PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI · segala kerja sama, dukungan, ... Mbak Sum, Ocha, Eva,...

i

EFEK HEPATOPROTEKTIF JANGKA PENDEK DEKOK

BIJI Persea americana Mill. TERHADAP AKTIVITAS ALT-AST

PADA TIKUS TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm)

Program Studi Farmasi

Oleh:

Angelia Rosari

NIM : 108114115

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2013

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

ii


iii


iv

HALAMAN PERSEMBAHAN

Kekuatan Di Hidupku

Ku Dapat Dalam Yesus

Dia Tak Pernah Tinggalkanku

Setia Menopangku

Berseru, Berharap Dalam Yesus

(edward chen)

Karena ada bunga mati, maka banyaklah buah yang tumbuh,

demikianlah pula dalam hidup manusia bukan? Karena ada angan-

angan mudah mati, kadang-kadang timbullah angan-angan lain,

yang lebih sempurna, yang boleh menjadikan buah.

(R. A. Kartini)

Kupersembahkan tulisan kecil ini untuk

Yesus Kristus Dan Bunda Maria sumber kuat dan harapanku,

yang mencintai, memberkati dan menyertai segala jalanku

Mamaku, Papaku, dan adikku

yang tak pernah berhenti menyayangi

dan menyemangatiku..


v


vi


vii

PRAKATA

Puji syukur penulis panjatkan kepada Bapa atas berkat, kasih, anugerah,

dan kuasaNya, sehingga skripsi yang berjudul EFEK HEPATOPROTEKTIF

JANGKA PENDEK DEKOK BIJI Persea americana Mill. TERHADAP

AKTIVITAS ALT-AST PADA TIKUS TERINDUKSI KARBON

TETRAKLORIDA dapat dikerjakan dengan sebaik-baiknya. Skripsi ini disusun

untuk memenuhi salah satu persyaratan untuk memperoleh gelar Sarjana Strata

Satu Program Studi Farmasi (S. Farm) Fakultas Farmasi Universitas Sanata

Dharma Yogyakarta.

Dalam menyelesaikan skripsi ini, penulis menyadari bahwa ada banyak

bantuan dan dukungan dari berbagai pihak, baik secara langsung maupun tidak

langsung. Oleh karena itu, tanpa mengurangi rasa hormat, penulis hendak

mengucapkan terima kasih kepada:

1. Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi

Universitas Sanata Dharma Yogyakarta

2. Ibu Phebe Hendra, M.Si., Ph.D., Apt. selaku Dosen Pembimbing dan Dosen

Penguji pada skripsi ini, atas segala bimbingan, bantuan, motivasi, dan saran

yang diberikan kepada penulis selama proses pengerjaan skripsi tersebut.

3. Bapak Prof. Dr. C. J. Soegihardjo, Apt. selaku Dosen Penguji pada skripsi ini

yang telah memberikan saran kepada penulis.

4. dr. Fenty, M.Kes., Sp.PK selaku Dosen Penguji pada skripsi ini, atas saran

dan dukungannya kepada penulis.


viii

5. Ibu Rini Dwiastuti., Apt. selaku Kepala Laboratorium Fakultas Farmasi yang

telah memberikan izin dalam penggunaan semua fasilitas laboratorium untuk

kepentingan dan keberlangsungan skripsi tersebut.

6. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si., yang telah memberikan bantuan dalam

determinasi biji Persea americana.

7. Bapak Heru, Bapak Parjiman, Bapak Kayat, Bapak Kunto, dan Bapak

Suparlan selaku laboran Laboratorium Fakultas Farmasi atas bantuan dan

dukungannya kepada penulis selama proses pngerjaan skripsi tersebut.

8. Keluargaku Mama Li Sian Lay, Papa Mikael NES, adikku Maria Charin da

Christa, Kokoku Harry Siestanto, Mbah, Om Agus, dan Ce Fretty atas segala

cinta, doa, nasihat, dukungan, dan batuan yang selalu mengiringiku.

9. Rekan-rekan Tim Persea americana: Ni Luh Putu Dian P.P., Lydia Setiawan,

Gidion Krisnadi Yoseph, Inneke Devi P. S., Irene, Rotua, Komang Ayu N.,

Ike Kumalasari, Priscilla D.V.V., Liana Risha G., Robert Dwijantara Putra,

Maria Malida V. S., Yudhytha Anggarhani Q., dan Adrienne Roma A. atas

segala kerja sama, dukungan, dan bantuannya.

10. Sahabat dan partner segala tugas praktikum serta diskusi Agriva Devaly A.,

Yudhytha Anggarhani Q., Evan Gunawan, dan Stefanus Indra.

11. Para sahabat tercinta Hendy Larsen, Denny Krisandi, Priscilla Novelia Sari,

Gabriella Indria, Arellia Oktaviori, Eva Christiana, dan Wuri Kinanti atas

doa, motivasi, dan sarannya.

12. Teman luar biasaku Andreas Wilasto Anggit buat semua doa, dukungan,

semangat, dan saran yang tiada pernah habisnya menyertai perjuanganku.


ix

13. Keluarga besar Wisma Ananda: Mbak Sum, Ocha, Eva, Helen, Maria, Indah,

Kak Liza atas semua dukungan dan doa yang mengiringiku.

14. Om Budi (Alm.), Tante Hastuti, Mas Bowo, Mbak Asri, dan Mbak Risty

terima kasih buat semua dukungan, dan doa yang diberikan kepada penulis.

15. Teman-teman FKK B 2010 dan teman-teman Fakultas Farmasi USD 2010

atas kebersaamaan dan dukungannya.

16. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu per satu oleh penulis yang

telah ikut membantu selama proses penyusunan skripsi tersebut.

Penulis menyadari bahwa dalam skripsi ini masih terdapat kekurangan

mengingat keterbatasan pengetahuan dan kemampuan yang dimiliki oleh penulis.

Oleh karena itu, penulis mengharapkan kritik dan saran yang bersifat membangun.

Penulis juga berharap semoga skripsi tersebut dapat bermanfaat bagi

perkembangan ilmu pengetahuan, terutama pada bidang farmasi, maupun

masyarakat.

Yogyakarta, Oktober 2013

Penulis


x

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL ........................................................................................... i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ................................................ ii

HALAMAN PENGESAHAN ........................................................................... iii

HALAMAN PERSEMBAHAN ....................................................................... iv

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................................................ v

PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI ............................................. vi

PRAKATA ....................................................................................................... vii

DAFTAR ISI ...................................................................................................... x

DAFTAR TABEL ........................................................................................... xiv

DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... xv

DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................. xvii

INTISARI ...................................................................................................... xviii

ABSTRACT ...................................................................................................... xix

BAB I. PENGANTAR ....................................................................................... 1

A. Latar Belakang Penelitian ........................................................................... 1

1. Rumusan masalah ........................................................................... 2

2. Keaslian penelitian .......................................................................... 3

3. Manfaat penelitian .......................................................................... 3

B. Tujuan Penelitian ........................................................................................ 4

1. Tujuan umum .................................................................................. 4

2. Tujuan khusus ................................................................................. 4


xi

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA ....................................................................... 5

A. Anatomi dan Fisiologi Hati ......................................................................... 5

B. Fungsi Hati .................................................................................................. 7

C. Jenis Kerusakan Hati ................................................................................... 8

1. Perlemakan (Steatosis) .................................................................... 8

2. Nekrosis hati ................................................................................... 9

3. Kolestasis ........................................................................................ 9

4. Sirosis ............................................................................................ 10

D. Hepatotoksin ............................................................................................. 10

1. Hepatotoksin teramalkan (Tipe A) ................................................ 10

2. Hepatotoksin tak teramalkan (Tipe B) .......................................... 10

E. ALT dan AST ........................................................................................... 11

F. Karbon Tetraklrorida ................................................................................. 11

G. Persea americana Mill. ............................................................................ 12

1. Taksonomi ..................................................................................... 12

2. Nama lain ...................................................................................... 13

3. Morfologi ...................................................................................... 13

4. Kandungan kimia .......................................................................... 14

5. Khasiat dan kegunaan ................................................................... 14

H. Landasan Teori .......................................................................................... 15

I. Hipotesis ................................................................................................... 16

BAB III. METODE PENELITIAN .................................................................. 17

A. Jenis dan Rancangan Penelitian ................................................................ 17


xii

B. Variabel dan Definisi Operasional ............................................................ 17

1. Variabel utama .............................................................................. 17

2. Variabel pengacau ......................................................................... 17

3. Definisi operasional ...................................................................... 18

C. Bahan Penelitian ....................................................................................... 19

1. Bahan utama .................................................................................. 19

2. Bahan kimia .................................................................................. 19

D. Alat Penelitian ........................................................................................... 21

E. Tata Cara Penelitian .................................................................................. 21

1. Determinasi serbuk biji P. americana .......................................... 21

2. Pengumpulan bahan uji ................................................................. 21

3. Pembuatan serbuk biji P. americana ............................................ 21

4. Penetapan kadar air pada serbuk kering biji P. americana ........... 22

5. Pembuatan dekok serbuk biji P. americana .................................. 22

6. Pembuatan larutan karbon tetraklorida konsentrasi 50% ............... 22

7. Uji pendahuluan ............................................................................ 23

8. Pengelompokkan dan perlakuan hewan uji ................................... 24

9. Pembuatan serum .......................................................................... 24

10. Pengukuran aktivitas ALT dan AST ............................................. 24

F. Tata Cara Analisis Hasil ........................................................................... 25

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................ 27

A. Penyiapan Bahan ....................................................................................... 27

1. Hasil determinasi serbuk biji P. americana ................................. 27


xiii

2. Penetapan kadar air serbuk kering biji P. americana .................... 27

B. Uji Pendahuluan ........................................................................................ 28

1. Penentuan dosis hepatotoksik karbon tetraklorida ........................ 28

2. Penentuan waktu pencuplikan darah ............................................. 29

C. Hasil Uji Waktu Protektif Pemberian Dekok Biji P. americana

Secara Jangka pendek pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida .......... 32

1. Kontrol negatif (olive oil 2 ml/kgBB) ........................................... 36

2. Kontrol hepatotoksin (karbon tetraklorida 2 ml/kgBB) ................ 39

3. Kontrol perlakuan (dekok biji P. americana dosis 360,71

mg/kgBB ....................................................................................... 40

4. Kelompok praperlakuan dekok biji P. americana dosis

360,71 mg/kgBB pada tikus jantan terinduksi karbon

tetraklorida 2 ml/kgBB ................................................................. 41

BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN .......................................................... 47

A. Kesimpulan ............................................................................................... 47

B. Saran ......................................................................................................... 47

DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................... 49

LAMPIRAN ..................................................................................................... 52

BIOGRAFI PENULIS ..................................................................................... 94


xiv

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel I. Rata-Rata Aktivitas ALT-AST Tikus Setelah Induksi

Karbon Tetraklorida dengan Dosis 2 ml/kgBB Saat

Pencuplikan Darah pada Jam ke-0, 24, dan 48 (n=3) .................... 29

Tabel II. Hasil Uji Scheffe Aktivitas ALT Tikus Terinduksi Karbon

Tetraklorida Dosis 2 ml/kgBB pada Pencuplikan Darah

Jam ke-0, 24, dan 48 ...................................................................... 30

Tabel III. Hasil Uji Scheffe Aktivitas AST Tikus Terinduksi Karbon

Tetraklorida Dosis 2 ml/kgBB pada Pencuplikan Darah

Jam ke-0, 24, dan 48 ...................................................................... 31

Tabel IV. Pengaruh Waktu Protektif Pemberian Dekok Biji P.

americana Secara Jangka pendek Terhadap

Hepatotoksisitas Karbon Tetraklorida pada Aktivitas

Serum ALT dan AST .................................................................... 33

Tabel V. Hasil Analisis Statistik Uji Post Hoc Mann Whitney dari

Kebermaknaan ALT Antar Kelompok .......................................... 34

Tabel VI. Hasil Analisis Statistik Uji Post Hoc Scheffe dari

Kebermaknaan AST Antar Kelompok .......................................... 36

Tabel VII. Perbandingan Kontrol Olive Oil Jam ke-0 dan 24 pada

Aktivitas Serum ALT dan AST Hewan Uji (n=5) ........................ 37


xv

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Penampang Mikroskopik Hati .................................................... 7

Gambar 2. Struktur Mikroskopik Hepar yang Mengalami Steatosis ........... 9

Gambar 3. Struktur Molekul Karbon Tetraklorida ..................................... 11

Gambar 4. Mekanisme Oksidasi dan Biotransformasi Karbon

Tetraklorida .............................................................................. 12

Gambar 5. Diagram Batang Orientasi Aktivitas ALT Tikus Setelah

Diinduksi Karbon Tetraklorida Dosis 2 ml/kgBB pada

Jam ke-0, 24, dan 48 ................................................................. 29

Gambar 6. Diagram Batang Orientasi Aktivitas AST Tikus Setelah

Diinduksi Karbon Tetraklorida Dosis 2 ml/kgBB pada

Jam ke-0, 24, dan 48 ................................................................. 31

Gambar 7. Diagram Batang Rata-Rata Pengaruh Waktu Protektif

Pemberian Dekok Biji P. americana Secara Jangka

pendek terhadap Hepatotoksisitas Karbon Tetraklorida

pada Aktivitas Serum ALT ....................................................... 35

Gambar 8. Diagram Batang Rata-Rata Pengaruh Waktu Protektif

Pemberian Dekok Biji P. americana Secara Jangka

pendek terhadap Hepatotoksisitas Karbon Tetraklorida

pada Aktivitas Serum AST ....................................................... 35

Gambar 9. Diagram Batang Rata-Rata Perbandingan ALT Kontrol

Olive Oil Jam ke-0 dan 24 ........................................................ 37


xvi

Gambar 10. Diagram Batang Rata-Rata Perbandingan AST Kontrol

Olive Oil Jam ke-0 dan 24 ........................................................ 38


xvii

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1. Foto Serbuk Biji P. americana ................................................. 53

Lampiran 2. Foto Dekok Biji P. americana .................................................. 53

Lampiran 3. Surat Determinasi Biji P. americana ........................................ 54

Lampiran 4. Data Organoleptis dan Mikroskopis Hasil Determinasi

Serbuk Biji P. americana ......................................................... 55

Lampiran 5. Surat Ethical Clearance ........................................................... 61

Lampiran 6. Analisis Statistik Data ALT dan AST Uji Pendahuluan

Waktu Pencuplikan Darah Hewan Uji Setelah

Diinduksi Karbon Tetraklorida 2 ml/kgBB .............................. 62

Lampiran 7. Analisis Statistik Data ALT dan AST Kelompok

Kontrol Olive Oil Dosis 2 ml/kgBB ......................................... 69

Lampiran 8. Analisis Statistik Data ALT dan AST Kelompok

Perlakuan Dekok Biji P. americana Dosis 360,71

mg/kgBB Terinduksi Karbon Tetraklorida 2 ml/kgBB ............ 75

Lampiran 9. Perhitungan Persen Hepatoprotektif ALT ................................ 89

Lampiran 10. Penetapan Kadar Air Serbuk .................................................... 90

Lampiran 11. Perhitungan Konversi Dosis dan Waktu Untuk Manusia .......... 92

Lampiran 12. Pengukuran Validitas dan Realibilitas Pengukuran

Aktivitas ALT ........................................................................... 92


xviii

INTISARI

Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan efek hepatoprotektif dekok

biji Persea americana jangka pendek terhadap penurunan kadar ALT dan AST

serum pada tikus yang diinduksi karbon tetraklorida dan mengetahui waktu

pemberian efektif dekok.

Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni dengan

rancangan acak lengkap pola searah. Penelitian ini dilakukan dengan membagi

acak 30 ekor tikus ke dalam 6 kelompok sama banyak. Kelompok I (kelompok

kontrol hepatotoksin) diberi karbon tertraklorida yang dilarutkan dalam olive oil

(1:1) dengan dosis 2 ml/kgBB secara intraperitonial. Kelompok II (kelompok

kontrol negatif) diberi olive oil dosis 2 ml/kgBB secara intraperitonial. Kelompok

III (kelompok kontrol dekok) diberi dekok biji P. americana dosis 360,71 mg/kg

BB, kemudian setelah 6 jam diberikan diambil darahnya. Kelompok IV, V, dan VI

(kelompok perlakuan) diberi dekok biji P. americana dosis 360,71 mg/kg BB,

kemudian secara berturut-turut pada jam ke 1, 4 dan 6 setelah pemberian dekok

dilakukan pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB. Pada jam ke-24 setelah

pemberian karbon tetraklorida, semua kelompok diambil darahnya pada daerah

sinus orbitalis mata untuk penetapan aktivitas ALT dan AST, dan data dihitung

dengan menggunakan ANOVA satu arah.

Dari peneltian diperoleh bahwa pemberian dekok biji P. americana

360,71 mg/kgBB memiliki pengaruh terhadap penurunan aktivitas ALT-AST

serum pada tikus jantan yang terinduksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB dengan

waktu 1, 4, dan 6 jam; dengan waktu efektif pada jam ke-1 setelah pemberian

dekok biji P. americana.

Kata kunci : Persea americana, dekok, jangka pendek, ALT, AST, karbon

tetraklorida


xix

ABSTRACT

The aim of study research are to prove the hepatoprotective effect of short

term Persea americana seed decoction to decrease serum levels of ALT and AST

in rats induced carbon tetrachloride and to know the most effective time in giving

decoction.

This research is purely experimental research with randomized complete

direct sampling design. A total of 30 male Wistar rats were divided randomly into

6 groups in the same amount. Group I (hepatotoxins controlled-group) was given

carbon tetrachloride dissolved in olive oil (1:1) at a dose of 2 ml/kgBW in

intraperitonial. Group II (negative-controlled-group) was given a dose of 2

ml/kgBW olive oil in intraperitonial. Group III (decoction controlled-group) was

given oral decoction of P. americana seeds at a dose of 360.71 mg/kgBW, then

after 6 hours, their blood was drawn. Group IV, V, and VI (treatment group) were

given decoction of P. americana seeds at a dose of 360.71 mg/kgBW, then

successively on the 1, 4, and 6 hour after administration of decoctoin dose, 2

ml/kgBW of carbon tetrachloride was adminstered intraperitonially. At the 24th

hour after administration of carbon tetrachloride, blood samples from all group

were taken through the eyes orbital sinus for measuring the ALT and AST

activities. The data were analyzed by one way ANOVA.

The result of this study showed that short-term seeds of P. americana

decoction at a dose of 360.71 mg/kgBW had effect to reduce ALT-AST

activitities in male rats induced carbon tetrachloride 2 ml/kgBW with a time of 1,

4, and 6 hours; with effective time 1 hour after administration decoction of P.

americana seeds.

Keywords : Persea americana, decoction, short term, ALT, AST, carbon

tetrachloride


1

BAB I

PENGANTAR

A. Latar Belakang Penelitian

Hepar merupakan organ sekaligus kelenjar terbesar di dalam tubuh yang

memproduksi empedu dan juga mengeluarkan hasil produksi dari makanan yang

sudah dicerna. Fungsi utama dari organ yang sekaligus kelenjar ini adalah

metabolisme (Wibowo dan Paryana, 2009). Adanya kerusakan pada hepar

disebabkan karena adanya pemejanan terhadap senyawa kimia dan

mikroorganisme (Donatus, 1992).

Menurut Sofia, Nurdjanah, dan Ratnasari (2009), prevalensi perlemakan

hati di Indonesia sebesar 30,6%. Menurut WHO (2013), 500 juta penduduk dunia

terkena infeksi virus hepatitis B atau C, yang setiap tahunnya membunuh 1,5 juta

manusia. Dari angka tersebut dapat terlihat bahwa prevalensi penyakit hati di

masyarakat tinggi.

Adanya tanaman-tanaman di sekitar kita dapat dimanfaatkan dalam

pengobatan berbagai penyakit (Donatus, 1992), termasuk penyakit yang

menyerang organ hati. Salah satunya adalah Persea americana yang diketahui

memiliki aktivitas sebagai antioksidan yang memiliki kemampuan untuk

menangkap radikal bebas (Malangngi, Meyke, dan Jessy, 2012) karena P.

americana memiliki kandungan flavonoid yang larut air dan dapat menangkap

radikal bebas (Arukwe, Amadi, Duru, Agomuo, Adindu, Odika, Lele, Egejuru,

dan Anudike, 2012). Oleh karena itu, mengacu pada penelitian yang sudah ada,


2

penelitian ini menggunakan pelarut air dengan harapan dapat memperoleh

antioksidan lebih banyak. Adapun bentuk sediaan yang diuji adalah dekok karena

betuk sediaan tersebut banyak digunakan dalam masyarakat sebagai salah satu

cara untuk memperoleh khasiat dari suatu tanaman.

Radikal bebas dalam penelitian ini terbentuk sebagai hasil pengubahan

karbon tetraklorida menjadi radikal triklormetil (CCl3•) dan kemudian diubah

menjadi radikal trikorometilperoksi (CCl3O2•) yang bersifat lebih reaktif

(Hodgson, 2010). Berdasarkan hal tersebut dilakukan penelitian terkait aktivitas

P. americana untuk mengetahui kemampuannya sebagai hepatoprotektif jangka

pendek pada tikus jantan yang sudah diinduksi karbon tetraklorida untuk diketahui

pengaruh pemberian dan waktu pemberian efektif dekok tersebut yang mampu

memberikan efek hepatoprotektif yang optimal. Penelitian serupa mengunakan

waktu jangka panjang juga dilakukan bersamaan dengan penelitian tersebut.

1. Rumusan masalah

Berdasarkan latar belakang yang telah disampaikan, dapat dirumuskan

permasalahan sebagai berikut:

a. Apakah pemberian dekok biji Persea americana jangka pendek memberi

pengaruh hepatoprotektif dengan menurunkan kadar AST-ALT serum

pada tikus jantan galur Wistar yang diinduksi karbon tetraklorida?

b. Berapa lama waktu pemberian dekok biji P. americana yang efektif

untuk memberikan efek hepatoprotektif yang optimal pada tikus jantan

galur Wistar yang diinduksi karbon tetraklorida?


3

2. Keaslian penelitian

Penelitian menggunakan ekstrak biji Persea americana Mill. pernah

dilakukan oleh Arukwe, et al. (2012) yang menyatakan bahwa ekstrak biji Persea

americana memiliki kandungan saponin, tanin, flavonoid, sianogenik glikosida,

alkaloid, fenol, dan steroid. Ekstrak air biji Persea americana dinyatakan oleh

Alhassan, Sule, Atiku, Wudil, dan Abubakar (2012) memiliki efek hipoglikemi

pada tikus terinduksi aloksan. Selanjutnya, penelitian terkait dengan P. americana

telah dilakukan oleh Idris, Ndukwe, dan Gimba (2009) yang melaporkan bahwa

biji P. americana memiliki aktivitas antimikroba. Selain itu, Malangngi, dkk.

(2012) melaporkan ekstrak etanol biji P. americana memiliki kandungan

antioksidan. Malangngi, dkk. (2012) juga melaporkan kandungan tanin dan

aktivitas antioksidan ekstrak etanol biji Persea americana dalam menangkap

radikal bebas DPPH. Nwaoguikpe dan Braide (2011) juga melaporkan bahwa

ekstrak air biji P. americana juga mampu mengontrol hipertensi dan penyakit

kardiovaskular.

Sejauh studi pustaka yang dilakukan oleh peneliti, penelitian terkait

dengan efek hepatoprotektif jangka pendek dekok biji P. americana Mill.

terhadap penurunan kadar ALT dan AST serum pada tikus jantan galur Wistar

yang terinduksi karbon tetraklorida belum pernah dilakukan.

3. Manfaat penelitian

a. Manfaat teoritis

Hasil penelitian ini mampu memberikan sumbangan pengetahuan bagi

masyarakat, khususnya dalam bidang kesehatan, terutama bidang farmasi


4

mengenai pengaruh pemberian dekok biji Persea americana yang

memiliki efek hepatoprotektif jangka pendek.

b. Manfaat praktis

Hasil penelitian ini mampu memberikan informasi kepada masyarakat

terkait waktu efektif dalam pemberian dekok biji Persea americana yang

memiliki efek hepatoprotektif.

B. Tujuan Penelitian

1. Tujuan umum

Untuk mengetahui pengaruh waktu pemberian dekok biji P. americana

terhadap hepar tikus jantan galur Wistar.

2. Tujuan khusus

a. Mengetahui pengaruh pemberian dekok biji P. americana jangka pendek

terhadap aktivitas ALT-AST serum pada tikus jantan galur Wistar yang

diinduksi karbon tetraklorida.

b. Mengetahui waktu pemberian efektif dekok biji P. americana yang dapat

memberikan efek hepatoprotektif optimal pada tikus jantan galur Wistar

yang diinduksi karbon tetraklorida.


5

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

A. Anatomi dan Fisiologi Hati

Hepar merupakan organ sekaligus kelenjar terbesar di dalam tubuh yang

memproduksi empedu dan juga mengeluarkan hasil produksi dari makanan yang

sudah dicerna. Fungsi utama dari organ yang sekaligus kelenjar ini adalah

metabolisme (Wibowo dan Paryana, 2009). Hepar memiliki berat sekitar 1400 g

pada orang dewasa dan dibungkus oleh suatu fibrosa. Hepar menerima hampir

sekitar 1500 ml darah per menit melalui vena porta dan arteri hepatica (McPhee

dan Ganong, 2011).

Hepar secara keseluruhan tertutup oleh dinding thorax. Hepar memiliki

dua facies, yaitu (1) facies diaphragmatica yang terletak di sisi atas dengan

bentuk sesuai dengan lengkung diafragma dan memiliki tekstur permukaan yang

halus, serta terbagi menjadi bagian anterior dan posterior; (2) facies visceralis

yang memiliki permukaan yang ireguler karena berbatasan dengan gaster,

duodenum, esofagus, flexura coli dextra, ren dextra, dan vesica fellea. Facies ini

menghadap ke bawah dan ke belakang dengan garis horizontal yang membentang

yang dinamakan porta hepatis (Wibowo dan Paryana, 2009).

Hepar terdiri dari unit-unit fungsional (Gambar 1.) yang biasa disebut

lobulus yang berupa susunan jaringan berbentuk heksagonal yang mengelilingi

vena sentral. Darah dari cabang arteri hepatika dan vena porta mengalir dari

perifer lobulus menuju sinusoid. Sinusoid adalah kapiler luas yang berjalan di


6

antara deretan sel hati ke vena sentral. Di bagian dalam sinusoid ini terdapat sel

yang berfungsi untuk menghancurkan sel darah merah dan bakteri yang

melewatinya dalam darah. Sel ini disebut sel Kupffer (Sherwood, 2007), dan tidak

jarang disebut sebagai sel fagositik (Price dan Wilson, 2005). Lapisan endotel

sinusoid vena memiliki pori-pori yang sangat besar, berdiameter hampir 1

mikrometer. Di bawah lapisan ini terdapat ruang Disse atau disebut juga ruang

perisinusoidal. Jutaan disse menghubungkan pembuluh limfe di dalam pembuluh

septum interlobularis. Kelebihan cairan dalam ruang ini akan dikeluarkan melalui

aliran limfatik (Guyton dan Hall, 2006).

Hepar menerima darah dari dua sumber: (a) Darah arteri, yang

menyediakan O2 bagi hati dan mengandung metabolit darah untuk diproses oleh

hati, disalurkan oleh arteri hepatika; dan (b) Darah vena yang berasal dari saluran

cerna, dibawa oleh vena porta hepatika untuk pemrosesan dan penyiapan nutrien

yang baru diserap (Sherwood, 2007). Kedua pembuluh darah ini bercabang

mengikuti ductus biliaris sampai akhirnya bermuara ke dalam sinusoid. Dari sini,

darah akan dialirkan menuju vena hepatica dan bermuara pada vena cava inferior

(Wibowo dan Paryana, 2009).


7

Gambar 1. Penampang mikroskopik hati (Ganong dan McPhee, 2011)

B. Fungsi Hati

Pada awal kehidupan, fungsi hati pada neonatus masih kurang efektif

(Guyton dan Hall, 2006). Namun peran hati sesungguhnya dalam sistem

pencernaan adalah sekresi garam empedu. Hati juga memiliki fungsi lain, yaitu:

1. Memetabolisme nutrien utama: karbohidrat, protein, lemak

2. Mendetoksifikasi zat-zat yang tidak berguna bagi tubuh, hormon, serta

senyawa asing lain yang masuk ke dalam tubuh

3. Membentuk protein plasma

4. Menyimpan glikogen, lemak, besi, tembaga, dan vitamin

5. Bersama ginjal, mengaktifkan vitamin D (Sherwood, 2007).

Fungsi utama hepar adalah metabolisme. Hepar memiliki struktur

seragam yang memiliki kelompok sel yang dipersatukan oleh sinusoid. Sel-sel


8

hepar mendapat suplai darah dari vena portae hepatis yang kaya akan makanan

dan tidak mengandung oksigen, namun terkadang bersifat toksik; serta dari arteri

hepatika yang mengandung oksigen. Karena sistem peredaran darah yang tidak

biasa ini, sel-sel hepar mendapatkan suplai darah yang relatif kurang oksigen yang

mengakibatkan hepar memiliki potensi besar untuk mengalami kerusakan dan

juga penyakit (Wibowo dan Paryana, 2009).

Setelah hati mengalami kehilangan jaringannya, hati akan melakukan

regenerasi atau mengembalikan dirinya sendiri. Proses regenerasi ini berlangsung

selama 5 hingga 7 hari pada tikus dimana pada saat ini hepatosit diperkirakan

mengalami replikasi sebanyak satu atau dua kali, dan setelah mencapai ukuran

yang sebenarnya, hepatosit akan kembali lagi pada keadaan semula (Guyton dan

Hall, 2007).

C. Jenis Kerusakan Hati

Macam-macam jenis kerusakan hati yang dapat terjadi sebagai akibat

dari efek toksik yang dihasilkan oleh toksikan, antara lain:

1. Perlemakan (Steatosis)

Perlemakan hati (Gambar 2.) ditandai dengan adanya lipid pada hati

dengan berat lebih dari 5%. Lesi yang terbentuk dapat bersifat akut, seperti yang

ditimbulkan oleh etionin, fosfor, atau tertrasiklin. Tetrasiklin menyebabkan

banyaknya butiran lemak kecil di dalam suatu sel, sementara etanol menyebabkan

terbentuknya butiran lemak kecil yang menggantikan inti, sedangkan karbon

tetraklorida menyebabkan perlemakan hati melalui penghambatan sintesis satuan


9

protein dari lipoprotein dan penekanan konjugasi trigliserid dengan lipoprotein

(Lu, 1995).

Gambar 2. Struktur mikroskopik hepar yang mengalami steatosis

(Mercer University School of Medicine, 2012)

2. Nekrosis hati

Nekrosis hati merupakan kematian dari hepatosit yang termasuk dalam

kerusakan akut. Kematian sel ini ditandai dengan edema sitoplasma, dilatasi

retikulum endoplasma, dan disagregasi polisom (Lu, 1995). Di daerah terjadinya

nekrosis terjadi peningkatan eosinofil di sitoplasma dan juga neutrofil di daerah

terjadinya kerusakan tersebut (Hodgson, 2010).

3. Kolestasis

Kolestasis merupakan jenis kerusakan hati akut yang jarang ditemukan

dibandingkan perlemakan hati dan nekrosis (Lu, 1995). Kolestasis merupakan

penekanan atau penghentian aliran empedu yang disebabkan oleh faktor dalam

atau pun luar hepar. Peradangan atau penyumbatan pada saluran empedu


10

mengakibatkan akumulasi retensi garam empedu, akumulasi bilirubin, dan

peristiwa yang mengarah jaundice (Hodgson, 2010).

4. Sirosis

Sirosis merupakan hepatotoksisitas yang ditandai dengan adanya kolagen

di seluruh hati yang mengakibatkan terbentuknya jaringan parut. Dalam banyak

kasus, hal ini terjadi karena adanya paparan senyawa kimia secara kronis yang

mengakibatkan terjadinya akumulasi di matriks ekstra seluler yang menghambat

aliran darah, metabolisme normal hepar, dan proses detoksifikasi (Hodgson,

2010). Pada manusia, penyebab utama terjadinya sirosis hati adalah konsumsi

kronis dari minuman beralkohol (Lu, 1995).

D. Hepatotoksin

Hepatotoksin diklasifikasi menjadi dua, yaitu:

1. Hepatotoksin teramalkan (Tipe A)

Hepatotoksin ini merupakan senyawa yang dapat merusak hepar jika

diberikan dalam jumlah yang cukup untuk menimbulkan efek toksik. Jadi jenis

hepatotoksin ini bergantung dari jumlah dosis pemberian senyawa. Parasetamol

dan karbon tetraklorida merupakan contoh hepatotoksin teramalkan (Forrest,

2006).

2. Hepatotoksin tak teramalkan (Tipe B)

Hepatotoksin tersebut tidak bersifat toksik, dan hanya memberikan efek

toksik pada orang-orang tertentu, sehingga hepatotoksin jenis ini tidak bergantung


11

pada dosis pemberian. Contoh senyawa yang termasuk jenis ini adalah isoniazid

dan clorpromazine (Forrest, 2006).

E. ALT dan AST

ALT (alanin aminotransferase) dan AST (aspartat aminotransferase)

serum sering digunakan dalam uji fungsi hati yang terletak normal di dalam

hepatosit. Maka jika kedua enzim tersebut ditemukan di dalam serum, hal ini

mengindikasikan adanya kerusakan fungsi hati (McPhee dan Ganong, 2007).

Kadar aminotransferase dalam level yang tinggi menunjukkan adanya infeksi

virus, ischemic, atau keracunan pada hepar (Dipiro, 2008).

ALT merupakan enzim yang konsentrasi terbesarnya terdapat pada hepar

yang merupakan petunjuk spesifik adanya nekrosis hepar dibandingkan AST yang

terdapat pada hampir semua jaringan, hepar, dan otot rangka (Zimmerman, 1999).

F. Karbon Tertaklorida

Gambar 3. Struktur molekul karbon tetraklorida

(Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 1995)

Karbon tetraklorida (Gambar 3.) merupakan senyawa model yang dapat

mengakibatkan perlemakan dan nekrosis pada hepar (Timbrell, 2009). Senyawa

ini dapat terdistribusi di dalam tubuh karena senyawa tersebut bersifat sangat larut


12

lemak (Wahyuni, 2005). Karbon tetraklorida (CCl4) merupakan senyawa kimia

yang bersifat lebih ekstensif dalam merusak hepar jika dibandingkan dengan

senyawa kimia lainnya. CCl4 dikonversi menjadi radikal triklormetil (CCl3•) dan

kemudian diubah menjadi radikal trikorometilperoksi (CC3O2•) yang bersifat lebih

reaktif (Gambar. 4). Nekrosis yang terjadi karena CCl4 paling parah terjadi pada

centrilobular sel hati yang banyak mengandung isozim CYP dalam konsentrasi

tinggi yang bertanggung jawab mengaktifkan CCl4 (Hodgson, 2010), dan

pemejanan senyawa ini dalam jangka panjang akan mengakibatkan terjadinya

sirosis dan tumor hati, juga kerusakan ginjal (Timbrell, 2009).

Gambar 4. Mekanisme oksidasi dan biotransformasi karbon tetraklorida

(Timbrell, 2008)

G. Persea americana Mill.

1. Taksonomi

Kerajaan : Plantae (Tumbuhan)


13

Sub kerajaan : Tracheobionta (Tumbuhan berpembuluh)

Super divisi : Spermatophyta (Menghasilkan biji)

Divisi : Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga)

Kelas : Magnoliopsida (berkeping dua atau dikotil)

Sub kelas : Magnoliidae

Bangsa : Laurales

Keluarga : Lauraceae

Marga : Persea

Varietas : Persea americana Mill. (Proseanet, 2012)

2. Nama lain

Avocado (Amerika), Butter fruit, Avocado-pear, Alligator pear (Inggris),

Alligatorbine, Avocadobirne (Jerman), Avokad, Adpukat (Indonesia), Awokado

(Thailand), Apukado, Avokado (Malaysia) (World Agroforestry Centre, 2002).

3. Morfologi

Persea americana memiliki pohon berukuran sedang hingga besar dengan

tinggi 9-20 m. Daun berbentuk elips, lanset, dan oval, berukuran panjang 7-41 cm,

berwarna merah ketika muda, dan menjadi lembut dan kasar serta berwarna hijau

tua saat matang (World Agroforestry Centre, 2002) dan bagian permukaannya

berlapis lilin (Porseanet, 2012). Bunga berwarna hijau kekuningan dengan

diameter 1-1,3 cm (World Agroforestry Centre, 2002). Bunga banci tersusun atas

3 daun mahkota. Perhiasan bunga tersusun atas dua lingkaran, 9 benang sari di

dalam 3 lingkaran, kumpulan benang sari di bagian dalam menghasilkan 2 nektar

di bagian dasarnya. Putik terdiri atas satu ruang bakal buah, tangkai kepala putik


http://www.plantamor.com/index.php?plantsearch=Lauraceae

http://www.plantamor.com/index.php?plantsearch=Persea

14

ramping dengan kepala putik tunggal (simple papillate stigma). Buah berdaging

dan berair, besar dan bulat, berbiji tunggal, permukaan buah halus, dengan

panjang 7-20 cm (Proseanet, 2012).

4. Kandungan kimia

Berdasarkan penelitian yang dilakukan Arukwe, et al. (2012), biji Persea

americana memiliki kandungan saponin, tanin, flavonoid, sianogenik glikosida,

alkaloid, fenol, dan steroid. Di antara senyawa kimia ini, kandungan saponin

memiliki prosentase terbesar dari berbagai kandungan kimia yang terdapat pada

biji Persea americana.

5. Khasiat dan kegunaan

Ekstrak air biji Persea americana memiliki efek hipoglikemi pada tikus

yang terinduksi aloksan. Hal ini menunjang pendapat banyak orang terkait

kegunaan Persea americana bagi orang yang mengalami diabetes (Alhassan, et

al., 2012). Ekstrak air biji P. americana juga mampu mengontrol hipertensi dan

penyakit kardiovaskular (Nwaoguikpe, et al., 2011), juga sebagai antimikroba

(Idris, et al., 2009). Selain itu, ekstrak etanol biji P. americana memiliki

kandungan antioksidan (Malangngi, dkk., 2012). Di Nigeria, Ekstrak kulit

kayunya digunakan untuk mengobati penyakit kulit yang disebabkan oleh parasit

(Owolabi, Jaja, dan Coker, 2005). Daun Persea americana Mill memiliki

kemampuan mengontrol penyakit diabetes melitus, sedangkan bijinya sebagai anti

radang dan analgesik (Haryanto, 2009).


15

H. Landasan Teori

Hepar merupakan organ yang berperan sebagai organ metabolisme. Hepar

memperoleh darah dari vena portae hepatis (70%) dan arteria hepatica (30%).

Kedua pembuluh darah ini bercabang mengikuti ductus biliaris sampai akhirnya

bermuara ke dalam sinusoid. Dari sini, darah akan dialirkan menuju vena hepatica

dan bermuara pada vena cava inferior. Sel-sel yang membawa darah menuju

hepar ini sering bersifat toksik dan tidak membawa oksigen yang memperbesar

kemungkinan terjadinya kerusakan hepar (Wibowo dan Paryana, 2009). Aktivitas

ALT dan AST dapat digunakan sebagai uji fungsi hati untuk mengetahui adanya

kerusakan hepar jika kadar kedua serum tersebut tinggi dalam darah (Dipiro,

2008).

Karbon tetraklorida (CCl4) merupakan senyawa kimia yang dapat merusak

hepar. CCl4 di dalam hepar akan dikonversi menjadi radikal triklormetil (CCl3•)

dan kemudian diubah menjadi radikal trikorometilperoksi (CC3O2•) yang bersifat

lebih reaktif. Nekrosis yang terjadi karena CCl4 paling parah terjadi pada

centrilobular sel hati (Hodgson, 2010).

Persea americana diketahui memiliki aktivitas sebagai antioksidan yang

memiliki kemampuan untuk menangkap radikal bebas (Malangngi, dkk., 2012). P.

americana juga memiliki kandungan flavonoid yang larut air dan dapat

menangkap radikal bebas (Arukwe, et al., 2012). Hal ini memungkinkan bahwa P.

americana mampu berperan sebagai hepatoprotektor dengan pembuatan ekstrak

air dekok. Melalui penelitian ini akan diketahui apakah dengan pemberian dekok


16

biji P. americana, aktivitas ALT dan AST serum pada tikus yang terinduksi

karbon tetraklorida dapat diturunkan, berikut dengan waktu pemberian efektifnya.

I. Hipotesis

Pemberian dekok biji P. americana secara jangka pendek memiliki efek

hepatoprotektif pada tikus terinduksi karbon tetraklorida.


17

BAB III

METODE PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian

Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni dengan

rancangan acak lengkap pola searah.

B. Variabel dan Definisi Operasional

Variabel-variabel yang digunakan dalam penelitian ini adalah:

1. Variabel utama

a. Variabel bebas

Variasi waktu pemberian dekok biji P. americana jangka pendek

dengan dosis 360,71 mg/kgBB pada tikus jantan galur Wistar terinduksi

karbon tetraklorida.

b. Variabel tergantung

Penurunan kadar ALT-AST tikus jantan galur Wistar yang

terinduksi karbon tetraklorida setelah pemberian P. americana jangka

pendek.

2. Variabel pengacau

a. Variabel pengacau terkendali

Dalam penelitian ini yang termasuk variabel pengacau terkendali

adalah hewan uji yang digunakan, yaitu tikus jantan galur Wistar yang

berumur 2-3 bulan, dengan berat badan 150-250 g; cara pemberian


18

hepatotoksin secara intraperitonial; cara pemberian dekok biji P.

americana secara per oral; frekuensi waktu pemberian dekok biji P.

americana (selama 1, 4, dan 6 jam); dan biji P. americana yang

diperoleh dari Sumatera Barat.

b. Variabel pengacau tak terkendali

Dalam penelitian tersebut, variabel pengacau tak terkendali

adalah kondisi patologis hewan uji.

3. Definisi operasional

a. Dekok P. americana

Dekok P. americana adalah sediaan yang diperoleh dengan

menginfundasi 8,0 g serbuk kering biji P. americana dalam air

sebanyak 16,0 ml; kemudian dipanaskan dalam 100,0 ml air pada suhu

900C selama 30 menit sehingga diperoleh ekstrak dekok biji P.

americana.

b. Efek hepatoprotektif

Efek hepatoprotekif adalah kemampuan dekok P. americana

terhadap penurunan kadar ALT-AST tikus jantan galur Wistar yang

terinduksi karbon tetraklorida setelah pemberian P. americana secara

jangka pendek.

c. Jangka pendek

Yang dimaksud penelitian jangka pendek adalah penelitian

tersebut dilakukan dengan memberikan dekok biji P. americana kepada

hewan uji secara berturut-turut dengan selang waktu 1, 4, dan 6 jam.


19

C. Bahan Penelitian

1. Bahan utama

a. Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus jantan

galur Wistar yang berumur 2-3 bulan dengan berat badan 150-250 g

yang diperoleh dari Laboratorium Imono Fakultas Farmasi Universitas

Sanata Dharma Yogyakarta.

b. Bahan uji yang digunakan adalah serbuk biji P. americana yang

diperoleh dari Sumatera Barat pada Bulan Januari 2013.

2. Bahan kimia

a. Bahan hepatotoksin yang digunakan adalah karbon tetraklorida yang

diperoleh dari Laboratorium Kimia Analisis Fakultas Farmasi

Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

b. Kontrol negatif yang digunakan adalah olive oil (Bertolli®).

c. Pelarut untuk dekok digunakan aquadest yang diperoleh dari

Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia Fakultas Farmasi Universitas

Sanata Dharma Yogyakarta.

d. Pelarut hepatotoksin digunakan olive oil (Bertolli®).

e. Blanko pengukuran kadar ALT dan AST menggunakan aquabidestilata

yang diperoleh dari Laboratorium Kimia Analisis dan Instrumental

Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

f. Kontrol serum Roche/Hitachi Cobas C series.


20

g. Reagen serum ALT

Komposisi dan konsentrasi dari reagen ALT Diasys yang digunakan

adalah sebagai berikut.

Komposisi pH Konsentrasi

R1: TRIS 7,15 140 mmol/L

L-alanine 700 mmol/L

LDH (lactate

dehydrogease)

≥ 2300 mmol/L

R2: 2-oxogultarate 85 mmol/L

NADH 1 mmol/L

Pyridoxal-5phosphate

FS:

Good’s buffer

Pyridoxal-5-phosphate

9,6

100 mmol/L

13mmol/L

g. Reagen AST

Komposisi dan konsentrasi dari reagen AST Dyasis yang digunakan

adalah sebagai berikut.

Komposisi pH Konsentrasi

R1: TRIS 7,65 110 mmol/L

L-aspartate 320 mmol/L

MDH (malate

deydrogenase)

≥ 800 U/L

LDH (lactate

dehydrogease)

≥ 1200 mmol/L

R2: 2-oxoglutarate 65 mmol/L

NADH 1 mmol/L

Pyridoxal-5phosphate

FS:

Good’s buffer

Pyridoxal-5-phosphate

9,6

100 mmol/L

13mmol/L


21

D. Alat Penelitian

Alat-alat yang digunakan di dalam penelitian ini antara lain oven, mesin

penyerbuk, ayakan, panci enamel, termometer, stopwatch, beaker glass, gelas

ukur, penangas air, kain flannel, tabung reaksi, labu ukur, pipet tetes, batang

pengaduk (Pyrex Iwaki Glass®), timbangan analitik Mettler Toledo®, sentrifuge

Centurion Scientific®, vortex Genie Wilten®, spuit injeksi per oral dan syringe 3

cc Terumo®, spuit i.p. dan syringe 1 cc Terumo®, pipa kapiler, tabung

Eppendorf, Microlab 200 Merck®, moisture balance, dan stopwatch.

E. Tata Cara Penelitian

1. Determinasi serbuk biji P. americana

Determinasi dilakukan dengan mencocokkan serbuk biji P. americana

yang diperoleh dari Sumatera Barat dengan serbuk yang diketahui secara pasti

merupakan serbuk biji P. americana yang dilakukan secara makroskopis dan

mikroskopis.

2. Pengumpulan bahan uji

Bahan uji yang digunakan adalah biji P. americana yang masih segar dan

tidak busuk.

3. Pembuatan serbuk biji P. americana

Biji P. americana dicuci bersih dan dipisahkan dari kulitnya. Setelah itu,

biji dirajang tipis lalu dikeringkan dalam oven pada suhu 500C. Setelah biji benar-

benar kering, biji dihaluskan dan diayak.


22

4. Penetapan kadar air pada serbuk kering biji P. americana

Serbuk kering biji P. americana yang sudah diayak, dimasukkan ke

dalam alat moisture balance sebanyak ± 5 g kemudian diratakan. Bobot serbuk

kering biji tersebut ditetapkan sebagai bobot sebelum pemanasan (bobot A),

setelah itu dipanaskan pada suhu 1050C. Serbuk kering biji P. americana yang

sudah dipanaskan ditimbang kembali dan dihitung sebagai bobot setelah

pemanasan (bobot B). Kemudian dilakukan perhitungan terhadap selisih bobot A

terhadap bobot B yang merupakan kadar air serbuk biji P. americana.

5. Pembuatan dekok serbuk biji P. americana

Serbuk kering biji P. americana ditimbang 8,0 g dan dimasukkan ke

dalam 16,0 ml pelarut aquadest dan kemudian ditambahkan lagi aquadest

sebanyak 100,0 ml, kemudian dipanaskan pada suhu 900C dan dijaga tetap dalam

suhu tersebut selama 30 menit. Waktu 30 menit dihitung ketika suhu campuran

mencapai 900C. Setelah 30 menit, campuran tersebut diambil dan diperas

menggunakan kain flanel kemudian tambahkan air panas secukupnya melalui

ampas hingga diperoleh volume dekok biji P. americana yang dikehendaki.

6. Pembuatan larutan karbon tetraklorida konsentrasi 50%

Larutan karbon tetraklorida dibuat dengan perbandingan karbon

tetraklorida : pelarut adalah 1 : 1, sehingga konsentrasi larutan karbon tetraklorida

yang digunakan adalah 50% (Janakat dan Al-Merie, 2002). Pelarut yang

digunakan dalam pembuatan larutan ini adalah olive oil.


23

7. Uji Pendahuluan

a. Penetapan dosis hepatotoksik karbon tetraklorida

Berdasarkan penelitian Janakat dan Al-Merie (2002), dosis

karbon tetraklorida yang digunakan untuk menginduksi kerusakan

hepar pada tikus jantan galur Wistar adalah 2 ml/kg BB. Dosis ini

mampu merusak sel-sel hepar pada tikus jantan yang ditunjukkan

melalui peningkatan aktivitas ALT-AST tetapi tidak menimbulkan

kematian pada hewan uji.

b. Penetapan waktu pencuplikan darah

Penetapan waktu pencuplikan darah ditentukan melalui orientasi

dengan tiga kelompok perlakuan waktu, yaitu pada jam ke–0, 24, dan

48 setelah pemejanan karbon tertraklorida. Setiap kelompok perlakuan

terdiri dari 5 hewan uji yang pengambilan darahnya dilakukan melalui

pembuluh sinus orbitalis mata.

Aktivitas ALT tikus yang terinduksi karbon tetraklorida yang

dilarutkan dalam olive oil (1:1) dengan dosis 2 ml/kgBB mencapai

kadar maksimal pada jam ke–24 setelah pemberian dan mulai menurun

pada jam ke–48 (Janakat dan Al-Merie, 2002). Hal ini juga mengacu

pada penelitian yang telah dilakukan oleh Martha (2009) bahwa waktu

pencuplikan darah pada tikus terinduksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB

adalah pada jam ke-24 setelah pemberian hepatotoksin.


24

8. Pengelompokkan dan perlakuan hewan uji

Hewan uji yang dibutuhkan sebanyak 30 ekor tikus jantan galur Wistar

yang dibagi secara acak dalam 6 kelompok sama banyak. Kelompok I (kelompok

kontrol hepatotoksin) diberi karbon tertraklorida yang dilarutkan dalam olive oil

(1:1) dengan dosis 2 ml/kgBB secara intraperitonial. Kelompok II (kelompok

kontrol negatif) diberi olive oil dosis 2 ml/kgBB secara intraperitonial. Kelompok

III (kelompok kontrol dekok) diberi dekok biji P. americana dosis 360,71

mg/kgBB, kemudian setelah 6 jam diambil darahnya. Kelompok IV, V, dan VI

(kelompok perlakuan) diberi dekok biji P. americana dosis 360,71 mg/kgBB,

kemudian secara berturut-turut pada jam ke 1, 4 dan 6 setelah pemberian dekok

dilakukan pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB. Pada jam ke-24 setelah

pemberian karbon tetraklorida, semua kelompok diambil darahnya pada daerah

sinus orbitalis mata untuk penetapan aktivitas ALT dan AST.

9. Pembuatan serum

Darah diambil melalui sinus orbitalis mata hewan uji dan ditampung

dalam tabung eppendrof dan didiamkan selama 15 menit, lalu disentrifugasi

selama 15 menit dengan kecepatan 5000 rpm, lalu dipisahkan bagian

supernatannya.

10. Pengukuran aktivitas ALT dan AST

Micro vitalab 200 adalah alat yang digunakan untuk mengukur aktivitas

ALT-AST pada serum hewan uji. Sebelum melakukan pengukuran sampel, alat

divalidasi dengan menggunakan kontrol serum Roche/Hitachi Cobas C series.


25

Kisaran nilai ALT dan AST kontrol serum Roche/Hitachi Cobas C series adalah

26,2-41,8 U/L dan 35,4-56,6 U/L untuk AST.

Pengukuran ALT dilakukan dengan mencampur 100 μl serum dengan

1000 μl reagen I, kemudian divortex selama 5 detik, didiamkan selama 2 menit,

setelah itu dicampur dengan 250 μl reagen II, kemudian divortex selama 5 detik

dan dibaca serapan setelah 1 menit.

Pengukuran aktivitas AST dilakukan dengan mencampur 100 μl serum

dengan 1000 μl reagen I, kemudian divortex selama 5 detik, didiamkan selama 2

menit, setelah itu dicampur dengan 250 μl reagen II, kemudian divortex selama 5

detik dan dibaca serapan setelah 1 menit.

Aktivitas ALT dan AST dinyatakan dalam U/L yang diukur pada panjang

gelombang 340 nm, suhu 370C, dengan faktor koreksi -1745. Pengukuran

aktivitas ALT dan AST ini dilakukan di Laboratorium Biokimia Fakultas Farmasi

Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

F. Tata Cara Analisis Hasil

Data aktivitas ALT-AST diuji dengan Kolmogorov-Smirnov untuk

mengetahui distribusi data tiap kelompok hewan uji. Apabila didapat distribusi

data yang normal maka analisis dilanjutkan dengan analisis pola searah (One Way

ANOVA) dengan taraf kepercayaan 95% untuk mengetahui perbedaan masing-

masing kelompok. Kemudian dilanjutkan dengan uji Scheffe untuk melihat

perbedaan masing-masing antar kelompok bermakna (signifikan) (p<0,05) atau

tidak bermakna (tidak signifikan) (p>0,05). Namun bila didapatkan distribusi


26

tidak normal, maka dilakukan analisis dengan uji Kruskal Wallis untuk

mengetahui perbedaan aktivitas ALT dan AST antar kelompok. Setelah itu

dilanjutkkan dengan uji Mann Whitney untuk mengetahui kebermaknaan

perbedaan tiap kelompok.

Perhitungan persen efek hepatoprotektif terhadap hepatotoksin karbon

tetraklorida diperoleh dengan rumus:

purata ALT CCl4 − purata ALT 𝑜𝑙𝑖𝑣𝑒 𝑜𝑖𝑙 − (purata ALT perlakuan − purata ALT 𝑜𝑙𝑖𝑣𝑒 𝑜𝑖𝑙)

purata ALT CCl4 − purata ALT 𝑜𝑙𝑖𝑣𝑒 𝑜𝑖𝑙 × 100%


27

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Penyiapan Bahan

1. Hasil determiasi serbuk biji P. americana

Biji P. americana merupakan biji uji yang digunakan di dalam penelitian

tersebut. Untuk memastikan bahwa serbuk yang digunakan dalam penelitian

tersebut adalah benar serbuk biji tanaman P. americana, maka peneliti melakukan

determinasi tanaman. Determinasi tanaman dilakukan oleh Bapak Yohanes

Dwiatmaka, M.Si di Laboratorium Farmakognosi Fitokimia Fakultas Farmasi

Universitas Sanata Dharma. Determinasi tersebut dilakukan dengan mencocokkan

ciri-ciri makroskopis dan mikroskopis serbuk uji pembandingnya (Lampiran 4).

Dari determinasi ini diperoleh bukti bahwa serbuk yang peneliti gunakan dalam

penelitian tersebut adalah benar biji P. americana.

2. Penetapan kadar air serbuk kering biji P. americana

Penetapan kadar air bertujuan untuk mengetahui kandungan air dalam

serbuk, sehingga dapat diketahui apakah serbuk biji P. americana memenuhi

salah satu persyaratan serbuk yang baik atau tidak, yaitu memiliki kandungan

kadar air kurang dari 10% (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan,

1995).

Penetapan kadar air ini dilakukan dengan menggunakan metode

gravimetri dengan alat moisture balance. Dengan menggunakan metode ini,

serbuk biji P. americana dipanaskan pada suhu 1050C selama 15 menit.


28

Pemanasan pada suhu tersebut dimaksudkan supaya kandungan air menguap

dalam batas waktu 15 menit, sehingga dapat memenuhi persyaratan serbuk yang

baik. Berdasarkan hasil perhitungan diperoleh kadar air serbuk biji P. americana

yang digunakan dalam penelitian ini adalah sebesar 7,4%. Hal ini menyatakan

bahwa kadar air serbuk biji P. americana telah memenuhi persyaratan yang

ditetapkan.

B. Uji Pendahuluan

1. Penentuan dosis hepatotoksik karbon tetraklorida

Pada penelitian ini dilakukan penentuan dosis hepatotoksik karbon

tetraklorida. Tujuan dari penentuan dosis hepatotoksik karbon tetraklorida

tersebut adalah untuk menentukan dosis karbon tetraklorida yang dapat

mengakibatkan kerusakan hepar berupa steatosis yang ditandai dengan adanya

peningkatan pada kadar serum ALT dan AST pada hewan uji.

Pemejanan terhadap karbon tetraklorida dapat mengakibatkan

perlemakan (steatosis) pada hepar (Timbrell, 2009), yang dapat ditandai dengan

peningkatan kadar ALT mencapai 50-200 U/L (Wahyuni, 2005). Berdasarkan

penelitian Rajendran, Hemalatha, Akasakalai, MaduKrishna, Sohil, Vita, et al.

(2009), terjadinya steatosis ditandai dengan adanya peningkatan aktivitas ALT

dan AST mencapai dua kali lipat terhadap kontrol. Dosis hepatotoksin yang

digunakan dalam penelitian ini mengacu pada penelitian yang telah dilakukan

oleh Janakat dan Al-Merie (2002) dan Martha (2009), dimana kabon tetraklorida

pada dosis 2 ml/kgBB sudah menimbulkan efek hepatotoksik.


29

2. Penentuan waktu pencuplikan darah

Penentuan waktu pencuplikan darah ini dilakukan untuk mengetahui

waktu dimana karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB mampu memberikan efek

hepatotoksik yang maksimal yang ditandai dengan peningkatan aktivitas ALT dan

AST tertinggi pada hewan uji pada waktu tertentu. Karbon tetraklorida dosis 2

ml/kgBB diujikan pada tikus jantan, dan dilakukan pencuplikan darah pada sinus

orbitalis hewan uji pada jam ke-0, 24, dan 48. Berdasarkan uji tersebut diperoleh

data aktivitas ALT dan AST yang masing-masing tertera pada Tabel. I dan

Gambar 5.

Tabel. I. Rata-rata aktivitas ALT-AST tikus setelah induksi karbon tetraklorida

dengan dosis 2 ml/kgBB saat pencuplikan darah pada jam ke-0, 24, dan 48 (n=3)

Waktu pencuplikan

jam ke-

Purata aktivitas

ALT ± SE (U/L)

Purata aktivitas

AST ± SE (U/L)

0 68,0 ± 9,6 88,3 ± 3,7

24 203,3 ± 15,9 407,7 ± 26,8

48 54,7 ± 5,5 147,3 ± 7,5

Gambar 5. Diagram batang orientasi aktivitas ALT tikus setelah diinduksi

karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB pada jam ke-0, 24, dan 48


30

Uji menggunakan Kolmogorov Smirnov pada aktivitas ALT jam ke-0, 24,

dan 48 menunjukkan signifikansi masing-masing 0,996 (p>0,05); 0,850 (p>0,05);

dan 0,944 (p>0,05). Kemudian dilanjutkan dengan analisis pola searah (One Way

ANOVA) dan diperoleh signifikansi 0,143 (p>0,05). Data tersebut menunjukkan

bahwa variansi data homogen. Lalu dilakukan uji menggunakan Scheffe untuk

melihat kebermaknaan antar kelompok yang ditunjukkan pada Tabel. II.

Tabel. II. Hasil uji Shceffe aktivitas ALT tikus terinduksi karbon tetraklorida

dosis 2 ml/kgBB pada pencuplikan darah jam ke-0, 24, dan 48

Waktu pencuplikan

(jam ke-)

Jam ke-0 Jam ke-24 Jam ke-48

0 - B TB

24 B - B

48 TB B -

Untuk data AST, hasil analisis menggunakan uji Kolmogorov Smirnov

pada setiap kelompok perlakuan jam ke-0, 24, dan 48 diperoleh signifikansi

masing-masing kelompok sebesar 1,000 (p>0,05); 1,000 (p>0,05); dan 1,000

(p>0,05). Hal ini menunjukkan bahwa data memiliki distribusi normal, sehingga

dilanjutkan analisis data dengan menggunakan uji pola searah (One Way

ANOVA). Berdasarkan analisis tersebut, diperoleh signifikansi 0,145 (p>0,05)

yang menunjukkan bahwa variansi data yang diperoleh adalah homogen. Lalu

dilakukan uji Scheffe untuk melihat kebermakaan data yang ditunjukkan dalam

Tabel. III dan diagram batang hasil pengukuran tersebut pada Gambar 6.


31

Tabel. III. Hasil uji Sceffe aktivitas AST tikus terinduksi karbon tetraklorida

dosis 2 ml/kg BB pada pencuplikan darah jam ke-0, 24, dan 48

Waktu

pencuplikan

Jam ke-0 Jam ke-24 Jam ke-48

Jam ke-0 - B TB

Jam ke-24 B - B

Jam ke-48 TB B -

Gambar 6. Diagram batang orientasi aktivitas AST tikus terinduksi karbon

tetraklorida dosis 2 ml/kgBB saat pencuplikan darah jam ke-0, 24, dan 48

Berdasarkan Tabel. I terlihat bahwa rata-rata aktivitas ALT tertinggi pada

saat pencuplikan darah jam ke-24, dimana sesuai dengan nilai kerusakan hati

ringan dengan kenaikan aktivitas ALT mencapai dua kali lipat (Rajendran, et al.,

2009), yaitu 203,3 ± 15,9 U/L dari aktivitas ALT jam ke-0, dan meningkat tiga

kali lipat dari nilai normal ALT 29,8-77,0 U/L (Hastuti, 2008), dimana

peningkatan sebesar tiga kali lipat dapat menyebabkan terjadinya steatosis


32

(Zimmerman, 1999). Hal ini juga didukung oleh data AST yang menunjukkan

peningkatan aktivitas AST tertinggi pada jam ke-24. Pada Gambar 5. dan Gambar

6. juga terlihat bahwa ada peningkatan aktivitas ALT dan AST pada jam ke 24,

dimana nilai tersebut menunjukan perbedaan yang bermakna pada jam ke-24

dibandingkan pada jam ke-0 dan 48. Selain itu, pada jam ke-48, kedua aktivitas

serum tersebut menunjukkan penurunan yang signifikan seperti terlihat pada

Gambar 5. dan Gambar 6. yang menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna

(p>0,05) terhadap aktivitas AST jam ke-0, dimana kerusakan hepar yang terjadi

sudah kembali pada keadaan normal.

Berdasarkan keseluruhan data tersebut, terlihat bahwa efek hepatotoksik

yang dimiliki karbon tetraklorida dosis 2ml/kgBB menunjukkan efek yang

maksimal pada jam ke-24. Oleh karena itu, hasil orientasi ini digunakan oleh

peneliti sebagai acuan dalam penentuan waktu pencuplikan darah hewan uji, yaitu

pada jam ke-24 untuk dosis karbon tetraklorida 2 ml/kgBB.

C. Hasil Uji Waktu Protektif Pemberian Dekok Biji P. americana Secara

Jangka Pendek Pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida

Penelitian tersebut dilakukan dengan tujuan untuk mengetahui pengaruh

waktu pemberian dekok biji P. americana secara jangka pendek terhadap

penurunan aktivitas serum ALT dan AST pada tikus yang terinduksi karbon

tetraklorida. Waktu pemberian jangka pendek yang digunakan dalam penelitian

ini adalah 1, 4, dan 6 jam. Penggunaan waktu pemberian secara jangka pendek ini

dilakukan untuk membandingkan pengaruh pemberian dekok biji P. americana


33

jangka panjang terhadap penurunan aktivitas serum ALT dan AST yang dilakukan

bersamaan dengan penelitian tersebut.

Dosis dekok biji P. americana yang digunakan dalam penelitian ini

adalah 360,71 mg/kgBB. Pemilihan dosis ini didasarkan pada dosis yang

digunakan oleh masyarakat. Hasil penelitian berupa penurunan aktivitas ALT dan

AST (U/L) tersaji dalam bentuk purata ± SE dalam tabel dan diagram batang

berikut.

Tabel. IV Pengaruh waktu protektif pemberian dekok biji P. americana secara

jangka pendek terhadap hepatotoksisitas karbon tetraklorida pada aktivitas serum

ALT dan AST

Perlakuan

Aktivitas Efek Hepatoprotektif ALT

(%) Purata ± SE

(U/L) ALT

Purata ± SE

(U/L) AST

Kontrol negatif

olive oil 2 ml/kg

BB

47,6 ± 1,9 60,2 ± 2,3 -

Kontrol

hepatotoksin

CCl4 2 ml/kg BB

183,2 ± 5,1 476,8 ± 14,3 0

DPA 360,71

mg/kg BB 36,6 ± 0,5 91,6 ± 4,4 -

DPA 360,71

mg/kg BB 1 jam

+ CCl4 2 ml/kg

BB

36,6 ± 1,4 115,8 ± 13,1 108,1

DPA 360,71

mg/kg BB 4 jam

+ CCl4 2 ml/kg

BB

48,6 ± 2,4 110,0 ± 5,0 99,2

DPA 360,71

mg/kg BB 6 jam

+ CCl4 2 ml/kg

BB

47,2 ± 3,5 124,6 ± 8,1 100,2

Keterangan: DPA = Dekok Persea americana

SE = Standard Error


34

Tabel. V Hasil analisis statistik uji Post Hoc Mann Whitney dari kebermaknaan

ALT antar kelompok

Kelompok

Kontrol

hepatooksin

CCl4 2

ml/kg BB

Kontrol

negatif

olive oil 2

ml/kg BB

DPA

360,71

mg/kg BB

DPA

360,71

mg/kg BB

1 jam +

CCl4 2

ml/kg BB

DPA

360,71

mg/kg BB

4 jam +

CCl4 2

ml/kg BB

DPA

360,71

mg/kg BB

6 jam +

CCl4 2

ml/kg BB

Kontrol

hepatooksin

CCl4 2

ml/kg BB

- B B B B B

Kontrol

negatif olive

oil 2 ml/kg

BB l

B - TB TB TB TB

DPA

360,71

mg/kg BB

B TB - TB TB TB

DPA

360,71

mg/kg BB 1

jam + CCl4

2 ml/kg BB

B TB TB - TB TB

DPA

360,71

mg/kg BB 4

jam + CCl4

2 ml/kg BB

B TB TB TB - TB

DPA

360,71

mg/kg BB 6

jam + CCl4

2 ml/kg BB

B TB TB TB TB -

Keterangan: DPA = Dekok Persea americana

B = Berbeda bermakna (p<0,05)

TB = Berbeda tidak bermakna (p>0,05)


35

Gambar 7. Diagram batang rata-rata pengaruh waktu protektif pemberian

dekok biji P. americana secara jangka pendek terhadap hepatotoksisitas

karbon tetraklorida pada aktivitas serum ALT

Gambar 8. Diagram batang rata-rata pengaruh waktu protektif pemberian

dekok biji P. americana secara jangka pendek terhadap hepatotoksisitas

karbon tetraklorida pada aktivitas serum AST


36

Tabel. VI Hasil analisis statistik uji Post Hoc Scheffe dari kebermaknaan AST

antar kelompok

Kelompok

Kontrol

hepatooksin

CCl4 2

ml/kg BB

Kontrol

negatif

olive oil 2

ml/kg BB

DPA

360,71

mg/kg BB

DPA

360,71

mg/kg BB

1 jam +

CCl4 2

ml/kg BB

DPA

360,71

mg/kg BB

4 jam +

CCl4 2

ml/kg BB

DPA

360,71

mg/kg BB

6 jam +

CCl4 2

ml/kg BB

Kontrol

hepatooksin

CCl4 2

ml/kg BB

- B B B B B

Kontrol

negatif

olive oil 2

ml/kg BB l

B - B B B B

DPA

360,71

mg/kg BB

B B - TB B B

DPA

360,71

mg/kg BB 1

jam + CCl4

2 ml/kg BB

B B TB - TB TB

DPA

360,71

mg/kg BB 4

jam + CCl4

2 ml/kg BB

B B B TB - TB

DPA

360,71

mg/kg BB 6

jam + CCl4

2 ml/kg BB

B B TB TB TB -

Ket: B = berbeda bermakna (p < 0,05) TB = berbeda tidak bermakna (p > 0,05)

1. Kontrol negatif (olive oil 2 ml/kgBB)

Pada penelitian ini dilakukan juga pengujian pada kelompok kontrol

negatif. Tujuan dari pengujian ini adalah untuk memastikan bahwa peningkatan

aktivitas serum ALT dan AST pada hewan uji hanya disebabkan karena

pemberian hepatotoksin karbon tetraklorida, dan bukan akibat dari pemberian

pelarut yang digunakan dalam penelitian ini, yaitu olive oil. Dosis pemberian olive


37

oil yang digunakan sama dengan dosis karbon tetraklorida, yaitu 2 ml/kg BB. Hal

ini dilakukan agar diketahui apakah pada dosis yang sama dengan hepatotoksin

yang diberikan pada hewan uji, olive oil memberikan pengaruh terhadap aktivitas

serum ALT dan AST atau tidak, sehingga hasilnya dapat digunakan untuk

perlakuan hewan uji pada jam ke-1, 4, dan 6. Berdasarkan pengujian tersebut

diperoleh nilai aktivitas rata-rata ALT dan AST seperti terlihat pada Tabel. VII,

dan diagram batang hasil pengukuran aktivitas ALT dan AST tersaji pada Gambar

9.

Tabel. VII Perbandingan kontrol olive oil jam ke-0 dan 24 pada aktivitas serum

ALT dan AST hewan uji (n=5)

Perlakuan Purata ± SE

ALT

Olive oil jam

ke-0

Olive oil jam

ke-24

jam ke-0 41,6 ± 1,1 B

jam ke-24 47,6 ± 1,9 B

AST

jam ke-0 Olive oil jam

ke-24

jam ke-0 50,2 ± 2,2 B

jam ke-24 60,2 ± 2,3 B

Ket: B = berbeda bermakna (p < 0,05) TB = tidak bermakna (p > 0,05)

Gambar 9. Diagram batang rata-rata perbandingan ALT kontrol olive oil

jam ke-0 dan 24


38

Gambar 10. Diagram batang rata-rata perbandingan AST kontrol olive oil

jam ke-0 dan 24

Berdasarkan hasil pengukuran ALT seperti yang sudah disajikan pada

Tabel. VII dan Gambar 6. terlihat nilai ALT jam ke-0, yaitu sebelum pemberian

kontrol negatif olive oil adalah sebesar 41,6 ± 1,1 U/L, sedangkan nilai ALT jam

ke-24 setelah pemberian olive oil menjadi 47,6 ± 1,9 U/L. Secara statistik, data

tersebut menunjukkan perbedaan yang bermakna (p<0,05) pada jam ke-0 dan 24,

dimana jika dilihat pada Gambar 9. diketahui bahwa aktivitas ALT mengalami

peningkatan pada jam ke-24 setelah pemberian olive oil, namun peningkatan yang

terjadi masih berada pada rentang nilai normal ALT. Sebagai data pendukung,

digunakan data lain berupa aktivitas AST hewan uji pada jam ke-0 dan 24.

Berdasarkan pengukuran yang dilakukan, aktivitas AST pada jam ke-0 sebesar

50,2 ± 2,2 U/L dan mengalami peningkatan aktivitas pada jam ke-24 menjadi 60,2

± 2,3 U/L, dimana perolehan data secara statistik menunjukkan adanya perbedaan


39

yang bermakna (p<0,05) antara aktivitas AST pada jam ke-0 dan 24 setelah

pemberian olive oil, namun peningkatan nilai AST tersebut masih berada pada

rentang nilai normal.

Dengan demikian, hasil pengukuran terhadap aktivitas ALT dan AST

hewan uji setelah pemberian olive oil 2 ml/kgBB menunjukkan peningkatan.

Akan tetapi, peningkatan tersebut masih di dalam batas normal aktivitas ALT dan

AST, sehingga dapat disimpulkan bahwa pemberian olive oil 2 ml/kgBB tidak

menyebabkan hepatotoksik.

2. Kontrol hepatotoksin (karbon tetraklorida 2 ml/kgBB)

Tujuan dilakukan kontrol hepatotoksin adalah untuk mengetahui

pengaruh pemberian karbon tetraklorida 2 ml/kgBB terhadap sel hepar hewan uji

yang ditunjukkan dengan adanya peningkatan aktivitas ALT dan AST. Pengujian

tersebut dilakukan dengan memejankan karbon tetraklorida 2ml/kgBB secara

intraperitonial pada hewan uji. Kemudian dilakukan pencuplikan darah pada jam

ke-24 untuk diukur aktivitas ALT dan AST dan dibandingkan dengan kelompok

kontrol olive oil. Berdasarkan hasil pengukuran yang terlihat pada Tabel. IV,

terjadi peningkatan aktivitas ALT hingga 183,2 U/L yang memberikan perbedaan

bermakna (p<0,05) terhadap kontrol olive oil (Tabel. V). Dari pengukuran ini,

aktivitas ALT hewan uji setelah dipejani hepatotoksin meningkat tiga kali lipat

hingga lebih dari rata-rata ALT tikus yang diberi kontrol olive oil. Data tersebut

telah sesuai dengan penelitian Zimmerman (1999) bahwa pemejanan karbon

tetraklorida dapat mengakibatkan peningkatan aktivitas ALT menjadi tiga kalinya.


40

Pada pengukuran AST, terjadi peningkatan aktivitas AST menjadi 476,8

U/L, dimana aktivitas AST ini meningkat sekitar 10 kali lipat dari rata-rata

aktivitas AST pada kelompok kontrol olive oil, dimana kenaikan aktivitas AST ini

telah sesuai dengan teori, yaitu empat kalinya (Zimmerman, 1999). Data yang

diperoleh menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna (p<0,05) dibandingkan

dengan kontrol olive oil, seperti yang tertera pada Tabel. VI.

Berdasarkan uji tersebut, adanya peningkatan aktivitas ALT dan AST

pada hewan uji menunjukkan bahwa karbon tetraklorida 2 ml/kgBB memiliki efek

hepatotoksik pada hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini.

3. Kontrol perlakuan (dekok biji P. americana dosis 360,71 mg/kgBB)

Dalam penelitian ini dilakukan kontrol perlakuan untuk mengetahui

bahwa pemberian dekok biji P. americana dosis 360,71 mg/kgBB tidak

memberikan pengaruh terhadap kenaikan aktivitas ALT dan AST pada hewan uji.

Uji tersebut dilakukan dengan memberikan dekok P. americana pada hewan uji

secara per oral. Kemudian pada jam ke-24 dilakukan pencuplikan darah melalui

sinus orbitalis yang selanjutnya diukur aktivitas ALT dan AST. Berdasarkan

pengukuran, kontrol perlakuan dekok P. americana 360,71 mg/kgBB memberikan

rata-rata aktivitas ALT sebesar 36,6 ± 0,5 U/L yang memiliki perbedaan yang

tidak bermakna (p>0,05) dibandingkan dengan kontrol olive oil, dengan nilai

aktivitas ALT kontrol dekok lebih kecil dibandingkan dengan kontrol olive oil.

Pada pengukuran aktivitas AST secara statistik diperoleh rata-rata aktivitas AST

sebesar 91,6 ± 4,4 U/L dengan perbedaan yang bermakna (p<0,05) terhadap

kelompok kontrol olive oil, dimana nilai AST yang tinggi ini mungkin disebabkan


41

karena adanya peningkatan AST di jaringan lain selain di hati, seperti jantung,

otot rangka, dan ginjal.

Berdasarkan data-data tersebut, dapat diketahui bahwa pemberian dekok

P. americana 360,71 mg/kgBB tidak berdampak pada kerusakan hepar hewan uji.

4. Kelompok praperlakuan dekok biji P. americana dosis 360,71 mg/kgBB

pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB

Kelompok perlakuan diberikan praperlakuan dekok biji P. americana

dosis 360,71 mg/kgBB secara jangka pendek, yaitu pada jam ke-1, 4, dan 6

sebelum hewan uji diberi pemejanan karbon tetraklorida 2 ml/kgBB. Hasil

pengujian pada kelompok praperlakuan jam ke-1 (Tabel. IV) terlihat rata-rata

aktivitas ALT sebesar 36,6 ± 1,4 U/L. Perhitungan analisis berdasarkan statistik

dibandingkan dengan kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida menunjukkan

perbedaan yang bermakna (p<0,05). Hal ini dapat dikatakan bahwa dekok biji P.

americana dosis 2 ml/kgBB memiliki efek hepatoprotektif dengan efek

hepatoprotektif sebesar 108,1%. Pada kelompok praperlakuan jam ke-1

dibandingkan pada kelompok kontrol olive oil menunjukkan perbedaan yang tidak

bermakna (p>0,05), dimana purata kelompok perlakuan jam ke-1 menunjukkan

bahwa aktivitas ALT sudah kembali normal dengan nilai yang lebih kecil

dibandingkan kelompok kontrol olive oil. Aktivitas AST pada jam ke-1

menunjukkan purata sebesar 115,8 ± 13,1 U/L yang menunjukkan perbedaan yang

bermakna (p<0,05) terhadap kelompok kontrol hepatotoksin dan kelompok

kontrol olive oil dimana aktivitas AST hewan uji telah mengalami penurunan,

namun penurunan aktivitas AST tersebut belum kembali pada aktivitas normal.

Berdasarkan data tersebut, dapat disimpulkan bahwa praperlakuan dekok biji P.


42

americana dosis 360,71 mg/kgBB jam ke-1 mampu memberikan efek

hepatoprotektif pada tikus jantan yang diinduksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB.

Pada kelompok praperlakuan dekok biji P. americana jam ke-4 diperoleh

rata-rata aktivitas ALT sebesar 48,6 ± 2,4 U/L, dengan uji statistik terhadap

kelompok hepatotoksin menunjukkan perbedaan yang bermakna (p<0,05), dan

terhadap kelompok kontrol olive oil menunjukkan perbedaan yang tidak

bermakna (p<0,05) dimana aktivitas ALT pada kelompok praperlakuan jam ke-4

sudah kembali pada range normal ALT. Dengan demikian dapat dikatakan bahwa

dekok biji P. americana 360,71 mg/kgBB memiliki efek hepatoprotektif, dengan

persen efek hepatoprotektif yang dihasilkan untuk aktivitas ALT sebesar 99,2%.

Pada pengukuran aktivitas AST praperlakuan jam ke-4 pada hewan uji

diperoleh hasil 110,0 ± 5,0 U/L; dengan uji statistik ditemukan adanya perbedaan

yang bermakna (p<0,05) terhadap kelompok kontrol hepatotoksin dan kelompok


namun penurunan aktivitas AST tersebut belum kembali pada aktivits normal.

Dengan demikian dapat dinyatakan bahwa dekok P. americana 360,71 mg/kgBB

memiliki efek hepatoprotektif pada tikus jantan yang diinduksi karbon tetraklorida

2 ml/kgBB.

Pengukuran rerata aktivitas ALT pada praperlakuan jam ke-6

menunjukkan hasil 47,2 ± 3,5 U/L dengan uji statistik terhadap kelompok kontrol

karbon tetraklorida menunjukkan perbedaan yang bermakna (p<0,05), dan

terhadap kelompok kontrol olive oil menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna

(p>0,05), dimana aktivitas ALT sudah kembali pada keadaan normal, dengan


43

rerata nilai aktivitas kelompok praperlakuan jam ke-6 lebih kecil dibanding

kelompok kontrol olive oil. Berdasarkan data tersebut, dapat diketahui bahwa

pemberian dekok biji P. americana 360,71 mg/kgBB pada kelompok

praperlakuan jam ke-6 memiliki efek hepatoprotektif, dimana berdasarkan

perhitungan diperoleh efek hepatoprotektif sebesar 100,2%.

Rerata aktivitas AST pada kelompok praperlakuan jam ke-6 adalah 124,6

± 8,1 U/L. Berdasarkan uji statistik yang dilakukan, terdapat perbedaan yang

bermakna (p<0,05) terhadap kelompok kontrol hepatotoksin dan kelompok


namun penurunan aktivitas AST tersebut belum kembali pada aktivitas normal.

Berdasarkan data tersebut, dapat disimpulkan bahwa praperlakuan dekok biji P.

americana dosis 360,71 mg/kgBB jam ke-6 mampu memberikan efek

hepatoprotektif pada tikus jantan yang diinduksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB.

Berdasarkan perbandingan aktivitas ALT dan AST secara statistik yang

dilakukan antar kelompok praperlakuan (Tabel. V dan Gambar 8.) dapat dilihat

adanya perbedaan yang tidak bermakna (p>0,05) pada kelompok praperlakuan

jam ke-1, 4, dan 6. Hasil perhitungan secara statistik ini menunjukkan bahwa

dekok biji P. americana pada kelompok praperlakuan jam ke-1, 4, dan 6 memiliki

efek yang sama sebagai hepatoprotektif pada tikus yang diinduksi karbon

tetraklorida dosis 2 ml/kgBB.

Jika dibandingkan dengan kelompok kontrol olive oil, ditemukan adanya

perbedaan yang tidak bermakna (p>0,05) antar kelompok perlakuan. Hal ini

menunjukkan bahwa aktivitas ALT hewan uji sudah kembali pada keadaan


44

normal. Sedangkan pada aktivitas AST, kelompok praperlakuan jam ke-1, 4 dan 6

memiliki perbedaan yang bermakna (p<0,05), dimana aktivitas AST telah

mengalami penurunan, namum belum kembali pada aktivitas normal yang

kemungkinan disebabkan karena kondisi patologis hewan uji yang berbeda. Di

samping itu, peningkatan aktivitas AST tidak hanya disebabkan karena kerusakan

yang terjadi pada hepar saja, sebab enzim AST juga terdapat jantung, ginjal, dan

otak (Cahyono, 2006).

Berdasarkan uji statistik yang telah dilakukan, jangka waktu jam ke-1

disarankan sebagai waktu pemberian dekok biji P. americana dosis 360,71

mg/kgBB yang paling baik dimana terdapat perbedaan yang tidak bermakna

(p>0,05) terhadap kelompok kontrol olive oil, dengan aktivitas ALT dan AST

pada kelompok praperlakuan diketahui memiliki purata yang lebih kecil

dibandingkan kelompok praperlakuan jam ke-4 dan jam ke-6, dengan efek

hepatoprotektif yang ditimbulkan paling besar dibandingkan pada kelompok

praperlakuan jam ke-4 dan jam ke-6. Secara keseluruhan, dekok biji P. americana

dosis 360,71 mg/kgBB memiliki pengaruh terhadap penurunan aktivitas ALT dan

AST pada tikus jantan yang terinduksi karbon tetraklrorida dosis 2 ml/kgBB, yang

dapat mengakibatkan terjadinya kerusan hati (steatosis) pada hewan uji.

Hepatotoksin yang digunakan dalam penelitian ini akan membentuk

radikal bebas triklorometil (•CCl3) dengan adanya aktivitas metabolisme CYP2EI,

yang selanjutnya akan diubah mejadi radikal triklorometilperoksi (CC3O2•) yang

bersifat lebih reaktif (Hodgson, 2010) yang akan mengakibatkan terjadinya

peroksidasi lipid dan akan menghasilkan senyawa 4-hydroxyalkenal dan


45

hydroxynoneal yang dapat menghambat sintesis protein dan menghambat enzim

glukosa-6-phosphatese. Penghambatan sintesis protein ini mengakibatkan

penurunan produksi lipoprotein yang berperan dalam transport lipid keluar dari sel

hati, sehingga akan mengakibatkan terjadinya steatosis (Timbrell, 2009). Adanya

peroksidasi lipid juga dapat mengakibatkan keluarnya enzim ALT dan AST

(Wahyuni, 2005) karena peroksidasi lipid menghasilkan produk yang

menyebabkan kerusakan berupa gangguan integritas pada membran sel dan

kerusakan mitokondria (Timbrell, 2009).

Penurunan aktivitas ALT dan AST yang terjadi diduga disebabkan

karena adanya kandungan flavoniod yang terdapat dalam dekok biji P. americana.

Kemungkinan flavonoid menangkap radikal triklorometil (•CCl3) dan diubah

menjadi senyawa yang tidak toksik sehingga tidak merusak retikulum endoplasma

sel hepar. Di samping itu, kemungkinan senyawa tersebut dapat meningkatkan

sintesis enzim GST pada hepar sehingga radikal bebas yang terdapat di dalam

tubuh ditangkap oleh senyawa tersebut yang ditandai dengan penurunan aktivitas

ALT dan AST.

Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Nugraha dan Hendra (2011),

dan Martha (2013), ditemukan bahwa perbedaan hepatotoksin yang diberikan

kepada hewan uji menimbulkan jenis kerusakan hepar yang berbeda dengan

waktu efektif pemberian infusa daun M. Tanarius yang berbeda pula. Berdasarkan

data tersebut, peneliti menyarankan agar dapat digunakan senyawa model

parasetamol untuk mengetahui waktu efektif yang dihasilkan dari pemberian

dekok biji P. americana. Selanjutnya, perlu juga dilakukan variasi dosis


46

pemberian dekok biji P. americana pada waktu efektif yang diperoleh dari

penelitian tersebut yang mungkin akan menghasilkan efek hepatoprotektif lebih

optimal. Di samping itu, untuk mengetahui kerusakan struktural yang terjadi

akibat pemberian karbon tetraklorida maka perlu dilihat pula gambaran histologis

hepar hewan uji.


47

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan

Berdasarkan data yang diperoleh dan uji statistik yang dilakukan, maka

dapat disimpulkan:

1. Pemberian dekok biji P. americana secara jangka pendek dosis 360,71

mg/kgBB memiliki pengaruh terhadap penurunan aktivitas ALT dan AST

pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB dengan waktu 1, 4,

dan 6 jam dengan hasil purata aktivitas ALT secara berturut-turut adalah 36,6

± 1,4, 48,6 ± 2,4, 47,2 ± 3,5 U/L dengan purata penurunan aktivitas AST

secara berturut-turut adalah 115,8 ± 13,1, 110,0 ± 5,0, dan 124,6 ± 8,1 U/L.

2. Jam ke-1 praperlakuan dekok biji P. americana dosis 360,71 mg/kgBB

merupakan waktu efektif dalam menurunkan aktivitas ALT dan AST tikus

jantan yang terinduksi karbon tetraklorida 2 ml/kg BB.

B. Saran

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai:

1. Pengaruh waktu protektif pemberian dekok biji P. americana jangka pendek

menggunakan senyawa model parasetamol terhadap aktivitas ALT-AST tikus

jantan.

2. Pengaruh dosis pemberian dekok P. americana waktu 1 jam terhadap

aktivitas ALT dan AST pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida.


48

3. Gambaran histologis hepar hewan uji akibat pemberian karbon tetraklorida

untuk mengetahui kerusakan struktural yang terjadi.


49

DAFTAR PUSTAKA

Alhassan, A. J., Sule, M. S., Atiku, M. K., Wudil, A. M., dan Abubakar, H., 2012,

Effect of Aqueous Avocado Pear (Persea americana) seed extract on

alloxan induced diabetes rats, GJMS, Vol. 2 (1), 005-011.

Arukwe, U., Amadi, B.,Duru, M., Agomuo,E., Adindu, E.,Odika, P., Lele, K.,

Egejuru, L., dan Anundike, J., 2012, Chemical Composition of Persea

americana Leaf, Fruit and Seed, IJRRAS 11 (2), 345.

Benitz, K. F., 1970, Measurement of Chronic Toxicity, Methods in Toxicology,

Blackwell Scientific Publications, Oxford.

Cahyono J.B.S.B, 2009, Hepatitis A, Kanisius, Yogyakarta, pp.78.

Dipiro, 2008, Pharmacotherapy A Pathophisiologic Approach, Edisi Ketujuh,

McGrraw Hill, USA, pp. 636.

Direktorat Jenderal Pangawasan Obat dan Makanan, 1995, Farmakope Indonesia,

Edisi IV, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, pp. 7.

Donatus, I. A., 1992, Fitofarmaka Penyakit Hati, Kumpulan Naskah Lengkap

Simposium Nasional Hepatitis, Jakarta, pp. 23.

Forrest, E., 2006, Hepatic Disorders, Edisi Kedua, Pharmaceutical Press, London,

pp. 193, 201,202.

Guyton, A.C., Hall, J.E., 2006, Textbook of Medical Physicology, diterjemahkan

oleh Irawati Setiawan, Edisi 9, Penerbit EGC, Jakarta, pp. 904, 1103.

Hastuti, T., 2008, Aktivitas Enzim Transaminase dan Gambaran Histopatologi

Tikus yang Diberikan Kelapa Kopyor Pasca Induksi Parasetamol,

Skripsi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut

Pertanian Bogor, Bogor.

Haryanto, S., 2009, Ensiklopedi Tanaman Obat Indonesia, Palmall, Yogyakarta,

pp 25-26.

Hodgson, E., 2010, A Textbook of Modern Toxicology, Edisi Keempat, John

Wiley & Sons Inc., New Jersey, pp. 281, 282.

Idris, S., Ndukwe, G. I., dan Gimba, C. E., 2009, Preliminary Phytochemical

Screening and Antimicrobial Activity of Seed Extracts of Persea

america (Avocado Pear), JPAS, 2(1), 173-176.


50

Janakat, S., dan Al-Merie, H., 2002, Optimization of the dose and route of

injection, and characterization of the time course of carbon tetrachloride-

induced hepatotoxicity in the rat, J. Pharm. Tox. Methods, 48, 41-44.

Lu, F. C., 1995, Toksikologi Dasar: Asas, Organ Sasaran, dan Penilaian Resiko,

Edisi kedua, UI Press, Jakarta, pp. 208-212.

Malangngi, L., Meiske, S., dan Jessy, J., 2012, Penentuan Kandungan Tanin dan

Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Biji Buah Alpukat (Persea americana

Mill), Jurnal MIPA UNSRAT , 1 (1) 5-10.

Martha, L. R., 2013, Pengaruh Waktu Protektif Pemberian Infusa Daun

Macaranga tanarius L. Secara Jangka pendek Terhadap Kadar ALT-

AST Pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida, Skripsi, 38, Universitas

Sanata Dharma, Yogyakarta.

McPhee dan Ganong, 2007, Patofisiologi Penyakit: Pengantar Menuju

Kedokteran Klinis, Edisi Kelima, Penerbit Buku Kedokteran EGC,

Jakarta, pp. 419-462.

Mercer University School of Medicine, 2012, Hepatic Pathology,

http://library.med.utah.edu/WebPath/webpath.html, diakses tanggal 20

Maret 2013.

Nugraha, A. W., dan Hendra, P., 2011, Pengaruh Pemberian Secara Jangka

pendek Infusa Macaranga tanarius L. Terhadap Kadar ALT Tikus Jantan

Terinduksi Parasetamol, Workshop & Seminar Nasional, Fakultas

Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.

Nwaoguikpe. R . N., dan Braide. W, 2011, The Effect of Aqueous Seed Extract of

Persea americana (Avocado pear) on Serum Lipid and Cholesterol Levels

in Rabbits, AJPPR, Vol. 1(2) pp. 023-029.

Owolabi, M.A., Jaja, S.I., dan Coker, H. A., 2005, Vasorelaxant Action of

Aqueous Extract of The Leaves of Persea americana on Isolated Thoracic

Rat Aorta, Fitoterapia, 76, 567–573.

Price, S. A., Wilson, L. M., 2005, Patofisiologi: Konsep Klinis Proses-Proses

Penyakit, Edisi 6 , Vol 1, Penerbit EGC, Jakarta, pp.473-476.

Proseanet, 2012, Persea americana

http://www.proseanet.org/prohati4/browser.php?keywords=persea+ame

ricana&do_search=Search+Now&pcategory=0, diakses tanggal 16

Maret 2013.

Rajendran, R., Hemalatha, S., Akasakalai, K., MadhuKrishna, C. H., Sohil, B.,

Vital, et. al., 2009, Hepatoprotective Activity of Mimosa pudica Leaves

Againts Carbonterachlorides Induced Toxicity, JNP, 2, 116-122.


http://library.med.utah.edu/WebPath/webpath.html

51

Sherwood, 2007, Fisiologi Manusia: Dari Sel ke Sistem, Edisi Keenam, Penerbit

Buku Kedokteran EGC, Jakarta, pp. 669-671.

Sofia, N.A., Nurdjanah, S., dan Ratnasari, N., 2009, Kadar Leptin pada Populasi

non Diabetes dengan dan tanpa Non Alcoholic Fatty Liver (NAFL),

Berkala Kesehatan Klinik, 15 (1), 49-55.

Timbrell J. A., 2009, Principles of Biochemical Toxicology, Informa Healthcare

USA, New York, pp. 308, 309.

Wahyuni, S., 2005, Pengaruh Daun Sambiloto (Andrographis paniculata, Ness)

Terhadap Kadar ALT dan AST Tikus Putih, GAMMA, 1(1),45-53.

WHO, 2013, http://www.euro.who.int/en/what-we-do/health-

topics/communicable-diseases/hepatitis/facts-and-figures, diakses

tanggal 2 Mei 2013.

Wibowo, D.S., dan Paryana, 2009, Anatomi Tubuh Manusia, Graha Ilmu,

Indonesia, hal. 347,348,351, 352.

World Agroforestry Centre, 2002, Botanic Nomenclature to Agroforestry trees:

Persea

americana,http://www.worldagroforestry.org/sea/products/afdbases/af/as

p/SpeciesInfo.asp?SpID=1274, diakses tanggal 3 Maret 2013

Zimmerman, H. J., 1999, Hepatotoxicity, Appleton Century Crofts, NewYork, pp.

167-171.


http://www.euro.who.int/en/what-we-do/health-topics/communicable-diseases/hepatitis/facts-and-figures

http://www.euro.who.int/en/what-we-do/health-topics/communicable-diseases/hepatitis/facts-and-figures

52

LAMPIRAN


53

Lampiran 1. Foto biji serbuk P. Americana

Lampiran 2. Foto dekok biji P. Americana


54

Lampiran 3. Surat determinasi tanaman P. Americana


55

Lampiran 4. Data organoleptis dan mikroskopis hasil determinasi serbuk biji

P. americana


56


57


58


59


60


61

Lampiran 5. Surat Ethical Clearance


62

Lampiran 6. Analisis statistik data ALT dan AST uji pendahuluan waktu

pencuplikan darah hewan uji setelah diinduksi karbon tetraklorida 2

ml/kgBB

ALT

Descriptive Statistics

N Mean Std. Deviation Minimum Maximum

alt0 3 68.0000 16.70329 50.00 83.00

alt24 3 2.0333E2 27.53785 185.00 235.00

alt48 3 54.6667 9.45163 44.00 62.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test

alt0 alt24 alt48

N 3 3 3

Normal Parametersa Mean 68.0000 2.0333E2 54.6667

Std. Deviation 1.67033E1 2.75379E1 9.45163

Most Extreme Differences Absolute .238 .353 .304

Positive .193 .353 .219

Negative -.238 -.253 -.304

Kolmogorov-Smirnov Z .412 .611 .527

Asymp. Sig. (2-tailed) .996 .850 .944

a. Test distribution is Normal.


63

Descriptives

ALT

N Mean

Std.

Deviation

Std.

Error

95% Confidence

Interval for Mean

Minimu

m

Maximu

m

Lower

Bound

Upper

Bound

orientasi CCl4

jam ke-0 3

68.000

0 16.70329

9.6436

5 26.5067 109.4933 50.00 83.00

orientasi CCl4

jam ke-24 3

2.0333

E2 27.53785

15.898

99 134.9255 271.7412 185.00 235.00

orientasi CCl4

jam ke-0 3

54.666

7 9.45163

5.4569

0 31.1875 78.1458 44.00 62.00

Total 9

1.0867

E2 73.18470

24.394

90 52.4119 164.9214 44.00 235.00

Test of Homogeneity of Variances

ALT

Levene Statistic df1 df2 Sig.

2.732 2 6 .143

ANOVA

ALT

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 40594.667 2 20297.333 54.046 .000

Within Groups 2253.333 6 375.556

Total 42848.000 8


64

Multiple Comparisons

ALT

Scheffe

(I) kelompok (J) kelompok

Mean

Difference

(I-J)

Std.

Error Sig.

95% Confidence

Interval

Lower

Bound

Upper

Bound

orientasi CCl4 jam

ke-0

orientasi CCl4 jam

ke-24 -135.33333

* 15.8231

0 .000 -186.0821 -84.5846

orientasi CCl4 jam

ke-0 13.33333

15.8231

0 .715 -37.4154 64.0821

orientasi CCl4 jam

ke-24

orientasi CCl4 jam

ke-0 135.33333

* 15.8231

0 .000 84.5846 186.0821

orientasi CCl4 jam

ke-0 148.66667

* 15.8231

0 .000 97.9179 199.4154

orientasi CCl4 jam

ke-0

orientasi CCl4 jam

ke-0 -13.33333

15.8231

0 .715 -64.0821 37.4154

orientasi CCl4 jam

ke-24 -148.66667

* 15.8231

0 .000 -199.4154 -97.9179

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

ALT

Scheffe

kelompok N

Subset for alpha = 0.05

1 2

orientasi CCl4 jam ke-0 3 54.6667



Sig. .715 1.000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.


65

AST



ast0 3 88.3333 6.50641 82.00 95.00

ast24 3 4.0767E2 46.54389 360.00 453.00

ast48 3 1.4733E2 13.01281 134.00 160.00


ast0 ast24 ast48

N 3 3 3

Normal Parametersa Mean 88.3333 4.0767E2 1.4733E2

Std. Deviation 6.50641 4.65439E1 1.30128E1


Positive .187 .180 .181

Negative -.181 -.187 -.187


Asymp. Sig. (2-tailed) 1.000 1.000 1.000



66


ast0 ast24 ast48

N 3 3 3

Normal Parametersa Mean 88.3333 4.0767E2 1.4733E2

Std. Deviation 6.50641 4.65439E1 1.30128E1


Positive .187 .180 .181

Negative -.181 -.187 -.187


Asymp. Sig. (2-tailed) 1.000 1.000 1.000

Descriptives

AST

N Mean

Std.

Deviation

Std.

Error

95% Confidence

Interval for Mean

Minimu

m

Maximu

m

Lower

Bound

Upper

Bound

orientasi CCl4 jam

ke-0 3

88.333

3 6.50641

3.7564

8 72.1705 104.4961 82.00 95.00

orientasi CCl4 jam

ke-24 3

4.0767

E2 46.54389

26.872

13 292.0452 523.2881 360.00 453.00

orientasi CCl4 jam

ke-0 3

1.4733

E2 13.01281

7.5129

5 115.0077 179.6590 134.00 160.00

Total 9

2.1444

E2 149.15773

49.719

24 99.7917 329.0972 82.00 453.00


AST


2.707 2 6 .145


67

ANOVA

AST


Between Groups 173228.222 2 86614.111 109.269 .000

Within Groups 4756.000 6 792.667

Total 177984.222 8


AST

Scheffe

(I) kelompok (J) kelompok

Mean

Difference

(I-J)

Std.

Error Sig.

95% Confidence

Interval

Lower

Bound

Upper

Bound

orientasi CCl4 jam

ke-0

orientasi CCl4 jam

ke-24 -319.33333

* 22.9879

2 .000 -393.0615 -245.6051

orientasi CCl4 jam

ke-0 -59.00000

22.9879

2 .108 -132.7282 14.7282

orientasi CCl4 jam

ke-24

orientasi CCl4 jam

ke-0 319.33333

* 22.9879

2 .000 245.6051 393.0615

orientasi CCl4 jam

ke-0 260.33333

* 22.9879

2 .000 186.6051 334.0615

orientasi CCl4 jam

ke-0

orientasi CCl4 jam

ke-0 59.00000

22.9879

2 .108 -14.7282 132.7282

orientasi CCl4 jam

ke-24 -260.33333

* 22.9879

2 .000 -334.0615 -186.6051



68

Scheffe

kelompok N


1 2




Sig. .108 1.000



69

Lampiran 7. Analisis statistik data ALT dan AST kelompok kontrol olive oil

dosis 2 ml/kgBB

ALT



alt0 5 41.6000 2.50998 40.00 46.00

alt24 5 47.6000 4.39318 43.00 54.00


alt0 alt24

N 5 5

Normal Parametersa Mean 41.6000 47.6000

Std. Deviation 2.50998 4.39318

Most Extreme Differences Absolute .394 .242

Positive .394 .242

Negative -.262 -.148

Kolmogorov-Smirnov Z .882 .541

Asymp. Sig. (2-tailed) .418 .931


Descriptives

alt

N Mean

Std.

Deviation

Std.

Error

95% Confidence Interval

for Mean

Minimu

m

Maximu

m

Lower

Bound

Upper

Bound

olive jam

0 5

41.600

0 2.50998 1.12250 38.4834 44.7166 40.00 46.00

olive jam

24 5

47.600

0 4.39318 1.96469 42.1452 53.0548 43.00 54.00

Total 10

44.600

0 4.62361 1.46211 41.2925 47.9075 40.00 54.00


70


alt


2.482 1 8 .154

ANOVA

alt


Between Groups 90.000 1 90.000 7.031 .029

Within Groups 102.400 8 12.800

Total 192.400 9

Paired Samples Statistics

Mean N Std. Deviation Std. Error Mean

Pair 1 olive jam 0 41.6000 5 2.50998 1.12250

olive jam 24 47.6000 5 4.39318 1.96469

Paired Samples Correlations

N Correlation Sig.

Pair 1 olive jam 0 & olive jam 24 5 .866 .058

Paired Samples Test

Paired Differences

t df Sig. (2-tailed)

Mean

Std. Deviation

Std. Error Mean

95% Confidence Interval of the

Difference

Lower Upper

Pair 1 olive jam 0 - olive jam

24 -6.00000 2.54951 1.14018 -9.16563 -2.83437 -5.262 4 .006


71

AST



ast0 5 50.2000 4.96991 43.00 54.00

ast24 5 60.2000 5.26308 55.00 69.00


ast0 ast24

N 5 5




Positive .222 .315





72


ast0 ast24

N 5 5




Positive .222 .315





Descriptives

ast

N Mean

Std.

Deviation

Std.

Error


for Mean

Minimu

m

Maximu

m

Lower

Bound

Upper

Bound

olive jam 0 5 50.2000 4.96991 2.22261 44.0290 56.3710 43.00 54.00

olive jam

24 5 60.2000 5.26308 2.35372 53.6650 66.7350 55.00 69.00

Total 10 55.2000 7.14609 2.25979 50.0880 60.3120 43.00 69.00


ast


.134 1 8 .724

ANOVA

ast


Between Groups 250.000 1 250.000 9.542 .015

Within Groups 209.600 8 26.200


73

Descriptives

ast

N Mean

Std.

Deviation

Std.

Error


for Mean

Minimu

m

Maximu

m

Lower

Bound

Upper

Bound

olive jam 0 5 50.2000 4.96991 2.22261 44.0290 56.3710 43.00 54.00

olive jam

24 5 60.2000 5.26308 2.35372 53.6650 66.7350 55.00 69.00

Total 459.600 9

Paired Samples Statistics

Mean N Std. Deviation Std. Error Mean

Pair 1 olive jam 0 50.2000 5 4.96991 2.22261

olive jam 24 60.2000 5 5.26308 2.35372

Paired Samples Correlations

N Correlat

ion Sig.

Pair 1

olive jam 0 & olive jam 24

5 .543 .344

Paired Samples Test

Paired Differences

t df

Sig. (2-tailed)

Mean

Std. Deviation

Std. Erro

r Mea

n

95% Confidence Interval of

the Difference

Lower

Upper

Pair 1

olive jam 0 - olive jam 24

-1.0000

0E1

4.89898

2.19089

-16.08

289

-3.91711

-4.564

4 .010


74



kelompok_selisih_ALT 5 6.0000 2.54951 3.00 9.00


kelompok_selisih

_ALT

N 5

Normal Parametersa Mean 6.0000

Std. Deviation 2.54951

Most Extreme Differences Absolute .184

Positive .184

Negative -.184

Kolmogorov-Smirnov Z .411

Asymp. Sig. (2-tailed) .996



75



kelompok_selisih_AST 5 9.2000 4.81664 4.00 16.00


kelompok_selisih

_AST

N 5

Normal Parametersa Mean 9.2000


Most Extreme Differences Absolute .198

Positive .198

Negative -.140

Kolmogorov-Smirnov Z .444



Lampiran 8. Analisis statistik data ALT dan AST kelompok perlakuan

dekok P. Americana dosis 360,71 mg/kg BB terinduksi karbon tetraklorida 2

ml/kgBB

ALT



k_ccl4 5 1.8320E2 11.43241 168.00 197.00

k_olive 5 47.6000 4.39318 43.00 54.00

k_dekok 5 36.6000 1.14018 35.00 38.00

jam1 5 36.6000 3.13050 34.00 42.00

jam4 5 48.6000 5.41295 45.00 58.00

jam6 5 47.2000 7.82304 35.00 55.00


76


k_ccl4 k_olive k_dekok jam1 jam4 jam6

N 5 5 5 5 5 5

Normal Parametersa Mean 1.8320E

2 47.6000 36.6000 36.6000 48.6000 47.2000


E1 4.39318 1.14018 3.13050 5.41295 7.82304

Most Extreme

Differences

Absolute .163 .242 .237 .376 .344 .239

Positive .136 .242 .163 .376 .344 .159

Negative -.163 -.148 -.237 -.203 -.253 -.239

Kolmogorov-Smirnov Z .363 .541 .530 .841 .769 .535

Asymp. Sig. (2-tailed) .999 .931 .941 .479 .594 .938




N 5 5 5 5 5 5


2 47.6000 36.6000 36.6000 48.6000 47.2000


E1 4.39318 1.14018 3.13050 5.41295 7.82304

Most Extreme

Differences

Absolute .163 .242 .237 .376 .344 .239

Positive .136 .242 .163 .376 .344 .159

Negative -.163 -.148 -.237 -.203 -.253 -.239


Asymp. Sig. (2-tailed) .999 .931 .941 .479 .594 .938



ALT


3.230 5 24 .023


77

ANOVA

ALT


Between Groups 82284.567 5 16456.913 392.454 .000

Within Groups 1006.400 24 41.933

Total 83290.967 29


ALT

Scheffe

(I) KELOMPOK

(J)

KELOMPOK

Mean

Difference (I-

J) Std. Error Sig.


Lower Bound Upper Bound

kontrol ccl4 kontrol olive oil 135.60000* 4.09553 .000 120.7748 150.4252

kontrol dekok 146.60000* 4.09553 .000 131.7748 161.4252

jam ke-1 146.60000* 4.09553 .000 131.7748 161.4252

jam ke-4 134.60000* 4.09553 .000 119.7748 149.4252

jam ke-6 136.00000* 4.09553 .000 121.1748 150.8252

kontrol olive oil kontrol ccl4 -135.60000* 4.09553 .000 -150.4252 -120.7748

kontrol dekok 11.00000 4.09553 .245 -3.8252 25.8252

jam ke-1 11.00000 4.09553 .245 -3.8252 25.8252

jam ke-4 -1.00000 4.09553 1.000 -15.8252 13.8252

jam ke-6 .40000 4.09553 1.000 -14.4252 15.2252

kontrol dekok kontrol ccl4 -146.60000* 4.09553 .000 -161.4252 -131.7748

kontrol olive oil -11.00000 4.09553 .245 -25.8252 3.8252

jam ke-1 .00000 4.09553 1.000 -14.8252 14.8252

jam ke-4 -12.00000 4.09553 .169 -26.8252 2.8252

jam ke-6 -10.60000 4.09553 .282 -25.4252 4.2252

jam ke-1 kontrol ccl4 -146.60000

* 4.09553 .000 -161.4252 -131.7748

kontrol olive oil -11.00000 4.09553 .245 -25.8252 3.8252

kontrol dekok .00000 4.09553 1.000 -14.8252 14.8252

jam ke-4 -12.00000 4.09553 .169 -26.8252 2.8252


78

jam ke-6 -10.60000 4.09553 .282 -25.4252 4.2252


* 4.09553 .000 -149.4252 -119.7748

kontrol olive oil 1.00000 4.09553 1.000 -13.8252 15.8252

kontrol dekok 12.00000 4.09553 .169 -2.8252 26.8252

jam ke-1 12.00000 4.09553 .169 -2.8252 26.8252

jam ke-6 1.40000 4.09553 1.000 -13.4252 16.2252


* 4.09553 .000 -150.8252 -121.1748

kontrol olive oil -.40000 4.09553 1.000 -15.2252 14.4252

kontrol dekok 10.60000 4.09553 .282 -4.2252 25.4252

jam ke-1 10.60000 4.09553 .282 -4.2252 25.4252

jam ke-4 -1.40000 4.09553 1.000 -16.2252 13.4252


ALT

Scheffe

KELOMPOK N


1 2

kontrol dekok 5 36.6000

jam ke-1 5 36.6000

jam ke-6 5 47.2000

kontrol olive oil 5 47.6000

jam ke-4 5 48.6000

kontrol ccl4 5 183.2000

Sig. .169 1.000



79

AST



k_ccl4 5 4.7680E2 31.87789 441.00 521.00

k_olive 5 60.2000 5.26308 55.00 69.00

k_dekok 5 91.6000 9.93982 75.00 101.00

jam1 5 1.1580E2 29.48220 95.00 167.00

jam4 5 1.1000E2 11.22497 96.00 123.00

jam6 5 1.2460E2 18.25651 106.00 155.00


80



N 5 5 5 5 5 5


2 60.2000 91.6000

1.1580E

2

1.1000E

2

1.2460E

2


E1 5.26308 9.93982

2.94822

E1

1.12250

E1

1.82565

E1

Most Extreme

Differences

Absolute .172 .315 .316 .365 .205 .313

Positive .172 .315 .172 .365 .189 .313

Negative -.131 -.162 -.316 -.240 -.205 -.180


Asymp. Sig. (2-tailed) .998 .703 .700 .519 .984 .711


Kruskal-Wallis Test

Ranks

KELOMPOK N Mean Rank

AST kontrol ccl4 5 28.00

kontrol olive oil 5 3.00

kontrol dekok 5 9.20

jam ke-1 5 15.70

jam ke-4 5 16.50

jam ke-6 5 20.60

Total 30

Test Statisticsa,b

AST

Chi-Square 24.483

df 5

Asymp. Sig. .000

a. Kruskal Wallis Test


81

Test Statisticsa,b

AST

Chi-Square 24.483

df 5

Asymp. Sig. .000

a. Kruskal Wallis Test

b. Grouping Variable:

KELOMPOK



AST 30 1.6317E2 145.40338 55.00 521.00

KELOMPOK 30 3.5000 1.73702 1.00 6.00

Ranks

KELOMPOK N Mean Rank Sum of Ranks

AST kontrol ccl4 5 8.00 40.00

kontrol olive oil 5 3.00 15.00

Total 10

Test Statisticsb

AST

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.611


Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .008a

a. Not corrected for ties.

b. Grouping Variable: KELOMPOK


82

Ranks



kontrol dekok 5 3.00 15.00

Total 10

Test Statisticsb

AST

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.611





Ranks



jam ke-1 5 3.00 15.00

Total 10

Test Statisticsb

AST

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.611






83

Ranks



jam ke-4 5 3.00 15.00

Total 10

Test Statisticsb

AST

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.611





Ranks



jam ke-6 5 3.00 15.00

Total 10

Test Statisticsb

AST

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.619






84

Ranks


AST kontrol olive oil 5 3.00 15.00

kontrol dekok 5 8.00 40.00

Total 10

Test Statisticsb

AST

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.611





Ranks



jam ke-1 5 8.00 40.00

Total 10

Test Statisticsb

AST

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.611






85

Ranks



jam ke-4 5 8.00 40.00

Total 10

Test Statisticsb

AST

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.611





Ranks



jam ke-6 5 8.00 40.00

Total 10

Test Statisticsb

AST

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.619






86

Ranks


AST kontrol dekok 5 3.70 18.50

jam ke-1 5 7.30 36.50

Total 10

Test Statisticsb

AST

Mann-Whitney U 3.500

Wilcoxon W 18.500

Z -1.886





Ranks



jam ke-4 5 7.50 37.50

Total 10

Test Statisticsb

AST


Wilcoxon W 17.500

Z -2.095






87

Ranks



jam ke-6 5 8.00 40.00

Total 10

Test Statisticsb

AST

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.619





Ranks

KELOMPO

K N Mean Rank Sum of Ranks

AST jam ke-1 5 5.00 25.00

jam ke-4 5 6.00 30.00

Total 10

Test Statisticsb

AST


Wilcoxon W 25.000

Z -.522






88

Ranks

KELOMPO


AST jam ke-1 5 4.40 22.00

jam ke-6 5 6.60 33.00

Total 10

Test Statisticsb

AST


Wilcoxon W 22.000

Z -1.152





Ranks

KELOMPO


AST jam ke-4 5 4.00 20.00

jam ke-6 5 7.00 35.00

Total 10

Test Statisticsb

AST


Wilcoxon W 20.000

Z -1.571





89

Test Statisticsb

AST


Wilcoxon W 20.000

Z -1.571





Lampiran 9. Perhitungan persen hepatoprotektif ALT

purata ALT CCl4 − purata ALT 𝑜𝑙𝑖𝑣𝑒 𝑜𝑖𝑙 − (purata ALT perlakuan − purata ALT 𝑜𝑙𝑖𝑣𝑒 𝑜𝑖𝑙)

purata ALT CCl4 − purata ALT 𝑜𝑙𝑖𝑣𝑒 𝑜𝑖𝑙 × 100%

1. Kelompok dekok biji P. americana 360,71 mg/kgBB jam ke-1 + karbon

tetraklorida 2 ml/kgBB:

183,20−47,6 −(36,6−47,6)

183,20−47,6 x 100 % = 108,1%


90



183,20−47,6 −(48,6−47,6)

183,20−47,6 x 100% = 99,2%



183,20−47,6 −(47,2−47,6)

183,20−47,6 x 100% = 100,2%

Lampiran 10. Penetapam kadar air serbuk

Penentuan kadar air dilakukan dengan metode gravimetri dengan menggunakan

alat moisture balance.

Cara penentuan kadar air :

1. Masukkan ± 5 g serbuk biji P. americana yang sudah diayak ke dalam

alat, kemudian diratakan.

2. Timbang bobot serbuk biji P. americana sebagai bobot sebelum

pemanasan (bobot A).

3. Panaskan serbuk biji P. americana pada suhu 105ᵒC selama 15 menit

4. Timbang serbuk biji P. americana setelah pemanasan (bobot B).

5. Hitung kadar air dengan menggunakan rumus penentuan kadar air sebagai

berikut :

𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝐴−𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝐵

𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝐴 x 100%


91

Perhitungan

Bobot serbuk biji

P.americana

Replikasi I Replikasi II Replikasi III

Sebelum 5,000 g 5,000 g 5,000 g

Sesudah 4,624 g 4,636 g 4,630 g

Kadar air 7,52 % 7,28 % 7,4 %

Rata-rata 7,4 %

Replikasi I

Kadar air = 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝐴−𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝐵


= 5,000 𝑔 − 4,624 𝑔

5,000 𝑔 x 100% = 7,52 %

Replikasi II



= 5,000 𝑔 − 4,636 𝑔

5,000 𝑔 x 100% = 7,28 %

Replikasi III



= 5,000 𝑔 − 4,630 𝑔

5,000 𝑔 x 100% = 7,4 %

Rata-rata = 𝑟𝑒𝑝𝑙𝑖𝑘𝑎𝑠𝑖 𝐼+𝑟𝑒𝑝𝑙𝑖𝑘𝑎𝑠𝑖 𝐼𝐼+𝑟𝑒𝑝𝑙𝑖𝑘𝑎𝑠𝑖 𝐼𝐼𝐼

3

= 7,52% +7,28% +7,4%

3

= 7,4%


92

Lampiran 11. Perhitungan konversi dosis dan waktu untuk manusia

1. Nilai konversi tikus 200 g ke manusia 70 kg = 56,0

2. Dosis untuk manusia = dosis untuk tikus 200 g x nilai konversi tikus 200 g ke

manusia 70 kg

3. Dosis dekok biji P. americana pada tikus = 360,71 mg/kgBB

4. Dosis dekok biji P. americana pada manusia

Dekok biji P. americana dosis 360,71 mg/kgBB tikus

360,71 mg/kgBB = 0,36071 g/1000 gBB = 0,072142 g/200 gBB

0,072142 g/200 gBB x 56,0 = 4,039952 g/70 kgBB

Jadi, dosis dekok biji P. americana pada manusia adalah 4,039952 g/70

kgBB.

5. Nilai konversi waktu dari tikus ke manusia:

1 bulan pada tikus = 34 bulan pada manusia

1 jam pada tikus = 34 jam pada manusia



Lampiran 12. Pengukuran validitas dan realibilitas pengukuran akitivitas

ALT

Hasil validitas dan reabilitas pengukuran ALT

Dilihat dari serum kontrol (range 26,2 – 41,8 U/L)

X (U/L) X-X,‾ (X-X,‾ )2

36

35,6

0,4 0,16

36 0,4 0,16

36 0,4 0,16

35 -0,6 0,36

35 -0,6 0,36

∑ = 1,2


93

SD = ∑(X−X,‾ )2

(n−1)

SD = 1,2

4 = 0,5

Range = X,‾ ± SD

= 35,6 ± 0,5

= 35,1 – 36,1

CV = 𝑆𝐷

X,‾ x 100%

= 0,5

35,6 x 100%

= 1,40 %


94

BIOGRAFI PENULIS

Penulis Skripsi berjudul “Efek Hepatoprotektif

Jangka Pendek Dekok Biji Persea Americana Mill.

Terhadap Aktivitas ALT-AST Pada Tikus

Terinduksi Karbon Tetraklorida” yang memiliki

nama lengkap Angelia Rosari, merupakan anak pertama

dari Bapak Mikael NES dan Ibu Li Sian Lay. Penulis

dilahirkan di Palembang pada tanggal 21 April 1993

silam. Pendidikan formal yang telah ditempuh penulis yaitu TK Xaverius

Pagaralam (1997-1998), tingkat sekolah dasar di SD Xaverius Pagaralam (1998-

2004), tingkat sekolah menengah pertama di SMP Xaverius Pagaralam (2004-

2007), dan tingkat sekolah menengah atas di SMA Xaverius 1 Palembang (2007-

2010). Pada tahun 2010, penulis melanjutkan studi di Fakultas Farmasi

Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Semasa studinya, penulis aktif mengikuti

kegiatan kepanitiaan dan organisasi, di antaranya Wakil Komisaris Internal

Jaringan Mahasiswa Kesehatan Indonesia Fakultas Farmasi Universitas Sanata

Dharma (2012-2013), Manager UKF Sepak Bola Squadra Viola (2010-2013), dan

Division of Accomodation Student Exchange Programme 2011. Penulis juga

pernah menjadi asisten praktikum Farmasi Fisika, praktikum Biokimia, dan

praktikum Komunikasi Farmasi. Pada tahun 2011, penulis memperoleh juara II

dalam kompetisi Patient Conseling Event tingkat nasional.


PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI · segala kerja sama, dukungan, ... Mbak Sum, Ocha, Eva,...

Documents

Transcript of PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI · segala kerja sama, dukungan, ... Mbak Sum, Ocha, Eva,...