SINTESIS SENYAWA TURUNAN PIRIMIDINON DARI ANALOG …repository.unair.ac.id/25762/1/TUSSHOLIHA,...

SINTESIS SENYAWA TURUNAN PIRIMIDINON DARI ANALOGBIS- CALKON (3E,5E)-3,5-BIS-(4-METOKSIBENZILIDIN-N-

METILPIPERIDIN-4-ON) SEBAGAI SENYAWA ANTIKANKER

SKRIPSI

NIA TUSSHOLIHA

DEPARTEMEN KIMIAFAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI

UNIVERSITAS AIRLANGGASURABAYA

2012

ADLN Perpustakaan Universitas Airlangga

Skripsi Sintesis Senyawa Turunan Pirimidinon Dari Analog Bis- Calkon (3E,5E)-3,5-Bis-(4-Metoksibenzilidin-N-Metilpiperidin-4-On) Sebagai Senyawa Antikanker

Nia Tussholiha

ii

SINTESIS SENYAWA TURUNAN PIRIMIDINON DARI ANALOGBIS- CALKON (3E,5E)-3,5-BIS-(4-METOKSIBENZILIDIN-N-

METILPIPERIDIN-4-ON) SEBAGAI SENYAWA ANTIKANKER

SKRIPSI

Sebagai Salah Satu Syarat untuk MemperolehGelar Sarjana SainsBidang Kimia pada

Fakultas Sains dan TeknologiUniversitas Airlangga

Disetujui Oleh :

Pembimbing I,

Drs. Hery Suwito, M.SiNIP. 1963 0308 198701 1 001

Pembimbing II,

Dr. Alfinda Novi Kristanti, DEANIP. 1967 11115 199102 2 001



Nia Tussholiha

iii

LEMBAR PENGESAHAN SKRIPSI

Judul : Sintesis Senyawa Turunan Pirimidinon Dari Analog Bis-Calkon (3E,5E)-3,5-Bis-(4-Metoksi-benzilidin-N-Metil-piperidin-4-On) Sebagai Senyawa Antikanker

Penyusun : Nia TussholihaNIM : 080810650Pembimbing I : Drs. Hery Suwito, M.SiPembimbing II : Dr. Alfinda Novi Kristanti, DEATanggal Ujian : 29 Agustus 2012

Disetujui oleh:

Pembimbing I

Drs. Hery Suwito, M.SiNIP. 1963 0308 198701 1 001

Pembimbing II


Mengetahui:Ketua Departemen Kimia

Fakultas Sains dan TeknologiUniversitas Airlangga




Nia Tussholiha

iv

PEDOMAN PENGGUNAAN SKRIPSI

Skripsi ini tidak dipublikasikan, namun tersedia di perpustakaan dalam

lingkungan Universitas Airlangga. Diperkenankan untuk digunakan sebagai

referensi kepustakaan, tetapi pengutipan seijin penulis dan harus menyebutkan

sumbernya sesuai kebiasaan ilmiah.

Dokumen skripsi ini merupakan hak milik Universitas Airlangga



Nia Tussholiha

v

KATA PENGANTAR

Alhamdulillah, segala puji syukur kehadirat Allah SWT karena dengan

rahmat, taufik serta hidayah-Nya, sehingga penyusun dapat menyelesaikan

penulisan skripsi dengan judul “Sintesis Senyawa Turunan Pirimidinon Dari

Analog Bis-Calkon (3E,5E)-3,5-Bis-(4-Metoksibenzilidin-N-Metil-Piperidin-

4-On) Sebagai Senyawa Antikanker” dengan tepat waktu. Dalam kesempatan

ini, penyusun menyampaikan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada:

1. Bapak Drs. Hery Suwito, M.Si selaku dosen pembimbing I yang telah

meluangkan waktu, tenaga, pikiran, bimbingan serta arahannya dalam

menyusun skripsi ini.

2. Ibu Dr. Alfinda Novi K., DEA selaku pembimbing II yang telah meluangkan

waktu, pikiran, serta arahannya dalam menyusun skripsi ini

3. Ibu Dr. Alfinda Novi K., DEA selaku ketua Departemen Kimia Fakultas

Sains dan teknologi Universitas Airlangga.

4. Ibu Dra. Usreg Sri Handajani M.Si selaku dosen wali yang selalu senantiasa

membimbing dan memberikan masukan selama penyusun menempuh kuliah.

5. Ibu Dr. Pratiwi Pudjiastuti, M.Si selaku penguji I atas saran dan

bimbingannya.

6. Bapak Drs. Imam Siswanto, M.Si selaku penguji II atas sarannya

7. Ibu Dr. Nanik Siti Aminah, M.Si selaku penguji III atas saran dan

bimbingannya.

8. Bapak dan Ibu Dosen pengajar di Departemen Kimia Fakultas Sains dan

teknologi Universitas Airlangga.

9. Kedua Orang Tua, Jie Usy, Kamelia, Hafid, Nurul dan keluarga besar yang

telah memberikan motivasi dan ketabahan hati dengan doa dan bantuan

kepada penyusun.

10. Teman- temanku kimia organik angkatan 2008 yang memberikan dukungan

moral maupun doanya. Khususnya bagi Asma N, Ike JP, Nera E, Ines K,

Wahyu S.

11. Teman- temanku jurusan kimia angkatan 2008 yang memberikan dukungan



Nia Tussholiha

vi

moral Khususnya bagi Nirma, Vida, Dyah, Ais, dan Shofi.

12. Semua pihak yang telah membantu dalam penulisan skripsi ini yang tidak

dapat disebutkan satu persatu. Semoga apa yang mereka berikan kepada

penyusun mendapatkan balasan dari Allah SWT.

Semoga skripsi ini bermanfaat bagi yang membutuhkan serta menjadi

wacana yang berguna bagi kita semua. Amin

Surabaya, Agustus 2012

Penyusun

Nia Tussholiha



Nia Tussholiha

vii

Tussholiha, N, 2012, Sintesis Senyawa Turunan Pirimidinon Dari Analog Bis-Calkon (3E,5E)-3,5-Bis-(4-Metoksibenzilidin-N-Metilpiperidin-4-On) SebagaiSenyawa Antikanker, skripsi ini dibawah bimbingan Drs. Hery Suwito, M.Sidan Dr. Alfinda Novi Kristanti, DEA, Departemen Kimia Fakultas Sains danTeknologi Universitas Airlangga, Surabaya.

ABSTRAK

Penelitian ini dilakukan dalam upaya pencegahan penyakit kanker, yangsaat ini masih menjadi salah satu penyebab kematian di dunia. Penelitian ini jugadifokuskan untuk menghasilkan suatu senyawa turunan pirimidinon yang dapatmembunuh sel kanker dengan cara mensintesis senyawa target 3-(4-klorofenil)-1-(3,4-diklorofenil)-8-(4-metoksibenzilidin)-4-(4-metoksifenil)-6-metil-3,4,5,6,7,8-heksahidro-1H-pirido-pirimidin-2-on dari bahan analog bis-Calkon (3E,5E)-3,5-bis-(4-metoksi-benzilidin-N-metil-piperidin-4-on) dan 1-(4-kloro-fenil)-3-(3,4-diklorofenil)-urea. Pembuatan analog bis-Calkon (3E,5E)-3,5-bis-(4-metoksibenzilidin-N-metilpiperidin-4-on) dilakukan melalui reaksi kondensasi aldolsilang dan diuji kemurniannya menggunakan KLT dan titik leleh sertadiidentifikasi dengan metode spektroskopi yaitu uji 1H-RMI, 13C-RMI. Pembuatansenyawa target dilakukan melalui reaksi siklo kondensasi. Senyawa target yangtelah diperoleh dimurnikan dengan menggunakan KLTP dan diuji kemurniannyamenggunakan KLT. Identifikasi senyawa hasil sintesis dilakukan dengan metodespektroskopi, meliputi uji UV-VIS, IR, dan MS. Untuk mengetahui aktivitasnyasebagai senyawa antikanker dilakukan uji antikanker secara in vitro terhadapenzim DHFR yang dihasilkan dalam hati mencit. Aktivitas antikanker yangmenghambat enzim DHFR dapat dilihat dari penurunan serapan NADPH. NilaiIC50 senyawa hasil sintesis yang didapatkan melalui analisis probit adalah 25,086μg/mL. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa hasil sintesis memiliki aktivitassebagai antikanker

Kata kunci : analog bis-calkon, pirimidinon, siklo kondensasi, antikanker, enzimDHFR.



Nia Tussholiha

viii

Tussholiha, N, 2012, Synthesis Of Pyrimidinone Derivative From Bis-Chalcone Analogue (3E,5E)-3,5-Bis-(4-Methoxy-benzylidene-N-Methyl-Piperidine-4-One) And As Anticancer Agent, Final project is counselled byDrs. Hery Suwito, M.Si and Dr. Alfinda Novi K., DEA, The Department ofChemistry, Faculty Science and Technology, Universitas Airlangga,Surabaya.

ABSTRACT

The research was conducted in cancer curement, which is still the one of deathcause in the world. The study was also focused to produce a pirimidinonderivative compound that can kill cancer cells by synthesizing the targetcompound 3-(4-chloro-phenyl)-1-(3,4-dichloro-phenyl)-8-(4-methoxy-benzylidene)-4-(4-methoxyphenyl)-6-methyl-3,4,5,6,7,8-hexahydro-1H-pyridopyrimidin-2-one,from bis-chalcone analogue (3E, 5E) -3,5-bis-(4- methoxy-benzylidene -N-methyl-piperidine-4-one) and 1-(4-chloro-phenyl)-3-(3,4-dichloro-phenyl)-urea. Preparation of bis-Calkon analogue (3E,5E)-3,5-bis-(4-methoxy-benzylidene-N-methyl-piperidine-4-one) was done through the cross-aldol condensationreaction and tested using TLC and melting point apparatus. Identification wasperformed by spectroscopic methods such as 1H-NMR, 13C-NMR. Preparation oftarget compound was done through cyclo condensation reaction. The targetcompound was purified using KLTP and tested using TLC. Identification of thecompound synthesized was done by spectroscopic methods, including UV-VIS,IR, and MS. Anticancer activity was done using DHFR enzyme and could be seenfrom decreasing NADPH absorption. IC50 value obtained by probit analysis was25,086 μg/mL. This result showed that the compound synthesized had activity asan anticancer agent.

Keywords : bis-chalcone analogue, pyrimidinone, cyclo condensation, anticancer,DHFR enzyme.



Nia Tussholiha

ix

DAFTAR ISI

Halaman

LEMBAR JUDUL ........................................................................................... iLEMBAR PERNYATAAN ............................................................................ iiLEMBAR PENGESAHAN ............................................................................ iiiPEDOMAN PENGGUNAAN SKRIPSI ....................................................... ivKATA PENGANTAR ..................................................................................... vABSTRAK ....................................................................................................... viiDAFTAR ISI .................................................................................................... ixDAFTAR TABEL ............................................................................................ xiDAFTAR GAMBAR ........................................................................................ xiiDAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... xiv

BAB I PENDAHULUAN ............................................................................... 11.1 Latar Belakang Permasalahan ................................................... 11.2 Rumusan Masalah ..................................................................... 61.3 Tujuan Penelitian........................................................................ 61.4 Manfaat Penelitian ..................................................................... 7

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ..................................................................... 82.1 Calkon......................................................................................... 92.2 Reaksi Kondensasi Aldol ........................................................... 9

2.2.1 Reaksi kondensasi aldol silang ....................................... 92.3 Pirimidinon................................................................................. 102.4 Reaksi Penutupan Cincin Pada Reaksi Siklokondensasi............ 102.5 Kromatografi .............................................................................. 11

2.5.1 Kromatografi lapis tipis .................................................. 122.5.2 Kromatografi lapis tipis preparatif (KLTP) ................... 12

2.6 Spektroskopi .............................................................................. 132.6.1 Spektroskopi ultraviolet-visibel (UV-Vis) .................... 132.6.2 Spekttoskopi inframerah (IR) ........................................ 142.6.3 Spektroskopi resonansi magnetik nuklir (NMR)............ 14

2.6.3.1 Spektroskopi proton resonansi magnetik inti(1H-RMI)............................................................. 14

2.6.3.2 Spektroskopi karbon resonansi magnetikinti (13C-RMI) ................................................... 15

2.6.4 Spektroskopi massa (MS) ............................................... 152.7 Kanker ........................................................................................ 162.8 Antikanker .................................................................................. 162.9 Mekanisme Antikanker .............................................................. 172.10 Enzim DHFR.............................................................................. 18

BAB III METODE PENELITIAN ................................................................ 20



Nia Tussholiha

x

3.1 Tempat dan Waktu Penelitian ................................................... 203.2 Bahan dan Alat Penelitian ......................................................... 20

3.2.1 Alat Penelitian ................................................................ 203.2.2 Bahan Penelitian ............................................................. 21

3.3 Tahapan Penelitian ..................................................................... 213.3.1 Sintesis senyawa turunan calkon .................................... 213.3.2 Sintesi senyawa target .................................................... 223.3.3 Uji sifat fisika senyawa hasil sintesis ............................ 22

3.3.3.1 Uji penentuan titik leleh.. ........................................ 223.3.3.2 Uji kemurnian senyawa dengan kromatografi

lapis tipis................................................................. 223.3.4 Uji spektroskopi ............................................................. 23

3.3.4.1 Uji spektroskopi UV-Vis ........................................ 233.3.4.2 Uji spektroskopi NMR ............................................ 233.3.4.3 Uji spektroskopi MS................................................ 243.3.4.4 Uji spektroskopi IR ................................................. 24

3.3.5 Uji antikanker ..................................... ............................ 243.3.5.1 Ektraksi enzim DHFR ............................................. 243.3.5.2 Uji aktivitas ekstrak enzim DHFR .......................... 253.3.5.3 Inhibisi ekstrak enzim DHFR.................................. 25

3.4 Skema Kerja ............................................................................... 26

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................ 274.1 Sintesis Senyawa Turunan Calkon ............................................ 27

4.1.1 Uji spektroskopi 1H-resonansi magnetik inti..................... 284.1.2 Uji spektroskopi 13C-resonansi magnetik inti.................... 29

4.2 Sintesis Senyawa Porimidinon .................................................. 304.1.2 Uji spektroskopi................................................................. 33

4.1.2.1 Uji spektroskopi ultraviolet-visibel (UV-VIS)........ 334.1.2.2 Uji spektroskopi inframerah........ ............................ 334.1.2.2 Uji spektroskopi massa............................................ 34

4.3 Uji Aktivitas Antikanker secara in Vitro .................................... 364.3.1 Ektraksi enzim DHFR.............. ......................................... 364.3.2 Uji aktivitas ekstrak enzim DHFR.............. ...................... 364.3.3 Inhibisi ekstrak enzim DHFR.............. .............................. 37

BAB V METODE PENELITIAN .................................................................. 405.1 Kesimpulan................................................................................. 405.2 Saran .......................................................................................... 40

DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................... 41LAMPIRAN



Nia Tussholiha

xi

DAFTAR TABEL

No Judul Halaman

4.1 Nilai Rf Senyawa Turunan Calkon 28

4.2 Nilai Rf Senyawa Hasil Sintesis 32



Nia Tussholiha

xii

DAFTAR GAMBAR

No Judul Halaman

1.1 Struktur Pirimidinon 2

1.2 Turunan Pirimidinon 2-[2-(4-klorofenil)-2-hidroksi-1-fenilazo-vinil]-6-metil-(3H)-pirimidin-4-on.

3

1.3 Turunan Urea 1-(4-klorofenil)-3-(3,4-diklorofenil)-urea.

4

1.4 Struktur molekul target 3-(4- klorofenil)-1-(3,4-diklorofenil)-8-(4-metoksibenzilidin)-4-(4-metoksifenil)-6-metil-3,4,5,6,7,8-heksahidro-1H-pirido-pirimidin-2-on

4

1.5 Analisi Retrosintesis Molekul Target 5

2.1 Struktur Calkon 8

2.2 Reaksi Kondensasi Aldol 9

2.3 Reaksi Penutupan Cincin 11

2.4 Mekanisme reaksi enzim DHFR 19

4.1 Gambar hasil KLT senyawa turunan calkon 28

4.2 Analisis 1H-RMI senyawa turunan calkon 29

4.3 Analisis 13C-RMI senyawa turunan calkon 30

4.4 Gambar sintesis senyawa target 31

4.5 Gambar KLT hasil reaksi siklo kondensasi 31

4.6 Gambar Kromatografi Lapis Tipis Preparatif 32

4.7 Gambar hasil KLT senyawa hasil sintesis 33

4.8 Senyawa 4-(4-metoksifenil)-6-metil-5,6-dihidro-1H-pirido[4,3-d]pirimidin-2-on

34

4.9 Mekanisme Reaksi Senyawa Target 35



Nia Tussholiha

xiii

4.10 Struktur methotreksat 38

4.11 Grafik % inhibisi vs konsentrasi (μg/mL) 39



Nia Tussholiha

xiv

DAFTAR LAMPIRAN

No. Judul Lampiran

1. Spektrum 1H-NMR senyawa turunan calkon

2. Spektrum 13C-RMI senyawa turunan calkon

3. Spektrum UV-Vis senyawa hasil sintesis

4. Spektrum IR senyawa hasil sintesis

5. Spektrum MS senyawa hasil sintesis

6. Data hasil analisis antikanker



Nia Tussholiha

1

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Penyakit kanker merupakan salah satu penyebab kematian di dunia. Pada

tahun 2005 jumlah kematian akibat penyakit kanker mencapai 58 juta jiwa. Di

Indonesia penyakit kanker merupakan penyebab kematian kedua setelah penyakit

jantung (Lutfa et al., 2008). Kanker merupakan penyakit tidak menular yang

timbul akibat kondisi fisik yang tidak normal dan pola hidup yang tidak sehat.

Jumlah penyakit kanker yang menyerang manusia semakin meningkat setiap

tahunnya, bahkan di masa mendatang diperkirakan akan semakin tinggi karena

berbagai alasan (Schreiber, 2008).

Secara umum, penyakit kanker dipengaruhi oleh kondisi fisik yang tidak

normal dan pola hidup yang tidak sehat. Dalam keadaan normal sel dalam tubuh

akan membelah diri dan bertambah banyak hanya untuk menggantikan sel yang

sudah mati atau rusak, akan tetapi sel kanker akan membelah terus-menerus

walaupun tubuh tidak memerlukannya. Akibatnya akan terjadi timbunan sel-sel

baru yang disebut tumor ganas atau kanker (Schreiber., 2008). Kanker memiliki

kemampuan menyerang dan menyebar pada jaringan lain yang pada akhirnya

akan mengakibatkan kematian (Edrees et al., 2010).

Kemoterapi termasuk salah satu upaya yang dilakukan untuk mengatasi

kanker. Akan tetapi obat antikanker yang digunakan masih mempunyai efek

samping, sehingga kemoterapi tidak efisien apabila digunakan untuk sel kanker

ganas (Taj et al., 2010). Kebanyakan obat-obat kemoterapi mempunyai efek pada



Nia Tussholiha

2

sumsum tulang belakang dan kulit (Benvenuti et al., 2005). Pada saat ini banyak

penelitian dan pengembangan yang difokuskan untuk menghasilkan suatu

senyawa baru yang dapat membunuh sel kanker. Namun demikian dari berbagai

penelitian tersebut masih terdapat efek negatif yang mempengaruhi sel normal

sehingga tidak efisien untuk digunakan, sehingga penelitian mengenai senyawa

antikanker yang potensial dan bersifat selektif merupakan tantangan bagi para

ilmuwan.

Salah satu senyawa yang berpotensi untuk diteliti dan dikembangkan

sebagai antikanker adalah turunan pirimidinon. Pirimidinon merupakan suatu

senyawa yang banyak terdapat di alam. Pirimidinon dan turunannya banyak

dimanfaatkan dalam bidang farmasi dan biokimia karena memiliki aktivitas

bioligis yang berpotensi sebagai agen antitumor (Edrees et al., 2010).

N

HN

O

Gambar 1.1 Struktur pirimidinon

Berdasarkan hasil penelitan Edress (2007) senyawa turunan pirimidinon yaitu

2-[2-(4-klorofenil)-2-hidroksi-1-fenilazo-vinil]-6-metil-(3H)-pirimidin-4-on,

seperti yang tampak pada gambar 1.2 diketahui dapat menghambat sel-sel tumor

dengan ED50 0,211 -1 dan LD50 2111,22 -1 .



Nia Tussholiha

3

N

N

H3C

H

NN Cl

O

OH

X

1

34

6 2 21

Gambar 1.2 Turunan Pirimidinon 2-[2-(4-klorofenil)-2-hidroksi-1-fenilazo-vinil]-

6-metil-(3H)-pirimidin-4-on

Pada dasarnya sintesis senyawa pirimidinon dapat dilakukan melalui

reaksi Biginalli. Reaksi Biginalli merupakan suatu reaksi kondensasi satu tahap

dengan mengombinasikan tiga bahan yaitu senyawa aldehid, β-keto ester, dan

urea dengan menggunakan katalis asam. Pada penelitian ini senyawa pirimidinon

tidak disintesis menggunakan reaksi Biginalli tetapi disintesis menggunakan dua

tahap reaksi yaitu pembuatan senyawa calkon kemudian pembuatan senyawa

pirimidinon hal tersebut dilakukan agar didapatkan senyawa yang lebih murni.

(Weorly, 2008)

Berdasarkan bioaktivitas senyawa pirimidinon yang potensial sebagai

antikanker maka pada penelitian ini akan disintesis suatu senyawa turunan

pirimidinon serta uji aktivitasnya sebagai senyawa antikanker. Sebagai salah satu

pereaksi yang digunakan untuk mensintesis senyawa pirimidinon ini adalah

senyawa analog bis-calkon (3E,5E)-3,5-bis-(4-metoksi-benzilidin-N-metil-

piperidin-4-on) yang telah disintesis oleh Ajrina (2011) yang diketahui tidak



Nia Tussholiha

4

memiliki aktivitas antikanker karena memiliki IC50 11605,6 μg/mL. IC50

merupakan konsentrasi yang digunakan untuk menghambat 50% sel kanker,

sehingga semakin kecil nilai IC50 maka aktivitas untuk menghambat sel kanker

semakin besar. Senyawa analog bis-calkon yang berhasil disintesis oleh Ajrina

(2011) ini akan direaksikan dengan suatu turunan urea, yaitu 1-(4-klorofenil)-3-

(3,4-diklorofenil)-urea

Cl

Cl NH HN Cl

O

Gambar 1.3 Struktur 1-(4-klorofenil)-3-(3,4-diklorofenil)-urea, suatu turunan urea

Berdasarkan latar belakang yang telah dijelaskan, maka pada penelitian ini

akan disintesis suatu molekul target yang memiliki struktur sebagai berikut :

(1)

Gambar 1.4 Struktur molekul target 3-(4-klorofenil)-1-(3,4-diklorofenil)-8-(4-metoksibenzilidin)-4-(4-metoksifenil)-6-metil-3,4,5,6,7,8-heksahidro-1H-pirido-[4,3-d]pirimidin-2-on

Sebelum melakukan sintesis dibutuhkan suatu analisis retrosintesis. Tahap

pertama dalam analisis retrosintesis adalah diskoneksi senyawa yang akan

NH3CO OCH3

CH3

NN

O

Cl Cl

Cl

1 3

4

6

57

8

2

1 2

34



Nia Tussholiha

5

menghasilkan suatu sinton. Analisis retrosintesis molekul target pada penelitian

ini adalah sebagai berikut :

Cl

Cl NH

HN

O

NCH3

H3CO OCH3

O

Cl +

N

CH3

O

O

CH3

H

O

N-metil-piperidin-4-on p-anisaldehid

+

Gambar 1.5 Gambar analisis retrosintesis molekul target

Berdasarkan analisis retrosintesis di atas, dapat diketahui dua molekul

yang digunakan sebagai bahan dasar pembuatan senyawa analog bis-calkon yaitu

N-metil-piperidin-4-on dan p-anisaldehid. Sintesis tersebut dilakukan

menggunakan reaksi kondensasi aldol silang, kemudian dilanjutkan dengan reaksi

NH3CO OCH3

CH3

NN

O

Cl Cl

Cl



Nia Tussholiha

6

siklo kondensasi sehingga terbentuk molekul target. Uji aktivitas antikanker

dilakukan dengan menggunakan enzim DHFR yang dihasilkan dari hati mencit.

Enzim tersebut dapat mengubah asam dihidrofolat menjadi asam tetrahidrofolat,

tetapi pada penelitian ini diharapkan setelah penambahan senyawa target dapat

menghambat kerja enzim Dihydro Folic Acid Reductase (DHFR), Aktivitas

antikanker yang menghambat enzim Dihydro Folic Acid Reductase (DHFR) dapat

dilihat dari penurunan serapan NADPH.

1.2 Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang yang sudah dikemukakan, maka dapat dirumuskan

beberapa permasalahan sebagai berikut:

1. Apakah senyawa target (1) dapat disintesis dari analog bis-Calkon (3E,5E)-

3,5-bis-(4-metoksibenzilidin-N-metilpiperidin-4-on) dan 1-(4-klorofenil)-3-

(3,4-diklorofenil)-urea?

2. Apakah senyawa target (1) memiliki bioaktivitas sebagai antikanker ?

1.3 Tujuan Penelitian

Adapun tujuan dari penelitian ini adalah:

1. Mensintesis senyawa target dari analog bis-Calkon (3E,5E)-3,5-bis-(4-

metoksibenzilidin-N-metilpiperidin-4-on) dan 1-(4-klorofenil)-3-(3,4-

diklorofenil)-urea.

2. Menguji bioaktivitas sebagai antikanker dari senyawa



Nia Tussholiha

7

1.4 Manfaat Penelitian

Penelitian ini diharapkan dapat memberi wawasan keilmuwan mengenai

suatu senyawa turunan pirimidinon yang memiliki kemampuan sebagai antikanker

sehingga dapat memberi manfaat dalam dunia kesehatan



Nia Tussholiha

8

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Calkon

Flavonoid merupakan senyawa yang banyak terdapat pada tumbuhan di

alam. Beberapa contoh senyawa flavonoid adalah flavanol, flavonol, antosianin,

calkon, dihidrocalkon, dan auron (Andersen, 2006). Calkon merupakan flavonoid

rantai terbuka di mana terdapat dua cincin aromatik yang bergabung dengan tiga

karbon α,β-tak jenuh senyawa karbonil sehingga terbentuk turunan flavonoid

yaitu, 1,3-difenil-2-propen-1-on (Avila et al., 2008)

O

Gambar 2.1 Struktur Calkon

Calkon memiliki struktur gugus karbonil α,β-tak jenuh sehingga

mengakibatkan calkon memiliki aktifitas antikanker, antibakteri, antiinflamasi

(Chen et al., 2010). Sampai saat ini senyawa calkon masih dimodifikasi

sedemikian rupa agar dapat meningkatkan aktivitas farmakologi serta dapat

mengurangi efek yang tidak diinginkan pada tubuh (Rullah, 2010). Calkon dapat

disintesis dengan menggunakan reaksi kondensasi Claisen –Schmidt dengan

mereaksikan senyawa aldehid atau keton dengan katalis basa (Dawane et al.,

2010).



Nia Tussholiha

9

2.2 Reaksi Kondensasi Aldol

Reaksi kondensasi merupakan reaksi dimana dua molekul bergabung

bersama disertai dengan hilangnya sebuah molekul kecil yaitu air. Reaksi aldol

adalah salah satu reaksi pembentukan ikatan karbon-karbon. Reaksi kondensasi

aldol merupakan reaksi yang menggunakan katalis basa atau asam dari gugus

keton atau aldehid yang mengalami dehidrasi sehingga akan membentuk sebuah

β-hidroksi keton atau β-hidroksi aldehid (Morisson, 1992).

Senyawa aldol yang terbentuk dari kondensasi ini mudah mengalami

dehidrasi karena akan terbentuk sistem terkonjugasi ikatan rangkap dengan gugus

karbonil membentuk keton α,β-takjenuh yang stabil (Elsevier, 2002)

OLiPh H

CH3

O

+

O

PhCH3

HOH

Ph PhCH3

Ph

O

+ H2Okondensasi Aldol

melepaskan H2Oenolat keton(nukleofil)

aldehida( elektrofil)

PhH

Gambar 2.2 Reaksi kondensasi aldol

2.2.1 Kondensasi Aldol Silang

Reaksi kondensasi aldol merupakan reaksi pada suatu senyawa yang

memiliki hidrogen α untuk membentuk enolat, tetapi apabila terdapat dua

senyawa yang sama-sama memiliki hidrogen-α, maka akan terbentuk produk

campuran, untuk itu dapat digunakan reaksi kondensasi aldol silang dengan

menggunakan sebuah senyawa karbonil yang tidak memiliki hidrogen-α

(Fessenden, 1982). Reaksi Kondensasi Aldol Silang merupakan suatu reaksi

kondensasi aldol yang terjadi dengan cara mereaksikan senyawa antara keton



Nia Tussholiha

10

dengan aldehid, antara dua aldehid, atau senyawa karbonil yang berbeda

(Morrison, 1992).

2.3 Pirimidinon

Pirimidinon merupakan suatu senyawa yang banyak terdapat di alam.

Pirimidinon dan turunannya memiliki aktivitas biologis sehingga banyak di

terapkan dalam bidang farmasi dan biokimia. Turunan pirimidinon diketahui

berpotensi sebagai agen antitumor. Suatu contoh senyawa turunan pirimidinon

yaitu 2-[2-(4-klorofenil)-2-hidroksi-1-fenilazo-vinil]-6-metil-(3H)-pirimidin-4-on

yang berpotensi dalam menghambat sel-sel tumor dengan data ED50 0,211 -1

dan LD50 2111,22 -1 (Edrees et al., 2007). ED50 adalah dosis yang

diperlukan agar menghasilkan efek terapi pada 50% populasi sedangkan LD50

adalah dosis yang menyebabkan 50% kematian (Lee, 2006). Hal tersebut

menunjukkan bahwa turunan pirimidinon sangat signifikan dalam menghambat

sel-sel antitumor (Edrees et al., 2010).

2.4 Reaksi Penutupan Cincin Pada Reaksi Siklo kondensasi

Reaksi penutupan cincin banyak digunakan dalam sintesis senyawa

organik. Pada reaksi ini memungkinkan terbentuknya suatu molekul kompleks

dengan stereoselektivitas tinggi (Lee,1999). Penutupan cincin heterosiklik pada

umumnya dapat dibagi menjadi dua, yaitu penutupan cincin dengan pembentukan

ikatan C-C dan penutupan cincin dengan tidak membentuk ikatan C-C. Pada

reaksi dengan pembentukan C-C, melibatkan reaksi elektrofilik dan nukleofilik



Nia Tussholiha

11

karbon pusat serta antara karbon pusat radikal dan ikatan ganda (Katrizky et al.,

1987). Suatu contoh pembentukan cincin yang tersusun melalui reaksi

siklokondensasi adalah sebagai berikut:

Gambar 2.3 Reaksi pembentukan cincin

Penutupan cincin tersebut terjadi melalui serangan nukleofilik pada gugus aril

yang mengakibatkan kehilangan beberapa ikatan tak jenuh dan pelepasan air

(Lee,1999).

2.5 Kromatografi

Kromatografi merupakan suatu teknik pemisahan molekul berdasarkan

perbedaan pola pergerakan antara fase gerak dan fase diam untuk memisahkan

komponen (berupa molekul). Suatu molekul yang terlarut dalam fase gerak, akan

melewati pelat yang merupakan fase diam. Berdasarkan fase gerak yang

digunakan, kromatografi dibedakan menjadi dua golongan yaitu gas

chromatography (GC) dan liquid chromatography (LC) (Heftmann, 2004).

Kromatografi gas berguna untuk senyawa organik yang mudah menguap. Metode

ini menggunakan fase gerak yang berupa gas seperti helium. Kromatografi cair

menggunakan fase gerak berupa zat cair seperti pelarut organik (Shriner, 2004).



Nia Tussholiha

12

Untuk memisahkan campuran zat-zat kimia dapat dilakukan dengan menggunakan

kromatografi antara lain kromatografi kertas, kromatografi lapis tipis (KLT),

kromatografi kolom, dan kromatografi gas (Harborne, 1987).

2.5.1 Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi lapis tipis (KLT) merupakan metode pemisahan dalam

kromatografi yang banyak digunakan karena relatif murah dan memiliki

kecepatan pemisahan yang tinggi (Heftmann, 2004). Pada kromatografi lapis tipis

ini digunakan lapisan tipis (silika gel), yang dibantu dengan pipa kapiler untuk

menotolkan senyawa yang akan diidentifikasi. Pada pemisahan kromatografi lapis

tipis, senyawa yang akan dipisahkan ditotolkan pada silika gel (fasa diam)

kemudian dialiri dengan fasa gerak yang berupa cairan biasa disebut dengan

eluen. Pemisahan tersebut akan terbentuk berdasarkan beda kelarutan sehingga

akan membentuk noda-noda (kromatogram). Kemudian dianalisis dengan

menggunakan sinar UV agar noda yang terbentuk dapat dilihat.

Pada kromatografi lapis tipis digunakan faktor retardasi (Rf) untuk

menentukan sifat zat yang dianalisis (Wall, 2005) yaitu dengan perhitungan

sebagai berikut:

Jarak yang ditempuh zat pada platRf = ------------------------------------------

Jarak yang ditempuh eluen pada plat

2.5.2 KLTP ( Kromatografi Lapis Tipis Preparatif)

Kromatografi lapis tipis preparatif (KLTP) biasanya digunakan untuk

memisahkan bahan dalam jumlah 10-1000 mg, tetapi juga dapat digunakan dalam

jumlah gram. Pada kromatografi lapis tipis preparatif menggunakan pelat ( silika



Nia Tussholiha

13

gel ) lebih besar daripada yang digunakan dalam analisis KLT yaitu berukuran 20

× 40cm atau 20 × 20 cm. (Sherma, 2006).

Pada kromatografi lapis tipis preparatif, senyawa yang akan dipisahkan

dilarutkan dalam pelarut yang sesuai kemudian ditotolkan pada salah satu garis

sisi pelat secara tegak lurus dengan bantuan pipa kapiler. Kemudian pelat dielusi

dengan eluen yang sesuai selanjutnya silika dikerok dari pelat. Tujuan dari

penggunaan Kromatografi Lapis Tipis Preparatif adalah untuk mendapatkan

senyawa murni. (Sherma, 2006).

2.6 Spektroskopi

Spektroskopi merupakan ilmu yang mempelajari tentang analisis senyawa

kimia berdasarkan interaksi antara materi dengan sinar (Pavia et al., 2001).

2.6.1 Spektroskopi ultraviolet-visible (UV-Vis)

Spektroskopi ultraviolet-visible (UV-Vis) merupakan metode analisis yang

melibatkan interaksi radiasi elektromagnetik di daerah ultraviolet dan visibel

dengan panjang gelombang antara 180nm - 800 nm. Spektroskopi ultraviolet-

visible (UV-Vis) digunakan untuk menentukan struktur senyawa organik yang

mengandung gugus pengabsorbsi (kromofor). Prinsip kerja teknik ini adalah

memanfaatkan peristiwa penyerapan energi radiasi elektromagnetik berupa sinar

UV atau sinar tampak oleh sebuah molekul, dimana elektron yang berada pada

keadaan dasar dalam sebuah molekul tersebut dapat tereksitasi ke tingkat energi

yang lebih tinggi, baik elektron terikat (pada orbital molekul ikatan atau bonding),

maupun elektron tidak terikat (pada orbital non-bonding).



Nia Tussholiha

14

2.6.2 Spektroskopi inframerah (IR)

Spektroskopi inframerah (IR) merupakan metode analisis elektromagnetik

yang berada pada daerah visibel dan microwave. Untuk analisis senyawa organik

dengan menggunakan Spektroskopi inframerah (IR) pada umumnya berada di

daerah antara 4000-400 cm-1. Spektroskopi inframerah (IR) memberikan informasi

tentang gugus fungsional yang terdapat pada suatu molekul (Silverstein, 2005).

2.6.3 Spektroskopi resonansi magnetik inti (RMI)

Resonansi magnetik nuklir (NMR) adalah teknik untuk menentukan

struktur molekul organik dan biomolekul dalam larutan. NMR merupakan teknik

spektroskopi yang bergantung pada sifat magnetik dari inti atom suatu molekul

(Jacobsen, 2007). Ketika suatu molekul berada pada medan magnet yang kuat

maka akan terjadi penyerapan gelombang elektromagnetik oleh inti-inti atom

tertentu pada molekul organik (Akit, 1992). Penyerapan tersebut menyebabkan

munculnya suatu medan magnet, sehingga akan menghasilkan spektrum

(Fessenden, 1982).

2.6.3.1 Spektroskopi proton resonansi magnetik inti (1H-RMI)

Spektroskopi proton resonansi magnetik inti (1H-RMI) akan memberikan

data tentang proton pada senyawa yang dianalisis, sehingga akan terbentuk sinyal

yang berbeda yang menunjukkan berapa banyak jenis proton yang muncul. Oleh

karena itu pelarut untuk pengukuran RMI ini harus inert dan tanpa proton

(Shriner, 2004). Pergeseran kimia atom hidrogen berbeda-beda tergantung pada

lingkungan kimia. Misalnya proton aromatis dan hetero aromatis muncul pada



Nia Tussholiha

15

pergeseran kimia δ 6-9 ppm, H alkena muncul pada pergeseran kimia δ 6-7,5 ppm

(Silverstein, 2005).

2.6.3.2 Spektroskopi karbon resonansi magnetik inti (13C-RMI)

Spektroskopi karbon resonansi magnetik inti (13C-RMI) akan memberikan

data tentang karbon pada senyawa yang dianalisis (Jacobsen, 2007). Dari

spektroskopi karbon resonansi magnetik inti (13C-RMI) dapat diketahui jumlah

sinyal karbon yang muncul seperti CH3, CH2, CH, atau C dan pergeseran kimia

dari masing-masing sinyal sehingga akan menunjukkan lingkungan elektronik

masing-masing atom carbon. Tingginya sinyal tidak selalu berkorelasi dengan

jumlah karbon. Biasanya atom karbon dengan dua atau tiga hidrogen memberikan

sinyal yang kuat, sementara karbon tanpa hidrogen memberikan sinyal yang

lemah (Shriner, 2004).

2.6.4 Spektroskopi massa (MS)

Spektroskopi massa (MS) merupakan metode ionisasi dimana ion

dipisahkan berdasarkan rasio massa/muatan, sehingga dari jumlah massa/muatan

tersebut akan terbentuk spektrum. Spektroskopi massa (MS) dapat

dikombinasikan dengan instrument kromatografi, seperti kromatografi gas (GC-

MS) dan kromatografi cair (LC-MS) (Silverstein, 2005). Senyawa yang akan

dianalisis dalam spektrometer massa harus berada dalam keadaan gas, sehingga

senyawa padatan dan cairan diuapkan terlebih dahulu dengan panas. Uap yang

terbentuk akan disinari dengan sinar elektron multiplier yang memiliki sensitivitas

deteksi hingga tingkat nanogram dalam spektrometer massa. Selanjutnya detektor



Nia Tussholiha

16

memberikan informasi yang kemudian akan didapatkan spektrum massa yang

berupa pola-pola fragmen (Shriner, 2004)

2.7 Kanker

Kanker adalah salah satu masalah kesehatan yang paling serius. Kanker

merupakan penyakit yang terjadi akibat hilangnya kontrol pertumbuhan sel secara

tidak normal. Dalam keadaan normal sel dalam tubuh akan membelah diri dan

bertambah banyak hanya untuk menggantikan sel yang sudah mati atau rusak,

akan tetapi sel kanker akan membelah terus-menerus walaupun tubuh tidak

memerlukannya. Akibatnya akan terjadi timbunan sel-sel baru yang disebut tumor

ganas atau kanker (Schreiber., 2008). Penyebab dari penyakit kanker adalah

karsinogen, yaitu suatu zat yang mengakibatkan tumbuhnya kanker (Siswandoyo,

1995). Kanker memiliki kemampuan menyerang dan menyebar pada jaringan lain

yang kemudian pada akhirnya akan menimbulkan kematian (Edrees et al., 2010).

2.8 Antikanker

Senyawa antikanker merupakan suatu senyawa yang digunakan untuk

menghambat pertumbuhan sel kanker. Diperkirakan bahwa hampir setengah dari

kasus kanker dapat dicegah dengan melakukan gaya hidup sehat (diet dan

olahraga) hal tersebut sangat efektif untuk menurunkan angka kematian pada

penyakit kanker (Chen, 2010). Sejauh ini penelitian antikanker difokuskan pada

sel-sel kanker dan pengembangan obat sitotoksik yang efisien dan selektif. Hal



Nia Tussholiha

17

ini disebabkan kanker adalah jaringan sel yang tidak normal yang mudah

menyebar sehingga akan merusak sistem kekebalan tubuh (Missailidis, 2008).

Di bidang farmasi metode secara in vitro digunakan untuk

mengidentifikasi toksisitas dalam pengembangan obat. In vitro merupakan

penelitian dalam biologi yang dilakukan menggunakan komponen dari suatu

organisme yang telah diisolasi dalam rangka untuk memungkinkan analisis yang

lebih rinci atau lebih nyaman daripada yang dapat dilakukan dengan organisme

utuh. Kelebihan metode in vitro adalah relatif sederhana dan prosesnya cepat

(Castell, 1997).

2.9 Mekanisme Antikanker

a. Senyawa pengalkilasi

Senyawa pengalkilasi merupakan senyawa reaktif yang dapat mengalkilasi DNA,

RNA dan enzim-enzim tertentu. Senyawa pengalkilasi dapat membentuk senyawa

kationik yang tidak stabil kemudian terjadi pemecahan cincin sehingga

membentuk ion karbonium reaktif selanjutnya akan terbentuk ikatan kovalen

dengan DNA, RNA atau enzim yang dapat menghambat mitosis sehingga

menghambat pertumbuhan sel kanker (Katzung, 2002).

b. Antimetabolit

Antimetabolit adalah senyawa yang dapat menghambat jalur metabolik yang

penting untuk kehidupan dan reproduksi sel kanker, cara kerjanya adalah dengan

menghambat sintesis DNA dan RNA melalui penghambatan asam folat, purin,

pirimidin, dan asam amino. Jika sintesis DNA terhambat, maka sel tidak



Nia Tussholiha

18

berproliferasi dan mengalami kematian. Suatu contoh antimetabolit antifolat

adalah metotreksat (Pratt et al, 1994)

c. Antibiotik

Golongan antibiotik umumnya obat yang dihasilkan oleh suatu

mikroorganisme yang bersifat non spesifik, terutama berguna untuk tumor yang

tumbuh lambat. Mekanisme kerjanya yaitu dengan menghambat sintesis DNA dan

RNA. Contohnya pada mekanisme mitomisin yaitu dengan mengalkilasi DNA

sehingga menyebabkan kerusakan dan penghambatan sintesis DNA (Katzung,

2002).

2.10 Enzim DHFR

DHFR (Dihydrofolate reduktase) adalah enzim yang mengkatalisis reaksi

penting untuk biosintesis basa DNA. DHFR (Dihydrofolate reduktase) merupakan

enzim yang mereduksi asam dihidrofolat menjadi asam tetrahidrofolat. (Chwatt et

al., 1986). Dimana asam tetrahidrofolat merupakan koenzim untuk mensintesis

basa-basa DNA. DHFR bekerja dengan menyebabkan hambatan sintesis asam

tetrahidrofolat sehingga menghambat pertumbuhan sel. Adapun mekanisme reaksi

dari enzim DHFR yang tertera pada gambar 2.4 berikut :



Nia Tussholiha

19

Gambar 2.4 Mekanisme reaksi enzim DHFR

Sumber: (http://en.wikipedia.org/wiki/)

DHFR



Nia Tussholiha

20

BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Kimia Organik Departemen

Kimia Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Airlangga Surabaya. Penelitian

dilaksanakan mulai bulan Januari sampai bulan Juli 2012.

Analisis menggunakan Spektroskopi UV-Vis dilakukan di Laboratorium

Penelitian Departemen Kimia Fakultas Sains dan Teknologi Universitas

Airlangga. Analisis menggunakan Spektroskopi Resonansi Magnet Inti (NMR)

dilakukan di Phytochemistry Laboratory Faculty of Science and Food Universitas

Teknoligi Malaysia, analisis Spektroskopi Massa (MS) dilakukan di Laboratorium

Penelitian Universitas Teknologi Bandung, analisis Spektroskopi Inframerah (IR)

dilakukan di Laboratorium Penelitian Universitas Negeri Surabaya (UNESA), dan

uji antikanker secara in vitro dilakukan di Laboratorium Kimia Organik dan

Biokimia Departemen Kimia Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Airlangga.

3.2 Alat dan Bahan Penelitian

3.2.1 Alat penelitian

Alat yang digunakan pada penelitian ini meliputi seperangkat peralatan

gelas yang biasa digunakan dalam laboratorium kimia organik. Alat-alat yang

digunakan untuk melakukan analisis adalah seperangkat alat kromatografi lapis

tipis, Fisher John Melting Point Apparatus, spektrometer Ultraviolet-Visibel



Nia Tussholiha

21

(UV-Vis), spektrometer resonansi magnet inti (NMR), Spektrometer massa (MS),

spektrometer inframerah (IR).

3.2.2 Bahan penelitian

Bahan-bahan organik yang digunakan pada penelitian ini adalah N-metil

piperidin-4-on, p-anisaldehid, natrium hidroksida, 1-(4-klorofenil)-3-(3,4-

diklorofenil)-urea, HCl, etil asetat, etanol, kloroform, diklorometana, metanol, dan

n-heksana. Untuk pelarut digunakan kualitas teknis yang kemudian didestilasi.

3.3 Tahapan Penelitian

3.3.1 Sintesis senyawa turunan calkon

Dalam mensintesis suatu senyawa calkon diperlukan p-anisaldehid 1,088

gr (8 mmol), N-metil piperidin-4-on 0,333 gr (3 mmol), NaOH 40% 3 mL, dan

etanol 10 mL. Hal pertama yang dilakukan adalah mencampurkan p-anisaldehid

dengan etanol 10 mL, diaduk sampai larut, kemudian memasukkan larutan

tersebut ke dalam labu alas bulat bersamaan dengan N-metil piperidin-4-on.

Campuran tersebut didinginkan dengan penangas es sambil dijaga suhunya di

bawah 10°C. Selanjutnya ditambahkan larutan NaOH 40% tetes demi tetes sambil

menjaga suhu agar tetap di bawah 10°C. Kemudian campuran direfluks selama 1

jam dengan penangas es dan dilanjutkan selama 4 jam tanpa menggunakan

penangas es. Lalu campuran larutan tersebut dituang ke dalam air es, sehingga

akan terbentuk padatan yang kemudian disaring menggunakan corong Buchner.

Hasil yang didapatkan direkristalisasi dengan etanol-air (Suwito, 2010).



Nia Tussholiha

22

3.3.2 Sintesis senyawa target

Untuk mensintesis turunan pirimidinon dibutuhkan senyawa 0.349 gram

(0,001 mmol) analog bis-Calkon (3E,5E)-3,5-bis-(4-metoksibenzilidin-N-

metilpiperidin-4-on) dan 0, 4732 gram (0,0015 mmol) 1-(4-klorofenil)-3-(3,4-

diklorofenil)-urea, dan 20 ml etanol dan 5 ml HCl pekat. Kemudian campuran

tersebut direfluks selama 12 jam. Campuran yang dihasilkan dipekatkan hingga

mendapatkan setengah dari volume awal. Selanjutnya dilakukan kromatografi

lapis tipis preparatif untuk memurnikan senyawa. Setelah dilakukan kromatografi

lapis tipis preparatif pelat silika gel yang sudah elusi dikerok dan dilarutkan dalam

etanol, lalu didiamkan agar silika dapat mengendap. Selanjutnya larutan disaring

dan kemudian dipekatkan. Hasil yang didapatkan ditimbang. Kemudian diuji

kemurniannya dan diuji aktivitasnya sebagai senyawa antikanker. (Fathalla et al.,

2005).

3.3.3 Uji sifat fisika senyawa hasil sintesis

3.3.3.1 Uji penentuan titik leleh

Penentuan titik leleh dilakukan dengan menggunakan alat Fischer John

Melting Point Apparatus. Titik leleh senyawa hasil sintesis ditentukan dengan

mengamati saat senyawa mulai meleleh sampai tepat meleleh semua. Suatu

senyawa dikatakan murni apabila jarak titik lelehnya antara 1-20 C (Ritmaleni,

2006).

3.3.3.2 Uji kemurnian senyawa dengan kromatografi lapis tipis

Penentuan kemurnian senyawa hasil sintesis ditentukan dengan

kromatografi lapis tipis menggunakan berbagai macam perbandingan eluen.



Nia Tussholiha

23

Senyawa hasil sintesis ditotolkan pada satu titik di atas fasa diam (silika gel)

dengan menggunakan pipa kapiler. Setelah proses elusi mencapai batas atas fasa

diam, pelat KLT didiamkan dahulu sampai kering. Setelah kering, dilihat noda

yang terbentuk dengan menggunakan sinar UV karena senyawa yang dipisahkan

bukan senyawa yang berwarna. Kemudian dari setiap noda yang tampak

ditentukan nilai faktor retardasinya (Rf)

Jarak tempuh zat pada platRf = ------------------------------------------

Jarak tempuh eluen pada plat

Suatu senyawa dikatakan murni apabila telah dilakukan uji KLT dengan

menggunakan 3 macam eluen yaitu n-heksan, etil asetat, dan kloroform dengan

perbandingan yang berbeda dan menunjukkan satu noda (Wall, 2005).

3.3.4 Uji spektroskopi

3.3.4.1 Uji spektroskopi UV-Vis

Senyawa hasil sintesis dilarutkan dalam metanol kemudian diukur panjang

gelombang maksimal (λmaks) pada rentang λ= 200-800 nm (Ritmaleni, 2006).

3.3.4.2 Uji spektroskopi NMR

Senyawa hasil sintesis dilarutkan ke dalam pelarut kloroform (CDCl3)

dalam tabung NMR, kemudian dianalisis dengan spektrometer NMR. Selanjutnya

spektrum yang dihasilkan diinterpretasikan. (Ritmaleni, 2006). Untuk spektrum

1H diukur pada 0-14 ppm sedangkan spektrum 13C diukur pada 0-200 ppm

(Edrees et al., 2010).



Nia Tussholiha

24

3.3.4.3 Uji spektroskopi MS

Senyawa hasil sintesis dianalisis struktur molekulnya dengan

spektrometer massa. Senyawa hasil sintesis diionisasi sehingga dapat membentuk

sebuah radikal kation [M+H]+. Spektrum massa yang dihasilkan yaitu kelimpahan

versus massa/muatan (m/e). Puncak ion molekul yang muncul diidentifikasi

sebagai berat molekul senyawa hasil sintesis (Edrees et al., 2010).

3.3.4.4 Uji spektroskopi IR

Senyawa hasil sintesis digerus dengan KBr kering hingga homogen dan

harus dalam keadaan bebas dari air. Pelet KBr yang terbentuk diperiksa dengan

menggunakan spektrofotometer IR (Ritmaleni, 2006). Untuk analisis senyawa

organik pada umumnya dilakukan pada daerah antara 4000-400 cm-1. (Silverstein,

2005).

3.3.5 Uji antikanker

3.3.5.1 Ektraksi enzim DHFR

Untuk mengekstraksi enzim DHFR diperlukan sebanyak 3,4 gram hati

mencit lalu dicuci bersih dan dibekukan. Selanjutnya dibekukan dan ditambahkan

air 3,4 ml (1 : 1) kemudian dihaluskan pada penangas es. Campuran bahan

tersebut disentrifugasi dengan kecepatan 10.000 rpm selama 20 menit kemudian

supernatannya dipisahkan dan diasamkan pada pH 5 dengan menambahkan asam

asetat 1N. Supernatan tersebut dilisis selama semalam kemudian disentrifuse

dengan kecepatan 10.000 rpm selama 10 menit. Kemudian supernatannya

dipisahkan sehingga dihasilkan ekstrak enzim DHFR sebanyak 5 ml.



Nia Tussholiha

25

3.3.5.2 Uji aktivitas ekstrak enzim DHFR

Untuk menguji aktifitasnya diperlukan sebanyak 150 μL ekstrak enzim

DHFR, 9 μL 2-merkaptoetanol, 7,5 μL asam dihidrofolat dan 9 μL NADPH

ditambahkan buffer fosfat (pH 7,0) sampai total volume 1500 μL. Campuran

tersebut diinkubasi pada suhu 37°C selama 5 menit kemudian diukur

absorbansinya pada λ 340 nm. Sebagai kontrol dilakukan pengukuran yang sama

tetapi tanpa penambahan ekstrak enzim dan tanpa penambahan substrat.

3.3.5.2 Inhibisi ekstrak enzim DHFR

Untuk melakukan inhibisi ekstrak enzim DHFR diperlukan sebanyak 9 μL

2-merkaptoetanol, 150 μL ekstrak enzim dan senyawa hasil sintesis dengan variasi

konsentrasi 20 ppm, 40 ppm, 60 ppm, 80 ppm dan 100 ppm ditambahkan buffer

fosfat (pH 7,0) yang disesuaikan dengan konsentrasi senyawa hasil sintesis.

Campuran tersebut diinkubasi selama 5 menit pada suhu kamar. Kemudian

ditambahkan 7,5 μL asam dihidrofolat, 9 μL NADPH,. Selanjutnya campuran

tersebut diinkubasi pada suhu 37°C selama 5 menit dan kemudian diukur

absorbansinya pada λ 340 nm. (Santoso, 2011)



Nia Tussholiha

26

3.4 Skema Kerja

p-anisaldehid+

N-metil-piperidin-4-on

Senyawa turunancalkon

Uji Sifat Fisik

- dilarutkan dalam etanol, ditambahkanN-metil piperidin-4-on dan NaOH40% (Reaksi Kondensasi Claisen-Schmidt)

Uji Antikanker Uji SpektroskopiUji Sifat Fisik

Ditambahkan 1-(4-klorofenil)-

3-(3,4-diklorofenil)-urea.

Kemudian menambahkan HCl

pekat dan etanol lalu direfluks

12 jam. Endapan disaring dan

Dipekatkan hingga 0,5 dari

volume awal, dilakukan PLC

Uji Spektroskopi

3-(4-klorofenil)-1-(3,4-diklorofenil)-8-(4-

metoksibenzilidin)-4-(4-metoksifenil)-6-metil-3,4,5,6,7,8-

heksahidro-1H-pirido-[4,3-d]pirimidin-2-on



Nia Tussholiha

27

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Sintesis Senyawa Turunan Calkon

Sintesis senyawa calkon dilakukan dengan mereaksikan N-metil piperidin-

4-on dan p-anisaldehid. Suhu campuran tersebut dijaga di bawah 10ºC saat

penambahan larutan NaOH 40%. Penambahan larutan NaOH 40% dilakukan

untuk pembentukan ion enolat. Setelah campuran tersebut direfluks selama 1 jam

dalam penangas es, terlihat adanya endapan kuning pucat. Campuran hasil sintesis

dituang ke dalam es batu dan endapan kuning yang terbentuk menjadi semakin

banyak. Endapan kuning pucat yang terbentuk kemudian disaring dan dilakukan

pemurnian dengan cara merekristalisasi menggunakan etanol-air sehingga

dihasilkan kristal jarum bewarna kuning. Kristal ditimbang dan didapatkan produk

sebanyak 0,7279 gram dengan rendemen sebesar 69,52%.

Senyawa hasil sintesis diuji titik lelehnya dengan menggunakan Fisher

John Melting Point Apparatus dengan mengamati saat senyawa mulai meleleh

sampai meleleh secara keseluruhan yaitu antara 196-198ºC. Kemudian senyawa

diuji kemurniannya menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT) dengan tiga

eluen yang berbeda dan menghasilkan satu noda selanjutnya dihitung nilai Rf nya

dengan perhitungan :

Jarak yang ditempuh zat pada platRf = ------------------------------------------

Jarak yang ditempuh eluen pada plat

Sehingga didapatkan data pada tabel 4.1 berikut:



Nia Tussholiha

28

Tabel 4.1 Nilai Rf Senyawa Turunan Calkon

(1) (2) (3)

Gambar 4.1 Gambar hasil KLT senyawa turunan calkon

Selanjutnya senyawa tersebut diidentifikasi dengan spektroskopi 1H-NMR

dan 13C-NMR.

4.1.1 Uji spektroskopi 1H-resonansi magnetik inti

Untuk uji spektroskopi 1H-RMI, sebuah senyawa dianalisis strukturnya

berdasarkan jumlah atom H yang dimiliki senyawa tersebut. Dari spektrum 1H-

RMI pada lampiran 1, nampak sinyal pada δ 2,49 ppm, singlet dengan integrasi

3H menunjukkan adanya gugus -NCH3. Sinyal kedua terlihat pada δ 3,77 ppm,

singlet dengan integrasi 4H menunjukkan adanya -NCH2- yang muncul dengan

integrasi dua kali lipat karena memiliki lingkungan kimia yang sama. Selanjutnya

no Eluen Nilai Rf

1. n-heksan : etil asetat (7 : 3) 0.46

2. Klorofom : etil asetat (7 : 3) 0.76

3. DCM : metanol (4 : 6) 0.80



Nia Tussholiha

29

sinyal yang paling tinggi yaitu pada δ 3,86 ppm, singlet dengan integrasi 6H

menunjukkan adanya hidrogen pada gugus -OCH3 .

Pada pergeseran kimia δ 7-8 ppm terdapat sinyal proton yang khas untuk

benzena (Fessenden, 1982). Pada spektrum terdapat adanya dua sinyal: Ha terlihat

pada δ 6,96 ppm, dublet dengan integrasi 4H, konstanta kopling ( J ) = 8.8 Hz dan

Hb terlihat pada δ 7,38 ppm, dublet dengan integrasi 4H, konstanta kopling ( J ) =

8.8 Hz. Dari nilai konstanta kopling dapat diketahui bahwa ke delapan H tersebut

saling berposisi orto.

Sinyal yang paling deshielding atau terletak paling kiri terlihat pada δ 7,78

ppm, muncul sebagai singlet dengan jumlah integrasi sebanyak 2. Sinyal ini

menunjukkan adanya – CH =. Dari beberapa data yang telah disebutkan di atas,

maka struktur senyawa calkon dapat disimpulkan sebagai berikut:

N

O

OH3C

OCH3

CH3

(7,78, s, 1H)

(2,49, s, 3H)

(3,86, s, 3H)

(6,96, d, 2H, J=8.8)

(7,38, d, 2H, J=8.8)

(3,77, s, 2H)

H

Ha

Ha

H

H2

Hb

Hb

H2

(7,78, s, 1H)

Hb

HbHa

Ha

(7,38, d, 2H, J=8.8)

(6,96, d, 2H, J=8.8)

(3,86, s, 3H)

(3,77, s, 2H)

Gambar 4.2 Analisis 1H-RMI senyawa turunan calkon

4.1.2 Uji spektroskopi 13C- resonansi magnetik inti

Uji spektroskopi 13C-RMI bisa digunakan untuk memberi informasi jumlah

karbon dalam sebuah senyawa. Dari spektrum yang terdapat pada lampiran 1

terlihat adanya 10 sinyal. Sinyal yang letaknya paling shielding yaitu pada δ =



Nia Tussholiha

30

46,0 ppm merupakan sinyal dari gugus -NCH3, kemudian gugus –OCH3 muncul

sebagai sinyal pada pergeseran kimia 55,0 ppm. Sinyal ketiga pada pergeseran

kimia 57,0 ppm menunjukkan adanya gugus N-CH2- .

Sinyal yang muncul antara δ 114,0 ppm dan δ 132,2 ppm merupakan sinyal

dari atom karbon pada benzena (Fessenden, 1982). Selanjutnya sinyal pada

pergeseran kimia 136,0 ppm menunjukkan adanya gugus =CH ̶ . Sinyal tersebut

terletak dekat dengan sinyal C=O dimana sinyal C=O muncul pada pergeseran

kimia 187,0 ppm. Dari sinyal-sinyal tersebut dapat diketahui nilai pergeseran

kimia setiap atom karbon pada senyawa hasil sintesis, yaitu sebagai berikut :

N

O

CH3

O O

H3C CH3

46,0 ppm

186,8 ppm

57,0 ppm

131,3 ppm128,0 ppm

131,2 ppm

114,0 ppm

160,3ppm

136,0 ppm

55,0 ppm57,0 ppm

131,3 ppm

136,0 ppm

128,0 ppm

131,2 ppm

114,0 ppm

160,3ppm

55,0 ppm

Gambar 4.3 Analisis 13C-RMI senyawa turunan calkon

Dari analisis spektroskopi 1H-RMI dan 13C-RMI yang telah diketahui

dapat disimpulkan bahwa struktur senyawa calkon sesuai dengan yang diharapkan,

yaitu (3E,5E),3,5-bis-(4-metoksibenzilidin-N-metil piperidin-4-on).

4.2 Sintesis Senyawa Pirimidinon

Untuk mensintesis turunan pirimidinon dibutuhkan senyawa analog bis-

Calkon (3E,5E)-3,5-bis-(4-metoksibenzilidin-N-metilpiperidin-4-on), 1-(4-

klorofenil)-3-(3,4-diklorofenil)-urea, etanol dan HCl pekat. Setelah semuanya



Nia Tussholiha

31

Senyawa turunan urea

Senyawa turunan calkon

Senyawa target yang tidak terelusi

Senyawa turunanurea

Senyawa turunancalkon

tercampur, larutan menjadi berwarna kuning pucat. Pada suhu 70oC larutan

berwarna orange dan endapan mulai larut. Setelah disintesis selama 4 jam, warna

larutan berubah menjadi hitam kekuningan. Gambar 4.4 menunjukkan perubahan

warna yang terjadi selama reaksi berlangsung.

(a). Saat mereaksikan (b). Senyawa mulai bereaksi (c). Senyawa mulai terbentuk

Gambar 4.4 Gambar sintesis senyawa target

Setelah 12 jam reaksi dihentikan dan campuran yang dihasilkan

dipekatkan hingga mendapatkan 0,5 ml dari volume awal. Kemudian dilakukan

KLT yang tertera pada gambar 4.5 berikut :

Gambar 4.5 Gambar KLT hasil reaksi siklo kondensasi

Senyawa yang diisolasi



Nia Tussholiha

32

Senyawa hasilsintesis

Pada hasil KLT di atas menunjukkan bahwa senyawa hasil sintesis yang diperoleh

masih belum murni sehingga perlu dilakukan pemisahan menggunakan

kromatografi lapis tipis preparatif untuk memurnikan senyawa.

(a). Proses elusi KLTP (b). Gambar kromatogram dengan sinar UV

Gambar 4.6 Gambar Kromatografi Lapis Tipis Preparatif

Setelah dilakukan kromatografi lapis tipis preparatif, pelat silika gel hasil

elusi dikerok dan dilarutkan dalam etanol, lalu didiamkan agar silika dapat

mengendap. Selanjutnya larutan disaring dan kemudian dipekatkan. Senyawa

hasil sistesis yang telah dimurnikan dengan KLTP ditimbang dan dihasilkan

senyawa sebesar 0,0243 gram dengan rendemen 3,78%. Uji kemurnian senyawa

hasil sintesis dilakukan menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT) dengan tiga

sistem eluen yang berbeda dan menghasilkan satu noda. Tabel 4.3 menunjukkan

nilai Rf senyawa hasil sintesis yang telah murni.

Tabel 4.2 Nilai Rf Senyawa Hasil Sintesis

Eluen Nilai Rf

1.Klorofom : etil asetat (5 : 5) 0.79

2.heksana : etil asetat (7 : 3) 0.87

3.heksana : etil asetat (6 : 4) 0.74



Nia Tussholiha

33

(1) (2) (3)

Gambar 4.7 Gambar hasil KLT senyawa hasil sintesis

4.2.1 Uji Spektroskopi

4.2.1.1 Uji spektroskopi ultraviolet-visibel (UV-VIS)

Senyawa hasil sintesis dilarutkan dalam metanol kemudian diukur panjang

gelombangnya menggunakan spektrofotometer UV-VIS. Seperti yang dapat

dilihat pada lampiran 2, spektrum menunjukkan adanya satu puncak di panjang

gelombang 244,5 nm. Menurut Scott (1964), suatu senyawa pirimidinon memiliki

daerah absorbansi pada panjang gelombang 229 nm (pita I) dan 240-250 nm (pita

II). Senyawa hasil sintesis yang diharapkan adalah sebuah turunan pirimidinon.

Hasil sintesis UV-Vis menunjukkan adanya perbedaan antara hasil sintesis dengan

referensi.

4.2.1.2 Uji spektroskopi inframerah

Uji spektroskopi FT-IR memberikan informasi mengenai gugus fungsi

yang dimiliki suatu senyawa. Hasil uji spektroskopi IR yang terdapat pada

lampiran 3 menunjukkan adanya pita yang muncul pada bilangan gelombang

1710.9 cm-1. Pita tersebut menunjukkan adanya gugus karbonil C=O. Muncul tiga

pita pada daerah 1400-1600 cm-1, hal tersebut menunjukkan adanya gugus



Nia Tussholiha

34

aromatis. (Fessenden, 1982). Kemudian pita pada 1228.1 cm-1 menunjukkan

adanya gugus C-O-C. Gugus C-O- muncul sebagai pita pada daerah 1275-1200

(Pretsch,et al., 2000)

4.2.1.2 Uji spektroskopi massa

Analisis spektroskopi massa (MS) dilakukan dengan menggunakan High

Resolution Electron Spray Ionization Mass Spectra (HR ESI-MS) yang dapat

memberikan informasi tentang berat molekul dari senyawa hasil sintesis. Hasil

analisis spektrum MS tersebut terdapat pada lampiran 4. Adanya 3 atom N pada

struktur molekul menyebabkan berat molekul bernilai ganjil yakni 645, akan

tetapi berat molekul yang terbaca pada spektrum berupa bilangan 269. Hal ini

menunjukkan bahwa senyawa target yang disintesis tidak terbentuk dan diduga

senyawa yang terbentuk adalah senyawa berikut :

N OCH3

CH3

NHN

O

Gambar 4.8 Senyawa 4-(4-metoksifenil)-6-metil-5,6-dihidro-1H-pirido[4,3-d]pirimidin-2-on

Secara stuktural mekanisme reaksi pada sintesis senyawa target yang

seharusnya terbentuk adalah yang tertera pada gambar 4.9. Mekanisme reaksi

tersebut menunjukkan terjadinya reaksi adisi nukleofilik pada amina sekunder

sehingga terjadi pembentukan enamin yang selanjutnya terjadi reaksi penutupan

cincin pada reaksi siklo kondensasi. Penutupan cincin tersebut terjadi melalui



Nia Tussholiha

35

serangan nukleofilik pada gugus aril sehingga mengakibatkan terjadinya

pelepasan air.

N

O Cl

Cl

NH

O

ClNH

N

OH

N

CH3 CH3

CH3

OHHN

OHNCl

Cl

Cl

NCH3

OH N

OHNCl

Cl

Cl

NCH3

O N

OHNCl

Cl

Cl

NCH3

OH N

OHNCl

Cl

Cl

H

H

NCH3

NH NCl

Cl

Cl O

HO

NCH3

N NCl

Cl

Cl O

H2O

NCH3

N NCl

Cl

Cl O

NCH3

N NCl

Cl

Cl

O

H3CO OCH3H3CO OCH3

H3CO OCH3OCH3H3CO

OCH3

OCH3H3COOCH3H3CO

OCH3H3CO

OCH3H3CO

OCH3H3CO

OCH3

H

H

H

Gambar 4.9 Mekanisme Reaksi Senyawa Target

Dari hasil analisis MS yang menunjukkan bahwa senyawa hanya memiliki

BM = 269, maka diduga terjadi pemutusan rantai dari senyawa target sehingga



Nia Tussholiha

36

terbentuk senyawa seperti pada gambar 4.8. Hal ini dapat terjadi kemungkinan

dikarenakan lingkungan reaksi yang terlalu asam disertai dengan pemanasan yang

cukup tinggi. Jika dilihat dari tingkat kepolarannya, senyawa target seharusnya

bersifat lebih polar dari senyawa asalnya yaitu analog bis-calkon dan urea. Dari

kromatogram yang diperoleh dari KLT hasil reaksi (gambar 4.5), senyawa target

diduga masih berada dalam campuran reaksi (dalam gambar sebagai noda yang

tidak terelusi).

4.3 Uji Aktivitas Antikanker secara in Vitro

4.3.1 Ektraksi enzim DHFR

Untuk mengekstraksi enzim DHFR diperlukan hati mencit lalu dicuci

bersih, selanjutnya dibekukan. Hal tersebut diharapkan agar darahnya ikut beku

sehingga tidak mempengaruhi pengukuran absorbansinya. Selanjutnya

ditambahkan air (1 : 1) kemudian digerus pada penangas es agar enzimnya tidak

rusak. Dari semua perlakuan tersebut dihasilkan ekstrak enzim DHFR sebanyak 5

ml.

4.3.2 Uji aktivitas ekstrak enzim DHFR

Untuk menguji aktivitasnya, diperlukan ekstrak enzim DHFR, 2-

merkaptoetanol, asam dihidrofolat, NADPH dan ditambahkan buffer fosfat (pH

7,0) sampai total volume 1500 μL. Campuran tersebut diinkubasi pada suhu 37°C

selama 5 menit kemudian diukur absorbansinya pada λ 340 nm. Sebagai kontrol

dilakukan pengukuran yang sama tetapi tanpa penambahan ekstrak enzim dan

tanpa penambahan substrat. Aktivitas enzim dihitung dengan rumus :



Nia Tussholiha

37

Penurunan serapan NADPH ( 340 nm) = NADPH awal –NADPH akhir

= (A(-E)) - (A(E+S) - A(-S))

Aktivitas enzim = 1 mol/mL.menit x penurunan A 340 x vol. Assay x P

6,22 x vol.enzim x waktu

Keterangan : (-E) = tanpa penambahan enzim

(E+S) = dengan penambahan ekstrak enzim dan substrat

(-S) = tanpa penambahan substat

P = pengenceran ekstrak enzim

4.3.3 Inhibisi ekstrak enzim DHFR

Untuk melakukan inhibisi ekstrak enzim DHFR diperlukan sebanyak 2-

merkaptoetanol, ekstrak enzim dan senyawa hasil sintesis dengan variasi

konsentrasi 20 ppm, 40 ppm, 50 ppm, 80 ppm dan 100 ppm. Ditambahkan buffer

fosfat (pH 7,0) yang disesuaikan dengan konsentrasi senyawa hasil sintesis.

Campuran tersebut diinkubasi selama 5 menit pada suhu kamar. Setelah

diinkubasi ditambahkan DHFA dan NADPH. Selanjutnya diinkubasi lagi selama

5 menit kemudian diukur absorbansinya pada λ 340 nm. Persentase inhibisi

sampel terhadap aktivitas enzim dihitung dengan rumus :

% Inhibisi =( ) ( )

( )x 100%

Keterangan : Aktivitas (E) = aktivitas enzim

Aktivitas (E+I) = aktivitas enzim dan inhibitor/sampel

DHFR (dihydrofolate reduktase) adalah enzim yang mengkatalisis reaksi

penting untuk biosintesis basa DNA. DHFR (Dihydrofolate reduktase) merupakan

enzim yang mereduksi asam dihidrofolat menjadi asam tetrahidrofolat. Kontrol



Nia Tussholiha

38

positif yang dipakai pada penelitian ini adalah metotreksat karena metotreksat

merupakan agen antimetabolit yang kompetitif menghambat enzim reduktase

dihidrofolat. Methotrexate adalah obat yang dapat menghentikan pertumbuhan sel

yang dapat mengganggu sistem kekebalan tubuh. Methotrexate digunakan untuk

mengobati kanker dan autoimun (Fradd, 2004)

N

N N

N

NH2

N

CH3

O

NH

CO2H

H CO2H

NH2

C22H22N8O5Mr 454.4

Gambar 4.10 Struktur methotreksat

Methotrexate tersebut akan dibandingkan dengan senyawa hasil sintesis.

Percobaan uji aktivitas senyawa antikanker dilakukan duplo dan ditentukan nilai

IC50 (Inhibitory Consentration) melalui analisis probit. Setelah didapatkan data

hasil analisis antikanker yang tertera pada lampiran 5 maka dari data tersebut

didapatkan nilai %inhibisi. Di bawah ini adalah grafik % inhibisi vs

konsentrasi(μg/mL):



Nia Tussholiha

39

Gambar 4.11 Grafik % inhibisi vs konsentrasi (μg/mL)

Setelah dihitung nilai IC50-nya maka didapatkan IC50 dari senyawa hasil sintesis

sebesar 25,086 μg/mL sedangkan nilai IC50 dari senyawa kontrol positif yaitu

methotrexat sebesar 256,864 μg/mL. IC50 merupakan konsentrasi yang digunakan

untuk menghambat 50% sel kanker, sehingga semakin kecil nilai IC50 maka

aktivitas untuk menghambat sel kanker semakin besar.

Karena pada senyawa hasil sintesis nilai IC50-nya lebih kecil daripada

senyawa kontrol positif (methotrexat) maka senyawa hasil sintesis memiliki

aktivitas yang jauh lebih besar dibandingkan dengan senyawa kontrol positif

(methotrexat).

y = 0,248x - 5,474R² = 0,895

y = 0,706x + 38,68R² = 0,991

-20

0

20

40

60

80

100

120

0 50 100 150

% I

nhib

isi

konsentrasi

Grafik % inhibisi Vs konsentrasi (g/mL)

methotrexate

senyawa hasilsintesis



Nia Tussholiha

40

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Dari penelitian ini dapat disimpulkan beberapa hal, yaitu

1. Senyawa target 3-(4-klorofenil)-1-(3,4-diklorofenil)-8-(4-metoksibenzilidin)-

4-(4-metoksifenil)-6-metil-3,4,5,6,7,8-heksahidro-1H-pirido-[4,3-d]pirimidin-

2-on tidak dapat disintesis dari bahan analog bis-Calkon (3E,5E)-3,5-bis-(4-

metoksibenzilidin-N-metilpiperidin-4-on) dan 1-(4-klorofenil)-3-(3,4-

diklorofenil)-urea tetapi terbentuk senyawa 4-(4-metoksifenil)-6-metil-5,6-

dihidro-1H-pirido[4,3-d]pirimidin-2-on

2. Senyawa 4-(4-metoksifenil)-6-metil-5,6-dihidro-1H-pirido[4,3-d]pirimidin-2-

on memiliki aktivitas sebagai senyawa antikanker karena memiliki nilai IC50

sebesar 25,086 μg/mL yang lebih kecil daripada kontrol positif.

5.2 Saran

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut dengan menggunakan metode lain

untuk mensintesis senyawa 3-(4-klorofenil)-1-(3,4-diklorofenil)-8-(4-metoksi

benzilidin)-4-(4-metoksifenil)-6-metil-3,4,5,6,7,8-heksahidro-1-H-pirido-[4,3-d]

pirimidin-2-on karena masih terdapat kemungkinan terbentuknya senyawa

turunan pirimidinon 3-(4-klorofenil)-1-(3,4-diklorofenil)-8-(4-metoksibenzilidin)-

4-(4-metoksifenil)-6-metil-3,4,5,6,7,8-heksahidro-1H-pirido-[4,3-d]pirimidin-2-

on.



Nia Tussholiha

41

DAFTAR PUSTAKA

Ajrina, A., 2011, Sintesis Senyawa Analog Bis-Calkon (3E,5E)-3,5-bis-(4-metoksibenzilidin-N-metil-piperidin-4-on) Serta Uji AktivitasnyaSebagai Antikanker. Laporan Skripsi Departemen Kimia FakultasSains dan Teknologi. UNAIR : Surabaya.

Akit, J.W., 1992, NMR and Chemistry: An Introduction to Modern NMRSpectroscopy, 3rd Ed , chapman and Hall, New York

Andersen, Ø. M., Markham, K. R., 2006, Flavonoids Chemistry, BiochemistryAnd Applications. Taylor & Francis Group. CRC Press.

Ávila. H. P., Smânia, E. F. A., Monache. F. E., Júnior. A. S., 2008, Structure–activity relationship of antibacterial chalcones. Journal Bioorganic& Medicinal Chemistry 16 p. 9790–9794

Benvenuti, S., Arena, S., Bardelli, A., 2005, Identification of cancer genes bymutational profiling of tumor genomes. Journal of EuropeanBiochemical Societies. vol 579 p. 1884-1890

Castell, J. V and Lech6n, M. J. G., 1997, Vitro Methods in PharmaceuticalResearch. Academic Press, California

Chen, Z. H., Zheng, C. H., Sun, P. L., Piao, H. R., 2010, Synthesis of newchalcone derivatives containing a rhodanine-3-acetic acid moietywith potential anti-bacterial activity. European Journal ofMedicinal Chemistry (2010), doi: 10.1016/j.ejmech.2010.09.031

Chwatt B, Black R, Canfield C, Cyde D, Peters, Wernsdorfer, 1986.Chemotherapy of Malaria. WHO Geneva.. 24-45.

Dawane, B. S., Konda, S. G., Mandawad, G. G., Shaikh, B. M., 2010.Poly(ethylene glycol) (PEG-400) as an alternative reaction solventfor the synthesis of some new 1-(4-(40-chlorophenyl)-2-thiazolyl)-3-aryl-5-(2-butyl-4-chloro-1H-imidazol-5yl)-2-pyrazolines andtheir in vitro antimicrobial evaluation. European Journal ofMedicinal Chemistry 45 p. 387–392

Edrees, M.M; Farghaly, T. A; El-Hag F. A. A; Abdalla, M. M, 2010,Antimicrobial, antitumor and 5α-reductase inhibitor activities ofsome hydrazonoyl substituted pyrimidinones. European Journal ofMedicinal Chemistry. vol 45 p. 5702-5707

Elsevier, 2002, Advanced Organic Chemistry Reaction Mechanisms. ReinhardBruckner, Germany



Nia Tussholiha

42

Fathalla, O.A., Awad, S.M., Mohamed, M.S., 2005, Synthesis of new 2-thiouracil-5-sulphonamide derivatives with antibacterial andantifungal activity. Arch. Pharm., Res., 28(11) p. 1205-1212

Fessenden, R.J.; Fessenden, J.S., 1982, Kimia Organik, jilid II, Edisi ketiga,diterjemahkan oleh A. Hadyana P., Penerbit Erlangga, Jakarta.

Fradd, E. 2004, Administering Subcutaneous Methotrexate For InflammatoryArthritis. Royal College of Nursing, London.

Harborne, J.B., 1987, Metode fitokimia, Penuntun Cara Modern MenganalisisTumbuhan, Penerbit IBT, Bandung

Heftmann, E., 2004, Chromatography 6th edition. fundamentalsand applicationsof chromatography and related differential migration methods.Elsevier B.V. All rights reserved.

Jacobsen, N. E., 2007, NMR Spectroscopy Explained Simplified Theory,Applications And Examples For Organic Chemistry And StructuralBiology. John Wiley & Sons, Inc.,Canada

Katritzky, A. R., Ostercamp, D.L., Yousaf, T. I., 1987, The Mechanisme ofHeterocyclic Ring Closures. Disertasi Departement of Chemistry,University of Florida, Gainnesville, FL 32611 (USA) andDepartement of Chemistry, Concordia Collage, Moorhead, MN 56560(USA)

Katzung, B., 2002, Pharmacology, EGC, Jakarta

Lee, D., Sello, J. K., and Schreiber, S. L., 1999, A Strategy for MacrocyclicRing Closure and FunctionalizationAimed toward Split-PoolSyntheses. J. Am. Chem. Soc. 1999, 121, 10648-10649

Lee, M., 2006, Heterocyclic Antitumor Antibiotics. Springer-Verlag BerlinHeidelberg

Lutfa, U., Maliya, A., 2008, Faktor-faktor yang mempengaruhi kecemasanpasien dalam tindakan kemoterapi di rumah sakit Dr. MoewardiSurakarta. Jurnal Berita Ilmu Keperawatan. Vol. 1 p. 187-192

Missailidis, S., 2008, Anticancer Therapeutics. First Edition John Wiley & Sons,Ltd

Morisson, B., 1992, Organik Chemistry, 6th Ed, Prentice- Hall Inc, EnglewoodCliffs, New Jersey



Nia Tussholiha

43

Pavia, D.L., Lampman, G. M., Kriz, G. S., 2001, Intriduction To Spektroscopy AGuide For Students Of Organic Chemistry. Thomson Learning, Inc.Washington

Pratt, Wiliiam; Ruddon, Raymond; Ersminger, William D; Maybaum, Jonathan.1994. The Anticancer Drugs. Oxford University Press : New York.

Pretsch, E., Buhlmann, P., Affolter, C. 2000, Structure Determination of OrganicCompounds Tables of Spectral Data. Springer-Verlag BerlinHeidelberg New York

Ritmaleni; Nurcahyani, W., 2006, Sintesis 4-fenil-3,4-tetrahidro-indeno [2,1]-pyrimidin-2-one (LR-1). Majalah Farmasi Indonesia. Vol 17(3) p.149-155

Rullah, K., 2010, Sintesis Senyawa-Senyawa Calkon dalam Penemuan ObatAntikanker Baru. Universitas Riau: Riau.

Santoso, S. D., 2011, Sintesis Dan Uji Antimalaria Senyawa Organologam Besi(III). Laporan Tesis Departemen Kimia Fakultas Sains dan Teknologi.UNAIR : Surabaya

Schreiber, S. D., 2008, Anticancer: A New Way of Life.Viking: The PenguinGroup Inc.

Scott, A. I., 1964, Interpretation Of The Ultraviolet Spectra Of Natural Products.PERGAMON Press GmbH, Frankfurt Germany p.193

Sherma, J. Kowalska, T. 2006, Preparative Layer Chromatography, Taylor &Francis Group. CRC Press

Shriner, R. L., Hermann, C. K. F., Morrill, T.C; Curtin, D. Y., Fuson, R. C.,2004, The Systematic Identification of Organic Compounds. 8thEdition, John Wiley & Sons. Inc. All rights reserved.

Silverstein, M. Robert, Webster, X., Francis, Kiemle, J. David, 2005,Spectrometri Identification of Organic Compounds, Edisi ketujuh,John Willey and Sons Inc. All rights reserved.

Siswandono; Sukarji, Bambang. 1995, Kimia Medisinal. Airlangga UniversityPress: Surabaya

Suwito, H., Puspaningsih, N.N.T., 2010, Calkon Teranulasi sebagai AntagonisOnkoprotein MDM2 pada Terapi Antikanker. Laporan HibahPenelitian Strategis Nasional: UNAIR.



Nia Tussholiha

44

Taj, T., Kamble, R. R., Gireesh, T. M., Hunnur, R.K., Margank, S.B., 2010, One-pot synthesis of pyrazoline derivatised carbazoles asantitubercular, anticancer agents, their DNA cleavage andantioxidant activities. European Journal of Medicinal Chemistry vol46 p. 4366-4373

Wall, E. P., 2005, Thin-layer Chromatography A Modern Practical Approach.Athenaeum Press Ltd, Gateshead, Tyne and Wear, UK.

Woerly, E., 2008, The Biginalli Reaction: Development and Applications. J.Chem : 535



Nia Tussholiha

Lampiran 1

Spektrum (1H-NMR) senyawa turunan calkon

Lampiran 2 (Lanjutan) Spektrum 13C-NMR senyawa turunan calkon



Nia Tussholiha

Lampiran 3

Spektrum UV-VIS senyawa hasil sintesis

Lampiran 4

Spektrum IR senyawa hasil sintesis



Nia Tussholiha

Lampiran 5

Spektrum MS senyawa hasil sintesis

Lampiran 6

Data hasil analisis antikanker

1. Larutan uji senyawa hasil sintesisKonsentrasi

senyawaLarutan200 ppm

(μL)

BufferFosfat(μL)

2-merkaptoetanol (μL)

Ekstrakenzim(μL)

NADPH(μL)

DHFA(μL)

100 ppm 750 574,5 9 150 9 7,580 ppm 600 724,5 9 150 9 7,560 ppm 450 874,5 9 150 9 7,540 ppm 300 1024,5 9 150 9 7,520 ppm 150 1174,5 9 150 9 7,5

2. Larutan uji aktivitas enzimAKTIVITAS Buffer

Fosfat (μL)2-merkaptoetanol (μL)

Ekstrakenzim(μL)

NADPH(μL)

DHFA(μL)

Ekstrak DHFR 1324,5 9 150 9 7,5Kontrol

(-E) 1474,5 9 0 9 7,5(-S) 1332 9 150 0 7,5



Nia Tussholiha

3. Data absorbansi uji aktivitas enzim DHFRKeterangan Absorbansi (λ 340 nm)

Replikasi 1 Replikasi 2Dengan substrat DHFA (+S) 1,386 1,454

Tanpa substrat DHFA (-S) 0,726 0,713

Tanpa enzim (-E) 1,489 1,519

4. Uji konsentrasi senyawa hasil sintesis terhadap inhibisi aktivitas ekstrak enzimSampel Absorbansi (λ 340 nm)

Replikasi 1 Replikasi 2100 ppm 2,272 2,299

80 ppm 2,164 2,215

60 ppm 2,096 2,170

40 ppm 1,920 1,957

20 ppm 1,804 1,885

5. Uji konsentrasi methotrexat terhadap inhibisi aktivitas ekstrak enzimSampel Absorbansi (λ 340 nm)

Replikasi 1 Replikasi 2100 ppm 1,622 1,512

80 ppm 1,498 1,460

60 ppm 1,443 1,437

40 ppm 1,436 1,416

20 ppm 1,410 1,390

6. IC50 senyawa uji terhadap aktivitas ekstrak enzim DHFRSampel Penurunan

serapanNADPH

Aktivitasenzim

Inhibisi (%) Rata-rataInhibisi (%)

IC50 (ppm)

Senyawa turunan pirimidinon

100 ppm-0,057 -0,018 106,76%

107,78%25,086μg/mL

-0,067 -0,022 108,8%

80 ppm0,051 0,016 93,98%

95,99%0,017 0,005 98,0%



Nia Tussholiha

60 ppm0,119 0,025 75,56%

83,98%0,062 0,019 92,4%

40 ppm0,295 0,094 64,66%

64,73%0,275 0,088 64,8%

20 ppm0,411 0,132 50,38%

52,79%0,347 0,112 55,2%Senyawa methotrexat

100 ppm0,593 0,1907 28,47%

22,62 %

256,864μg/mL

0,690 0,2219 16,77 %

80 ppm0,717 0,2305 13,54 %

12,04 %0,742 0,2385 10,54 %

60 ppm0,772 0,2482 6,90 %

6,53 %0,778 0,2502 6,15 %

40 ppm0,779 0,2505 6,04 %

4,84 %0,799 0,2569 3,64 %

20 ppm0,805 0,2588 2,93 %

1,54 %0,825 0,2652 0,14 %

8. Probit Analysis methotrexat

Parameter Estimates

Parameter Estimate Std. Error Z Sig.

95% Confidence Interval

Lower Bound Upper Bound

PROBITa konsentrasi 2.131 .457 4.660 .000 1.235 3.028

Intercept -5.136 .845 -6.078 .000 -5.981 -4.291

a. PROBIT model: PROBIT(p) = Intercept + BX (Covariates X are transformed using the base 10,000

logarithm.)

Chi-Square Tests

Chi-Square dfa Sig.

PROBIT Pearson Goodness-of-Fit

Test

2.271 3 .518b

a. Statistics based on individual cases differ from statistics based on aggregated

cases.

b. Since the significance level is greater than ,150, no heterogeneity factor is used

in the calculation of confidence limits.



Nia Tussholiha

Cell Counts and Residuals

Num

ber konsentrasi

Number of

Subjects

Observed

Responses

Expected

Responses Residual Probability

PROBIT 1 1.301 100 2 .906 .634 .009

2 1.602 100 4 4.258 .222 .043

3 1.778 100 7 8.913 -2.383 .089

4 1.903 100 12 14.011 -1.971 .140

5 2.000 100 23 19.126 3.494 .191

Confidence Limits

Prob

ability

95% Confidence Limits for konsentrasi 95% Confidence Limits for log(konsentrasi)a

Estimate Lower Bound Upper Bound Estimate Lower Bound Upper Bound

PROBIT .010 20.810 8.465 30.560 1.318 .928 1.485

.020 27.936 13.948 37.937 1.446 1.145 1.579

.030 33.676 19.084 43.657 1.527 1.281 1.640

.040 38.758 24.087 48.672 1.588 1.382 1.687

.050 43.452 29.016 53.342 1.638 1.463 1.727

.060 47.893 33.880 57.870 1.680 1.530 1.762

.070 52.159 38.660 62.398 1.717 1.587 1.795

.080 56.299 43.323 67.041 1.751 1.637 1.826

.090 60.350 47.826 71.896 1.781 1.680 1.857

.100 64.336 52.133 77.046 1.808 1.717 1.887

.150 83.840 70.422 108.540 1.923 1.848 2.036

.200 103.479 85.118 149.747 2.015 1.930 2.175

.250 123.954 98.510 200.645 2.093 1.993 2.302

.300 145.773 111.615 262.595 2.164 2.048 2.419

.350 169.406 124.935 337.968 2.229 2.097 2.529

.400 195.364 138.808 430.123 2.291 2.142 2.634

.450 224.259 153.534 543.704 2.351 2.186 2.735



Nia Tussholiha

.500 256.864 169.430 685.220 2.410 2.229 2.836

.550 294.211 186.873 864.024 2.469 2.272 2.937

.600 337.725 206.353 1094.009 2.529 2.315 3.039

.650 389.476 228.549 1396.697 2.590 2.359 3.145

.700 452.617 254.455 1807.258 2.656 2.406 3.257

.750 532.287 285.641 2387.315 2.726 2.456 3.378

.800 637.613 324.807 3255.621 2.805 2.512 3.513

.850 786.964 377.189 4675.015 2.896 2.577 3.670

.900 1025.543 455.126 7372.977 3.011 2.658 3.868

.910 1093.276 476.229 8230.943 3.039 2.678 3.915

.920 1171.937 500.258 9276.664 3.069 2.699 3.967

.930 1264.978 528.072 10580.656 3.102 2.723 4.025

.940 1377.648 560.956 12255.077 3.139 2.749 4.088

.950 1518.448 600.953 14490.865 3.181 2.779 4.161

.960 1702.363 651.585 17644.605 3.231 2.814 4.247

.970 1959.264 719.685 22478.201 3.292 2.857 4.352

.980 2361.763 821.309 31014.477 3.373 2.915 4.492

.990 3170.504 1011.280 51518.049 3.501 3.005 4.712

a. Logarithm base = 10.



Nia Tussholiha

9. Probit Analysis senyawa hasil sintesis

Parameter Estimates

Parameter Estimate Std. Error Z Sig.

95% Confidence Interval

Lower Bound Upper Bound

PROBITa konsentrasi 2.305 .251 9.185 .000 1.813 2.797

Intercept -3.226 .419 -7.693 .000 -3.645 -2.807

a. PROBIT model: PROBIT(p) = Intercept + BX (Covariates X are transformed using the base 10,000

logarithm.)

Chi-Square Tests

Chi-Square dfa Sig.


Test

8.644 2 .013b


cases.



Nia Tussholiha

Chi-Square Tests

Chi-Square dfa Sig.


Test

8.644 2 .013b


cases.

b. Since the significance level is less than ,150, a heterogeneity factor is used in

the calculation of confidence limits.

Cell Counts and Residuals

Number konsentrasi

Number of

Subjects

Observed

Responses

Expected

Responses Residual Probability

PROBIT 1 1.301 110 53 45.130 7.660 .410

2 1.602 110 65 74.775 -10.045 .680

3 1.778 110 84 88.953 -4.973 .809

4 1.903 110 96 96.489 -.499 .877

5 2.000 110 108 100.857 6.923 .917

Confidence Limits

Pro

babi

lity

95% Confidence Limits for konsentrasi 95% Confidence Limits for log(konsentrasi)b

Estimate Lower Bound Upper Bound Estimate Lower Bound Upper Bound

PROBITa .010 2.456 .001 8.788 .390 -3.183 .944

.020 3.225 .002 10.321 .508 -2.734 1.014

.030 3.833 .004 11.435 .584 -2.449 1.058

.040 4.365 .006 12.355 .640 -2.234 1.092

.050 4.851 .009 13.161 .686 -2.060 1.119

.060 5.308 .012 13.891 .725 -1.912 1.143

.070 5.744 .017 14.566 .759 -1.782 1.163

.080 6.164 .022 15.201 .790 -1.666 1.182

.090 6.573 .028 15.803 .818 -1.560 1.199

.100 6.974 .034 16.381 .843 -1.463 1.214



Nia Tussholiha

.150 8.909 .087 19.035 .950 -1.061 1.280

.200 10.823 .181 21.494 1.034 -.743 1.332

.250 12.789 .338 23.908 1.107 -.471 1.379

.300 14.857 .592 26.371 1.172 -.227 1.421

.350 17.072 .993 28.965 1.232 -.003 1.462

.400 19.477 1.615 31.781 1.290 .208 1.502

.450 22.127 2.571 34.944 1.345 .410 1.543

.500 25.086 4.035 38.645 1.399 .606 1.587

.550 28.441 6.261 43.220 1.454 .797 1.636

.600 32.310 9.607 49.324 1.509 .983 1.693

.650 36.863 14.480 58.387 1.567 1.161 1.766

.700 42.357 21.093 73.778 1.627 1.324 1.868

.750 49.208 29.035 103.539 1.692 1.463 2.015

.800 58.149 37.515 166.821 1.765 1.574 2.222

.850 70.641 46.499 316.365 1.849 1.667 2.500

.900 90.239 57.297 752.521 1.955 1.758 2.877

.910 95.736 59.936 932.734 1.981 1.778 2.970

.920 102.089 62.845 1179.552 2.009 1.798 3.072

.930 109.561 66.106 1529.275 2.040 1.820 3.184

.940 118.555 69.842 2046.881 2.074 1.844 3.311

.950 129.718 74.245 2858.736 2.113 1.871 3.456

.960 144.182 79.637 4239.974 2.159 1.901 3.627

.970 164.192 86.638 6897.013 2.215 1.938 3.839

.980 195.157 96.668 13201.184 2.290 1.985 4.121

.990 256.237 114.437 36872.932 2.409 2.059 4.567

a. A heterogeneity factor is used.

b. Logarithm base = 10.



Nia Tussholiha



Nia Tussholiha

SINTESIS SENYAWA TURUNAN PIRIMIDINON DARI ANALOG …repository.unair.ac.id/25762/1/TUSSHOLIHA,...

Documents

Transcript of SINTESIS SENYAWA TURUNAN PIRIMIDINON DARI ANALOG …repository.unair.ac.id/25762/1/TUSSHOLIHA,...