PEWARNAAN GRAM

Indikasi :

Untuk mengidentifikasi bakteri Gram Positif dan negatif

Informed consent : Meminta Persetujuan Pasien dan keluarga Pasien untuk melakukan pemeriksaan

Menjelaskan tentang tujuan Pemeriksaan yang akan dilakukan kapada pasien dan

keluarga pasien

Menjelaskan teknik pemeriksaan yang akan dilakukan kepada pasien dan

keluarga pasien

Persiapan pre-prosedural

Jenis spesimen untuk Pemeriksaan Gram diperoleh : Dengan cara Swabbing

Atau langsung dari Darah, pus, sputum atau likuor serebrospinalis

Alat dan Bahan :

1. Material kuman yang akan diselidiki

2. Gelas objek

3. Ose

4. Lampu Spirtus

5. Mikroskup dan minyak imersi

6. Alkohol 70% dan kapas

7. Cat yang akan digunakan

- Carbol gentian Violet (gram A)

Terdiri dari : Alkohol Gentian violet 10 ml

Carbol 5% 90 ml

- Larutan lugol (gram B)

Terdiri dari : Yodida 1 gram

Kalium Yodida 2 gram

Aquades 300 gram

- Alkohol absolut 96% (gram C)

- Larutan Air fucshsin (gram D)

Gelas objek

Cara kerja :

1. Desinfektan objek glas dengan alkohol 70%

2. Desinfektan ose dengan memanaskan ose sampai membara

3. Setelah dingin dengan ose steril kita ambil material kuman

4. Sediaan difixasi dengan pemanasan

5. Sediaan dituangi carbol gentian violet dan dibiarkan selama 1 menit

6. Sisa bahan pewrna dibuang dan dibilas dengan air

7. Sediaan dituangi dengan larutan lugol sebagai mordant dibiarkan selama 1

menit

8. Sisa lugol dibuang dan dibilas dengan air

9. Sediaan dituangi dengan alkohol 96% sebagai peluntur (decolorization)

selama 5-10 detik sampai cat tampak hampir larut kemudian segera dibilas

dengan air.

Gbr. Bakteri gram negative gbr. Bakteri gram positif

Interpretasi Hasil Pemeriksaan

Gram Positif :

- Warna Biru keunguan

- Bentuk : Rantai ( spesies streptokokus ) , Klaster ( spesies stafilokokus )

Gram Negatif :

- Warna Merah

- Bentuk bisa besar , kecil atau bahkan kokkobaksil

Pewarnaan Gram

Larutan dan urutan

penggunaannya

Reaksi dan tampang bakteri

Gram positif Gram negatif

1. Ungu kristal (UK) Sel berwarna ungu Sel berwarna ungu

2. Larutan yodium (Y) Kompleks UK-Y

terbentuk di dalam sel, sel

tetap berwarna ungu

3. Alkohol Dinding sel mengalami

dehidrasi, pori-pori

menciut, daya rembes

dinding sel dan membran

menurun, UK-Y tak dapat

keluar dari sel, sel tetap

ungu

Lipid terekstraksi dari

dinding sel, pori-pori

mengembang, komplek

UK-Y keluar dari sel, sel

menjadi tak berwarna.

4. Safranin Sel tak terpengaruhi, tetap

ungu

Sel menyerap zat pewarna

ini, menjadi merah