TIARA DWI NURMALITA (120342400172/G-GE)

ESSAY: MOLECULAR CLONING

Kloning DNA merupakan proses penggandaan organisme inang yang

didalamnya terdapat DNA rekombinan dan membentuk organisme yang

memiliki seperangkat genetik DNA yang identik. Organisme inang yang

digunakan hampir selalu menggunakan bakteri E.coli. vektor yang digunakan

secara normal harus dapat direplikasi dan diisolasi secara bebas. Enzim yang

digunakan dalam kloning DNA : alkaline phosphatase, DNA ligase, DNA

polymerase I, Exonuclease III, mung bean nuclease, nuclease S1,

Polinucleotide kinase, enzim retriksi, reverse transcriptase, RNase A, RNase H,

T7, T3, dan SP6 RNA polymerase, Taq DNA polymerase, dan terminal

transferase.

Kloning DNA ada yang berupa subkloning (transfer DNA yang telah di

klon dari satu vektor ke vektor lainnya). Tahap subkloning yang pertama yaitu

isolasi plasmid DNA yang berisi sekuen yang diklon . tahap kedua yaitu digesti

(pemotongan) plasmid dalam fragmen yang terpisah dengan endonuclease

restriksi, ketiga yaitu pemisahan fragmen-fragmen dengan elektroforesis gel

agarose, keempat yaitu ligase (penyambungan) fragmen ke dalam vektor

plasmid baru, untuk membentuk molekul rekombinan, kelima yaitu transfer

plasmid yang sudah ada sambungannya ke dalam strain E.coli (transformasi),

keenam yaitu seleksi bakteri yang tertransformasi, terakhir yaitu analisis

plasmid rekombinan.

Kloning gen dapat menggunakan “DNA libraries”. Caranya, pertama

mRNA total diekstrak dari jaringan khusus dan hibridisasi dengan primer poli-T,

kedua yaitu pembentukan komlementer DNA copy dengan reverse

transcriptase, ketiga yaitu degradasi RNA dengan menggunakan enzim RNase

H, keempat yaitu menyintesis untai cNDA kedua menggunakan fragmen RNA

sebagai primer.

Jurnal yang ditemukan metode kloningnya perpaduan antara DNA

libraries dengan subkloning: isolasi A.niger, persiapan cDNA, ligase dan

identifikasi DNA yang masuk, ligase produk PCR, persiapan cell line yang

kompeten, transformasi E.coli, dan isolasi dan identifikasi plasmid rekombinan.

DAFTAR PUSTAKA Alberts, Bruce., Johnson, Alexander., Lewis, Julian., Raff, Martin., Roberts,

Keith., dan Walter, Peter. Molecular Biology of the Cell fifth Edition. 2008. New York : Garland Science Taylor & Francis Group.

Mukadam, D.S., Chavan, A.M., Taware, dan D.S, Taware, S.D. 2010. Isolation, Cloning, and Molecular Characterization of Polygalacturonase I (pgaI) Gene from Aspergillus niger Isolate from Mango. Indian Journal of Biotechnology, 9: 153—159.

Turner, P.C., McLennan, A.G., bates, A.D., dam White, M.R.H. 1998. Instant Notes in Molecular Biology. Liverpool : Bios Scientific Publishers.