FF-UNAIR

KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS

Tujuan Kuliah topik KLT-densitometri

Mampu menjelaskan proses pemisahan secara kromatografi

Mampu menjelaskan pengaruh kandungan air, jenis fase diam dan jenis fase gerak terhadap nilai Rf

Mampu menghitung nilai Rf dan Rs

Mampu memilih sistem KLT utk analisis campuran tertentu

Mampu menjelaskan mode analisis dengan densitometer

Mampu menghitung kadar pada analisis KLT-densitometri

Rf A = LA/LsolRf B = LB/Lsol Rf C = LC/Lsol

A

B

C

LA

LB

LC

LS

INTRODUCTION TO TLC

Applications

Screening many samples very quickly

Analysis in cases where sample preparation is

very difficult

Analysis of compounds in complex matrices

Time per analysis: 3-15 min.

Limitations

Non-volatile compounds

Low separating power

Thin layer solid phase is coated onto glass/aluminum plate

with gips, amylum, or polyvinylalcohol

KLT vs kromatografi kertas

lebih cepat tiada serabut mengurangi pelebaran zona dpt dipakai penampak warna yang korosif perlu sedikit contoh dan lebih peka 10 - 100 x

HPLC

Serial process: all analytes go through the same column and detector

- Possibility of carryover

Detection in the presence of mobile phase

TLC

Parallel process: many samples analyzed simultaneously, side-by side

Solid Phase is used only once

- Carryover is not a problem

Off-line: Analytes are stored on plate

- Measurements can be done repeatedly

Common TLC Stationary Phases

Tabel 1 Keaktifan Al2O3 vs kandungan air

Kandungan airKeaktifan menurutBilangan azobenzena

Brochmann dan (azobenzena x 10-5 M/g)

Schooder

0I26

3II21

6III18

10IV13

15V0

Pemilihan penjerap tgt sifat analit

sifat kelarutan, apakah analit hidrofil atau lipofilhidrofil maka dipakai selulose, kieselguhr atau poliamidaanalit lipofil dapat dipakai alumina, silikagel, asetil selulosa atau poliamidareaksi analit asam, basa atau netralapakah ada reaksi antara analit dengan penjerap atau pelarut pengembang

Segitiga Stahl

M

S

E

M

S

E

Hidrofil

Lipofil

Nonpolar

Inaktif

Aktif

Polar

FASE DIAM

ANALIT

LAR PENGEMBANG

HPTLC

Characteristics

Smaller particles (6 m instead of 12-20)

Thinner Layers (100 m instead of 250)

Narrow particle size distribution

Why?

Advantages

Faster

Cheaper (smaller plates)

Improved detection limits

ANALISIS KUALITATIF

Nilai Rf, Warna (maks))Pemilihan sistem KLTKepekaanWaktu analisisKeterulangan nilai Rf x 100Hubungan sifat kromatografi antar sistemDistribusi nilai Rf x 100 dan daya pembedanya

PenjerapSilika dicelup dlm 0,1 M KOH, aktifkan

PelarutSyw Pembanding Rf x 100

Met-OHamm.Diazepam75

(100 + 1,5) Klorprotiksan58

Kodein33

Atropin18

2M
Daya pembeda = 1 -
N(N-1)

M = jumlah obat yang nilai Rf x 100-nya sama atau dalam jendela galat, N = jumlah obat yang diperiksa

B

Sikloheksan- toluena- Dipipanon66

-dietil-aminaPetidin37

(75 + 15 + 20) Desipramin20

Kodein6

Kloroform-met-OH Meklezin79

( 9 + 1 ) Kofein58

Dipipanon33

Desipramin11

AsetonMeklezin70

Mepavakain48

Prokain30

Amitriptilin15

B

Kloroform-aseton Metoheksitopn73

( 4 + 1 ) Kuinalbarbiton56

Klonazepam35

Parasetamol15

Etil asetat-metanolPrazepam81

-amonia (85 + 10 + 5 ) Tenazepam63

Hidroklorotiazid34

Sulfadimidin13

Etil asetatKuinalbarbiton68

Salisilamida55

Fenasetin38

Sulfatiazol20

Kloroform-metanol Prazepam72

( 9 + 1 ) Feansetin52

Sulfafurazol 33

Hidroklorotiazid13

A

Tabel 5 Daya Pembeda gabungan terbaik sistem KLT utk obat basa2

2 dengan jendela galat = 3 X Rf x 100 simpangan baku intra-laboratorium

Sistem KLTDaya Pembeda

3 0,860

1 + 2 0,962

1 + 2 + 3 0,988

1 + 2 + 3 + 4 0,993

1 dengan jendela galat = 3 X Rf x 100 simpangan baku intra-laboratorium (Stead, 1982)

Sistem KLTDaya Pembeda

5 0,854

6 + 7 0,965

6 + 7 + 8 0,983

5 + 6 + 7 + 8 0,987

Tabel 6 Daya Pembeda gabungan terbaik sistem KLT utk obat asam1

3. Detection:

If the spots are not colored and cant be seen by the eye, use:

UV lamp for UV-active compounds; most aromatics are UV-active If compounds are not UV-active, use an iodine (I2) chamber

PENAMPAK NODA

Pereaksi untuk obat golongan basaninihidrin, aminaFPN, fenotiazin warna merah kecoklatan, dibenzazepin warna biruDragendorff alkaloidaIodoplatina asam, aminaPereaksi Marquis, alkaloida fenolik Pereaksi untuk obat golongan asamPeraksi van Urk, sulfonamidabesi III klorida, fenol raksa I nitrat, barbituratKalium permanganat asam, ikatan rangkap alifatikPereaksi furfural, senyawa netralIodoplatina asam

Halaman1

FF-UNAIR

KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS

TujuanKuliahtopikKLT-densitometri

1.Mampumenjelaskanprosespemisahansecarakromatografi

2.Mampumenjelaskanpengaruhkandunganair, jenisfasediam

danjenisfasegerakterhadapnilaiR

f

3.MampumenghitungnilaiR

f

danR

s

4.MampumemilihsistemKLT utkanalisiscampurantertentu

5.Mampumenjelaskanmode analisisdengandensitometer

6.MampumenghitungkadarpadaanalisisKLT-densitometri