Sampel

Pengotor Analit

Eksogen Endogen

Sensitivitas & Selektivitas

PENANGANAN SAMPEL

Pemurnian sampel

Pemurnian awal / penanganan awal

Ekstraksi

Kromatografi

Pemurnian awal

PRE-TREATMENTPresipitasi / denaturasi

protein

Ekstraksi solfen

Liofilisasi Hidrolisis konjugat

Homogenisasi

Derivatisasi kimia sebagai pendahuluan

ekstraksi

Presipitasi / denaturasi protein .... (1)

Protein pengotor endogen :Mengikat obat hasil analisis tidak

validMerusak alat (kolom HPLC)

Presipitasi / denaturasi protein

Perusakan ikatan antara protein dg obat / metabolitnya

Presipitasi / denaturasi protein .... (1)

Penambahan zat kimia

Sentrifugasi

Pemanasan

Ultrafiltrasi

Presipitasi / denaturasi protein .... (1)

Sampel Metanol Asetonitril

Sentrifuge

Endapan Supernatan

Pemanasan

Sentrifuge

Endapan Supernatan

Ekstraksi pelarut untuk menghilangkan seny hidrokarbon

Atur pH

Obat terionisasi

Ekstraksi dg pelarut organik

Fase organik /hidrofobik :hidrokarbon

Fase hidrofilik :Obat terionisasi

Liofilisasi ... (1)

Alasan pemilihan liofilisasi : Air sangat banyak, analit sangat larut air shg tidak

dapat dipisahkan secara ekstraksi pelarut Analit mudah menguap & rusak oleh pemanasan

Contoh : Feses mengandung mikroflora yang merusak

analit pada suhu kamar Feses liofilisasi serbuk larutkan dengan

pelarut yg sesuai ekstraksi

Liofilisasi ... (2)

Sampel dibekukan

Lyophilizer

Uap air divacum

Sublimasi

Padatan kering

Larutkan dg pelarut yg sesuai

Hidrolisis konjugat

Hidrolisis dengan penambahan enzim

Homogenisasi

Derivatisasi kimia

Obat / metabolit ekstraksi rusak Derivat obat / metabolit ekstraksi tidak

rusak Hidralazin ekstraksi pelarut organik (pH

basa) rusak Hidralazin + NaNO3 (pada pH asam)

tetrazolo (1,5a) phthalazin ekstraksi pelarut organik (pH basa) tidak rusak

Ekstraksi

Pemisahan senyawa berdasarkan perbedaan kelarutan

Ekstraksi padat – cairPemisahan senyawa menggunakan

kolom kromatografi.Pemisahan didasarkan perbedaan

kelarutan dalam fase gerak (pelarut)Parameter : konstanta distribusi (KD)

Ekstraksi cair – cair

KD = [Vlarutan x Wsolut dalam fase diam]

[Wfase diam x Wsolut dalam larutan]

Nilai KD dipengaruhi oleh :Polaritas pelarutKecepatan aliran larutanKontak larutan dengan fase diam

Konstanta Distribusi (KD)

Ekstraksi cair – cair ... (1)

Pemisahan didasarkan perbedaan kelarutan senyawa pada pelarut organik & air.

Parameter : koefisien partisi (P) P = Corganik / Cair

Faktor yang mempengaruhi PPelarut yang digunakanpHDerajat ionisasi

Darah utuh

Sentrifuge

serum

analit

protein CHCl3

protein CHCl3

uapkan

analit

Ekstraksi cair – cair ... (2)

Solid Phase Extraction (SPE)

Teknik SPE digunakan untuk pra-perlakuan sampel atau clean-up sampel-sampel yang kotor seperti sampel dengan kandungan matriks yang tinggi seperti garam-garam, protein, polimer, resin dll.

Efisiensi SPE dapat memperoleh recovery yang tinggi (>99 %).

Tahapan SPE

KLT

Fase diam : padat Fase gerak : cair Pemisahan

senyawa Analisis kualitatif &

kuantitatif (kurang sensitiv)

GC

Fase diam : padat / cair

Fase gerak : gas inert Analisis kualitatif &

kuantitatif Untuk pemeriksaan

zat yang volatil & tahan panas

HPLC

Fase diam : padat Fase gerak : cair Analisis kualitatif &

kuantitatif Untuk pemeriksaan

zat yang tidak tahan panas & tidak volatil

Gel Permeation Chromatography

(GPC) Pemisahan berdasar perbedaan ukuran

partikel Fase diam : gel Gel berupa butiran – butiran berpori

(dekstran, poliakrilamid, polistiren) Fase gerak : cair Contoh : pemisahan makromolekul (lemak,

protein, garam) dari sampel

TUGAS KELOMPOK PEKAN DEPAN

Buatlah presentsi kelompok (@ ±5 orang) dengan durasi 15 menit mengenai prosedur ekstraksi untuk obat dan atau metabolitnya dalam sampel biologis beserta contoh penerapannya.

Sub tema pilihan : Metode ekstraksi padat-cair Metode ekstraksi cair-cair Metode kromatografi Metode radiokimia Metode spektroskopi

HATUR NUHUN PISAN ....

Jangan lupa untuk mencari tambahan informasi dari berbagai sumber lainnya...