PENGARUH LINGKUNGAN TERHADAP KESEHATAN

SAPOGENIN STEROIDBURHANUDDIN TAEBEFakultas FarmasiUNIVERSITAS HASANUDDIN1

Sapogenin steroid

Sejarah perkembangan obat menunjuk-kan 3 cara pembuatan ; (i) isolasi, (ii) sintesis, (iii) semisintesisIlustrasi : isolasi 1000 mg kortison dibutuhkan 1000 Kg ginjal sapi, rata-rata berat ginjal sapi 10 20 g / buahCara termurah adalah cara semisinte-sis, mula dicoba mengubah asam empe-du, ditemui kesulitan dan membutuhkan bahan awal lebih banyak

Sapogenin steroid

Tahun 1935 Russel E.Marker meneliti bahan bahan murah & mudah didapatTahun 1939 menemukan struktur sapogenin steroid yang betul Russel E.Marker menemukan prosedur mengubah sapogenin steroid ----- preg-nadienon, prosedur kerja DEGRADASI MARKERTahun 1939 1942, menemukan sumber sapogenin steroid Dioscorea composita (barbasco) dan D.macrostachya (cabeza de negro) dikenal The Mexican Yams

BEBERAPA PENEMU STRUKTUR SAPOGENIN STEROID

BEBERAPA USAHA MEMBUAT OBAT STEROIDAhli Searle menemukan prosedur mikrobiologi --------- mengkonversi kolesterol, sitosterol, stigmasterol atau 17 Alkil sterol -------- 17 on SteroidProgesteron oksidasi mikrobiologi ----- 11 a hidroksiprogesteron --------- kortison dan hidrokortisonOksidasi mikrobiologi kolesterol, sito-sterol, diosgenin ----- 1,4-androsta-dien-3,17 dion pirolisis estrogenBEBERAPA USAHA MEMBUAT OBAT STEROIDReduksi 3,O-metilestradiol, hasil dihidrolisis 19-NortestosteronDiosgenin, kolesterol 19-metil androstan oksidasi 19-NorsteroidDiosgenin, kolesterol, oksidasi mikrobiologi testosteronDiosgenin 3b-asetoksi-5- and-rosten-17-on spironolakton

SITOSTEROLSTIGMASTEROL17-ALKIL STEROL17-ON STEROIDSTEROIDHEKOGENINPROGESTERON11a-HIDROKSIPROGESTERONKORTISONHIDROKORTISONOKSIDASI MIKROBIOLOGIKOLESTEROLSITOSTEROLDIOSGENIN19-METILANDROSTANDIOSGENIN1,4-ANDROSTADIEN-3,17-DIONESTROGEN19-NORSTEROID(19-NORTESTOSTERON)3-O-METILESTRADIOLSPIRONOLAKTON3b-ASETOKSI-5-ANDROSTAN-17-ONOKSIDASIREDUKSIOKSIDASIMIKROBIOLOGIOKSIDASI8

-Kocok dengan air ---- busa -Hemolisis butir darah merah - Hidrolisis asamSTEROID ALAMBEBASBENTUK GLIKOSIDASTEROLINKARDIOAKTIFSAPONINGULAAGLIKONSAPOGENINTRITERPENOIDTRITERPENSTEROIDSTEROL9PEMBAGIAN SAPOGENIN STEROIDSAPOGENIN STEROIDALAM (C-27)CABANG TANPA - NCABANG DENGAN - NSPIROSOLANNON-SPIROSOLANSPIROSTANNON-SPIROSTANSOLASODANTOMATIDAN

10TURUNAN STEROID YANG BANYAK DIGUNAKANA. GOLONGAN GLUKOKORTIKOID a. Turunan 4-Pregnen-3,20-Di-on

11 b. Turunan 1,4-Pregnadien-3,20-Dion

12B. GOLONGAN KONTRASEPTIKa. Turunan Progesteron

13 b. Turunan Estron

14C. GOLONGAN ANDROGENIK Turunan 17b-Hidroksi Androstan

15D. GOLONGAN MINERALOKORTIKOSTEROID Turunan Aldosteron

E. GOLONGAN ANTAGONIS MINERALOKORTIKOSTEROID Turunan Spironolakton

16SUMBER SAPOGENIN STEROID ALAM

17SUMBER SAPOGENIN STEROID ALAM

18CIRI-CIRI SAPOGENIN STEROIDKELOMPOK STEROID C-27,TERIKAT SE-BAGAI GLIKOSIDABERBUSA DENGAN AIR, MEMECAH BU-TIR SEL DARAH, RACUN IKAN (MAMA-LIA TIDAK MENGABSORPSI SAPOGENIN STEROID)CINCIN CABANG SPIROKETAL DAN SPI-RO-AMINOKETAL TERIKAT PADA ATOM C-16 DAN C-17 DENGAN KEDUDUKAN bBIDANG CINCIN F TERLETAK TEGAK LURUS PADA BIDANG CINCIN E19KERANGKA INTI SAPOGENIN STEROIDKerangka inti perhidrosiklopentanofenantren, dengan subtituen metil angular pada atom C-10 dan C-13Fusi cincin D/C dan C/B selalu berkonfigurasi trans, cincin A/B bisa berfusi sis atau transInti perhidrosiklopentanofenantren, dibuktikan dgn didehidrogenasi katalisator selenium menghasilkan hidrokarbon Diels

20CINCIN CABANG SAPOGENIN STEROIDGolongan spirostan bila didehidrogenasi ----keton delapan atom karbon + hidrokarbon DielsReaksi hidrogenasi, brominasi dan reduksi Cle-mensen ---------- petunjuk cincin cabang adalah keton yang terikat sebagai spiroketalGugus spiroketal E (tetrahidrofuran) terikat langsung pada kerangka inti steroid pada atom C-16 dan C-17 ----- oksidasi ----- asam etio (allo) bilianatCincin F dibuktikan sebagai tetrahidropiran ------- pemanasan 200o dengan anhidrida asetat ----- furostan 26 ol asetat

21Cincin E dan F dihubungkan C-22 sebagai ikatan spiro ----- mungkin a (seri 22R) atau b (seri 22S) ---- belum dapat dibukitkan dengan reaksi kimia

22

STRUKTUR (25x) 5x SPIROSTAN

NOMENKALTUR SAPOGENIN STEROIDBERDASAR INTERNATIONAL UNION of PURE and APPLIED CHEMISTRY (IUPAC) dan INTER-NATIONAL UNION of BIOCHEMISTRY (IUB)Nama spirostan untuk struktur di atas, yaitu 16,22-22,26 diepoksi kolestanSubtituen pada kerangka inti dibawah bidang diberi prefiks (indeks) a, dan tidak diketahui x (psi)Konfigurasi C-16 dan C-17 jika berbeda untuk spiro-stan diberi petunjuk 16 b (H) dan 17 b (H)Konfigurasi pada atom C-20 dan C-22, jika berbeda dengan struktur di atas, digunakan aturan sikuen (aturan R S), kalau belum diketahui ditandai x 25Subtituen pada cincin F (C-23, C-24, C-25 atau C-26) dijelaskan kedudukannya dengan aturan sikuen, belum diketahui ditandai xCincin F biasa digambarkan sebagai konfigu-rasi kursi ----- menggambarkan konfigurasi C-22, spirostan alam ditetapkan 20S dan 22R)

26 SAPOGENIN STEROID ALKALOIDA BELUM DITETAPKAN, BEBERAPA NAMA YANG BIASA DIGUNAKAN

1. Nama induk 27 azaspirostan untuk cabang cincin spiroaminoketal2. Ketentuan lain mengikuti aturan spirostan3. Ada yang menggunakan spirosolan pengganti 27 azaspirostan (22R, 25R)-5a-27-azaspirostan = (22R, 25R)-5a- spirosolan (22S, 25S)-5a-27-azaspirostan = (22S, 25S)-5a- spirosolan4. Membedakan epimer 22R dan 22S diberi nama induk berturut-turut solasodan dan tomatidan (tanpa sub-tituen) dan ditetapkan dengan konfigurasi sbb :27

28ATURAN SIKUEN KONFIGURASI KARBON ASIMETRISMula-mula tetapkan dengan konvensi Platner, yang merupakan perubahan aturan Fieser :Potong ikatan heteroatom cincin E dan F, tarik lurus ketas sehingga 26 CH2N (H2) atau 26 CH2O terletak diujung atasProyeksi menurut aturan Fieser,subtituen sebelah kiri beri prefeksi bF dan kanan aF (indeks F untuk membedakan subtituen pada inti dasar)Pakai aturan konfigurasi absolut Fieser (D, L)20 bF (aF) = 20 L (20D) = 20 S (20R)22 bF (aF) = 22 L (20D) = 22 S (20R)25 bF (aF) = 25 L (20D) = 25 S (20R)

29

30

31SKRINING DAN ANALISIS SAPOGENIN STEROID SYARAT PROSEDUR SKRINING :1. Prosedur dan peralatan sederhana2. Selektif3. kuantitatif atau semikuantitatif4. relatif cepatDIPERLUKAN DUA TAHAP SKRINING1. UJI PENDAHULUANa. Uji busab. Uji warna Liebermann Bouchardc. Uji warna Carr - Price2. UJI LANJUTAN322. UJI LANJUTAN

a. Analisis Kualitatif dan Kuantitatif Gol. Spirostan aa. Analisis Kromatografi Lapis Tipis ab. Analisis Spektrofotometer Inframerah ac. Analisis Spektrofotometer Ultraviolet

b. Analisis Kualitatif dan Kuantitatif Gol. Spirosolan

33

1. UJI PENDAHULUANa. Uji busa

0,5 g serbuk kering sampel dalam tabung reaksi, tambah 10 ml air mendidih, dingin ----- kocok ----- busa tahan > 10 menit (ukur tinggi busa), busa tidak hilang dengan penambahan 1 tetes HCl 2 M

b. Uji warna Liebermann Bouchard

0,5 g serbuk kering sampel dalam tabung reaksi, tambah 5 ml kloroform ----- panaskan diatas tangas air sambil dikocok ----- dinginkan. Satu ml filtrat + pereaksi Liebermann Bouchard (20 tetes anhidrida asetat dengan 1 tetes asam sulfat pekat) ----- amati perubahan warna. (reaksi positif sapogenin steroid ----- merah atau ungu ----- perlahan menjadi biru)

34

1. UJI PENDAHULUANc. Uji warna Carr Price

Totolkan filtrat diatas (b) di atas lempeng KLT, ----- kering ----- semprot perekasi Carr Price (larutan jenuh Antimon (III) klorida dalam kloroform) ----- lempeng panaskan 105 -110o C ----- (reaksi positif sapogenin steroid ----- ungu merah). Jika terganggu, elusi dengan eluen dari campur-an kloroform, metanol dan air perbandingan volume (435 : 15 : 1) atau BAW (4 : 1 : 1) ----- semprot dengan pereaksi Carr - Price

35SKRENING DAN ANALISIS SAPOGENIN STEROID - Uji busa - Uji warna - Uji susut pengeringan 105o C Timbang

Soksletasi dengan 200 ml n-heksan

destilasi keringkan tanur 50o C

kering tanur 105o C, 1 jam + 300 ml etanol 80% refluks 1 jamTimbang, orientasi lemak + kotoran saring

CONTOH SERBUK KERING50 g serbuk contoh sisaSisa keringn-heksan pencuciSisa contohSisa contoh36 Cuci 3 x 50 ml Et-OH 80% Saring

UJI KLT

Buang

+ EtOH 80% ad 500,0 ml

- pipet

SISAFILTRATAmpas3xFiltratFiltrat ke-3FILTRAT GABUNGANFILTRAT GABUNGANSPIROSTANSPIROSOLAN37 kisatkan kisatkan

+ 7,5 ml HCl 1 M + 3 ml HCl 1 M refluks 3 jam refluks 3 jam

+ 7,5 ml NaOH 1 M + NaOH 1 M ad basa

+ 3 ml HOAc + H2O ad 25,0 ml + 3 x 5 ml CHCl

Spektrofometri

SPIROSOLAN10,0 ML(1,0 g Contoh) 2,0 mL(200 g Contoh) Sisa HidrolisatHidrolisat netralHidrolisatSisa kering Hidrolisat basaHidrolisat netralLapisan airLapisan CHCl3SOLASODIN ALKALOIDA TOTAL38 kisatkan buang + 2,0 ml CHCl3 pipet

Kolom kromatografi Kisatkan

+ HOAc 20% ad 10,0 ml

pipet Lapisan CHCl3Lapisan CHCl3SisaLar. CHCl3 2 ml1,0 mlLapisan CHCl3KLT / HPLCeluatsisaLar cont 10,0 mlSpektrofotometri SPEKTROFOTOMETRI 3,0 2,0 1,0 ml+ HOAc 20% .. 2 3 4 ml+ dapar asetat . 5 55 ml+ jingga metil ..1 11 ml- Kocok 10 .+ +++ CHCl3 .5,0 5,05,0- Ambil lapisan ..CHCl3 CHCl3 CHCl3+ Na2SO4 anh ..250 250250 mg- Saring + ++- Ambil filtrat ..CHCl3 CHCl3 CHCl3- Masukkan dalam + ++- Ukur resapan ..A425 A425 A42540

kisatkan sampai kental

cuci 3 x 5 ml n-heksan + HCl 12 M ad pH 4, refluks 5 jam

+ NaOH 4 M ad basa

+ 3 x 5 ml n-heksan, pisahkan

buang

Spirostan50,0 ml(5,0 g contohSisa kentalHidrolisatHidrolisat basaLap. n-Hekasan(basa)Lap. air41 - cuci dengan ai

+ Na2SO4 anhidrat, saring kuantitatif

- kisatkan

- keringkan tanur 105o C

- timbang, + 2,0 ml CHCl3 Lap. n-Hekasan(basa)Lap. n-Hekasan(netral)FiltratSisaSisa keringLar. CHCl3 2,0 ml42 + 5,0 ml H2SO4 94% kisatkan

KBr / Muyol Lar. CHCl3 2,0 ml1,0 ml5 10 ug6 10 ugLarutan contohDlm H2SO4 94%SisaSediaanI MA250KLT / HPLC43SINTESIS STEROIDHEKOGENINDIOSGENINSOLASODINSTIGMASTEROLKOLESTEROLINTERMED-1PROGESTERONINTERMED-2INTERMEDI-3INTERMED-4INTERMED-5GOL.KORTIKOKORTIKOSTEROIDSTIGMAS-1STIGMAS-2DIOSODIN-1INTERMED-4aGOL.MINERALOKORTIKOSTEROIDDIOSODIN-2GOL.ANTAGONIS MINERALOKORTIKOSTEROIDOksi-MBioSTIGMKOL-1ANDROGENSTIGMKOL-2ESTROGEN19 NOR TESTOSTERONGOL.KONTRASETIK ORAL44SENYAWA-SENYAWA SINTESIS STEROID

SENYAWA-SENYAWA SINTESIS STEROID

SENYAWA-SENYAWA SINTESIS STEROID

KONVERSI DIOSGENIN MENJADI PROGESTERON MENURUT PROSEDUR DEGRADASI MARKER

Sekian,Terima kasih atas perhatianta