� ��� ����$����������� �� ���8� ��� �������� �� -?$���/ �,-� ���� ���2 <2����D�����

-��������� ,��� ��! �������� -�,� ��66�) B������� ��� � ������0����� ������� #� ������ ���� ��������� �� ����� ������-� �#� �� ���# 682 ����D�����

-��������� ,���� =�� >� ��! �������� -�,� ��66�) ������� ������$��+ ��/����� #� ������ ���� ��������� �� ����� ������/�# ���� .�#532 �� �D�����

-��������� ,���� #������ ��:� ��! �������� -�,� ��66�) B������$����� ������ � ��� ��� ��M���� ������ ���� ����+������ �� ����������� !���� ����2 <2 6#D ����

-������ >�� -��������� ,��� ��! �������� -�,� ��66�) B������� -?$���/ �������� ������� �������� �� �&� ��������+$�� ������ ������� ����� ������ !���� "# 562 6��D6!��

-!������ :�/� ��! #����� ��=� ��666) <������������ ������� �� �������$�����.� � ��� �-�2 82 �"�D����

��B ��A� $�� =�� ���>�� -�,���� ���� ��! ������ ���� ��66�) I�������� *19 ������+ ����� ����������+������ �� ����������� �� ���������� ��������� � ��� �-�2 32 ��!D��"�

���� ?�� ���������� ,�� /�*�A� �� ��! �������� #� ��666) B����$������ �� �/� ?����,* &��/ ��� ��������� �������� ��0������������ #� ������ ���� ���������� ����� ���# 532 #�6D#"��

2�!!�� ,����� � ���) ,����� ���$��,- �������+ �� ������� ���#���# !���� � # 6;2 # �D#���

2��!� 2� ��66�) B������ ������$���� ����+������ ��� ������+ ����+���$��,- �������+� ����# ,��# �����# ���# 92 �#D ��

2��!� 2� � ���) I��/������ �� .������ �� ���$��,- �������+� ����#,��# ���� .�# 562 �!�D�!#�

2����� 2�/�� "����� -� ��! ������#����� -�,� ��66�) -���$������ �������� �� �/� �������������� ����� �� �������� "# .�# � #69<2 �� D�� 6�

2���� 0���� �������� #�� �� ��! ����� ��,� � ���) 9�����+ �� *�3�� � �����$�����.� �������+ ��/����� ����������� ����������&��/ � �� �������� � ��� "# .�# � # 6482 ���"D �� ��

������ ���� ��! #� �� ��"��� ��66�) 7�.����� �������+ ���� -?$���/ ��������� ������ ��0����� !���� /�# .�# 652 �#D ���

������ ���� ��! /�� �A� "� ��66�) �������+ �� ��������� ��������+�� �,- �� /�+/�� ������> ���/�����2 ��+������ �����$������ ��+��������� �� �/� ������������ ���/������ !����/� .�# 362 �D!��

������ ����� ������ ����� ��%!��� ��� ����� �� ��! #� ����"��� ��66�) I������ �� ������� �����/����� ����������0����� �� ����� ������� ������ �������+ ��.������� !���� "#&2 ��6D�"��

������ ����� -�G��!�� ��� =��� �� ��! #� �� ��"��� ��66")</��������8����� �� � �� �(�����+ ������ �� �/� �,!$ +������� ���%����� !���� "# 582 � #D����

������ ����� ������ ����� =��� ��-�� "������� ��� -�G��!�� ����! #� �� ��"��� ��666) B����������� ���&��� ������� ��� � ����.������ �� ����� ���$��,- �������+� !���� "# 5<2 6�D�� �

������ ����� >�!���� ��:�� "������� ��,�� ������ ����� -�G��!����� -������� ���� ��! #� �� ��"��� � ���) ��0�������� �������$� �� �������� �� ������ ��������� ��,-� �������� ���$����� ��� � ��$�������+ �� ������� �-�2 92 ! D!���

������ ����� �� � ��� ������ ����� �������� ����� "������� ��,���! #� �� ��"��� � �� ) I�������� �������� �� � ����� �����/$����� ��� �������������� ����� ��0���� ��� ����������� �������+�� � ����$� ��� �-�2 <2 !�D#��

����� 2�� @����B ����� �� ��! ������ -�2� ��66#) K������� ������+�����.������ ��� �������� �� /�+/�� �(������� �������������������$������+ ��������� � �� �2 69<2 ����D�����

����� ��"��� ��! @����B ����� �� � ���) -���������� ���$��,- ����$���+> �/� ��+�� �� ������������� �������� ����� . ��(# � # 682�"�D�""�

"���� �� ��! -������ ��=� ��66�) ��+������ �� ���$��,- �������+�� ����8��� ����# ,��# ���# ���# 42 �#D ���

C����� ����� ������ ���� ��! ������ -�2� ��66 ) <�����+ ��������� ������� �� �/� ��������� �������+ ������ ? -�� -��*���2 3882 ��6D��!�

� 9���(&��� *����/��+ :��2 �� !���� "�����2 � ���)2 342 " D6�

!���� �� � ����� ��� ��'�'�(��� ��� �� 6�