PraktikumInokulasiMikroba

LaboratoriumTeknologi Industri Hasil Perikanan

Inokulasi Mikroba FPIK-Unpad

1. Tujuan

Praktikum ini bertujuan meningkatkan keterampilan

praktikan dalam menginokulasi mikroba.

2. Landasan Teori

Salah satu tahapan identifikasi mikroba adalah

inokulasi mikroba. Inokulasi dimaksudkan untuk

menumbuhkan, meremajakan mikroba dan mendapatkan

populasi mikroba yang murni. Inokulasi dapat dilakukan

pada media cair (broth) atau padat (solid). Inokulasi

mikroba pada media cair dapat dilakukan menggunakan

media kaldu yang disimpan dalam labu Erlenmeyer.

Inokulasi mikroba pada media padat dapat dilakukan pada

agar lempeng, miring dan tegak. Inokulasi mikroba pada

agar lempeng, yaitu menginokulasi mikroba ke agar

lempeng untuk memurnikan mikroba.

Inokulasi mikroba pada agar lempeng dapat

dilakukan dengan tiga cara, yaitu lempeng gores (streak

plate), lempeng tuang (pour plate), dan lempeng sebar

(spread plate). Inokulasi mikroba dengan cara lempeng

gores dimaksudkan untuk menumbuhkan mikroba pada

agar lempeng dengan cara menggores (streaking)

permukaan agar menggunakan jarum ose yang mengandung

mikroba inokulan. Dengan teknik ini mikroba yang

tumbuh akan tampak dalam bentuk goresan. Ada beberapa

Mikrobiologi Perikanan 1



teknik menggores yang biasa digunakan (Gambar 1).

Gambar 1. Pola goresan pada media agar

Sumber : http://www.studentsguide.in/microbiology/microbiology-tools-techniques/images/various-methods-of-streaking.jpg&imgrefurl

Inokulasi mikroba dengan cara lempeng tuang

dimaksudkan untuk menumbuhkan mikroba di media agar

dengan cara mencampurkan kultur mikroba ke media agar

hangat yang masih cair. Teknik ini bertujuan agar mikroba

tumbuh tersebar merata di seluruh media agar. Inokulasi

mikroba dengan cara lempeng sebar dimaksudkan untuk

menumbuhkan mikroba di bagian permukaan media agar.

Cara inokulasi ini dapat dilakukan dengan dua cara, yaitu

dengan pemipetan (pipetting) dan penghapusan (swabbing).


http://www.studentsguide.in/microbiology/microbiology-tools-techniques/images/various-methods-of-streaking.jpg&imgrefurl

http://www.studentsguide.in/microbiology/microbiology-tools-techniques/images/various-methods-of-streaking.jpg&imgrefurl



(a) (b)

Gambar 2. Inokulasi mikroba dengan metode tuang (a) dan pipet (b)Sumber :

http://biology.clc.uc.edu/fankhauser/Labs/Microbiology/Bacterial_Inhibition/Pour_seeded_agar_P7231208md.jpg&imgrefurl

Agar miring (slant), yaitu menginokulasi mikroba

ke agar miring di dalam tabung reaksi untuk melihat

karakteristik koloni mikroba yang tumbuh. Setiap bakteri

memiliki karakteristik koloni yang khas. Agar tegak

(deep), yaitu menginokulasi mikroba ke agar tegak dalam

tabung reaksi untuk melihat karakteristik koloni mikroba

yang tumbuh.

(a) (b)

Gambar 3. Inokulasi mikroba pada agar miring (a) dan agar tegak (b)Sumber : http://a-s.clayton.edu/furlong/BIOL2250LAB/Reviews/pictures/tsi.jpg


http://a-s.clayton.edu/furlong/BIOL2250LAB/Reviews/pictures/tsi.jpg



3. Alat dan Bahan

3.1. Alat

a. Ose

b. Lampu Bunsen

c. Tabung reaksi

d. Inkubator

e. Tisu

3.2. Bahan

a. Agar tegak dan agar miring

b. Biakan fermentasi kubis

4. Prosedur Kerja

Untuk menginokulasi mikroba, semua peralatan dan lingkungan

harus steril sehingga dapat dicegah kemungkinan terjadinya

kontaminasi. Adapun tahapan inokulasi mikroba adalah :

1. Sterilisasi ruang, peralatan, pakaian dan praktikan sehingga dapat

meminimalkan terjadinya kontaminasi . Sterilisasi dapat dilakukan

secara kering atau basah.

2. Lakukan pengambilan mikroba dari cairan fermentasi kubis dan

inokulasikan ke media agar miring dan agar tegak. Pengambilan

mikroba dilakukan dengan menggunakan ose sebagai berikut :


http://a-s.clayton.edu/furlong/BIOL2250LAB/Reviews/pictures/tsi.jpg



Panaskan ujung ose hingga berpijar. Bagian api berwarna biru paling panas sehingga bias memanaskan ose lebih cepat. Panaskan pula kawat baja hingga ke pangkal pegangan. Dinginkan ose selama 10-20 detik. Ose jangan diletakkan di atas meja untuk mencegah kontaminasi.

Pegang tabung reaksi berisi mikroba dan tabung reaksi yang akan diinokulasi pada satu tangan, sementara tangan lainnya tetap memegang ose. Buka kedua tutup tabung reaksi menggunakan tangan yang memegang ose

Panaskan mulut tabung reaksi dengan melewatkan sekilas melalui api

Ambil sample mikroba dari tabung reaksi menggunakan ose, baik ose berbentuk lingkaran atau jarum




Panaskan kembali mulut tabung reaksi sebelum ditutup

Sentuhkan koloni mikroba pada ujung ose ke media tanpa merusak permukaan agar.

Saat menginokulasi ke media agar tegak dan miring, goreskan ose lingkaran ke permukaan media agar dengan pola lurus atau zigzag secara hati-hati tanpa ditekan sehingga tidak merusak permukaan agar. Inokulasi pada agar tegak dilakukan dengan menusukkan ose jarum ke dalam media agar hingga mencapai dasar tabung reaksi dan kemudian dicabut kembali.

Sumber : faculty.clintoncc.suny.edu/.../Procaryotes.htm

3. Mikroba yang telah diinokulasi selanjutnya diinkubasi selama 2 x 24

jam di dalam incubator.

4. Amati karakteristik koloni mikroba yang tumbuh.

5. Hasil Pengamatan


http://faculty.clintoncc.suny.edu/faculty/Michael.Gregory/files/Bio%20102/Bio%20102%20Laboratory/Prokaryotes/Procaryotes.htm



Berdasarkan prosedur kerja yang dilaksanakan,

maka lakukan pengamatan terhadap hasil inokulasi. Buat

gambar pertumbuhan mikroba dari masing-masing teknik

inokulasi.

Gambar Deskripsi

Agar miring

Agar tegak

6. Pembahasan

Buat pembahasan mengenai kegiatan praktikum

inokulasi mikroba yang saudara kerjakan. Kesimpulan apa

yang Saudara dapatkan?




................................................................................................

................................................................................................

................................................................................................

................................................................................................

................................................................................................

................................................................................................

................................................................................................

................................................................................................

................................................................................................

................................................................................................

................................................................................................

................................................................................................

................................................................................................

................................................................................................

................................................................................................

................................................................................................

................................................................................................

................................................................................................

................................................................................................

................................................................................................

................................................................................................

................................................................................................

................................................................................................

................................................................................................

7. Pendalaman




Untuk meningkatkan pemahaman mengenai proses

inokulasi mikroba, maka praktikan diwajibkan menjawab

pertanyaan berikut ini :

1. Apa tujuan utama inokulasi mikroba pada media

lempeng agar?

…………………………………………………………

…………………………………………………………

…………………………………………………………

…………………………………………………………

…………………………………………………………

2. Berdasarkan hasil yang diperoleh, jelaskan oleh

Saudara apa perbedaan tujuan inokulasi mikroba pada

media agar miring dan agar tegak?

…………………………………………………………

…………………………………………………………

…………………………………………………………

…………………………………………………………

…………………………………………………………

8. Pustaka

Apriyantono, A., D. Fardiaz, N.L. Puspitasari, Sedarnawati dan S. Budiyanto. 1989. Petunjuk Laboratorium Analisis Pangan. Departemen Pendidikan dan Kebudayaan, Direktorat Jenderal Pendidikan




Tinggi. Pusat Antar Universitas Pangan dan Gizi. Institut Pertanian Bogor.

Cappuccino J.G. and N. Sherman. 1987. Microbiology : A Laboratory Manual. The Benjamin/Cummings Publishing Company, Inc. Menlo Park, California.

Furlong. 2008. Media Study Guide. http://a-s.clayton.edu/furlong/BIOL2250LAB/Reviews/pictures/tsi.jpg&imgrefurl

Post, F.J. 1988. A Laboratory Manual for Food Microbiology and Biotechnology. Star Publishing Company, United State of America.

Prokaryotes. http ://faculty.clintoncc.suny.edu/.../ Procaryotes.htm

Streaking Agar Plates. 2008. http://www.madsci.org/~lynn/ micro/techniques/streaking/secondary.

Seeley, H.W., P.J. Vandemark dan J.J. Lee. Microbe in Action. A Laboratory Manual of Microbiology. W.H. Freeman and Company, New York.


http://www.madsci.org/~lynn/%20micro/techniques/streaking/secondary

http://www.madsci.org/~lynn/%20micro/techniques/streaking/secondary



PraktikumInokulasiMikroba

Documents

Transcript of PraktikumInokulasiMikroba