Sintesis Dan Karakterisasi Campuran Asam 2-(stearoiloksi ...
SKRIPSI SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS SITOTOKSIK ASAM 10 …repository.unair.ac.id/30167/1/HALAMAN...
Transcript of SKRIPSI SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS SITOTOKSIK ASAM 10 …repository.unair.ac.id/30167/1/HALAMAN...
SKRIPSI
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS SITOTOKSIK
ASAM 10-N-(BENZOIL) FOLAT PADA SEL
HELA
AHMAD FATIH JAUHARI
FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS AIRLANGGA
DEPARTEMEN KIMIA FARMASI
SURABAYA
2015
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
SKRIPSI
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS... AHMAD FATIH JAUHARI
SKRIPSI
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS SITOTOKSIK
ASAM 10-N-(BENZOIL) FOLAT PADA SEL
HELA
AHMAD FATIH JAUHARI
051111078
FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS AIRLANGGA
DEPARTEMEN KIMIA FARMASI
SURABAYA
2015
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
SKRIPSI
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS... AHMAD FATIH JAUHARI
LEMBAR PERSETUJUAN
PUBLIKASI KARYA ILMIAH
Demi perkembangan ilmu pengetahuan, saya menyetujui
skripsi/karya ilmiah saya, dengan judul :
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS SITOTOKSIK ASAM 10-N-
(BENZOIL) FOLAT PADA SEL HELA
untuk dipublikasikan atau ditampilkan di internet atau media lain yaitu
Digital Library Perpustakaan Universitas Airlangga untuk kepentingan
akademik sebatas sesuai Undang-Undang Hak Cipta.
Demikian pernyataan persetujuan publikasi karya ilmiah ini saya
buat dengan sebenarnya.
Surabaya, September 2015
Ahmad Fatih Jauhari
NIM: 051111078
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
SKRIPSI
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS... AHMAD FATIH JAUHARI
SURAT PERNYATAAN Saya yang bertanda tangan di bawah ini,
Nama : Ahmad Fatih Jauhari
NIM : 051111078
Fakultas : Farmasi
menyatakan dengan sesungguhnya bahwa hasil tugas akhir yang saya tulis
dengan judul :
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS SITOTOKSIK ASAM 10-N-
(BENZOIL) FOLAT PADA SEL HELA
adalah benar-benar merupakan hasil karya saya sendiri. Apabila dikemudian
hari diketahui bahwa skripsi ini merupakan hasil plagiarisme, maka saya
bersedia menerima sangsi berupa pembatalan kelulusan dan atau pencabutan
gelar yang saya peroleh.
Demikian surat pernyataan ini saya buat untuk digunakan sebagaimana
mestinya.
Surabaya, September 2015
Ahmad Fatih Jauhari
NIM : 051111078
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
SKRIPSI
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS... AHMAD FATIH JAUHARI
Lembar Pengesahan
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS SITOTOKSIK ASAM
10-N-(BENZOIL) FOLAT PADA SEL HELA
SKRIPSI
Dibuat untuk memenuhi syarat mencapai gelar Sarjana Farmasi pada
Fakultas Farmasi Universitas Airlangga
2015
Oleh :
AHMAD FATIH JAUHARI
NIM : 051111078
Skripsi ini telah disetujui oleh:
Pembimbing Utama Pembimbing Serta
Prof. Dr. Siswandono, MS.,Apt. Dr. Suko Hardjono, MS.,Apt.
NIP. 19521002 198002 1 001 NIP. 19520928 198103 1 001
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
SKRIPSI
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS... AHMAD FATIH JAUHARI
v
KATA PENGANTAR
Puji syukur kehadirat Allah SWT yang selalu melimpahkan
Rahmat-Nya kepada kita semua sehingga penulis dapat menyelesaikan
skripsi yang berjudul “Sintesis dan uji aktivitas sitotoksik asam 10-N-
(benzoil) folat pada sel hela” sebagai prasyarat untuk mencapai gelar
sarjana farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Airlangga.
Skripsi ini dapat selesai berkat bantuan berbagai pihak, oleh karena
itu penulis ingin mengucapkan terima kasih dan apresiasi sedalam-dalamnya
kepada:
1. Prof. Dr. Fasich, Apt. selaku Rektor Universitas Airlangga yang
telah memberikan kesempatan kepada penulis untuk menyelesaikan
skripsi ini.
2. Dr. Umi Athijah, MS., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Airlangga yang telah memberikan kesempatan kepada
penulis untuk menyelesaikan skripsi ini.
3. Prof. Dr. Siswandono, MS., Apt. selaku dosen pembimbing utama
saya, yang tidak mengenal lelah membantu memberikan saran,
arahan, nasehat, masukan dari awal penelitian dan memberikan
semangat baru dalam menghadapi skripsi ini.
4. Dr. Suko Hardjono, MS., Apt. selaku selaku dosen wali saya,
sekaligus pembimbing serta, yang tidak hentinya memberikan
semangat dalam penyelesaian skripsi ini serta naeshat akademik dari
awal masuk perkuliahan sampai kapanpun.
5. Prof. Dr. Djoko Agus Purwanto, Apt. dan Dra. Suzana, M.Si., Apt.
serta Drs. Achmad Toto Poernomo, M.Si., Apt. selaku dosen penguji
yang telah memberikan evaluasi saran, masukan dan nasehat dalam
perbaikan naskah skripsi ini.
6. Laboratorium Kimia Medisinal, Analisis, Sintesis, TDC dan
Laboratorium Parasitologi FK UGM beserta seluruh stafnya
terutama Pak Tukijo, Pak Yanto yang sering membantu preparasi
alat, Pak Sunar, Pak Kosairi, Bu Yayuk, Pak Iwan, Bu Juana, Mas
Tegar, Mbak Helen .
7. Ayahanda Muhammad Furqon dan Ibunda Eni Purwati yang selalu
mendoakan, membangkitkan semangat penulis serta Muhammad
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
SKRIPSI
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS... AHMAD FATIH JAUHARI
vi
Nu’man Elfakhri dan Muhammad Alfan Nasrullah yang selalu
menemani penulis di rumah.
8. Para Kyai dan guru-guru di Darul Ulum beserta ustadz dan santrinya
yang bersedia memberikan ilmu, meluangkan waktu untuk bertukar
pikiran dan mendoakan penulis.
9. Seluruh teman satu lab tim proyek asam folat yang dipromotori oleh
Didy Yoga beserta anggota Erwin, Aldi, Faris dan Nindya yang tiada
pernah putus semangat dalam menyelesaikan proyek ini.
10. Spesial terimakasih pada seluruh angkatan Farmasi Unair 2011
beserta komponennya dari kelas A hingga kelas D, teman-teman
yang pernah menjadi komting kelas Hajir, Edy, Ananto, Raihan,
Primadi, Aldi, Arie yang sudah menjalankan tugas dengan
maksimal dan memperjuangkan angkatan hingga saat ini.
11. Segenap teman-teman Rep. PHP Management Ayu Ratnasari,
Febrianti, Meira dan Nadiyah yang selalu menemani, memberikan
motivasi dan inspirasi bagi penulis.
12. Teman-teman kontrakan sehidup serumah Nana Setyawan, Zainul
Amrullah, Khanzul, Rojikin, Arya Putra, Faris S, Faris K, Raihan,
Aldi, Ustad Alfi, Mas Febi, Mas Riki, Mas Dhoan dan Mas Cipto
dan komponen tambahan Rohman Hadi yang mengisi hari-hari
selama ini dengan pengalaman baru.
13. Serta seluruh teman-teman, kakak dan adik kelas yang berada di
BEM FF, ISMAFARSI, DKI dan UKMKI serta Mas Asset,
Haqqum, Kresma Okky yang turut bersama berjuang, memberi
bimbingan, masukan, pengalaman dan semangat baru pada penulis .
14. Serta berbagai pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu dalam
lembaran kertas ini.
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
SKRIPSI
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS... AHMAD FATIH JAUHARI
vii
Dengan segala keterbatasan, penulis belum dapat membalas
kebaikan dari seluruh pihak yang terlibat baik secara langsung maupun tidak
langsung, semoga Allah SWT yang membalas seluruh kebaikan kalian.
Penulis menyadari dalam penyusunan skripsi ini banyak terdapat
kekurangan, maka dari itu segala kritik dan saran yang membangun penulis
harapkan dari berbagai pihak.
Surabaya, September 2015
Penulis
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
SKRIPSI
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS... AHMAD FATIH JAUHARI
viii
RINGKASAN
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS SITOTOKSIK ASAM
10-N-(BENZOIL) FOLAT PADA SEL HELA
Ahmad Fatih Jauhari
Terkait pengobatan kanker diketahui bahwa salah satunya adalah
golongan anti metabolit folat. Asam folat dengan nama asam N - [ 4 - [ [ (10
– amino - 1,4 – dihidro – 4 – oxo – 6 - pteridinil) metil] amino] benzoil] -L -
glutamat dan metabolitnya (dikenal dengan folat) merupakan koenzim dari
banyak transformasi biokimia esensial. Dalam rangka meningkatkan aktivitas
biologis dari suatu struktur senyawa maka dilakukan modifikasi molekul atau
struktur dari senyawa penuntun. Modifikasi asam folat menjadi antimetabolit
folat diawali dengan membuat rancangan senyawa dimana asam folat
ditambahkan gugus-gugus yang memiliki sifat lipofilik, elektronik, dan sterik
tertentu. Kemudian dilakukan uji in silico , melakukan sintesis senyawa
tersebut dengan metode reaksi subtitusi asil nukleofilik. Sintesis turunan
asam folat pada gugus amin sekunder pernah dilakukan sebelumnya dengan
subtituen trifluoroasetil. Senyawa hasil sintesis kemudian dilihat aktivitas
biologisnya dengan menguji aktivitas sitotoksiknya secara in vitro pada sel
HeLa dengan menggunakan metode MTT.
Tujuan penelitian ini untuk membandingkan aktivitas sitotoksik
secara in silico dari senyawa asam 10-N-(benzoil)folat dengan metotreksat,
memperoleh senyawa asam 10-N-(benzoil)folat melalui hasil reaksi antara
asam folat dan benzoil klorida dan membandingkan aktivitas sitotoksiknya
dengan metotreksat secara in vitro dengan metode MTT terhadap kultur sel
HeLa.
Uji in silico secara komputerisasi dilakukan untuk memprediksi
apakah senyawa asam 10-N-(benzoil)folat memiliki aktivitas sitotoksik yang
lebih besar daripada metotreksat menggunakan program Molegro Virtual
Docker (MVD). Dari hasil doking melalui reseptor DHFR dengan kode
1DDS didapatkan nilai rerank score yang lebih rendahdari metotreksat.
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
SKRIPSI
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS... AHMAD FATIH JAUHARI
ix
Sehingga energi ikatan antara senyawa dan dengan reseptor akan semakin
interaktif, dan diprediksi aktivitasnya akan meningkat.
Hasil sintesis memperoleh cairan minyak kuning. Yang selanjutnya
dicuci menggunakan benzen dan eter untuk menghilangkan sisa subtituen
benzoil klorida yang tersisa. Lalu fase minyak di pisahkan menggunakan
corong pisah dan diuapkan untuk mendapatkan senyawa asam 10-N-
(benzoil)folat.
Uji kemurnian dilakukan metode KLT dengan 3 sistem eluen. Dari
uji kemurnian senyawa asam 10-N-(benzoil)folat yang dieluasi dengan
metanol: air (7:3), metanol : air (1 :1) yang dilakukan pada plat KLT RP dan
acetonitril : air (3:1) pada plat KLT fase normal dihasilkan satu noda yang
berbeda Rf nya dengan noda asam folat.
Uji konfirmasi struktur dilakukan dengan metode spektrofotometri
inframerah dan 1H-NMR. Dari hasil analisis dengan spektrofotometri
inframerah tidak didapatkan data yang mendukung bahwa senyawa target
adalah asam 10-N-(benzoil)folat. sedangkan dari hasil analisis dengan
spektrofotometri 1H-NMR dapat disimpulkan ada 2 benzena yang
menunjukkan senyawa yang diuji adalah asam 10-N-(benzoil)folat.
Uji sitotoksik mendapatkan dari data absorbansi dan dikonversikan
menjadi % sel hidup, menunjukkan bahwa baik perlakuan dengan senyawa
asam 10-N-(benzoil)folat maupun dengan kontrol positif metotreksat tidak
menyebabkan adanya kematian sel yang signifikan. Hal ini dapat disebabkan
oleh penggunaan metode ataupun pengaruh bahan dan komposisi bahan pada
pengujian aktivitas sitotoksik dari senyawa hasil sintesis dan kontrol positif
yang tidak sesuai, sehingga hasil yang diperoleh tidak dapat mendeskripsikan
aktivitas sitotoksik dari senyawa hasil sintesis maupun kontrol positif.
Ketiga tahap yang telah dilakukan, yaitu uji in silico, sintesis
senyawa, dan uji aktivitas in vitro MTT menjelaskan bahwa uji in vitro dapat
mengurangi percobaan trial and error sehingga dapat mengurangi waktu dan
biaya yang dibutuhkan dalam pengembangan obat baru. Hasil penelitian ini
dapat digunakan sebagai dasar pengembangan senyawa asam 10-N-
(benzoil)folat sebagai calon obat antikanker. Namun, masih perlu dilakukan
penelitian lebih lanjut terkait analisis untuk metode spektrofotometri
inframerah dengan pelet KBr dan uji in vitro untuk senyawa yang bekerja
sebagai antifolat. Selain itu, perlu dilakukan studi lebih lanjut terkait aktivitas
asam 10-N-(benzoil)folat secara in vitro dengan sel kanker lain dan studi in
vivo untuk memprediksikan toksisitas dan pengaruh metabolisme terhadap
keberadaan obat di dalam tubuh.
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
SKRIPSI
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS... AHMAD FATIH JAUHARI
x
ABSTRACT
Synthesis and cytotoxic activity test of 10-N- (benzoyl) folic acid on
HeLa cells
In Indonesia, each year approximately 15,000 new cases of cervical
cancer and 7,500 of them lead to death. In cancer cells was found that excess
folic acid needs. Have been many analog of folic acid (antifolate) is used as
the analog cancer chemotherapy but still have considerable side effects. So it
is necessary to modify the folic acid molecule to produce another analog that
is expected to provide an optimal activity but have low toxicity. Folic acid
modification begins with drafting a compound where folic acid is added the
groups which have lipophilic properties, electronic and steric certain. Then
tested in silico to predict bond strength analogous to receptors. Then do the
synthesis of these compounds with acylation method and the its analog results
tested the activity with in vitro assays in HeLa cells that compared to the
positive control (methotrexate) with MTT assay method. Results from in
silico test shows modified compounds have lower scores rerank (potent).
Results compound from synthesis is 10-N- (benzoyl)folic acid with 60% yield
and proved by TLC and 1H-NMR spectrophotometric test. Then results
compound from synthesis tested with MTT assay test against HeLa cell
culture that compared with methotrexate at a level of 5000 ppm until 10 ppm.
The result from MTT assay test can not be analyzed because the method does
not show the good hindrance between 10-N- (benzoyl) folic acid and
methotrexate. This research resulted in 10-N- (benzoyl)folic acid as
antifolate.
Keyword: Cancer, folic acid, in silico, acylation, 10-N- (benzoyl)folic acid,
MTT assay, HeLa cell.
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
SKRIPSI
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS... AHMAD FATIH JAUHARI
xi
DAFTAR ISI
Halaman
KATA PENGANTAR .................................................................................. v
RINGKASAN .......................................................................................... viii
ABSTRACT ............................................................................................. x
DAFTAR ISI ............................................................................................ xi
DAFTAR TABEL .......................................................................................xv
DAFTAR GAMBAR ................................................................................. xvi
DAFTAR SINGKATAN ......................................................................... xviii
DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................. xix
BAB I PENDAHULUAN
1.2 Rumusan Masalah ....................................................................... 6
1.3 Tujuan Penelitian ........................................................................ 6
1.4 Manfaat Penelitian ...................................................................... 6
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Tinjauan tentang Kanker ............................................................. 7
2.1.1 Pengertian Kanker ............................................................ 7
2.1.2 Penyebab Kanker .............................................................. 7
2.2 Tinjauan tentang Antikanker ......................................................10
2.2.1 Antimetabolit ...................................................................10
2.2.2. Obat Antikanker yang Menghambat Kerja Hormon .........10
2.2.3. Agen Pengalkilasi DNA ....................................................11
2.3 Tinjauan tentang Uji In silico .....................................................11
2.3.1 Definisi Molegro Virtual docking ....................................11
2.3.2 Keuntungan MVD ...........................................................12
2.4 Tinjauan tentang Reaksi Substitusi Asil Nukleofilik .................12
2.4.1 Mekanisme Reaksi ...........................................................12
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
SKRIPSI
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS... AHMAD FATIH JAUHARI
xii
2.5 Tinjauan tentang Analisis Senyawa ...........................................14
2.5.1 Tinjauan tentang Kromatografi Lapis Tipis .....................14
2.5.2 Tinjauan tentang Spektroskopi Absorbsi .........................14
2.5.2.1 Prinsip Dasar Spektroskopi Absorbsi.............................14
2.5.2.2 Kromofor.........................................................................15
2.5.2.3 Spektroskopi Inframerah.................................................15
2.5.2.4 Spektroskopi H1 NMR...................................................17
2.6 Tinjauan tentang Uji In vitro ......................................................17
2.6.1 Tinjauan tentang Kultur Sel .............................................17
2.7 Tinjauan tentang MTT assay .....................................................18
2.7.1 Pengertian ........................................................................18
2.7.2 Tujuan penggunaan .........................................................18
2.8 Tinjauan Tentang Sel HeLa ........................................................19
BAB III KERANGKA KONSEPTUAL
3.1 Kerangka Konseptual .................................................................21
3.2 Skema Kerangka Konseptual .....................................................24
3.3 Hipotesis .....................................................................................25
BAB IV METODOLOGI PENELITIAN
4.2 Alat dan Bahan Penelitian ..........................................................27
4.2.1 Alat Penelitian .................................................................27
4.2.2 Bahan Penelitian ..............................................................28
4.3 Uji In silico Turunan Asam Folat dengan Subtituen Benzoil
Klorida 28
4.3.1 Pembuatan Struktur Asam 10-N-(Benzoil)Folat ..............28
4.3.2 Docking Turunan Asam Folat dengan Subtituen Benzoil
Klorida .............................................................................28
4.4 Sintesis Asam Folat dengan Subtituen Benzoil Klorida .............30
4.5 Analisa Kualitatif dan Konfirmasi Struktur ...............................30
4.5.1 Kromatografi Lapis Tipis ................................................30
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
SKRIPSI
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS... AHMAD FATIH JAUHARI
xiii
4.5.2 Spektrofotomeri Inframerah ............................................31
4.5.3 Spektrofotometri 1HNMR ................................................31
4.6 Uji Sitotoksik Senyawa Secara In vitro dengan Metode MTT ...31
4.6.1 Prosedur Pembuatan Media .............................................31
4.6.2 Prosedur Menumbuhkan Sel dari Tangki Nitrogen Cair .32
4.6.3 Prosedur Penggantian Media ...........................................33
4.6.4 Prosedur Panen Sel ..........................................................33
4.6.5 Prosedur Perhitungan Sel .................................................34
4.6.6 Prosedur Subkultur Sel ....................................................35
4.6.7 Prosedur Preparasi Sampel ..............................................35
4.6.8 Prosedur Uji Sitotoksik Metode MTT .............................36
BAB V HASIL PENGAMATAN
5.1 Uji In silico .................................................................................39
5.1.1 Pembuatan Struktur Senyawa ..........................................39
5.1.2 Hasil Preparasi Protein ....................................................39
5.1.3 Hasil Penentuan Lubang (Cavity) ....................................40
5.1.4 Hasil Perolehan Nilai Docking ........................................41
5.1.5 Hasil Interaksi Ligan dengan Asam Amino .....................42
5.2 Hasil Sintesis Senyawa asam 10-N-(benzoil)folat......................43
5.3 Uji Kualitatif Senyawa Hasil Sintesis ........................................43
5.3.1 Pemeriksaan Organoleptis ...............................................43
5.3.2 Uji Kemurnian Senyawa Hasil Sintesis ...........................43
5.3.2.1 Uji Kemurnian dengan Kromatografi Lapis Tipis ..........43
5.4 Konfirmasi Struktur Senyawa Hasil Sintesis .............................45
5.4.1 Analisis Spektrofotometri FT-IR .....................................45
5.4.2 Analisis Spektrofotometri 1H-NMR ................................47
5.5 Uji Aktivitas Sitotoksik secara In vitro dengan Metode MTT ...50
5.5.1 Penimbangan dan Pengambilan Bahan ............................50
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
SKRIPSI
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS... AHMAD FATIH JAUHARI
xiv
5.5.2 Pemanenan Sel HeLa .......................................................50
5.5.3 Hasil Pengukuran Absorbansi Sel HeLa yang Masih
Hidup Setelah Perlakuan metotreksat ..............................51
5.5.4 Hasil Pengukuran Absorbansi Sel HeLa yang Masih
Hidup Setelah Perlakuan asam 10-N-(benzoil)folat ........51
5.5.5 Hasil Pengukuran Absorbansi Sel HeLa pada Kontrol
Sel ....................................................................................52
5.5.6 Hasil Pengukuran Absorbansi Kontrol Media .................52
5.5.7 Perhitungan IC50 Metotreksat ..........................................52
5.5.8 Perhitungan IC50 asam 10-N-(benzoil)folat .....................53
BAB VI. PEMBAHASAN ..........................................................................55
BAB VII. KESIMPULAN DAN SARAN ...................................................61
DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................62
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
SKRIPSI
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS... AHMAD FATIH JAUHARI
xv
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel V.1 Nilai doking metotreksat terhadap reseptor 1DDS ......... 41
Tabel V.2. Pemeriksaan organoleptis senyawa hasil sintesis ........... 43
Tabel V.3. Rf noda kromatografi lapis tipis pada tiga eluen berbeda 44
Tabel V.4 Karakteristik spektrum inframerah senyawa asam folat .. 46
Tabel V.5 Karakterisasi spektrum 1H-NMR senyawa asam folat .... 48
Tabel V.6 Karakterisasi spektrum 1H-NMR senyawa hasil sintesis . 48
Tabel V.7 Penimbangan dan pengambilan bahan ........................ 50
Tabel V.8. Hasil absorbansi perlakuan dengan senyawa metotreksat 51
Tabel V.9. Hasil absorbansi perlakuan dengan senyawa asam 10-N-
(benzoil)folat ......................................................... 51
Tabel V.10 Hasil absorbansi kontrol sel ...................................... 52
Tabel V.11 Hasil absorbansi kontrol media ................................. 52
Tabel V.12 Tabel perhitungan % sel hidup pada perlakuan
metotreksat ............................................................ 53
Tabel V.13 Tabel perhitungan % sel hidup pada perlakuan asam 10-N-
(benzoil)folat ......................................................... 54
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
SKRIPSI
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS... AHMAD FATIH JAUHARI
xvi
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1.1 Senyawa AM dan MTX (Avendano & Menendez, 2008) ... 3
Gambar 1.2 Struktur (a)asam folat; (b)metotreksat; (c)asam 10-N-
(benzoil)folat (ChemBioDraw Ultra). ................................. 4
Gambar 1.3 Struktur asam 10-N-(trifluoroasetil)folat yang pernah
disentesis. ............................................................................ 5
Gambar 2.1 Siklus Sel dalam Tubuh (Bolsover, et al., 2004) ................. 9
Gambar 2.2 Interaksi folat dengan reseptor ...........................................10
Gambar 2.3 Substitusi Asil Nukleofilik .................................................13
Gambar 2.4 Mekanisme Reaksi Substitusi Asil Nukleofilik pada Asam
Folat ....................................................................................13
Gambar 2.5 Skema Spektra Absorbsi .....................................................15
Gambar 2.6 Daerah inframerah dari spektra elektromagnetik ................15
Gambar 2.7 Absorbsi IR dari Beberapa Gugus Fungsi ...........................16
Gambar 3.1 Skema Kerangka Konseptual ..............................................24
Gambar 4.1 Kerangka Operasional Penelitian ........................................26
Gambar 4.2 Gambar (a) adalah struktur reseptor dihydrofolate reductase
1DDS sedangkan Gambar (b) adalah gambar ligannya yang
mengandung gugus farmakofor diaminopirimidin (Molegro
Virtual docking) ..................................................................29
Gambar 4.3 Hemasitometer terdiri dari 4 kamar hitung. Setiap kamar
hitung terdiri dari 16 kotak .................................................34
Gambar 5.1 Gambar (a) adalah struktur 2D asam 10-N-(benzoil)folat,
gambar (b) adalah struktur 3D dari asam 10-N-
(benzoil)folat, gambar (c) adalah struktur 2D metotreksat,
dan gambar (d) adalah struktur 3D metotreksat
(chembiodraw) ...................................................................39
Gambar 5.2 Reseptor DHFR dengan kode 1DDS ..................................40
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
SKRIPSI
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS... AHMAD FATIH JAUHARI
xvii
Gambar 5.3 Cavity pada reseptor DHFR 1DDS .........................................40
Gambar 5.4 Cavity 1 reseptor 1DDS terdapat gugus farmakofor dari
ligan asal reseptor dan ligan senyawa yang akan
disintesis. ............................................................................41
Gambar 5.5 Gambar ikatan hidrogen (biru) senyawa metotreksat beserta
jenis protein yang terikat pada saat proses doking. ............42
Gambar 5.6 Gambar ikatan hidrogen (biru) senyawa asam 10-N-
(benzoil)folat beserta jenis protein yang terikat pada saat
proses doking. .....................................................................42
Gambar 5.7 Spektrum inframerah senyawa asam folat dalam pelet
KBr .....................................................................................45
Gambar 5.8 Spektrum inframerah senyawa hasil sintesis dalam pelet
KBr .....................................................................................46
Gambar 5.9 Spektrum 1H-NMR senyawa asam folat dalam pelarut
DMSO. ...............................................................................47
Gambar 5.10 Spektrum 1H-NMR asam 10-N-(benzoil)folat dalam pelarut
DMSO ................................................................................49
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
SKRIPSI
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS... AHMAD FATIH JAUHARI
xviii
DAFTAR SINGKATAN
2D 2 dimensi
3D 3 dimensi
DHFR Dihidrofolat Reduktase
DMSO Dimetilsulfoksida
DNA Deoxyribonucleic Acid
ELISA Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
FBS Fetal Bovine Serum
FT-IR Fourier Transform Infrared 1H-NMR Proton Nuclear Magnetic Resonance
HDAC Histon Deasetilase
MTT 3-(4,5-dimetiltiazol-10-il)-10-5-difeniltetrazolium bromida
MTX Methotrexate
MVD Molegro Virtual Docker
PBS Phospat Buffer Saline
RNA Ribonucleic Acid
RPMI Roswell Park Memorial Institute
SDS Sodium Dodecyl Sulfate
WHO World Health Organization
UV Ultraviolet
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
SKRIPSI
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS... AHMAD FATIH JAUHARI
xix
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
LAMPIRAN 1. Perhitungan bahan sintesis .................................................67
LAMPIRAN 2. Prosedur sintesis .................................................................68
LAMPIRAN 3. Perhitungan Hasil Sintesis .................................................69
LAMPIRAN 4. Pengaturan Docking Score .................................................70
LAMPIRAN 5. Penentuan nilai pKa Asam Folat Menggunakan Maestro
(Schrodinger) ......................................................................71
LAMPIRAN 6. Konfirmasi Struktur Senyawa Metotreksat dengan FT-IR .72
LAMPIRAN 7 .Konfirmasi Struktur Senyawa Hasil Sintesis dengan FT-
IR ........................................................................................74
LAMPIRAN 8. Konfirmasi Struktur Asam Folat dengan 1H-NMR dalam
Pelarut DMSO .................................................................. 75
LAMPIRAN 9. Konfirmasi Struktur Senyawa Hasil Sintesis dengan
Spektrum 1H-NMR dalam pelarut DMSO .........................78
LAMPIRAN 10.Denah Platting Uji Sitotoksik dengan metode MTT
Menggunakan Plate 96 Sumuran ........................................81
LAMPIRAN 11.Gambar Alat dan Bahan Uji Sitotoksik .............................82
LAMPIRAN 12.Perhitungan Pembuatan Larutan Uji Sampel, Larutan
Kontrol Positif, dan Larutan Sel HeLa ...............................83
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
SKRIPSI
SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS... AHMAD FATIH JAUHARI