PendahuluanSpesies oksigen reaktif (ROS) yang dihasilkan oleh berbagai proses redoks yang biasanya terjadi dalam metabolisme sel aerobik yang sangat reaktif dan berbahaya bagi sel.Jika tidak dihilangkan, mereka dapat merusak molekul penting, seperti protein, DNA, dan lipid (Fang dan Yang, 2002).Stres oksidatif merupakan kontributor penting untuk patofisiologi berbagai kondisi patologis seperti disfungsi jantung, aterosklerosis, peradangan, karsinogenesis, toksisitas obat dan penyakit neurodegenerative (Aruoma, 1998).Sel mengekspresikan beberapa mekanisme pertahanan yang membantu mencegah efek merusak dari ROS.Namun, sistem endogen sering tidak cukup untuk mengambil lengkap ROS (Anderson, 1999).Oleh karena itu, jumlah tertentu dari antioksidan eksogen terus diperlukan untuk mempertahankan tingkat yang memadai antioksidan untuk menyeimbangkan ROS di dalam tubuh manusia.Tindakan berbahaya radikal bebas dapat diblokir oleh zat antioksidan, yang mengais radikal bebas dan etoxify organisme (Dehpour et al., 2009).Hypericum perforatum L. (St John Wort, Hypericaceae) adalah anggota dari genus Hypericum, yang ada 400 spesies di seluruh dunia (Kizil et al., 2004).Dalam beberapa tahun terakhir, konsumsi H. perforatum produk turunan telah meningkat secara dramatis, dan saat ini salah satu tanaman obat yang paling banyak dikonsumsi di dunia (Wills et al., 2000).Tanaman ini memiliki berbagai aplikasi obat, termasuk luka pada kulit, eksim, luka bakar, penyakit pada saluran pencernaan dan gangguan psikologis (Butterweck, 2003).Bunga H. perforatum telah difokuskan pada efek antidepresan nya (Butterweck, 2003), namun, rempah telah menunjukkan kegiatan lain, termasuk penyembuhan luka (Pesin Suntar etal., 2010), antijamur (Milosevic et al., 2007), antimycobacterial (Fitzpatrick, 1954), antibakteri (Saddiqe et al., 2010) antivirus (Serkedjieva et al., 1990) dan anti-HIV/anti-AIDS(Wood et al., 1990).Ekstrak dari bagian aerial berbunga H. perforatum telah digunakan sebagai obat terhadap berbagai penyakit termasuk radang urogenital, diabetes mellitus, neuralgia, penyakit jantung, pilek, gangguan pencernaan, sakit kuning, hepar dan gangguan empedu, wasir dan obat tukak lambung rakyat di Turki (Yesilada et al., 1995). Hewan percobaan telah mengungkapkan bahwa H. perforatum juga akan berharga dalam manajemen klinis penyalahgunaan dan ketergantungan dari berbagai zat seperti alkohol, nikotin dan kafein (Coskun et al., 2006).Bagian gas tanaman mengandung spektrum enam kelompok produk alami utama: naphthodianthrones (misalnya hypericin), phloroglucinols (misalnya hyperforin), flavonoid (seperti kaempferol dan quercetin), biflavones, phenylpropanes dan proanthocyanidins. Selain itu, jumlah yang lebih kecil dari tanin, xanthones, minyak esensial, dan asam amino yang hadir (Nahrstedt et al., 1997).Meskipun banyak laporan, sedikit yang diketahui tentang aktivitas antioksidan tanaman ini.MetodeBahan TanamanCabang bunga dari Hypericum perforatum (Hypericaceae) dikumpulkan dari sari, Iran, pada musim semi 2011.Sampel diidentifikasi oleh Dr Bahman Eslami.Sebuah spesimen voucher (No 861) telah disimpan di Sari Sekolah Farmasi herbarium.Sampel dikeringkan pada suhu kamar dan digiling kasar sebelum ekstraksi.Sejumlah dikenal sampel diekstraksi pada suhu kamar dengan metode perkolasi menggunakan metanol.Hasil ekstrak dipekatkan melalui rotary vacuum sampai ekstrak kasar diperoleh, yang kemudian dikeringkan beku untuk menghilangkan pelarut lengkap.Aktifitas pengambilan radikal DPPHAnalisis spektrofotometri direkam pada dua balok Perkins Elmer UV / Visible-spektrofotometer untuk menentukan kemampuan bebas DPPH radikal pemulungan (Ebrahimzadeh et al., 2010).Konsentrasi ekstrak yang berbeda yang ditambahkan, pada volume yang sama dengan solusi metanol DPPH (100 uM).Setelah 15 menit pada suhu kamar, absorbansi tercatat sebesar 517 nm.Percobaan diulang tiga kali.BHA digunakan sebagai kontrol standar.Nilai IC50 menunjukkan konsentrasi sampel, yang diperlukan untuk menghilangkan 50% radikal bebas DPPH.Iron chelating activitySecara singkat, konsentrasi yang berbeda ekstrak yang ditambahkan ke dalam larutan 2 mM FeCl2 (0,05 ml).Reaksi dimulai dengan penambahan 5 mM ferrozine (0,2 ml), dan campuran kemudian dikocok dengan kuat dan dibiarkan pada suhu kamar selama 10 menit.Absorbansi larutan diukur pada 562 nm.Persentase penghambatan ferrozine-Fe2 + pembentukan kompleks dihitung sebagai [(A0-A1) / A0] 100, dimana A0 adalah absorbansi kontrol, dan A1was absorbansi campuran yang mengandung ekstrak atau standar.EDTA digunakan sebagai standar.Uji aktivitas pengambilan oksida nitratUntuk percobaan, natrium nitroprusside (10 mM), fosfat-buffer salin, dicampur dengan konsentrasi yang berbeda H. perforatumextract dilarutkan dalam air dan diinkubasi pada suhu ruang selama 150 menit.Campuran reaksi yang sama, tanpaekstrak tetapi dengan jumlah yang setara dengan air, menjabat sebagai kontrol.Setelah masa inkubasi, 0,5 ml reagen Griess ditambahkan.Absorbansi kromofor terbentuk dibaca pada 546 nm.Quercetin digunakan sebagai kontrol positif (Dehpour et al.,2009).Pengambilan hidrogen peroksidaKemampuan ekstrak untuk mengais hidrogen peroksida ditentukan menurut kertas kami baru-baru ini diterbitkan (Nabavi et al., 2010).1,4 ml ekstrak (0,1-3,2 mg ML1) dalam air suling ditambahkan ke dalam larutan hidrogen peroksida (0,6 ml, 40 mM dalam buffer fosfat, pH 7,4).Absorbansi hidrogen peroksida pada 230 nm ditentukan setelah 10 menit melawan larutan blanko yang mengandung buffer fosfat tanpa hidrogen peroksida. Persentase pengambilan hidrogen peroksida dihitung sebagai berikut:% memulung [H2O2] = 100 mana Ao adalah absorbansi kontrol dan A1 adalah absorbansi di hadapan ekstrak atau standar [/ Ao (Ao- A1)].Mengurangi penentuan dayaKekuatan mengurangi ekstrak ditentukan menurut kertas kami baru-baru ini diterbitkan (Nabavi et al., 2010).2,5 ml ekstrak (25-800? G / ml) dalam air yang dicampur dengan buffer fosfat (2,5 ml, 0,2 M, pH 6,6) dan kalium ferricyanide [K3Fe (CN) 6] (2,5 ml, 1%).Campuran diinkubasi pada 50 o C selama 20 menit.Sebagian (2,5 ml) asam trikloroasetat (10%) ditambahkan ke campuran untuk menghentikan reaksi, yang kemudian disentrifugasi pada 3000 rpm selama 10 menit.Lapisan atas larutan (2,5 ml) dicampur dengan air suling (2,5 ml) dan FeCl3 (0,5 ml, 0,1%), dan absorbansi diukur pada 700 nm.Peningkatan absorbansi campuran reaksi ditunjukkan meningkat mengurangi daya.Vitamin C digunakan sebagai kontrol positif.Penentuan senyawa fenolik total dan kandungan flavonoidIsi total senyawa fenolik ditentukan dengan metode Folin-Ciocalteau (Ebrahimzadeh et al., 2008).Sampel ekstrak (0,5 ml) dicampur dengan 2,5 ml 0,2 N Folin-Ciocalteau reagen untuk 5 menit dan 2,0 ml 75 g l1 natrium karbonat kemudian ditambahkan.Absorbansi reaksi diukur pada 760 nm setelah 2 jam inkubasi pada suhu kamar.Hasil dinyatakan sebagai setara asam galat.Total kandungan flavonoid diukur dengan alat tes kolorimetri (Ebrahimzadeh et al., 2008).Secara singkat, solusi 0,5 ml ekstrak dalam metanol yang dicampur dengan 1,5 ml metanol, 0,1 ml 10% aluminium klorida, 0.1ml dari 1 M kalium asetat, dan 2,8 ml air suling dan dibiarkan pada suhu ruang selama 30 menit.Absorbansi campuran reaksi diukur pada 415.Isi total flavonoid dihitung sebagai quercetin dari kurva kalibrasi.Analisis statistikHasil eksperimen dinyatakan sebagai sarana SD.Semua pengukuran diulang tiga kali.Analisis statistik dilakukan oleh study t-test.Nilai-nilai P lebih rendah dari 0,05 dianggap signifikan secara statistik.Nilai IC50 dihitung dari analisis regresi linier.