87

87

Lampiran 1

Sertifikat Determinasi Tanaman Sembukan (Paederia scandens (Lour.) Merr.)

88

88

Lampiran 2

Sertifikat Bakteri Shigella sonnei

89

89

Lampiran 3

Sertifikat Uji Biokimia Shigella sonnei

90

90

Lampiran 4

Sertifikat Ampisillin

91

91

Lampiran 5

Hasil Pemeriksaan Susut Pengeringan Simplisia

Replikasi Berat Serbuk (gram) Susut Pengeringan (%)

1 5 7,20

2 5 7,30

3 5 7,10

Rata-rata 7,20

Keterangan: Susut pengeringan yang dipersyaratkan adalah ≤ 10% (DepKes RI,

1989).

92

92

Lampiran 6

Hasil Pemeriksaan Kadar Abu Simplisia

W Replikasi

K (g) K + S (g) W (S) (g) % Kadar Abu

1 22,0605 22,1060 2,0869 2,18

2 22,0617 22,1075 2,0899 2,19

3 22,0621 22,1081 2,0893 2,20

Rata-rata 2,19

Keterangan: Kadar abu yang dipersyaratkan adalah ≤ 7% (DepKes RI, 1989).

Rumus yang digunakan adalah:

% Kadar abu = 100 (W konstan (k+s) – W konstan (k)) %

W konstan (s)

Dimana: W konstan (k+s) = Berat konstan krus + serbuk abu (gram)

W konstan (k) = Berat konstan krus (gram)

W konstan (s) = Berat konstan serbuk (gram)

93

93

Lampiran 7

Perhitungan Berat Ekstrak kental dan Rendemen dari Hasil Remaserasi 100 gram Serbuk Daun Sembukan

Berat ekstrak kental (gram) Rendemen (%) Replikasi Berat

serbuk (gram)

n-Heksana Etil asetat

Etanol n-Heksana Etil asetat

Etanol

I II III IV V

100 100 100 100 100

1,05 1,07 1,06 1,09 1,08

2,51 2,55 2,53 2,57 2,56

3,64 3,66 3,63 3,68 3,66

1,05 1,07 1,06 1,09 1,08

2,51 2,55 2,53 2,57 2,56

3,64 3,66 3,63 3,68 3,66

Rata-rata 1,07 2,54 3,65 1,07 2,54 3,65 Keterangan :

Perhitungan rendemen(%) = ekstrak kental yang didapat dari hasil remaserasi × 100% jumlah serbuk

94

94

Lampiran 8

Hasil Pemeriksaan Kadar Air Ekstrak n-Heksana, Etil Asetat dan Etanol Daun Sembukan

Kadar air (%)

Replikasi n-Heksana Etil Asetat Etanol

I II III IV V

13,60 13,10 13,50 13,30 13,80

15,20 15,70 15,50 15,30 15,10

16,50 16,90 16,30 16,70 16,10

Rata-rata 13,46 15,36 16,50 Keterangan: Kadar air yang dipersyaratkan adalah ≤ 20% (Voigt, 1995).

95

95

Lampiran 9

Penyetaraan Kekeruhan Kultur Bakteri dengan Larutan 1⁄2 Mc Farland I

Hasil Absorbsi Larutan 1⁄2 Mc Farland I pada λ=625 nm dan Absorbsi Kultur Cair

Shigella sonnei diukur dengan spektrofotometer UV.

Replikasi Absorbsi 1⁄2 Mc Farland I Absorbsi Kultur Cair

1 0,091 0,094 2 0,093 0,091 3 0,090 0,093

4 0,089 0,095

5 0,091 0,093

____

X ±SD 0,091 ± 0,001 0,093 ± 0,001

Hasil pemeriksaan kekeruhan bakteri memenuhi persyaratan yang ada sesuai dengan

pustaka yaitu 0,08-0,10 (Lorian, 1991).

96

96

Lampiran 10

Perhitungan Rancangan Acak Lengkap Ekstrak n-Heksana, Etil Asetat dan Etanol terhadap Shigella sonnei

Daerah Hambatan Pertumbuhan

Replikasi Pelarut Konsentrasi (%) I II III IV V

Total Perlakuan

(∑yp)

10 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 20 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 n-

Heksana 30 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 10 14,73 14,22 14,53 14,77 14,82 73,07 20 16,73 16,97 16,83 16,73 16,53 83,79 Etil

Asetat 30 18,44 18,94 18,34 18,81 18,87 93,40 10 12,87 12,94 12,85 12,90 12,96 64,52 20 14,12 14,55 14,48 14,99 14,62 72,76 Etanol 30 17,68 17,38 17,63 17,36 17,53 87,58

Kontrol Negatif

(DMSO) 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00

N = p x n = 10 x 5 = 50 Db Total = N – 1 = 50 – 1 = 49 Db Perlakuan = p – 1 = 10 – 1 = 9 Db Galat = p(n – 1 ) = 10(5 – 1 ) = 40 FK = (∑x)2 / N = (475,12)2 / 50 = 4514,7803 JK Total = ( ∑x)2 – FK = [(14,73)2+(14,22)2+(14,53)2+…+(17,63)2+(17,36)2+(17,53)2] – 4514,7803 = 7643,2504 – 4514,7803 = 3128,4701

97

97

JK Perlakuan = (∑yp)2 / n – FK = [(73,07)2+(83,79)2+(93,40)2+ (64,52)2+(72,76)2+(87,58)2] 5 – 4514,7803 = 7642,1307 – 4514,7803 = 3127,3504 JK Galat = JK Total – JK Perlakuan = 3128,4701– 3127,3504 = 1,1197

Ftabel Sumber Variasi

Db JK RJK Fhitung 5%

Perlakuan 9 3127,3504 347,4834 12410,1214 2,12 Galat 40 1,1197 0,0280 Total 49 3128,4701 63,8463 2280,2250

98

98

Lampiran 11

Perhitungan Anava Faktorial 3 x 3 untuk Penentuan Perbedaan Daya Antibakteri Ekstrak n-Heksana, Etil Asetat dan Etanol terhadap

Shigella sonnei

Daerah Hambatan Pertumbuhan Replikasi Pelarut Konsentrasi

(%) I II III IV V

Total Perlakuan

(∑yp)

Rata – rata

10 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 20 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 n-

Heksana 30 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 10 14,73 14,22 14,53 14,77 14,82 73,07 14,6120 16,73 16,97 16,83 16,73 16,53 83,79 16,76Etil

Asetat 30 18,44 18,94 18,34 18,81 18,87 93,40 18,6810 12,87 12,94 12,85 12,90 12,96 64,52 12,9020 14,12 14,55 14,48 14,99 14,62 72,76 14,55Etanol 30 17,68 17,38 17,63 17,36 17,53 87,58 17,52

Kontrol Negatif

(DMSO) 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00

99

99

B

A B1 n-Heksana

B2 Etil Asetat

B3 Etanol

Jumlah mean Ai

A1 (10%)

0,00 0,00 0,00 0,00 0,00

14,73 14,22 14,53 14,77 14,82

12,87 12,94 12,85 12,90 12,96

∑x ∑x2

mean

0,00 0,00 0,00

73,07 1068,0875

14,61

64,52 832,5746

12,90

137,59 1900,6621

9,17

A2 (20%)

0,00 0,00 0,00 0,00 0,00

16,73 16,97 16,83 16,73 16,53

14,12 14,55 14,48 14,99 14,62

∑x ∑x2

mean

0,00 0,00 0,00

83,79 1404,2565

16,76

72,76 1059,1918

14,55

156,55 2463,4483

10,44

A3 (30%)

0,00 0,00 0,00 0,00 0,00

18,44 18,94 18,34 18,81 18,87

17,68 17,38 17,63 17,36 17,53

∑x ∑x2

mean

0,00 0,00 0,00

93,40 1745,0058

18,68

87,58 1534,1342

17,52

180,98 3279,14 12,07

Jumlah (∑x) Mean Bj

0,00 0,00

250,26 27,81

224,86 24,98

475,12

100

100

∑(∑x) = 137,59 + 156,55 +180,98 = 475,12

∑(∑x2) = 1900,6621 +2463,4483 +3279,14 =7643,2504

Db perlakuan = (ab – 1) = (3.3 – 1) = 8

Db galat = ab(n – 1) = 3.3(5 – 1) = 36

Db total = abn – 1 = 3.3.5 – 1 = 44

Db A = a – 1 = 3 – 1 = 2

Db B = b – 1 = 3 –1 = 2

Db AB = (a – 1) (b – 1) = (3 –1) (3 – 1) = 4

FK = (∑x)2/ (abn) = (475,12)2 / (3.3.5) = 5016,4225

JK(A) = ∑(∑x)2i/ (bn) – FK

= (137,59)2+(156,55)2+(180,98)2 – 5016,4225

(3.5)

= 63,0889

JK(B) = ∑(∑x)2j/ (an) – FK

= (0,00)2+(250,26)2 + (224,86)2 – 5016,4225

(3.5)

= 2529,7166

101

101

JK(AB) = ∑(∑x)2ij/ n – JK(A) – JK(B) – FK

= (0,00)2+(73,07)2+(83,79)2+… +(72,76)2+(87,58)2 – (63,0889 –

5

2529,7166 – 5016,4225)

= 32,9027

JK Total = ( ∑x)2 – FK

= (0,00)2+(14,73)2+(14,22)2+…+(17,63)2+(17,36)2+(17,53)2 – 5016,4225

= 2626,8279

JK Perlakuan = (∑yp)2 / n – FK

= (0,00)2+(73,07)2+(83,79)2+…+(72,76)2+(87,58)2 – 5016,4225

5

= 2625,7082

JK Galat = JK Total – JK Perlakuan

= 2626,8279 – 2625,7082

= 1,1197

102

102

Ftabel Sumber Variasi

Db JK

RJK

Fhitung 5%

Perlakuan 8 2625,7082 328,2135 10553,4888

A 2 63,0889 31,5445 1014,2926* 3,26

B 2 2529,7166 1264,8583 40670,6849* 3,26

AB 4 32,9027 8,2257 264,4920* 2,63 Galat 36 1,1197 0,0311 Total 44 2626,8279 59,7006 1919,6334

* : ada perbedaan yang bermakna A : konsentrasi ekstrak daun sembukan B : jenis pelarut AB : kombinasi antara konsentrasi ekstrak daun sembukan dengan jenis pelarut

103

103

Lampiran 12

Hasil Perhitungan HSD 5% Untuk Menentukan Perbedaan Antar Perlakuan Pada Penentuan Daya Antibakteri Ekstrak n-Heksana, Etil Asetat dan Etanol

terhadap Shigella Sonnei

* : ada perbedaan yang bermakna A1B1 : ekstrak n-heksana 10% TS : tidak ada perbedaan yang bermakna A1B2 : ekstrak etil asetat 10% p : jumlah perlakuan 10 A1B3 : ekstrak etanol 10% db : derajat kebebasan galat 36 A2B1 : ekstrak n-heksana 20% RJK : rataan jumlah kuadrat A2B2 : ekstrak etil asetat 20% n : jumlah pengulangan (replikasi) A2B3 : ekstrak etanol 20% kontrol positif : larutan pembanding Ampisilin A3B1 : ekstrak n-heksana 30% q(0,05 ; p ; db) = 4,73 A3B2 : ekstrak etil asetat 30% HSD = q(0,05 ; p ; db) √ RJK /n A3B3 : ekstrak etanol 30% = 4,73 √ 0,0311/ 5 =0,3730

Perla-

kuan

A1B1

A1B2 A1B3 A2B1 A2B2 A2B3 A3B1 A3B2 A3B3 Kontrol Positif

Mean

0,00

14,61 12,90 0,00 16,76 14,55 0,00 18,68 17,52 38,25

A1B1

0,00 0,00

14,61*

12,90*

0,00 16,76*

14,55*

0,00 18,68* 17,52*

38,25*

A1B2

14,61

0,00 1,71* 14,61*

2,15* 0,06

TS 14,61

* 4,07* 2,91* 23,64*

A1B3

12,90

0,00 12,90*

3,86* 1,65* 12,90*

5,78* 4,62* 25,35*

A2B1

0,00 0,00 16,76*

14,55*

0,00 18,68* 17,52*

38,25*

A2B2

16,76

0,00 2,21* 16,76*

1,92* 0,76* 21,49*

A2B3

14,55

0,00 14,55*

4,13* 2,97* 23,70*

A3B1

0,00 0,00 18,68* 17,52*

38,25*

A3B2

18,68

0,00 1,16* 19,57*

A3B3

17,52

0,00 20,73*

104

104

Lampiran 13

Tabel F

105

105

Lampiran 14

Tabel Q