CETIS 62

PRACTICA No.6

IDENTIFICACION DE PROTEINAS

Lerma Acosta Nohemi Yunuen Leyja Rangell Selene GuadalupePerez Alvarez ErnestoYepez Vazquez MarianaValenzuela Toledo Katya

OBJETIVO: Realizar experimentos para identificar las proteínas, como la configuración y la identificación por el reactivo BIURET.

MARCO TEORICO:

Las proteínas son materiales que se desempeñan el mayor número de las funciones de las células de todos los seres vivos. Forman parte de su estructura básica de los tejidos y desempeñan funciones metabólicas y reguladoras también son seres vivos que definen la identidad de cada ser vivo, ya que son la base de la estructura del código genético ADN y de los sistemas de reconocimiento de organismos extraños en el sistema inmunológico.

Por sus propiedades físico-químicas, las proteínas se pueden clasificar en proteínas simples (holoproteidos), que por hidrólisis dan solo aminoácidos o sus derivados; proteínas conjugadas (heteroproteidos), que por hidrólisis dan aminoácidos acompañados de sustancias diversas, y proteínas derivadas, sustancias formadas por desnaturalización y desdoblamiento de las anteriores. Las proteínas son indispensables para la vida, sobre todo por su función plástica (constituyen el 80% del protoplasma deshidratado de toda célula), pero también por sus funciones biorreguladora (forma parte de las enzimas) y de defensa (los anticuerpos son proteínas).

Las proteínas desempeñan un papel fundamental para la vida y son las biomoléculas más versátiles y más diversas. Son imprescindibles para el crecimiento del organismo. Realizan una enorme cantidad de funciones diferentes, entre las que destacan:

Estructural. Esta es la función más importante de una proteína (Ej: colágeno),

Inmunológica (anticuerpos), Enzimática (Ej: sacarasa y pepsina),

Contráctil (actina y miosina). Homeostática: colaboran en el mantenimiento del pH (ya que actúan como

un tampón químico), Transducción de señales (Ej: rodopsina) Protectora o defensiva (Ej: trombina y fibrinógeno)

Las proteínas están formadas por aminoácidos los cuales a su vez están formados por enlaces peptídicos para formar esfingocinas.

Las proteínas de todos los seres vivos están determinadas mayoritariamente por su genética (con excepción de algunos péptidos antimicrobianos de síntesis no ribosomal), es decir, la información genética determina en gran medida qué proteínas tiene una célula, un tejido y un organismo.

Las proteínas se sintetizan dependiendo de cómo se encuentren regulados los genes que las codifican. Por lo tanto, son susceptibles a señales o factores externos. El conjunto de las proteínas expresadas en una circunstancia determinada es denominado proteoma.

REACCIONES COLOREADAS ESPECIFICAS (BIURET)

MATERIAL

l 1 Gradilla

l Pescado

l Espinaca

l Levadura

l Tubos de ensaye

l Albumina

l Grenetina

l Caseina

REACTIVOS

l NaOH al 10%

l Sulfato cúprico al 1% en gotero

PROCEDIMIENTO

1. En cada tubo de endaye colocae 2 mL de dolucion de proteina

2. Añadir a cada tubo 2 mL de NaOH al 10% y agitar

3. Agregar gota a gota solucion de sulfato cuprico al 1% hasta la aparicion de

un color rosa o violeta (maximo 10 gotas)

4. Reportar a que gota aparece el color

RESULTADOS

Proteina No. De Gota

Espinaca No obtuvo coloracionGrenetina Tercer gotaHuevo Segunda gotaLeche Segunda gotaLevadura Tercer gotaPescado Segunda gota

REACCION XANTOPROTEICA

MATERIAL REACTIVOS

Tubos de ensaye proteínas Gradilla NaOH concentrado (gotero)Baño maría HNO3 concentrado

PROCEDIMIENTO1. Colocar en cada tubo de ensaye 3ml de proteína.2. Añadir con cuidado y lentamente 1ml de HNO3 concentrado.3. Calentar en baño maría por 2min, y enfriar a chorro de agua.4. Agregar gota a gota solución de NaOH concentrado (máximo 10 gotas) a él

vire de color. Observar y reportar resultados.

RESULTADOS:

proteina Características y/o observaciones

imagen

leche

Tuvo un cambio de color amarillento con consistencia espesosa y muy liquida en el precipitadosoluble

albumina

Cambio de color blanco y amarillo y su consistencia se volvió solidasoluble

espinaca

Las espinacas se fueron al precipitado y los reactivos quedaron en la parte inferior y su consistencia no cambioNo soluble

proteina Características y/o observaciones

imagen

leche

Tuvo un cambio de color amarillento con consistencia espesosa y muy liquida en el precipitadosoluble

albumina

Cambio de color blanco y amarillo y su consistencia se volvió solidasoluble

espinaca

Las espinacas se fueron al precipitado y los reactivos quedaron en la parte inferior y su consistencia no cambioNo soluble

OBTENCIÓN DE CASEINA DE LA LECHE

MATERIAL REACTIVOS2 vasos de precipitados de 250ml leche entera1 probeta de 100ml HCl 0.2N1 embudo acetona2 papel filtro éter

PROCEDIMIENTO1. Colocar 100ml de leche en un vaso de precipitado2. Agregar 100ml de agua destilada3. Con una pipeta añadir HCl 0.2N hasta obtener un pH de 4.84. Dejar reposar hasta que el sedimento precipite.5. Suspender el precipitado en 100ml de agua destilada y dejar reposar.6. Repetir este lavado 4 veces.7. Filtrar el precipitado final en un embudo Buchner, colectando en el papel la proteína.8. Suspender la caseína en 25ml de agua destilada, agitar para homogeneizar y filtrar. Repetir 4 veces.9. Después del último lavado, suspender la proteína en 5ml de éter y 5ml de acetona, y filtrar.10. Colocar el polvo obtenido en un desecador con cloruro de calcio y pesar el polvo 24 horas después.

Observaciones y Resultados

Por cuestiones de tiempo en el laboratorio se omitió el paso numero 10 de la practica. Asì que solo se quedo hasta la suspensión en el éter y acetona.El resultado fue un fino polvo blanco que se le llama caseina, y se obtuvo de La leche como el nombre de la practica lo indica.

COAGULACION POR CALOR

MATERIAL REACTIVOS

16 Tubos de ensaye Acido acético al 1%Gradilla Acetona Baño maría Éter

Tetracloruro de carbono Butanol

Proteínas NaOH concentrado con

gotero

PROCEDIMIENTO

1. Calentar a hervir 5ml de solución de proteína 2. Añadir 2 gotas de acido acético al 1% 3. Colocar en 4 tubos, la solución repartida por igual y agregar de la siguiente

manera: Tubo1= 1ml acetona Tubo2= 1ml de éterTubo3= 1ml de butanolTubo4= 1ml tolueno

4. Agitar fuertemente para tratar de disolver el coagulo. Reportar en tabla.5. Los tubos que no disolvieron el coagulo, agregar 3 gotas de NaOH

concentrado, y agitar.6. Observar y anotar diferencias.

RESULTADOS:

SI= coagualo NO= no coagulo

Pescado Levadura Grenetina Albumina Leche Espinaca

acetona no si si si si no

éter si si si no si no

butanol si no no si si si

tolueno si si no si no si

CUESTIONARIO

1. ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de las PROTEINAS?

Por la pérdida de las estructuras de orden superior quedando la cadena polipeptídica reducida a un polímero estadístico sin ninguna estructura tridimensional fija.

2. Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalización?Los químicos por su fuerza iónica

3. ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína?Por la técnica de Biuret gracias a la coloración

4. Que coloración da la reacción del Biuret?Entre azul fuerte y morado

5. ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del Biuret?Si ya que el reactivo actúa con las proteína ya sea solida o liquida.

6. Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido como la Glicina ¿es positiva o negativa? ¿Por qué?Negativa, el reactivo solo actúa con proteínas más no con aminoácidos por que no existen enlaces peptidicos.

7. Explica la reacción Xantoproteíca.

Se usa para determinar la presencia de proteínas solubles en una solución, empleando nítrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos aromáticos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali, se torna color amarillo oscuro o a su pH acido.

CONCLUSIONES:

La elaboración de esta practica nos fue muy útil para saber identificar las proteínas gracias a reactivos como el Biuret dada su coloración morado/violeta.

La consistencia de la proteína de la leche de vaca es decir la caseina, también observamos como actúa rápidamente la coagulación de proteínas con algunos reactivos.