nn

Kelompok :Ayu PermatasariA0111001M.NaufalA0111004Rora Junita CahyatiA0111006Selvi YuliantiA0111008Erna IrianiA0111013

ISOLASI BAHAN ALAM LAUT

TUJUAN..Adalah untuk memberikan beberapa petunjuk praktis dalam proses ekstraksi dan isolasi bahan alam laut.perhatian khusus diberikan kepada prosedur isolasi yang disesuaikan dengan karakteristik fisik dan kimia dari senyawa-senyawa yang terisolasi.

Ketidakpastian taksonomi dan informasiKuantitas kecil Metabolit Ketidakstabilan metabolitPemurnian senyawa yang larut air : pengaruh air tinggi dan garam Senyawa yang kekurangan UV Kromofor Biaya dan waktuRintangan dalam isolasi dari produk alami laut

Kromatografi..Pemisahan tergantung pada afinitas komponen terhadap fase diam dan fase gerak. Menurut sifat fase gerak, kromatografi dapat diklasifikasikan menjadi kromatografi gas (GC), kromatografi cair (LC) dan superkritis cairan kromatografi (SFC).

Pendekatan Umum untuk Pemurnian Produk Bahan Alam Lauta. Pengumpulan dan Penyimpanan Organisme Laut Penanganan organisme laut selama pengumpulan sangat kritis. harus diambil tindakan untuk menghindari dekomposisi senyawa. informasi pada organisme dan tempat pengumpulan harus hati-hati dicatat untuk memfasilitasi pengumpulan dan identifikasi taksonomi berikutnya.

b. Ekstraksi.Pilihan metode ekstraksi tergantung pada tujuan proses isolasi, fasilitas yang tersedia, serta keuntungan intrinsik dan kerugian prosedur .Metode pertama melibatkan maserasi sampel dengan pelarut, diikuti dengan penyaringan atau sentrifugasi. Residu jaringan dikembalikan ke wadah ekstraksi dan diekstraksi lagi. Proses berlanjut sampai tidak ada hasil ekstraktif diperoleh. Sampel biasanya dipotong menjadi potongan-potongan kecil atau ditumbuk menjadi partikel halus untuk memfasilitasi penetrasi pelarut.

Ekstrak mentahTahap 2 Dereplikasi Pemurnian akhirTahap 1(NMR, MS, TLC dan analisis biologi)Tahap 3Fraksinasi mentahGambar. Pendekatan umum untuk fraksinasi ekstrak laut.c. Fraksinasi ekstrak lautUmumnya, prosedur fraksinasi melalui 4 tahap

Tahap I..

1. Investigasi Sifat Komponen ExtractTahap ini mungkin merupakan tahap yang paling penting dalam proses isolasi. Perencanaan skema fraksionasi terutama tergantung pada informasi yang tersedia pada sifat dari zat aktif. Selain itu, pengetahuan tentang sifat kimia dan / atau aktivitas biologis senyawa target yang efisien dapat memandu proses pemisahan.

a. PENYARINGAN BIOLOGI Bioassay-dipandu fraksinasi sangat menarik untuk penelitian tentang penemuan obat dari sumber alami. Hal ini penting untuk menjaga sampel referensi dari fraksi yang diperoleh setelah setiap langkah pemisahan sehingga dapat diuji secara biologis dan berfungsi sebagai catatan pada setiap tahap proses . Namun, salah satu masalah yang paling sulit dalam bioassay- fraksinasi adalah kemungkinan mendapatkan positif palsu dan negatif palsu.

b. ANALISIS TLC

Analitis pelat TLC dapat digunakan untuk mendapatkan ide tentang tingkat polaritas dan/atau hidrofilisitas komponen ekstrak yang berbeda. Metode ini juga banyak diterapkan dalam mendeteksi senyawa melalui beberapa langkah pemisahan.Selain itu, juga dapat digunakan untuk memprediksi pola pemisahan pada kromatografi kolom, dan dengan demikian membantu dalam memilih sistem kolom kromatografi terbaik. Serta dapat membantu dalam menilai tingkat kemurnian senyawa hasil isolasi.

c. ANALISIS NMR Analisis spektroskopi NMR memiliki peran yang sangat diperlukan dalam menjelaskan struktur senyawa murni. Hal ini juga dapat memberikan banyak informasi tentang sifat kimia senyawa dalam campuran.

d. ANALISIS MS MS adalah teknik yang digunakan untuk mengidentifikasi berat molekul dari senyawa yang tidak diketahui oleh pengionnya dan mendeteksi rasio massa terhadap muatan (m / z) dari ion molekul yang dihasilkan. Molekul yang tidak terionisasi tidak akan terdeteksi. Salah satu keuntungan dari teknik ini memiliki sensitivitas tinggi. Ia bahkan bisa mendeteksi jumlah mikrogram senyawa.

Tahap II.

DereplikasiIsolasi senyawa murni dari ekstrak laut adalah proses yang mahal. Langkah-langkah harus diambil untuk menghindari isolasi senyawa yang dikenal. Dereplikasi dapat didefinisikan sebagai upaya untuk menghapus senyawa duplikat.

Tahap III.

Crude Fraksinasi Tujuan dari tahap ini adalah untuk menyederhanakan komposisi ekstrak dengan membaginya kedalam berbagai kelompok senyawa berbagi karakteristik fisikokimia yang sama dan atau menghapus sebagian besar bahan yang tidak diinginkan dan dengan demikian memperbanyak ekstrak sehubungan dengan senyawa sasaran. prosedur umum melibatkan partisi pelarut, defatting, dan desalting.

1. Partisi pelarut Keuntungan metode ini adalah perolehan kembali senyawa sasaran. Kelemahannya adalah masalah pembentukan emulsi, ketidakefektifan waktu dan banyaknya penggunaan pelarut.

2. Defatting Sejumlah prosedur telah dijelaskan untuk defatting ekstrak laut. Penggunaan Sephadex LH-20 dan MeOH: CH2Cl2 (1: 1 v / v) sebagai eluen adalah salah satu prosedur yang umum digunakan. Lemak dan senyawa organik non polar biasanya dielusi pertama. Prosedur umum lainnya melibatkan penggunaan cartridge SPE yang mengandung silika C18 dan MeOH atau H2O sebagai cairan pencuci.

3. Penghilangan garam Metode yang paling efisien untuk desalting ekstrak laut telah dijelaskan oleh West dan Northcote dan West. Dalam prosedurnya, ekstrak metanol dilewatkan melalui kolom Diaion HP20 resin (styrene-divinil benzena polimer) sebelumnya dikalibrasi dengan MeOH. Eluen terkonsentrasi dan melewati lagi kolom yang sama. Eluen yang dihasilkan diencerkan dengan air dan melewati kolom.

Tahap IV

Pemurnian Akhir HPLC preparatif, sejauh ini, merupakan alat yang paling berguna untuk memisahkan campuran kompleks. Ketika dihubungkan dengan diode array detector (DAD), HPLC memungkinkan seorang analis untuk mengidentifikasi senyawa yang dikenal dengan perbandingan waktu retensi dan spektrum UV. Pengenalan evaporative light scattering detector (ELSD) memungkinkan untuk mendeteksi senyawa yang tidak memiliki gugus kromofor UV.

1. UV DIODA ARRAY DETECTOR (DAD) Detektor UV Fotodioda array memungkinkan pengumpulan data absorbansi UV di banyak panjang gelombang secara bersamaan dan dengan demikian memungkinkan penilaian kemurnian puncak. Kotoran dasar dapat dengan mudah dideteksi dengan membandingkan spektra UV pada titik waktu yang berbeda di puncak.

2. EVAPORATIVE LIGHT-SCATTERING DETECTOR (ELSD) ELSD telah dikembangkan untuk melengkapi deteksi UV senyawa dengan daya absorbansi yang lemah. Di ELSD, efluen HPLC nebulized dan kemudian menguap dalam tabung melayang yang dipanaskan, yang menghasilkan embun partikel analit yang melewati seberkas cahaya.

Partikel analit menghamburkan cahaya dan menghasilkan sinyal. Berbeda dengan detektor UV, koefisien kehilangan analit tidak berpengaruh pada respon ELSD. Dengan demikian, ELSD merupakan metode deteksi konsentrasi pilihan untuk LC. Ketika ELSD terhubung ke HPLC preparatif, efluen dari kolom dibagi dan hanya sebagian kecil diarahkan ke detektor.

3. LC-MS DAN LC- NMRLC-MS adalah alat yang paling banyak diterapkan untuk dereplikasi bahan alami Hal ini terutama karena berat molekul nominal dapat digunakan sebagai permintaan pencarian di hampir semua database.

4. LC-NMR Kemajuan terbaru dalam spektroskopi NMR telah memungkinkan rangkaian langsung dengan sistem HPLC. Penggunaan medan magnet yang tinggi (500 MHz atau lebih besar), Sel aliran volume kapiler mikroliter, dan sistem pemrosesan sinyal digital telah secara dramatis meningkatkan sensitivitas untuk melacak jumlah analit. Bagaimanapun, teknik ini masih lambat dan sangat mahal.

Gambar. garis Skema pipa dari sepbox. Gambar direproduksi dengan izin dari Perusahaan Brosur Sepiatec.

d. Vistas baru Pada Teknologi Pemisahan dengan metode sepbox