PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI - core.ac.uk · 6. Ibu Maria Dwi Budi Jumpowati, S. Si....
-
Upload
duongkhanh -
Category
Documents
-
view
214 -
download
0
Transcript of PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI - core.ac.uk · 6. Ibu Maria Dwi Budi Jumpowati, S. Si....
1
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL KULIT BATANG
POHON PETAI (Parkia speciosa Hassk.) TERHADAP Staphylococcus aureus
dan Escherichia coli
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:
Aloysius Ade Pratama
NIM : 118114150
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2015
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
i
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL KULIT BATANG
POHON PETAI (Parkia speciosa Hassk.) TERHADAP Staphylococcus aureus
dan Escherichia coli
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:
Aloysius Ade Pratama
NIM : 118114150
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2015
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iv
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
v
Halaman Persembahan
“TERJADILAH PADAKU SETURUT KEHENDAK-MU”
“Aku ingin mendaki puncak tantangan, menerjang batu granit kesulitan,
menggoda mara bahaya, dan memecahkan misteri dengan sains. Aku ingin
menghirup berupa-rupa pengalaman lalu terjun bebas menyelami labirin lika-liku
hidup yang ujungnya tak dapat disangka. Aku mendamba kehidupan dengan
kemungkinan-kemungkinan yang bereaksi satu sama lain seperti benturan
molekul uranium: meletup tak terduga-duga, menyerap, mengikat, mengganda,
berkembang, terurai, dan berpencar ke arah yang mengejutkan. Aku ingin
kehidupan yang menggetarkan, penuh dengan penaklukan.
(Andrea Hirata-Edensor)
Aku persembahkan karyaku ini untuk:
Tuhan Yesus dan Bunda Maria,
Bapa, mama beserta adikku
Almamaterku tercinta
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
vi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
vii
PRAKATA
Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas segala
perlindungan dan berkat, kasih dan sayang, serta tuntunan yang diberikan
sehingga skripsi berjudul “UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK
ETANOL KULIT BATANG POHON PETAI (Parkia speciosa Hassk.)
TERHADAP Staphylococcus aureus dan Escherichia coli” dengan baik dan
lancar.
Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini tidak terlepas dari berbagai
pihak. Kesempatan ini, penulis pergunakan untuk mengungkapkan rasa terima
kasih kepada:
1. Ibu Aris Widayati, M. Si., Ph.D., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Sanata Dharma.
2. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M. Si. selaku dosen pembimbing skripsi yang
telah membimbing, mendampingi dan memberikan arahan, evaluasi serta
kritik dan saran mulai dari pembuatan proposal penelitian hingga penulisan
skripsi ini selesai.
3. Ibu Dr. Yustina Sri Hartini, M. Si., Apt. selaku dosen penguji yang telah
meluangkan waktu untuk memberi kritik dan saran selama penulisan skripsi.
4. Ibu Damiana Sapta Candrasari, S. Si., M. Sc. selaku dosen penguji yang telah
meluangkan waktu untuk memberi kritik dan saran selama penulisan skripsi.
5. Ibu Agustina Setiawati, M. Sc., Apt. selaku Kepala Penanggungjawab
Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah memberikan ijin dalam
penggunaan semua fasilitas laboratorium untuk kepentingan penelitian skripsi.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
viii
6. Ibu Maria Dwi Budi Jumpowati, S. Si. atas masukan dan arahan dalam bidang
Mikrobiologi.
7. Bapak Ir. Ignatius Aris Dwiatmoko, M. Sc. atas masukan dan arahan dalam
bidang statistik.
8. Bapak Mukminin, Bapak Wagiran, Bapak Kunto, Bapak Parlan, serta semua
laboran yang telah membantu selama proses penelitian di laboratorium.
9. Anisetus Ratnasari Jebarus, Sabrina Handayani Tambun dan Metta Maurilla
atas bantuannya baik tenaga maupun ide-ide cemerlangnya serta motivasi
dalam suka dan duka selama penelitian di laboratorium.
10. Keluargaku tercinta, Bapak Matius Daryono, Mama Dra. M.M Iin Sarkinah,
Adikku tercinta Veronika Yuli Indarwati yang selalu memberikan dukungan,
doa, kasih sayang, dan semangat kepada penulis.
11. Teman-teman FKK dan FST 2011 atas doa dan dukungan.
12. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu sehingga penulis
dapat menyelesaikan tugas akhir ini dengan baik.
Penulis menyadari bahwa naskah skripsi ini masih banyak kekurangan
dengan keterbatasan yang ada sehingga penulis membuka diri terhadap semua
kritik dan saran dari semua pihak yang membangun untuk kemajuan diri dan ilmu
pengetahuan. Akhir kata, penulis berharap semoga naskah skripsi ini dapat
bermanfaat bagi semua pihak terutama di bidang Farmasi.
Penulis
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ix
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL .......................................................................................... i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ................................................ ii
HALAMAN PENGESAHAN ........................................................................ iii
HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH ................. iv
HALAMAN PERSEMBAHAN ................................................................... v
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ........................................................ vi
PRAKATA .................................................................................................... vii
DAFTAR ISI ................................................................................................. ix
DAFTAR TABEL .......................................................................................... xiii
DAFTAR GAMBAR .................................................................................... xiv
DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................. xv
INTISARI ...................................................................................................... xvii
ABSTRACT ...................................................................................................... xviii
BAB I PENGANTAR .................................................................................... 1
A. LATAR BELAKANG ..................................................................... 1
1. Permasalahan ................................................................................ 3
2. Keaslian Penelitian ...................................................................... 4
3. Manfaat Penelitian ....................................................................... 5
B. TUJUAN PENELITIAN ................................................................... 6
1. Tujuan Umum .............................................................................. 6
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
x
2. Tujuan Khusus .............................................................................. 6
BAB II PENELAAHAN PUSTAKA ............................................................. 7
A. Petai ................................................................................................... 7
B. Staphylococcus aureus ........................................................................ 8
1. Morfologi dan Fisiologi ................................................................... 8
2. Patogenesis ...................................................................................... 9
C. Escherichia coli ................................................................................. 10
1. Morfologi dan Fisiologi ................................................................... 10
2. Patogenesis dan Gejala Penyakit ..................................................... 10
D. Ekstraksi ............................................................................................. 11
E. Alkaloid .............................................................................................. 14
F. Fenolik ................................................................................................ 15
G. Terpenoid ........................................................................................... 16
H. Flavonoid ........................................................................................... 17
I. Metode Pengujian Aktivitas Antibakteri ............................................. 18
1. Metode Difusi ................................................................................... 18
2. Metode Dilusi ................................................................................... 19
J. Landasan Teori .................................................................................... 19
K. Hipotesis ............................................................................................ 21
BAB III METODE PENELITIAN ................................................................. 23
A. Jenis dan Rancangan Penelitian ......................................................... 23
B. Variabel dan Defenisi Operasional .................................................... 23
1. Variabel Penelitian ........................................................................ 23
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xi
2. Definisi Operasional ...................................................................... 23
C. Bahan dan Alat Penelitian .................................................................. 24
D. Tata Cara Penelitian ........................................................................... 25
1. Determinasi Kulit Batang Pohon Petai .......................................... 25
2. Pengumpulan Kulit Batang Pohon Petai ........................................ 26
3. Pengeringan dan Pembuatan Serbuk Kulit Batang Pohon Petai .... 26
4. Penetapan Susut Pengeringan Pada Serbuk Kulit Batang
Pohon Petai ..................................................................................... 26
5. Pembuatan Ekstak Etanol Kulit Batang Pohon Petai ..................... 27
6. Identifikasi Kandungan Senyawa Kimia Kulit Batang Pohon Petai
Dengan Uji Tabung ........................................................................ 28
7. Uji Identifikasi Bakteri .................................................................... 30
8. Uji Potensi Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai Terhadap
S. aureus dan E. coli ....................................................................... 31
9. Analisis Hasil ................................................................................. 33
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ....................................................... 35
A. Determinasi dan Pengumpulan Tanaman .......................................... 35
B. Pembuatan Serbuk Simplisia Kulit Batang Pohon Petai .................... 36
C. Penetapan Susut Pengeringan Serbuk Kulit Batang Pohon Petai ...... 37
D. Pembuatan Ekstak Etanol Kulit Batang Pohon Petai ........................ 38
E. Skrining Fitokimia .............................................................................. 40
F. Identifikasi Bakteri ............................................................................. 50
G. Uji Potensi Antibakteri Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xii
Terhadap S. aureus dan E. coli ........................................................ 51
H. Pengukuran Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh
Minimum (KBM) Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai Terhadap
S. Aureus Dengan Metode Dilusi Cair ............................................. 59
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ....................................................... 64
A. Kesimpulan ...................................................................................... 64
B. Saran ................................................................................................ 64
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................... 65
LAMPIRAN .................................................................................................. 70
BIOGRAFI PENULIS .................................................................................. 128
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiii
DAFTAR TABEL
Tabel I. Bobot Tetap Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai ................. 39
Tabel II. Hasil Pengamatan Uji Tabung Terhadap Larutan Uji Ekstrak
Kulit Batang Pohon Petai .............................................................. 40
Tabel III. Diameter Zona Hambat Yang Dihasilkan Seri Konsentrasi Ekstrak
Etanol Kulit Batang Pohon Petai, Kontrol Positif dan Kontrol Negatif
Terhadap S. aureus .......................................................................... 53
Tabel IV. Kriteria Kekuatan Aktivitas Antibakteri ........................................ 54
Tabel V. Kriteria Kekuatan Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Kulit Batang
Pohon Petai Terhadap Staphylococcus aureus ................................ 54
Tabel VI. Hasil Mann Withney – Wilcoxon Test Diameter Zona Hambat Seri
Konsentrasi Ekstrak Etanol, Kontrol Negatif dan Positif ............... 56
Tabel VII. Hasil Pengukuran Absorbansi Pada Uji KHM dan KBM Ekstrak
Etanol Kulit Batang Pohon Petai Terhadap Staphylococcus aureus ... 60
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiv
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Struktur Fenol .................................................................................. 16
Gambar 2. Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai ....................................... 39
Gambar 3. Uji Pendahuluan .............................................................................. 41
Gambar 4. Uji Saponin ...................................................................................... 42
Gambar 5. Uji Flavonoid ................................................................................... 43
Gambar 6. Larutan Uji Pada Uji Alkaloid ........................................................ 43
Gambar 7. Reaksi Uji Alkaloid dengan Penambahan Pereaksi Mayer .............. 44
Gambar 8. Uji Alkaloid dengan Penambahan Mayer ........................................ 45
Gambar 9. Reaksi Uji Alkaloid dengan Penambahan Pereaksi Dragendorff ..... 45
Gambar 10. Uji Alkaloid dengan Penambahan Dragendorff ............................. 46
Gambar 11. Uji Tanin ....................................................................................... 47
Gambar 12. Uji Fenolik ..................................................................................... 48
Gambar 13. Uji Terpenoid ................................................................................ 49
Gambar 14. Hasil Streak Uji KHM dan KBM .................................................. 61
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat Keterangan Keaslian Tanaman Petai
(Parkia speciosa Hassk.) .............................................................. 69
Lampiran 2. Surat Izin Melakukan Penelitian di Laboratorium Balai
Kesehatan Yogyakarta ................................................................. 70
Lampiran 3. Sertifikat Hasil Uji Staphylococcus aureus ATCC 25923 ........... 71
Lampiran 4. Sertifikat Hasil Uji Escherichia coli ATCC 25922 ...................... 72
Lampiran 5. Pereaksi-Pereaksi yang Digunakan Untuk Uji Fitokimia ............. 73
Lampiran 6. Hasil Uji Identifikasi Staphylococcus aureus ................................ 74
Lampiran 7. Uji Identifikasi Bakteri Escherichia coli ...................................... 77
Lampiran 8. Uji Aktivitas Antimikroba Difusi Sumuran Terhadap
Staphylococcus aureus ................................................................. 80
Lampiran 9. Uji Aktivitas Antimikroba Difusi Sumuran Terhadap
Escherichia coli ............................................................................ 82
Lampiran 10. Hasil Pengukuran Diameter Zona Hambat Ekstrak Etanol
Kulit Batang Pohon Petai ............................................................. 84
Lampiran 11. Hasil Perhitungan Statistik Zona Hambat Ekstrak Etanol Kulit
Batang Pohon Petai Terhadap Staphylococcus aureus ................ 85
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xvi
INTISARI
Penyakit infeksi merupakan salah satu faktor penyebab kematian di
seluruh dunia. Selain virus dan jamur, bakteri juga dapat menyebabkan
infeksi diantaranya, Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Kulit batang
pohon petai (Parkia speciosa) mengandung alkaloid dan fenolik. Biji petai
sering digunakan masyarakat sebagai makanan sedangkan kulit batang pohon
petai jarang digunakan. Oleh sebab itu, perlu dilakukan penelitian terkait
dengan distribusi senyawa dalam kulit batang pohon petai dan potensi
senyawa tersebut sebagai antibakteri.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak
etanol kulit batang pohon petai yang dilanjutkan dengan menentukan Kadar
Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh Minimum (KBM) terhadap
Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Pengujian aktivitas antibakteri
menggunakan metode difusi padat dan penentuan KHM dan KBM
menggunakan metode dilusi cair. Jenis penelitian ini termasuk eksperimental
murni.
Data yang diperoleh dianalisis menggunakan Shapiro Wilk untuk
distribusi data, Levene Test untuk homogenitas data, Kruskal Wallis untuk
mengetahui perbedaan bermakna secara menyeluruh, dan Mann-Whitnney
untuk mengetahui kebermaknaan antar konsentrasi, kontrol positif dan
kontrol negatif.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol kulit batang
pohon petai mampu menghambat bakteri Staphylococcus aureus tetapi tidak
mampu menghambat Escherichia coli. KHM dari ekstrak etanol kulit batang
pohon petai terhadap bakteri Staphylococcus aureus sebesar 21,875% dan
KBM pada konsentrasi 21,875% belum diperoleh.
Kata kunci : kulit batang, petai (Parkia speciosa), antibakteri, Staphylococcus
aureus, Escherichia coli, metode difusi sumuran, metode dilusi cair
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xvii
ABSTRACT
Infection disease is one of the causes of death in the world. In addition
to viruses and fungi, bacteria also can cause infections such Staphylococcus
aureus and Escherichia coli. The tree bark of Parkia speciosa contain the
alkaloid and phenolic. Parkia speciosa seeds are often used by people as
food, while the tree bark of Parkia speciosa is rarely used. Therefore, it is
necessary to do research related to the distribution of compounds in the tree
bark of Parkia speciosa and the potential of these compounds as antibacterial.
This study aims to determine the antibacterial activity of ethanol
extract of the tree bark of Parkia speciosa, followed by determining the
Minimum Inhibition Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal
Concentration (MBC) against Staphylococcus aureus and Escherichia coli.
Testing of antibacterial activity using solid diffusion method and
determination of MIC and MBC using liquid dilution method. This type of
research is purely experimental.
The data obtained were analyzed using Shapiro Wilk to see the data
distribution, Levene Test for viewing data homogeneous, Kruskal Wallis for
knowing the significant differences overall, and the Mann-Whitnney to
determine the significance between concentration, positive and negative
control. The results showed that the ethanol extract of the tree bark of Parkia
speciosa is able to inhibit Staphylococcus aureus but are not capable of
inhibiting Escherichia coli. MIC of an ethanol extract of the tree bark of
Parkia speciosa obtained against bacteria Staphylococcus aureus is 21,875%
and MBC of this concentrations has not been obtained.
Keywords : bark, Parkia speciosa Hassk., antibacterial, Staphylococcus
aureus, Escherichia coli, solid diffusion method, liquid dilution method.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
1
BAB I
PENGANTAR
A. Latar Belakang
Penyakit infeksi merupakan salah satu penyakit yang sering diderita oleh
masyarakat, seperti infeksi saluran kemih, pernapasan, pencernaan dan infeksi
lainnya. Penyebab timbulnya penyakit infeksi adalah bakteri, virus dan jamur.
Penyakit infeksi yang umumnya dialami oleh masyarakat Indonesia adalah diare
dan pneumonia. Menurut hasil Riskesdas (2007), pneumonia merupakan
penyebab kematian nomor dua pada balita (13,2%) setelah diare (17,2%).
Penyakit diare merupakan penyebab kematian nomor satu pada bayi (31,4%) dan
pada balita (25,2%), sedangkan pada golongan semua umur merupakan penyebab
kematian yang keempat (13,2%).
Menurut Mardiastuti, Karuniawati, Kiranasari, Ikaningsih, dan Kadarsih,
(2007) salah satu bakteri yang menyebabkan diare adalah bakteri Escherichia coli
dan penyakit infeksi saluran pernapasan umumnya disebabkan oleh bakteri
Staphylococcus aureus. Pada penelitian ini Staphylococcus aureus dan
Escherichia coli digunakan sebagai bakteri uji karena Staphylococcus aureus
merupakan salah satu bakteri Gram positif dan Escherichia coli merupakan salah
satu bakteri Gram negatif. Namun, meningkatnya penyalahgunaan serta
penggunaan antibiotik yang irrasional maka penyembuhan penyakit infeksi tidak
dapat disembuhkan. Salah satu alternatif untuk memecahkan masalah tersebut,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
2
peneliti melakukan eksplorasi bahan alam yang berpotensi sebagai antibakteri
yaitu petai.
Dalam kehidupan sehari-hari, biji petai sering digunakan oleh masyarakat
sebagai makanan seperti sambel goreng ati, lalapan, nasi goreng petai atau
masakan lainnya. Sedangkan, bagian tanaman lainnya seperti daun, kulit batang
pohon, bunga dan kulit buah petai kurang dimanfaatkan. Menurut Kamisah,
Faizah, Qodriyah, dan Kamsiah (2013), biji petai mengandung alkaloid, terpenoid,
flavonoid dan fenolik. Petai dapat digunakan sebagai antibakteri, antimutagenik,
antitumor, dan antioksidan. Menurut Kurniawati (2014), kulit petai yang berasal
dari Kabupaten Bogor mengandung golongan senyawa fitokimia seperti alkaloid,
terpenoid, saponin, dan tanin serta ekstrak etanol kulit petai tidak memiliki
aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Oleh
sebab itu, peneliti melakukan eksplorasi bahan alam menggunakan tanaman yang
sama tetapi berbeda daerah yaitu petai yang berasal dari Kabupaten Sleman,
Yogyakarta dengan bagian kulit batang pohon petai. Lingkungan yang berbeda
dapat mempengaruhi kandungan senyawa kimia yang terkandung dalam tanaman.
Menurut Nitisapto dan Siradz (cit., Mahatriny, Payani, Oka dan Astuti, 2014),
faktor lingkungan tanaman yang berbeda dapat mempengaruhi hasil metabolit
sekunder tanaman. Faktor-faktor lingkungan yang dapat mempengaruhi adalah
iklim, cahaya matahari, suhu, lingkungan atmosfer (CO2, O2, dan kelembaban),
lingkungan perakaran (sifat kimia dan fisika tanah) dan ketersediaan air di dalam
tanah.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
3
Berkaitan dengan distribusi senyawa dalam bagian tanaman petai dan
potensi senyawa tersebut sebagai antibakteri, maka perlu dilakukan penelitian
terkait distribusi kandungan senyawa aktif pada bagian tanaman petai lainnya
seperti kulit batang pohon. Untuk mengetahui distribusi senyawa aktif pada kulit
batang pohon petai maka peneliti melakukan penyarian menggunakan penyari
yang sesuai untuk mempermudah menyari senyawa yang diduga berpotensi
sebagai antibakteri tersebut di atas berdasarkan kelarutannya. Menurut Agnes,
Lois, Aning, dan Nani (2013), salah satu pelarut yang dapat digunakan sebagai
penyari adalah etanol. Etanol digunakan sebagai penyari karena dapat menyari
senyawa yang bersifat semi polar sampai polar sehingga kandungan kimia yang
diharapkan dapat tersari dengan baik sesuai dengan kepolarannya. Berdasarkan
potensi antibakteri yang terdapat pada tanaman petai, maka tanaman petai dapat
digunakan sebagai bahan baku dalam pembuatan antibiotik baru.
1. Permasalahan
a. Kandungan kimia apa saja yang terkandung dalam ekstrak etanol kulit
batang pohon petai yang bermanfaat sebagai antibakteri?
b. Apakah ekstrak etanol kulit batang pohon petai memiliki aktivitas
antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli ?
c. Berapa kadar hambat minimum (KHM) dan kadar bunuh minimum (KBM)
ekstrak etanol kulit batang pohon petai terhadap Staphylococcus aureus dan
Escherichia coli ?
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
4
2. Keaslian penelitian
Sejauh pengamatan penulis, penelitian dengan judul “Uji Aktivitas
Antibakteri Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai (Parkia speciosa Hassk.)
Terhadap Staphylococcus aureus Dan Escherichia coli” belum pernah
dilakukan. Penelitian sebelumnya yang berkaitan dengan uji aktivitas
antibakteri kulit buah petai yaitu:
a. Uji aktivitas antibakteri ekstrak biji petai terhadap pertumbuhan bakteri
Helicobacter pylori dan Escherichia coli (Sakunpak dan
Panichayupakaranant, 2012).
b. Potensi antibakteri ekstrak metanol biji petai terhadap Helicobacter pylori,
ekstrak etil asetat biji Parkia speciosa Hassk terhadap Eschericia coli,
suspensi air biji petai menghambat pertumbuhan Aeromonas hydrophila,
Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus
anginosus, dan Vibrio parahaemolyticu (Kamisah, dkk., 2013).
c. Aktivitas antibakteri ekstrak kulit petai (Parkia speciosa Hassk.) terhadap
bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus (Kurnawati, 2014).
d. Fraksinasi ekstrak kulit petai berpotensi antioksidan (Mahardika, 2013).
Hasil uji identifikasi pada penelitian tersebut adalah kulit petai
mengandung alkaloid, flavonoid, saponin, dan tanin.
e. Ekstraksi dan identifikasi senyawa dari biji Parkia speciosa dengan
karbon dioksida superkritis (Azizi, Salman, Nik, dan Mohd, 2006). Salah
satu hasil identifikasi senyawa dari penelitian ini tersebut adalah pada kulit
petai terdapat terpenoid.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
5
Perbedaan penelitian yang dilakukan oleh penulis dengan penelitian
lainnya adalah pada penelitian yang dilakukan oleh Sakunpak dan
Panichayupakaranant (2012) menggunakan biji petai yang diekstraksi dengan
etil asetat; sedangkan penelitian yang dilakukan penulis menggunakan kulit
batang pohon petai yang diekstraksi dengan etanol 70%. Penelitian yang
dilakukan Kamisah, dkk (2013) dilakukan di Malaysia menggunakan biji petai
dengan penyari metanol, etil asetat dan air; sedangkan penelitian yang
dilakukan penulis berada di Indonesia dengan penyari etanol. Selain itu,
penelitian yang dilakukan Kurnawati (2014), serbuk kulit petai diekstraksi
dengan ultrasonikasi secara bertingkat dengan pelarut n-heksana, etil asetat,
dan etanol 70%; sedangkan penelitian yang dilakukan penulis menggunakan
metode ekstraksi maserasi mekanik (shaker) dengan etanol 70% dan sampel
yang digunakan adalah kulit batang pohon petai yang diambil di Kabupaten
Sleman.
3. Manfaat penelitian
a. Manfaat teoritis
Penelitian ini diharapkan dapat mengembangkan khasanah ilmu
pengetahuan khususnya di bidang kesehatan tentang penggunaan kulit
batang pohon petai yang berkhasiat sebagai antibakteri.
b. Manfaat praktis
Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi tentang
manfaat kulit batang pohon petai sebagai antibakteri dan dapat digunakan
sebagai pengobatan alternatif bagi masyarakat terutama untuk mengobati
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
6
penyakit infeksi yang disebabkan oleh Staphylococcus aureus dan
Escherichia coli.
B. Tujuan Penelitian
1. Tujuan umum
Tujuan umum dari penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas
antibakteri ekstrak etanol kulit batang pohon petai terhadap
Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.
2. Tujuan khusus
a. Mengetahui kandungan kimia yang terdapat dalam ekstrak etanol kulit
batang pohon petai yang bermanfaat sebagai antibakteri.
b. Mengetahui kadar hambat minimal (KHM) dan kadar bunuh minimal
(KBM) dari ekstrak etanol kulit batang pohon petai terhadap
Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
7
BAB II
PENELAAHAN PUSTAKA
A. Petai
1. Menurut Plantamor (2008) diklasifikasikan sebagai berikut:
Kingdom : Plantae
Subkingdom : Tracheobionta
Super Divisi : Spermatophyta
Divisi : Magnoliophyta
Kelas : Magnoliopsida
Sub Kelas : Rosidae
Ordo : Fabales
Famili : Fabaceae
Genus : Parkia
Spesies : Parkia speciosa Hassk.
2. Uraian tanaman
Petai merupakan tanaman berbentuk pohon dengan ketinggian antara
5-14 m dan membentuk percabangan yang banyak. Daun majemuk serta
berwarna hijau. Bunga majemuk dan pangkal mahkota berwarna putih
kekuningan dan melekat pada benang sari. Karangan bunga berbentuk
bongkol yang terkulai dengan tangkai yang panjang, bunga yang masih
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
8
muda dan belum mekar bewarna hijau. Setelah dewasa, bunga petai berubah
menjadi warna kuning. Batang pohon berwarna coklat dan keras. Kulit buah
berbentuk polong panjang dan pipih. Biji tersusun rapi dalam polong yang
menggantung di pohon dan pada setiap polong terdapat 10-18 biji. Akar
tanaman petai berbentuk tunggang dan berwarna coklat (Adi, 2008).
3. Kandungan kimia
Tanaman petai mengandung zat kimia seperti alkaloid, saponin,
terpenoid, fenolik, flavonoid dan tanin. Beberapa dari senyawa tersebut
berpotensi sebagai antibakteri. Bagian tanaman petai seperti kulit batang
pohon petai mengandung alkaloid dan fenolik (Kamisah, dkk, 2013).
B. Staphylococcus aureus
1. Morfologi dan fisiologi
Staphylococcus aureus termasuk dalam family Micrococcaceae dan
termasuk dalam golongan bakteri Gram positif. Bakteri ini berbentuk bulat
sedangkan koloni mikroskopiknya berbentuk seperti buah anggur. Koloni
bakterinya dapat ditemukan di saluran hidung dan di bagian tubuh yang lain.
Bakteri ini bersifat anaerob fakultatif dan menghasilkan enzim katalase.
Bakteri Staphylococcus aureus dapat tumbuh dalam larutan NaCl 15 %.
Staphylococcus aureus memiliki diameter 0,8-1 mikron, tidak bergerak dan
tidak menghasilkan spora. Bakteri ini dapat tumbuh dengan baik pada suhu
370C. Kisaran suhu pertumbuhan bakteri ini adalah 15-400C dan suhu
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
9
optimumnya adalah 350C. Staphylococcus aureus memiliki daya tahan
paling kuat diantara semua bakteri yang tidak membentuk spora. Pada agar
miring, Staphylococcus aureus dapat hidup hingga berbulan-bulan, baik
dalam lemari es maupun pada suhu kamar. Dalam keadaan kering pada
benang, kertas, kain, dan dalam nanah, bakteri ini dapat hidup selama 6-14
minggu (Radji, 2009).
2. Patogenesis
Bakteri Staphylococcus aureus menyebabkan berbagai jenis infeksi
pada manusia, diantaranya infeksi pada kulit, seperti bisul; infeksi yang
lebih lebih serius, seperti pneumonia, mastitis, flebitis, dan meningitis; dan
infeksi pada saluran urin. Selain itu, bakteri ini dapat menyebabkan infeksi
kronis, seperti osteomyelitis dan endokarditis. Staphylococcus aureus adalah
salah satu penyebab utama terjadinya infeksi nosokomial (infeksi yang
diakibatkan luka tindakan operasi dan pemakaian alat-alat perlengkapan
perawatan rumah sakit). Bakteri ini juga dapat menyebabkan keracunan
makanan akibat enterotoksin yang dihasilkannya dan menyebabkan sindrom
kejut toksik (toxic shock syndrome) akibat pelepasan superantigen ke dalam
aliran darah (Radji, 2009).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
10
C. Escherichia coli
1. Morfologi dan fisiologi
Escherichia coli merupakan bakteri Gram negatif yang banyak
ditemukan pada ileum caudal, termasuk dalam famili Enterobacteriaceae,
berbentuk batang pendek (kokobasil), memiliki flagel, berukuran 0,4 - 0,7
µm x 1,4 µm. Pada lingkungan yang kurang baik dapat membentuk spora,
dan merupakan mikroba anaerob fakultatif. Escherichia coli akan bersifat
patogen apabila berada di luar saluran pencernaan dan pada saat kondisi
tubuh lemah (Radji, 2009).
2. Patogenesis dan gejala penyakit
Kolonisasi Escherichia coli dalam saluran cerna biasa terjadi setelah
40 hari dilahirkan. Escherichia coli dapat bertahan dan melekat di usus
besar selama beberapa bulan bahkan beberapa tahun. Perubahan populasi
bakteri Escherichia coli dapat terjadi dalam periode yang lama, hal ini
terjadi setelah infeksi usus atau setelah penggunaan kemoterapi atau
antimikroba yang dapat membunuh flora normal (Radji, 2009).
Escherichia coli menjadi penyebab infeksi manusia, seperti infeksi
saluran kemih, infeksi saluran meningitis pada neonates, dan infeksi
intestine (gastroenteritis). Ketiga penyakit ini sangat bergantung pada
ekspresi faktor virulensi masing-masing serotipe Escherichia coli, termasuk
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
11
adanya adhesin, invasion, jenis toksin yang diproduksi, dan kemampuan
mengatasi pertahanan tubuh hospes (Radji, 2009).
Infeksi Escherichia coli sering kali berupa diare yang disertai darah,
kejang perut, demam, dan terkadang dapat menyebabkan gangguan pada
ginjal. Sekitar 2-7% infeksi Escherichia coli pada beberapa penderita,
misalnya anak-anak di bawah 5 tahun dan orang tua, dapat menimbulkan
komplikasi yang disebut dengan sindrom uremik hemolitik. Sebagian besar
penyakit yang disebabkan oleh infeksi Escherichia coli ditularkan melalui
makanan yang tidak dimasak dan daging yang terkontaminasi. Penularan
penyakit ini dapat terjadi melalui kontak langsung dan biasanya terjadi di
tempat yang memiliki sanitasi dan lingkungan yang kurang bersih (Radji,
2009).
D. Ekstraksi
Ekstraksi adalah teknik memisahkan suatu senyawa berdasarkan
distribusi zat dalam pelarut. Umumnya zat terlarut yang diekstrak bersifat
tidak larut atau sedikit larut dalam pelarut tetapi mudah larut dengan pelarut
lain. Metode ekstraksi yang tepat ditunjukkan dengan tekstur kandungan air
bahan-bahan yang akan diekstrak dan senyawa-senyawa yang akan diisolasi
(Dirjen POM, 1996).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
12
Jenis-jenis metode ekstraksi yang dapat dilakukan diantaranya adalah
ekstraksi menggunakan pelarut, yakni:
1. Cara dingin
a. Maserasi adalah proses penyarian simplisia menggunakan pelarut dan
dilakukan beberapa kali penggojogan atau pengadukan pada suhu
kamar (ruang). Secara teknologi maserasi termasuk ekstraksi dengan
prinsip metode pencapaian konsentrasi pada keseimbangan. Maserasi
kinetik adalah proses maserasi yang pengadukannya dilakukan secara
kontinyu (terus-menerus). Remaserasi merupakan pengulangan
penambahan pelarut. Pengulangan penambahan pelarut dilakuakan
setelah penyaringan maserat pertama dan seterusnya.
b. Perkolasi adalah metode ekstraksi yang menggunakan pelarut selalu
baru sampai sempurna (exhaustive extraction) yang umumnya
dilakukan pada temperature ruang. Proses ekstraksi terdiri dari tahapan
pengembangan bahan, tahap maserasi bahan dan tahap perkolasi
sebenarnya (penetesan / penampungan ekstrak). Tahapan ini dilakukan
terus-menerus sampai diperoleh perkolat (ekstrak) yang jumlahnya 1-5
kali bahan.
2. Cara panas
a. Refluks adalah ekstraksi yang menggunakan pelarut pada temperatur
titik didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang
relative konstan dengan adanya pendingin balik. Umumnya dilakukan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
13
pengulangan proses pada residu 3-5 kali sehingga proses refluks ini
termasuk proses ekstraksi sempurna.
b. Sokhlet merupakan metode ekstraksi yang menggunakan pelarut yang
selalu baru yang umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga
terjadi ekstraksi kontinyu dengan jumlah pelarut relatif konstan
dengan adanya pendingin balik.
c. Digesti adalah maserasi kinetik dengan pengadukan berkala pada suhu
yang lebih tinggi dari suhu ruang (kamar), yaitu secara umum
dilakukan pada 40-500C.
d. Infus merupakan ekstraksi dengan menggunakan air sebagai pelarut
pada suhu penangas air mendidih, suhu terukur 96- 980C selama waktu
tertentu (15-20 menit).
e. Dekok adalah metode infusa yang memerlukan waktu yang lebih lama
(lebih dari 30 menit) dan titik didihnya sampai titik didih air (1000C).
f. Destilasi uap adalah ekstraksi senyawa kandungan yang menguap
(minyak atsiri) dari bahan (simplisia atau bahan segar) dengan uap
berdasarkan peristiwa tekanan parsial senyawa kandungan akan
menguap dengan fase uap air dari ketel secara kontinyu sampai
sempurna dan diakhiri dengan kondensasi fase uap campuran
(senyawa kandungan menguap ikut terdestilasi) menjadi destilat air
bersama senyawa kandungan yang memisah sempurna atau memisah
sebagian (Sampurno, 2000).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
14
E. Alkaloid
Alkaloid merupakan suatu golongan senyawa organik yang banyak
ditemukan di alam. Alkaloid dapat ditemukan dalam berbagai bagian
tumbuhan seperti biji, daun, ranting dan kulit batang. Semua alkaloid
mengandung paling sedikit satu atom nitrogen yang biasanya bersifat basa
dan dalam sebagian besar atom nitrogen ini merupakan bagian dari cincin
heterosiklik (Lenny, 2006).
Menurut Soegihardjo (2013), peran alkaloid dalam tumbuhan antara
lain berperan dengan keberadaan asam organik tertentu, misalnya alkaloid
opium berhubungan dengan adanya asam mekonat, alkaloid kinkona terkait
dengan asam kuinat dan kinkotonat. Selain itu, alkaloid berperan dalam
berperan dalam hubungannya dengan oksigen in statu nascendi (oksigen
singlet) yang berbahaya bagi organisme hidup, hal ini dibuktikan dengan
adanya sinar UV yang kuat pada tumbuhan akan meningkatkan biosintesis
alkaloid. Selain itu, menurut Robinson (1991), alkaloid berfungsi sebagai
senyawa antibakteri. Mekanisme alkaloid sebagai antibakteri adalah dengan
mengganggu komponen penyusun peptidoglikan pada sel bakteri sehingga
lapisan dinding selnya tidak terbentuk secara utuh dan menyebabkan
kematian sel.
Identifikasi alkaloid selain dengan analisis kualitatif alkaloid dapat
dilakukan dengan bantuan pereaksi. Misalnya pereaksi Mayer, Dragendroff,
Wagner, dan Buchardt; reaksi warna, misalnya dengan pereaksi asam sulfat
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
15
pekat, asam nitrat pekat, dan fluoresensi. Kelarutan alkaloid dalam farmasi
sangat penting karena perbedaan kelarutan antara alkaloid bebas dan
garamnya, terutama berkaitan dengan isolasinya dari bahan tumbuhan.
Alkaloid bebas umumnya sedikit larut dalam air, tetapi larut dalam pelarut
organik, sedangkan kebalikannya pada garamnya kecuali garam sulfas kinina
yang kelarutannya dalam air (1 : 1000), sedangkan kinina hidroklorida larut
dalam air kurang dari satu bagian (Soegihardjo, 2013).
F. Fenolik
Menurut Fessenden (1986), fenolik merupakan senyawa yang banyak
ditemukan pada tumbuhan. Fenolik memiliki cincin aromatik dengan satu
atau lebih gugus hidroksi (OH-) dan gugus-gugus penyerta lainnya. Senyawa
ini diberi nama berdasarkan nama senyawa induknya, fenol. Fenol biasanya
dikelompokkan berdasarkan jumlah atom karbon pada kerangka
penyusunnya.
Menurut Robinson (1991), aktivitas fisiologis senyawa fenolik pada
tumbuhan banyak dan beragam. Beberapa senyawa fenolik bersifat racun
terhadap hewan pemangsa tumbuhan (herbivor) dan beberapa bersifat racun
serangga. Senyawa fenolik lain mempunyai aktivitas antiinflamasi, karena
senyawa ini menghambat sintesis prostaglandin. Menurut Dwidjoseputro
(1994), fenolik memiliki fungsi sebagai antibakteri. Mekanisme
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
16
antibakterinya adalah dengan membentuk senyawa kompleks terhadap
protein ekstraseluler yang mengganggu integritas membrane sel bakteri.
OH
Gambar 1. Struktur fenol
G. Terpenoid
Terpenoid adalah golongan hidrokarbon yang banyak ditemukan
dalam tumbuhan terutama pada getah dan vakuola selnya. Semua senyawa
golongan terpen atau terpenoid dan turunannya termasuk hasil metabolit
sekunder. Terpen atau terpenoid mempunyai aktivitas antibakteri, antivirus
dan antiprotozoa (Salni, Hanifa, dan Ratna, 2011).
Mekanisme antibakteri yang dimiliki oleh terpenoid adalah bereaksi
dengan porin (protein transmembran) yang terdapat pada membran luar
dinding sel bakteri sehingga membentuk ikatan polimer yang kuat sehingga
porin menjadi rusak. Porin adalah jalan keluar masuknya substansi sehingga
rusaknya porin mengurangi permeabilitas dinding sel bakteri yang membuat
sel bakteri kekurangan nutrisi. Oleh karena itu, pertumbuhan bakteri menjadi
terhambat atau mati (Salni, Hanifa, dan Ratna, 2011).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
17
H. Flavonoid
Flavonoid adalah suatu golongan senyawa fenol terbesar yang
ditemukan di alam. Flavonoid memiliki warna merah, ungu, biru, dan sebagai
zat kuning yang terkandung dalam tumbuhan. Senyawa ini memiliki struktur
dasar karbon yang terdiri dari 15 atom karbon, dimana dua cincin benzen (C6)
terikat pada rantai propana (C3) sehingga terbentuk susunan C6-C3-C6 (Lenny,
2006).
Flavonoid memiliki beberapa gugus hidroksil, gula dan flavonoid
adalah senyawa polar sehingga flavonoid cukup larut dalam pelarut polar
seperti etanol, metanol, butanol, aseton, dimetilsulfoksida (DMSO),
dimetilformamida (DMF), air dan lain-lain. Senyawa ini juga memiliki
aktivitas antibakteri (Subramani, 2002; Rosidah dan Afizia, 2012).
Mekanisme antibakteri dari flavonoid adalah membentuk senyawa
kompleks dengan protein ekstraseluler dan larut sehingga dapat merusak
membran sel bakteri dan senyawa intraseluler pun ikut keluar (Nuria, Arvin,
Sumantri, 2009). Selain itu, flavonoid dapat merusak permeabilitas dinding
sel bakteri (Sabir, 2008).
I. Metode Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode pengujian ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan suatu
larutan uji dalam menghambat atau membunuh bakteri. Metode pengujian
antimikroba dapat dibedakan menjadi dua yaitu:
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
18
1. Metode difusi
Metode difusi merupakan metode yang digunakan untuk mengukur
potensi antibakteri berdasarkan pengamatan luas zona jernih yang terbentuk di
sekitar tempat penginokulasian obat/ekstrak karena terdifusinya obat/ekstrak
(Jawetz, Melnick, Brooks, dan Adelberg, 2005). Terdapat beberapa cara
metode difusi, salah satunya ialah metode sumuran Kirby Bauer. Metode ini
merupakan metode untuk menguji senyawa kimia yang terkandung dalam
tanaman yang berpotensi sebagai antimikroba berdasarkan pada ukuran zona
inhibisi pertumbuhan kultur bakteri di sekitar disk yang diresapi dengan obat
antimikroba. Metode ini dilakukan dengan membuat lubang pada agar padat
yang telah diinokulasi dengan bakteri (Mpila, Fatimawai, dan Weny, 2012).
Jumlah dan letak lubang sumuran disesuaikan dengan tujuan penelitian,
kemudian lubang sumuran diinjeksikan dengan ekstrak yang akan diuji.
Setelah dilakukan inkubasi, pertumbuhan bakteri diamati untuk melihat ada
tidaknya daerah hambatan di sekeliling lubang (Kusmayanti dan Agustini,
2007).
2. Metode dilusi
Prinsip metode dilusi adalah antibiotik diencerkan sehingga diperoleh
beberapa macam kadar. Pada dilusi cair, setiap kadar sampel obat
ditambahkan pada suspensi bakteri pada media kemudian diukur dengan
spektrofotometri UV-VIS (UVmini-1240 UV-Vis Spectrophotometer
Shimadzu) pada λ 480 nm untuk mengukur kekeruhan dari media yang telah
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
19
ditambahkan suspensi bakteri dan ekstrak. Pada dilusi padat setiap kadar obat
dicampur dengan media agar kemudian ditanami bakteri. Pengamatannya
dengan melihat ada tidaknya pertumbuhan bakteri atau tingkat kesuburan
bakteri. Metode dilusi ini dapat digunakan untuk menentukan KHM dan KBM
(Jawetz, dkk., 2005).
J. Landasan Teori
Penyakit infeksi merupakan salah satu penyakit yang sering diderita
oleh masyarakat. Penyebab timbulnya penyakit infeksi adalah bakteri, virus
dan jamur. Bakteri yang menimbulkan infeksi antara lain Staphylococcus
aureus dan Escherichia coli. Oleh sebab itu, perlu dilakukan eksplorasi bahan
alam yang memiliki potensi antibakteri dengan efek samping lebih kecil
karena bahan alam mudah tersedia secara terus-menerus.
Daun petai mengandung alkaloid, terpenoid, fenolik, dan flavonoid.
Biji petai mengandung alkaloid, terpenoid, flavonoid, fenolik. Kulit batang
pohon petai mengandung senyawa fenolik dan alkaloid (Kamisah, dkk, 2013).
Sedangkan menurut Kurniawati (2014) menggunakan kulit petai yang diambil
dari Kabupaten Bogor diekstraksi dengan etanol 70% menggunakan metode
maserasi ultrasonifikasi. Hasil yang diperoleh Kurniawati (2014) menyatakan
bahwa kulit petai yang berasal dari Kabupaten Bogor mengandung golongan
senyawa kimia seperti alkaloid, terpenoid, saponin, dan tanin serta ekstrak
etanol kulit petai tidak memiliki aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
20
aureus dan Escherichia coli. Oleh sebab itu, peneliti melakukan eksplorasi
bahan alam menggunakan tanaman yang sama yaitu petai yang berasal dari
Kabupaten Sleman, Yogyakarta dengan bagian kulit batang pohon petai.
Menurut Nitisapto dan Siradz (cit., Mahatriny, Payani, Oka dan Astuti, 2014),
faktor lingkungan tanaman yang berbeda dapat mempengaruhi hasil metabolit
sekunder tanaman. Faktor-faktor lingkungan yang dapat mempengaruhi
adalah iklim, cahaya matahari, suhu, lingkungan atmosfer (CO2, O2, dan
kelembaban), lingkungan perakaran (sifat kimia dan fisika tanah) dan
ketersediaan air di dalam tanah.
Untuk mendapatkan senyawa kimia yang terkandung dalam kulit
batang pohon petai maka dapat dilakukan dengan metode maserasi
menggunakan penyari yang sesuai sehingga mempermudah menyari senyawa
kimia tersebut berdasarkan kelarutannya. Salah satu pelarut yang digunakan
sebagai penyari senyawa kimia yang terkandung dalam kulit batang pohon
petai adalah etanol. Menurut Agnes, dkk (2013), etanol dapat digunakan
sebagai penyari karena dapat menarik senyawa kimia yang bersifat semi polar
sampai polar sehingga kandungan kimia yang diharapkan dapat tersari dengan
optimal sesuai dengan kepolarannya.
Pengujian aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit batang pohon petai
dilakukan dengan menggunakan metode difusi sumuran. Hasil dari metode
difusi sumuran dapat ditunjukkan dengan diameter zona hambat (zona jernih).
Untuk mengukur KHM dan KBM menggunakan metode dilusi cair yang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
21
hasilnya ditunjukkan dengan kadar terendah dari ekstrak etanol kulit batang
pohon petai yang mampu menghambat dan membunuh pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.
Penelitian terkait adanya aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit
batang pohon petai terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli
diharapkan dapat memberikan informasi kepada masyarakat dan
perkembangan ilmu pengetahuan mengenai manfaat kulit batang pohon petai
sebagai salah satu terapi alternatif penyakit infeksi yang disebabkan oleh
Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.
K. Hipotesis
Kandungan senyawa kimia yang terdapat dalam kulit batang pohon
petai yang memiliki aktivitas antibakteri adalah senyawa alkaloid, fenolik,
saponin, tanin, flavonoid. Ekstrak etanol kulit batang pohon petai memiliki
aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli,
memiliki kadar hambat minimum (KHM) dan kadar bunuh minimal (KBM).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
22
BAB III
METODE PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni, dengan
rancangan acak lengkap pola satu arah. Penelitian dilakukan di Laboratorium
Farmakognosi-Fitokimia dan Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Farmasi
Universitas Sanata Dharma, Laboratorium Mikrobiologi Balai Kesehatan Yogyakarta.
B. Variabel dan Definisi Operasional
1. Variable Penelitian
a. Variabel bebas : konsentrasi ekstrak etanol kulit batang
pohon petai.
b. Variabel tergantung : diameter zona hambat.
c. Variabel pengacau terkendali : asal tanaman, cara ekstraksi, waktu
lamanya inkubasi, suhu inkubasi, jenis
mikroba uji, volume larutan uji yang
diinokulasikan, umur tanaman.
2. Definisi Operasional
a. Aktivitas antibakteri adalah kemampuan bahan uji yang mampu
menghambat atau membunuh pertumbuhan mikroba uji Staphylococcus
aureus dan Escherichia coli yang dapat dilihat dari zona jernih yang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
23
menggambarkan zona hambat pertumbuhan bakteri, dibandingkan dengan
kontrol negatif (DMSO 5%).
b. Kulit batang pohon petai adalah kulit batang pohon petai yang berwarna
cokelat dari pohon yang berumur 3-5 tahun berasal dari Kabupaten
Sleman, Yogyakarta.
c. Zona hambat adalah zona jernih di sekitar sumuran pada media
pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Escherichia coli, dilihat dari
kejernihan media yang dibandingkan dengan kontrol negatif (DMSO).
d. Kadar Hambat Minimum (KHM) adalah kadar terendah dari ekstrak
etanol kulit batang pohon petai yang dapat menghambat pertumbuhan
bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.
e. Kadar Bunuh Minimal (KBM) adalah kadar terendah dari ekstrak etanol
kulit batang pohon petai yang dapat membunuh pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.
C. Bahan dan Alat Penelitian
1. Bahan
Bahan-bahan yang digunakan adalah serbuk kulit batang pohon petai
diperoleh dari CV. Merapi Farma Herbal, kultur murni bakteri Staphylococcus
aureus dan Escherichia coli dari Balai Kesehatan Yogyakarta, media Mueller
Hinton Agar (MHA) dan Mueller Hinton Broth (MHB) dari Merck, Etanol
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
24
70% (Mediss), Amoksisilin (BERNOFARM), DMSO 5% (Merck), larutan
Mac Farland 0,5 (1,5.108 CFU), aquadest steril.
2. Alat
Alat-alat yang digunakan adalah spektrofotometer UV-Vis (UVmini-
1240 UV-Vis Spectrophotometer Shimadzu), Microbiological Safety Cabinet,
moisture balance (HG53 Halogen Moisture Analyzer), Platform Shaker
(Innova 2100 New Brunswick Scientific), autoclave, rotary vacuum
evaporator (Buchi Labortechnik AG CH-9230), timbangan digital, waterbath
(Memmert), mikropipet (Socorex), Bunsen, jarum ose, flakon, kertas saring,
kuvet, alat-alat gelas (PYREX dari Laboratorium Mikrobiologi dan
Farmakognosi Fitokimia Fakultas Farmasi Sanata Dharma), pipet tetes, cawan
petri, batang pengaduk, inkubator (Heraeus), sendok, pelubang sumuran
diameter 6 mm.
D. Tata Cara Penelitian
1. Determinasi kulit batang pohon petai
Determinasi dilakukan di CV. Merapi Farma Herbal, Yogyakarta.
Kulit batang pohon petai dideterminasi secara makroskopis dengan
mencocokkan ciri - ciri yang ada pada tanaman.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
25
2. Pengumpulan bahan kulit batang pohon petai
Sampel yang digunakan adalah kulit batang pohon petai yang diambil
dari Kabupaten Sleman. Kulit batang pohon petai yang diambil berwarna
cokelat.
3. Pengeringan dan pembuatan serbuk bahan
Kulit batang pohon petai yang telah diperoleh, dicuci bersih dari
kotoran dengan menggunakan air mengalir. Kulit batang pohon petai dipotong
menjadi beberapa bagian lalu dikeringkan. Pengeringan dihentikan ketika
kulit batang pohon petai mudah remuk saat diremas lalu dilanjutkan dengan
proses penyerbukan menggunakan mesin penggiling kopi hingga halus.
Setelah serbuk didapatkan lalu serbuk diayak menggunakan ayakan tepung.
Serbuk yang telah halus dimasukkan dalam toples yang tertutup rapat dan
disimpan dalam lemari penyimpanan.
4. Penetapan susut pengeringan pada serbuk kering kulit batang pohon petai
Serbuk kering kulit batang pohon petai yang sudah diayak ditimbang
sebanyak lebih kurang 5 gram ke dalam alat moisture balance lalu diratakan.
Bobot serbuk kering kulit batang pohon petai ditimbang sebelum pemanasan
dan sesudah pemanasan. Serbuk kering kulit batang pohon petai dipanaskan
pada suhu 1050C selama 15 menit. Bobot serbuk setelah pemanasan diperoleh
lalu dihitung selisih antara bobot sebelum pemanasan dan bobot setelah
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
26
pemanasan yang merupakan hasil susut pengeringan serbuk kulit batang
pohon petai. Hasil pengukuran dinyatakan dalam persen.
5. Pembuatan ekstak etanol kulit batang pohon petai
Ekstrak etanol kulit batang pohon petai dibuat dengan metode
maserasi. Maserasi dilakukan dua kali dengan perbandingan 1 : 7,5 bagian
pada maserasi pertama dan maserasi kedua dengan perbandingan 1 : 2,5
bagian. Maserasi pertama dilakukan dengan menimbang 50 g serbuk kulit
batang pohon petai kemudian direndam dalam 375 ml pelarut etanol 70%
selama 2 x 24 jam menggunakan shaker. Ekstrak yang didapat disaring
menggunakan corong Buchner, kertas saring dan pompa vakum. Sisa serbuk
hasil maserasi pertama yang masih ada kemudian diremaserasi menggunakan
pelarut etanol sebanyak 125 mL dan diperoleh maserat II. Maserat I dan
maserat II digabung kemudian dipekatkan menggunakan rotary vacuum
evaporator dengan suhu 70 0C sampai terbentuk cairan kental. Penguapan
dilanjutkan dengan menggunakan penangas air selama dengan suhu antara 50-
60oC sampai diperoleh ekstrak kental dengan bobot tetap.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
27
6. Identifikasi kandungan senyawa kimia kulit batang pohon petai dengan uji
tabung
a. Pembuatan larutan uji fitokimia
Pembuatan larutan uji untuk uji fitokimia dilakukan dengan cara
melarutkan sebanyak 500 mg ekstrak etanol 70% kulit batang pohon petai
dilarutkan dalam 50 mL etanol 70%.
b. Skrinning Fitokimia
1) Uji pendahuluan
Dua gram serbuk kulit batang pohon petai ditambahkan dengan 20
mL aquadest lalu dipanaskan di atas waterbath selama lebih kurang 15
menit, lalu disaring. Hasil positif yang diperoleh apabila larutan menjadi
berwarna merah hingga kuning dan saat penambahan KOH LP, warna larutan
menjadi lebih intensif menunjukkan adanya senyawa yang mengandung
kromofor dengan gugus hidrofilik.
2) Uji Saponin
Sebanyak 100 mg serbuk kulit batang pohon petai ditambahkan 10
mL aquadest ke dalam tabung reaksi, ditutup dan dikocok selama 30 detik.
Tabung dibiarkan dalam posisi tegak selama 30 menit. Apabila terbentuk
buih dari permukaan cairan dan setelah lebih kurang 30 menit ditetesi lebih
kurang 1 tetes HCl 2 N, busa tidak hilang maka menunjukkan adanya
saponin.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
28
3) Uji Flavonoid
Sebanyak 3 mL larutan uji ditetesi dengan NaOH LP lebih kurang 2
tetes, terjadi pembentukan intensitas warna kuning. Penambahan HCL
membuat intensitas warna kuning berubah. Perubahan ini mengindikasikan
adanya flavonoid (Jones and Kinghorn, 2006).
4) Uji Alkaloid
Sebanyak 2 mL larutan uji diuapkan di atas porselin dan penangas air
lebih kurang 5 menit, lalu sisanya dilarutkan dengan 5 mL HCl 2 N.
Kemudian, larutan yang diperoleh dibagi dalam 3 tabung reaksi yaitu : blanko
(larutan uji yang telah diuapkan dan ditambah HCL 2N), blanko ditambah 3
tetes pereaksi Dragendorff, dan blanko ditambah 3 tetes peraksi Mayer.
Apabila terdapat endapan jingga setelah ditambah pereaksi Dragendorff dan
endapan kuning setelah ditambahkan pereaksi Mayer menunjukkan adanya
alkaloid (Jones and Kinghorn, 2006).
5) Uji Tanin
Sebanyak 1 mL larutan uji dilarutkan dengan larutan FeCl3 10% lebih
kurang 3 tetes. Adanya tanin ditunjukkan dengan terbentuknya warna biru tua
atau hitam kehijauan (Jones and Kinghorn, 2006).
6) Uji Fenolik
Sebanyak 3 mL larutan uji ditambahkan beberapa tetes (lebih kurang 6
tetes) larutan FeCl3 1%. Hasil positif berwarna hijau, merah, ungu atau hitam
(Jones and Kinghorn, 2006).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
29
7) Uji Terpenoid
Sebanyak 2,5 mL larutan uji dicampur dengan 1 mL kloroform dan
ditambah 1,5 mL H2SO4 pekat secara hati-hati (lewat dinding). Hasil positif
ditunjukkan dengan larutan menjadi warna coklat kemerahan pada
permukaan dalam larutan (Edeoga, Okwu, dan Mbaebre, 2005).
7. Uji identifikasi bakteri
a. Staphylococcus aureus
Bakteri ditanam di media geolitik, diinkubasi selama 24 jam pada suhu
370C. Bakteri diisolasi dari media geolitik ke media Enrich, diinkubasi selama 2
x 24 jam pada suhu 37 0C. Jika terdapat endapan hitam dengan kabut putih
diduga bakteri Staphylococcus aureus. Kemudian, diambil 1-2 ose bakteri,
diinokulasi ke dalam media gula (glukosa, laktosa, manitol, maltosa, sakarosa),
media NA miring, media Simons Citrate (SC), media Sulfure Indole Motil
(SIM) dan diinkubasi selama 24 jam. Pengecatan Gram dilakukan setelah
inkubasi selama 24 jam pada suhu 370C.
b. Escherichia coli
Bakteri ditanam ke media penyubur Brilliant Green Lactose Blue
(BGLD) kemudian diinkubasi selama 24 jam dengan suhu 440C. Jika terdapat
gelembung udara dari tabung Durham yang terdapat di dalam tabung reaksi
diduga bakteri Escherichia coli. Setelah itu, bakteri diisolasi lalu ditanam ke
media TBX (Tryptone Bile X-Glucoronide) dan diinkubasi pada suhu 370C
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
30
selama 24 jam. Pada media isolasi setelah 24 jam diketahui tersangka
Escherichia coli dengan timbulnya warna hijau. Kemudian, bakteri diambil 1-2
ose, diinokulasi ke dalam media gula (laktosa, glukosa, sakarosa, manitol,
maltosa), NA, SC (Simon Citrate), SIM (Sulfur Indol Motil) dan diinkubasi
selama 24 jam. Setelah 24 jam diinkubasi, dilakukan pengecatan Gram.
8. Uji potensi ekstrak etanol kulit batang pohon petai terhadap S. aureus dan E.
coli.
a. Pembuatan variasi konsentrasi larutan uji
Sebanyak 2,5 gram ekstrak kental kulit batang pohon petai ditimbang
kemudian dilarutkan dengan 5 mL DMSO 5% sehingga diperoleh konsentrasi
50%. Konsentrasi 50% diencerkan sehingga diperoleh konsentrasi 25%; 12,5%;
6,25%; 3,125%. Kontrol negatif yang digunakan dalam penelitian ini adalah
DMSO 5% dan kontrol positif yang digunakan adalah amoksisilin 125 mg/ 5 mL
untuk S. aureus dan E. coli.
b. Pembuatan suspensi bakteri uji
Sebanyak 1-3 ose diambil dari stok bakteri S. aureus dan E. coli, kemudian
diinokulasikan ke dalam tabung reaksi yang berisi MHB (Mueller Hinton Broth)
dan divortex agar tercampur rata, lalu dilihat kekeruhannya. Kekeruhan suspensi
bakteri disetarakan dengan larutan Mac Farland 0,5 (1,5 x 108 CFU/mL).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
31
c. Uji aktivitas antibakteri dengan metode difusi sumuran
Sebanyak 15 mL MHA steril dituang ke dalam cawan petri steril dan
dibiarkan memadat. Media MHA yang telah memadat pada cawan petri
kemudian dapat di streak menggunakan cotton bud steril yang sebelumnya
dicelup dahulu ke dalam suspensi bakteri uji secara merata. Metode ini
menggunakan metode Kirby Bauer (Mpila, dkk, 2012). Sumuran dibuat dengan
menggunakan pelubang sumuran no. 6 sebanyak 7 lubang sumuran pada media
yang telah padat dan ditumbuhi bakteri uji. Ekstrak etanol kulit batang pohon
petai dengan variasi konsentrasi (50%; 25%; 12,5%; 6,25%; 3,125%), kontrol
negatif (DMSO 5%), dan kontrol positif (Amoksisilin 125 mg/5 mL)
dimasukkan pada lubang sumuran sebanyak 50 µL. Media uji yang telah berisi
ekstrak, control positif dan kontrol negatif diinkubasi selama 24 jam pada suhu
370C lalu diamati dan diukur diameter zona hambat yang dihasilkan. Zona
hambat yang terbentuk diukur dengan penggaris. Dalam uji aktivitas antibakteri
ini dilakukan replikasi sebanyak 3 kali replikasi.
d. Penentuan KHM dan KBM dengan metode dilusi cair
Pada uji aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi sumuran,
didapatkan konsentrasi terkecil dari ekstrak kulit batang pohon petai yang
mempunyai aktivitas antibakteri. Dari konsentrasi terkecil tersebut, dibuat variasi
konsentrasi yang rentangnya lebih sempit sebanyak 10 konsentrasi (0,785%;
1,563%; 3,125%; 6,25%; 12,5%; 15,625%; 18,750%; 21,875%; 25%; 50%)
untuk mengetahui KHM dan KBM dari masing-masing ekstrak. Pengujian
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
32
dilakukan dengan membuat suspensi bakteri yang kekeruhannya disetarakan
dengan larutan Mac Farland 0,5 (1,5 x 108 CFU). Dari suspensi tersebut, diambil
200 µL, ditambah dengan larutan uji yang berisi ekstrak etanol kulit batang
pohon petai dengan konsentrasi tertentu dan dicampur rata dengan 5 mL MHB.
Setelah itu diukur nilai absorbansinya menggunakan spektrofotometer UV-Vis (λ
480 nm) sebelum inkubasi dan setelah inkubasi selama 24 jam pada suhu 37 0C.
Hasil selisih dari absorbansi tersebut digunakan sebagai nilai Optical Density
(OD). Kemudian konsentrasi ekstrak etanol kulit batang pohon petai yang
mempunyai nilai ∆ OD = 0 akan ditegaskan ke dalam media MHA padat,
diinkubasi selama 24 jam pada suhu 370C, lalu diamati pertumbuhan bakteri.
Apabila pada media MHA tumbuh koloni bakteri maka konsentrasi ekstrak
etanol kulit batang pohon petai tersebut menghambat pertumbuhan bakteri
(KHM) dan jika media MHA tersebut tidak terdapat pertumbuhan bakteri maka
konsentrasi ekstrak etanol kulit batang pohon petai membunuh pertumbuhan
bakteri (KBM). Penentuan KHM dan KBM dengan metode dilusi cair dilakukan
3 kali replikasi.
E. Analisis Hasil
Data yang didapat berupa diameter zona hambat, dianalisis secara statistik
menggunakan uji Shapiro Wilk untuk mengetahui apakah terdistribusi normal
atau tidak kemudian diikuti dengan uji Levene bertujuan untuk melihat
homogenitas data. Apabila distribusi data tidak normal maka analisis dilanjutkan
menggunakan uji Kruskal Wallis untuk melihat perbedaan bermakna antara
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
33
kelompok ekstrak etanol kulit batang pohon petai, kontrol negatif (DMSO 5%),
dan kontrol positif (Amoksisilin 125 mg/ 5 mL). Selanjutnya, dilakukan analisis
post hoc menggunakan Mann-Whitnney Test.
Data yang didapat berupa diameter zona hambat, dianalisis secara statistik
menggunakan uji Kruskal Wallis untuk mengetahui perbedaan bermakna antara
kelompok ekstrak etanol kulit batang pohon petai, kontrol negatif (DMSO 5%),
dan kontrol positif (Amoksisilin 125 mg/ 5 mL). Selanjutnya, dianalisis post hoc
dengan Mann-Withney Wilcoxon Test.
Nilai KHM dan KBM yang didapat dianalisis secara deskriptif. Nilai KHM
dan KBM yang diperoleh dengan metode dilusi cair dan diukur kekeruhannya
dengan melihat absorbansi menggunakan spektrofotometer UV-Vis sehingga
didapatkan nilai optical density (OD). Nilai KHM dan KBM diperoleh jika nilai
∆ OD = 0 yakni absorbansi setelah inkubasi dikurangi absorbansi sebelum
inkubasi. Kemudian ditegaskan pada media MHA di cawan petri untuk
menunjukkan konsentrasi dari ekstrak etanol kulit batang pohon petai mampu
menghambat atau membunuh pertumbuhan koloni bakteri.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
34
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini secara umum mempunyai tujuan untuk mengetahui aktivitas
antibakteri ekstrak etanol kulit batang pohon petai terhadap S. aureus dan E. coli.
Selain itu, penelitian ini juga bertujuan untuk mengetahui kandungan senyawa
kimia yang terdapat dalam ekstrak etanol kulit batang pohon petai, mengetahui
kadar hambat bakteri dari ekstrak etanol kulit batang pohon petai terhadap S.
aureus dan E. coli.
A. Determinasi dan Pengumpulan Tanaman
Determinasi tanaman bertujuan untuk menghindari kesalahan dalam
penelitian dan memastikan bahwa tanaman yang digunakan adalah petai.
Tanaman petai memiliki ciri-ciri sebagai berikut tinggi pohon 5-14 meter.
Batang berkayu, bulat, bercabang, warna coklat kemerahan. Daun majemuk,
anak daun dengan ujung runcing, pangkal membulat, panjang 4-20 mm, lebar 2-
3 cm, warna hijau. Bunga majemuk, jumlah benang sari 10. Pangkal mahkota
berwarna putih kekuningan, melekat pada benang sari. Kelopak bertajuk, bagian
ujung berkelamin ganda. Tangkai sari panjang. Buah berbentuk polong, pipih,
warna hijau. Biji berbentuk pipih, tebal, warna hijau. Akar tunggang, warna
coklat (Adi, 2008).Kulit batang pohon petai diperoleh dari Kabupaten Sleman,
Yogyakarta dalam bentuk kulit batang pohon petai yang segar. Kulit batang
pohon petai yang dipilih adalah kulit batang pohon yang berwarna coklat dan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
35
memiliki permukaan yang keras. Kebenaran tanaman yang digunakan dibuktikan
dengan surat keterangan dari CV Merapi Farma Herbal yang terdapat dalam
lampiran 1. Berdasarkan surat keterangan tersebut, didapatkan bahwa tanaman
yang dipakai dalam penelitian ini adalah benar petai (Parkia speciosa Hassk.).
B. Pembuatan Serbuk Simplisia Kulit Batang Pohon Petai
Kulit batang pohon petai yang telah diperoleh, dicuci bersih dari kotoran
dengan menggunakan air mengalir untuk menghilangkan pengotor yang
mungkin masih ada. Kulit batang pohon petai dipotong menjadi beberapa bagian
lalu dikeringkan. Pengeringan dihentikan ketika kulit batang pohon petai mudah
remuk saat diremas lalu dilanjutkan dengan proses penyerbukan menggunakan
mesin penggiling kopi. Pengeringan dilakukan untuk menurunkan kandungan air
yang terdapat dalam kulit batang pohon petai agar tidak mudah ditumbuhi
kapang dan bakteri. Selain itu, apabila kandungan air dalam kulit batang pohon
petai masih tinggi, dapat mendorong enzim mengubah kandungan kimia menjadi
produk lain yang tidak memiliki efek farmakologi seperti senyawa aslinya
(Pramono, 2005; Ma’mun, 2006). Beberapa enzim perusak kandungan kimia
antara lain : hidrolase, oksidase dan polimerase (Ma’mun, 2006). Setelah serbuk
didapatkan lalu serbuk diayak menggunakan ayakan tepung hingga halus.
Penyerbukan ini berfungsi untuk meningkatkan luas permukaan kontak dengan
pelarut, sehingga saat proses ekstraksi dapat diperoleh rendemen yang banyak.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
36
Setelah itu serbuk dimasukkan dalam toples yang tertutup rapat dan disimpan
dalam ruangan penyimpanan.
C. Penetapan susut pengeringan pada serbuk kulit batang pohon
petai
Dalam penelitian, penetapan kadar air tidak dilakukan karena belum
diketahui apakah serbuk kulit batang pohon petai hanya mengandung air dalam
bentuk serapan atau tidak. Oleh sebab itu, dilakukan susut pengeringan. Alasan
dilakukan susut pengeringan dalam penelitian ini adalah untuk mengetahui
kandungan air yang terdapat dalam serbuk kulit batang pohon petai dan dapat
digunakan untuk menetapkan jumlah semua jenis bahan yang mudah menguap
dan hilang pada kondisi tertentu (proses pengeringan) (Departemen Kesehatan
Republik Indonesia, 1995). Susut pengeringan umumnya dinyatakan sebagai
nilai persen terhadap bobot awal.
Penetapan susut pengeringan dalam penelitian ini menggunakan metode
Gravimetri. Gravimetri adalah suatu metode analisis kuantitatif berdasarkan
berat konstannya (berat tetap). Hal ini dibuktikan dengan nilai persen terhadap
bobot awal serbuk sebelum dipanaskan. Serbuk kulit batang pohon petai yang
telah diayak dipanaskan menggunakan alat moisture balance pada suhu 1050C
selama 15 menit dengan asumsi air sudah menguap semua. Tujuan digunakan
suhu 1050C adalah agar air yang terdapat di dalam serbuk menguap (diatas titik
didih air). Setelah serbuk dipanaskan, dilakukan perhitungan terhadap kadar air
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
37
yang terdapat dalam serbuk yang diteliti. Persyaratan yang ditetapkan oleh
Menteri Kesehatan Republik Indonesia 2009 untuk susut pengeringan adalah
nilai susut pengeringan kurang dari 10%. Dalam penelitian dilakukan tiga kali
replikasi dan diperoleh rata-rata susut pengeringan dalam serbuk kulit batang
pohon petai sebesar 6,75 %. Hal ini menunjukkan bahwa serbuk kulit batang
pohon petai yang digunakan dalam penelitian ini telah memenuhi persyaratan
yang telah ditetapkan yaitu tidak lebih dari 10 %.
D. Pembuatan Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai
Ekstrak etanol kulit batang pohon petai dibuat menggunakan metode
maserasi. Serbuk kulit batang pohon petai yang telah ditimbang kemudian
diekstraksi menggunakan pelarut etanol 70 % dengan tujuan untuk menarik
senyawa kimia yang terdapat dalam kulit batang pohon petai. Menurut
Padmasari, Astuti, dan Warditiani (2013), etanol 70% digunakan sebagai pelarut
karena etanol merupakan pelarut universal yang dapat menarik senyawa kimia
dan mempunyai indeks polaritas sebesar 5,2. Alasan lain digunakan etanol
karena etanol tidak beracun, tidak ditumbuhi oleh kapang dan jamur, dan
absorbsinya baik (Hargono, 1986). Alasan mengunakan metode maserasi adalah
mudah dilakukan, caranya sederhana, dan peralatannya sederhana. Metode
maserasi juga dapat menghindari perubahan kimia pada senyawa-senyawa
tertentu akibat pemanasan (Pratiwi, 2008). Ekstrak etanol kulit batang pohon
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
38
petai tidak ditumbuhi oleh kapang dan jamur dibuktikan dengan ekstrak yang
didapat dalam penelitian ini (Gambar 2).
Proses ekstraksi dibantu dengan penggojogan menggunakan shaker.
Penggojogan ini bertujuan agar seluruh serbuk dapat kontak dengan pelarut
sehingga senyawa yang berpotensi sebagai antibakteri dapat tersari. Penggojogan
juga mempercepat waktu ektraksi dibandingkan jika serbuk hanya direndam.
Ekstraksi dengan metode ini dapat disebut sebagai ekstraksi mekanik.
Serbuk kulit batang pohon petai yang telah ditimbang terlebih dahulu
dibasahi dengan pelarut. Apabila sudah terbasahi seluruhnya, ditambahkan
pelarut sampai ketinggian pelarut ± 2 cm dari permukaan serbuk pada
Erlenmeyer. Penggojogan menggunakan shaker dilakukan selama 2 x 24 jam
kemudian disaring menggunakan kertas saring dengan bantuan pompa vacuum.
Pompa vacuum berfungsi untuk membantu proses ekstraksi.
Hasil saringan (filtrat) kemudian dimasukkan ke dalam labu alas bulat
untuk dipekatkan menggunakan vacuum rotary evaporator. Suhu yang
digunakan pada proses evaporasi ini adalah 70 0C sampai terbentuk cairan
kental. Prinsip kerja rotary vacum evaporator adalah destilasi, yaitu memisahkan
cairan penyari dan zat tersari dengan cara penurunan tekanan pada labu alas
bulat dan pemutaran labu alas bulat sehingga pelarut dapat menguap lebih cepat
di bawah titik didih. Apabila setelah proses pemekatan masih tersisa filtrat yang
cukup banyak, maka pemekatan bisa dibantu dengan pemanasan di atas
waterbath dengan suhu antara 50-60 0C. Sebelum dipanaskan di atas waterbath,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
39
filtrat ditampung dalam cawan porselin kemudian ditimbang dan setiap 1 jam
ditimbang hingga diperoleh bobot tetap. Menurut Depkes RI (1995), bobot tetap
adalah selisih penimbangan dari dua kali penimbangan berturut-turut setelah
pemanasan di atas waterbath selama satu jam dan tidak lebih dari 0,5 mg tiap
gram sisa yang ditimbang. Penimbangan dilakukan setelah 1 jam ekstrak
diuapkan. Bobot tetap ekstrak ditunjukkan pada tabel I.
Tabel I. Bobot Tetap Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai
Keterangan Bobot (g)
Selisih
bobot
(mg)
Penimbangan awal 12,24 - -
1 jam pemanasan 12,24 0 0
2 jam pemanasan 12,24 0 0
Ekstrak etanol kulit batang pohon petai yang telah diperoleh dilanjutkan
dengan menentukan rendemen. Penentuan rendemen memiliki tujuan untuk
mengukur efektivitas jenis pelarut yang digunakan untuk mengekstrak
kandungan kimia yang terkandung dalam kulit batang pohon petai. Semakin
besar nilai rendemen yang diperoleh semakin efektif pelarut yang digunakan
ketika dilakukan ekstraksi. Hasil rendemen yang didapat dalam penelitian ini
sebesar 24,52%.
Gambar 2. Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
40
E. Skrining Fitokimia
Tujuan dilakukan skrining fitokimia dalam penelitian adalah untuk
mengetahui kandungan bioaktif atau kandungan senyawa kimia yang berfungsi
sebagai antibakteri. Pada penelitian, skrining perlu dilakukan untuk mengetahui
senyawa yang berpotensi sebagai antibakteri, seperti : alkaloid, polifenol,
flavonoid, tanin, dan lain-lain. Analisis kualitatif yang digunakan dalam
penelitian adalah uji tabung. Tujuan dilakukan uji tabung adalah untuk
mengetahui kandungan kimia yang terdapat dalam kulit batang pohon petai. Uji
tabung yang dilakukan dalam penelitian meliputi uji pendahuluan, uji saponin,
uji flavonoid, uji alkaloid, uji tanin, uji fenolik dan uji terpenoid terdapat pada
tabel II. Hasil yang diperoleh Kurniawati (2014) menyatakan bahwa kulit petai
mengandung golongan senyawa kimia seperti alkaloid, terpenoid, saponin, dan
tanin yang berpotensi sebagai antibakteri.
Tabel II. Hasil pengamatan uji tabung terhadap larutan uji ekstrak kulit
batang pohon petai
No Pengujian Pengamatan Hasil
1 Uji pendahuluan Warna lebih pekat +
2 Uji saponin Tidak terbentuk buih/busa -
3 Uji flavonoid Warna kuning +
4 Uji alkaloid Adanya endapan +
5 Uji tanin Tidak terdapat warna hijau -
6 Uji fenolik Terdapat warna ungu kehitaman +
7 Uji terpenoid Terdapat warna merah +
Keterangan : (+) = mengandung senyawa yang dimaksud ; (-) = tidak
mengandung senyawa yang dimaksud.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
41
1. Uji pendahuluan
Uji pendahuluan merupakan uji tahap awal yang menggambarkan
adanya kemungkinan senyawa spesifik seperti flavonoid, tanin, alkaloid,
saponin, fenolik, terpenoid dan sebagainya (Arisandi, 1990 cit. Anwar, 2014).
Tujuan dilakukan uji pendahuluan adalah untuk mengetahui kandungan kimia
yang terkandung dalam ekstrak etanol kulit batang pohon petai. Pada uji
pendahuluan (Gambar 3), serbuk kulit batang pohon petai yang telah
dilarutkan dengan etanol 70% dipanaskan lalu ditambahkan dengan KOH LP
sehingga menghasilkan warna kuning yang lebih intensif (kuning pekat). Hal
ini menunjukkan bahwa kulit batang pohon petai mengandung kromofor
seperti tanin, flavonoid, alkaloid dan lain-lain.
Sebelum ditambah KOH LP Setelah ditambah KOH LP
Gambar 3. Uji Pendahuluan
2. Uji saponin
Saponin merupakan metabolit sekunder yang mengandung gugus gula
terutama glukosa, galaktosa, xylosa, rhamnosa atau metilpentosa yang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
42
berikatan dengan suatu aglikon hidrofobik (sapogenin) berupa triterpenoid,
steroid alkaloid. Saponin bersifat polar dan dapat larut dalam pelarut air.
Saponin juga bersifat nonpolar karena memiliki gugus hidrofobik yaitu
aglikon (Suparjo, 2008 cit. Marliana dan Chairul, 2011).
Gugus hidrofil dan hidrofobik ini akan membentuk misel. Ketika misel
terbentuk maka gugus hidrofil akan menghadap ke dalam dan gugus
hidrofobik akan menghadap keluar dan fenomena ini tampak seperti busa.
Sifat ini menyerupai surfaktan/sabun yang berfungsi dapat menurunkan
tegangan permukaan antara udara dengan air yang berupa emulsi gas dalam
air (Robinson, 1995). Hasil yang diperoleh pada uji saponin (Gambar 4)
adalah tidak terbentuk buih. Dalam uji saponin, tidak terbentuk buih setelah
serbuk dilarutkan dalam aquadest kemudian digojog selama 30 detik.
Gambar 4. Uji saponin (a) sebelum penggojogan; (b) setelah penggojogan
(a) (b)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
43
3. Uji flavonoid
Dalam uji flavonoid menurut, penambahan natrium hidroksida akan
melarutkan flavonoid yang merupakan senyawa polifenol yang memiliki sifat
asam lemah (Kumalasari dan Sulistyani, 2011). Ekstrak yang mengandung
flavonoid ketika ditambahkan dengan natrium hidroksida akan menghasilkan
warna kuning (Syajid, 2008). Dalam uji ini menunjukkan hasil positif yang
dibuktikan dengan terbentuknya warna kuning. Hasil positif ini menunjukkan
bahwa kulit batang pohon petai mengandung flavonoid. Hasil positif
penelitian ini ditunjukkan pada Gambar 5.
(a) (b) (c)
Gambar 5. Uji Flavonoid (a) Larutan uji sebelum ditambahkan NaOH dan KCl ; (b)
Setelah ditambahkan NaOH ; (c) Setelah ditambahkan KCl
4. Uji alkaloid
Dalam uji alkaloid, hasil positif dibuktikan dengan terbentuknya
endapan ketika larutan uji ditambahkan dengan pereaksi Mayer dan
Dragendorff. Larutan uji dilarutkan dengan etanol sebelum dipanaskan.
Larutan uji ditunjukkan pada Gambar 6.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
44
Sebelum diuapkan Setelah diuapkan
Gambar 6. Larutan uji pada uji alkaloid
Menurut Harbone (1996) dalam uji alkaloid, penambahan HCl
berfungsi untuk melarutkan ekstrak yang mengandung alkaloid karena alkaloid
bersifat basa. Hasil positif alkaloid setelah ditambahkan pereaksi Mayer
ditunjukkan dengan terbentuknya endapan putih. Endapan putih yang terbentuk
merupakan kompleks kalium alkaloid. Dalam pembuatan pereaksi Mayer,
larutan merkurium (II) klorida ditambah kalium iodide akan bereaksi
membentuk endapan merah merkurium (II) iodida. Apabila penambahan
kalium iodida terlalu banyak maka akan membentuk kalium tetraiodomerkurat
(II). Reaksi yang terjadi ketika ditambahkan pereaksi Mayer ditunjukkan pada
Gambar 7. Hasil yang didapatkan dalam uji alkaloid yang ditambahkan dengan
pereaksi Mayer ditunjukkan pada Gambar 8. Gambar 8 menunjukkan adanya
endapan setelah larutan uji ditambah dengan pereaksi Mayer ditunjukkan
dengan anak panah.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
45
Gambar 7. Reaksi uji alkaloid dengan penambahan pereaksi Mayer
Sebelum ditambah Mayer Setelah ditambah Mayer
Gambar 8. Uji alkaloid dengan penambahan pereaksi Mayer
Menurut McMurry (2004), alkaloid memiliki atom nitrogen yang
memiliki pasangan elektron bebas sehingga dapat digunakan untuk
membentuk ikatan kovalen koordinat dengan ion logam ketika ditambahkan
dengan pereaksi Dragendorff. Menurut Miroslav (1971) pada uji alkaloid
dengan pereaksi Dragendorff, nitrogen digunakan untuk membentuk ikatan
kovalen koordinat dengan K+ yang merupakan ion logam. Reaksi pada uji
alkaloid dengan penambahan Dragendorff ditunjukkan pada Gambar 9.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
46
Gambar 9. Reaksi pada uji alkaloid dengan penambahan Dragendorff
Hasil yang diperoleh setelah ditambahkan pereaksi Dragendorff ditunjukkan
pada Gambar 10.
Sebelum ditambah Dragendorff Setelah ditambah Dragendorff
Gambar 10. Uji alkaloid dengan penambahan pereaksi Dragendorff
Hasil yang diperoleh dalam uji alkaloid adalah adanya endapan ketika
ditambahkan pereaksi Mayer dan Dragendorff sehingga kulit batang pohon
petai mengandung alkaloid. Hasil yang diperoleh dalam uji tanin ditunjukkan
pada Gambar 8 dan Gambar 10.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
47
5. Uji tanin
Dalam uji ini penambahan larutan FeCl3 10% bertujuan untuk bereaksi
dengan salah satu gugus hidroksi yang terdapat pada senyawa tanin. Tujuan
digunakan pereaksi FeCl3 secara umum adalah untuk mengidentifikasi senyawa
fenol termasuk tanin. Hasil positif dari uji tannin setelah penambahan larutan
FeCl3 ditunjukkan dengan adanya warna hijau (Marlinda, Meiske, dan Audy,
2012).
Sebelum ditambah FeCl3 10% Setelah ditambah FeCl3 10%
Gambar 11. Uji Tanin
Hasil yang diperoleh dalam uji tanin adalah tidak menunjukkan warna hijau
ketika ditetesi larutan FeCl3 10% sehingga kulit batang pohon petai tidak
mengandung tanin. Hasil yang diperoleh dalam uji tanin ditunjukkan pada
Gambar 11.
6. Uji fenolik
Larutan uji kulit batang pohon petai direaksikan dengan FeCl3 1%
sehingga menunjukkan hasil positif dengan munculnya warna ungu kehitaman.
Senyawa fenolik memiliki ciri yang khas yaitu membentuk ikatan kompleks
dengan besi (III) klorida berwarna biru atau biru ungu. Kompleks yang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
48
terbentuk diduga senyawa besi (III) heksa fenolat sehingga hasil positif dari uji
ini menunjukkan adanya gugus OH aromatik. Warna yang terbentuk ketika besi
(III) klorida bereaksi dengan sampel yang diuji. Dalam uji ini, ion Fe3+
mengalami hibridisasi orbital d2sp3. Berdasarkan hasil hibridisasi tersebut, ion
Fe3+ mempunyai 6 orbital kosong yang dapat diisi oleh gugus pendonor
pasangan electron dimana gugus pendonor pasangan elektron pada senyawa
fenolik berasal dari pasangan elektron bebas dari atom oksigen. Fenolik
memiliki fungsi penting dalam transport elektron pada fotosintesis, memiliki
aktivitas sitokinin, pemacu pertumbuhan, mampu menyerap sinar UV serta
memiliki aktivitas antiinflamasi (Ardiansyah, 2007; Marliana dan Chairul,
2011). Hasil uji fenolik pada penelitian (Gambar 12) menunjukkan adanya
warna ungu kehitaman setelah ditambahkan dengan larutan FeCl3 1% sehingga
kulit batang pohon mengandung senyawa fenolik.
Gambar 12. Uji Fenolik, larutan uji (a) belum ditambahkan FeCl3 1%; dan (b) sudah
ditambahkan FeCl3 1%.
(a) (b)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
49
7. Uji terpenoid
Analisis senyawa dalam uji terpenoid ini berdasarkan pada kemampuan
senyawa membentuk warna ketika bereaksi dengan H2SO4 pekat. Senyawa
terpenoid larut dalam kloroform dan akan menghasilkan warna merah ketika
ditambahkan dengan H2SO4 pekat. Hasil dalam uji ini (Gambar 13)
menunjukkan adanya warna merah yang terdapat pada permukaan larutan uji
sehingga kulit batang pohon petai mengandung terpenoid.
Larutan uji ditambah kloroform ditambah H2SO4
Gambar 13. Uji Terpenoid
F. Identifikasi Bakteri
Tujuan dilakukan identifikasi bakteri adalah untuk mengetahui apakah
bakteri uji yang digunakan adalah S. aureus dan E. coli. Identifikasi bakteri uji
dilakukan dengan uji gula (glukosa, laktosa, maltosa, sakarosa, manitol), NA, SC
(Simon Citrate), SIM (Sulfur Indol Motil) dan pengecatan Gram. Tujuan
dilakukan pengecatan Gram adalah untuk menentukan apakah bakteri uji
termasuk E. coli (Gram negatif) atau S. aureus (Gram positif).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
50
Menurut Kismiyati, Sri, Wahid dan Rahayu (2009), tujuan dilakukan uji
gula-gula dalam penelitian adalah untuk mendeterminasi kemampuan bakteri
dalam mendegradasi gula dan menghasilkan asam organik yang berasal dari tiap
jenis gula, yaitu glukosa, laktosa, manitol, maltosa, dan sakarosa. Menurut
Rostinawati (2008), hasil positif yang diperoleh pada uji gula-gula ditunjukkan
dengan adanya perubahan warna media gula-gula menjadi kuning dari warna
media sebelumnya. Hasil yang diperoleh pada uji gula-gula dalam penelitian
adalah media gula-gula tersebut berubah warna menjadi warna kuning setelah
diinkubasi selama 24 jam, baik pada bakteri S. aureus maupun E. coli.
Menurut Rostinawati (2008), hasil positif yang diperoleh pada uji motil
dalam media dapat dilihat dengan mengamati penyebaran pertumbuhan bakteri di
sekitar tusukan. Hasil yang diperoleh pada uji motil dalam penelitian adalah
adanya penyebaran bakteri di sekitar tusukan. Berdasarkan hasil yang diperoleh
menunjukkan bahwa koloni bakteri uji memiliki alat gerak yang menyebabkan
penyebaran bakteri pada media merata. Oleh karena itu dapat disimpulkan bahwa
bakteri tersebut bersifat fakultatif anaerob. Menurut Rostinawati (2008), hasil
positif pada uji indol ditunjukkan dengan cincin merah yang terdapat pada
permukaan media. Hasil yang diperoleh pada uji indol dalam penelitian adalah
terdapat cincin merah pada permukaan media. Menurut Cappucino dan Sherman
(cit. Rostinawati 2008), adanya produksi indol pada bakteri bertujuan untuk
mengetahui kemampuan bakteri mendegradasi asam amino esensial triptofan.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
51
Produk metabolit yang dihasilkan dari triptofan adalah indol, asam urat dan
ammonia.
Menurut Dewi (2010) bakteri S. aureus memiliki bentuk coccus dan
berwarna ungu ketika dilakukan pengecatan Gram. Hasil yang diperoleh dari uji
identifikasi bakteri uji menunjukkan bahwa S. aureus memiliki sel berbentuk
bulat (coccus) dan koloninya menyerupai buah anggur serta berwarna ungu dapat
dilihat pada lampiran no. 6. Menurut Purwohadisantoso, Elok dan Ella, (2009),
bakteri E. coli memiliki bentuk batang pendek dan menghasilkan warna merah
ketika dilakukan pengecatan Gram. Hasil yang didapat dari uji identifikasi
bakteri uji menunjukkan bahwa pada bakteri E. coli memiliki warna merah
muda, selnya berbentuk batang (basil) dapat dilihat pada lampiran no. 7.
Berdasarkan pustaka yang diacu (Purwohadisantoso, Elok dan Ella, 2009),
(Dewi, 2010) dan hasil yang diperoleh oleh penulis dalam penelitian ini
menunjukkan bahwa bakteri uji yang digunakan adalah benar bakteri S. aureus
dan E. coli.
G. Uji Potensi Antibakteri Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai
Terhadap S. aureus dan E. coli dengan Metode Difusi Sumuran
Uji ini merupakan uji pendahuluan yang bertujuan untuk memastikan
adanya aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit batang pohon petai terhadap
pertumbuhan S. aureus dan E. coli. Pengujian potensi antibakteri dilakukan
menggunakan metode difusi sumuran. Prinsip metode difusi yaitu senyawa uji
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
52
ditempatkan dalam media padat yang sebelumnya sudah diinokulasikan bakteri
uji. Senyawa uji akan berdifusi ke dalam media dan akan menghambat
pertumbuhan bakteri.
Ekstrak etanol kulit batang pohon petai disiapkan terlebih dahulu lalu
dilarutkan menggunakan DMSO karena DMSO dapat melarutkan ekstrak etanol
kulit batang pohon petai dan aman digunakan untuk uji aktivitas antibakteri
sebab tidak menunjukkan adanya zona hambat ketika diujikan pada bakteri S.
aureus dan E. coli. Menurut Alfath, Vera, dan Sunnati (2013) DMSO juga
digunakan sebagai pelarut karena DMSO dapat berfungsi sebagai pelarut yang
cepat menyerap ke dalam ekstrak tanpa merusak ekstrak.
Pembuatan variasi konsentrasi (3,125%; 6,25%; 12,5%; 25%; 50%) dengan
melarutkan ekstrak etanol kulit batang pohon petai sebesar 2,5 gram dalam 5 mL
DMSO 5% (konsentrasi 50%). Konsentrasi 50% merupakan konsentrasi paling
besar. Konsentrasi paling besar ini akan menentukan empat konsentrasi di
bawahnya. Empat konsentrasi tersebut ditentukan dengan pengenceran sebesar
setengah dari konsentrasi sebelumnya.
Dalam penelitian yang dilakukan oleh Efendi dan Triana (2013)
menggunakan DMSO 5% sebagai kontrol negatif untuk menguji aktivitas
antimikroba ekstrak etanol sarang semut terhadap Candida albicans, Escherichia
coli, dan Staphylococcus aureus. Hermawan, Hana, dan Wiwiek (2007)
menggunakan DMSO 10% sebagai kontrol negatif dalam penelitian tentang
pengaruh ekstrak daun sirih terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus dan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
53
Escherichia coli dengan metode difusi disk. Selain itu, dalam penelitian yang
dilakukan Nauman dan Muhammad (2003) dalam penelitiannya terkait skrinning
ekstrak metanol air terhadap aktivitas antibakteri dengan kontrol negatif adalah
DMSO 100% dengan bakteri uji Staphylococcus aureus, Bacillus cereus,
Corynebacterium bovis, Pasturella multocida dan Escherichia coli. Hasil yang
diperoleh dari penelitian di atas dengan kontrol negatif adalah DMSO 5%, 10%,
dan 100% adalah DMSO tidak dapat menghambat pertumbuhan bakteri uji.
Oleh sebab itu, peneliti melakukan orientasi menggunakan DMSO dengan
konsentrasi terkecil yaitu 1 %, 2%, dan 5% untuk melarutkan ekstrak etanol kulit
batang pohon petai dan digunakan sebagai kontrol pelarut. Hasil yang diperoleh
adalah DMSO 1% dan 2% belum bisa melarutkan ekstrak etanol kulit batang
pohon petai sebaik mungkin, sedangkan DMSO 5% dapat melarutkan ekstrak
etanol kulit buah petai dengan baik dan tidak menghambat pertumbuhan bakteri.
DMSO dengan konsentrasi 5% sudah dapat melarutkan ekstrak etanol kulit
batang pohon petai maka pada konsentrasi DMSO di atas 5% sudah pasti dapat
melarutkan ekstrak etanol kulit batang pohon petai. Pembuatan variasi
konsentrasi dilakukan untuk mengetahui konsentrasi minimum dari ekstrak
etanol kulit batang pohon petai dalam menghambat pertumbuhan bakteri S.
aureus dan E. coli. Hasil yang diperoleh Kurniawati (2014) menyatakan bahwa
ekstrak etanol kulit petai tidak memiliki aktivitas antibakteri terhadap S. aureus
dan E. coli. Data diameter zona hambat yang diperoleh oleh peneliti disajikan
dalam tabel III.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
54
Tabel III menunjukkan bahwa ekstrak etanol kulit batang pohon petai
hanya mampu menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus sedangkan tidak
mampu menghambat pertumbuhan bakteri E. coli. Ekstrak etanol kulit batang
pohon petai mampu menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus karena adanya
perbedaan struktur dinding sel bakteri Gram positif dan Gram negatif yang
mengakibatkan perbedaan kemampuan penetrasi ekstrak uji ke dalam bakteri
tersebut.
Tabel III. Diameter zona hambat yang dihasilkan seri konsentrasi
ekstrak etanol kulit batang pohon petai, kontrol positif dan kontrol negatif
terhadap S. aureus
Kelompok perlakuan Diameter zona hambat (mm)
(Rerata ± SD)
Konsentrasi ekstrak etanol kulit
batang pohon petai 50% 18.9 ± 2.4
Konsentrasi ekstrak etanol kulit
batang pohon petai 25% 17.1 ± 1.0
Konsentrasi ekstrak etanol kulit
batang pohon petai 12,5% 15.1 ± 1.6
Konsentrasi ekstrak etanol kulit
batang pohon petai 6,25% 11.3 ± 0.6
Konsentrasi ekstrak etanol kulit
batang pohon petai 3,125% 9.1 ± 0.5
Kontrol positif 35.1 ± 0.8
Kontrol negatif 0
NB: diameter zona hambat sudah dikurangi diameter sumuran 6 mm, n = 3
S. aureus (bakteri Gram positif) mempunyai struktur dinding sel dengan
banyak lapisan peptidoglikan dan memiliki sedikit lipid sedangkan bakteri E. coli
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
55
(bakteri Gram negatif) memiliki struktur dinding sel yang lebih kompleks dimana
adanya membran luar yang melindungi peptidoglikan yaitu fosfolipid (lapisan
dalam) dan lipopolisakarida (lapisan luar) (Pratiwi, 2008). Oleh karena dinding
sel bakteri E. coli lebih kompleks mengakibatkan ekstrak etanol sulit menembus
dan merusak integritas dinding sel E. coli.
Kriteria kekuatan aktivitas antibakteri menurut Davis dan Stout (1971)
ditunjukkan pada tabel IV dan hasil penelitian ditunjukkan pada tabel V.
Berdasarkan tabel V, konsentrasi 6,25%, 12,5%, 25% dan 50% merupakan
konsentrasi efektif untuk menghambat bakteri S. aureus karena konsentrasi
tersebut menunjukkan aktivitas antibakteri termasuk kuat sehingga dapat
menghasilkan zona hambat yang besar.
Tabel IV. Kriteria kekuatan aktivitas antibakteri
Menurut Davis dan Stout (1971)
Diameter zona hambat Kekuatan aktivitas antibakteri
≤ 5 mm Lemah
5 – 10 mm Sedang
10 – 20 mm Kuat
> 20 mm Sangat kuat
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
56
Tabel V. Kriteria kekuatan aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit batang
pohon petai terhadap S. aureus
Hasil penelitian
Konsentrasi Diameter zona hambat Kekuatan aktivitas
antibakteri
3, 125% 9,1 ± 0,5 Sedang
6,25% 11,3 ± 0,6 Kuat
12,5% 15,1 ± 1,6 Kuat
25% 17,1 ± 1,0 Kuat
50% 18,9 ± 2,4 Sangat kuat
Kontrol negatif (DMSO) yang digunakan dalam penelitian ini tidak
menunjukkan zona hambat sehingga DMSO tidak mempunyai aktivitas
antibakteri dan aman digunakan dalam uji antibakteri. Kontrol negatif atau
kontrol pelarut bertujuan untuk melihat apakah pelarut yang digunakan untuk
melarutkan ekstrak memiliki aktivitas antibakteri atau tidak. Sedangkan kontrol
positif yang digunakan (amoksisilin) dalam penelitian ini menunjukkan zona
hambat dengan kekuatan daya antibakterinya sangat kuat. Amoksisilin digunakan
dalam penelitian karena memiliki spektrum yang luas dalam golongan penisilin.
Menurut McEvoy (cit., Sulistiyaningsih, 2007), amoksisilin digunakan untuk
mengobati penyakit infeksi yang disebabkan oleh bakteri Gram negatif (E. coli)
dan Gram positif (S. aureus). Menurut Istiantoro dan Ganiswarna (cit.,
Sulistiyaningsih, 2007), mekanisme kerja amoksisilin menghambat pembentukan
peptidoglikan yang diperlukan untuk sintesis dinding sel bakteri. Selain
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
57
digunakan sebagai kontrol positif, amoksisilin juga digunakan sebagai kontrol
metode. Kontrol metode (amoksisilin) bertujuan untuk melihat aktivitas
antibakteri yang digunakan di pasaran sebagai terapi bagi penyakit yang
disebabkan karena bakteri dan untuk melihat apakah metode yang dilakukan
peneliti sudah benar atau belum.
Data diameter zona hambat ekstrak etanol kulit batang pohon petai
terhadap S. aureus yang diperoleh dari masing-masing variasi konsentrasi, kontrol
negatif, kontrol positif dianalisis secara statistik menggunakan Microsoft Excel
dengan rumus yang sesuai. Data tersebut diuji apakah terdistribusi normal atau
tidak menggunakan Shapiro-Wilk dan homogenitas data dengan uji Levene. Dari
kedua uji tersebut menunjukkan bahwa distribusi data diameter zona hambat tidak
normal dan data diameter zona hambat ekstrak etanol kulit batang pohon petai
tidak homogen. Oleh karena itu, analisis data dilanjutkan menggunakan analisis
non parametrik dengan uji Kruskal-Wallis bertujuan untuk melihat apakah antara
seri konsentrasi dengan kontrol positif dan kontrol negatif berbeda tidak
bermakna atau tidak. Kemudian dilanjutkan dengan uji post hoc menggunakan
Mann Withney-Wilcoxon Test bertujuan untuk melihat perbedaan hasil diameter
zona jernih antara seri konsentrasi, kontrol positif, dan kontrol negatif. Mann
Withney-Wilcoxon Test ini menunjukkan bahwa data yang diperoleh disajikan
dalam tabel VI.
Seri konsentrasi ekstrak etanol pada data tabel VI menunjukkan berbeda
bermakna secara statistik terhadap kontrol positif maupun kontrol negatif. Pada
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
58
kontrol negatif, seluruh seri konsentrasi mempunyai perbedaaan yang bermakna
terkait aktivitas hambat karena kontrol negatif tidak menghasilkan aktivitas
hambat.
Tabel VI. Hasil Mann Withney-Wilcoxon Test diameter zona hambat seri
konsentrasi ekstrak etanol, kontrol negatif, kontrol positif terhadap
Staphylococcus aureus
Kelompok
perlakuan
Kontrol
+
Kontrol
–
K.
50%
K.
25%
K.
12,5%
K.
6,25%
K.
3,125%
Kontrol + BTB
Kontrol – BB BTB
Konsentrasi
50% BB BB BTB
Konsentrasi
25% BB BB BTB BTB
Konsentrasi
12,5% BB BB BB BB BTB
Konsentrasi
6,25% BB BB BB BB BB BTB
Konsentrasi
3,125% BB BB BB BB BB BB BTB
Keterangan:
*BB = berbeda bermakna, BTB = berbeda tidak bermakna
*Rerata ± SD diameter zona hambat ekstrak etanol kulit batang pohon petai setiap
kelompok perlakuan : kontrol + (35,1 ± 0,8); kontrol – (0,0 ± 0,0); konsentrasi 50% (18,9
± 2,4); konsentrasi 25% (17,1 ± 1,0); konsentrasi 12,5% (15,1 ± 1,6), konsentrasi 6,25%
(11,3 ± 0,6); dan konsentrasi 3,125% (9,1 ± 0,5).
*K : Konsentrasi ekstrak etanol kulit batang pohon petai
Apabila membandingkan antar seri konsentrasi, meningkatnya daya hambat
sebanding dengan meningkatnya seri konsentrasi. Tetapi pada seri konsentrasi 25%
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
59
dan 50%, data diameter zona hambat menunjukkan berbeda tidak bermakna atau
bisa dikatakan memiliki daya hambat yang sama antar kedua seri konsentrasi
tersebut. Selain itu, hasil ini juga menunjukkan bahwa pada konsentrasi yang lebih
besar (50%) tidak selalu daya hambatnya makin besar. Hal ini disebabkan karena
etanol yang digunakan untuk menyari senyawa kimia yang terkandung dalam kulit
batang pohon petai adalah etanol 70% dimana komposisi etanol 70% terdiri dari
etanol 70% dan air 30%. Menurut Djide (2004) mengatakan bahwa etanol dapat
menghambat pertumbuhan bakteri pada konsentrasi 50 - 70% dan membunuh
pertumbuhan bakteri pada konsentrasi 70%. Tersedianya molekul air dalam etanol
70% akan mempercepat proses penguapan dan proses penetrasi ke jaringan. Hal ini
didukung oleh fakta yang menyatakan bahwa alkohol absolut yang tidak
mengandung air, memiliki aktivitas antibakteri jauh lebih rendah dibandingkan
dengan alkohol yang mengandung air. Menurut Sulistiyaningsih (2010) mekanisme
kerja alkohol dengan mendenaturasi protein. Hal ini disebabkan karena pada proses
denaturasi protein memerlukan air pada konsentrasi tertentu. Oleh karena itu, variasi
konsentrasi ekstrak etanol dapat menghambat pertumbuhan S. aureus dan daya
hambatnya tidak lebih baik dibandingkan dengan kontrol positif. Berdasarkan hasil
yang diperoleh menyatakan bahwa ekstrak etanol kulit batang pohon petai
mempunyai potensi antibakteri terhadap pertumbuhan bakteri S. aureus. Kemudian
dilanjutkan dengan mengukur kadar hambat minimum (KHM) dan kadar bunuh
minimum (KBM) dari ekstrak etanol kulit batang pohon petai.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
60
H. Pengukuran Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh Minimum
(KBM) Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai Terhadap S. aureus dengan
Metode Dilusi Cair
Seri konsentrasi dalam pengukuran KHM dan KBM diperoleh dari
konsentrasi terkecil ekstrak etanol kulit batang pohon petai yang mampu
menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus dengan metode difusi sumuran yang
mempunyai zona hambat yang lebih besar dari kontrol negatif (DMSO) yaitu
3,125%. Prinsip metode dilusi yaitu pengenceran senyawa uji antibakteri sehingga
diperoleh beberapa konsentrasi. Seri konsentrasi yang digunakan 0,782%; 1,563%;
3,125%; 6,25%; 12,5%; 15,625%; 18,750%; 21,875%; 25% dan 50%. Uji dilusi
cair ini hanya dilakukan terhadap bakteri S. aureus karena bakteri E.coli tidak
memiliki zona hambat pada uji difusi sumuran. Senyawa uji memiliki daya
antibakteri apabila nilai kekeruhan yang dimiliki media uji sama atau lebih kecil
dibandingkan dengan kontrol pertumbuhan. Uji dilusi cair dilakukan tiga kali
replikasi.
Penentuan KHM dan KBM dilakukan secara kuantitatif dengan
mengukur Optical Density (OD) menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Prinsip
spektrofotometri UV-Vis berdasarkan hukum Lambert-Beer, yaitu suatu cahaya
monokromatis dilewatkan melalui suatu media, maka bertambah-turunnya
intensitas cahaya yang ditransmisikan sebanding dengan tebal dan kepekaan media
yang digunakan (Yanlinastuti, Dian, Fatimah, dan Yusuf, 2011).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
61
Parameter Optical Density (OD) yang digunakan adalah absorbansi. Seri
konsentrasi ditambahkan ke dalam media MHB lalu ditambahkan suspensi bakteri
ke dalam media uji yang telah terdapat ekstrak etanol. Tabung yang berisi media
uji (MHB, ekstrak etanol dan suspensi bakteri) divortex lalu diukur Optical
Density (OD) menggunakan spektrofotometer (λ 480 nm). Tabung yang berisi
media, ekstrak etanol kulit batang pohon petai tersebut diinkubasi selama 18-24
jam dengan suhu 370C dalam inkubator. Setelah 18-24 jam inkubasi, tabung diukur
Optical Density (OD) menggunakan spektrofotometer (λ 480 nm). Berdasarkan
penelitian yang dilakukan oleh Dewi (2010), panjang gelombang 480 nm
menunjukkan bahwa nilai absorbansi terhadap seri konsentrasi kultur bakteri
dengan ketelitian tertinggi dibandingkan dengan panjang gelombang lainnya.
Pengukuran Optical Density (OD) dilakukan sebelum dan setelah inkubasi dimana
selisih dari kedua nilai tersebut digunakan untuk menentukan pertumbuhan bakteri.
Jumlah koloni bakteri dapat diukur dengan kekeruhan (turbiditas) kultur. Semakin
keruh media uji maka makin banyak jumlah bakteri yang tumbuh. Cahaya yang
dipancarkan pada spektrofotometer akan mengenai sel bakteri sehingga sebagian
cahaya akan diserap dan sebagian diteruskan. Banyaknya cahaya yang diabsorbsi
sebanding dengan banyaknya sel bakteri pada batas-batas tertentu (Purwoko, 2007;
Dewi, 2010). Tabel VII adalah data hasil uji kekeruhan dengan menggunakan
spektrofotometer UV-Vis. Data yang ditampilkan pada tabel VII merupakan data
yang paling baik dari ketiga data yang didapatkan.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
62
Tabel VII menunjukkan bahwa konsentrasi 21,875%, 25% dan 50%
menghasilkan nilai ∆OD sebesar nol. Nilai ΔOD nol ini menyatakan bahwa tidak
ada perubahan nilai absorbansi sebelum dan setelah inkubasi. Nilai ΔOD ≥ 0
menunjukkan masih terdapat pertumbuhan bakteri dengan meningkatnya nilai
absorbansi. Adanya pertumbuhan bakteri berarti menunjukkan konsentrasi ekstrak
etanol tersebut belum mampu menghambat pertumbuhan bakteri. Konsentrasi
21,875%, 25% dan 50% dilanjutkan uji penegasan apakah ketiga konsentrasi
tersebut termasuk KHM atau KBM.
Tabel VII. Hasil pengukuran absorbansi pada penentuan KHM dan KBM
ekstrak etanol kulit batang pohon petai terhadap bakteri S. aureus
No. Konsentrasi
(%)
Optical Density (OD) ΔOD
(Abs) Sebelum inkubasi Setelah inkubasi
1. 0,782 0,2406 1,6082 1,3676
2. 1,563 0,4312 1,7579 1,3267
3. 3,125 1,5535 2,4662 0,9127
4. 6,25 2,5331 3,1652 0,6321
5. 12,5 3,6123 3,9133 0,301
6. 15,625 3,9133 4,0163 0,103
7. 18,750 3,9133 3,9990 0,0857
8. 21,875 3,9999 3,9999 0
9. 25 3,9133 3,9133 0
10. 50 3,9133 3,9133 0
n = 3
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
63
Keterangan:
A: konsentrasi ekstrak etanol kulit batang pohon petai 21,875 %;
B: konsentrasi ekstrak etanol kulit batang pohon petai 25 %;
C: konsentrasi ekstrak etanol kulit batang pohon petai 50 % Gambar 14. Hasil penegasan KHM dan KBM
Hasil dari uji penegasan pada media MHA (Gambar 14) yang distreak
dengan konsentrasi 21,875%, 25%, dan 50% menunjukkan bahwa ketiga
konsentrasi tersebut tumbuh bakteri sehingga dapat disimpulkan bahwa ketiga
bakteri tersebut hanya mampu menghambat pertumbuhan bakteri. Jadi, konsentrasi
terkecil ekstrak etanol kulit batang pohon petai yang dapat menghambat
pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus (KHM) adalah konsentrasi 21,875%
dan pada konsentrasi ini, Kadar Bunuh Minimal (KBM) belum diperoleh.
a
b
c
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
64
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
1. Berdasarkan uji tabung yang dilakukan, ekstrak etanol kulit batang
pohon petai mengandung flavonoid, alkaloid, fenolik, dan terpenoid
2. Ekstrak etanol kulit batang pohon petai mempunyai aktivitas
antibakteri terhadap S. aureus, tetapi tidak mempunyai aktivitas
antibakteri terhadap E. coli.
3. Kadar Hambat Minimal (KHM) ekstrak etanol kulit batang pohon
petai terhadap bakteri S. aureus adalah pada konsentrasi 21,875%.
Pada konsentrasi 21,875%, Kadar Bunuh Minimal (KBM) ekstrak
etanol kulit batang pohon petai terhadap S. aureus belum didapatkan.
B. Saran
Perlu dilakukan penelitian tentang uji penegasan senyawa kimia
yang terdapat dalam ekstrak etanol kulit batang pohon petai
menggunakan KLT preparative yang dilanjutkan dengan uji
bioautografi insitu (bioautografi kontak).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
65
Daftar Pustaka
Adi, L. T., 2008, Tanaman Obat dan Jus Untuk Mengatasi Penyakit Jantung,
Hipertensi, Kolesterol, PT Agromedia Pustaka, Jakarta, hal 141.
Agnes, Lois, Aning, dan Nani, 2013, Ekstraksi Kulit Petai Sebagai Sumber
Antioksidan Alami Dengan Metode Domestic Microwave Maceration,
Jurnal Teknik Kimia Indonesia, Volume 11 (5), 237 – 242.
Alfath, C.R., Vera, Y., dan Sunnati, 2013, Antibacterial Effect Of Granati Fructus
Cortex Extract On Streptococcus Mutans In Vitro, Journal of Dentistry
Indonesia, Vol. 20, No. 1,5 – 8.
Ardiansyah, 2007 in Marliana dan Chairul, 2011, Uji Fitokimia dan Aktivitas
Antibakteri Ekstrak Etanol, Fraksi n-Heksana, Etil Asetat dan Metanol
Dari Buah Labu Air (Lagenari siceraria (Molina) Standl), Jurnal Kimia
Mulawarman,Volume 8 Nomor 2, Samarinda, hal. 28.
Arisandi, 1990 in Anwar, L., 2014, Uji Pendahuluan Fitokimia, Karya Ilmiah,
Indramayu, hal. 3.
Azizi, C. Y. M., Salman, Nik, dan Mohd, 2006, Extraction and Identification of
Compounds From Parkia Speciosa Seeds by Supercritical Carbon Dioxide,
Journal of Chemical and Natural Resources Engineering, University
Technology Malaysia, hal. 153 – 163.
Cappucino dan Sherman, 1983 in Rostinawati, T., 2008, Skrining dan Identifikasi
Bakteri Penghasil Enzim Kitinase dari Air Laut di Perairan Pantai Pondok
Bali, Penelitian Mandiri, Fakultas Farmasi, Universitas Padjadjaran,
Jatinangor, hal. 30.
Davis and Stout, 1971, Disc Plate Methode of Microbiological Antibiotic Assay,
Journal of Microbiology, Vaol. 22, No. 4, 666 – 670.
Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1986, Sediaan Galenik, Edisi 1,
Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, hal. 4-6.
Depkes RI, 1995, Farmakope Indonesia, Edisi IV, Departemen Kesehatan
Republik Indonesia, Jakarta, hal. 7, 1036.
Depkes RI,. 1995, Materi Medika Indonesia, Jilid VI, Departemen Kesehatan
Republik Indonesia, Jakarta, hal. xvii.
Dewi, F.K., 2010, Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Buah Mengkudu (Morinda
citrifolia, L.) Terhadap Bakteri Pembusuk Daging Segar, Skripsi, 3-8, 20,
Universitas Sebelas Maret, Yogyakarta.
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 1996, Inventaris Tanaman
Obat Indonesia, Jilid 1, Departemen Kesehatan Republik Indonesia,
Jakarta, hal. 357.
Djide, N., 2004, Mikrobiologi Farmasi, Laboratorium Mikrobiologi Farmasi
Fakultas MIPA UNHAS Makasar, hal. 77, 84, 86, 110-119, 153-157, 202-
203.
Dwidjoseputro, D., 1994, Dasar-dasar mikrobiologi, Djambatan, Jakarta.
Edeoga, H.O., Okwu, and Mbaebre, B., 2005, Phytochemical Constituent of Some
Nigerian Medicinal Plants, Afr Journal of Biotechnology, 4:685-688.
Efendi, Y. N. dan Triana, H., 2013, Potensi Antimikroba Ekstrak Etanol Sarang
Semut (Myrmecodia tuberosa Jack.) Terhadap Candida albicans,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
66
Escherichia coli dan Staphylococcus aureus, Traditional Medicine Journal,
Volume 18 (1), Universitas Gajah Mada, Yogyakarta, hal. 53 – 58.
Fessenden, R. J. dan Joan S. F., 1986, Organic Chemistry, Third Edition,
diterjemahkan oleh Aloysius Hadyana Pudjaatmaka, hal. 259-260, Penerbit
Erlangga, Jakarta.
Harborne, J., 1996, Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis
Tumbuhan, Cetakan kedua, Penerjemah: Padmawinata, K. dan I. Soediro.,
ITB, Bandung, hal. 23 – 24.
Hargono, D., 1986. Sediaan Galenik, Depkes RI., Jakarta, hal. 1 -7.
Hermawan, A., Hana, E., dan Wiwiek, T., 2007, Pengaruh Ekstrak Daun Sirih
(Piper betle L.) Terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus dan
Escherichia coli dengan Metode Difusi Disk, Artikel Ilmiah, Fakultas
Kedokteran Hewan Universitas Airlangga, Surabaya, hal. 3 – 6.
Istiantoro, YH., dan Vincent H.S. Ganiswarna, 2002 in Sulistiyaningsih, Rr.,
2007, Pengujian Potensi Sediaan Injeksi Kering Amoksisilin Dalam Aqua
Pro Injeksi Pada Variasi Suhu Penyimpanan dan Konsentrasi, Laporan
Penelitian, Universitas Padjadjaran, Bandung.
Jawetz, Melnick, Adelberg, Brooks, Butel, and Ornston, 2005, Mikrobiologi
Kedokteran. Edisi ke-20, EGC, Jakarta, hal. 211,213,215.
Jones, W. P. and Kinghorn, A.D., 2006. Extraction of Plant Secondary
Metabolites, In: Sarker, S. D., Latif, Z. and Gray, A. I., eds. Natural
Products Isolation. 2nd Ed. New Jersey: Humana Press. P.341-342.
Kamisah, Y., Faizah Othman, Hj Mohd Saad Qodriyah, and Kamsiah Jaarin,
2013, Review Article : Parkia speciosa Hassk.: A Potential Phytomedicine,
hal. 1-10.
Kismiyati, Sri, Wahid, dan Rahayu, 2009, Isolasi dan Identifikasi Bakteri Gram
Negatif Pada Luka Ikan Maskoki (Carassius Auratus) Akibat Infestasi
Ektoparasit Argulus Sp., Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan, Volume I,
No. 2, Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga, Surabaya,
hal. 132.
Kumalasari, E. dan Sulistyani, N., 2011, Aktivitas Antifungi Ekstrak Etanol
Batang Binahong (Anredera cordifolia (Tenore) Steen.) Terhadap Candida
albicans serta Skrining Fitokimia, Jurnal Ilmiah Kefarmasian, 1 (2): 51 –
62.
Kurniawati, D. A., 2014, Aktivitas Antibakteri Ekstrak Kulit Petai (Parkia
speciosa Hassk.) Terhadap Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus
aureus, Skripsi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut
Pertanian Bogor, hal. 6-35.
Kusmayanti, dan Agustini, N. W. R., 2007, Uji Aktivitas Senyawa Antibakteri dari
Mikroalga (Porphyridium cuentum), Biodiversitas, Vol 8 (1), hal. 48-53.
Lenny, S., 2006, Senyawa Flavonoida, Fenil Propanoida, Dan Alkaloida, karya
ilmiah, Universitas Sumatera Utara, Medan, hal 14-21.
Mahardika, C., 2013, Fraksionasi Ekstrak Kulit Petai Berpotensi Antioksidan,
Skripsi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut
Pertanian Bogor, hal. 5 – 28.
Mardiastuti H. W., Anis, K., Ariyani, K., Ikaningsih, dan Retno, K., 2007,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
67
Emerging Resistance Pathogen : Situasi Terkini di Asia, Eropa, Amerika
Serikat, Timur Tengah dan Indonesia, Majalah Kedokteran Indonesia
Volume 57, Departemen Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas
Indonesia, Jakarta, hal. 76.
Markham, K.R., 1988, Cara Mengidentifikasi Flavonoid, Terjemahan
Padmawinata, ITB Press, Bandung, hal. 23 - 24, 42 – 43.
Marlinda, M., Meiske, S., dan Audy, D.W., 2012, Analisis Senyawa Metabolit
Sekunder dan Uji Toksisitas Ekstrak Etanol Biji Buah Alpukat (Persea
americana Mill), Jurnal MIPA UNSRAT, Manado, hal. 27.
McEvoy, 2002 in Sulistiyaningsih, Rr., 2007, Pengujian Potensi Sediaan Injeksi
Kering Amoksisilin Dalam Aqua Pro Injeksi Pada Variasi Suhu
Penyimpanan dan Konsentrasi, Laporan Penelitian, Universitas
Padjadjaran, Bandung.
MC Murry, 2004; Marliana dan Chairul, 2011, Uji Fitokimia dan Aktivitas
Antibakteri Ekstrak Etanol, Fraksi n-Heksana, Etil Asetat dan Metanol
Dari Buah Labu Air (Lagenari siceraria (Molina) Standl), Jurnal Kimia
Mulawarman, Volume 8 Nomor 2, Samarinda, hal. 28 - 29.
Miroslav, V. 1971. Detection and Identification of Organic Compound, New
York: Planum Publishing Corporation and SNTC Publishers of Technical
Literatur.
Nitisapto dan Siradz, 2005 in Mahatriny, N. N., Payani, Oka dan Astuti, 2014,
Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Pepaya (Carica papaya L.) yang
diperoleh daerah Ubud , Kabupaten Gianyar, Bali, Skripsi, Universitas
Udayana Bali, hal. 9.
Nuria, M.C., Arvin, F., Sumantri, 2009, Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol
Daun Jarak Pagar (Jatropha curcas L.) Terhadap Bakteri Staphylococcus
aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922, dan Salmonella typhi
ATCC 1408, Jurnal Ilmu-Ilmu Pertanian, Universitas Gajah
Mada,Yogyakarta, hal. 7 – 10.
Padmasari, P.D., Astuti, K.W., dan Warditiani, N.K., 2013, Skrining Fitokimia
Ekstrak Etanol 70% Rimpang Bangle (Zingiber purpureum Roxb.), Jurnal
Farmasi Udayana, Bali, hal. 2 – 4.
Plantamor, 2008, Klasifikasi Botani Petai, http://www.plantamor.com/index.
php?plant=955, diakses tanggal 4 Mei 2014
Pramono, 2005 in Ma’mun, dkk., 2006, Teknik Pembuatan Simplisia dan Ekstrak
Purwoceng,
http://herbalnet.healthrepository.org/bitstream/123456789/2578/1/5d.pdf,
diakses tanggal 20 November 2014.
Pratiwi, S.T., 2008, Mikrobiologi Farmasi, Erlangga, Jakarta, hal. 136 - 147.
Purwohadisantoso, K., Elok, Z., dan Ella, S., 2009, Isolasi Bakteri Asam Laktat
dari Sayur Kubis yang Memiliki Kemampuan Penghambatan Bakteri
Patogen (Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, Escherichia coli,
dan Salmonella thypimurium), Jurnal Teknologi Pertanian, Volume 10,
Nomor 1, 19 – 27, Universitas Brawijaya, Malang.
Purwoko, 2007 in Dewi, F.K., 2010, Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Buah
Mengkudu (Morinda citrifolia, L.) Terhadap Bakteri Pembusuk Daging
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
68
Segar, Skripsi, 3 – 8, Universitas Sebelas Maret, Yogyakarta.
Radji, M., 2009, buku ajar mikrobiologi panduan mahasiswa farmasi dan
kedokteran, EGC, Jakarta, hal. 125, 127, 179-181, dan 184.
Riskesdas, 2007, Riset Kesehatan Dasar, Badan Penelitian dan Pengembangan
Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, hal. 10.
Robinson, T., 1991, Kandungan Organic Tumbuhan Tingkat Tinggi, ITB,
bandung, p.132.
Robinson, T., 1995, Kandungan Senyawa Organik Tumbuhan Tinggi,
diterjemahkan oleh Prof. Dr. Kosasih Padmawinata, ITB, Bandung, hal. 45
– 46.
Rostinawati, T., 2008, Skrining dan Identifikasi Bakteri Penghasil Enzim Kitinase
dari Air Laut di Perairan Pantai Pondok Bali, Penelitian Mandiri, Fakultas
Farmasi, Universitas Padjadjaran, Jatinangor, hal. 30.
Sabir, A. 2008. In Vitro Antibacterial Activity Of Flavonoids Trigona Sp Propolis
Against Streptococcus Mutans, http://www.journal.unair.ac.id/filerPDF/
DENTJ-38-3-08.pdf, diakses tanggal 23 September 2014.
Sakunpak, A. dan Panichayupakaranant, 2012, Antibacterial Activity of Thai
Edible Plants Against Gastrointestinal Pathogenic Bacteria and Isolation of
a New Broad Spectrum Antibacterial Polyisoprenylated Benzophenone,
Chamuangone, Food Chemistry, 130:826 – 831.
Salni, Hanifa, M., dan Ratna, W. M., 2011, Isolasi Senyawa Antibakteri Dari
Daun Jengkol (Pithecolobium lobatum Benth) dan Penentuan Nilai KHM-
nya, Jurnal Penelitian Sains, Vol. 14, 40, Universitas Sriwijaya, Sumatera
Selatan.
Sardjono, T.W., 2009, Strategi Penanggulangan dan Pencegahan Penyakit
Parasitik di Masyarakat, Majalah Kedokteran Indonesia, Volume 59,
Malang.
Sjahid, L.R. 2008. Isolasi dan Indentifikasi Flavonoid Dari Daun Dewandaru
(Eugenia uniflora L.), Skripsi, Universitas Muhammadiyah Surakarta,
Surakarta.
Soegihardjo, C. J., 2013, Farmakognosi, PT Citra Aji Parama, Yogyakarta, hal
10-11,45,50-57.
Subramani, 2002 in Rosidah dan Afizia, 2012, Potensi Ekstrak Daun Jambu Biji
Sebagai Antibakterial Untuk Menanggulangi Serangan Bakteri Aeromonas
Hydrophila Pada Ikan Gurame (Osphronemus oouramy lacepede), Jurnal
Kuatika, Universitas Padjadjaran, Bandung.
Sulistiyaningsih, Rr., 2010, Uji kepekaan beberapa sediaan antiseptic terhadap
bakteri Staphylococcus aureus dan Staphylococcus aureus resisten
Metisilin (MRSA), http://pustaka.unpad.ac.id/wp-
content/uploads/2010/11/pdf, diakses tanggal 17 Februari 2015.
Suparjo, 2008 in Marliana dan Chairul, 2011, Uji Fitokimia dan Aktivitas
Antibakteri Ekstrak Etanol, Fraksi n-Heksana, Etil Asetat dan Metanol
Dari Buah Labu Air (Lagenari siceraria (Molina) Standl), Jurnal Kimia
Mulawarman, Volume 8 Nomor 2, Samarinda, hal. 65.
Yanlinastuti, Anggraini, D., Fatimah, S., dan Yusuf, N., 2011, Penentuan Kadar
Zirkonium Dalam Paduan U-ZR Menggunakan Spektrofotometer UV-Vis
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
69
dengan Pengompleks Arsenazo III, Seminar Nasional, Sekolah Tinggi
Teknologi Nuklir, Yogyakarta, hal. 567 – 568.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
70
LAMPIRAN
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
71
Lampiran 1. Surat Keterangan Keaslian Tanaman Petai (Parkia speciosa Hassk)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
72
Lampiran 2. Surat Izin Melakukan Penelitian di Laboratorium Balai Kesehatan
Yogyakarta
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
73
Lampiran 3. Sertifikat hasil uji Staphylococcus aureus ATCC 25923
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
74
Lampiran 4. Sertifikat hasil uji Escherichia coli ATCC 25922
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
75
Lampiran 5. Pereaksi-pereaksi yang digunakan untuk uji fitokimia
FeCl3 10% dan
FeCl3 1%
Mayer dan
Dragendorf
KOH LP
H2SO4 Pekat
NaOH LP
HCL 2N
Larutan uji
Mayer dan
Dragendorf
FeCl3 10% dan
FeCl3 1%
NaOH LP
KOH LP
Kloroform
H2SO4 Pekat
Pereaksi Mayer dan
Dragendorff
FeCl3 10% dan
FeCl3 1%
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
76
Lampiran 6. Hasil Uji Identifikasi S. aureus
NB: a: glukosa, b: laktosa, c: manitol, d: maltosa, e: sakarosa.
a b c d e
Ada endapan hitam pada
media geolitik
Ada kabut putih pada media
Enrich
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
77
NA miring SIM (Sulfur Indol Motil)
SC (Simon Citrate)
f g
h
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
78
Hasil identifikasi bakteri S. aureus dengan uji gula-gula
Label Gula-gula Sebelum inkubasi
24 jam (Warna)
Setelah inkubasi 24
jam (Warna) Keterangan
A Glukosa Kuning
Bagian atas
berwarna kuning,
dan bawahnya
berwarna jingga Positif karena
terjadi
perubahan
warna
B Laktosa Ungu Kuning
C Manitol Hijau Jingga
D Maltosa Merah Kuning
E Sakarosa Biru Kuning
F Na Bening
Kekuningan Sedikit hitam
Negatif karena
perubahan
warna yang
terjadi tidak
sesuai sehingga
dilakukan uji
DNAse
G SIM Bening
Kekuningan
Ada gelembung
atau motil
H SC Hijau Sedikit hitam
Hasil uji DNAse
Uji DNAse sebagai proses aglutinase,
Hasil positif karena terjadi gumpalan.
Hasil Pengecatan Gram
Positif
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
79
Lampiran 7. Uji Identifikasi Bakteri Escherichia coli
NB: a: glukosa, b: laktosa, c: manitol, d: maltosa, e: sakarosa.
Ada gelembung gas dari tabung
Durham yang ada di dalam
tabung reaksi media BGLD
a b c d e
Ada warna hijau kebiruan
menunjukkan tersangka adalah
Escherichia coli
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
80
SIM (Sulfur Indol Motil) SC (Simon Citrate)
Hasil identifikasi bakteri E. aureus dengan uji gula-gula
Label Gula-gula Sebelum inkubasi
24 jam (Warna)
Setelah inkubasi 24
jam (Warna) Keterangan
A Glukosa Kuning
Bagian atas
berwarna kuning,
dan bawahnya
berwarna jingga Positif karena
terjadi
perubahan
warna
B Laktosa Ungu Kuning
C Manitol Hijau Jingga
D Maltosa Merah Kuning
E Sakarosa Biru Kuning
F SC Hijau Kuning kecoklatan
Negatif karena
tidak berubah
warna menjadi
biru
G SIM Bening
Kekuningan
Permukaan
berbentuk cincin
jingga (indol), agak
hitam (sulfur) dan
terbentuk
gelembung yang
melebar (motil)
f g
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
81
Hasil Pengecatan Gram
negatif
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
82
Lampiran 8. Uji aktivitas antimikroba difusi sumuran terhadap S. aureus
a b c
d e f
g h i
j
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
83
Keterangan :
Label Plate
A Lima seri konsentrasi replikasi I
B Kontrol pertumbuhan replikasi I
C Kontrol positif dan negatif replikasi I
D Lima seri konsentrasi replikasi II
E Kontrol pertumbuhan replikasi II
F Kontrol positif dan negatif replikasi II
G Lima seri konsentrasi replikasi III
H Kontrol pertumbuhan replikasi III
I Kontrol positif dan negatif replikasi III
J Kontrol kontaminasi media
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
84
Lampiran 9. Uji aktivitas antimikroba difusi sumuran terhadap E. coli
a b c
d e f
g h i
j
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
85
Keterangan :
Label Plate
A Lima seri konsentrasi replikasi I
B Kontrol positif dan negatif I
C Kontrol pertumbuhan replikasi I
D Lima seri konsentrasi replikasi II
E Kontrol positif dan negatif II
F Kontrol pertumbuhan replikasi II
G Lima seri konsentrasi replikasi III
H Kontrol positif dan negatif III
I Kontrol pertumbuhan replikasi III
J Kontrol kontaminasi media
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
86
Lampiran 10. Hasil Pengukuran diameter zona hambat ekstrak etanol kulit batang
pohon petai
1. Terhadap bakteri S. aureus
Konsentrasi
(%) X1 X2 X3 X4 X5 X5 X6
Diameter I
(mm) 8,6 10,6 14,3 17,3 19,3 36 0
Diameter II
(mm) 9 12 17 18 21 34.3 0
Diameter III
(mm) 9,6 11,3 14 16 16,3 35 0
SD ± Rata-
Rata
9,1 ±
0.5
11,3 ±
0,6
15,1 ±
1,6
17,1 ±
1,0
18,8 ±
2,4
35.1 ±
0.8 0
2. Terhadap bakteri E. coli
Konsentrasi
(%) X1 X2 X3 X4 X5 X6 X7
Diameter I
(mm) 0 0 0 0 0 34 0
Diameter II
(mm) 0 0 0 0 0 34.3 0
Diameter III
(mm) 0 0 0 0 0 35 0
SD ± Rata-
Rata 0 0 0 0 0
34.4 ±
0.5 0
NB : X1: konsentrasi 3,125%; X2: konsentrasi 6,25%; X3: konsentrasi 12,5%;
X4: konsentrasi 25%; X5: konsentrasi 50%; X6: kontrol positif; X7: kontrol
negatif
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
87
Lampiran 11. Hasil perhitungan statistik zona hambat ekstrak etanol kulit Batang
pohon petai terhadap S. aureus
Uji Distribusi Normal dengan Shapiro-Wilk
1. H0 : data terdistribusi normal
H1 : data tidak terdistribusi normal
2. Taraf kepercayaan, α : 0,05
3. Wilayah Kritis
=
Keterangan :
D = Berdasarkan rumus di bawah
= Koefisient test Shapiro Wilk
X n-i+1 = Angka ke n – i + 1 pada data
X i = Angka ke i pada data
D =
Keterangan :
X I = Angka ke I pada data
= Rata-rata data
T (α ; n) = T (0,05 ; 3) = 0,05 ; 0,767
Ho diterima jika T hitung < Ttabel maka distribusi data normal (DN)
Ho ditolak jika T hitung > Ttabel maka distribusi data tidak normal (DTN)
1 Kontrol positif
Xi - rata (Xi - rata)^2
1 36 34,333 -0,778 0,605284
2 34,333 35 -0,111 0,012321
3 35 36 0,889 0,790321
Jumlah 105,333
D 1,407926
Rata-rata 35,111
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
88
Hitung Nilai T
I Ai
X n – I +
1 - Xi
ai (X n – I
+ 1 – Xi)
[∑ai (X n – I +
1 – Xi)]^2 1/D * [∑ai (X n – I + 1 – Xi)]^2
1 0,7071 1,667 1,179
Jumlah
1,179 1,389 0,987 DTN
2 Kontrol negatif
Xi - rata (Xi - rata)^2
1 0 0 0 0
2 0 0 0 0
3 0 0 0 0
Jumlah 0
D 0
Rata-rata 0
Hitung Nilai T
I Ai
X n – I +
1 - Xi
ai (X n – I
+ 1 – Xi)
[∑ai (X n – I +
1 – Xi)]^2 1/D * [∑ai (X n – I + 1 – Xi)]^2
1 0,7071
0 - 0 =
0 0
Jumlah 0 0 #DIV/0!
#DIV
/0!
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
89
3 Kadar 50%
Xi - rata (Xi - rata)^2
1 19,333 16,333 -2,556 6,531
2 21 19,333 0,444 0,197
3 16,333 21 2,111 4,458
Jumlah 56,666 D 11,187
Rata-
rata 18,889
Hitung Nilai T
I Ai
X n – I +
1 - Xi
ai (X n – I
+ 1 – Xi)
[∑ai (X n – I +
1 – Xi)]^2 1/D * [∑ai (X n – I + 1 – Xi)]^2
1 0,7071 4,667 3,300
Jumlah 3,300 10,890 0,974 DTN
4 Kadar 25%
Xi - rata (Xi - rata)^2
1 17,333 16 -1,111 1,234
2 18 17,333 0,222 0,049
3 16 18 0,889 0,790
Jumlah 51,333 D 2,074
Rata-
rata 17,111
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
90
Hitung Nilai T
I Ai
X n – I +
1 - Xi
ai (X n – I
+ 1 – Xi)
[∑ai (X n – I +
1 – Xi)]^2 1/D * [∑ai (X n – I + 1 – Xi)]^2
1 0,7071 2 1,414
Jumlah 1,414 2,000 0,964 DTN
5 Kadar 12,5%
Xi - rata (Xi - rata)^2
1 14,333 14 -1,111 1,234
2 17 14,333 -0,778 0,605
3 14 17 1,889 3,568
Jumlah 45,333 D 5,408
Rata-
rata 15,111
Hitung Nilai T
i Ai
X n – I +
1 - Xi
ai (X n – I
+ 1 – Xi)
[∑ai (X n – I +
1 – Xi)]^2 1/D * [∑ai (X n – I + 1 – Xi)]^2
1 0,7071 3 2,121
Jumlah 2,121 4,500 0,832 DTN
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
91
6 Kadar 6,25%
Xi - rata (Xi - rata)^2
1 10,667 10,667 -0,666 0,444
2 12 11,333 0,000 0,000
3 11,333 12 0,667 0,444
Jumlah 34 D 0,888
Rata-
rata 11,333
Hitung Nilai T
i Ai
X n – I +
1 - Xi
ai (X n – I
+ 1 – Xi)
[∑ai (X n – I +
1 – Xi)]^2 1/D * [∑ai (X n – I + 1 – Xi)]^2
1 0,7071 1,333 0,943
Jumlah 0,943 0,888 1,000 DTN
7 Kadar 3,125%
Xi - rata (Xi - rata)^2
1 8,667 8,667 -0,444 0,197
2 9 9 -0,111 0,012
3 9,667 9,667 0,556 0,309
Jumlah 27,334 D 0,519
Rata-
rata 9,111
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
92
Hitung Nilai T
i Ai
X n – I +
1 - Xi
ai (X n – I
+ 1 – Xi)
[∑ai (X n – I +
1 – Xi)]^2 1/D * [∑ai (X n – I + 1 – Xi)]^2
1 0,7071 1 0,7071
Jumlah 0,7071 0,500 0,964 DTN
Konsentrasi 50% data terdistribusi normal dan kontrol positif, konsentrasi 25%, konsentrasi 12,5%, konsentrasi 6,25%,
konsentrasi 3,125% data tidak terdistribusi normal, Jadi, dapat disimpulkan bahwa tidak semua data terdistribusi normal,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
93
Uji Homogenitas dengan Levene’s Test
1. Menentukan Hipotesa
Ho : σ1 = σ2 = σ3 = σ4 = σ5 = σ6 = σ7 (Semua variansi sama)
H1 : Tidak semua variansi sama
2. Dengan α = 0,05
3. Statistik Uji
F Levene =
K : Jumlah kelompok
N : Jumlah semua sampel (n1 + n2 + n3 + n4 + n5 + n6 + n7 )
n : Jumlah sampel per kelompok
Di : Xi –
Xi : Diameter zona hambat kelompok ke-i
: Rata-rata diameter zona hambat kelompok ke-i
: Rata-rata Dij untuk perlakuan ke i
: Rata-rata semua Dij
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
94
Kelompok
kontrol
positif
Kadar
50%
Kadar
25%
Kadar
12,5%
Kadar
6,25%
Kadar
3,125%
kontrol
negatif
Replikasi I 36 19,3 17,3 14,3 10,6 8,6 0
Replikasi II 34,3 21,0 18 17 12 9 0
Replikasi III 35 16,3 16 14 11,3 9,6 0
Mean A 35,1 18,8 17,1 15,1 11,3 9,1 0
N 3 3 3 3 3 3 3
D1 D2 D3 D4 D5 D6 D7
Replikasi I 0,8 0,4 0,2 0,7 0,6 0,4 0
Replikasi II 0,7 2,1 0,8 1,8 0,6 0,1 0
Replikasi III 0,1 2,5 1,1 1,1 0 0,6 0
Mean B 0,6 1,7 0,7 1,3 0,4 0,37 0
AA 0,73
n(Bx-AA)^2 0,057 2,844 0 0,840 0,245 0,388 1,6
TOTAL 5,973
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
95
(D1 -
B1)^2
(D2 -
B2)^2
(D1 -
B1)^2
(D1 -
B1)^2
(D1 -
B1)^2
(D1 -
B1)^2
(D1 -
B1)^2
Replikasi I 0,088 1,586 0,269 0,232 0,049 0,005 0,000
Replikasi
II 0,034 0,166 0,022 0,396 0,049 0,067 0,000
Replikasi
III 0,232 0,726 0,137 0,022 0,197 0,034 0,000
TOTAL 4,313
F Levene =
=
=
= 3,2321
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
96
4. Menentukan wilayah kritis :
Ho ditolak jika, FLevene ≥ Fα (K – 1, N – K)
F 0,05 (6,14) = 2,85
FLevene = 3,2321 ,
F Levene > F 0,05 (6,14)
Jadi, Ho ditolak, tidak semua variansi sama,
*Karena tidak semua variansi sama, maka analisis dilanjutkan dengan metode non parametrik Kruskal Wallis,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
97
Uji Kruskal Wallis
1. Menentukan Hipotesis
Ho : Tidak ada perbedaan bermakna antara kelompok (Ho : μ1 = μ2 = μ3 = μ4
= μ5 = μ6 = μ7),
H1 : Ada perbedaan bermakna antara kelompok (H1 : μ1 # μ2 # μ3 # μ4 # μ5
# μ6 # μ7),
2. Jumlah kelompok (k) = 7 kelompok, maka untuk k >3 dan >5 menggunakan
tabel chi square, df = k – – 1 = 6
N (total n) = 21
3. Hitung nilai dari statistik uji
Perhitungan data menggunakan Excel,
Konsentrasi
(%) 3,125 6,125 12,5 25 50
Kontrol
positif
Kontrol
negatif
Diameter I
(mm) 8,667 10,667 14,333 17,333 19,333 36 0
Diameter II
(mm) 9 12 17 18 21 34,333 0
Diameter III
(mm) 9,667 11,333 14 16 16,333 35 0
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
98
No
Diameter
zona
hambat
(mm)
Urutan
data Kelompok Rangking
Urutan
rangking
1 0 0 - 1 2
2 0 0 - 1 2
3 0 0 - 1 2
4 8,667 8,667 3,13% 4 4
5 9 9 3,13% 5 5
6 9,667 9,667 3,13% 6 6
7 10,667 10,667 6,25% 7 7
8 12 11,333 6,25% 8 8
9 11,333 12 6,25% 9 9
10 14,333 14 12,50% 10 10
11 17 14,333 12,50% 11 11
12 14 16 25% 12 12
13 17,333 16,333 50% 13 13
14 18 17 12,50% 14 14
15 16 17,333 25% 15 15
16 19,333 18 25% 16 16
17 21 19,333 50% 17 17
18 16,333 21 50% 18 18
19 36 34,333 Kontrol + 19 19
20 34,333 35 Kontrol + 20 20
21 35 36 Kontrol + 21 21
R1 (-) R2
(3,125%)
R3
(6,25%)
R4
(12,5%)
R5
(25%)
R6
(50%) R7 (+)
Replikasi 1 2 4 7 10 12 13 19
Replikasi 2 2 5 8 11 15 17 20
Replikasi 3 2 6 9 14 16 18 21
∑R 6 15 24 35 43 48 60
∑R ^2 36 225 576 1225 1849 2304 3600
∑(R ^2)/3 12 75 192 408,333 616,333 768 1200
Urutan 6 15 24,5 34 43 48,5 60
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
99
Total ∑(R ^2)/3 = 3271,667
R1<R2<R3<R4<R5<R6<R7
R : Ranking
N : total sampel
T = - 3 (N + 1)
= - 3 (21 + 1)
= - 3 (22)
= 84,978 – 66
= 18,978
4. Nilai kritis
df = k – 1 – chi square = 12,592 dengan nilai taraf
kepercayaan = 95%,
Jadi, t tabel < t hitung, sehingga Ho ditolak, Oleh karena itu, ada perbedaan bermakna
antara kelompok,
Kemudian dilanjutkan dengan uji post hoc menggunakan Mann Withney-
Wilcoxon Test untuk melihat kebermaknaan dalam perbedaan hasil diameter
zona jernih tiap konsentrasi dengan konsentrasi lain, kontrol positif, dan
kontrol negatif,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
100
Mann whitney-Wilcoxon test
Untuk uji ini, dengan sampel n1≤8 dan n2 ≤ 8, menggunakan rumus
U1 =
U2 =
Kemudian, untuk nilai U hitung yang akan dibandingkan dengan U tabel adalah U
yang bernilai paling kecil, Perhitungan Mann withney menggunakan Excel,
a. Hipotesis
Ho = Konsentrasi x dan y berbeda tidak bermakna
Ha = Konsentrasi x dan y berbeda bermakna
b. Taraf kepercayaan 95%, α = 0,05
c. Menghitung statistik uji dengan Excel
d. Nilai kritis dilihat pada tabel mann whitney, n(y) = 3 dan m (x) = 3, dengan α
= 0,05
e. Ho diterima jika:
Uhitung = Utabel dan Uhitung < Utabel
Ho ditolak jika :
Uhitung >Utabel
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
101
1. Kontrol positif
Kontrol + dan kontrol +
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Kontrol + (X) 36 34,333 35 5,5 1,5 3,5 10,5
Kontrol + (Y) 36 34,333 35 5,5 1,5 3,5 10,5
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)/
2
Ny(ny+1)/
2 Ux Uy U Ket
Kontrol + (X) Kontrol + (Y) 3 3 9 6 6 4,5 4,5 4,5 BTB
Kontrol + dan kontrol -
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Kontrol + (X) 36 34,333 35 6 4 5 15
Kontrol - (Y) 0 0 0 2 2 2 6
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)/
2
Ny(ny+1)/
2 Ux Uy U Ket
Kontrol + (X) Kontrol - (Y) 3 3 9 6 6 0 9 0 BB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
102
Kontrol positif dan konsentrasi 50%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Kontrol + (X) 36 34,333 35 6 4 5 15
50% (Y) 19,333 21 16,333 2 3 1 6
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)/
2
Ny(ny+1)/
2 Ux Uy U Ket
Kontrol + Konsentrasi 50% 3 3 9 6 6 0 9 0 BB
Kontrol + dan konsentrasi 25%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Kontrol + 36 34,333 35 6 4 5 15
Konsentrasi 25% 17,333 18 16 2 3 1 6
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)/
2
Ny(ny+1)/
2 Ux Uy U Ket
Kontrol + Konsentrasi 25% 3 3 9 6 6 0 9 0 BB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
103
Kontrol + dan konsentrasi 12,5%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Kontrol + 36 34,333 35 6 4 5 15
Konsentrasi
12,5% 14,333 17 14 2 3 1 6
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)/
2
Ny(ny+1)/
2 Ux Uy U Ket
Kontrol + Konsentrasi 25% 3 3 9 6 6 0 9 0 BB
Kontrol + dan konsentrasi 6,25%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Kontrol + 36 34,333 35 6 4 5 15
Konsentrasi 6,25
% 10,667 12 11,333 1 3 2 6
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)/
2
Ny(ny+1)/
2 Ux Uy U Ket
Kontrol +
Konsentrasi
6,25% 3 3 9 6 6 0 9 0 BB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
104
Kontrol + dan konsentrasi 3,125%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Kontrol + 36 34,333 35 6 4 5 15
Konsentrasi
3,125 % 8,667 9 9,667 1 2 3 6
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)/
2
Ny(ny+1)/
2 Ux Uy U Ket
Kontrol +
Konsentrasi
3,125% 3 3 9 6 6 0 9 0 BB
2. Kontrol negatif
Kontrol - dan kontrol +
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Kontrol -
(X) 0 0 0 2 2 2 6
Kontrol +
(Y) 36
34,33
3 35 6 4 5 15
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
105
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)/
2
Ny(ny+1)/
2 Ux Uy U Ket
Kontrol -
(X) Kontrol + (Y) 3 3 9 6 6 9 0 0 BB
KONTROL - DAN KONTROL -
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Kontrol -
(X) 0 0 0 3,5 3,5 3,5 10,5
Kontrol -
(Y) 0 0 0 3,5 3,5 3,5 10,5
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)/
2
Ny(ny+1)/
2 Ux Uy U Ket
Kontrol - Kontrol - 3 3 9 6 6 4,5 4,5 4,5 BTB
Kontrol negatif dan konsentrasi 50%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
KONTROL -
(X) 0 0 0 2 2 2 6
50% (Y) 19,333 21 16,333 5 6 4 15
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
106
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)/
2
Ny(ny+1)/
2 Ux Uy U Ket
Kontrol - 50% 3 3 9 6 6 9 0 0 BB
Kontrol - dan konsentrasi 25%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Kontrol - 0 0 0 2 2 2 6
25% 17,333 18 16 5 6 4 15
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)/
2
Ny(ny+1)/
2 Ux Uy U Ket
Kontrol - 25% 3 3 9 6 6 9 0 0 BB
Kontrol - dan konsentrasi 12,5%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Kontrol - 0 0 0 2 2 2 6
Konsentrasi
12,5% 14,333 17 14 5 6 4 15
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)/
2
Ny(ny+1)/
2 Ux Uy U Ket
Kontrol -
Konsentrasi
25% 3 3 9 6 6 9 0 0 BB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
107
Kontrol - dan konsentrasi 6,25%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Kontrol - 0 0 0 2 2 2 6
Konsentrasi
6,25 % 10,667 12 11,333 4 6 5 15
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)/
2
Ny(ny+1)/
2 Ux Uy U Ket
Kontrol -
Konsentrasi
6,25% 3 3 9 6 6 9 0 0 BB
Kontrol - dan konsentrasi 3,125%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Kontrol - 0 0 0 2 2 2 6
Konsentrasi
3,125 % 8,667 9 9,667 4 5 6 15
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)/
2
Ny(ny+1)/
2 Ux Uy U Ket
Kontrol -
Konsentrasi
3,125% 3 3 9 6 6 9 0 0 BB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
108
3. Konsentrasi 50%
Konsentrasi 50% dan kontrol +
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 50%
(X) 19,333 21 16,333 2 3 1 6
Kontrol + (Y) 36 34,333 35 6 4 5 15
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)/
2
Ny(ny+1)/
2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 50%
(X) Kontrol + (Y) 3 3 9 6 6 9 0 0 BB
Konsentrasi 50% dan kontrol -
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 50%
(X) 19,333 21 16,333 5 6 4 15
Kontrol - (Y) 0 0 0 2 2 2 6
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)/
2
Ny(ny+1)/
2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 50%
(X)
Konsentrasi 50%
(Y) 3 3 9 6 6 0 9 0 BB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
109
Konsentrasi 50% dan konsentrasi 50%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 50%
(X) 19,333 21 16,333 3,5 5,5 1,5 10,5
Konsentrasi 50%
(Y) 19,333 21 16,333 3,5 5,5 1,5 10,5
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)/
2
Ny(ny+1)/
2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 50% Konsentrasi 50% 3 3 9 6 6 4,5 4,5 4,5 BTB
Konsentrasi 50% dan konsentrasi 25%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 50% 19,333 21 16,333 5 6 2 13
Konsentrasi 25% 17,333 18 16 3 4 1 8
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)/
2
Ny(ny+1)/
2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 50% Konsentrasi 25% 3 3 9 6 6 2 7 2 BTB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
110
Konsentrasi 50% dan konsentrasi 12,5%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 50% 19,333 21 16,333 5 6 3 14
Konsentrasi 12,5% 14,333 17 14 2 4 1 7
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)/
2
Ny(ny+1)/
2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 50% Konsentrasi 25% 3 3 9 6 6 1 8 1 BB
Konsentrasi 50% dan konsentrasi 6,25%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 50% 19,333 21 16,333 5 6 4 15
Konsentrasi 6,25 % 10,667 12 11,333 1 3 2 6
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)/
2
Ny(ny+1)/
2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 50%
Konsentrasi
6,25% 3 3 9 6 6 0 9 0 BB
Konsemtrasi 50% dan konsentrasi 3,125%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 50% 19,333 21 16,333 5 6 4 15
Konsentrasi 3,125 % 8,667 9 9,667 1 2 3 6
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
111
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)/
2
Ny(ny+1)/
2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 50%
Konsentrasi
3,125% 3 3 9 6 6 0 9 0 BB
4. Konsentrasi 25%
Konsentrasi 25% dan kontrol +
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 25%
(X) 17,333 18 16 2 3 1 6
Kontrol + (Y) 36
34,33
3 35 6 4 5 15
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2
Ny(ny+1)
/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 25%
(X) Kontrol + (Y) 3 3 9 6 6 9 0 0 BB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
112
Konsentrasi 25% dan kontrol -
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 25%(X) 17,333 18 16 5 6 4 15
Kontrol - (Y) 0 0 0 2 2 2 6
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2
Ny(ny+1)
/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 25%(X)
Konsentrasi 25%
(Y) 3 3 9 6 6 0 9 0 BB
Konsentrasi 25% dan konsentrasi 50%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 25%
(X) 17,333 18 16 3 4 1 8
50% (Y) 19,333 21 16,333 5 6 2 13
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2
Ny(ny+1)
/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 25% Konsentrasi 50% 3 3 9 6 6 7 2 2 BTB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
113
Konsentrasi 25% dan konsentrasi 25%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 25% 17,333 18 16 3,5 5,5 1,5 10,5
Konsentrasi 25% 17,333 18 16 3,5 5,5 1,5 10,5
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2
Ny(ny+1)
/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 25% Konsentrasi 25% 3 3 9 6 6 4,5 4,5 4,5 BTB
Konsentrasi 25% dan konsentrasi 12,5%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 25% 17,333 18 16 5 6 3 14
Konsentrasi 12,5% 14,333 17 14 2 4 1 7
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2
Ny(ny+1)
/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 25%
Konsentrasi
12,5% 3 3 9 6 6 1 8 1 BB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
114
Konsentrasi 25% dan konsentrasi 6,25%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 25% 17,333 18 16 5 6 4 15
Konsentrasi 6,25 % 10,667 12 11,333 1 3 2 6
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2
Ny(ny+1)
/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 25%
Konsentrasi
6,25% 3 3 9 6 6 0 9 0 BB
Konsentrasi 25% dan konsentrasi 3,125%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 25% 17,333 18 16 5 6 4 15
Konsentrasi 3,125 % 8,667 9 9,667 1 2 3 6
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2
Ny(ny+1)
/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 25%
Konsentrasi
3,125% 3 3 9 6 6 0 9 0 BB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
115
5. Konsentrasi 12,5%
Konsentrasi 12,5% dan kontrol +
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 12,5%
(X) 14,333 17 14 2 3 1 6
Kontrol + (Y) 36 34,333 35 6 4 5 15
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2 Ny(ny+1)/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 12,5%
(X) Kontrol + (Y) 3 3 9 6 6 9 0 0 BB
Konsentrasi 12,5% dan kontrol -
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi
12,5%(X) 14,333 17 14 5 6 4 15
Kontrol - (Y) 0 0 0 2 2 2 6
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2 Ny(ny+1)/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi
12,5%(X) Kontrol - (Y) 3 3 9 6 6 0 9 0 BB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
116
Konsentrasi 12,5% dan konssentrasi 50%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 12,5%
(X) 14,333 17 14 2 4 3,5 9,5
50% (Y) 19,333 21
16,33
3 3,5 5,5 5,5 14,5
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2 Ny(ny+1)/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 12,5%
Konsentrasi
50% 3 3 9 6 6 5,5 0,5 0,5 BB
Konsentrasi 12,5% dan konsentrasi 25%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 12,5% 14,333 17 14 2 4 1 7
Konsentrasi 25% 17,333 18 16 5 6 3 14
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2 Ny(ny+1)/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 12,5%
Konsentrasi
25% 3 3 9 6 6 8 1 1 BB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
117
Konsentrasi 12,5% dan konsentrasi 12,5%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 12,5% 14,333 17 14 1,5 3,5 5,5 10,5
Konsentrasi 12,5% 14,333 17 14 1,5 3,5 5,5 10,5
X Y Nx Ny Nx*ny Nx(nx+1)/2 Ny(ny+1)/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 12,5%
Konsentrasi
12,5% 3 3 9 6 6 4,5 4,5 4,5 BTB
Konsentrasi 12,5% dan konsentrasi 6,25%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 12,5% 14,333 17 14 5 6 4 15
Konsentrasi 6,25 % 10,667 12
11,33
3 1 3 2 6
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2 Ny(ny+1)/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 12,5%
Konsentrasi
6,25% 3 3 9 6 6 0 9 0 BB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
118
Konsentrasi 12,5% dan konsentrasi 3,125%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 12,5% 14,333 17 14 5 6 4 15
Konsentrasi 3,125 % 8,667 9 9,667 1 2 3 6
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2 Ny(ny+1)/2 Ux Uy U Ket
Kons. 12,5% Kons. 3,125% 3 3 9 6 6 0 9 0 BB
6. Konsentrasi 6,25%
Konsentrasi 6,25% dan kontrol +
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 6,25%
(X) 10,667 12 11,333 1 3 2 6
Kontrol + (Y) 36
34,33
3 35 6 4 5 15
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2
Ny(ny+1)
/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 6,25%
(X) Kontrol + (Y) 3 3 9 6 6 9 0 0 BB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
119
Konsentrasi 6,25% dan kontrol -
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi
6,25%(X) 10,667 12 11,333 4 6 5 15
Kontrol - (Y) 0 0 0 2 2 2 6
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2
Ny(ny+1)
/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi
6,25%(X) Kontrol - 3 3 9 6 6 0 9 0 BB
Konsentrasi 6,25% dan konsentrasi 50%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 6,25%
(X) 10,667 12 11,333 1 3 2 6
Konsentrasi 50%
(Y) 19,333 21 16,333 5 6 4 15
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2
Ny(ny+1)
/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 6,25% Konsentrasi 50% 3 3 9 6 6 9 0 0 BB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
120
Konsentrasi 6,25%dan konsentrasi 25%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 6,25% 10,667 12 11,333 1 3 2 6
Konsentrasi 25% 17,333 18 16 5 6 4 15
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2
Ny(ny+1)
/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 6,25% Konsentrasi 25% 3 3 9 6 6 9 0 0 BB
Konsentrasi 6,25% dan konsentrasi 12,5%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 6,25% 10,667 12 11,333 1 3 2 6
Konsentrasi 12,5% 14,333 17 14 5 6 4 15
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2
Ny(ny+1)
/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 6,25%
Konsentrasi
6,25% 3 3 9 6 6 9 0 0 BB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
121
Konsentrasi 6,25% dan konsentrasi 6,25%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 6,25% 10,667 12 11,333 1,5 5,5 3,5 10,5
Konsentrasi 6,25 % 10,667 12 11,333 1,5 5,5 3,5 10,5
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2
Ny(ny+1)
/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 6,25%
Konsentrasi
6,25% 3 3 9 6 6 4,5 4,5 4,5 BTB
Konsemtrasi 6,25% dan konsentrasi 3,125%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 6,25% 10,667 12 11,333 4 6 5 15
Konsentrasi 3,125
% 8,667 9 9,667 1 2 3 6
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2
Ny(ny+1)
/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 6,25%
Konsentrasi
3,125% 3 3 9 6 6 0 9 0 BB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
122
7. Konsentrasi 3,125%
Konsentrasi 3,125% dan kontrol +
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 3,125%
(X) 8,667 9 9,667 1 2 3 6
Kontrol + (Y) 36 34,333 35 6 4 5 15
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2
Ny(ny+1)
/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 3,125%
(X) Kontrol + (Y) 3 3 9 6 6 9 0 0 BB
Konsentrasi 3,125% dan kontrol -
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 3,125%
(X) 8,667 9 9,667 4 5 6 15
Kontrol - (Y) 0 0 0 2 2 2 6
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2
Ny(ny+1)
/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi
3,125%(X) Kontrol - 3 3 9 6 6 0 9 0 BB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
123
Konsentrasi 3,125% dan konsentrasi 50%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 3,125%
(X) 8,667 9 9,667 1 2 3 6
Konsentrasi 50% (Y) 19,333 21
16,33
3 5 6 4 15
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2
Ny(ny+1)
/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 3,125%
Konsentrasi
50% 3 3 9 6 6 9 0 0 BB
Konsentrasi 3,125% dan konsentrasi 25%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 3,125% 8,667 9 9,667 1 2 3 6
Konsentrasi 25% 17,333 18 16 5 6 4 15
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2
Ny(ny+1)
/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 3,125%
Konsentrasi
25% 3 3 9 6 6 9 0 0 BB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
124
Konsentrasi 3,125% dan konsentrasi 12,5%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 3,125% 8,667 9 9,667 1 2 3 6
Konsentrasi 12,5% 14,333 17 14 5 6 4 15
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2
Ny(ny+1)
/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 3,125%
Konsentrasi
3,125% 3 3 9 6 6 9 0 0 BB
Konsentrasi 3,125% dan konsentrasi 6,25%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 3,125% 8,667 9 9,667 1 2 3 6
Konsentrasi 6,25 % 10,667 12
11,33
3 4 6 5 15
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2
Ny(ny+1)
/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 3,125%
Konsentrasi
3,125% 3 3 9 6 6 9 0 0 BB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
125
Konsentrasi 3,125% dan Konsentrasi 3,125%
Replikasi Ranking ∑Ranking
I II III I II III
Konsentrasi 3,125% 8,667 9 9,667 1,5 3,5 5,5 10,5
Konsentrasi 3,125 % 8,667 9 9,667 1,5 3,5 5,5 10,5
X Y Nx Ny Nx*ny
Nx(nx+1)
/2
Ny(ny+1)
/2 Ux Uy U Ket
Konsentrasi 3,125%
Konsentrasi
3,125% 3 3 9 6 6 4,5 4,5 4,5 BTB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
126
Oleh karena itu, hasil test Mann Withney dapat disimpulkan sebagai
berikut :
Kelompok
perlakuan
Kontrol
+ (35,1
± 0,8)
Kontrol
– (0,0
± 0,0)
Konsentrasi
50%
(18,9 ± 2,4)
Konsentrasi
25%
(17,1 ± 1,0)
Konsentrasi
12,5%
(15,1 ± 1,6)
Konsentrasi
6,25%
(11,3 ± 0,6)
Konsentrasi
3,125%
(9,1 ± 0,5)
Kontrol +
(35,1 ± 0,8) BTB
Kontrol –
(0,0 ± 0,0) BB BTB
Konsentrasi
50%
(18,9 ± 2,4)
BB BB BTB BTB
Konsentrasi
25%
(17,1 ± 1,0)
BB BB BTB BTB
Konsentrasi
12,5%
(15,1 ± 1,6)
BB BB BB BB BTB
Konsentrasi
6,25%
(11,3 ± 0,6)
BB BB BB BB BB BTB
Konsentrasi
3,125%
(9,1 ± 0,5)
BB BB BB BB BB BB BTB
*BB = Berbeda Bermakna
BTB = Berbeda Tidak Bermakna
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
127
Hasil pengukuran absorbansi pada penentuan KHM dan KBM ekstrak etanol
kulit batang pohon petai terhadap bakteri S. aureus
Replikasi 1
No. Konsentrasi
(%)
Optical Density (OD) ΔOD
(Abs) Sebelum inkubasi Setelah inkubasi
1. 0.782 0,2406 1,6082 1,3676
2. 1.563 0,4312 1,7579 1,3267
3. 3.125 1,5535 2,4662 0,9127
4. 6.25 2,5331 3,1652 0,6321
5. 12.5 3,6123 3,9133 0,301
6. 15.625 3,9133 4,0163 0,103
7. 18.750 3,9133 3,9990 0,0857
8. 21.875 3,9999 3,9999 0
9. 25 3,9133 3,9133 0
10. 50 3,9133 3,9133 0
Replikasi 2
No. Konsentrasi
(%)
Optical Density (OD) ΔOD
(Abs) Sebelum inkubasi Setelah inkubasi
1. 0.782 0.2626 1.6232 1.3606
2. 1.563 0.3765 1.7348 1.3583
3. 3.125 0.4829 2.5033 2.0204
4. 6.25 1.6583 3.3928 1.7345
5. 12.5 2.4749 3.9373 1.4624
6. 15.625 3.2312 4.0393 0.8081
7. 18.750 3.4739 3.9992 0.5183
8. 21.875 3.8999 3.9922 0.0923
9. 25 3.7133 3.9122 0.1989
10. 50 3.6133 3.9234 0.3101
Replikasi 3
No. Konsentrasi
(%)
Optical Density (OD) ΔOD
(Abs) Sebelum inkubasi Setelah inkubasi
1. 0.782 0.2506 1.6182 1.3676
2. 1.563 0.4455 1.7689 1.3234
3. 3.125 1.5676 2.4792 0.9116
4. 6.25 2.5876 3.2222 0.6346
5. 12.5 3.6987 3.9243 0.2256
6. 15.625 3.9426 4.0273 0.0847
7. 18.750 3.8382 3.9670 0.1288
8. 21.875 3.8473 3.9989 0.1516
9. 25 3.8778 3.9989 0.1211
10. 50 3.2456 3.9333 0.6877
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
128
BIOGRAFI PENULIS
Penulis skripsi berjudul “ UJI AKTIVITAS
ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL KULIT
BATANG POHON PETAI (Parkia speciosa Hassk.)
TERHADAP Staphylococcus aureus dan Escherichia
coli ” ini memiliki nama lengkap Aloysius Ade Pratama.
Penulis lahir di Karawang pada tanggal 3 April 1993
sebagai anak pertama dari dua bersaudara. Pendidikan
formal yang pernah ditempuh penulis adalah TK Yos
Sudarso Karawang (1998-1999), SD Yos Sudarso
Karawang (1999-2005), SMP Yos Sudarso Karawang
(2005-2008), SMA Yos Sudarso Karawang (2008-2011),
kemudian tahun 2011 penulis melanjutkan kuliah di
Fakultas Farmasi Sanata Dharma Yogyakarta. Selama kuliah penulis aktif dalam
beberapa kegiatan dan organisasi antara lain sebagai anggota Divisi Unit Kegiatan
Mahasiswa Badan Eksekutif Mahasiswa Fakultas Farmasi Universitas Sanata
Dharma periode 2013-2014, anggota Unit Kegiatan Fakultas Bidang Olahraga
Sepak Bola (2012-2013), Panitia Road to School 2013 dan Pharmacy
Performance 2013 sebagai koordinator seksi perlengkapan, asisten praktikum
Kultur Jaringan periode 2013-2014, asisten praktikum Mikrobiologi periode
2014-2015 dan sebagai peserta dalam Program Kreativitas Mahasiswa Bidang
Pengabdian Masyarakat yang lolos didanai oleh DIKTI (2014).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI